На правах рукописи Филонова Наталья Владимировна Иммуно

На правах рукописи
Филонова Наталья Владимировна
Иммуно-патогенетическая характеристика эффективности применения
полисахаридов из бурых водорослей Тихого океана в комплексе с базисной
терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С
14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Владивосток – 2012
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении
«Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии»
Сибирского
отделения
Российской
академии
медицинских
наук,
Государственном бюджетном учреждении здравоохранения «Краевая
клиническая инфекционная больница»
Научный руководитель:
Доктор медицинских наук Запорожец Татьяна Станиславовна
Официальные оппоненты:
Скляр Лидия Фёдоровна - доктор медицинских наук, доцент кафедры
инфекционных болезней ГБОУ ВПО «Владивостокский государственный
медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального
развития Российской Федерации
Лазанович Владимир Анатольевич – кандидат медицинских наук, ассистент
кафедры биологической химии, клинической лабораторной диагностики, общей
и клинической иммунологии ГБОУ ВПО «Владивостокский государственный
медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального
развития Российской Федерации
Ведущая организация:
Федеральное
государственное
бюджетное
учреждение
«Научноисследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»
Российской академии медицинских наук
Защита состоится 24 мая 2012г. в 13.00 часов на заседании диссертационного
совета ДМ 208.007.02 при ГБОУ ВПО «Владивостокский государственный
медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального
развития Российской Федерации по адресу: 690002, г. Владивосток, проспект
Острякова, 2
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ
ВПО
«Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства
здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Автореферат разослан « 23 »
апреля
Ученый секретарь
диссертационного совета
2012 г.
Шаркова Валентина Александровна
2
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы: Вирусный гепатит С является актуальной
проблемой современного здравоохранения в связи с распространенностью в
популяции, высокой частотой формирования цирроза печени и
гепатоцеллюлярной карциномы, развитием внепеченочных проявлений,
определяющих трудности диагностики заболевания и его лечения (Радченко
В.Г., 2004; Chang K. M., 2003; Hoofnagle J.H., 2002; Matsuzaki К. et al., 2007).
Важной особенностью HCV-инфекции является способность вируса к
длительной персистенции в организме хозяина (Argentini С. et al., 2009).
Генетическая вариабельность HCV, высокая скорость мутаций, подавление
иммунного ответа под действием структурных и неструктурных белков вируса,
а также инфицирование вирусом иммунокомпетентных лимфоидных клеток,
являются факторами, способствующими хронизации инфекции (Argentini С. et
al., 2009; Blackard J. T. et al., 2008; Yan F. et al., 2000). Персистенция вируса
гепатита С в клетках, выполняющих функцию иммунного надзора, может
сопровождаться морфологической и функциональной дезорганизацией
иммунной системы, наиболее значимым проявлением которой являются
количественные и функциональные нарушения клеток, участвующих в
иммунных реакциях (Буеверов А.О. с соавт., 2000; Радченко В.Г., 2004; Серов
В.В., 2004). Несмотря на многочисленные исследования в этой области, многие
аспекты
иммунопатогенеза
HCV-инфекции
остаются
недостаточно
изученными.
Трудной и до конца не решенной проблемой современной медицины
является лечение хронического вирусного гепатита С (ХВГС), которое
предполагает комплексный подход и включает два основных направления:
базисное и этиотропное (Соринсон С.Н., 1998). Этиотропная терапия ХВГС
предусматривает использование препаратов рекомбинантных интерферонов-α в
сочетании с синтетическими аналогами нуклеозидов. Базисное лечение
включает
в
себя
охранительный
режим,
лечебное
питание,
дезинтоксикационную и метаболическую терапию (Блюм Х.Е., 2005;
Богословская Е.В. с соавт., 2007; Shepherd J. et al., 2004). В настоящее время в
дополнение к базисному и этиотропному лечению ХВГС используют
иммуномодулирующую
терапию
рекомбинантными
интерлейкинами
(ронколейкин, беталейкин), ростовыми и колониестимулирующими факторами,
индукторами интерферонов (Лобзин Ю.В. с соавт., 2001; Конусова В.Г. с соавт.,
2003; Романцов М.Г. с соавт., 2008). Однако, резистентность некоторых
пациентов к интерферонам и иммуномодулирующим препаратам, наличие
множества противопоказаний к их назначению, побочные эффекты,
недостаточная эффективность, длительность терапии и высокая ее стоимость
3
(Ивашкин В.Т. с соавт., 2007; Крель П.Е., 2000) привели к необходимости
поиска новых эффективных средств терапии.
Одним из возможных подходов к эффективному патогенетически
обоснованному лечению пациентов с ХВГС является включение в
комплексную терапию биокорректоров. Среди природных соединений
несомненный интерес представляют полисахариды, выделенные из морских
бурых
водорослей,
обладающие
противовоспалительными,
цитокининдуцирующими,
иммуномодулирующими,
гепатозащитными,
антивирусными, антиоксидантными
свойствами (Запорожец Т.С., 2006;
Кузнецова Т.А. с соавт., 2003; Cumashi А. et al., 2007; Alekseyenko T.V. et al.,
2007; Mandal P. et al., 2007; Lee J. et al., 2004; Хотимченко М.Ю., 2011).
Настоящая работа посвящена исследованию возможности коррекции
дисфункции иммунной системы у пациентов с ХВГС при включении в
комплекс терапевтических мероприятий биологически активной добавки к
пище (БАД) «Фуколам» на основе полисахаридов из бурых водорослей.
Цель исследования: изучить влияние полисахаридов из бурых
водорослей на состояние иммунной системы и воспалительный процесс в
печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С для оптимизации
базисной терапии.
Задачи исследования:
1. Исследовать состояние системы врожденного и адаптивного иммунитета у
пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации
2. Исследовать состояние цитокиновой системы у пациентов с хроническим
вирусным гепатитом С в фазе реактивации
3. Оценить
иммуно-патогенетическую
эффективность
применения
полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у
пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации
4. Исследовать влияние полисахаридов из бурых водорослей на
воспалительный процесс в печени
Научная новизна: установлены особенности дисфункции иммунной
системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации
с низкой и умеренной степенью биохимической активности, выражающиеся в
изменении функциональной активности лимфоцитов (нарушение процессов
активации, продукции цитокинов), нейтрофилов (снижение фагоцитарной
активности) на фоне
нормальных количественных параметров
субпопуляционного состава и активации гуморальных факторов иммунитета.
Установлено иммуномодулирующее действие полисахаридов из бурых
водорослей, применяемых в комплексе с базисной терапией у пациентов с
хроническим вирусным гепатитом С: изменение процессов активации
4
лимфоцитов периферической крови; нормализация баланса Th1- и Th2цитокинов, уровня иммуноглобулинов и иммунных комплексов; стимуляция
фагоцитарной активности нейтрофилов; восстановление баланса между
процессами перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты. В
экспериментальных и клинических исследованиях доказано, что полисахариды
из бурых водорослей Тихого океана снижают воспалительный процесс в
печени.
Практическая значимость: Обоснована целесообразность применения
полисахаридов из бурых водорослей для коррекции иммунной дисфункции,
нормализации свободнорадикальных процессов и снижения воспалительного
процесса в печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С.
Разработана и внедрена в практическое здравоохранение Приморского
края (ГБУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница») методика
применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной
терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, определена
перспектива ее практического использования при гепатитах различной
этиологии,
представлены
методические
рекомендации
“Применение
полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у
пациентов с хроническим вирусным гепатитом С” (утверждены Департаментом
здравоохранения администрации Приморского края), определены наиболее
информативные критерии оценки степени выраженности иммунных нарушений
у пациентов с ХГВС (уровень экспрессии активационных антигенов на
поверхности лимфоцитов крови).
Апробация материалов работы: Результаты работы были представлены
на научно – практических конференциях и симпозиумах международного,
российского и регионального уровня: XII Международной научной конференции
с международным участием «Здоровье семьи – XXI век» и III Международной
научной конференции «Онкология - XXI век» (г.Эйлат, Израиль, 2008),
Всероссийской научно-практической конференции «Иммуномодуляторы
природного происхождения» (Владивосток, 2009), V научно-практической
конференции «Инфекционная патология в Приморском крае» (Владивосток,
2010), III Съезде военных врачей медико-профилактического профиля
Вооруженных Сил Российской Федерации «Достижения науки и практики в
обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия Вооруженных Сил
Российской Федерации» (Санкт-Петербург, 2010), VIII Российской конференции
иммунологов Урала (Сыктывкар, 2010), научной конференции с международным
участием «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты
инфекционных болезней» (Иркутск, 2010), III Ежегодном Всероссийском
Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2011), V Всероссийской
5
научно-практической
конференции
с
международным
участием
«Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов «
(Новосибирск, 2011), Всероссийской научно-практической конференции с
международным участием «Дни иммунологии в Сибири» (Абакан, 2011), Χ
Региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы
аллергологии и иммунологии» (Владивосток, 2012).
Публикации: По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, в том
числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для
публикации основных положений диссертации.
Объем и структура диссертационной работы: Диссертация изложена на
166 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора
литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав результатов
собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы,
включающего 310 источников, из них 161 отечественных и 149 зарубежных
авторов. Работа иллюстрирована 22 таблицами и 7 рисунками.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Состояние иммунной системы у пациентов с хроническим вирусным
гепатитом С в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью
биохимической активности характеризуется нарушением процессов активации
лимфоцитов,
дисбалансом
сывороточных
цитокинов,
сниженной
интерферонпродуцирующей и фагоцитарной функцией клеток крови,
активацией гуморальных факторов иммунитета.
2. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисным
лечением у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С оказывает
иммуномодулирующее действие на показатели цитокинового статуса,
гуморальные и клеточные факторы адаптивного и врожденного иммунитета,
способствуя коррекции метаболической иммуносупрессии.
3. Полисахариды из бурых водорослей снижают воспалительный процесс в
печени - нормализуют биохимические и морфометрические показатели печени,
восстанавливают баланс системы перекисного окисления липидов и
антиоксидантной защиты.
Личный вклад автора: Анализ данных отечественной и зарубежной
литературы по теме диссертации, комплексное исследование иммунного
статуса пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, ретроспективный
анализ историй болезни пациентов с хроническим вирусным гепатитом С,
статистическая обработка полученных результатов и их анализ, подготовка
основных публикаций, написание диссертации выполнено лично автором.
Отдельные исследования выполнены совместно со специалистами ФГБУН
6
ТИБОХ им. Г.Б. Елякова ДВО РАН, что нашло отражение в совместных
публикациях.
СОДЕРЖАНИЕ, РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ РАБОТЫ
Экспериментальные и клинические исследования проведены в
лаборатории иммунологии ФГБУ «НИИЭМ» СО РАМН (заведующая
лабораторией д.м.н. Кузнецова Т.А.), а также на базе ГБУЗ «Краевая
клиническая инфекционная больница» г. Владивостока (главный врач, к.м.н.
Шкляр Г.М.). Отдельные разделы работы выполнены совместно с лабораторией
химии ферментов ФГБУН Тихоокеанского института биоорганической химии
им. Г.Б. Елякова ДВО РАН (заведующая лабораторией д.х.н. Звягинцева Т.Н.).
Все экспериментальные и клинические исследования проведены с разрешения
Комитета по биомедицинской этике ФГБУ «НИИЭМ» СО РАМН (протокол №
6 от 17.04.2007 г.)
Контингент, материалы и методы: Обследовано 57 пациентов с ХВГС
(37 женщин и 20 мужчин в возрасте от 18 до 49 лет), находящихся на лечении в
ГБУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница» г. Владивостока в
период с 2008 по 2010 годы. Диагноз ХВГС устанавливали на основании
клинико-эпидемиологических и биохимических данных и подтверждали
выявлением у пациентов специфических серологических маркеров
инфицирования методом иммуноферментного анализа (ИФА) (наличие антиНСV-сум., анти-HCV-IgG, анти-HCV-IgM, анти-HCV-NS(3-5), обнаружением
RNA-HCV в крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), а также
данными УЗИ органов брюшной полости и фибросканирования печени.
Критерии включения: ХВГС в фазе реактивации (репликации вируса), низкая
или умеренная степень биохимической активности гепатита, информированное
согласие пациента на участие в проведении исследования. Критерии
исключения: ХВГС в стадии фиброза или цирроза печени, наличие
хронической алкогольной интоксикации, употребление наркотических и
психотропных средств, включение в комплекс лечения пациентов с ХВГС
противовирусных и иммуномодулирующих препаратов. Исследование было
рандомизированным, обеспечивающим случайное распределение пациентов в
однородные группы. Все больные были разделены на 2 группы: контрольная
группа (30 человек) - пациенты, получавшие только базисное лечение,
включающее охранительный режим, лечебное питание, дезинтоксикационную
и метаболическую терапию; опытная группа (27 человек) - пациенты,
получавшие в комплексе с базисной терапией БАД «Фуколам»1 по 1 капсуле,
содержащей 100 мг фукоидана из Fucus evanescens и 400 мг солей альгиновых
кислот из бурых водорослей, внутрь два раза в сутки в течение 21 дня. С целью
7
сравнения исследуемых показателей использовали кровь 22 здоровых доноров.
Исследования выполнялись дважды: до начала лечения и после его окончания.
Экспериментальная часть работы выполнена на 40 мышах линии
(СВАхС57В1/6) F1, а также на 80 неинбредных мышах массой 18-20 граммов,
полученных из питомника РАМН “Столбовая”, находившихся на стандартной
диете в боксированных помещениях с соблюдением всех правил и
международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных
животных, используемых в экспериментальных работах (Страсбург, 1986).
____________________________________________________________________
Свидетельство Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и
благополучия человека о государственной регистрации (№77.99.23.3.У.739.1.06 от 30.01.06)
1
8
Направления, методы и объем проведенных исследований
Таблица 1
№
1
2
3
Направления
исследования
Клиниколабораторные
исследования
Маркерная
диагностика
ХВГС
Исследование
показателей
иммунного
статуса
4
Исследование
показателей
цитокинового
статуса
5
Исследование
показателей
системы
ПОЛ/АОЗ
6
Объем
исследо
вания
1.Анкетирование пациентов
57 чел.
2.Комплексное клиническое обследование больных в 57 чел.
динамике
3.Расширенный мониторинг клинико-биохимических и
инструментальных
(УЗИ,
фибросканирование) 57 чел.
показателей
4.Определение антител к HCV методом ИФА
57 чел.
5.Качественное определение RNA-HCV в крови методом
ПЦР с генотипированием (Simmonds P., 1995)
57 чел
6.Определение субпопуляционного состава лимфоцитов 114
периферической крови методом проточной цитометрии проб
(Qouzi A.A. et al., 2002)
7. Исследование основных классов иммуноглобулинов в 114
сыворотке крови (IgG, IgM, IgA) методом радиальной проб
иммунодиффузии (Manchini G. et al., 1964)
114
8. Определение уровня и размеров циркулирующих проб
иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови
(Гриневич Ю.А., 1981; Стручков П.В. с соавт., 1985)
9. Исследование фагоцитарной активности нейтрофилов 114
крови в латекс-тесте (Лебедев К.А., 1990)
проб
10.Исследование концентрации цитокинов в сыворотке 228
крови и супернатантах лимфоцитов периферической проб
крови (ЛПК) методом твердофазного ИФА с помощью
диагностических наборов ООО «Цитокин» (СанктПетербург), согласно прилагаемой инструкции
Методы исследования
11.Определение малонового диальдегида (МДА) в
эритроцитах крови спектрофотометрическим методом
(Новгородцева Т.П., 2003)
12.Определение общей антиокислительной активности
плазмы крови спектрофотометрическим методом
(Новгородцева Т.П., 2003)
Исследование
13.Исследование морфометрических показателей печени
влияния
у
мышей
с
экспериментальным
хроническим
фукоидана из Fu- токсическим гепатитом методом магнитно-резонансной
cus evanescens на томографии (МРТ) с использованием томографа
воспалительный
высокого разрешения «PharmaScan 70/16 US» фирмы
процесс в печени
Bruker с программным обеспечением Para Vision 3.0.2
16.Определение массы печени у экспериментальных
животных
17.Определение содержания аминотрансфераз (АлАТ,
АсАТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), общего билирубина,
глюкозы в сыворотке крови экспериментальных
животных при помощи коммерческих наборов
«Ольвейкс Диагностикум», Санкт-Петербург
в
соответствии с прилагаемой инструкцией.
9
114
проб
114
проб
40
мышей
линии
(СВАхС
57В1/6)
F1
80
неинбре
дных
мышей
80
неинбре
дных
мышей
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью
прикладной программы “Statistica 7.0”. Использовали следующие методы
статистического
анализа:
проверку
нормальности
распределения
количественных признаков при малом числе наблюдений (W-критерий
Шапиро-Уилка), проверку гипотез о равенстве дисперсий (F-критерий
Фишера), кластеризацию признаков методом К-средних. Для оценки
значимости различий при нормальном распределении количественных
признаков использовали t-критерий Стьюдента (для независимых выборок и
для двух связанных между собой вариационных рядов), при распределении,
отличающемся от нормального - критерий Вилкоксона (W) для связанных
вариационных рядов и критерий Манна-Уитни (U) для несвязанных меду собой
выборок. Выборочные параметры, приводимые далее в таблицах, имеют
следующие обозначения: среднее арифметическое (М), стандартное отклонение
(σ), медиана (Me), нижний и верхний квартили (LQ-UQ), объем анализируемой
группы (n), достигнутый уровень значимости (р). Уровень доверительной
вероятности был задан равным 95%.
Результаты и их обсуждения:
I. Адаптивный иммунитет при ХВГС и его коррекция полисахаридами
из бурых водорослей
Результаты исследования показали, что до начала терапии у пациентов с
ХВГС показатели, характеризующие субпопуляционный состав ЛПК, значимо
не отличались от таковых в группе здоровых доноров и находились в пределах
средне-нормальных значений (рис.1).
Рис.1. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови здоровых
доноров и пациентов с ХВГС до начала лечения
10
В результате проведенного лечения в контрольной и опытной группах
показатели субпопуляционного состава ЛПК значимо не изменялись. В тоже
время, реактивация хронического гепатита С, связанная с репликацией вируса,
отражалась на процессах активации лимфоцитов. Так, у 37% пациентов с ХВГС
уровень экспрессии активационных антигенов CD25, CD95 и HLA-DR на ЛПК
был повышен, у 34% пациентов – находился в пределах средне-нормальных
значений и у 29% пациентов - снижен. Полученные результаты указывают на
индивидуальные особенности реакции иммунной системы пациентов с ХВГС:
высокий уровень экспрессии активационных антигенов свидетельствует об
адекватной реакции на вирусный антиген и эффективном иммунном ответе,
низкий уровень активации лимфоцитов отражает супрессию иммунного ответа.
Иммунный ответ пациентов со средне-нормальными значениями уровня
экспрессии активационных антигенов является неадекватным в условиях
персистенции HCV и недостаточным для подавления активности вируса. В
результате применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с
базисной терапией, у пациентов с исходно высокими значениями
активированных лимфоцитов показатели снижались до уровня нормы, с
исходно средними значениями активированных лимфоцитов - значимо не
менялись, с исходно низкими значениями активированных лимфоцитов увеличивались. У пациентов контрольной группы, получавших только базисное
лечение, подобной закономерности выявлено не было, уровень экспрессии
активационных антигенов значимо не менялся по отношению к показателям до
начала лечения (табл.2). Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови
пациентов с ХГВС до начала терапии (IgM (2,75±1,5 г/л), IgG (20,5±4,6 г/л) и
IgА (2,58±0,86 г/л) значимо превышало соответствующие показатели у
здоровых лиц (IgM – 1,3±0,4 г/л, р=0,000; IgG - 10,1±3,2 г/л, р=0,000; IgА 1,8±0,4 г/л, р=0,000), свидетельствуя об активации гуморального звена
иммунитета. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с
базисным лечением у пациентов с ХВГС оказывало положительный
корригирующий эффект на показатели гуморального звена иммунитета,
отражая снижение степени выраженности воспалительного процесса:
концентрация IgM в сыворотке крови пациентов контрольной и опытной групп
снижалась с 2,4 (1,7-3,1) г/л до 1,8 (1,1-2,3) г/л, р=0,000 и с 2,5 (1,4-4,2) г/л до
1,1(0,7-1,8) г/л, р=0,000 соответственно, однако уровень IgM в группе
пациентов, получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с
базисной терапией, снижался в большей степени, чем в контрольной группе
(р1=0,05). Уровень IgА у пациентов опытной группы нормализовался (с 2,5
(1,8-3,2) г/л до 2,1 (1,5-2,6) г/л, р=0,028), в то время как в контрольной группе
11
значимо не менялся (2,67 (2-3,1) г/л и 2,7 (2,1-3,3) г/л, р=0,313). Изменений
концентрации IgG после лечения в обеих группах выявлено не было (р>0,05).
12
Таблица 2
Динамика показателей активационных антигенов ЛПК в зависимости от их исходного уровня у пациентов с ХВГС
Условно
здоровые
доноры
(n=22)
Показатели
Опытная группа (n=27)
Высокий уровень
Средний
экспрессии
уровень
активационных
экспрессии
антигенов
активационных
(n=11)
антигенов
(n=8)
Низкий
уровень
экспрессии
активационных
антигенов
(n=8)
Контрольная группа (n=30)
Высокий
Средний
Низкий
уровень
уровень
уровень
экспрессии
экспрессии
экспрессии
активационных активационных активационных
антигенов
антигенов
антигенов
(n=10)
(n=11)
(n=9)
Mе(LQ-UQ)
Mе (LQ-UQ )
Mе ( LQ-UQ )
Mе ( LQ-UQ )
Mе ( LQ-UQ )
Mе ( LQ-UQ )
Mе ( LQ-UQ )
%
10,0
(9,5 -12,0)
9
10 /л
0,23
(0,18-0,28)
%
6,0
(4,0-7,0)
109/л
0,12
(0,08 -0,14)
%
17,0
(12,5-18,0)
15,0 (14,3-18,0)
10,0 (7,5-14,2)
р=0,02
0,36 (0,20-0,40)
0,22 (0,17-0,30)
р=0,049
15,10 (12,0-19,6)
10,0 (5,3-13,0)
р=0,009
0,32 (0,26-0,45)
0,24 (0,13-0,30)
р=0,033
23,2 (22,0-26,0)
19,0 (17,0- 22,4)
р=0,012
0,58 (0,48-0,67)
0,52 (0,40-0,55)
р=0,284
9,8 (9,0-11,0)
7,5 (5,0-11,5)
р=0,138
0,21 (0,16-0,20)
0,18 (0,15-0,20)
р=0,362
7,0 (6,1-7,0)
10,0 (7,0-11,2)
р=0,128
0,13 (0,09-0,10)
0,14 (0,10-0,18)
р=0,345
16,9 (16,0-18,0)
17,0 (12,7-17,5)
р=0,374
0,38 (0,30-0,40)
0,32 (0,27-0,40)
р=0,507
5,5 (5,0-6,3)
8,3 (6,6-9,5)
р=0,006
0,12 (0,08-0,15)
0,18 (0,10-0,21)
р=0,092
3,5 (2,7-4,0)
9,0 (7,2-10,7)
р=0,027
0,09 (0,07-0,10)
0,4 (0,2-0,6)
р=0,027
10,0 (8,0-11,0)
13,0 (12,0-13,7)
р=0,017
0,17 (0,09-0,17)
0,20 (0,23-0,31)
р=0,310
13,5 (13,0-15,0)
14,0 (12,5-15,7)
р=0,685
0,28 (0,20-0,30)
0,28 (0,18-0,30)
р=0,892
12,2 (10,0-13,0)
11,2 (8,0-13,6)
р=0,168
0,30 (0,24-0,31)
0,29 (0,10-0,30)
р=0,507
23,0 (21,0-28,5)
21,0 (17,0-30,0)
р=0,905
0,54 (0,14-0,70)
0,52 (0,30-0,69)
р=0,798
9,5 (8,6-10,0)
7,0 (8,0-13,8)
р=0,858
0,20 (0,16-0,25)
0,15 (0,10-0,30
р=0,678
6,6 (5,80-7,80)
7,0 (5,6-8,7)
р=0,575
0,12 (0,10-0,13)
0,14 (0,09-0,20)
р=0,358
18,0 (15,0-19,0)
20,0 (17,0-22,0)
р=0,260
0,36 (0,27-0,40)
0,36 (0,24-0,40)
р=0,083
6,0 (5,5-6,5)
6,9 (5,3-8,0)
р=0,074
0,10 (0,1-0,15)
0,10 (0,13-0,17)
р=0,173
3,0 (0,4-4,2)
3,9 (0,4-4,3)
р=0,248
0,04 (0,01-0,10)
0,06 (0,01-0,1)
р=0,715
12,0 (10,6-12,3)
12,0 (11,0-14,0)
р=0,500
0,27 (0,23-0,30)
0,23 (0,22-0,30)
р=0,983
CD25+
CD95+
HLA-DR+
109/л
0,35
(0,27-0,42)
Примечание: в числителе – показатели до начала лечения, в знаменателе – показатели после лечения; р - значимость различий между
показателями до и после лечения
13
II. Цитокиновый статус у пациентов с
ХВГС и обоснование
иммунокорригирующей терапии полисахаридами из бурых водорослей
Согласно современным представлениям, иммунный баланс при ХВГС
смещается в сторону Th2-лимфоцитов, сопровождаясь усилением продукции
противовоспалительных цитокинов, что может приводить к снижению
противоинфекционной защиты и утяжелению течения заболевания (Gao Q.J. et
al., 2009).
В наших исследованиях у пациентов с ХВГС в фазе реактивации до
начала терапии наблюдалось снижение концентрации INF-α в сыворотке крови,
увеличение IL-4, уменьшение соотношения INF-γ/IL-4, свидетельствующее о
девиации баланса цитокинов в сторону Th2, недостаточности клеточного звена
иммунитета и преобладании гуморального иммунного ответа (табл.3).
Таблица 3
Динамика уровня цитокинов в сыворотке крови пациентов с ХВГС
Цитокины
(пг/мл)
IL-10
Здоровые доноры
(n=22)
Mе (LQ-UQ )
4,8 (4,0-6,0)
IL-6
5,0 (4,29-6,92)
TNF-α
3,01 (2,40-4,38)
INF-α
14,0 (12,0-18,0)
INF-γ
23,6 (18,0-29,0)
IL-4
4,2 (3,99-5,00)
INF-γ/ IL-4
5,6 (3,7-6,5)
Опытная группа
(n=27)
Контрольная группа
(n=30)
Mе (LQ-UQ )
4,94 (4,20-5,80)
4,93 (4,00-5,70)
5,4 (4,2-6,3)
4,9 (4,0-5,9)
3,2 (2,3-4,2)
3,1 (2,3-4,9)
7,6 (5,9-10,3)3
8,0 (5,5-9,4)3
26,0 (20,0-31,2)
24,8 (18,0-30,7)
9,1 (5,7-11,6)3
5,0 (4,8-5,4)1,2
2,7 (2,0-4,6)3
4,6 (3,6-6,2)1,2
Mе (LQ-UQ )
4,8 (3,10-6,30)
4,81 (3,30-5,60)
4,8 (4,0-5,9)
4,5 (4,1-5,7)
3,05 (2,40-3,80)
2,9 (2,4-3,5)
7,7 (6,4-9,2)3
7,3 (5,9-9,9)3
26,0 (15,0-30,0)
27,0 (16,6-30,0)
8,0 (6,0-12,1)3
9,6 (5,3-10,7)3
2,5 (1,6-5,2)3
2,7 (1,6-4,7)3
Примечание: в числителе – показатели до начала лечения, в знаменателе – показатели после
лечения; 1 - различия по отношению к показателям до начала лечения статистически
значимы; 2 - различия по отношению к показателям контрольной группы после лечения
статистически значимы. 3 - различия по отношению к показателям здоровых доноров
статистически значимы.
По окончании лечения у пациентов опытной группы содержание IL-4 в
сыворотке крови снижалось до уровня средне-нормальных значений,
сопровождаясь увеличением соотношения INF-γ/IL-4, тогда как у пациентов
контрольной группы после базисного лечения содержание IL-4 не менялось, не
изменялось также и соотношение INF-γ/IL-4 (табл.3).
Поскольку системный уровень цитокинов не всегда адекватно отражает
тяжесть состояния (так как цитокины являются локальными медиаторами,
имеют короткий период полураспада в сыворотке крови, способны активно
связываться с растворимыми рецепторами к ним (Демьянов А.В. с соавт., 2003),
мы оценили способность
клеток цельной крови пациентов с ХВГС,
получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной
терапией, к продукции цитокинов in vitro.
Полученные результаты свидетельствовали о сохранении резервных
возможностей клеток периферической крови пациентов с ХГВС в отношении
продукции про- и противовоспалительных цитокинов на фоне снижения
интерферонпродуцирующей функции: до начала терапии у пациентов с ХВГС
способность клеток периферической крови к спонтанной продукции IL-6, TNFα, IL-10 и IL-4 была усилена, способность к выработке INF-α и INF-γ – снижена
- по сравнению с показателями у здоровых доноров; митогенстимулированная
продукция TNF-α, IL-6, IL-10, и IL-4 у пациентов с ХГВС значимо превышала
соответствующие показатели стимулированных лимфоцитов у здоровых
доноров, в то время как концентрация INF-γ и INF-α в супернатантах
стимулированных лимфоцитов пациентов с ХВГС снижалась (табл.4).
В супернатантах ЛПК пациентов контрольной группы после базисного
лечения было отмечено незначительное снижение концентрации TNF-α, однако
этот показатель значимо превышал таковой у пациентов опытной группы.
Продукция IL-6 значимо не изменялась и сохранялась на высоком уровне.
Наблюдалось незначительное увеличение спонтанной продукции INF-γ, не
достигающее
уровня
нормальных
показателей.
Спонтанная
и
митогениндуцированная продукция INF-α значимо не изменялась, способность
клеток крови к продукции IL-10 и IL-4 оставалась повышенной (табл.4).
Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной
терапией способствовало снижению и нормализации уровня спонтанной
продукции провоспалительных цитокинов TNF-α и IL-6, индуцированной
продукции TNF-α, а также противовоспалительных цитокинов IL-10 и IL-4 и
усилению интерферонпродуцирующей функции клеток периферической крови
пациентов с ХВГС (табл.4). Таким образом, полисахариды из бурых водорослей
оказывают иммунорегулирующее действие на измененные показатели
цитокинового статуса у пациентов с ХВГС: нормализуют баланс цитокинов
Th1и
Th2-лимфоцитов
за
счет
снижения
концентрации
противовоспалительных цитокинов и усиления интерферонпродуцирующей
функции клеток крови, снижают уровень провоспалительных цитокинов.
15
Таблица 4
Спонтанная и митогениндуцированная продукция цитокинов ЛПК у здоровых доноров и пациентов с ХВГС по
окончанию лечения
Спонтанная продукция
Цитокины
(пг/мл)
Индуцированная продукция
Здоровые
Доноры (n=22)
Опытная
Группа (n=27)
Контрольная
группа(n=30)
Здоровые
доноры(n=22)
Опытная
группа(n=27)
Контрольная
группа(n=30)
IL-10
4,2 (3,1-4,6)
210,0 (180,0-325,0)
TNF-α
19,4 (19,1-21,6)
INF-α
40,0 (34,2-46,3)
INF-γ
58,0 (48,0-69,0)
IL-4
15,1 (11,3-17,0)
INF-γ/ IL-4
3,9 (2,6-5,2)
5,6 (4,6-6,4)4
5,4 (4,7-5,9)
353,0 (331,0-388,0)4
357,0 (246,0-423,0)
66,0 (52,0-76,0)4
55,0 (35,0-70,7)1
15,0 (12,7-17,0)4
14,6 (13,5-15,0)
38,0 (35,0-43,0)4
41,9 (35,0-45,0)1
23,4 (18,0-30,0)4
20,7 (18,0-29,0)
1,6 (1,3-2,2)4
1,85(1,50-2,20)1
9,0 (4,8-11,5)2
IL-6
5,3 (5,0-6,1)4
4,3 (2,9-4,9)1,3
373,0 (319,0-417,0)4
202,0 (146,0-333,0)1,3
68,0 (45,0-94,0)4
32,0 (23,0-48,0)1,3
14,9 (12,0-18,3)4
18,0 (15,8-20,0)1,3
37,0 (33,0-41,0)4
48,5 (43,0-55,7)1,3
23,0 (14,7-29,0)4
12,4 (11,5-17,2)1,3
2,0 (1,4-2,5)4
4,4 (2,3-5,0)1,3
18,1 (11,3-22,1)2,4
10,8 (6,6-12,0)1,2,3
725,0 (586,0-915,0)2,4
810,0 (559,0-1119,0)2
224,0 (157,0-246,0)2,4
86,0 (39,0-118,0)1,2
20,8 (19,3-24,0)2,4
21,7 (21,0-25,0)2
55,2 (51,0-58,0)2,4
40,0 (35,0-46,0)1
41,7 (29,0-42,0)2,4
28,8 (25,0-36,0)1,2
1,5 (1,3-1,7)2,4
1,35 (1,00-1,50)2
23,0 (12,1-29,0)2,4
17,6 (6,5-25,0)1,2
674,0 (417,0-1000,0)2,4
783,0 (517,0-1134,0)2
184,0 (145,0-241,0)2,4
96,0 (46,0-125,0)1
21,4 (18,8-24,0)2,4
20,7 (19,6-23,1)2
55,4 (49,0-57,0)2,4
47,0 (45,0-49,0)1
37,6 (32,0-43,0)2,4
36,3 (28,0-43,0)2
1,5 (1,1-1,8)4
1,26 (1,00-1,50)1,2
495,0 (360,0-605,0)2
165,0 (115,0-200,0)2
53,0 (47,0-61,0)2
148,0 (136,4-163,2)2
19,7 (15,4-28,0)2
7,3 (5,1-10,2)2
Примечание: в числителе - показатели до начала лечения, в знаменателе - показатели после лечения; 1 - различия по отношению к
показателям до начала лечения статистически значимы; 2 - различия по отношению к показателям спонтанной продукции цитокинов
статистически значимы; 3 – различия по отношению к показателям контрольной группы после лечения статистически значимы. 4 - различия
по отношению к показателям здоровых доноров статистически значимы
III. Состояние врожденного иммунитета у пациентов с ХВГС и его
коррекция полисахаридами из бурых водорослей
Воздействие различных инфекционно-токсических агентов, в том числе
вирусов, может служить причиной изменения активности гуморальных и
клеточных факторов врожденного иммунитета. Мы
исследовали
фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови, уровень ЦИК
и их размеры у пациентов с ХВГС, а также влияние полисахаридов из бурых
водорослей на эти факторы. При оценке фагоцитарной системы у пациентов
с ХВГС было установлено снижение функциональной активности
нейтрофилов периферической крови (ФП – 65,6±6,6%, ФЧ - 3,8±0,7) по
сравнению с показателями у здоровых доноров (ФП - 80±5,0%; р=0,000, ФЧ 4,5±0,5; р=0,010 соответственно). На фоне проводимой терапии у пациентов,
получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисным
лечением, наблюдалось значимое увеличение ФП (с 68 (59-69) % до 74 (6878) %; р=0,003) и ФЧ (с 3,9 (2,9-4,5) до 4,6 (3,6-5,7); р=0,007), в то время как в
контрольной группе у пациентов, получавших только базисную терапию, эти
показатели не изменялись и сохранялись на сниженном уровне (ФП с 68 (6272)% до 69 (62-71)%; р=0,117; ФЧ с 3,5 (3,1-4,5) до 3,7 (3,1-4,6); р=0,157).
Нарушение равновесия процессов формирования и нейтрализации ЦИК,
необходимых для удаления чужеродных антигенов, способствует длительной
персистенции иммунных комплексов в организме, фиксации их в тканях и,
следовательно, развитию иммунокомплексных повреждений (Дранник Г.Н.,
2003; Серов В.В., 2004). При исследовании уровня ЦИК в сыворотке крови
пациентов с ХВГС до начала лечения было выявлено увеличение
концентрации иммунных комплексов (157,4±46 ед. ОП; у здоровых доноров 62,4±5,4 ед. ОП, р=0,000) с преобладанием иммунных комплексов мелких
размеров, менее эффективно активирующих систему комплемента и
длительно циркулирующих в крови. Под влиянием проведенной терапии у
пациентов опытной группы отмечено снижение уровня ЦИК в сыворотке
крови (с 148 (129-158) ед.ОП до 107 (94-131) ед.ОП, р=0,0003) с
уменьшением
количества
низкомолекулярных
и
увеличением
крупномолекулярных ЦИК. В контрольной группе, получавших базисную
терапию, концентрация ЦИК сохранялась на высоком уровне (с 153 (125-202)
ед.ОП до 154 (119-181) ед.ОП, р=0,850), изменения в качественном составе
иммунных комплексов выявлено не было. Таким образом, полисахариды из
бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с ХВГС
обладают регулирующим эффектом на измененные факторы врожденного
иммунитета: снижают уровень ЦИК в сыворотке крови, увеличивают их
молекулярную массу, нормализуют измененные показатели активности
фагоцитарной системы.
IV. Оценка влияния полисахаридов из бурых водорослей на
воспалительный процесс в печени
Наличие репликации HСV в гепатоцитах, а также клетках иммунной
системы, циркуляция иммунных комплексов, снижение продукции альфаинтерферона, прямое угнетающее влияние возбудителя на факторы
врожденного и адаптивного иммунитета играют важную роль в патогенезе
хронического гепатита, приводя к повреждению печеночной паренхимы с
развитием воспалительной реакции, цитолитического синдрома и
формированием фиброза печени. В предыдущих разделах работы мы
установили способность полисахаридов бурых водорослей корригировать
нарушения клеточных и гуморальных факторов врожденного и адаптивного
иммунитета у пациентов с ХВГС, отражающие степень выраженности
воспалительного процесса в печени. В этой связи нам представилось
целесообразным оценить влияние полисахаридов из бурых водорослей на
воспалительный процесс в органе-мишени (печени). С этой целью мы
исследовали влияние полисахаридов из бурых водорослей на биохимические
и морфометрические показатели печени и процессы ПОЛ-АОЗ у пациентов с
ХВГС в фазе реактивации.
Анализ биохимических показателей крови у пациентов с ХВГС до
начала лечения выявил высокий уровень аминотрансфераз (AлАТ – 132,5
(97,0-195,0) МЕ/л, АсАТ – 101,0 (83,0-151,0) МЕ/л) по сравнению с
показателями у здоровых лиц (AлАТ – 25,0 (20,0-31,0) МЕ/л; р=0,000; АсАТ 20,8 (18,4-23,5) МЕ/л; р=0,000), свидетельствующий о наличии
цитолитического синдрома у обследуемых. В результате проведенного
лечения наблюдалось снижение активности аминотрансфераз в опытной
(AлАТ c 133,0 (90,0-198,0) МЕ/л до 54,0 (46,0-73,0) МЕ/л, р=0,000; АсАТ c
101,0 (83,0-139,0) МЕ/л до 53,0 (42,0-57,0) МЕ/л, р=0,000) и контрольной
(AлАТ c 131,0 (99,0-172,0) МЕ/л до 88,0 (66,0-108,0) МЕ/л, р=0,000; АсАТ c
100,0 (83,0-144,0) МЕ/л до 82,0 (65,0-99,8) МЕ/л, р=0,000) группах, однако у
пациентов, получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с
базисным лечением, уровень этих показателей был значимо ниже, чем у
пациентов в контрольной группе (р1=0,001; р1=0,000 соответственно).
Увеличение размеров печени, выявленное при объективном осмотре и
свидетельствующее об усилении активности воспалительного процесса,
подтверждали данные ультразвукового исследования органов брюшной
полости (сагиттальный размер печени по срединно-ключичной линии
(17,3±1,3 см) значимо превышал показатели у здоровых доноров - 10,5±1,5
18
см; р=0,000). На момент окончания терапии у большинства пациентов
опытной группы размеры печени уменьшились (с 17,4 (16,2-18)см до 14,0
(12,8-14,9) см, р=0,000), в то время как в контрольной группе нормализации
размеров печени выявлено не было (с 17,4 (16,3-18,0) см до 17,0 (16,9-17,9)
см, р=0,287).
Нарушения процессов ПОЛ и АОЗ играют важную роль в развитии
патологического процесса при хронических вирусных гепатитах (Choi J. et
al., 2004), смещая окислительно-восстановительный баланс в сторону
активации процессов ПОЛ и приводя к развитию синдрома липидной
пероксидации, связанного с накоплением активных форм кислорода и
липидных радикалов, участвующих в повреждении биомембран гепатоцитов
(Нагоев Б.С., 2003; Choi J., 2006). В наших исследованиях до начала лечения
у пациентов с ХВГС в фазе реактивации выявлено высокое содержание МДА
(7,2±1,7 мкмоль/гНв) в эритроцитах крови и сниженный уровень АОА
плазмы (75,4±13,4%) по сравнению с показателями у здоровых доноров
(5,6±0,64 мкмоль/гНв, р=0,000; 82±7,1%, р=0,043 соответственно),
свидетельствующие о смещении окислительно-восстановительного баланса в
сторону активации процессов ПОЛ. После применения полисахаридов из
бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов опытной
группы наблюдалась нормализация показателей системы ПОЛ/АОЗ: уровень
МДА в эритроцитах крови снизился с 6,7 (6,0-7,6) мкмоль/гНв до 5,7 (5,4-6,6)
мкмоль/гНв; р=0,001, показатель АОА плазмы крови повысился до средненормальных значений (с 79 (68-85) % до 87 (78-91) %; р=0,004). В
контрольной группе пациентов после базисной терапии изменений
показателей ПОЛ/АОА выявлено не было. Окислительно-восстановительный
баланс был смещен в сторону процессов липопероксидации, что проявлялось
высоким уровнем МДА в эритроцитах крови (до лечения – 6,8 (6,2-8,3)
мкмоль/гНв, после лечения - 6,6 (6,0-7,3) мкмоль/гНв; p=0,175) и
сниженными показателями АОА плазмы (до лечения 80 (68-85)%, после
лечения – 78 (76-85)%; р=0,750).
Таким образом, полисахариды из бурых водорослей в комплексе с
базисной терапией у пациентов с ХВГС способствуют снижению
воспалительного процесса в печени: уменьшают уровень аминотрансфераз,
нормализуют размеры печени, оказывают регулирующее действие на
процессы липопероксидации, восстанавливая баланс между процессами
перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты. С
целью доказательства универсальности действия полисахаридов из бурых
водорослей на воспалительные процессы в печени, мы оценили влияние
фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens на биохимические и
19
морфометрические показатели печени у мышей с хроническим токсическим
гепатитом, индуцированным тетрахлорметаном. Индукция токсического
гепатита у мышей сопровождалась статистически значимым увеличением
массы печени, содержания аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, глюкозы
и общего билирубина в сыворотке крови по сравнению с показателями у
интактных животных, свидетельствующим о развитии цитолитического
синдрома и нарушении пигментообразующей функций печени (рис.2).
Данные
магнитно-резонансной
томографии
свидетельствовали
об
увеличении линейных размеров печени (рис.2), края долей были неровными,
просматривались нечетко, строма и паренхима печени были резко
деформированы.
______
……
интактная группа;
контрольная группа;
____
______
профилактическая схема;
лечебная схема
Рис.2. Влияние фукоидана на биохимические показатели крови, массу и
линейные размеры печени у мышей с хроническим токсическим гепатитом
(по отношению к контролю, принятому за 100% (различия показателей у
интактных животных и животных опытных групп статистически значимы по отношению
к показателям у животных контрольной (ССl4) группы (p<0,05).
У животных, получавших фукоидан по лечебной и профилактической
схемам, содержание аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, глюкозы и
общего билирубина снижалось, приближаясь к показателям у интактных
здоровых мышей, нормализовалась масса печени, уменьшались линейные
размеры (рис.2). Края печени были ровными, паренхима и строма печени не
деформированы, желчные протоки не изменены.
Таким образом, проведенное исследование выявило нарушения
факторов врожденного, адаптивного иммунитета, цитокинового статуса и
системы перекисного окисления липидов/антиоксидантной защиты у
пациентов у пациентов с ХВГС в фазе реактивации. Оценка влияния
20
полисахаридов из бурых водорослей на состояние иммунной системы и
воспалительный процесс в печени у пациентов с ХВГС позволила
обосновать целесообразность их применения для оптимизации базисной
терапии.
1.
2.
3.
4.
ВЫВОДЫ
Установлены особенности дисфункции иммунной системы у
пациентов с ХГВС в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью
биохимической активности, выражающиеся в активации гуморальных
факторов иммунитета,
изменении функциональной активности
нейтрофилов (снижение фагоцитарной активности) и лимфоцитов
(нарушение процессов активации)
на фоне
нормальных
количественных параметров их субпопуляционного состава.
Состояние цитокиновой системы у
пациентов с хроническим
вирусным гепатитом С в фазе реактивации с низкой и умеренной
степенью биохимической активности характеризуется дисбалансом
сывороточных цитокинов с доминированием медиаторов Th2лимфоцитов, а также снижением интерферонпродуцирующей функции
клеток периферической крови на фоне гиперпродукции про- и
противовоспалительных цитокинов.
Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с
базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С
оказывает иммуномодулирующее действие на факторы врожденного и
адаптивного иммунитета, сопровождающееся изменением процессов
активации лимфоцитов, зависящим от исходного состояния клетки,
нормализацией уровня основных классов иммуноглобулинов, ЦИК и
их качественного состава, увеличением фагоцитарной активности
нейтрофилов.
Полисахариды из бурых водорослей в составе базисной терапии у
пациентов с хроническим вирусным гепатитом С регулируют
цитокиновый баланс, нормализуя соотношение сывороточных
цитокинов,
продуцируемых
Th1/Th2-лимфоцитами.
Усиление
интерферонпродуцирующей функции клеток крови пациентов с
хроническим вирусным гепатитом С, получавших полисахариды из
бурых
водорослей
и
снижение
секреции
прои
противовоспалительных цитокинов, отражает снижение активности
инфекционного воспалительного процесса.
21
5. Полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у
пациентов с хроническим вирусным гепатитом С способствуют
снижению воспалительного процесса в печени, нормализуя
функциональную активность и морфометрические показатели печени,
восстанавливая баланс системы перекисного окисления липидов и
антиоксидантной защиты.
6. Фукоидан из Fucus evanescens снижает проявления воспалительного
процесса в печени у экспериментальных животных с индуцированным
хроническим токсическим гепатитом - нормализует морфометрические
показатели и функциональную активность печени.
РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ В МЕДИЦИНСКУЮ НАУКУ И
ПРАКТИКУ
1. Выявленные наиболее информативные показатели иммунного статуса у
пациентов с хроническим вирусным гепатитом С (уровень экспрессии
активационных антигенов на поверхности ЛПК - CD25, CD95, HLA-DR),
рекомендовано использовать для оценки степени выраженности иммунных
нарушений, а также эффективности их коррекции в лечебных
мероприятиях.
2. На основании оценки иммуно-патогенетической эффективности
полисахаридов из бурых водорослей рекомендовано включение БАД
“Фуколам” в состав базисной терапии у пациентов с хроническим
вирусным гепатитом С с целью коррекции дисфункции иммунной системы
и нормализации функциональной активности печени. Режим приема - по 1
капсуле 2 раза в день в течение 30 дней в комплексе с базисной терапией.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ НАУЧНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ
ДИССЕРТАЦИИ
1. Функциональная активность лимфоцитов периферической крови
пациентов с хроническим вирусным гепатитом С при включении в
комплекс лечения фукоидана из Fucus evanescens / Н.В. Филонова,
Т.С. Запорожец, С.А. Ермолицкая, Л.В. Лебедева, И.А. Пожидаева,
Т.Н. Звягинцева, М.И. Кусайкин // Тихоокеанский медицинский
журнал. - 2010. - №3. - С.55-58.
2. Гепатопротекторные свойства фукоидана из бурой водоросли Fucus
evanescens / Т.А. Кузнецова, И.Г. Агафонова, Т.С. Крохмаль, Т.Н.
Звягинцева, Н.В. Филонова // Тихоокеанский медицинский журнал.2010.- №4. -С.32-35.
22
3. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на показатели цитокинового
статуса у пациентов с хроническим гепатитом С / Н.В. Филонова,
Т.С. Запорожец, С.А. Ермолицкая, Л.В. Лебедева, И.А. Пожидаева,
Т.Н. Звягинцева, М.И. Кусайкин // Цитокины и воспаление. – 2011. –
Т.10, №4. – С.105-110.
4. Клинико-биохимическая эффективность применения БАД “Фуколам“ в
комплексной терапии больных с ХВГС / Н.В. Филонова, Н.Н. Беседнова,
С.А. Ермолицкая, М.В. Маковкина, Л.В. Лебедева, И.А. Пожидаева, Т.Н.
Звягинцева // Материалы XII Международной научной конференции
“Здоровье семьи – XXI век”, Эйлат, Израиль, 29 апреля – 07 мая. - 2008.С. 332-333.
5. Влияние фукоидана на экспрессию активационных антигенов
лимфоцитами периферической крови при хроническом вирусном
гепатите С / Н.В. Филонова, С.А. Ермолицкая, Л.В. Лебедева, И.А.
Пожидаева, Т.Н. Звягинцева // Тихоокеанский медицинский журнал. 2009. - №3. - С.138.
6. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на показатели иммунного и
цитокинового статуса у больных хроническим вирусным гепатитом С при
включении в комплекс лечебных мероприятий / Н.В. Филонова, Т.С.
Запорожец, С.А. Ермолицкая, Л.В. Лебедева, И.А. Пожидаева, Т.Н.
Звягинцева // Вестник Уральской медицинской академической науки. –
2010. - №2/1. – С. 215-216.
7. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на показатели антиоксидантной
системы у пациентов с хроническим гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С.
Запорожец, С.А. Ермолицкая, Л.В. Лебедева, И.А. Пожидаева, Т.Н.
Звягинцева // Достижения науки и практики в обеспечении санитарноэпидемиологического благополучия Вооруженных Сил Российской
Федерации: труды Третьего съезда военных врачей медикопрофилактического профиля Вооруженных Сил Российской Федерации. –
СПб. – 2010. – С.160.
8. Филонова, Н.В. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на гуморальные
факторы естественной резистентности у больных хроническим вирусным
гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, Т.Н. Звягинцева // Журнал
инфекционной патологии. – 2010. - Т.17. - №3. – С.203.
9. Коррекция нарушений интерферонпродуцирующей способности клеток
крови у пациентов с хроническим гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С.
Запорожец, Л.А. Иванушко, Т.Н. Звягинцева, С.П. Ермакова //
Инфекционные болезни. – 2011. – Т.9, Приложение 1. – С. 337.
23
10. Филонова, Н.В. Влияние фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens
на факторы врожденного иммунитета у пациентов с хроническим
вирусным гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, Т.Н. Звягинцева
//
Фундаментальные
аспекты
компенсаторно-приспособительных
процессов: Материалы Пятой Всероссийской научно-практической
конференции, Новосибирск, 12-14 апреля. - 2011. – С.225-226.
11. Филонова, Н.В. Коррекция цитокинпродуцирующей функции клеток
периферической крови пациентов с хроническим вирусным гепатитом С
фукоиданом из морских бурых водорослей / Н.В. Филонова, Т.С.
Запорожец, Т.Н. Звягинцева // Дни иммунологии в Сибири: Материалы
Всероссийской научно-практической конференции с международным
участием, Абакан, 27-28 апреля. - 2011. – С.216-217.
12. Клинико-патогенетическое обоснование применения фукоидана из бурой
водоросли Fucus evanescens в комплексной терапии у пациентов с
хроническим вирусным гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец,
А.К. Гажа, Л.А. Иванушко, Т.П. Смолина, Т.Н. Звягинцева // Актуальные
вопросы аллергологии и иммунологии: Материалы Χ Региональной
научно-практической конференции, Владивосток, 19 апреля. – 2012. –
С.54-58.
13. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной
терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С / Н.В.
Филонова, Т.С. Запорожец, Г.М. Шкляр, Т.Н. Звягинцева // Методические
рекомендации. Владивосток. - 2012. 16с.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АлАТ – аланиновая аминотрансфераза
АОА – антиокислительная активность
АсАТ – аспарагиновая аминотрансфераза
БАД – биологически активная добавка к пище
КонА – конканавалин А
ЛДГ – лактатдегидрогеназа
ЛПК – лимфоциты периферической крови
МДА – малоновый диальдегид
МРТ – магнитно-резонансная томография
ПОЛ/АОЗ – перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита
ФП – фагоцитарный показатель
ФЧ – фагоцитарное число
ХВГС – хронический вирусный гепатит С
24
ЦИК – циркулирующие иммунные комплексы
CD25, CD95, HLA-DR – молекулы активации
IgA, IgG, IgM – иммуноглобулины A, G, M
IL – 1,4,6,10 – интерлейкины 1,4,6,10
IFN-α – интерферон-α
IFN-γ – интерферон-γ
HCV – вирус гепатита С
Th1 – Т-лимфоциты – хелперы 1 типа
Th2 – Т-лимфоциты – хелперы 2 типа
TNF – туморнекротизирующий фактор
25