3.6 Разработка лечения при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий
advertisement
На правах рукописи Баженова Екатерина Анатольевна ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ, ДИАГНОСТИКА, ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА ПСЕВДОМОНОЗА И ЭНТЕРОКОККОЗА НУТРИЙ 06.02.02. – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Краснодар – 2013 2 Работа выполнена на кафедрах микробиологии, эпизоотологии и вирусологии; паразитологии, ветсанэкспертизы и зоогигиены ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор кафедры паразитологии, ветсанэкспертизы и зоогигиены ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» Шевченко Людмила Васильевна Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, заведующая лабораторией терапии ГНУ «Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт РАСХН» Басова Наталья Юрьевна кандидат ветеринарных наук, заведующая отделом ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБУ «Краснодарская межобластная ветеринарная лаборатория» Марченко Татьяна Витальевна Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет» Защита диссертации состоится «29» августа 2013 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13). Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» – http://www.kubsau.ru «26» июля 2013 г. и официальном сайте ВАК РФ – http://www.vak.ed.gov.ru. Автореферат разослан «___»__________2013 г. Ученый секретарь диссертационного совета И.А. Родин 3 1. Общая характеристика работы Актуальность темы. Нутриеводство – перспективная отрасль пушного звероводства. От нутрий получают вкусное диетическое мясо, ценные шкурки различных расцветок. Мясо нутрий сочное, нежное и по вкусовым свойствам лучше мяса птицы и кроликов, а по количеству белка превосходит говядину, баранину и свинину, так как содержит относительно мало жира. В мясе мало холестерина. Поэтому его рекомендуют детям, беременным женщинам и кормящим матерям, а также людям с сердечно-сосудистыми заболеваниями (В.Ф. Кладовщиков, 2002; Н.А. Балакирев, 2012; М.В. Петров, 2013). Разведением нутрий в России занимаются в различных климатических зонах государственные, фермерские хозяйства и нутриеводы-любители, но преимущественно в южных регионах (Г.А. Кузнецов, Е.Г. Сергеев, О.И. Федоров, 2003; И.А. Плотников, 2003). Стабильному развитию нутриеводства препятствуют бактериальные болезни: колибактериоз, псевдомоноз, энтерококкоз, стрептококкоз, сальмонеллез, пастереллез, стафилококкоз. Они регистрируются во многих развитых странах мира, в том числе и в России, наносят значительный экономический ущерб отрасли и протекают в последние годы преимущественно ассоциативно (Л.П. Миронова, 1999, 2000, 2001; В.Н. Александров, 2002; С.Н. Треглазов, Л.А. Малышева, 2003). Надежной защитой нутрий от инфекционных болезней является специфическая профилактика. Применение ассоциированных вакцин в звероводстве, включающих несколько антигенов, позволяет снизить стрессовые ситуации у прививаемых животных, уменьшить трудозатраты и создать напряженный иммунитет в сжатые сроки (И.А. Плотников, О.Ю. Беспятых, 2003; В.А. Есепенок и соавт., 2005). По мнению многих ученых, инактивированные вакцины, изготовленные из штаммов возбудителей инфекционных болезней, выделенных в период эпизоотии, обладают более высокими антигенными и иммуногенными свойствами и способствуют созданию иммунитета достаточной напряженности (Р.Т. Маннапова, 1998; Н.Н. Шульга, 2006). Учитывая сложную эпизоотическую обстановку, обусловленную совместным действием различных возбудителей, терапия заболеваний и разработка новых ассоциированных вакцин является одним из важнейших современных направлений в области инфекционной патологии животных. Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучить особенности эпизоотического процесса, идентифицировать возбудители и разработать систему лечебных и профилактических мероприятий при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи: изучить эпизоотическую ситуацию по инфекционным болезням нутрий и особенности эпизоотического процесса при псевдомонозе и энтерококкозе: этиология, возрастная динамика, клинические признаки, патоморфологические изменения; 4 провести индикацию и идентификацию культур Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) и Enterococcus faecalis (Е. faecalis), циркулирующих у нутрий; разработать технологию изготовления и изучить иммунобиологические свойства новых моно- и ассоциированной гидроокисьалюминиевых формолвакцин (ГОА-формолвакцин) против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий; изучить лечебное действие антибактериальных препаратов при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий; разработать мероприятия по профилактике и ликвидации псевдомоноза и энтерококкоза нутрий. Научная новизна. Впервые изучены особенности эпизоотического процесса при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий: этиология, возрастная динамика, клинические признаки, патоморфологические изменения. Впервые проведена разработка технологии изготовления и изучены иммунобиологические свойства новых моно- и ассоциированной ГОАформолвакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях. Определена чувствительность выделенных культур к антимикробным препаратам, P. aeruginosa: цефотаксиму, амикацину, энрофлоксацину, стрептомицину, ампициллину, рифампицину, гентамицину, неомицину; E. fаecalis: цефотаксиму, цефалексину, энрофлоксацину, амоксициллину, рифампицину, левомицетину. Препараты цефосин и энроксил 5% впервые применены для терапии псевдомоноза и энтерококкоза нутрий. Апробирована и внедрена в ветеринарную практику высокоэффективная комплексная система мероприятий по профилактике и терапии псевдомоноза и энтерококкоза нутрий. Материалы диссертационной работы использованы при подготовке «Рекомендаций по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза нутрий в Краснодарском крае». Научная новизна диссертационной работы подтверждена шестью патентами РФ на изобретение: № 2288002 «Способ изготовления вакцины против энтерококковой инфекции нутрий», № 2288003 «Вакцина против энтерококковой инфекции нутрий», № 2388487 «Способ изготовления вакцины против псевдомоноза нутрий», № 2388488 «Вакцина против псевдомоноза нутрий», № 2388489 «Способ изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий», № 2389505 «Вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий». Теоретическая и практическая значимость диссертационной работы. Результаты проведенных исследований послужили теоретическим обоснованием для разработки и внедрения в производство новых моно- и ассоциированной ГОА-формолвакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий из эпизоотических штаммов P. aeruginosa и Е. faecalis. Для лечения псевдомоноза и энтерококкоза нутрий предложены эффективные 5 антибактериальные препараты цефосин и энроксил 5 %. Разработана комплексная высокоэффективная система мероприятий по профилактике и терапии псевдомоноза и энтерококкоза нутрий. Основные положения диссертации, выносимые на защиту: результаты изучения эпизоотической ситуации по инфекционным болезням нутрий и особенностей эпизоотического процесса при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий: этиология, возрастная динамика, клинические признаки, патоморфологические изменения; результаты исследований по индикации и идентификации культур P. aeruginosa и Е. faecalis, циркулирующих у нутрий; результаты разработки технологии изготовления и методов контроля новых моно- и ассоциированной ГОА-формолвакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий; результаты изучения иммунобиологических свойств и эффективности новых инактивированных моно- и ассоциированной ГОА-формолвакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях; результаты изучения эффективности антибактериальных препаратов при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий; комплексная высокоэффективная система мероприятий по профилактике и терапии псевдомоноза и энтерококкоза нутрий. Апробация работы. Основные положения и результаты исследований диссертационной работы были доложены и одобрены на 3-ей Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (г. Краснодар, 2009 г.); на заседаниях ученого совета Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар, 2009 – 2013 гг.); на научных конференциях сотрудников и аспирантов факультета ветеринарной медицины КубГАУ (г. Краснодар, 2010 – 2013 гг.); на 5-ой международной научно-практической конференции молодых ученых (г. Краснодар, 2011 г.); на 2-ой международной научно-практической конференции «Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения» (г.Краснодар, 2011г.). Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе 5 в журналах, рецензируемых ВАК РФ, а также «Рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза нутрий в Краснодарском крае». Структура и объём работы. Диссертация изложена на 161 странице текста компьютерного исполнения, включает разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, предложения производству, список использованной литературы, приложения. Текст диссертационной работы иллюстрирован 49 рисунками и 17 таблицами. Список литературы содержит 179 источников, из числа которых 35 иностранных. 6 2. Материалы и методы исследований Работа выполнена в период с 2008 по 2012 гг. на базе кафедр микробиологии, эпизоотологии и вирусологии; паразитологии, ветсанэкспертизы и зоогигиены ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» в соответствии с темой, государственный регистрационный № 01.2.00606830, ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», в индивидуальных подсобных хозяйствах Краснодарского края. При выполнении диссертационной работы было проведено: 1437 клинических исследований нутрий, из них больных 231; 87 патологоанатомических вскрытий, изготовлено 437 гистологических препаратов; 398 бактериологических и 398 биохимических исследований, выделено 315 культур P. aeruginosa и E. fаecalis; на чувствительность к антибактериальным препаратам исследовано 590 культур (165 культур P. aeruginosa; 424 культуры E. fаecalis). Эпизоотические особенности псевдомоноза и энтерококкоза нутрий в хозяйствах Краснодарского края изучали, анализируя статистические данные отчетности государственного управления ветеринарии Краснодарского края и ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», и результаты собственных исследований за последние 5 лет (2008-2012 гг). Для определения патогенности возбудителей, испытаний вакцин на безвредность, реактогенность, иммуногенность, пассажей и титрования возбудителей использовали 697 белых беспородных мышей (Murius) массой 17-22 г, нутрий (Myocastor coypus) различного возраста и окраса – 1435 голов. Нутрии были клинически здоровы. Животные были подобраны по принципу параналогов (по породной принадлежности, возрасту, физиологическому состоянию, упитанности). Рационы животных соответствовали нормам, разработанным в НИИ пушного звероводства и кролиководства им. В. А. Афанасьева (1966). В работе использовали чистые культуры возбудителей псевдомоноза (P. aeruginosa) и энтерококкоза (E. faecalis), выделенные от вынужденно убитых и павших нутрий в Краснодарском крае. Бактериологические посевы проводили из легких, печени, брыжеечных лимфоузлов, почек, сердца, содержимого кишечника, крови, головного мозга от вынужденно убитых и павших нутрий. Культуральные свойства бактериальных культур оценивали по характеру роста на мясо-пептонном агаре (МПА), мясо-пептонном бульоне (МПБ) с 1% глюкозы, ЭДДС (энтерококковая дифференциально-диагностическая среда), среде с теллуритом калия, ЦПХ-агаре, кровяном агаре (5 % эритроцитов барана). Идентификацию выделенных бактериальных культур осуществляли по культуральным, морфологическим, тинкториальным свойствам в соответствии с нормативными документами: «Методические указания по лабораторным исследованиям на псевдомоноз животных и птиц», рекомендованные ГУВ 7 МСХ СССР № 432 - 3 от 14. 11. 1988 г., «Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденные 25 сентября 1990 г., «Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза сельскохозяйственных животных», рекомендованные отделением ветеринарной медицины РАСХН в 2003 г. Биохимическую активность выделенных бактериальных культур оценивали на микробиологическом анализаторе Мультискан с программным обеспечением «Система микробиологического мониторинга «МикробАвтомат», а также тест-систем «НЕФЕРМтест24» и «ЭН-коккус тест» фирмы PLIVA-Lachema Diagnostika, Чехия. Патогенные свойства псевдомонад и энтерококков определяли внутрибрюшинным заражением беспородных белых мышей массой 17-22 г. Культуру считали патогенной, если в течение 5 дней из 3-х инфицированных мышей выживало не более одной. Безвредность моно- и ассоциированной вакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий оценивали на белых беспородных мышах массой 17-22 г, нутриях в возрасте 40-60 дней путем соответственно подкожного и внутримышечного введения им вакцины в 3-5-кратной иммунизирующей дозе, выявляемой опытным путем на белых мышах, нутриях. Иммуногенность вакцинных препаратов оценивали по проценту выживаемости (защиты) привитых нутрий (белых мышей) после заражения их вирулентными возбудителями псевдомоноза (P. aeruginosa) и энтерококкоза (E. faecalis) в летальных дозах, определяемых предварительным титрованием на нутриях и белых мышах. Патоморфологические исследования проводили по общепринятым методикам (Г. А. Меркулов, 1969). Во время вскрытия трупов нутрий отбирали кусочки пораженных органов: печени, почек, селезенки, сердца, легких, кишечника, лимфоузлов, фиксировали в 10 % нормальном растворе формалина, изготавливали парафиновые срезы толщиной 6-8 μ, окрашивали гематоксилином и эозином и при помощи микроскопа МБИ-15 с цифровой камерой изучали и фотографировали их. Определение чувствительности выделенных штаммов P. aeruginosa и E. faecalis к антибактериальным препаратам проводили методом диффузии в агар с применением дисков согласно методическим указаниям по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных (М.,1972), рекомендаций по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (А.В. Скориков, 2005). Серологическую типизацию выделенных штаммов P. aeruginosa определяли в реакции агглютинации (РА) со специфическими сыворотками (Д.И. Скородумов, 2005). Экономический ущерб и эффективность лечебно-профилактических мероприятий определяли по утвержденному Главветупром СССР документу: «Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (М., 1982 г.). 8 Для обработки цифровых данных применяли компьютер с использованием стандартных прикладных программ «Microsoft Word», «Microsoft Excel» и «Adbe PhotoShop». 3. Результаты собственных исследований 3.1 Эпизоотическая ситуация по инфекционным болезням нутрий в Краснодарском крае Для изучения эпизоотической ситуации по инфекционным болезням нутрий провели анализ уровня заболеваемости и падежа нутрий от инфекционных болезней в Краснодарском крае в сравнительном аспекте и динамике. За основу были взяты ветеринарная отчетность по инфекционной патологии нутрий в этом регионе за 2008–2012 гг. и результаты собственных исследований – количество и видовой состав выделенных культур возбудителей. Установили, что в течение последних пяти лет (2008-2012 гг.) заболеваемость и падеж нутрий в Краснодарском крае регистрируются ежегодно от различных бактериальных болезней: колибактериоза, псевдомоноза, энтерококкоза, стрептококкоза, стафилококкоза, сальмонеллеза, пастереллеза, анаэробной дизентерии, листериоза. Доминируют среди них колибактериоз, псевдомоноз, энтерококкоз. В нозологическом профиле инфекционной патологии нутрий в Краснодарском крае в данный период колибактериоз составил 31 %, псевдомоноз – 21 %, стрептококкоз и энтерококкоз по – 11%, стафилококкоз – 8 %, сальмонеллез – 7 %, пастереллез – 6 %, анаэробная энтеротоксемия – 3 %, листериоз – 2 % (рис. 1). Рисунок 1 - Нозологический профиль инфекционных болезней нутрий в Краснодарском крае (2008 – 2012 гг.) При изучении удельного веса энтерококкоза в течение срока наблюдения (2008 – 2012 гг.) выявили динамичный рост энтерококкоза нутрий в 9 нозологическом профиле инфекционных болезней нутрий в Краснодарском крае от 11 % (2008 г.) до 26 % (2012 г.). Удельный вес псевдомоноза в инфекционной патологии нутрий в течение последних пяти лет (2008 – 2012 гг.) колебался от 15 до 27 %. Таким образом, псевдомоноз и энтерококкоз в инфекционной патологии нутрий в Краснодарском крае играют важную роль и наносят нутриеводству значительный экономический ущерб. 3.2 Диагностика, клинические признаки, патоморфологические изменения при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий Диагностику псевдомоноза и энтерококкоза нутрий проводили на основании эпизоотологических данных, клинических симптомов, патологоморфологических изменений и лабораторных исследований – бактериологического исследования патологического материала от вынужденно убитых и павших нутрий. Оно включало: обнаружение в исходном материале возбудителя при помощи светового микроскопа (световая микроскопия), выделение чистой культуры посевом на питательные среды или методом биопробы, идентификацию возбудителя по морфологическим, тинкториальным, культуральным, серологическим, патогенным признакам и биохимической активности с использованием микробиологического анализатора Мультискан. Лабораторные исследования по диагностике псевдомоноза и энтерококкоза нутрий проводили на базе ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория». При изучении клинического проявления псевдомоноза нутрий установили, что псевдомонозом чаще болеет молодняк, начиная с первых дней жизни, но наиболее восприимчивы щенки в возрасте от 45-50 дней до 3-х месяцев. Течение болезни острое. Отмечается потеря аппетита, вялость, повышение температуры (39,5 - 40,5 оС). Нутрии чихают. В дальнейшем у нутрий развивается понос, серозно-гнойные истечения из носовых отверстий, которые в дальнейшем формируют корки. Перед гибелью дыхание учащается и становится напряженным. Беременные самки абортируют или рождают мертвых щенков, отмечаются маститы и эндометриты. Болезнь у новорожденных протекает сверх остро без явных симптомов и с летальным исходом. При патологоанатомическом вскрытии щенков нутрий в 39 % случаев на плевре и брюшине, под капсулой почек и селезенки отмечали ярко выраженный геморрагический диатез, в 31 % выявляли серозно-катаральную или серозно-геморрагическую бронхопневмонию, в 15 % отмечали альтеративный гепатит, в 10 % определяли альтеративный нефрит и в 5 % альтеративный миокардит. 10 При патогистологическом исследовании у большинства животных в легких отмечали серозно-катаральную или серозно-геморрагическую бронхопневмонию, у нескольких животных некротическую бронхопневмонию, которая характеризовалась некрозом воздухопроводящего и респираторного отдела легких. В почках у большинства животных регистрировали зернистую или жировую дистрофию эпителия канальцев. Зернистая дистрофия характеризовалась неравномерным окрашиванием цитоплазмы и увеличением объема эпителиоцитов. В отдельных канальцах отмечали некроз, который сопровождался пикнозом, лизисом или рексисом ядер. В печени в большинстве случаев выявляли зернистую дистрофию, которая характеризовалась нарушением балочной структуры в виде искривления и дискомплексации балок, а также увеличением размера гепатоцитов, приобретением округлой формы и неравномерной окраской цитоплазмы. В сердце отмечали зернистую дистрофию и атрофию миокарда, которая характеризовалась истончением кардиомиоцитов, неплотным прилеганием их друг к другу. К энтерококкозу восприимчивы нутрии всех возрастов, но чаще всего заболевали беременные самки и щенки в возрасте от 1 до 3-х месяцев. Заболевание возникало в период массового щенения самок, при отсадке потомства и формировании групп для косячной случки. В основном энтерококкоз нутрий протекал остро. У больных животных отмечали повышение температуры до 41 0С, выделение кровянистой жидкости из носовых ходов, поносы с примесью крови, снижение и отсутствие аппетита, парез задних конечностей. Больные животные погибали в течение 3-5 суток. У больных самок рождались недоразвитые или мертворожденные щенки, а также происходили массовые аборты во второй половине беременности. В некоторых случаях болезнь заканчивалась гибелью беременных самок. При патологоанатомическом исследовании у абортированных плодов и мертворожденных щенков в 37 % случаев отмечали катаральногеморрагический или серозно-геморрагический гастроэнтероколит, в 26 % белковую и жировую дистрофию печени и миокарда, в 23 % - геморрагический диатез на плевре, брюшине, под капсулой почек и селезенки, в 6 % продуктивный или геморрагический спленит, в 4 % - серозно-катаральную бронхопневмонию и в 4 % - интерстициальный продуктивный нефрит. При гистологическом исследовании в желудке и кишечнике выявляли острое серозно-геморрагическое воспаление, которое характеризовалось слизистой дистрофией желудочных желез и кишечных ворсинок, некрозом и десквамацией эпителия, гиперемией сосудов и геморрагиями. В сердце отмечали зернистую дистрофию и атрофию кардиомиоцитов, гиперемию сосудов и геморрагии. В печени отмечали зернистую и жировую дистрофию, кариолизис и кариопикноз гепатоцитов, дискомплексацию балок и пролиферацию лейкоцитов, преимущественно нейтрофильного и лимфотического ряда. В желудочных, брыжеечных и портальных лимфатических узлах в фолликулах отмечали увеличение количества малых и 11 средних лимфоцитов, а также гиперемию синусов. В почках определяли острый диффузный интерстициальный нефрит, который характеризовался пролиферацией клеток соединительной ткани с преобладанием в пролиферате полибластов и эпителиоидных клеток. 3.3 Разработка технологии изготовления и контроля инактивированных моно- и ассоциированной вакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий Коммерческие вакцины против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий в России не выпускаются. Эпизоотическая ситуация по инфекционной патологии нутрий в Краснодарском крае за последние пять лет (2008–2012 гг.) свидетельствует о необходимости специфической профилактики псевдомоноза и энтерококкоза нутрий. Поэтому на следующем этапе исследований нами была отработана технология изготовления новых моно- и ассоциированной вакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий. С этой целью изучили биологические свойства 315 культур P. aeruginosa и E. fаecalis, выделенных от нутрий. Основываясь на проведенных исследованиях по иммуногенности, антигенности, стабильности подобрали штаммы P. aeruginosa (О18), E. faecalis для изготовления вакцин. Накопление бактериальной массы культур P. aeruginosa и E. faecalis, отобранных для производства вакцин, изучали на питательных средах: МПБ с 1 % глюкозы, глюкозо-сывороточном бульоне, бульоне Хоттингера с 1 % глюкозы. Наиболее доступным и дешевым является МПБ с глюкозой, который и был взят нами для получения бактериального сырья для производства вакцин. Применение МПБ дает возможность достичь необходимой концентрации микробных клеток – 4-8 млрд м.к./см3. Штаммы P. aeruginosa, E. faecalis для изготовления опытных образцов ГОА-формолвакцин освежали в МПБ с 1% глюкозы, рН 7,4 - 7,6, при 37 ºС, в течение 18–20 ч. Культуры контролировали на чистоту роста на питательных средах: МПА, МПБ, агаре и бульоне Сабуро, среде Китта-Тароцци, микроскопией мазков, окрашенных по Граму. Во флаконах объемом 250 мл отдельно нарабатывали матровую расплодку культур P. aeruginosa, E. faecalis. В каждый флакон вносили 80–100 мл МПБ с 1% глюкозы, рН 7,4 - 7,6 и 1-2 мл освеженной культуры P. aeruginosa или E. faecalis концентрацией 4–8 млрд м.к./см3. Посевы инкубировали при 37 ºС в течение 18–24 ч с последующей проверкой на чистоту роста на вышеуказанных питательных средах, микроскопией мазков, окрашенных по Граму. В 3–5-литровых ёмкостях нарабатывали биологическую массу P. aeruginosa, E. faecalis. В каждую из них вносили МПБ с 1 % глюкозы и 5–10 % матровой расплодки культуры от объема питательной среды. Посевы 12 инкубировали при 37 ºС в течение 18–24 ч, рН 7,7 - 7,8. Культуры проверяли на чистоту роста на вышеуказанных питательных средах, микроскопией мазков, окрашенных по Граму. Инактивацию бактериального сырья с концентрацией P. aeruginosa, E. faecalis 4–8 млрд м. к./см3 проводили отдельно путем внесения 0,4 % формалина в конечной концентрации при температуре 37 ºС продолжительностью 48–96 ч. Проверяли полноту инактивации посевом на МПА, МПБ, среду Эндо, агар и бульон Сабуро, среду Китта-Тароцци. При наличии роста проводили контроль безвредности на белых мышах и наблюдали за их клиническим состоянием в течение 10 дней. В процессе исследований разработали наиболее оптимальные режимы инактивации для P. aeruginosa и E. faecalis нутрий, основанные на действии 0,4 % формалина при температуре 37±3 °С. Это позволило существенно – в 4 раза уменьшить время инактивации микроорганизмов в отличие от традиционной технологии. Инактивированную бактериальную массу стандартизировали путем доведения до концентрации 4 млрд м.к./см3 и внесения адъюванта – 6 %-ного гидрата окиси алюминия до 10; 20; 30 % к объему и выдерживания с ним при температуре 20–25 °С 12–24 ч. На основании полученных данных в процессе исследований нами разработано схематическое представление технологии производства инактивированной ассоциированной вакцины против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий. 3.4 Исследование иммунобиологических свойств моно- и ассоциированной вакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий в опытных условиях На основе вирулентных штаммов P. aeruginosa и E. faecalis по разработанной нами технологии были изготовлены экспериментальные образцы инактивированных моновакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий: серия № 1 - гидроокисьалюминиевая формолвакцина (ГОАформолвакцина); серия № 2 - формолвакцина с масляным адъювантом; серия № 3 - формолвакцина без адъюванта. При изучении иммуногенности и безвредности серий вакцин на нутриях в возрасте 45-60 дней установили, что после однократной внутримышечной прививки зверей одной из ГОА-формолвакцин в дозе 0,5 см³ у животных через 14 суток формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий 80 % защиту животных от возбудителя соответствующей инфекции. У нутрий, иммунизированных формолвакцинами с масляным адъювантом и формолвакцинами без адъюванта, защита животных от возбудителя соответствующей инфекции составила 60%. При определении иммунобиологических свойств ГОА-формолвакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий после двукратной 13 внутримышечной прививки (первая доза – 0,5 см³, вторая – 1,0 см³ с интервалом 10 суток) у животных не наблюдали поствакцинальных осложнений, через 14 суток после ревакцинации у привитых зверей формировался напряжённый иммунитет, обеспечивающий 100%-ную защиту животных от возбудителя соответствующей инфекции. Таким образом, разработанные нами и испытанные в лабораторных условиях ГОА-формолвакцины против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий были безвредными и высокоиммуногенными, обеспечивали после одно- и двукратной иммунизации соответственно 80 и 100 %-ную защиту животных от возбудителя соответствующей инфекции. Учитывая широкое распространение псевдомоноза и энтерококкоза в нутриеводческих хозяйствах Краснодарского края и их ассоциативное течение, а также отсутствие коммерческой ассоциированной вакцины против данных болезней нутрий, по разработанной нами технологии на основе выделенных и изученных штаммов P. aeruginosa и E. faecalis накапливали раздельно бактериальное сырье. После инактивации его раствором формалина в 0,4 % концентрации при температуре 37±3 °С и проверки полноты инактивации компоненты смешивали в разных соотношениях (1:1; 1:2; 1:3), добавляли 10, 20, 30 % гидрата окиси алюминия, перемешивали, выдерживали в течение суток при температуре 19-25 0С, фасовали во флаконы с последующей укупоркой и оценивали качество по разработанным нами методам контроля. Иммуногенность вакцины оценивали на белых мышах массой 17– 22 г, предварительно определив для них иммунизирующую дозу антигенов псевдомоноза и энтерококкоза, а также соответствующие дозы для заражения данными вирулентными возбудителями. Исследования показали, что через 14 суток после однократной подкожной прививки ассоциированной вакциной против псевдомоноза и энтерококкоза в дозе 0,5 см3 у белых мышей формировался напряженный иммунитет, обеспечивающий соответственно 80 и 90 %-ную защиту лабораторных животных от P. aeruginosa и E. faecalis. Поствакцинальных осложнений у белых мышей не отмечали. Учитывая, что иммуногенная активность ассоциированных вакцин во многом зависит от правильного подбора их компонентов, мы изучили влияние соотношения антигенов и компонентов в ассоциированной вакцине против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий на ее иммуногенную активность. Выявлено, что при соотношении антигенов псевдомоноза и энтерококкоза 1:1 и 20 % гидрата окиси алюминия ассоциированная вакцина через 14 суток после двукратной иммунизации белых мышей подкожно с интервалом 10 суток в дозе 0,5 см3 обеспечивала соответственно 80 и 90 %-ную защиту лабораторных животных от P. aeruginosa и E. faecalis. Поствакцинальных осложнений у животных не отмечали. На следующем этапе исследований определили оптимальную иммунизирующую дозу ассоциированной вакцины против псевдомоноза и энтерококкоза для нутрий. Для этого брали по 4 животных в возрасте 1,5-2 месяца на каждую дозу биопрепарата (0,25; 0,5; 1,0; 2,0 млрд микробных 14 клеток) и прививали однократно внутримышечно в область бедра. Установили, что оптимальной иммунизирующей дозой ассоциированной вакцины против псевдомоноза и энтерококкоза для нутрий является 1,0 млрд микробных клеток каждого вида. Такая доза обеспечивает 100 %-ную защиту вакцинированных нутрий от вирулентных возбудителей псевдомоноза и энтерококкоза при 100 %-ных заболевании и гибели невакцинированных животных (контроль). Иммуногенность и безвредность ассоциированной вакцины против псевдомоноза и энтерококкоза оценивали на 5 нутриях в возрасте 1,5-2 месяца. Биопрепарат вводили внутримышечно однократно в дозе 1,0 см3. Через 14 суток после вакцинации заражали иммунизированных и не привитых нутрий P. aeruginosa (2 млрд м.к./см3) и E. faecalis (2 млрд м.к./см3). У нутрий через 14 суток после однократной внутримышечной прививки ассоциированной вакциной в дозе 1,0 см3 формировался напряженный иммунитет, обеспечивающий соответственно 80 и 100 %-ную защиту животных от P. aeruginosa и E. faecalis. Поствакцинальных осложнений у животных не отмечали. На следующем этапе исследований изучили влияние различных доз и схем иммунизации нутрий ассоциированной вакциной против псевдомоноза и энтерококкоза. Для этого пушных зверей в возрасте 1,5-2 месяца иммунизировали внутримышечно двукратно с интервалом 7 суток (первая доза – 0,5 см3, вторая – 1,0 см3) и 10 суток (первая доза – 1,0 см3, вторая – 1,5 см3) и через 14 суток после ревакцинации привитых животных вместе с контрольными (не вакцинированными) реинфицировали P. aeruginosa и E. faecalis. За нутриями вели наблюдение в течение 30 дней. Установили, что у нутрий после иммунизации ассоциированной вакциной двукратно с интервалом 7 суток формировался иммунитет, обеспечивающий 100 %-ную защиту животных от P. aeruginosa и 60 %-ную защиту нутрий от E. faecalis, с интервалом 10 суток – 100 %-ную защиту пушных зверей от P. аeruginosa и E. faecalis (таб. 1). 3.5 Исследование иммунобиологических свойств ассоциированной вакцины против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий в производственных условиях Производственные испытания ассоциированной вакцины проводили в ЛПХ Кавказского и Тбилисского районов Краснодарского края. С этой целью по ранее разработанной нами технологии были изготовлены две серии ассоциированной вакцины против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий и проверены на безвредность и иммуногенность на нутриях. Иммунизации было подвергнуто 500 голов нутрий в возрасте 1,5-2 месяца. Животных вакцинировали внутримышечно в дозе 1,0 см3 в область бедра. Повторную прививку проводили через 10 суток в дозе 1,5 см3. За иммунизированными животными вели наблюдение в течение 9 месяцев. 15 Для оценки напряженности иммунитета у привитых нутрий нами было изучено накопление специфических антител. У щенков контрольной и опытной групп до прививки и в течение 9 месяцев с интервалом в 30 суток после иммунизации перед кормлением из боковой вены хвоста брали кровь. Уровень антител в сыворотке крови вакцинированных нутрий определяли выборочно (у 6 % животных) в РА к P. аeruginosa, в РП - к E. faecalis. Серологические реакции ставили по общепринятым методикам. Установили, что у нутрий, привитых ассоциированной вакциной против псевдомоноза и энтерококкоза двукратно, отклонений от физиологической нормы не было, через 14 суток после ревакцинации нутрий формировался напряженный иммунитет. Уровень специфических антител в сыворотке крови 16 Объем вакцины, выжило пало выжило Кол-во животных, гол. первая доза – 0,5; пало 5 0 0 5 100 5 2 40 3 60 5 0 0 5 100 5 0 0 5 100 5 5 100 0 0 5 5 100 0 0 % % % % % % Кол-во животных, гол. % Кол-во животных, гол см 3 E. faecalis Кол-во животных, гол. 7 P. aeruginosa Кол-во животных, гол. Ассоциированная вакцина против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий* Результаты реинфицирования нутрий через 14 суток Кол-во животных, гол. Вакцина Интервал между прививками, дни Таблица 1 – Эффективность различных доз и схем иммунизации нутрий ассоциированной вакциной против псевдомоноза и энтерококкоза % вторая доза – 1,0 10 первая доза – 1,0; вторая доза – 1,5 Контроль (невакцинированые) *безвредна – – 17 вакцинированных нутрий через 30 суток к P. аeruginosa и E. faecalis составил соответственно 28,80±5,34 и 33,07±5,46, а через 9 месяцев наблюдения 15,47±1,45 и 18,40±4,66, обеспечивающий 95,3 %-ную защиту иммунизированных животных от вирулентных возбудителей псевдомоноза и энтерококкоза. Таким образом, испытания в производственных условиях ассоциированной вакцины против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий показали, что новая вакцина безвредна и высокоиммуногенна. Получено два патента РФ: № 2388489 «Способ изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий», № 2389505 «Вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий». Разработанные нами методы контроля моно- и ассоциированной вакцин против псевдомоноза и энтерококкоза на безвредность и иммуногенную активность (белые мыши и нутрии), реактогенность (нутрии), стерильность позволяют выпускать безопасные, стерильные и высокоиммуногенные вакцины против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий. 3.6 Разработка лечения при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий Чувствительность P. aeruginosa к антимикробным препаратам изучали на 165 эпизоотических культурах, выделенных от пушных зверей, сельскохозяйственных животных и птиц методом диффузии в агар с использованием стандартных коммерческих дисков. Культуры были проверены на чувствительность к наиболее часто применяемым антибиотикам: амоксициллину, эритромицину, тетрациклину, стрептомицину, неомицину, цефазолину, канамицину, левомицетину, полимиксину, амикацину, цефотаксиму, карбенициллину, цефалексину, гентамицину, энрофлоксацину, ципрофлоксацину, фуразолидону, азлоциллину, ампициллину, доксициклину, рифампицину, оксациллину, клиндамицину, окситетрациклину, зинаприму, польодоксину, триметоприм+сульфа, доксипрексу, сизомицину, офлоксацину, нетилмицину, пенициллину, меропенему, цефтазидиму, цефалотину – всего 35 препаратов. Установили, что изоляты P. aeruginosa наиболее чувствительны к цефотаксиму – 98 % (163 культуры), амикацину – 94 % (156 культур), энрофлоксацину – 88,5 % (147 культур), стрептомицину – 72,9 % (121 культура), ампициллину – 71,1 % (118 культур), рифампицину – 69,3 % (115 культур), гентамицину – 69,3 % (115 культур), неомицину – 66,3 % (110 культур) (рис. 2). Изоляты P. aeruginosa были устойчивы к клиндамицину, нетилмицину, зинаприму, окситетрациклину, офлоксацину, оксациллину, польодоксину, цефалотину, триметоприму+сульфа, пенициллину, меропенему. Таким образом, нами установлено, что наиболее эффективными антибактериальными препаратами при псевдомонозе являются: цефотаксим, амикацин, энрофлоксацин, стрептомицин, ампициллин, рифампицин, 18 гентамицин, неомицин, это позволяет рекомендовать их для лечения заболеваний, вызванных P. aeruginosa у пушных зверей, сельскохозяйственных животных и птиц. Рисунок 2 - Чувствительность изолятов P. aeruginosa к антибиотикам Чувствительность E. fаecalis к антимикробным препаратам изучали на 424 эпизоотических культурах, выделенных от пушных зверей, сельскохозяйственных животных и птиц методом диффузии в агар с использованием стандартных коммерческих дисков. Культуры были проверены на чувствительность к наиболее часто применяемым антибиотикам: амоксициллину, эритромицину, тетрациклину, стрептомицину, неомицину, цефазолину, канамицину, левомицетину, полимиксину, амикацину, цефотаксиму, карбенициллину, цефалексину, гентамицину, энрофлоксацину, ципрофлоксацину, фуразолидону, азлоциллину, ампициллину, доксициклину, рифампицину, оксациллину, клиндамицину, окситетрациклину, зинаприму, польодоксину, триметоприм+сульфа, доксипрексу, сизомицину, офлоксацину, нетилмицину, пенициллину – всего 32 препарата. Установили, что изоляты E. fаecalis наиболее чувствительны к цефотаксиму – 90,3 % (383 культуры), цефалексину – 70,3 % (298 культур), энрофлоксацину – 68,9 % (292 культуры), амоксициллину – 68,2 % (289 культур), рифампицину – 65,8 % (279 культур), левомицетину – 60,8 % (258 культур) (рис. 3). 19 Рисунок 3 - Чувствительность изолятов E. fаecalis к антибиотикам Установили устойчивость изолятов E. fаecalis к триметоприму+сульфа, зинаприму, польодоксину, окситетрациклину, клиндамицину, оксациллину, карбенициллину, пенициллину, доксипрексу. Таким образом, нами установлено, что наиболее эффективными антибактериальными препаратами при энтерококкозе являются: цефотаксим, цефалексин, энрофлоксацин, амоксициллин, рифампицин, левомицетин, что позволяет рекомендовать их для лечения энтерококкоза пушных зверей, сельскохозяйственных животных и птиц. Для испытаний в производственных условиях отобрали антибиотики, которые обладают бактерицидным действием к исследуемым культурам: цефосин, энроксил 5 % в сравнении с биофузолом. Терапевтическую эффективность лечебных препаратов определяли на нутриях в возрасте 40-50 дней при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий в ЛПХ. Испытание каждого препарата проводили на 80 больных нутриях, которым давали препараты в соответствии с инструкцией по применению: биофузол с кормом по 0,5 г препарата на одно животное на протяжении 12 дней, энроксил 5 % вводили внутримышечно в дозе 0,1 мл на 1 кг массы тела 1 раз в день в течение 7 дней, цефосин вводили внутримышечно в дозе 50 мг на 1 кг массы (разбавителем служил лидокаин) в течение 3-х дней. Результаты исследований представлены в таблице 2. Таблица 2 – Терапевтическая эффективность антибиотиков при лечении псевдомоноза и энтерококкоза нутрий Препараты Животные Дни терапии E. fаecalis P. aeruginosa Пало 1 2 3 4 5 6 7 8 91 1 1 Пало Выздорове Выздоровел ло о 20 0 1 2 гол Цефосин Энроксил + + + + + + + Биофузол Больные нутрии + + + + + + + + + + + + + + + 54 % 77 гол. % 3 96,25 75 гол. 79 3,75 5 93,75 % гол 1 98,75 76 6,25 % 1,25 4 95 5 26 67,5 58 32,5 22 72,5 27,5 Таким образом, в производственных условиях при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий высокую терапевтическую эффективность показали цефосин (96,25-98,75 %) и энроксил 5 % (93,75-95,0 %), что позволяет рекомендовать их для терапии данных заболеваний. Экономическая эффективность применения ассоциированной вакцины против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий в звероводческих хозяйствах Краснодарского края составила 30,9 руб. на 1 руб. затрат, терапевтическая экономическая эффективность использования цефосина при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий – 8,15 руб. на 1 руб. затрат. 3.7 Разработка мероприятий по профилактике и ликвидации псевдомоноза и энтерококкоза нутрий Комплексная система диагностики, профилактики и лечения энтерококкоза нутрий была разработана Черных О.Ю., Шевченко А.А., Шевченко Л.В. в 2008 г. и выпущены рекомендации. Сотрудники Краснодарского НИВИ (Терехов В.И., Шипицин А.Г., Болоцкий И.А., Пруцаков С.В. и соавт., 2003) разработали и опубликовали «Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза сельскохозяйственных животных». Однако мероприятий по профилактике, лечению и ликвидации псевдомоноза нутрий в Краснодарском крае не разработано. Поэтому нами были разработаны «Рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза нутрий в Краснодарском крае». Мероприятия по профилактике псевдомоноза нутрий. Для профилактики псевдомоноза необходимо проводить комплекс мероприятий, который направлен на снижение загрязнения патогенными микроорганизмами помещений, где содержатся нутрии, кормов, которыми кормят нутрий, а именно необходимо соблюдать технологию заготовки и хранения кормов, проводить в соответствии с требованиями дезинфекцию, дезинсекцию и дератизацию. 21 С целью предупреждения возникновения псевдомоноза новорожденных нутрий необходимо вакцинировать беременных и молодых нутрий соответствующими биопрепаратами в дозах и в сроки, которые указаны в рекомендациях по их использованию. Помимо вакцин необходимо применять: а) в соответствии с инструкцией вместе с вакциной иммуномодуляторы (риботан, вестин, левамизол, гамавит, ронколейтин и др.); б) согласно инструкции бактериофаг и поливалентную гипериммунную сыворотку против псевдомоноза нутрий; в) вводить подкожно в рекомендованной дозе (0,7 мл/кг) один раз в день на протяжении 2-3-х дней нормальные глобулины сывороток крови животных; г) согласно инструкции в профилактической дозе пробиотики (ветом - 1.1, споробактерин, флорентин, зоонорм, бифидумбактерин, бифацидобактерин). Для предупреждения псевдомоноза в коллективных и в индивидуальных нутриеводческих хозяйствах необходимо соблюдать ветеринарно-санитарные правила при транспортировке и переработке сырья и мяса нутрий. Обязанность ветеринарных специалистов - это обеспечение систематического наблюдения за общим состоянием нутрий, а также плановое проведение профилактической вакцинации против псевдомоноза нутрий. Мероприятия по ликвидации псевдомоноза. После того как установлен диагноз на псевдомоноз, администрация города или района по подтверждению главного ветеринарного врача выносит постановление и устанавливает ограничения, а также признает ферму, хозяйство, населенный пункт или его самостоятельную часть неблагополучной в порядке, который предусмотрен Ветеринарным уставом Российской Федерации. В этом постановлении указываются четкие границы эпизоотического очага и прописываются мероприятия, направленные на ликвидацию болезни и профилактику в угрожаемой зоне. В неблагополучном хозяйстве (пункте) запрещают: 1. Ввоз и вывоз нутрий, продуктов их убоя, шкурок, инвентаря и кормов. 2. Перегруппировку нутрий. 3. Мероприятия, связанные со скоплением нутрий. 4. Продажу или обмен нутрий, мяса и шкурок. 5. Заготовку кормов из мест предположительного нахождения больных или трупов нутрий. В неблагополучном хозяйстве (пункте) обязательно проводят: 1. Учет всех нутрий. 2. Применяют специфическую сыворотку против псевдомоноза нутрий согласно инструкции по применению и через 10-14 дней вакцинируют животных. 3. Дезинфекцию и уборку ферм, а также выгульных дворов, оборудования, помещений, в которых находятся нутрии. 22 4. Дезинфекции подвергают шкурки нутрий из неблагополучных пунктов или хозяйств непосредственно на перерабатывающем предприятии согласно действующей инструкции. Мероприятия, проводимые в зоне, которая подвергается угрозе заносу возбудителя. Угрожаемая зона – это территория с населенными пунктами и хозяйствами, которые непосредственно прилегают к неблагополучному по псевдомонозу нутрий пункту; хозяйства, контактирующие с неблагополучным пунктом по ввозу нутрий, кормов и др. В угрожаемой зоне проводят: 1. Ветеринарно-санитарные и хозяйственные мероприятия, а именно подвергают вакцинации против псевдомоноза все восприимчивое поголовье. 2. Ограничивают хозяйственные связи с неблагополучными по псевдомонозу хозяйствами и населенными пунктами. 3. Строго контролируют ветеринарно-санитарные мероприятия, кормление и содержание нутрий. 4. Устанавливают запрет на ввоз и вывоз нутрий из угрожаемой зоны, а также реализацию и торговлю нутриями, их мясом и шкурками. 5. Закрепляют транспорт и обслуживающий персонал для обслуживания нутриеводческой фермы. 6. Оповещают население об угрозе распространения псевдомоноза и установленных в связи с этим ограничениях. 7. Строго контролируют рынки, мясокомбинаты, заготавливающие и перерабатывающие предприятия. 8. Массово разъясняют населению как не допустить распространение псевдомоноза. Снятие ограничений. После проведения вакцинации нутрий и заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий хозяйство или ферму объявляют благополучной спустя 15 дней. Ввозить нутрий в неблагополучный пункт или угрожаемую зону после снятия ограничений разрешено только после вакцинации их против псевдомоноза в хозяйствах-поставщиках и при наличии соответствующей отметки в ветеринарном сопроводительном документе. Выводы 1. Установлено, что инфекционная патология нутрий в Краснодарском крае в течение последних пяти лет (2008-2012 гг.) формировалась в основном из девяти нозологических единиц: колибактериоза, псевдомоноза, энтерококкоза, стрептококкоза, стафилококкоза, сальмонеллеза, пастереллеза, анаэробной дизентерии, листериоза. Доля псевдомоноза в ней составила 21 %, энтерококкоза – 11 %. 2. Из патматериала от вынужденно убитых и павших нутрий P. aeruginosa выделяли в 25,5 % случаев, серотип О18 в 17,5 % случаев; E. faecalis – в 27,5 % случаев. Изучены антигенные, биологические свойства, вирулентность культур. 23 3. Псевдомоноз у нутрий протекает остро, проявляется лихорадкой (39,540,5 С), септицемией со смертельным исходом у молодняка с первого дня жизни и 2-3-х месячных щенков в период отсадки их от матерей, абортами или мертворождением, а также маститами и эндометритами. Основные патоморфологические изменения у нутрий при псевдомонозе: ярко выраженный геморрагический диатез (39 %), серозно-катаральная или серозногеморрагическая бронхопневмония (31 %), альтеративный гепатит (15 %), альтеративный нефрит (10 %) и альтеративный миокардит (5 %). 4. Энтерококкоз у нутрий протекает в острой и хронической форме и сопровождается лихорадкой (40,2-41,1 0С), диареей, бронхопневмонией, абортами и рождением недоразвитых или полуразложившихся щенков. Основные патоморфологические изменения у щенков нутрий: катаральногеморрагический или серозно-геморрагический гастроэнтероколит (37 %), белковая и жировая дистрофия печени и миокарда (26 %), геморрагический диатез на плевре, брюшине, под капсулой почек и селезенки (23 %), продуктивный или геморрагический спленит (6 %), серозно-катаральная бронхопневмония (4 %), интерстициальный продуктивный нефрит (4 %). 5. Разработана технология изготовления моно- и новой ассоциированной ГОА-формолвакцин против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий. Отработаны параметры оценки качества биопрепаратов по стерильности, безвредности, иммуногенности. В экспериментальных и производственных условиях все вакцины безвредны и высокоиммуногенны, после одно- и двукратной иммунизации обеспечивают не менее 80 % защиту от соответствующих возбудителей, что соответствует требованиям, предъявляемым к инактивированным вакцинам. 6. Новая ассоциированная ГОА-формолвакцина против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий антигенноактивна, стимулирует к обоим антигенам синтез специфических антител, сохраняющихся на протяжении 9 месяцев (1:81:32) и обеспечивающих в производственных условиях 95,3 %-ную защиту животных от P. аeruginosa и E. fаecalis. На фермах и в индивидуальных подсобных хозяйствах вакцину вводят щенкам в 35-дневном возрасте двукратно с интервалом 10 дней внутримышечно: первая доза – 1см3, ревакцинация в дозе 1,5 см3. 7. Наибольшая чувствительность выделенных изолятов P. аeruginosa отмечена к цефотаксиму (98 %), амикацину (94 %), энрофлоксацину (88,5 %), стрептомицину (72,9 %), ампициллину (71,1 %), рифампицину (69,3 %), гентамицину (69,3 %), неомицину (66,3 %). Изоляты P. aeruginosa резистентны к клиндамицину, нетилмицину, зинаприму, окситетрациклину, офлоксацину, оксациллину, польодоксину, цефалотину, триметоприму+сульфа, пенициллину, меропенему. 8. Изоляты E. fаecalis чувствительны к цефотаксиму (90,3 %), цефалексину (70,3 %), энрофлоксацину (68,9 %), амоксициллину (68,2 %), рифампицину (65,8 %), левомицетину (60,8 %) и резистентны к о 24 триметоприму+сульфа, зинаприму, польодоксину, окситетрациклину, клиндамицину, оксациллину, карбенициллину, пенициллину, доксипрексу. 9. В производственных условиях высокая терапевтическая эффективность при лечении нутрий, больных псевдомонозом и энтерококкозом, установлена у цефосина (96,25-98,75 %) и энроксила 5% (93,75-95,0 %). 10. Экономическая эффективность применения ассоциированной вакцины против псевдомоноза и энтерококкоза нутрий в звероводческих хозяйствах Краснодарского края составила 30,9 руб. на 1 руб. затрат, терапевтическая экономическая эффективность использования цефосина при псевдомонозе и энтерококкозе нутрий – 8,15 руб. на 1 руб. затрат. Практические предложения 1. Для специфической профилактики псевдомоноза и энтерококкоза нутрий предложена новая ассоциированная ГОА-формолвакцина, производство освоено в ФГУП «Армавирская биофабрика». 2. Для лечения псевдомоноза и энтерококкоза нутрий предложена комплексная высокоэффективная система лечебно-профилактических мероприятий с использованием цефосина и энроксила 5%. 3. На основе результатов исследований разработаны и изданы «Рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза нутрий в Краснодарском крае». 4. Результаты исследований могут быть использованы в учебном процессе, при планировании противоэпизоотических мероприятий и ФПК зооветеринарных специалистов. Список опубликованных работ по теме диссертации 1. Патент 2288003 РФ, МПК А61К 39/108, А61Р 31/04. Вакцина против энтерококковой инфекции нутрий / А. А. Шевченко, Л. В. Шевченко, Е. А. Баженова; заяв. 14.06.05 г.; опубл. 27.11.06 г., Бюл. 033 (1 ч). – 6 с. 2. Шевченко, Л. В. Инфекционные болезни нутрий в Краснодарском крае / Л. В. Шевченко, Е. А. Баженова // Мат. 3-й Всероссийской науч.-практ. конф. молод. ученых. – Краснодар: КубГАУ, 2009. – С. 274 - 275. 3. Шевченко, А. А. Совершенствование специфической профилактики и лечение псевдомоноза нутрий / А. А. Шевченко, Л. В. Шевченко, Е. А. Баженова, Р. О. Брилев, А. А. Филиппская // Тр. / КубГАУ. - 2009. – № 1 (ч. 1). – С. 125 - 127. 4. Шевченко, Л. В. Специфическая профилактика ассоциативных инфекционных болезней нутрий / Л. В. Шевченко, А. А. Шевченко, Е. А. Баженова, О. Ю. Черных // Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения: материалы 2-ой Междунар. науч.-практ. конф. / КубГАУ. – Краснодар, 2011. – С. 137-139. 25 5. Баженова, Е. А. Клинико-эпизоотологическая характеристика энтерококковой инфекции нутрий / Е. А. Баженова // Опыт международного сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения: материалы 2-ой Междунар. науч.-практ. конф. / КубГАУ. – Краснодар, 2011. – С. 50 – 52. 6. Баженова, Е. А. Идентификация энтерококков по тинкториальным, культурально-морфологическим признакам и биохимической активности / Е. А. Баженова, Ш. М. Бадеева // Научное обеспечение агропромышленного комплекса: материалы 5-ой Междунар. науч.-практ. конф. молодых ученых / КубГАУ. – Краснодар, 2011. – С. 329 – 330. 7. Баженова, Е. А. Эффективность гидроокисьалюминиевой формолвакцины против энтерококковой инфекции нутрий / Е. А. Баженова // Научное обеспечение агропромышленного комплекса: материалы 5-ой Междунар. науч.практ. конф. молодых ученых / КубГАУ. – Краснодар, 2011. – С. 330 – 332. 8. Баженова, Е. А. Чувствительность изолятов P. aeruginosa, выделенных от сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц к антибиотикам / Е. А. Баженова // Ветеринария Кубани. – 2012. – № 6. – С. 8 – 10. 9. Шевченко, Л. В. Определение чувствительности энтерококков к антибиотикам / Л. В. Шевченко, Е. А. Баженова, Ш. М. Бадеева // Тр. / КубГАУ. - 2012. – № 3 (ч. 36). – С. 268 – 271. 10. Бадеева, Ш. М. Лабораторная диагностика энтерококков / Ш. М. Бадеева, Е. А. Баженова, Л. В. Шевченко // Студенчество и наука. – 2012. – С. 87 – 89. 11. Баженова, Е. А. Определение чувствительности изолятов Pseudomonas аeruginosa, выделенных из патматериала от нутрий, к антибиотикам / Е. А. Баженова, Ш. М. Бадеева, Л. В. Шевченко // Студенчество и наука. – 2012. – С. 90 – 93. 12. Баженова, Е. А. Иммунобиологические свойства ассоциированной вакцины против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий / Е. А. Баженова, Л. В. Шевченко, А. А. Шевченко, О. Ю. Черных // Тр. / КубГАУ. - 2013. – № 1 (40). – С. 132 – 135. 13. Баженова, Е. А. Технология изготовления ассоциированной вакцины против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий / Е. А. Баженова, Л. В. Шевченко, А. А. Шевченко, О. Ю. Черных // Тр. / КубГАУ. - 2013. – № 1 (40). – С. 140 – 143. 14. Рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза нутрий в Краснодарском крае / Л. В. Шевченко, Е. А. Баженова, А. А. Шевченко, О. Ю. Черных, А. В. Скориков, Е. В. Якубенко. – Краснодар: КубГАУ, 2013. – 32 с.
