УДК 63:57 Сравнительная оценка действия бактериальных препаратов «Планриз» и «Байкал-М» на дыхательную и целлюлозоразлагающую активность почвы 2014 г. А.Х. Занилов Кабардино-Балкарская региональная общественная организация «Центр органического земледелия» e-mail: eco-agro.kbr@inbox.ru www.agroecocluster07.ru С момента выделения чистых культур азотфиксирующих микроорганизмов С.Н. Виноградским [1] не прекращались активные поиски возможностей использования почвенной микрофлоры для повышения плодородия почв и урожайности сельскохозяйственных культур. В последнее время сформировалась мировая тенденция экологизации сельскохозяйственного производства, тесно связанная с использованием различных микробиологических препаратов. Загрязнение почв средствами химизации и снижение качества сельскохозяйственной продукции способствуют дальнейшему развитию системы экологического земледелия. Развитые страны (США, Канада, Англия, Франция, Италия и др.) ставят вопрос о сокращении производства минеральных удобрений, в особенности, азотных и фосфорных, а недостаток питательных веществ в почве предлагают компенсировать за счет применения препаратов, созданных на основе ризосферных и ризоплановых микроорганизмов [2]. В последние годы в России разработан целый ряд бактериальных препаратов, выполняющих такие важные функции, как активация почвенной микрофлоры, улучшение прорастания растениями, интенсификация семян, разложения усиление пожнивных фотосинтеза остатков и труднодоступных органических соединений и др. Бактериальные препараты позволяют снизить расход азотных и фосфорных удобрений в 2 раза сохраняя ту же урожайности, что и при использовании полной нормы минеральных удобрений. При этом заметно улучшается качество сельскохозяйственной продукции, например уровень нитратов в продукции снижается в 2–2,5 раза [3]. 1 Обогащение почвы микрофлорой и направленное изменение ее состава является одной из задач повышения почвенного плодородия [4,5,6]. Для этого необходимо изучение связей и закономерностей, проявляющихся между микробным сообществом, с одной стороны и степенью окультуренности, свойствами почвы, а также особенностями возделываемых растений - с другой [5]. Научные исследования действия биопрепаратов чаще всего связаны с их влиянием на урожайность сельскохозяйственных культур, реже - на качество урожая, а опубликованных данных по изменению химических и биологических свойств почвы под действием биопрепаратов недостаточно, в связи с чем, знание показателей биологической активности почв приобретает особое значение. Целью данной работы являлось комплексное исследование влияния бактериальных препаратов «Планриз» и «Байкал-М» на интенсивность дыхания почвы и активность разложения целлюлозы, показатели которых служат для оценки их биологической активности. Объекты и методы исследования. В препарата «Планриз» входят микроорганизмы состав бактериального Pseudomonas florescence штамм АР-33. Препарат Байкал-М содержит смесь колоний различных родов молочнокислых и фотосинтезирующих бактерий. Бактерии Pseudomonas florescence являются продуцентами необходимых растениям аминокислот, цитохромов и витаминов. Живут симбиотрофно на поверхности корней, стимулируя рост и развитие растений. Действие молочнокислых бактерий заключается в подавлении действия патогенных микроорганизмов, вызывающих болезни растений. Фотосинтезирующие бактерии способствуют продуцированию нуклеиновых и аминокислот, полезных для растений биологически активных веществ, а также других стимулируют рост полезных микроорганизмов и микоризных грибов. Действие указанных препаратов изучалось в условиях модельного 2 опыта на черноземе выщелоченном остаточно-луговатом. Данные почвы характеризуются средним содержанием гумуса (5,7 %), низким содержанием легкогидролизуемого азота, высокой концентрацией подвижного фосфора и обменного калия, нейтральной реакцией почвенного раствора (рН=6,7). Масса почвы в вегетационных сосудах составляла 3 кг при влажности 60 % полной влагоемкости (ПВ), которая поддерживалась на протяжении всего опыта - 90 суток. Модельный опыт был заложен в шести вариантах в трехкратной повторности, с использованием посева растений ячменя и внесением описываемых бактериальных препаратов по представленной ниже схеме (табл.1). Таблица 1. Схема модельного опыта, заложенного с использованием бактериальных препаратов «Планриз» и «Байкал-М» Вариант Описание вариантов модельного опыта № 1 Почва (контроль) 2 Почва + растения 3 Почва + «Планриз» 4 Почва + «Байкал-М» 5 Почва +Растения + «Планриз» 6 Почва +Растения + «Байкал-М» В вариантах № 3 и № 4 изучалось изменение биологических свойств почв под действием биопрепаратов без высева растений. В этих вариантах препараты вносились методом разового полива почвы 100 мл 5 %-х растворов (по схеме опыта). В вариантах № 5 и № 6 действие препаратов изучалось в околокорневой зоне растений ячменя. Биопрепараты в этих вариантах вносились в почву посредством замачивания семян в течение 1,5 часов в 10 %-х растворах. Для изучения действия внесенных биопрепаратов в динамике почвенные образцы отбирались через 5; 30; 60 и 90 суток начиная от времени закладки опыта. 3 Результаты и их обсуждение. Дыхание почвы. Продуцирование углекислого газа почвой есть одна из важнейших экологических функций. По количеству углекислоты, выделяемой почвой, можно судить об интенсивности процессов разложения органического вещества [7], характеризовать продуктивность фитоценоза [8]. Интенсивность дыхания является показателем биологической активности почвы. Авторами отмечается положительная корреляционная связь между интенсивностью дыхания почвы и ее плодородием как в естественных, так и в культурных ценозах [9]. Например, в многолетнем опыте, заложенном в Краснодарском государственном аграрном университете, была установлена высокая корреляция (r=0,74) между интенсивностью дыхания и урожайностью озимой пшеницы [10]. Литературные данные о долях объема СО2, выделяемого корнями растений и микроорганизмами почвы разноречивы. По одним источникам корни растений выделяют около 1/3 углекислоты, а микроорганизмы ответственны за 2/3 выделяющегося из почвы углекислого газа [11]. Другие исследования показывают, что корни и микроорганизмы вносят равный вклад в выделение углекислого газа из почвы [12]. Рассмотрим действие биопрепаратов «Планриз» и «Байкал-М» на интенсивность почвенного дыхания в описываемом модельном опыте. Представленные результаты исследований на диаграммах (рис. 1, 2) демонстрируют изменение эмиссии СО2 при воздействии на почву указанными препаратами. 4 мг СО2/100г/сут 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 83 84 78 78 74 71 70 68 64 58 66 49 46 50 39 33 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 время воздействия, сутки К+Р Планриз Байкал Контроль Рисунок 1. Динамика изменения интенсивности дыхания почвы под воздействием биопрепаратов (варианты № 1; № 2; № 4; № 6) Рисунок 1 иллюстрирует повышение интенсивности выделения СО2 в вариантах с использованием биопрепаратов на всех временных участках по сравнению с контролем. Существенное изменение отмечается через 60 и 90 дней после закладки опыта. При использовании препарата «Планириз» изменение составляет 43 % и 50 %. При использовании препарата «БайкалМ» - 29 % и 42 % соответственно. Первые 30 дней опыта влияние микроорганизмов, содержащихся в обоих препаратах, на интенсивность почвенного дыхания носило несущественный характер (3-11 %). Можно предположить, что интродукция дополнительной микробной биомассы на первых этапах взаимодействия микроорганизмов с корневой системой растений создает конкуренцию аборигенным видами микроорганизмов. В то же время результаты, полученные через первые 30 суток роста растений ячменя в варианте без добавления биопрепаратов (вариант № 2), демонстрируют увеличение объема эмиссии СО2 на 18,3% по отношению к контрольному варианту и на 11-16 % по отношению к вариантам с бактеризованными растениями (варианты № 5; № 6). Несмотря на то, что со временем интенсивность дыхания почвы замедляется во всех вариантах, необходимо отметить, что ее разница в 5 вариантах с препаратами и контролем к концу опыта увеличивается (табл.1). Таблица 1. Изменение динамики интенсивности дыхания почвы под действием препаратов в % по отношению к контролю Время отбора образцов от закладки опыта, сутки Препараты 5 30 60 90 Показатели изменения интенсивности, % «Планриз» 14 7 43 51 «Байкал-М» 12 3 29 42 Способность исследуемых биопрепаратов продлевать период повышенной эмиссии углекислоты по сравнению с контрольным вариантом можно отнести к дополнительному положительному эффекту описываемых средств. Сравнивая дыхательную активность почв, в условиях изучаемых биопрепаратов, можно отметить, что под действием «Планриз» она несколько выше, в среднем на 10 %. В вариантах без высева растений (№ 3; № 5) наблюдается понижение продуцирования углекислоты на 8-25 %, в зависимости от сроков воздействия препаратов. При этом динамика снижения интенсивности мг СО2/100г/сутки выделения СО2 в околокорневой зоне бактеризованных растений повторяется 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 75 70 74 72.6 66 64.4 58.3 53 50 39.6 38 0 33 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 время воздействия, сутки Контроль Планриз Байкал Рисунок 2 Динамика изменения интенсивности дыхания почвы с внесением биопрепаратов (варианты № 1; № 3; № 5). 6 Как показано на рисунке 2, во всех вариантах наблюдается общая тенденцая изменения интенсивности почвенного дыхания. Под действием биопрепарата «Планриз» интенсивность дыхания почвы изменяется незначительно – до 15%, в зависимости от времени воздействия препарата. «Байкал-М» также не способствует существенной интенсификации дыхания почвы вне симбиоза с корневой системой растений, особенно на первых этапах эксперимента (до 30 суток). Через 60 и 90 суток «Байкал-М» способствовал усилению выделения СО2 по сравнению с контролем на 18 % и 22 % соответственно. Как отмечалось выше, интенсивность почвенного дыхания служит важным показателем почвенного плодородия и характеризует степень интенсивности процессов разложения органического вещества в почве. С этих позиции важно отметить особенности питания растений в промежутке времени 30 - 60 дней, так как именно на этом отрезке времени проявилось заметное изменение скорости выделения углекислоты почвой, обогащенной микроорганизмами. Особенности питания большинства сельскохозяйственных культур проявляются в том, что основная часть элементов питания поглощается в ранние сроки. Именно с этим связана система удобрения, предусматривающая внесение 2/3 всего объема удобрений под основную обработку почвы и лишь 1/3 в качестве припосевного внесения и подкормок. Например, некоторые озимые культуры за осенний период поглощают до 30 % всего количества питательных веществ, тогда как сухая масса достигает всего 10 % конечного урожая. Некоторые яровые за 1,5-2 месяца потребляют 2/3 - 3/4 всего количества питательных веществ (www.coolreferat.com). Таким образом, периоды повышенной интенсивности дыхания почв и активного потребления растениями питательных веществ и формирование фитомассы совпадают. С точки зрения необходимости создания оптимальных условий для питания растений, посредством интенсификации биохимических процессов, в том числе разложения органических веществ почвы, применение биологических препаратов показало свою обоснованность. 7 исследованных Целлюлозоразлагающая активность (ЦРА) почвы. Проявление целлюлазной активности целлюлозразрушающих почвы связано микроорганизмов, с энергией деятельности представленных грибами и бактериями и продуцированием ими экзоцеллюлаз. Целлюлазная активность почвы положительно коррелирует с содержанием гумуса, азота, фосфора, некоторых микроэлементов [13], а также с содержанием углеводов в растительных остатках. Она зависит от типа растительности, рельефа местности и гидротермического режима почвы [14]. Наиболее активное участие в трансформации целлюлозы в почве принимают грибы, бактерии и актиномицеты [15]. В целом, биоклиматические процессы и разложения экологические целлюлозы условия отражают почвообразования, интенсивность протекания биохимических процессов в почве, уровень плодородия и биологической активности почвы [16], но при этом корреляции между интенсивностью дыхания почвы и ее целлюлозоразлагающей активности не отмечается [17]. Опыт по определению влияния исследуемых биопрепаратов на целлюлозоразлагающую активность почвы был заложен через 90 суток после уборки растений из сосудов и завершения исследования дыхательной активности почвы. При закладке опыта за основу была взята методика, предложенная Воробейчик и Пищулиной [18], которая заключалась в определении скорости деструкции чистой целлюлозы (лабораторная фильтровальная бумага). Бумага помещалась в пакеты из капроновой сетки с ячейками 0,5 мм, размером 5×10 см. Пакеты с целлюлозой погружались вертикально в вегетационные сосуды. Верхний слой бумаги находился на 3 см ниже верхнего уровня почвы. Образцы бумаги в почве выдерживали 30 суток, после чего определялась разница между первоначальной массой бумаги и массой бумаги после извлечения ее из почвы. Извлеченная бумага предварительно сушилась 2 часа в сушильном шкафу при t 105°С. Скорость 8 деструкции выражалась в % убыли массы/день. Интересно было проследить действие бактериальных препаратов на ЦРА и их способность к пролонгированному влиянию. По окончании опыта был проведен сравнительный анализ полученных данных. Представленная ниже диаграмма показывает повышение целлюлозоразлагающей активности в вариантах с внесением в почву биопрепаратов, даже при отсутствии корневой системы растений (варианты № 3; № 4). Интенсивность целлюлозоразложения в этих вариантах превышает контрольный на 69 % 2 1,63 1.8 и 90% соответственно. 1,77 1,57 1,57 1.6 1.4 1.2 % 1 1,1 0,93 0.8 0.6 0.4 0.2 0 1 2 3 4 5 6 Номера вариантов Рисунок 3. Интенсивность ЦРА под действием исследуемых биопрепаратов, %/сутки. Рисунок 3 свидетельствует о влиянии корневой системы на ЦРА, усиливая ее активность по отношению к контролю на 75 %. (вар.2). Можно предположить, что столь значительная разница наблюдается благодаря изменению микробиологических свойств почв, вызванному влиянием растительности, причем воздействие это пролонгировано и проявляется даже через 30 суток после удаления растительных остатков. Сходные данные получены и другими авторами при проведении эксперимента на парующих почвах и почвах, занятых растениями. Результат показал, что разложение целлюлозы и продукция СО2 в почве под растениями гораздо выше, чем без 9 растений [19]. В вариантах № 5 и № 6, в которых воздействие биопрепаратов сочеталось с влиянием корневой системы растений, эффект получился различным. В варианте № 5 (с внесением препарата «Планриз») отмечается значительное усиление ЦРА по сравнению с контролем (69 %), но полученные данные вполне сопоставимы с действием, производимым посевом необработанных препаратами растений (вариант № 2). В варианте № 6, в котором препарат «Байкал-М» сочетается с посевом ячменя, наблюдаются самые низкие показатели среди обработанных вариантов. Превышение ЦРА над контролем составляет всего 18 %. Очевидно, что комплекс молочнокислых и фотосинтезирующих бактерий, представленных в биопрепарате «Байкал-М» в симбиозе с корнями растений, не оказывает стимулирующего воздействия на разложение целлюлозы в почве. Можно предположить, что причины снижения ЦРА почвы при обогащении растений препаратом «Байкал-М», связаны с изменением экологических функций других групп микроорганизмов, находящихся в околокорневой зоне, а также нарушением естественного хода сукцессионных изменений [20]. Заключение. Изучение действия микробиологических препаратов в модельном опыте показало возможности эффективного их использования в сельскохозяйственном производстве для повышения биологической активности почвы. Ее интегральные показатели - интенсивность дыхания почвы и целлюлозоразлагающая активность при применении изученных биопрепаратов повышаются. Использование препарата «Планриз» (бактерии рода Pseudomonas florescence) способствует повышению интенсивности дыхания почвы, а следовательно, и интенсификации процессов разложения органического вещества почвы на 43-50 %. Активация процессов дыхания совпадает с периодом интенсивного питания растений. Эффективность препарата 10 «Планриз» подтверждается и повышением целлюлозоразлагающей активности (ЦРА) на 69 % по отношению к контролю. Бактериальный препарат «Байкал-М» (комплекс молочнокислых и фотосинтезирующих бактерий) по влиянию на интенсивность дыхания почвы незначительно уступает действию «Планриз», а влияние на ЦРА почвы проявляется вне сочетания с корневой системой растений. Исследованные микробиологические препараты рекомендуются как средство активации процессов разложения органического вещества почвы, с целью обеспечения культурных растений доступными элементами питания. Способность препаратов «Планриз» и «Байкал-М» повышать ЦРА должна быть учтена при разработке технологий, способствующих ускорению деструкции стерневых остатков. Литература: Мишустин Е.Н., Емцев В.Т. Микробиология. М., «Колос», 1978. 351с. 2. Симбиотическая азотфиксация и пути ее повышения / Отв. ред. М.В. Кауш. – Кишинев: Штиинца, 1992. – 148с.; Базилинская М.В. Исследования по проблеме биологической фиксации азота в Канаде // С.-х. пр-во и наука. –1986. – №1. – С.21. (Обзор. информ. Сер.1. Экономика, земледелие и растениеводство). 3. Вакуленко В.В. Биологически активные соединения для повышения урожайности и качества продукции // Химия в сел. хоз-ве. – 1997. – № 5. – С.37. 4. Симонович Е.И. Влияние биоудобрения «Белогор» на почвенную биоту. Материалы V съезда Всероссийского общества почвоведов им. Докучаева. Ростов-на-Дону. 2008. с.130. 5. Миненко А.К. Изменение биологической активности дерновоподзолистых почв при их окультуривании «ВНИИ Агроэкоинформ». 6. Хазиев Ф.Х. Системно-экологический анализ ферментативной активности почв. М.: Наука, 1982. 7. Ведрова Э.Ф. Разложение органического вещества лесных подстилок // Почвоведение.1997. №2. С.261-223. 8. Карпачевский Л.О. Лес и лесные почвы. М.: Лесная промышленность, 1981. 264 с. 9. Макаров Б.Н. Дыхание почвы и роль этого процесса в углеродном питании растений // Агрохимия. 1993. №8. С.94-104. 10. Янчковский Ю.Ф. Биологическая активность чернозема 1. 11 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. выщелоченного в агроэкологическом мониторинге / Агроэкологические проблемы в земледелии Северного Кавказа и Центрально-Черноземной зоны России. Краснодар, 2001. с.32-33. Благодатский С.А., Ларионова А.А., Евдокимов И.В. Вклад дыхания корней в эмиссию СО2 из почвы // Дыхание почвы. НЦБИ РАН Пущино, 1993. С. 26-32/ Курганова И.А. Эмиссия и баланс диоксида углерода в наземных экосистемах России. автореф.д.б.н. М.2010г. 50 стр. Козлов К.А. Биологическая активность почв Восточной Сибири: Автореф.дис….д-ра биол.наук. Таллин: АН ЭССР, 1970. 37с. Хазиев, 1982/ Манучарова Н.А. Мониторинг развития микробной деструкции хитина и целлюлозы в почвах. Материалы V съезда Всероссийского общества почвоведов им. В.В. Докучаева. Ростовна-Дону. 2008г. С.119. Гауэрт В.И., Наплекова Н.Н., Хмелеа В.А. Сравнительная оценка показателей биологической активности черноземов горного Алтая. – Изв.СО АН СССР. Сер.биол.и мед.наук, 1977, вып.3, №15, с.3135. Владыченский А.С., Телеснина В.М., Румянцева К.А., Чалая Т.А. Органическое вещество и биологическая активность постагрогенных почв южной тайги. Почвоведение 2013. №5. С.570-582. Е.Л.Воробейчик, П.Т.Пищулин. «Влияние деревьев на скорость деструкции целлюлозы в почвах, в условиях промышленного загрязнения. Почвоведение. №5. 2011. с.597-610. Ларионова А.А., Котева Ж.В., Розанова Л.И., Кудеяров В.Н. Влияние азотных удобрений на разложение целлюлозы в почве в зависимости от отношения С:N в субстрате // Почвоведение. 1994, №9. Полянская Л.М., Иванов К.Е., Звягинцев Д.Г. Новый метод учета численности грамотрицательных бактерий в почве. Материалы V съезда Всероссийского общества почвоведов им. Докучаева.Ростов-на-Дону. 2008г. С.124. www.coolreferat.com 12