Стратегии применения быстрых тестов в мировой практике Дробченко А.Е ЗАО «Биоград», Санкт-Петербург,

Стратегии применения быстрых тестов
в мировой практике
Дробченко А.Е
ЗАО «Биоград», Санкт-Петербург,
http://www.biograd.ru
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
1
Алгоритм тестирования
(СП 3.1.5.2826-10)
«4.4.1. На первом этапе (скрининговая лаборатория).
Если получен положительный результат в ИФА, анализ
проводится последовательно еще 2 раза (с той же
сывороткой и в той же тест-системе, вторая сыворотка
запрашивается только в случае невозможности
направления для дальнейшего исследования первой
сыворотки). Если получены два положительных
результата из трех постановок в ИФА сыворотка
считается первично-положительной и направляется в
референс-лабораторию (Лаборатория диагностики ВИЧинфекции центра по профилактике и борьбе со СПИД)
для дальнейшего исследования.»
…
© ЗАО «Биоград»,
2011г.
Алгоритм тестирования
(СП 3.1.5.2826-10)
«4.4.2. На втором этапе (референс-лаборатория).
Первично положительная сыворотка повторно
исследуется в ИФА во второй тест-системе другого
производителя, отличающейся от первой по составу
антигенов, антител или формату тестов, выбранной
для подтверждения. При получении отрицательного
результата сыворотка повторно исследуется в третьей
тест-системе другого производителя, отличающейся от
первой и второй по составу антигенов, антител или
формату тестов. В случае получения отрицательного
результата (во второй и третьей тест-системах) выдается
заключение об отсутствии антител к ВИЧ. »
…
© ЗАО «Биоград»,
2011г.
Алгоритм тестирования
(СП 3.1.5.2826-10)
« При получении положительного результата (во второй
и/или третьей тест-системе) сыворотку необходимо
исследовать в иммунном или линейном блоте. Результаты,
полученные в подтверждающем тесте, интерпретируются
как положительные, неопределенные и отрицательные.
4.4.3. Положительными (позитивными) считаются пробы, в
которых обнаруживаются антитела к 2 из 3
гликопротеинов ВИЧ (env, gag, pol).
4.4.4. Отрицательными (негативными) считаются сыворотки,
в которых не обнаруживается антитела ни к одному из
антигенов (белков) ВИЧ или имеется слабое реагирование
с белком р 18.»
…
© ЗАО «Биоград»,
2011г.
Алгоритм тестирования
(СП 3.1.5.2826-10)
«4.4.5. Неопределенными (сомнительными) считаются
сыворотки, в которых обнаруживаются антитела к одному
гликопротеину ВИЧ и/или каким-либо протеинам ВИЧ.
При получении неопределенного результата с белковым
профилем, включающим белки сердцевины (gag) р 25,
проводится исследование для диагностики ВИЧ-2.
4.4.6. При получении отрицательного и сомнительного
результата в иммунном или линейном блоте
рекомендуется исследовать сыворотку в тест-системе для
определения р24 антигена или ДНК/РНК ВИЧ. Если был
выявлен антиген р24 или ДНК/РНК ВИЧ, повторное
обследование в иммунном или линейном блоте
проводится через 2, 4, 6 недель после получения первого
неопределенного результата. »
…
© ЗАО «Биоград»,
2011г.
Критерии положительного
результата
Критерии положительного результата (Western Blot):
СП 3.1.5.2826-10 «Профилактика
антитела к 2 из 3 гликопротеинов
ВИЧ-инфекции»
ВИЧ (env, gag, pol).
ВОЗ (рекомедованы в письме
два env (gp41, gp160, gp120)
Минздравсоцразвития N 4174-РХ от
4.08.2006 г.)
CDC
любые два из: p24, gp41, gp 160/120
Американский Красный Крест
по одной полосе из env, gag и pol
CRSS Консорциум по
стандартизации ретровирусной
серологии
gag или pol И env (p24 или p31) И
(gp41 или gp120/160)
© ЗАО «Биоград»,
2011г.
Отчет ВОЗ № 17 (2013 год)
Приведены алгоритмы диагностики, в которых
тесты делятся по уровню использования на тесты
первого, второго и третьего уровня.
Быстрые тесты рекомендованы для случаев, когда
необходимо ставить <40 анализов в день
Классические ИФА тест-системы рекомендованы
для проведения более чем 40 анализов в день,
при возможности «удержания» пациента
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
Отчет ВОЗ № 17 (2013 год)
алгоритм тестирования высокая
распространенность (>5%)
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
Отчет ВОЗ № 17 (2013 год)
алгоритм тестирования низкая
распространенность (<5%)
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
Программы скрининга групп высокого
риска, Сан-Франциско США 2003-2008
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Point of Care (POC) тесты
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Отчет ВОЗ № 17 (2013 год)
(HIV Assays Operational Characteristics – HIV rapid diagnostic
tests (detection of HIV-1/2 antibodies) Report 17)
Тесты для диагностики ВИЧ подразделены на
- Быстрые (Rapid)
- Простые (Simple)
- ИФА (EIA)
- Дополнительные тесты (вестерн и лайн-блоты)
- Молекулярные тесты (NAT)
© ЗАО «Биоград», 2015г.
Отчет ВОЗ № 17 (2013 год)
Быстрые:
- Иммунохроматографические (lateral-flow)
- Мембранные, иммунофильтрация (flow-through)
Простые:
- Иммуноферментные гребни (combs)
- Агглютинационные (latex agglutination)
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Отчет ВОЗ № 17 (2013 год)
Классификация серологических тестов (ИФА и
быстрые тесты) по поколениям в зависимости от
применяемых антигенов и конъюгатов:
Первое поколение – антигены из вирусного
лизата
Второе поколение – синтетические пептиды
Третье поколение – рекомбинантные антигены /
меченые рекомбинантные антигены в конъюгате
(«сэндвич» антиген-антитело-антиген)
Четвертое поколение – одновременное
определение антител и антигена p24 (Аг-Ат)
Отчет по четвертому поколению еще не
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
опубликован
Бесприборные (быстрые и простые тесты
четвертого поколения):
Простые:
-Иммуноферментные гребни (combs)
ImmunoComb II HIV 1&2 TriSpot Ag-Ab
Быстрые:
-Иммунохроматографические (lateral-flow)
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
Иммуноферментные гребни
(combs)
1
1. Проявочная
ванна (3 шт)
2. Пластиковый
гребень в
алюминиевом
пакете (3 шт)
3
2
4
3. Положительный
и отрицательный
контрольные
образцы
4. Перфоратор
______________
5
5. Шкала
КомбСкейл
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
ImmunoComb II HIV 1&2
TriSpot Ag-Ab: сероконверсия
Порядок точек:
1)
2)
3)
4)
контрольная
антиген p24
антитела к ВИЧ-2
антитела к ВИЧ-1
0
7
9 14 19 21 26
Дней с первого образца панели
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
ИммуноКомб II ВИЧ 1+2 КомбФирм
ImmunoComb® II HIV 1&2 CombFirm
Наименование
ImmunoComb® II HIV 1&2
CombFirm рекомбинантный
иммуноблот
Определяемые антитела:
к Env к Gag к Pol
к Env
ВИЧ 1 ВИЧ 1 ВИЧ 1 ВИЧ 2
gp120, p24
p31
gp36
gp 41
gp120
gp41
• Время анализа – 1 час
• Не требует разведения реагентов
(реагенты готовы к применению)
gp36
Внутренний контроль
p24
p31
© ЗАО «Биоград»,
2011г.
18
• Тест ИммуноКомб КомбФирм разрешен для подтверждения
наличия антител к ВИЧ (приказ МЗ РФ № 292 от
30.07.2001).
• Результаты мультицентровых испытаний (Израиль,
Франция, Бельгия, Бразилия, Сенегал)
* - включая 15 положительных по ВИЧ-1 группы О
Без учета неопределенных:
чувствительность 100%,
© ЗАО «Биоград»,
специфичность
100%
2011г.
19
Схема постановки анализа
1. Для индивидуального
тестирования гребень можно
согнуть и отломить
необходимое количество
зубцов.
4. Гребень перемещается из
ряда в ряд проявочной ванны
в соответствии с инструкцией
(промывки и связывание с
конъюгатом).
2. В ряд А проявочной ванны
вносятся образцы
(сыворотка, плазма или
цельная кровь) и контроли.
5. Цветная реакция в ряду F.
3. Гребень вставляется в ряд
А и инкубируется (реакция
антиген-антитело).
6. Результат анализа в виде
окрашенных точек.
Верхняя точка: внутренний
контроль. Нижняя точка и
(или) средняя точки
появляются в случае наличия
антител или антигенов.
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
Иммуноферментные
бесприборные тест-системы
• ИммуноКомб II HIV 1&2 Bispot – скрининговый, 36 мин
• Полноценный ИФА за 36 минут
• ИммуноКомб II HIV 1&2 TriSpot Ag-Ab – АГ-АТ, 84 мин
• ИФА четвертого поколения (антиген-антитело)
• Дифференцированный результат по антителам и
антигену p24
• ИммуноКомб II HIV 1&2 CombFirm – подтверждающий
(иммуноблот), 66 мин
• Рекомбинантный иммуноблот (подтверждающий тест)
• Определяет антитела к 5 различным антигенам ВИЧ
(Для каждого анализа используется по 2 зубца)
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Считывание результата на
приборе КомбСкан
• Автоматизированный
количественный учет
результатов
• Хранение результатов
анализа
• Хранение изображений
сканируемого гребня,
включая все пометки
• Стоимость, доступная
для лаборатории любого
уровня
Зарегистрирован Росздравнадзором
© ЗАО «Биоград», 2015
Технология ИммуноКомб позволяет
диагностировать широкий спектр инфекций:
ВИЧ, HTLV, Гепатиты А, В, С, ЦМВ,
Токсоплазмоз, Хламидиоз, Краснуху,
Хеликобактериоз, тропические инфекции.
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
23
Иммунохроматографические:
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo
Контр.
p24 Aг
Ат
43
47 50 54 57 61 64 70 72
Дней с первого образца панели
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
77
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab
Combo - исследования
Тест Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo прошел
преквалификацию ВОЗ в 2012 году. Отчет об испытаниях
теста
и
инспекциях
производственных
мощностей
опубликован на сайте ВОЗ.
В том числе в отчете было отмечено, что данный тест
правильно определял все образцы первой Международной
Референс Панели (код NIBSC 02/210), включая все
протестированные субтипы ВИЧ -1 (А, B, C, CRF01 AE) ВИЧ1 группы О и ВИЧ-2.
Стандартный образец антигена p24 (код NIBSC 90/636) Alere
Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo определял в разбавлениях
до 1:320, что соответствует 3,125 МЕ. При этом референстест Vironostika HIV Ag/Ab (bioMérieux) определял данный
образец в концентрациях только до 12,5 МЕ.
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab
Combo – исследования (1)
Evaluation of a 4th generation rapid HIV test for
earlier and reliable detection of HIV infection in
pregnancy.
J Clin Virol. 2012 Jun;54(2):180-4. doi:
10.1016/j.jcv.2012.02.021. Epub 2012 Mar 22.
Chetty V, Moodley D, Chuturgoon A.
Womens Health and HIV Research Unit, Department of Obstetrics and
Gynaecology, Nelson R Mandela School of Medicine, University of
KwaZulu-Natal, South Africa (ЮАР)
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Чувствительность при определении
острой фазы ВИЧ-инфекции (1)
Обследовано 32 образца от беременных женщин, у
которых была определена сероконверсия при
последующих визитах. В 18 из образцов
определялась вирусная нагрузка. Тест Determine
HIV-1/2 Ag/Ab Combo выявил 16 из 18 образцов,
в которых выявлялась вирусная нагрузка,
чувствительность – 88,9%, общая чувствительность
на всех 32 образцах – 59,4%.
В целом по исследованию (включая 32 образца с подозрением
на острую ВИЧ-инфекцию и 189 образцов с установленной
ВИЧ-инфекцией) Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo
определил 94% образцов с ВИЧ-инфекцией, в то время
как тесты 3-го поколения – 85%.
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab
Combo – исследования (2)
Rapid HIV screening: missed opportunities for HIV
diagnosis and prevention.
Patel P, Bennett B, Sullivan T, Parker MM, Heffelfinger JD,
Sullivan PS; CDC AHI Study Group
J Clin Virol. 2012 May;54(1):42-7. doi:
10.1016/j.jcv.2012.01.022. Epub 2012 Feb 29
Отдел по борьбе с ВИЧ/СПИД CDCP, Атланта, США
Из 99111 обследованных образцов (общая
популяция) выявлено 62 с острой ВИЧинфекцией, обследованы 62 на тестах третьего
поколения и 34 на тестах 4 поколения
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
Чувствительность при определении
острой ВИЧ-инфекции (2)
Сравнение на образцах, положительных по
результатам МАНК, но отрицательных или
неопределенных в иммуноблоте.
Чувствительность:
Architect Antigen/Antibody Combo IA – 88%
(классический тест 4 поколения)
Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo – 76%
(быстрый тест 4 поколения)
Тесты третьего поколения (ИФА) – 55%
Быстрые тесты (кроме 4 поколения) – 22-33%
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab
Combo (3)
Evaluation of a rapid antigen and antibody
combination test in acute HIV infection.
Faraoni S, Rocchetti A, Gotta F, Ruggiero T, Orofino
G, Bonora S, Ghisetti V.
J Clin Virol. 2013 May;57(1):84-7. doi:
10.1016/j.jcv.2013.01.007. Epub 2013 Feb 4
Лаборатория Микробиологии и Вирусологии,
отделение инфекционных заболеваний, госпиталь
Amedeo di Savoia, Турин, Италия.
Исследовано 17 образцов от пациентов с острой
ВИЧ-инфекцией
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Чувствительность при определении
острой ВИЧ-инфекции (3)
Тест Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo
определил ВИЧ инфекцию в 15 из 17 образцов, из
них в 5 образцах наблюдалась полоса антигена и
в 10 образцах– полоса антител. Чувствительность
составила 88,2%
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab
Combo (4)
Performance of Rapid Point-of-Care and Laboratory
Tests for Acute and Established HIV Infection in San
Francisco
Pilcher, CD. et al
Christopher D. Pilcher1*, Brian Louie2, Shelley Facente1,3, Sheila Keating5, John Hackett Jr6, Ana Vallari6, Chris Hall7, Teri
Dowling3, Michael P. Busch5, Jeffrey D. Klausner1,4, Frederick M. Hecht1, Sally Liska2, Mark W. Pandori2
1 HIV/AIDS Division, University of California San Francisco, San Francisco, California, United States of America, 2 Public Health
Laboratory, San Francisco Department of Public Health, San Francisco, California, United States of America, 3 HIV Prevention
Section, San Francisco Department of Public Health, San Francisco, California, United States of America, 4 STD Prevention and
Control Services Section, San Francisco Department of Public Health, San Francisco, California, United States of America, 5
Blood Systems Research Institute, San Francisco, California, United States of America, 6 Abbott Diagnostics, Abbott Park,
Illinois, United States of America, 7 Magnet Community Health Center, San Francisco, California, United States of America
PLoS ONE (2013) 8(12): e80629.
doi:10.1371/journal.pone.0080629
Сан-Франциско, США
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab
Combo (4)
Ретроспективное исследование 22348 образцов из групп
высокого риска Сан-Франциско (МСМ, пациенты клиники
ЗППП, лица запросившие пост-контактную профилактику,
половые партнеры лиц, у которых был выявлен ВИЧ),
исследованных в 2003-2008 году при помощи антительных
тестов с повторным исследованием пулированных
отрицательных образцов на РНК ВИЧ.
Все образцы с отрицательным результатом антительного
теста, но с наличием РНК или различающимися
результатами тестов были сохранены для последующего
исследования.
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab
Combo (4)
Исходное исследование:
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab
Combo (4)
Исследование проводилось среди групп высокого риска,
процент случаев обнаружения ВИЧ-инфекции в острой фазе
при помощи Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo был
значительно выше (от 3 до 5 раз), чем при исследовании
общей популяции в публикации Patel P et al (2):
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab
Combo (4)
Исследование образцов острой фазы ВИЧ-инфекции:
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab
Combo
Дополнительная информация по исследованиям и
применению тест-систем Determine и Determine
Combo на сайте (английский язык):
http://www.alerehiv.com
© ЗАО «Биоград», 2014 г.
Постановление Правительства
№102 от 05.02.2015
Установить, что для целей осуществления закупок отдельных
видов медицинских изделий, включенных в перечень, заказчик
отклоняет все заявки, содержащие предложения о поставке
медицинских
изделий, происходящих из иностранных
государств, за исключением Республики Армения, Республики
Белоруссия и Республики Казахстан, при условии, что на участие
в определении поставщика подано не менее 2
удовлетворяющих требованиям документации о закупке
заявок, которые одновременно:
•содержат предложения о поставке одного или нескольких
видов медицинских изделий, включенных в перечень, страной
происхождения которых является Российская Федерация,
Республика Армения, Республика Белоруссия или Республика
Казахстан;
•не содержат предложений о поставке одного и того же
вида медицинского изделия одного производителя.
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Постановление Правительства
№102 от 05.02.2015
В прилагаемом к постановлению перечне нет
иммунохроматографических тестов на инфекционные
заболевания, соответственно на них действие постановления не
распространяется.
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
Спасибо за внимание
ЗАО «Биоград»
Адрес: 197101, г. Санкт-Петербург,
Петровский пр., д. 14, 19-Н
тел./факс: (812) 325 21 71, 325 21 70
(многоканальные)
http://www.biograd.ru
biograd@biograd.ru
© ЗАО «Биоград», 2015 г.
40