Аминокислотный состав льняных и соевых белковых продуктов

3
На правах рукописи
ГРИГОРЬЕВА
Анна Леонидовна
ИЗУЧЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА,
БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ И СТРУКТУРЫ БЕЛКОВЫХ
ПРОДУКТОВ, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ ЖМЫХОВ СЕМЯН ЛЬНА
03.00.04 - биохимия
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Тверь – 2007
4
Работа
выполнена
на
кафедре
биомедицины
Тверского
государственного
университета.
Научный руководитель
доктор биологических наук,
профессор Панкрушина Алла Николаевна
Официальные оппоненты:
доктор химических наук, профессор
Лапина Галина Петровна
доктор биологических наук
Поляков Алексей Васильевич
Ведущая организация
Всероссийский научно-исследовательский институт
льна
Защита состоится « 3 » октября 2007 г. в 1400 на заседании диссертационного совета
К 212.263.01 в Тверском государственном университете по адресу: 170002, г. Тверь,
пр. Чайковского, 70 а, корп. 5, ауд. 318.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Тверского государственного
университета по адресу: 170000, г. Тверь, ул. Володарского, 44 а.
Автореферат разослан «___» _____________ 2007 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
Н.В. Костюк
5
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы. Анализ структуры питания населения России за последние
десять лет свидетельствует о тенденции неуклонного снижения потребления белка
животного происхождения, что обусловлено, в том числе, высокой себестоимостью
продуктов животноводства в сравнении с продукцией растениеводства (Рогов, 2000; Нечаев,
2003). Мясо – ценнейший источник белков – относится к числу наиболее
трудновоспроизводимых продуктов питания. В связи с этим возрастает актуальность
рационального использования растительных белков, в том числе для интенсификации
производства мясопродуктов.
В настоящее время в качестве источника растительного белка наиболее широко
используются бобовые и масличные культуры (Плешков, 1985). Лидером по производству
белка является соя (Доморощенкова, 2001). Высокая требовательность сои к природноклиматическим условиям, а также наличие в ней антипитательных компонентов (Петибская
и др., 1998,2000; Лобанов и др., 2005), в том числе белковой природы, делает ее
возделывание в северных регионах нашей страны нецелесообразным.
При выборе источников растительного белка необходимо учитывать региональные
ресурсы. В 16 субъектах Российской Федерации, в том числе и в Тверской области
(Виноградов и др., 2001; Ущаповский, 2001), приоритетной культурой является лен. В
нашей стране лен - старейшая волокнистая и масличная культура, пригодная к возделыванию
практически в любой зоне (Лисицын и др., 2002). Ценнейшим продуктом, получаемым при
переработке льносемян, является льняное масло, богатое полиненасыщенными жирными
кислотами. Льняное масло является лечебно-профилактическим средством при некоторых
онкологических заболеваниях, борьбе с липидемическими отложениями, атеросклерозом и
другими заболеваниями. Отжим льняного масла, составляющего до 50% массы семени,
производят методом холодного прессования, что позволяет сохранить все его ценные
компоненты в неизменном виде. Содержание белка в отходах льняного маслодельного
производства по данным различных источников составляет от 25 до 54% (Виноградов и др.,
2001). В настоящее время льняные жмыхи вводятся в количестве 10% в корма
сельскохозяйственных животных, что не позволяет в полной мере реализовать заложенный в
них потенциал нутрицевтиков.
В связи с тем, что в процессе отжима масла на долю высокобелковых отходов льняных жмыхов, приходится более 60%, их использование в качестве источника белка
является перспективным направлением, позволяющим решить как проблему рациональной
утилизации отходов маслодельного производства, так и проблему дефицита белка.
Количественный и качественный состав белков льна свидетельствует о
перспективности его применения в качестве источника белка (Пащенко и др., 2003,2004;
Щербаков и др., 1991). В белке семени льна присутствуют все незаменимые аминокислоты,
причем содержание некоторых из них соответствует стандарту ФАО (Food and Agricultural
Organisation of the United Nation – Организация по питанию и сельскому хозяйству при ООН)
(Виноградов и др., 2001; Ущаповский, 2001). Таким образом, существуют предпосылки
создания на основе льняных жмыхов белковых продуктов. В литературе есть примеры
получения белковых продуктов из сои, нута, люпина, чечевицы, подсолнечника, конопли,
горчицы, рапса и многих других культур, кроме льна, что определяет актуальность данного
исследования.
Согласно литературным данным (Рогов, 2000; Нечаев, 2003), некоторые
технологические этапы получения растительного белка, например, удаление масла
экстракционным методом, снижение активности ингибиторов ферментов, приводит к
денатурации белка, снижению содержания незаменимых аминокислот, в частности, полному
разрушению триптофана (Доморошенкова,2001; Нечаев, 2003). В связи с этим необходимо
не только разработать технологию получения белка из жмыха льна, но и изучить
биохимический и аминокислотный состав белковых продуктов на его основе, а также
6
исследовать влияние отдельных технологических стадий на структуру белка, так как от этого
во многом зависит его биологическая ценность.
Таким образом, актуальность работы заключается в создании научно-методической
основы получения растительного белка из жмыха семян льна и изучении биохимического
состава и биологической ценности целевых и промежуточных продуктов, получаемых из
жмыха семян льна.
Полученные данные легли в основу запатентованной технологии «Способ получения
альбуминно-глобулиновго белка «линумина» из жмыха семян льна» (патент РФ № 2232513).
Изучен аминокислотный состав льняных белковых продуктов, полученных из жмыхов.
Показано, что льняной белковый концентрат, получаемый по разработанной технологии,
обладает высокой пищевой ценностью и включает такие незаменимые аминокислоты, как
лизин, треонин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, фенилаланин, а также гистидин и
аргинин, считающиеся незаменимыми в детском возрасте. Результаты работы могут быть
использованы для разработки новых видов пищевых и кормовых продуктов на основе
льняных белковых концентратов и изолятов.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является изучение
биохимического состава и биологической ценности целевых и промежуточных продуктов,
полученных из жмыха семян льна. Были поставлены следующие задачи:
1. Изучить содержание различных форм азота в семенах и жмыхах льна, установить
предпочтительность использования этих объектов в качестве источника растительного
белка.
2. Создать научно-методическую основу для получения льняного пищевого белка из
жмыха семян льна.
3. Изучить биохимический состав и биологическую ценность целевых экстракционных
продуктов из жмыха семян льна.
4. Установить исходную конформацию белков льняного жмыха, и конформацию белков
целевого продукта для определения степени их денатурации в процессе реализации
технологии.
5. Изучить содержание белка в отходах производства: первичной жмыховой пасте,
вторичной жмыховой пасте, первичной сывороточной воде для определения возможных
путей их дальнейшей утилизации.
Научная новизна работы. Показана перспективность и принципиальная
возможность использования льняных жмыхов – отходов льняного маслодельного
производства в качестве регионального источника растительного белка различного
назначения. Разработаны научно-методические основы для создания технологии получения
растительного белка из отходов льняного маслодельного производства – жмыхов семян льна.
Установлено, что разработанная технология позволяет получать как льняной белковый
концентрат (70-90% белка), так и изолят (90% и более). На основании аминокислотного
состава изучена биологическая ценность льняных белковых продуктов. Методом ИКспектроскопии изучены конформационная структура белка льняного жмыха и изменения,
происходящие с ней в процессе реализации технологии получения белка. Исследования
биохимического состава технологических отходов получения льняного белка позволили
определить возможные пути их дальнейшей утилизации в качестве соломо-белкового корма
для крупного рогатого скота.
Практическая значимость. Разработана биотехнология «Способ получения
альбуминно-глобулинового белка «линумина» из жмыха семян льна» (патент РФ №
2232513). На базе отходов льняной маслодельной промышленности получены новые
льняные белковые продукты, изучен их аминокислотный состав и биологическая ценность.
Установлено, что льняной белковый концентрат содержит все незаменимые аминокислоты и
удовлетворяет потребность в большинстве из них более
чем
на
80%.
Изучение
биохимического состава отходов производства льняного белкового продукта позволило
разработать и запатентовать «Способ получения соломобелкового корма для жвачных
7
животных (варианты)» (патент РФ № 2268610). Комплексная технология получения
льняного белка и соломобелкового корма позволяет высокоэффективно использовать
белоксодержащие отходы льняного маслодельного производства в качестве дешевого сырья,
реализуя, тем самым, региональный потенциал Тверской области.
Таким образом, практическая значимость работы заключается в получении новых
белковых продуктов различного назначения, обладающих высокой биологической
ценностью, с использованием регионального потенциала Тверской области – жмыхов семян
льна – отходов льняного маслодельного производства. Предложенная технология является
малоотходной и ресурсосберегающей, поскольку позволяет решить не только проблему
пищевого и кормового белка, но и рациональной утилизации отходов льняного
маслодельного производства.
Публикации. По теме диссертации было издано 19 публикаций, в том числе в
журналах, рекомендуемых ВАК. Получено 2 патента на изобретение.
Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на 5-ой
Международной научно-технической конференции «Пища. Экология. Человек.» (Москва,
2003); на 6-ой Областной научно-технической конференции молодых ученых «Химия,
технология и экология.» в рамках 11 региональных Каргинских чтений (Тверь, 2004); на 8-ой
Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология – наука XXI
века» (Пущино,
2004г.); на 3-ей Российской научно-практической конференции
«Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания
функциональных продуктов» (Москва, 2005г.); на 2-ом и 3-ем Международном Московском
конгрессе: Биотехнология: состояние и перспективы развития (Москва, 2003, 2005г.); на
Международной научно-практической конференции «Интенсификация машинных
технологий производства и переработки льнопродукции» (Тверь, 2004г.); на Международной
научно-практической конференции «Актуальные проблемы аграрной науки и практики»
(Тверь, 7-9 июня 2005г.); на Международной научно-практической конференции «Новые
технологии и техника для ресурсосбережения и повышения производительности труда в
сельскохозяйственном производстве» (Москва, 2005г.); на Международной научнопрактической конференции «Научное обеспечение национального проекта «Развитие АПК»»
(Тверь, 2006г.). В 2005 г. технология получения белка «Способ получения альбуминноглобулинового белка «линумина» из жмыха семян льна» была награждена дипломом
победителя конкурса «Новые разработки 2005 года», проходившего в рамках 13-ой
специализированной выставки «Ярмарка продовольствия» (г. Тверь, 2005).
Объем и структура работы. Диссертация изложена на ____ листах машинописного
текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования,
результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка
литературы. Работа иллюстрирована ___ таблицами, ___ рисунками, включая
технологическую схему получения льняного белка.
Личное участие автора. Настоящая диссертационная работа является результатом
комплексных исследований, выполненных лично автором в 1999-2006 г. Автором
диссертации самостоятельно проведены экспериментальные исследования, осуществлена
обработка и анализ полученных данных, разработаны основные теоретические положения,
выводы и практические рекомендации. Все опубликованные работы написаны автором, или
при непосредственном его участии. Доля личного участия автора в написании публикаций
составляет 60-90%.
Содержание диссертации
Материалы и методы исследований
Объектами исследований являлись: 1) льняной жмых, полученный из семян льна,
выращенных в Пензенской, Костромской области и Ставропольском крае, являющийся
8
отходом льняного маслодельного производства льняного масла, получаемый методом
холодного прессования на предприятие ООО «Эколён», г. Тверь; 2) льняной белок,
получаемый в ходе реализации различных технологических стадий запатентованного
«Способа выделения льняного пищевого белка «линумина» из жмыха семян льна» (патент №
2232513). Сюда входят такие полупродукты, как солевой белковый экстракт, щелочной
белковый экстракт, солевой белок-сырец, щелочной белок-сырец, а также конечные
продукты технологии: солевой белковый концентрат, щелочной белковый концентрат.
Проводились исследования побочных продуктов технологии: первичной
сывороточной воды, первичной жмыховой пасты, вторичной жмыховой пасты, промывных
вод.
В качестве аналога льняного белкового концентрата изучался соевый белковый
концентрат и изолят фирмы ADM (США), текстурированный соевый белок фирмы Central
Soya (Дания). Для рациональной утилизации отходов производства были изучены
сорбционные свойства различных частей стебля пшеничной соломы.
Экстракцию белка из льняного жмыха проводили на первом этапе 7% раствором
хлорида натрия, а на втором – 0,1% раствором гидроксида натрия. Для этого льняной жмых
измельчали до размера частиц 0,25≥0,5 мм в лабораторной мельнице, калибровали через
почвенные сита и навеску массой 10 г., взятую из фракции с указанными параметрами,
заливали 7% раствором хлорида натрия в соотношении 1:10 и интенсивно перемешивали в
течение 45 мин. на магнитной мешалке.
Полученную смесь центрифугировали в течение 10 мин. при 3000 об/мин. Осадок,
представляющий собой жмых, заливали 0,1% раствором гидроксида натрия до достижения
прежнего объема 100 мл. К надосадочной жидкости приливали соляной кислоты
концентрацией 36-38% до рН=3,5 и отстаивали в течение 60 мин. Образовавшийся при этом
осадок белка (белок-сырец) отделяли от надосадочной жидкости центрифугированием в
течение 20 мин. при 3000 об/мин.
Полученный белок-сырец очищали от примесей полисахаридов и соли водной
промывкой в соотношении 1:10 по объему. Сепарирование осуществляли
центрифугированием при 3000 об/мин. в течение 20 мин. Льняной белковый концентрат
высушивали, используя поток теплого воздуха. Температура потока не превышала 40ºC.
Для определения количественного содержания белка в образцах использовали
наиболее широко применяемый и гостированный метод Къельдаля, основанный на
минерализации навески в концентрированной серной кислоте с селеном и последующем
учете азотистых веществ по продукту их распада – аммиаку (ГОСТ13496.4-93). Навески
измельченного льняного жмыха и вторичной жмыховой пасты брали по 0,5±0,001, а навески
льняного белкового продукта, белка-сырца и других высокобелковых продуктов – по 0,2 г.
Небелковый азот определяли, осаждая белки из водного экстракта трихлоруксусной
кислотой (Ермаков и др., 1972), а затем анализировали надосадочную жидкость по методу
Къельдаля. Расчет азота и белка проводился в мг навески.
Анализ аминокислотного состава проводили в соответствии с ГОСТ № 13496.21-87 и
ГОСТ № 13496.22-90.
Определение редуцирующих сахаров и гемицеллюлоз проводили по методу БертранаБьери (Петухова и др., 1989) и Ермакова (1972). Экстракцию редуцирующих сахаров
проводили 80-82% этанолом, а затем заливали образец 2% соляной кислотой и нагревали для
проведения 5-часового кислотного гидролиза гемицеллюлоз до редуцирующих сахаров.
Расчет сахаров проводился по выпавшему осадку закиси меди. Пересчет на гемицеллюлозы
проводился с использованием коэффициента 0,9 (Ермаков и др., 1972).
Гигроскопическую влажность устанавливали в соответствии с традиционной
методикой (Разумов, 1986).
Изучение конформации белков проводили методом Фурье-ИК-спектроскопии
(Пахомов, 1997). Образцы для ИК-спектроскопии готовили в виде таблеток с КВr (Эллиот,
1972). Спектры поглощения получали на Фурье-ИК-спектрометре «Equinox 55» фирмы
9
«Bruker» (Германия). Для соотнесения полос поглощения использовали данные,
представленные в работах Деханта (1976), Чиргадзе (1965), а также определяли спектры
модельных соединений.
Весь полученный экспериментальный материал обрабатывали методом вариационной
статистики по соответсвующим биометрическим алгоритмам с использованием критерия
Стьюдента (Венецкий, 1979; Иванова, 1981).
Результаты исследований и их обсуждение
1. Характеристика биохимических особенностей накопления белка в семенах
льна и возможности использования льняных жмыхов в качестве
перспективного источника протеина
Первой задачей нашего исследования явилось изучение содержания белка в льняных
семенах и жмыхах для определения предпочтительности использования объектов в качестве
источника белка. Как известно, выбор исходного сырья является основополагающим
фактором в разработке технологии.
Результаты проведенных исследований показали, что большую часть азотсодержащих
соединений семян льна составляют белки, на долю которых приходится от 81 до 92% в
зависимости от сорта (табл.1). Небелковые экстрактивные вещества составляют в среднем
порядка 15% (табл.1).
Таблица 1
Содержание различных форм азота и белка в семени льна-долгунца различных сортов
показатели
общий азот
белковый азот
небелковый азот
сырой протеин
белок
соотношение
Nбелк./Nнебелк
Алексим
%, общ.
%, а.с.в.
азота
4,39±0,09*
100
3,74±0,09*
85,19
0,65±0,01*
14,81
27,62±0,81*
100
23,35±0,60*
85,19
-
5,75
Белинка
%, общ.
%, а.с.в.
азота
3,14±0,04
100
2,56±0,05
80,89
0,60±0,01*
19,11
19,65±0,35
100
16,02±0,31
80,89
-
4,23
Лен-долгунец**
%, общ.
%, а.с.в.
азота
3,52±0,19
100
3,25±0,18*
92,05
0,28±0,01
7,95
22,02±1,21
100
20,29±1,16*
92,05
-
11,58
*- различия достоверны при р ≤ 0,05; ** - сертификат соответствия №РОСС RU.АЕ67.С00011
Предшественниками белков являются аминокислоты, короткоцепочечные пептиды,
поэтому содержание растворимых форм азота в процессе созревания семени снижается. Как
показано в табл.1, минимальное количество небелкового азота содержится в семенах льнадолгунца № РОСС RU.AE.67.C00011 и составляет около 8% от общего азота, что
свидетельствует о его зрелости.
Проведенные исследования показали, что содержание белка в льняных жмыхах
колеблется от 30 до 37%, что в 1,4 раза превышает его содержание в семенах. Поэтому
льняные жмыхи являются более перспективным сырьем в сравнении с семенами.
Содержание белкового азота в льняных жмыхах выше, чем в семенах, и составляет
соответственно 87% в сравнении с 81% в семенах. Более высокое количество белкового и
общего азота в льняных жмыхах объяснимо с позиций сбора льна на масло и на волокно.
Семена льна-долгунца, как правило, собираются в фазу ранней желтой спелости, так как
волокно в этот период отличается наилучшими качественными показателями. Семена
масличного льна собираются в фазе полной спелости, когда запас питательных веществ в
них масла и белка максимален.
10
Таблица 2
Биохимический состав и содержание различных форм азота в жмыхах различных
областей
показатели
общий азот
белковый азот
небелковый азот
сырой протеин
белок
соотношение
Nбелк./Nнебелк
дисахариды
гемицеллюлозы
пензенский жмых
%, общ.
%, а.с.в.
азота
4,90±0,16
100
4,32±0,02
87,76
ставропольский жмых
%, общ.
%, а.с.в.
азота
5,27±0,11*
100
4,62±0,10*
87,43
костромской жмых
%, общ.
%, а.с.в.
азота
5,91±0,03*
100
5,29±0,02*
89,51
0,60±0,02
30,59±1,56
27,00±0,13
12,24
100
87,76
0,66±0,01*
32,80±0,58*
28,87±0,64*
12,57
100
87,43
0,61±0,01
36,91±0,17*
33,06±0,13*
10,49
100
89,51
-
7,17
-
6,95
-
8,53
3,33±0,14*
18,01±0,12
*
-
2,86±0,03*
-
2,23±0,032
-
-
14,44±0,13*
-
13,47±0,07
-
*- различия достоверны при р ≤ 0,05
Проведенные исследования позволили установить зависимость между содержанием
белка и углеводов. Наши эксперименты показали (табл.1,2), что чем выше содержание белка,
тем ниже содержание редуцирующих сахаров, что хорошо согласуется с литературными
данными (Щербаков, 1991). Семена льна, из которых был получен костромской жмых,
являются более зрелыми, так как содержат максимальное количество сырого протеина –
36,91% и минимальное редуцирующих сахаров и гемицеллюлоз, соответственно, 2,23% и
13,47% (табл.2).
Таким образом, проведенные исследования общего количества азота и белка, а также
различных его форм в исходном сырье в зависимости от сорта льна и зоны его выращивания
выявило преимущества льняного жмыха перед льняным семенем в качестве источника
получения белка различного назначения. Полученные результаты позволили теоретически
обосновать и практически реализовать технологию выделения белка из жмыха льна.
2. Разработка технологии выделения белка из жмыха льна
Как показали проведенные исследования, льняные жмыхи содержат более 30% белка,
что позволяет рассматривать их в качестве дешевого растительного сырья для получения
протеина. Белки льна представлены преимущественно альбуминами и глобулинами,
характеризующимися полноценным аминокислотным составом (Виноградов, 2000;
Ущаповский, 2001). Это явилось предпосылкой разработки технологии получения белка из
жмыха льна. В основе технологии лежит принцип последовательной экстракции различных
белковых фракций из жмыха семян льна (рис.1). Разработанная технология позволяет
получать льняной белковый концентрат (содержание белка более 70%) либо изолят
(содержание белка около 90%). Технология защищена патентом №2232513. На базе отходов
разработанной технологии получения льняного белка может быть получен соломобелковый
корм для крупного рогатого скота (патент № 2268610).
11
ПРОДУКТ: Льняное масло,
получаемое методом холодного
прессования – выход более 30%
Семена льна
белки –23… 26,39%
липиды – 37…41%
углеводы – 23..28%
моно- и дисахариды – 2,81%
ОТХОД - СЫРЬЕ: Льняной жмых
белок – 30,6%
липиды – 11%
углеводы – 52%
моно- и дисахариды – 3,06%
Солевая экстракция белков
NaCl
Обезжиривание
гексаном
ПРОДУКТ: Солевой
белок – сырец
белок – 29,32%
белок-49,85%
ОТХОД: Вторичная
жмыховая паста
белок – 7,24%
ОТХОД: Первичная
жмыховая паста
белок – 13,31%
Льняной солевой белковый экстракт
сухой остаток – 9,10%
содержание белка в сухом в-ве – 9,71%,
концентрация белка в растворе – 0,89%
выход – 46,38% относительно содержания белка
в сырье
Осаждение белка HClконц
ПРОДУКТ: Льняная белковая мука
Щелочная экстракция 0,1%
раствором NaOH
Льняной щелочной белковый экстракт
сухой остаток – 6,82%
содержание белка в сухом в-ве – 6,05%
концентрация белка в растворе – 0,41%
выход– 22,13% относительно содержания белка в
сырье
ОТХОД: Первичная сывороточная
вода
содержание белка в сухом в-ве – 7,18%
сухой остаток – 8,75%
моно- и дисахариды – 2, 05%
потери – 14,38% относительно содержания
белка в сырье
Промывка белка водой
ПРОДУКТ: Льняной солевой
белковый концентрат
белок – 69,52%
липиды – 0,3%
углеводы – 19%
сырая зола – 8,5%
Осаждение белка HClконц
ПРОДУКТ: Щелочной
белок-сырец
белок – 61,83%
Промывка белка водой
ПРОДУКТ: Льняной щелочной
белковый концентрат
белок – 74,17%
липиды – 1,34%
углеводы – 17%
сырая зола – 5%
Рис.1 Технологическая схема выделения белка из жмыха льна
3. Характеристика целевых и промежуточных белковых продуктов
В результате проведения последовательной солевой и щелочной экстракции в раствор
удалось перевести 67,06% белка от исходного его количества в льняном жмыхе. Выход белка
в ходе солевой экстракции составил 44,95%, а щелочной – в 2 раза меньше – 22,11% от его
содержания в льносырье, что хорошо согласуется с литературными данными о фракционном
составе белков льна (Барбашов, 2004).
Проведенные эксперименты позволили установить, что солевой и щелочной белковые
экстракты имеют низкую концентрацию белка (0,83 и 0,41%), в связи с чем необходимо их
концентрирование. В результате осаждения белка соляной кислотой удается повысить
концентрацию белка в солевом белке-сырце до 30, а в щелочном белке-сырце до 62%
12
(табл.3). Фактически, щелочной белок-сырец по содержанию белка соответствует категории
белковой муки (более 50% белка).
Таблица 3
Содержание белка в целевых продуктах, полученных из льняного жмыха
показатель
содержание азота/белка в а.с.в., %
концентрация азота/белка в
растворе, %
количество азота/белка
относительно массы навески, %
количество азота/белка
относительно общего содержания
его в навеске, %
содержание азота/белка в а.с.в., %
концентрация азота/белка в
растворе, %
количество азота/белка
относительно массы навески, %
количество азота/белка
относительно общего содержания
его в навеске, %
солевая экстракция
солевой белковый раствор
солевой белок-сырец
азот, %
белок, %
азот, %
белок, %
1,44±0,03
9,01±0,14
4,69±0,16
29,32±1,00
0,14±0,003
0,83±0,03
-
-
14,43±0,22
13,75±0,21
13,87±0,19
9,33±0,14
44,95±0,71
44,95±0,68
31,21±0,32
31,21±0,32
щелочная экстракция
щелочной белковый раствор
щелочной белок-сырец
азот, %
белок, %
азот, %
белок, %
0,97±0,01
6,05±0,08
9,89±0,052
61,83±0,32
0,065±0,0014
0,41±0,04
-
-
1,08±0,001
6,77±0,10
0,92±0,001
5,72±0,023
22,13±0,34
22,11±0,31
18,68±0,08
18,70±0,083
Дальнейшее повышение концентрации белка осуществляется промывкой различными
растворителями. Максимального увеличения концентрации белка позволяет добиться
промывка горячей водой. После ее проведения солевой и щелочной белковый продукт
соответствует категории белкового концентрата с содержанием белка, соответственно, 73,31
и 78,56% (табл.4).
Таблица 4
Изменение концентрации белка в целевом продукте путем промывки различными
растворителями
последовательная промывка
вид очистки
белок-сырец
промывка водой,
tºC
этанол после
воды
ацетон после
воды и этанола
солевой белок-сырец
щелочной белок-сырец
потери, %
азот,%
белок,%
азот,%
7,39±0,07
белок,%
46,19±0,52
потери, %
-
9,89±0,05
61,83±0,32
-
11,73±0,15
73,31±0,94
27,12
12,56±0,05
78,50±0,28
16,67
11,81±0,06
73,81±0,51
0,5
11,80±0,04
73,76±0,26
-4,74
7,11±0,36
44,44±2,29
-29,37
12,73±0,14
79,57±0,87
5,81
параллельная промывка
промывка водой,
t°C
промывка
этанолом
11,76±0,06
73,51±0,39
27,31
12,58±0,06
78,66±0,37
16,83
8,55±0,10
53,48±0,06
7,28
11,71±0,03
73,21±0,22
11,38
«-» - снижение содержания белка в белковом продукте.
13
Высокая эффективность водной промывки, особенно в солевом белковом продукте,
объясняется значительным содержанием в семени льна водорастворимых полисахаридов –
слизей, которые в процессе экстракции переходят как в солевой, так и в щелочной белковый
экстракт, но в меньшей степени.
Обработка высушенного белкового продукта методом последовательной промывки
водой, этанолом, ацетоном и эфиром позволяет получить на основе солевого белка льняной
белковый изолят с содержанием белка 88,75%. Щелочной белковый концентрат имеет более
высокое содержание белка, чем солевой. Однако из солевого белкового концентрата
возможно получение изолированного белка.
Таким образом, на базе разработанной технологической схемы возможно получение
льняных белковых продуктов, соответствующих категориям белковой муки (50-70% белка),
белкового концентрата (70-90% белка) и изолята (более 90%белка). Каждая технологическая
стадия выделения белка оказывает определенное влияние на его структуру, вплоть до
денатурации белка, разрушения некоторых незаменимых аминокислот. В связи с этим
возникла необходимость изучения структуры льняного белкового продукта, выделенного из
жмыха.
4. Анализ конформации белковых продуктов
Высушенные порошки целевых, промежуточных и побочных белковых продуктов,
отобранные после каждой технологической стадии, были проанализированы с
использованием метода ИК-спектроскопии. В качестве контрольного образца нативного
белка использовали промышленный препарат изолята бычьего сывороточного альбумина.
Анализ ИК-спектров льняного жмыха позволил установить, что в нем преобладают
белки, имеющие α-свернутую форму. Об этом свидетельствует положение полос поглощения
амид I, амид II при 1653 см-1 и 1544 см-1 соответственно. Положение полосы поглощения
амид V при 660 см-1 подтверждает нахождение незначительной части белков в
неупорядоченной конформации. Причиной нарушения спиральной конформации белка
является отталкивание одинаково заряженных групп аминокислотных радикалов (глутамин,
аргинин), а также их большие размеры (треонин, лейцин). Присутствие перечисленных
аминокислот в составе белка льна, а также фенилаланина, тирозина, лейцина и валина
подтверждается ИК-спектрами белков.
Transmittance [%]
0.8
0.7
0.6
2
2854
0.5
1743 1544
2926
2854
0.4
16461543
0.3
1
0.2
1241
2925
3
3424
3500
1653
3000
2500
2000
Wavenumber cm-1
1500
1000
500
Рис.2 ИК-спектры костромского(1), ставропольского (2), пензенского (3) льняных жмыхов
14
Transmittance [%]
0.8
2
0.7
0.6
1238
1401
1
0.5
2927
1532
0.4
1243
2854
1407
0.3
1653
1542
2926
0.2
0.1
3422
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
Wavenumber cm-1
Рис.3 ИК-спектры солевого белкового экстракта (1) и солевого белка-сырца (2)
Изучение ИК-спектра солевого белкового экстракта позволило установить, что после
экстракции белков хлоридом натрия конформационных изменений в молекуле белка не
происходит. Об этом свидетельствует неизменное положение полос поглощения амид I, амид
II, амид III, амид IV в ИК-спектре солевого белкового экстракта. В связи с тем, что молекулы
соли обладают большими, чем белки электростатическими зарядами, они оттягивают на себя
молекулы воды, образующие гидратную оболочку белка, в результате чего заряд на
поверхности молекулы белка становится равным нулю. Для прохождения процесса
денатурации белка необходимо изменение двух стабилизирующих факторов: электрического
заряда и растворимости.
Анализ ИК-спектра солевого белка-сырца показывает изменение положения полос
поглощения амид II, амид III, амид IV, появление полосы поглощения при 1150 см-1,
расщепление полосы поглощения при 1406 см-1 на две при 1400 см-1 и 1384 см-1. Смещение
полосы поглощения амид II к 1532 см-1, характерному для хаотического клубка, смещение
полосы поглощения амид III к 1238 см-1 свидетельствуют об изменении конформации белка
вследствие его денатурации.
Денатурационные изменения наблюдаются и в процессе щелочной экстракции.
Смещение полос поглощения амид I к 1646 см-1, характерному для β-структур, отсутствие
поглощения в области амид II, амид III, обусловленных колебаниями группы –CОNН- и
деформационными колебаниями NH-группы в ИК-спектре щелочного белкового экстракта
свидетельствует о разворачивании третичной, вторичной структуры белков до первичной.
После осаждения щелочного белка-сырца соляной кислотой в его ИК-спектре полоса
поглощения амид II восстанавливается при 1529 см-1, а полоса поглощения амид I
наблюдается при 1656 см-1, оба эти значения характеризуют хаотический клубок. Положение
полосы поглощения амид III сдвинуто в длинноволновую область. Данные изменения
характеризуют процессы частичного самопроизвольного сворачивания в термодинамически
менее выгодные β-структуры (Финкельштейн, 2000). Последующее сворачивание
полипептидной цепи после нейтрализации становиться возможным из-за существования
областей гидрофобного связывания полипептидной цепи, не доступных для химических
взаимодействий (Кушнер, 1977). Очевидно, они впоследствии становятся зародышевыми
центрами формирования вторичной и третичной структуры полипептида.
15
Transmittance [%]
0.7
0.6
1
0.5
2
2854
0.4
2925
2860
0.3
1646
1400
1235
1529
0.2
2926
3426
3394
3500
3000
1656
2500
2000
Wavenumber cm-1
1500
1000
500
Рис.4 ИК-спектры щелочного белкового экстракта (1) и щелочного белка-сырца(2)
Таким образом, используемые в настоящее время методы концентрирования приводят
к денатурации белка, разрушению третичной и вторичной структуры. Снижение
концентрации денатурирующего агента приводит к образованию водородных связей и
самосборке более жестких β-структур, реализуя потенциал, заложенный в
последовательности аминокислотных остатков.
Проведенные исследования позволили установить, что льняной белковый концентрат
находится в конформации статистического клубка и β-структур. С позиций термодинамики
β-структуры являются менее выгодной формой существования макромолекул по сравнению
с α-спиралью (Финкельштейн,2000). Судя по ИК-спектрам льняных белковых продуктов,
после обработки этанолом белки в конформации β-структур преобладают. Это
предположение подтверждается смещением амид I и амид II полос поглощения к значениям,
характеризующим β-структуры.
Как показали проведенные исследования, технологическая обработка растительных
белков приводит к денатурации, и, как следствие, снижению их растворимости, изменению
функциональных свойств. Денатурация белка способствует повышению доступности
химических связей белка для пищеварительных ферментов, что облегчает усвоение
протеинов человеческим организмом (Рогов, 2000). С другой стороны, в процессе
денатурации возможно уменьшение содержания некоторых незаменимых аминокислот,
образование лизиноаланина и т.п. (Нечаев, 2003), что может снижать биологическую
ценность получаемых белковых продуктов. В связи с этим на следующем этапе работы было
проведено определение аминокислотного состава целевых белковых продуктов.
5. Биологическая ценность льняных продуктов
Как показали проведенные исследования, в аминокислотном составе как солевого, так
и щелочного льняного белкового концентрата присутствует семь незаменимых аминокислот,
а также обе частично заменимые аминокислоты – гистидин и аргинин.
Щелочной белковый концентрат превосходит практически в 2 раза солевой льняной
белковый концентрат по содержанию большинства незаменимых аминокислот: лизина,
треонина, валина, метионина, лейцина, изолейцина. Единственной аминокислотой,
16
содержание которой в рассматриваемых концентратах очень близко, является фенилаланин,
хотя и по этому показателю льняной солевой белковый продукт уступает щелочному. Его
содержится 2,22 и 2,15% соответственно.
Содержание частично незаменимых аминокислот гистидина и аргинина в льняном
щелочном белковом продукте также выше и составляет 2,02 и 5,83% соответственно.
Концентрация этих аминокислот в солевом белковом концентрате ниже и составляет 1,01 и
4,17% соответственно.
Сумма незаменимых аминокислот в льняном щелочном белковом концентрате
составляет 34,53, а, включая и частично незаменимые аминокислоты - 47,5%. Льняной
солевой белковый концентрат уступает по сумме незаменимых аминокислот льняному
щелочному белковому концентрату, в нем содержится 23,65% незаменимых аминокислот от
общего содержания их в белке.
На основании данных об аминокислотном составе белковых концентратов были
рассчитаны скоры незаменимых аминокислот относительно эталона ФАО/ВОЗ (Нечаев,2003;
Рогов,2000). Аминокислотный скор выражают в % или безразмерной величиной,
представляющей собой отношение содержания незаменимой аминокислоты (а.к.) в
исследуемом белке к ее количеству в идеальном белке согласно данным ФАО/ВОЗ
(Нечаев,2003; Рогов,2000).
мг.а.к.в1г.белка
AK 
 100
мг.а.к.в.1г.эталона
.
Таблица 5
Аминокислотный состав льняных и соевых белковых продуктов
(% от содержания белка)
Соя (Зубцов и др., 2002)
незаменимые
аминокислоты
изолейцин
лейцин
лизин
метионин
+цистин
фенилаланин
+тирозин
треонин
триптофан
валин
Лен
семена
стандарт
сорта Ленок
солевой
щелочной
ФАО
(Виноградов концентрат концентрат
и др., 2001 )
4,0
4,0
2,4
4,6
7,0
7,0
3,1
6,7
5,5
2,5
1,9
3,0
семена
молоко
мука
4,5
7,1
5,9
5,3
8,8
3,5
4,7
7,7
5,8
1,9*
2,5
2,3
3,5
4,2
2,0
3,0
4,1*
8,0
8,5
6,0
10,7
4,6
5,9
3,4
1,7
4,5
4,5
5,0
3,6
5,2
4,0
3,5
5,2
5,1
1,5
5,2
2,0
2,9
3,3
5,4
*-данные без учета цистина и тирозина
Первой лимитирующей аминокислотой в льняном солевом и щелочном белковом
концентрате, как и у большинства растительных белков, является лизин. В льняном солевом
белковом концентрате его содержание покрывает всего 34,36% потребности взрослого
человека, а в льняном щелочном белковом концентрате – на 55,82%, что в 1,62 раза выше,
чем в льняном солевом белковом концентрате.
Второй лимитирующей аминокислотой в льняных белковых концентратах является
треонин. Потребность взрослого человека в треонине за счет использования солевого
белкового концентрат удовлетворяется на 50,75, а щелочного – на 82,25% (табл.5). В целом,
аминокислотный состав щелочного белкового концентрата более сбалансирован, содержание
6 незаменимых аминокислот более 80% потребности в них взрослого человека, а по
содержанию валина и изолейцина льняной щелочной белковый продукт удовлетворяет
17
йц
ин
н
ле
ци
ол
из
ин
ио
ле
йц
ин
ле
йц
ин
ме
ти
ли
фе
он
зи
ни
и
н
н+
ла
ци
ла
ст
ни
ин
н
+
ти
ро
зи
н
тр
ео
ни
н
ва
ли
н
аминокислотный скор,%
ф
ен
ил
м
ал
ан
ет
ио
ей
оз
ин
ин
+т
ир
ва
л
ст
ин
ин
ци
он
н+
ни
тр
е
ли
зи
н
аминокислотный скор,%
потребность в них на 114 и 108% соответственно. Как в солевом, так и в щелочном льняном
белковом концентрате содержание суммы фенилаланина и тирозина
составляет,
соответственно 76,5 и 98,83% суточной потребности в нем человека. Белок льняного
щелочного белкового концентрата удовлетворяет 84,29% потребности человека в метионине
и цистине. А белок солевого льняного белкового концентрата – 56,29% потребности (рис.5).
В льняном солевом белковом
114,25
концентрате
второй
лимитирующей
108,40
120
98,83
95,00
аминокислотой является лейцин, его
100
82,25 84,29
76,50
использование
в
пищу
позволяет
80
60,25
55,82 50,75 56,29 58,60
удовлетворять
только
44,85%
суточной
60
44,85
потребности
взрослого
человека.
34,36
40
Применение
льняного
щелочного
20
белкового продукта в отличие от
0
предыдущего
образца
позволяет
практически полностью – на 95%
удовлетворять суточную потребность в
нем человека. Как показали проведенные
исследования аминокислотного состава
солевого и щелочного льняного белкового
концентрата,
щелочной
белковый
концентрат обладает более высокой
Рис.5
Содержание
незаменимых
пищевой ценностью (рис.5).
аминокислот в солевом и щелочном Сравнение
аминокислотного
льняном белковом концентрате
состава льняного белкового концентрата с
соевой белковой мукой показывает, что в
обоих продуктах не содержится всех незаменимых аминокислот: отсутствует аминокислота
триптофан (табл.5).
Несмотря на то, что соевая
белковая мука превосходит льняной
160
141,67
белковый концентрат по содержанию
117,50
108,40
140
110,00
таких незаменимых аминокислот, как
120
114,25 105,45
98,83
100,00
90,00
95,00
изолейцин, лейцин, фенилаланин, тирозин
84,29
100
82,25
65,71
и треонин, содержание лимитирующих
80
55,82
60
аминокислот метионина и цистина
40
покрывает
всего
65,71%
суточной
20
потребности в них человека. Это
0
незначительно, всего на 9,89% выше
аминокислотного
скора
лизина
–
лимитирующей аминокислоты льняного
белкового концентрата (рис.6). Значение
скора
лимитирующей
аминокислоты
определяет биологическую ценность и
степень усвояемости белков (Нечаев,
2003; Рогов, 2000). Отсюда следует, что
Рис.6
Сравнение
аминокислотных
биологическая
ценность
льняного
скоров соевой белковой муки
и
белкового концентрата не уступает
льняного белкового концентрата
биологической ценности соевой белковой
муки. Использование более мягких технологических условий на стадии концентрирования
белка позволит частично сохранить разрушающиеся в процессе технологической обработки
аминокислоты.
Таким образом, исследования аминокислотного состава льняных белковых продуктов,
получаемых в результате реализации разработанной нами технологии,
позволили
18
установить, что в их составе присутствуют семь незаменимых аминокислот: лизин, треонин,
валин, метионин, изолейцин, лейцин, фенилаланин, а также гистидин и аргинин.
Использование льняных белковых продуктов позволяет удовлетворять потребность человека
в большинстве незаменимых аминокислот более чем на 80%. Это свидетельствует о том, что
льняной белковый концентрат может найти применение в пищевой промышленности в
качестве белкового обогатителя при производстве аналогов мясных продуктов, а также
хлебобулочных и макаронных изделий.
6. Характеристика белковых компонентов технологических отходов после
реализации технологии выделения белка из жмыха льна
Как показали наши исследования, часть полноценного пищевого белка уходит в
технологические отходы, представленные первичной и вторичной сывороточной водой,
первичной и вторичной жмыховой пастой.
В связи с этим, следующей задачей нашей работы было изучение содержания белка в
отходах производства и поиск рационального пути их утилизации. В первичной
сывороточной воде содержится максимальное количество белка – 4,57%, включая и
небелковый азот (табл.6). Концентрация белка во вторичной жмыховой пасте составляет
более 7% (табл.6). Минимальная концентрация белка – 3,24% была обнаружена во вторичной
сывороточной воде.
Таблица 6
Количественное содержание белка в исходных и побочных продуктах разработанной
технологии
побочные продукты
показатель
содержание азота/белка в а.с.в., %
концентрация азота/белка в
растворе, %
количество азота/белка
относительно массы навески, %
количество азота/белка
относительно общего содержания
его в навеске, %
первичная жмыховая паста
азот, %
белок, %
азот, %
белок, %
2,14±0,12
13,35±0,80
0,73±0,001
4,57±0,07
0,44±0,025
2,77±0,16
0,06±0,001
0,39±0,07
18,43±1,12
11,50±0,70
0,73±0,015
4,50±0,10
37,62±2,28
37,58±2,28
14,33±0,22
14,39±0,20
побочный продукт
вторичная жмыховая паста
азот, %
белок, %
содержание азота/белка в а.с.в., %
концентрация азота/белка в
растворе, %
количество азота/белка
относительно массы навески, %
количество азота/белка
относительно общего содержания
его в навеске, %
первичная сывороточная вода
исходный продукт
льняной жмых
азот, %
белок, %
1,15±0,01
7,24±0,06
4,90±0,16
30,59±1,56
0,16±0,001
1,02±0,03
4,42±0,14
27,61±0,88
0,057±0,0009
5,76±0,11
4,90±0,16
30,59±1,56
1,16±0,02
18,81±0,37
100
100
В целом, в технологические воды переходит около 24,5% белка от общего его
содержания в исходном сырье, т.е. порядка одной трети от 70% экстрагируемого белка
19
переходит в отходы. На долю первичной сывороточной воды приходится 14,39, а на долю
вторичной сывороточной воды – 10,20% белка от общего его содержания в жмыхе. Во
вторичной жмыховой пасте остается около 19% от общего его содержания в исходном сырье.
Таким образом, в технологических отходах содержится около 43,5% белка льняного жмыха.
Следует отметить, что азотистые соединения, содержащиеся в первичной
сывороточной воде, представлены экстрактивным (небелковым) азотом, 60-80% которого
составляют свободные аминокислоты, представляющие особую пищевую ценность.
Азотистые соединения технологических вод представлены пептидами с низкой
молекулярной массой, что не позволяет осадить их под действием центробежных сил.
Помимо этого в первичную сывороточную воду переходят редуцирующие сахара,
водорастворимые полисахариды (камеди и слизи). В результате частичного гидролиза под
действием соляной кислоты на этапе осаждения белка они распадаются на моносахариды и
альдобионовую кислоту (Пащенко, 2004).
Анализ амидных характеристических полос поглощения указывает на
денатурационные изменения в структуре белков, присутствующих во вторичной жмыховой
пасте. Большая часть белков вторичной жмыховой пасты находится в β-конформации, на что
указывает положение характеристических амидных полос поглощения в ИК-спектре (рис.7).
В технологических водах содержится около 43,5% азотистых соединений от
содержания белка в льняном жмыхе, 24,5% которых отличаются высокими качественными
показателями и биологической ценностью. Помимо белков, отходы производства богаты
водорастворимыми углеводами в легко доступной для усвоения форме и липидами, как это
показано на ИК-спектре (рис.7).
Transmittance [%]
0.7
1
0.6
0.5
2
0.4
1741
2854
0.3
1402
1541
1239
0.2
2925
1654
1413
3408
3421
3500
1743 1642
3000
2500
2000
Wavenumber cm-1
1500
1245
1000
500
Рис.7 ИК-спектр первичной(1) и вторичной (2) жмыховой пасты
Таким образом, биохимический состав технологических отходов доказывает
целесообразность их использования в качестве белкового компонента для приготовления
корма крупному рогатому скоту. Изучение биохимического состава технологических
отходов позволило разработать на их основе технологию получения соломобелкового корма
для крупного рогатого скота (патент № 2268610), реализовав тем самым принципы
безотходности и экологичности.
20
ВЫВОДЫ
1. Установлено, что преобладающей формой азота как в семенах, так и в жмыхах – отходах
льняного маслодельного производства является белковый азот. Содержание сырого
протеина в жмыхах семян льна в 1,4 раза выше по сравнению с семенами, что
свидетельствует о перспективности их использования в качестве источника
растительного белка.
2. Создана научно-методическая база для получения белка из жмыхов семян льна, на основе
которой разработана технология получения белкового продукта «линумин».
3. Из жмыха льна получены белковые продукты, соответствующие по содержанию белка
белковой муке (более 50%), концентрату (70-90%) и изоляту (90% и более). Выявлены
денатурационные изменения белковых макромолекул в процессе выделения и осаждения
целевых продуктов из жмыхов семян льна, в результате чего конформация α-спирали
переходит в конформацию статистического клубка.
4. Установлено, что в целевом льняном белковом продукте содержится семь незаменимых
аминокислот: лизин, треонин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, фенилаланин, а также
гистидин и аргинин, считающиеся незаменимыми в детском возрасте, что
свидетельствует о его высокой биологической ценности, качественно и количественно
сравнимой с соевыми белковыми продуктами.
5. Установлено, что в составе технологических отходов получения льняного белка
содержатся биологически ценные компоненты: свободные аминокислоты, белки, липиды,
углеводы. Биохимический состав технологических отходов доказывает целесообразность
их использования в качестве белкового компонента для приготовления корма для
крупного рогатого скота
Основное содержание диссертации отражают следующие публикации
1. Стеблинин А.Н., Григорьева А.Л. Оценка пищевых свойств льна. // Технологии и
технические средства производства и переработки льнопродукции: Сб.науч.тр. Тверь:
ГНУ ВНИПТИМЛ, 2001 – С.77-83.
2. Григорьева А.Л. Очистка технологической воды при производстве пищевого льняного
белка // Достижения науки и техники АПК, 2003, №4 – С.32-33.
3. Панкрушина А.Н., Григорьева А.Л., Стеблинин А.Н. Разработка технологии получения
пищевого белка из льняного жмыха // Пища. Экология. Человек: Материалы 5-ой
Международной научно-технической конференции – М.: МГУПБ, 2003 – С.155-156.
4. Григорьева А.Л., Стеблинин А.Н., Панкрушина А.Н. Комплексная переработка отходов
льняного маслодельного производства // Биотехнология: состояние и перспективы
развития: Материалы Второго Московского международного конгресса (Москва, 10-14
ноября 2003 г.)– М.: ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д.И.Менделеева, 2003
– Ч.2 - С.58-59.
5. Григорьева А.Л. Изучение экстрагентов из льняного жмыха // XI Региональные
Каргинские чтения: VI областная научно-техническая конференция «Химия, технология
и экология»: Тез.докл. - Тверь: Твер.гос.ун-т, 2004 – С.15.
6. Григорьева А.Л., Панкрушина А.Н., Стеблинин А.Н. Влияние некоторых
технологических факторов на процентный выход белка, извлекаемого из жмыха льна //
Биология – наука XXI века: Материалы 8-ой Международной Пущинской школыконференции молодых ученых (17-21 мая 2004г.). – Пущино, 2004 - С.258.
7. Панкрушина А.Н., Григорьева А.Л., Пахомов П.М., Стеблинин А.Н. Изучение
содержания белка в льняных жмыхах и продуктах их переработки // Биомедицинские
технологии и радиоэлектроника, 2005, №10.
21
8. Григорьева А.Л., Панкрушина А.Н., Пахомов П.М., ИК спектроскопическое исследование
экстрактов льняного жмыха // Физико-химия полимеров: Синтез, свойства и применение:
Сб.науч.тр. Вып.10 – Тверь: Твер.гос.ун-т, 2004 – С.167-171.
9. Стеблинин А.Н., Миневич И.Э., Исакова А.В., Григорьева А.Л. Свойства льняного жмыха
и возможности его переработки // Интенсификация машинных технологий производства
и переработки льнопродукции: Материалы Международной научно-практической
конференции (15-16 июля 2004г.)– М.: «Издательство ВИМ», 2004 – Ч.2 - С.39-45.
10. Григорьева А.Л., Стеблинин А.Н. Биохимический состав льняного жмыха и льняного
пищевого белка // Интенсификация машинных технологий производства и переработки
льнопродукции: Материалы Международной научно-практической конференции (15-16
июля 2004г.)– М.: «Издательство ВИМ», 2004 – Ч.2 - С.58-64
11. Стеблинин А.Н., Миневич И.Э., Григорьева А.Л., Исакова А.В. Способ получения и
питательные свойства соломобелкового корма // Актуальные проблемы аграрной науки:
Сб.науч.тр. – Тверь: ТГСХА, 2005 – С.194-196
12. Григорьева А.Л., Панкрушина А.Н., Стеблинин А.Н. Использование жмыхов льна для
получения льняного белкового концентрата // Актуальные проблемы инноваций с
нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов
питания: Материалы III Российской научно-практической конференции – М.: РАЕН,
2005 – С.129-130.
13. Панкрушина А.Н., Пахомов П.М., Григорьева А.Л., Стеблинин А.Н. Биотехнологическое
получение льняного белка // Биотехнология: состояние и перспективы развития:
материалы Третьего Московского международного конгресса (Москва, 14-18 марта 2005
г.)– М.: ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д.И.Менделеева, 2005 – Ч.1 С.357-358.
14. Стеблинин А., Миневич И., Григорьева А., Исакова А. Белковый корм для жвачных
животных // Комбикорма, 2005, № 5 - С.30-31
15. Пахомов П.М., Григорьева А.Л., Панкрушина А.Н., Хижняк С.Д., Стеблинин А.Н.
Количество и качество белка в продуктах переработки льняного жмыха // Известия
высших учебных заведений. Пищевая технология, 2006, №1 – С.27-30.
16. Стеблинин А.Н, Миневич И.Э., Григорьева А.Л., Исакова А.В Некондиционные семена
льна-долгунца и перспективы их промышленного применения // Достижения науки и
техники АПК, 2006, №6 – С.45-46.
17. Стеблинин А.Н., Миневич И.Э., Григорьева А.Л., Исакова А.В. Пути повышения
эффективности использования продукции растениеводства // Новые технологии и
техника для ресурсосбережения и повышения производительности труда в
сельскохозяйственном производстве: Материалы XIII Международной научнопрактической конференции.– М.: «Издательство ВИМ», 2006 – Т.2 - С.307-313.
18. Патент на изобретение № 2232513 РФ МПК А23J1/14 C11B1/10. Способ получения
альбуминно-глобулинового белка «линумина» из жмыха семян льна / Стеблинин А.Н.,
Григорьева А.Л., Миневич И.Э., Зелинский А.М., Акаро А.И., Исакова А.В., Зубанов В.В.
№ 2002129154; Заявл.31.10.2002; Опубл. 20.07.2004 Бюл. №20.
19. Патент на изобретение № 2268610 РФ МПК А23К1/12. Способ получения
соломобелкового корма для жвачных животных / Стеблинин А.Н., Миневич И.Э.,
Исакова А.В., Григорьева А.Л. № 2004121661/13; Заявл. 14.07.2004; Опубл. 27.01.2006,
Бюл. № 03.
Выражаю глубокую признательность и благодарность моему научному руководителю
д.б.н., проф. А.Н.Панкрушиной за неоценимую помощь в работе над диссертацией, а также
д.х.н., проф. П.М.Пахомову и зав.лабораторией спектроскопии ТвГУ С.Д. Хижняк за помощь
в проведении экспериментальных исследований и интерпретации спектральных данных.