ЗАО «Дина Интернешнл»
Диагностика урогенитальных микоплазм
ELITech Microbio (Франция)
2014
1
ELITech MICROBIO
ELITech Microbio (Франция)
Основан в 1989
Расположен в г.Сини, Франция
ELITech Group Company 2006
Быстрые тесты по микробиологии
(ELITech Microbiology Reagents)
Мировой лидер по Идентификации Микоплазм,
подсчета и антибиотикочувствительности.
Урогенитальные микоплазмы
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Большинство микоплазм, поражающих человека, являются комменсалами
Не имеют клеточной стенки
Устойчивы к b-лактамам
Трудно культивируются и выделяются
Обнаружено 15 видов, обитающих в организме человека
Из 9 выделенных из урогенитального тракта: Mycoplasma hominis (M.h.) и
Ureaplasma urealyticum (U.u.) - являются наиболее часто встречающиеся
U.u. и M.h. передаются половым путем
В настоящее время вид Ureaplasma urealyticum разделены на два биовара:
U. urealyticum и U. parvum (U.u).
Ureaplasma parvum (parvo) (1, 3, 6, 14 серотипы) (biovar 1) и собственно
Ureaplasma urealyticum (biovar 2) (остальные 10 серотипов, иногда этот биовар
называют еще T-960). Ранее считалось,что U.urealyticum вызывает негонококковые
уретриты у мужчин,а U.parvum воспалительные заболевания у женщин и
патологию у новорожденных, но эти данные не были подтверждены.
Сейчас U. parvum и U. urealyticum считаются отдельными видами и иногда в
практической деятельности пользуются термином Ureaplasma species
(Ureaplasma spp.) объединяющим оба вида.
3
Инфекции, вызванные U.u. и M.h.
U. urealyticum
M. hominis
Негонококковый уретрит
++++
-
Уретропростатит
Эпидидимит
Мочекаменная болезнь
Пиелонефрит
Пельвиоперитонит
Послеродовая горячка /выкидыш
++
+++
++
++
++++
+++
++++
Хориоамнионит
++
-
Инфицирование при
рождении
Менингит
Респираторные
инфекции
Как правило, у женщин микоплазмы колонизируют влагалище,
уретру и шейку матки, а у мужчин — уретру и крайнюю плоть,
вызывая инфекционно-воспалительный процесс.
Кроме того, известно, что у мужчин микоплазмы способны подавлять
активность сперматозоидов, а в некоторых случаях даже вызывать
их гибель. Кроме своего «основного действия», микоплазмы способны
оседать в суставной жидкости и вызывать воспаление суставов
Обзор
Mycoplasma hominis (M.h.):
Бактерии – комменсалы
Патогенный титр для женщин ≥ 104 КОЕ/мл
Растут от 24 до 48 часов
Устойчивы к эритромицину (E) и
триметоприму/сульфаметоксазолу (SXT)
Морфология колоний
M. hominis в виде
«яичницы-глазуньи»
0.8 µm
5
Обзор
Ureaplasma urealyticum (U.u.):
Бактерии - комменсалы
Патогенный титр для мужчин ≥ 104 КОЕ/мл и ≥ 103 КОЕ/мл (для
мочи и спермы)
Растут 24 часа
Морфология колоний
U.urealyticum в форме
«морского ежа»
Устойчивы к линкомицину (L) и
триметоприму/сульфаметоксазолу (SXT)
Колонизация новорожденных может
происходить при рождении и быть причиной
неонатальных инфекций (менингиты,
респираторные инфекции, септицемии …).
Тем не менее, носительство генитальных
миколазм увеличивается в пубертатный период
(соотносясь с сексуальной активностью).
0.8 µm
6
Лабораторная диагностика микоплазмоза:
В настоящее время в лабораторной диагностике
неоправданно широко распространяются методы
молекулярной диагностики (ПЦР), трудно контролируемой
и зачастую способствующей гипердиагностике,
особенно инфекций передающихся половым путем
(ИППП).
Например, диагностика урогенитального
мико/уреаплазмоза.
Различные виды микоплазм могут являться причиной
ряда заболеваний урогенитального тракта,
этиологическим фактором преждевременных родов,
невынашивания беременности, нарушения репродуктивной
функции, случаев мертворождения.
С другой стороны, отмечается возможность
бессимптомного носительства микоплазм у клинически
здоровых лиц.
Лабораторная диагностика микоплазмоза:
Различные виды микоплазм проявляют
разную чувствительность к отдельным
лекарственным препаратам . Имеет значение
и общее состояние больного микоплазмозом –
при этом проявляется индивидуальные
особенности чувствительности микоплазм к
тем или иным антибиотикам. Растет число
штаммов микоплазм, нечувствительных к
различным группам антибиотиков.
В связи с этим сегодня считается
необходимым перед назначением
антибактериального лечения проводить
лабораторное исследование чувствительности
выделенных штаммов микоплазм к
антибиотикам групп тетрациклинов и
макролидов, линкозамидов, а также к
фторхинолонам.
Лабораторная диагностика микоплазмоза:
U.u. и M.h. являются комменсалами, поэтому инфекция может
быть диагностирована только путем определения
патологического порога, учитывая точные
количества бактерий
Тестирование чувствительности к антибиотикам
обязательно для определения резистентности
микоплазм
Оно должно выполняться каждый раз, когда диагностируется
инфекция
MYCOFAST
9
Наше предложение
Наборы MYCOFAST (ELITech
Microbio)
Диагностика инфекций, вызванных
Mycoplasma hominis (M.h.) и
Ureaplasma urealyticum (U.u.)
ПРЯМОЙ метод
MYCOFAST EvolutioN 3
СКРИНИНГОВЫЙ
метод
MYCOFAST EvolutioN 3
UMMlyo-UMMt (3 ml)
10
Наше предложение
Состав наборов:
Среды для микоплазм:
– Универсальная среда для микоплазм
→ UMMt – транспортная (желтый)
→ UMMlyo – лиофилизированная
питательная (белый)
- S.Mh стимулятор роста для M.h. (зеленый)
MYCOFAST плашки
– Mycofast EvolutioN 3
11
Состав наборов:
MYCOFAST
Evolution 3
UMMt-UMMlyo
UMMt
Кат. 00036
Кат. 00077
Кат. 00836
UMMt (3 ml)
UMMt (3 ml)
25 шт. транспортная среда 35 шт. транспортная среда
UMMlyo (+3 ml)
питательная среда
25 шт.
MYCOFAST Evolution 3
Плашка
25 шт.
S. Mh стимулятор роста
2 шт.
12
UMMlyo (+3 ml)
35 шт. питательная среда
UMMt (3 ml)
35 шт.
транспортная
среда
Обнаружение, подсчет,
идентификация и
определение
чувствительности к 7
антибиотикам
Ureaplasma spp. и
Mycoplasma hominis
13
Прямой метод
• Обнаружение, подсчет и идентификация U.u. и M.h.
• Визуализация роста бактерий по изменению цвета
индикатора
• Микрометод культивирования в жидкой среде основан на
ферментативной активности бактерий
• Идентификация основана на естественной устойчивости к
3 антибиотикам (линкомицину,
триметоприму/сульфаметоксазолу, эритромицину)
• Тестирование чувствительности к антибиотикам в 2
концентрациях
• Отбираемые пробы: эндоцервикальные, вагинальные,
уретральные, сперма, моча и желудочные секреты
новорожденных
• Результаты в течение 24 часов до 48 часов (стимулятор
роста для M.h.)
14
Методика
МЕТОДИКА
ПЕРЕНОС ПРОБ
Поместить тампон или жидкую пробу (300 мкл) во
флакон с транспортной средой UMMt (3ml) сразу
же после отбора пробы
ПОСЕВ В КУЛЬТУРАЛЬНУЮ СРЕДУ
Перенести содержимое инокулированного флакона
UMMt (3ml) в среду UMMlyo (+3 ml UMMt)
Прямой метод
Довести температуру
среды UMMt до
комнатной
Образцы доставить в
лабораторию
(при необходимости):
- 56 часов при 2-8 С
- 20 часов при 18 – 20 С
ИНОКУЛЯЦИЯ ПЛАШКИ
Снять липкую ленту и добавить в лунки каждого
ряда следующее:
- лунки 1-20: по 100 мкл засеянной среды UMMlyo
2 капли парафинового масла
- лунки 6-7: по 50 мкл стимулятора роста S.M.h
2 капли парафинового масла
(лунки E и M.h)
50 мкл S.Mh
-лунки 1-20: по 2 капли парафинового масла
Лунки можно снова закрыть липкой лентой (по
по 100 мкл засеянной среды UMMlyo
желанию)
ИНКУБАЦИЯ
Инкубация плашки при 35-37 °С в течение
24-48 часов
15
Прямой метод
Конфигурация плашки
100 мкл инокулированной
среды UMMlyo : в лунки с 1
по 20
U.u
Подсчет
U.u и M.h
Идентификация
50 мкл S.M.h в лунки в 6 и 7
M.h
Подсчет
Тестирование чувствительности к антибиотикам
7 антибиотиков
в 2 концентрациях (искл. пристинамицин)
2 капли парафинового масла
в лунки с 1 по 20
Инкубация при температуре 37°C: 24-48ч
16
Прямой метод
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
ПОДСЧЕТ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ
Считывание через 24 часа
КОЕ/мл
КОЕ/мл
КОЕ/мл
КОЕ/мл
КОЕ/мл
КОЕ/мл
ТЕСТИРОВАНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ
К АНТИБИОТИКАМ
Чувствительные
Нет роста
Нет роста
Промежуточные
Рост
Рост
Нет роста
Рост
Устойчивые
(Резистентные)
Обнаружение, подсчет, идентификация и
тестирование чувствительности к
антибиотикам
Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis
после скрининга 24 часов
18
Скрининговый метод
Обзор
• Этап скрининга : наличие или отсутствие микоплазм
(положительные результаты через 24 часа)
• При получении положительного результата → MYCOFAST
Evolution плашка: подсчет, идентификация и
тестирование чувствительности
(результаты через 24 часа)
• Подтверждение диагноза минимум через 48 часов после
начального этапа скрининга
19
* Новая транспортная среда UMMt: хранение образцов 20 часов при комнатной
температуре, 56 часов в холодильнике.
Mycoplasma контроль 12 тестов
(Кат.00900)
Характеристики продукта:
 Соответствует Управлению качеством в лаборатории (ISO 15189:2007)
 6 лиофилизированных штаммов U.u и 6 M.h
 Срок годности после восстановления: 6 часов
 Длительный срок хранения: 12 месяцев / легкий в использовании
 Совместимость при работе с Mycofast EvolutioN3 и с другими
основными наборами на рынке (Biorad / Biomerieux).
Краткая методика:
1.
2.
3.
4.
Штаммы U.u и M.h восстанавливаются 1 мл стерильной дистиллированной воды
Разбавленная бактериальная суспензия переносится в транспортную или
культуральную среды
Восстанавливаются в питательной среде при необходимости
Засеваются в плашку или микропланшет
23
ОСНОВНЫЕ КОНКУРЕНТЫ : сравнение 1/3
Elitech Microbio
bioMérieux
Biorad
Mycofast EV3
Mycoplasma IST2
Mycoplasma
DUO/Mycoplasma
S.I.R
Прямой метод
микрокультивирования на плашке в
жидкой среде
Прямой метод
микрокультивирования на плашке в
жидкой среде
Метод путем
разбавления на
микропланшет
Обнаружение,
подсчет,
идентификация
U.u и M.h,
тестирование
чувствительности
на одной плашке
Обнаружение,
подсчет,
идентификация
U.u и M.h,
тестирование
чувствительности
на одной плашке
Подсчет и определение
чувствительности на
отдельных планшетах
Для U.u патогенный
титр: 10 3, 104, 105
CCu/mL
Для U.u патогенный
титр: 104, 105 CCu/mL
Для U.u патогенный
титр: 104, 105
CCu/mL
Для M.h патогенный
титр: 104 CCu/mL
Для M.h патогенный
титр: 104 CCu/mL
Для M.h патогенный
титр: 104 CCu/mL
Комментарии
Biorad:
трудоемкая и
скрупулезная
постановка
Biorad/Bmx: отсутствует
титр 103 CCu
24
ОСНОВНЫЕ КОНКУРЕНТЫ: сравнение 2/3
Elitech Microbio
bioMérieux
Biorad
Комментарии
Mycofast EV3
Mycoplasma IST2
Mycoplasma
DUO/Mycoplasma
S.I.R
25 тестов в наборе
25 тестов в наборе
20 тестов в наборе
(DUO)
10 тестов в наборе
(S.I.R)
Готов к использованию
Без разведений
Готов к
использованию
Без разведений
Ряд разведений
Результаты для U.u и
M.h в течение 24ч в
80% случаев
Результаты в течение
48ч
Результаты в течение
48ч
Быстрый результат
для штаммов M.h. С
помощью наборов
MEV3 (Mh стимулятор
роста)
Подсчет+определение
чувствительности:
результаты в течение
24ч – 48ч
Подсчет+определение
чувствительности:
результаты в течение
48ч
Подсчет+определение
чувствительности:
результаты в течение
96ч
Biorad: необходимо 4
дня для получения
окончательного
результата
Возможность провести
скрининг с
использованием
отдельных
Ummt/UmmLyo
25
ОСНОВНЫЕ КОНКУРЕНТЫ: сравнение 3/3
Elitech Microbio
bioMérieux
Biorad
Комментарии
Mycofast EV3
Mycoplasma IST2
Mycoplasma
DUO/Mycoplasma
S.I.R
7 антибиотиков в
2 концентрациях
(искл.
Пристинамицин)
+ 3 в одной
концентрации
(идентификация: L,
SXT, E)
8 антибиотиков в 2
концентрациях
+ 1 в одной
концентрации
(Пристинамицин)
7 антибиотиков в
2 концентрациях
Количество
антибиотиков
примерно
одинаковое
Исследуемые
пробы:
эндоцервикальные,
вагинальные,
уретральные,
сперма, моча,
желудочные
секреты
Исследуемые
пробы:
уретральные,
вагинальные
НЕ ИССЛЕДУЮТСЯ
ПРОБЫ МОЧИ
Исследуемые
пробы:
эндоцервикальные,
вагинальные,
уретральные,
сперма, моча
Biomerieux:
невозможно
получить
результаты по
пробам мочи
26
Наборы MYCOFAST
Предложение, которое отвечает
всем потребностям
Прямой метод
MYCOFAST
EvolutioN 3
Скрининговый
метод
MYCOFAST EvolutioN 3
UMMlyo-UMMt (3 ml)
Быстрее (результаты в течение
Дольше (24 часа на скрининг+ 24 часа
24 часов в большинстве случаев) для получения окончательного
Дороже
результата)
27
Дешевле
ИННОВАЦИЯ
2014 г.
Методика
1. Инокуляция в
транспортную среду
Простые операции
Прямая инокуляция на плашке
Готовые к использованию реагенты
Новая закрытая система
2.Инокуляция плашки
MYCOFAST RevolutioN
3. Инкубация 24/48
часов при 37 °С
Подсчет и идентификация
4. Результат
Антибиотикочувствительность
Чувствительные
Промежуточные
Устойчивые
Быстрый результат за 24 часа
(Стимулятор роста M.h)
Легкая интерпретация
результатов
1. Инокуляция в транспортную
среду UMM(Кат.00061)
2. Инокуляция плашки Screening
MYCOFAST RevolutioN (Кат.00063)
1. Инокуляция
плашки MYCOFAST
RevolutioN(Кат. 0006)
из изначальной
UMMt, хранившейся
при 2-8°С
2.Инкубация
24/48ч при t 28 °С
3. Результат
Подсчет и идентификация
Антибиотикочувствительность
3. Инкубация 24/48 часов при
37°С
Чувствительные
Промежуточные
4. Результат
Устойчивые
Штаммы могут быть чувствительными, умеренно чувствительными или резистентными к
антибиотикам в соответствии со следующими критериями определенными стандартами CLSI:
MIC (мг/мл).
Антибиотик
U.u
M.h
Комментарии
Класс
Антибиотик
S
R
S
R
Фторхинолоны
Левофлоксацин
<2
>4
<1
>2
Моксифлоксацин
<2
>4 < 0.25
Макролиды
Эритромицин
<8
> 16
Линкозамиды
Клиндамицин
Тетрациклины
Тетрациклин
Организмы,
чувствительные к
Эритомицину будут
также чувствительны к
Азитромицину.
< 0.25
<1
>2
> 0.5
<4
> 0.5
>8
Организмы,
чувствительные к
Тетрациклину, будут
также чувствительны к
Доксициклину.
Screening RevolutioN – Методика:
Этот подход может быть выбран по
экономическим причинам , либо для
того, чтобы сократить количество
манипуляций.
Высокая практичность
• все компоненты доступны отдельно
(адаптируются под Ваши нужды)
• новая делимая плашка
Дифференцирование U.u от M.h на
этапе скрининга.
Целостность экземляра сохраняется до 72 часов.
Простые и безопасные операции:
Новая интегрированная среда
Новая закрытая система
Готовые к использованию
реагенты
Результаты, которые соответствуют патологическому титру
(>103 или >104)
Отдельная дифференцация U.u от M.h на этапе
скрининга.
Удобная номенклатура Прямой & Скрининговый метод
доступны по отдельности.
Скачать

Презентация Mycofast EvolutioN 3