Порфирьева Наталия презентация

СУНЦ МГУ - школа имени А.Н. Колмогорова
НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН
КУРСОВАЯ РАБОТА
СИНТЕЗ ДИПЕПТИДНОГО МИМЕТИКА НЕЙРОТРОФИНА BDNF
Порфирьева Наталия Алексеевна
Научный руководитель: аспирант Тарасюк Алексей Валерьевич
Москва 2012
2
Нейротрофины (neurotrophin, греч. neuron – нерв, trophe – питание) – семейство
секретируемых белков, отвечающих за рост
выживаемость и апоптоидную смерть нейронов.
нейритов,
дифференцировку,
• Сходное число АКО (118–120)
• В структуре присутствует 6 цистеиновых остатков.
• Характерна высокая степень гомологии – около 50% идентичности первичной структуры.
• Каждый протомер состоит из 3-х пар антипараллельных β-тяжей, связанных 3-мя дисульфидными мостиками
• Регулярные последовательности β-тяжей связываются нерегулярными участками, называемыми β-петлями.
3
Рецепторы нейротрофинов
Нейротрофины выполняют свои функции путем связывания с высокоаффинным
трансмембранным тирозин-киназым рецептором
Trk (Кd = 10-11M)
и
низкоаффинным рецептором p75 (Кd = 10-9M).
Структура и фармакологические
свойства BDNF
4
Вовлечен в патогенез:
•болезни Альцгеймера
•болезни Паркинсона
•болезни Хантигтона
•амиотрофического латерального
склероза
•сенсорных нейропатий
•депрессии
•ожирения
•эпилепсии
•шизофрении
Структура гетеродимера BDNF/NT-3 по данным РСА (файл 1B8M из Брукхавенской базы
данных http://www.rcsb.org/pdb)
Дизайн миметиков 4-й петли BDNF
Петля II
-Asp93-Ser94-Lys95-Lys96-
Объект моделирования:
β-изгиб 4-й петли BDNF
Петля I
Наиболее
экспонированный
участок
молекулы,
предположительно
более
доступный
для
взаимодействия
с
рецептором.
Петля III
Мономерный
ГСБ -104
Suc-L-Ser-L-Lys-NH2
Димерный
ГСБ -106
[Suc-L-Ser-L-Lys-NH(CH2)3-]2
5
Миметики на основе центрального фрагмента β-изгиба (-Ser94-Lys95)
Suc-L-Ser-L-Lys-NH2
(ГСБ-104)
[Suc-L-Ser-L-Lys-NH(CH2)3-]2
(ГСБ-106)
6
Биологическая активность
7
Нейропротективные свойства пептидов in vitro
Нейропротективные свойства синтезированных соединений определяли на культуре клеток гиппокампа мыши
линии НТ-22 в условиях оксидативного стресса, вызванного перекисью водорода.
Определение жизнеспособности клеток проводили с использованием МТТ-теста
GSB-104
GSB-106
0,18
0,16
0,14
0,14
0,12
Optical density
Optical density
0,16
*
0,1
0,08
0,06
0,04
*
0,12
0,1
*
*
0,08
0,06
0,04
0,02
0,02
0
control Н2О2
10-5
10-6
10-7
10-8М
0
control Н2О2
10-5
10-6
10-7
10-8М
Достоверность полученных данных P≤0,05 по критерию Стьюдента. v -достоверность относительно
контроля, * - достоверность относительно H2O2
Биологическая активность
Антидепрессантные свойства ГСБ-106 in vivo в тесте по Порсолту
Для выявления возможной антидепрессантной активности пептидомиметиков использовали тест
«отчаяние» в оригинальной конфигурации
[R.D.Porsolt, G.Anton, N.Blavet, M.Jalfre. European Journal of Pharmacology, 1978, v.47, p. 379-391]
*- P<0,05 по критерию Mann-Whitney.( U-тест).
8
Синтез гексаметилендиамида бис-(моносукцинил-серил-глицина) ГТ-105
9
Ñ
è
í
ò
å
çã
ë
è
ö
è
í
ñ
î
ä
å
ð
æ
à
ù
å
ã
îì
è
ì
å
ò
è
ê
à4
éï
å
ò
ë
èÃ
Ò
1
0
5
H
G
l
y
O
H
H
N
2
B
o
c
G
l
y
O
S
u
B
o
c
O
2
N
a
O
H
,
N
a
H
C
O
3
ä
è
î
ê
ñ
à
í
â
î
ä
à
N
H
2
E
t
O
A
c
,
t
ê
î
ì
í
,
2
÷
O
B
o
c
G
l
y
O
H
O
Ä
Ö
Ã
Ê
Ò
Ã
Ô
B
o
c
G
l
y
N
H
T
F
A
(
C
H
)
2
6
t
ê
î
ì
í
,
~1
÷
B
o
c
G
l
y
N
H
D
I
E
A+
B
o
c
S
e
r
(
B
z
l
)
G
l
y
N
H
B
o
c
S
e
r
(
B
z
l
)
O
S
u
D
M
F
,
t
ê
î
ì
í
,
1
2
÷
O
H
N
B
o
c
G
l
y
O
S
u
C
F
C
O
O
H
*
H
G
l
y
N
H
3
(
C
H
)
2
6
C
F
C
O
O
H
*
H
G
l
y
N
H
3
1
)T
F
A
,
t
ê
î
ì
í
,
~1
÷
(
C
H
)
2
6
O
2
)D
I
E
A+
B
o
c
S
e
r
(
B
z
l
)
G
l
y
N
H
O
O
S
u
c
S
e
r
(
B
z
l
)
G
l
y
N
H
(
C
H
)
2
6
S
u
c
S
e
r
(
B
z
l
)
G
l
y
N
H
D
M
F
,
t
ê
î
ì
í
,
3
÷
H
,1
0
%P
d
/
C
2
M
e
O
H
,
t
ê
î
ì
í
,
8
÷
S
u
c
S
e
r
G
l
y
N
H
(
C
H
)
2
6
S
u
c
S
e
r
G
l
y
N
H
(
Г
Т
1
0
5
)
î
á
ù
è
éâ
û
õ
î
ä2
4
%
Выводы
1. Синтезирован глицинсодержащий аналог ГСБ-106, миметик ГТ-105
2. Полученное соединение было охарактеризованно температурой
плавления, хроматографической подвижностью в тонком слое.
Структура была доказана методом ПМР.
СУНЦ МГУ - школа имени А.Н. Колмогорова
НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН
КУРСОВАЯ РАБОТА
СИНТЕЗ ДИПЕПТИДНОГО МИМЕТИКА НЕЙРОТРОФИНА BDNF
Порфирьева Наталия Алексеевна
Научный руководитель: аспирант Тарасюк Алексей Валерьевич
Москва 2012