УДК: 611- 091: 616.42: 616.35 - 071: 612.647 На правах рукописи
advertisement
УДК: 611- 091: 616.42: 616.35 - 071: 612.647 На правах рукописи ХАМИДУЛИН БОЛАТ САГДАТОВИЧ Анатомо-топографические особенности лимфоидных образований прямой кишки человека в пренатальном онтогенезе 14.00.02 – анатомия человека Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Республика Казахстан Алматы, 2010 Работа выполнена в АО «Медицинский университет Астана» и в Карагандинском государственном медицинском университете Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Аубакиров А.Б. кандидат медицинских наук, доцент Тебенов М.Е. Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Сисабеков К.Е. кандидат медицинских наук, доцент Салимгереева Б.Ж. Ведущая организация: Западно-Казахстанский государственный медицинский университет имени М. Оспанова. Защита диссертации состоится «26» мая 2010года в 16.00 часов на заседании диссертационного совета Д 09.01.03 при Казахском национальном медицинском университете им. С.Д. Асфендиярова по адресу: 050012, г. Алматы, ул. Толе би, 88. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казахского национального медицинского университета им. С.Д. Асфендиярова по адресу: 050012, г. Алматы, ул. Богенбай батыра, 153. Автореферат разослан «22» апреля 2010г. Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор Нурмухамбетова Б.Н. 2 ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы Среди органов иммуногенеза лимфоидные образования, локализованные в органах пищеварительной системы, занимают особое место, так как в организме человека они участвуют в поддержании иммунологического статуса (Сапин М.Р., Этинген Л.Е. 1996) Слизистая оболочка органов пищеварения находится в сложных, и до конца не изученных, взаимоотношениях с пищевыми массами, качественный состав которых не однороден, в начальном и конечном отделах пищеварительного тракта. Практически всегда, содержимое желудочнокишечного тракта обладает выраженными антигенными свойствами, поэтому лимфоидная ткань, расположенная в органах пищеварения выполняет защитную функцию. Общеизвестно, что непосредственно в толще собственной пластинки слизистой оболочки и в подслизистой основе органов желудочно-кишечного тракта располагаются лимфоидные образования и диффузная лимфоидная ткань, которая осуществляет первичный иммунный ответ на воздействие содержимого кишечника, выполняя функцию местной иммунной защиты, распознавая и инактивируя проникающие в толщу слизистой оболочки чужеродные агенты, несущие на себе признаки генетически чужеродной информации (Хлыстова З.С., Минина Т.А., Работникова Е.Л. и др. 2006; Сапин М.Р. 2007;) В настоящее время лимфоидные узелки, ассоциированные со слизистой оболочкой прямой кишки человека подразделяют на два типа: к первому типу относятся лимфоэпителиальные узелки, осуществляющие контроль над антигенами, попадающими на поверхность эпителия слизистой оболочки толстой кишки. Второй тип лимфоидной ткани – это периваскулярные лимфоидные узелки, которые обеспечивают иммунный контроль над антигенами, проникающими в подслизистую основу и в общий кровоток (Langman J.M., Rowland R. 1992; Чернышенко Л.В., Сырцов В.К., Чернокульский С.Т. 1992; Евтушенко В.М. 1998) Исследование лимфоэпителиальных и периваскулярных узелков коренным образом изменило существующее представление о топографии, количестве, размерах и структуре периферических органов, обеспечивающих местный иммунитет, и позволило опосредовано судить о резервных возможностях локального иммунитета в обеспечении общего иммунитета. Анализ литературных источников показал, что большинство исследований посвящены лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистой оболочкой тонкой кишки (Сапин М.Р. 1987; Видякина М.А. 2006; Nepomnyaschy I., Berguer P., Bekinschtein P. et al., 2000; Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г., 2000; Бархина Т.Г. 2008; Юлдашев А.Ю., Кахаров З.А., Юлдашев М.А. 2008; Ким Н.Б. 2008) 3 Хотя сведения о лимфоидных образованиях разных отделов толстой кишки встречаются довольно часто (Хлыстова З.С., Шмелева С.П., Рябчиков О.П., 1986; Рабажов А.Б. 1996; Аминова Г.Г. 1997, 2000, 2001, 2002, 2008; Молдавская А.А. 2000, 2008; Хлыстова З.С., Шмелева С.П., Калинина И.И., и др. 2002; Хидиатов И.И,, Казаков М.В., Адиев Р.Ф., и др. 2008), однако специальное изучение лимфоидных образований прямой кишки не проводилось. Для получения достоверных данных о морфологических особенностях лимфоидной ткани локализованной в слизистой оболочке прямой кишки человека, необходимы условия, исключающие побочное действие на иммунный аппарат (Хлыстова З.С. 1987; Хаитов Р.М, Пинегин Б.В. 2001). Данным требованиям практически соответствуют условия развития лимфоидного аппарата прямой кишки в пренатальном онтогенезе. Как известно, плод развивается в практически стерильных условиях, поэтому изучение процессов развития тканевых структур слизистой оболочки прямой кишки именно в пренатальном онтогенезе позволяет, проследит все этапы появления и дифференцировки лимфоидной ткани, а также определить моменты включения лимфоидного аппарата прямой кишки в систему лимфопоэза и выявить важные этапы становления лимфоидных образований прямой кишки. Работ, посвященных развитию лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистой оболочкой прямой кишки человека мало, как правило, они посвящены развитию органа в постнатальном онтогенезе (Евтушенко В.М. 1998; Мауль Я.Я., 1999). В литературных источниках отсутствуют сведения об эмбриональном и внутриутробном развитии лимфоидной ткани, расположенной в слизистой оболочке прямой кишки. Кроме того, отсутствуют данные о морфометрических особенностях органа, дифференцировки лимфоцитов в лимфоидных образованиях, появлении популяций лимфоцитов в слизистой оболочке прямой кишки в пренатальном онтогенезе (Доманин А.А., Яковлева О.Н. 2008; Иванова О.В., Левинская М.Ю., Перевозчикова Н.Г. 2008; Курбанов С. 2008). Все это и определяет актуальность и новизну настоящего исследования. Цель исследования Изучить сроки эмбриональной закладки и макро - микроанатомические особенности развития лимфоидной ткани, локализованной в слизистой оболочке прямой кишки человека в пренатальном онтогенезе. Задачи исследования: 1. Определить сроки появления иммунокомпетентных клеток в слизистой оболочке прямой кишки в пренатальном онтогенез 2. Сравнить сроки появления и развития эпителиальной и лимфоидной ткани слизистой оболочки прямой кишки плодов человека в период пренатального онтогенеза. 3. Изучить клеточный состав лимфоидных образований прямой 4 кишки человека в разные сроки пренатального онтогенеза Научная новизна В результате исследования были изучены анатомо-топографические особенности лимфоидных образований прямой кишки человека в пренатальном онтогенезе. Получены новые данные о количестве, размерах и форме лимфоидных узелков, локализованных в слизистой оболочке органа плода на протяжении внутриутробного развития. Определены сроки эмбриональной закладки и степень морфофункционального состояния лимфоидных образований, ассоциированных со слизистой оболочкой прямой кишки человека в пренатальном онтогенезе. Впервые выявлен иммуноморфологический статус лимфоидной ткани прямой кишки плода в зависимости от сроков беременности. Кроме того, определен клеточный состав лимфоидных образований прямой кишки плода в течение всего периода внутриутробного развития. Полученные данные позволяют судить на примере прямой кишки о степени развития местного иммунитета еще до рождения и дают объективную оценку уровню развития иммунитета у плода человека. Практическая значимость работы Подробные данные о анатомо-топографических особенностях лимфоидных образований человека в разные периоды пренатального онтогенеза, полученные в процессе исследования прямой кишки, составляют основную теоретическую и практическую ценность работы. В результате нашего исследования определены сроки первоначального появления иммунокомпетентных клеток в слизистой оболочке прямой кишки человека. Результаты исследования включены в курс лекции по анатомии и гистологии АО «Медицинский университет Астана», Карагандинского государственного медицинского университета на кафедре анатомии и в учебнике по анатомии человека (атлас «Адам анатомиясы» 2 том). Положения, выносимые на защиту 1. Лимфоидная ткань в слизистой оболочке прямой кишки человека в пренатальном онтогенезе впервые появляется на 9-10 неделе, и локализуется вокруг кровеносных сосудов. 2. Морфологические особенности лимфоидной ткани, локализованной в слизистой оболочке прямой кишки плода человека, зависят от возраста плода. 3. Клеточный состав лимфоидных образований прямой кишки плода в пренатальном онтогенезе зависит от возраста плода и отдела органа. 4. Специализированные клетки лимфоидного ряда появляются в поздние сроки беременности (после 28 – недельного срока). 5. Топография лимфоидных образований разных отделов прямой кишки плода зависит от срока внутриутробного развития. 5 Апробация результатов работы Основные положения диссертационной работы были представлены и обсуждены на: - IХ Конгрессе Международной ассоциации морфологов (Бухара, 2008); - Международной конференции «Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии» (г. Новосибирск, 2008); - конференции «Вопросы морфологии ХХI века, СПбМА им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, 2008); - заседании научного семинара по «Медико – биологическим дисциплинам» АО «Медицинский университет Астана» (2009); - заседании проблемной комиссии «Медико-биологические проблемы» Карагандинском государственном медицинском университете (Караганда, 2009); Евразийском симпозиуме, посвященному 80-летию Ю.И. Бородина «Проблемы саногенного и патогенного эффектов эндо – и экзоэкологического воздействия на внутреннюю среду организма» по вопросам фундаментальной и прикладной медицины (Чолпон-Ата, 2009); - VI Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Саратов 2009); - Международной научно-практической конференции руководителей анатомических кафедр и институтов Вузов СНГ и Восточной Европы, посвященной 75-летию УО ВГМУ (Витебск, 2009); - V-ой Республиканской научно – практической конференций с международным участием, посвященной 75-летию кафедры клинической анатомии и оперативной хирургии КазНМУ им. С.Д. Асфендиярова «Современные проблемы теоретической и клинической морфологии» (Алматы, 2009). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, из них 4 в изданиях рекомендованных Комитетом по контролю в сфере образования и науки МОН РК, и 8 – в сборниках конференций и семинаров. Структура и объем работы Диссертационная работа написана на русском языке, изложена на 105 страницах текста компьютерного набора и состоит из разделов: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, заключение, список использованных источников. Приложения на 3 страницах содержат акты внедрения. Диссертация иллюстрирована 32 рисунками и 17 таблицами. Указатель литературы содержит 161 источников, в том числе 109 на русском и 52 на иностранных языках. Диссертационная работа выполнена на базе кафедры нормальной и топографической анатомии с ОПХ АО «Медицинский 6 Университет Астана» и на кафедре анатомии Карагандинском государственном медицинском университете. ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ Материалы и методы исследования Для изучения анатомии и топографии, а также сроков эмбриональной закладки и процессов развития лимфоидной ткани локализованной в слизистой оболочке прямой кишки человека в период пренатального онтогенеза, в работе были использованы препараты прямых кишок, взятые от 87 трупов эмбрионов и плодов, начиная с 8 недельного срока беременности и заканчивая 34-36 неделями внутриутробного развития. Возраст эмбрионов и плодов определяли путем измерения теменнокопчиковой длинны (Пэттен Б.М. 1959) а также на основании актов патологоанатомических вскрытий и документов, предоставленных родильными домами г. Астана. Использованные в работе материалы мы получили от практически здоровых женщин в результате произведенных абортов, в родильных домах г. Астана. Причиной абортов служили медицинские и социальные показания. Во всех случаях мы четко отслеживали, чтобы среди медицинских показаний отсутствовали заболевания связанные с пищеварительной системой и органов иммунной системы матери и плода. Изъятие материала проводилось без нарушения целостности органа. Прямая кишка извлекалась вместе с органными кровеносными сосудами и прилегающей к органу параректальной жировой клетчаткой. При изъятии прямой кишки в качестве верхнего ориентира служил уровень мыса (promontorium) крестцовой кости. На этом уровне на прямую кишку накладывалась капроновая лигатура, которая служила ориентиром при дальнейшем морфологическом исследовании органа. В каудальном отделе прямая кишка извлекалась на границе слизистой оболочки и кожи промежности. После забора препараты прямой кишки промывались в проточной воде в течение 1 часа, затем, путем препаровки, удалялись кровеносные сосуды, соединительная ткань и жировая клетчатка. Орган повторно промывался в проточной воде в течение 15 минут, после чего препарат окрашивался по методу Т. Хеллмана (Hellman T. Studian uber das lymphoide Gewebe. //Ztschr. Konstitutionsforschung. 1921, Lehr 8. –S. 191-219) Метод Хеллмана позволяет визуально определить, сосчитать, установить форму и измерить размеры лимфоидных узелков. На фоне тотального препарата лимфоидные образования, локализованные в слизистой оболочке прямой кишки, окрашиваются в темно – синий цвет. В большинстве случаев (98%) нам удалось получить качественные препараты, на которых хорошо определялись количество, форма и размеры лимфоидных узелков, локализованных в слизистой оболочке прямой кишки в 7 период пренатального онтогенеза. Количество лимфоидных образований на единицу площади мы определяли с помощью трафарета площадью в 1 см2, подсчеты мы производили пятикратно в каждом из отделов прямой кишки, после чего высчитывалось среднестатистическое значение. Для микроскопического исследования лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистой оболочкой прямой кишки в период пренатального онтогенеза и обнаружения анатомо-топографических взаимоотношений с эпителиальным покровом и прилежащими тканями, полученные препараты подвергали традиционной гистологической обработке. Срезы окрашивали стандартными методиками: гематоксилин-эозином, азур II – эозином, по Романовскому-Гимзе, по Ван-Гизону. Для определения иммунокомпетентных клеток и их морфофункционального состояния мы использовали общепризнанные и широко известные критерии, присущие клеткам, входящим в состав лимфоидных образований в целом и в состав лимфоидной ткани прямой кишки, в частности. С целью определения Т- лимфоцитов и их количества мы использовали ЕРОК реакцию с иммунизированными эритроцитами кролика. Для обнаружения иммунокомпетентных клеток, способных продуцировать иммуноглобулины, определенные участки прямой кишки плодов фиксировали в жидком азоте с последующим изготовлением криостатных срезов толщиной от 10 до 15 мкм. Эти срезы подвергались окраске меченными ФИТЦ, стандартными сыворотками, по непрямому методу Кунса. Проведя 40- минутную инкубацию мы использовали микроскоп «Люмам-ИЗ», для выявления специфического желто – зеленного свечения в местах расположения M и A – иммуноглобулинов. Полученные в результате исследования цифровые данные о вариантах, количестве и о размерах лимфоидных узелков, расположенных в слизистой оболочке прямой кишки плода человека, обрабатывались общеизвестными методами вариационной статистики. Результаты исследования и их обсуждение Общепринято считать, что плод в утробе матери развивается в стерильных условиях. Однако, по мнению Титовой Н.Д. (2007г.), стерильные условия не исключают антигенного воздействия (бактериального или химического характера) организма матери на развивающийся эмбрион или плод. По нашим данным в слизистой оболочке прямой кишки в конце 8-й – начале 9 недели, клетки эпителия располагаются в 2 - 3 ряда и во многом напоминают многорядный призматический эпителий. На восьмой неделе эмбриогенеза на поверхности эпителия резко увеличивается количество углублений, кроме того, в эпителии слизистой оболочки прямой кишки появляются первые признаки образования бокаловидных клеток. 8 Из мезенхимальных клеток расположенных под эпителием слизистой оболочки прямой кишки, кроме компонентов микрососудистого русла, формируются ретикулярные клетки и фибробласты. В местах межклеточных щелей, образованных мезенхимальными клетками начинают формироваться эндотелиоциты микрососудистого русла. Постепенно в стенках сосудов обнаруживаются фибробласты и гладкомышечные клетки. Следует также отметить, что на 8 – 9 неделе пренатального онтогенеза, параллельно с развивающимися кровеносными сосудами, выявлялись и слаборазвитые лимфатические капилляры. Если в ранние сроки эмбриогенеза достаточно сложно подразделить кровеносные сосуды прямой кишки на артериолы и венулы, то к 8 – 9 неделям беременности происходит заметное изменение направленности соединительнотканных клеток вдоль продольной оси сосудов. Так, например, в развивающихся артериолах мы обнаруживали вертикально направленные соединительнотканные клетки, в венулах эти клетки сохраняли прежнюю, продольную, ориентацию. Таким образом, к концу 8 недели пренатального онтогенеза в формирующейся слизистой оболочке прямой кишки создаются оптимальные условия для развития лимфоидной ткани. Первоначально в слизистой оболочке прямой кишки 9 – 10 недельного плода появляются единичные клетки лимфоидного ряда, которые затем приобретают вид диффузной лимфоидной ткани, локализованной под покровным эпителием и во всех слоях слизистой оболочки. Кроме формирующихся лимфоидных скоплений или образований, в этот срок пренатального онтогенеза, во всех отделах слизистой оболочки, прямой кишки хорошо определяется диффузная лимфоидная ткань, а также формирующиеся одиночные лимфоидные узелки, расположенные между кишечными криптами. Обнаруженные нами лимфоидные образования в сроки 12-16 недель пренатального онтогенеза на макропрепаратах, окрашенных по методу Хеллмана чаще всего, имели форму овальную или округлую. Реже форма была продольной или неопределенной. С увеличением срока пренатального онтогенеза, от 10-й до 11-12-ых недель, во всех отделах прямой кишки происходит умеренное увеличение размеров лимфоидных скоплений, которые не достигли стадии предузелка или узелка, как правило, это диффузная лимфоидная ткань. Количество лимфоидных образований, локализованных в слизистой оболочке прямой кишки плода на единицу площади, (1 см2) даже в этот срок (12-16 недель) пренатального онтогенеза существенно зависит от возраста и отдела органа (рисунок 1). 9 25 20 Количество 20 Ампулярны й отдел 16,2 15 12,2 11,4 10,3 10 7,2 4,7 5 4,5 Анальный отдел 0 12-16 нед. 20-24 нед. 28-32 нед 34-36 нед Возраст (в неделях) Рисунок 1 - Количество лимфоидных узелков в ампулярном и анальном отделах прямой кишки человека в зависимости от возраста плода и отдела органа - 1 см2 (х ± Sx; min - max). Так, например, в ампулярном отделе количество лимфоидных образований более чем в 1,1 раза больше чем в анальном отделе. Размеры лимфоидных образований в ампулярном отделе так же несколько больше (рисунок 2). 765 800 Ампулярный отдел длина Размеры (мкм) 700 565 600 Ампулярный отдел ширина 465 500 374 400 300 200 235 168 225 145 256 190 245 235 345 320 234 Анальный отдел длина 164 Анальный отдел ширина 100 0 12-16 нед. 20-24 нед. 28-32 нед. 34-36 нед. Возраст (в неделях) Рисунок 2 – Размеры лимфоидных образований прямой кишки человека в зависимости от возраста плода и отдела органа. С увеличением возраста количество лимфоидных образований в ампулярном отделе прямой кишки увеличивается и к 34 – 36 неделям их количество в ампулярном отделе в 2 раза больше чем в анальном отделе (20,0 ± 2,06 и 11, 4 ± 1,22 соответственно). 10 Количество лимфоидных образований и значительное изменение их качественного состава зависит от конкретного отдела прямой кишки. Учитывая неоднородный клеточный состав лимфоидных образований, расположенных в слизистой оболочке прямой кишки и в различных ее отделах, мы исследовали морфологию иммунокомпетентных клеток в разных зонах лимфоидных образований. В 12 – 14 недельном возрасте внутриутробного развития у плодов человека количество малых и средних лимфоцитов, а также ретикулярных клеток достоверно не различается. Однако в периферической зоне лимфоидных образований, локализованных в ампулярном отделе прямой кишки плода, средних лимфоцитов в 1,5 – 2 раза меньше чем малых лимфоцитов. Подобная картина наблюдается в субэпителиальной и в центральной зонах лимфоидных узелков ампулярного отдела прямой кишки плода. Так в центральной зоне по сравнению с субэпителиальной зоной количество лимфоцитов почти в 2 раза меньше, и они расположены в более разреженном виде (16,58±1,4 и 28,62±2,8 соответственно). В анальном отделе лимфоидные образования определяются, в период 12– 16 недель, лишь в столбчатой зоне. В этой зоне они располагаются как в слизистой оболочке, так и в подслизистой основе и имеют овальную форму. Анализируя распределение количества малых лимфоцитов в различных зонах (субэпителиальная, периферическая, центральная) лимфоидных образований анального отдела прямой кишки плода мы обнаружили, что количество малых лимфоцитов преобладает в периферической зоне практически во всех периодах пренатального онтогенеза. В 12–16 недель внутриутробного развития соотношения малых лимфоцитов в субэпителиальной и периферической зонах одинаково (20,53±1,97 и 20,0±1,86 соответственно). Однако в центральной зоне данного отдела прямой кишки в этот период малых лимфоцитов на 62% меньше в сравнении с другими зонами лимфоидных образований. Подобная тенденция распределения количества малых лимфоцитов сохраняется включительно до 24-недельного срока внутриутробного развития. Количество средних лимфоцитов в этот период (20 – 24 нед.) больше в периферической зоне лимфоидных образований анального отдела прямой кишки плода 16,41±1,58. Наименьшее их количество приходится на центральную зону 10,58±1,13. С возрастом в каждом из отделов прямой кишки идет увеличение числа средних лимфоцитов. В целом в лимфоидных образованиях средних лимфоцитов в 1,5 – 2 раза меньше чем малых, причем независимо от возраста (12-24 нед.) плода или зоны лимфоидных образований. Ретикулярные клетки по своему количественному составу превалируют в субэпителиальной зоне (6,32±0,46), в периферической и центральной зонах лимфоидных узелков их количество почти одинаково, при преобладании в периферической зоне лимфоидных образований (5,90±0,56 и 4,62±0,36 соответственно). 11 Ретикулярные клетки в столбчатой зоне имеют веретенообразную, иногда отростчатую, форму и плотно контактируют с клетками лимфоидного ряда. Среди этих клеток мы не обнаружили лимфобластов, макрофагов, или дегенерирующих клеток. При исследовании сроков закладки лимфоидных образований, а также их развитие в период пренатального онтогенеза мы установили, что у плодов 12–16 недельного срока в однослойном призматическом эпителии ампулярного отдела прямой кишки заметно увеличивается число секретирующих бокаловидных клеток, кроме того, значительно увеличивается глубина кишечных крипт, причем в просвете крипт обнаруживается секрет. В результате исследования нами было установлено, что лимфоидные образования, представленные узелковой или диффузной формой, обнаруживаются как в собственной пластинке слизистой оболочки прямой кишки, так и в подслизистой основе. Следует отметить, что развитие лимфоидной ткани в слизистой оболочке прямой кишки плода происходит параллельно с развитием эпителиального покрова. Так, например, в промежуточной и в кожной зонах анального отдела, мы обнаружили, что первоначально формируется однослойный эпителий, а к двенадцати недельному сроку пренатального онтогенеза он трансформируется в многорядный эпителий. Затем, после двенадцати недель внутриутробного развития, покровный эпителий в этих зонах превращается в многорядный кубический эпителий. Однако наряду с процессом преобразования эпителия отчетливо прослеживается и процесс качественного и количественного изменения лимфоидной ткани. К данному сроку в слизистой оболочке прямой кишки плода обнаруживаются лишь малые и средние лимфоциты, причем преобладают малые лимфоциты (26,55±2,6 и 14,48±1,5 соответственно). Клеток непосредственно отвечающих за иммунный статус организма еще не обнаруживается. К 28 - недельному сроку пренатального онтогенеза эпителий слизистой оболочки анального отдела прямой кишки превращается в многослойный плоский неороговевающий эпителий. Именно к этому сроку в слизистой оболочке прямой кишки плода появляются первые единичные макрофаги, которые являются узкоспециализированными иммунокомпетентными клетками. На тридцать второй неделе внутриутробного развития в анальном отделе слизистой оболочки прямой кишки происходит окончательное структурное формирование покровного эпителия. Однако в целом он еще далек от такового у взрослого человека. К данному сроку пренатального онтогенеза в слизистой оболочке прямой кишки в анальном отделе мы уже обнаруживаем незначительное количество макрофагов, бластные формы лимфоцитов и даже плазматические клетки. Таким образом, на тридцать второй недели пренатального онтогенеза в слизистой оболочке анального отдела прямой кишки плода человека покровный эпителий заканчивает свое структурное формирование. В столбчатой зоне 12 однослойный призматический эпителий, который в нижней части этой зоны переходит в многослойный кубический. В промежуточной зоне формируется многослойный плоский неороговевающий эпителий. В эти сроки внутриутробного развития уже сформирована аноректальная линия, т.е. место перехода многослойного кубического эпителия столбчатой зоны, в виде зигзагообразной аноректальной линии, в многослойный плоский эпителий промежуточной зоны. Кожный отдел представлен многослойным плоским ороговеваюшим эпителием. Как уже отмечалось в главе «Материалы и методы исследования», для выполнения люминесцентной микроскопии мы использовали криостатные срезы толщиной от 10 до 15 мкм. Материал для люминесцентной микроскопии мы начали отбирать, начиная с 28-32 недельного срока пренатального онтогенеза. Это было обусловлено тем, что при обычной световой микроскопии до этого срока нам не удавалось обнаружить специализированные иммунокомпетентные клетки в слизистой оболочке прямой кишки плода человека, такие как лимфобласты и макрофаги. Использование иммунофлюоресцентного метода исследования на препаратах прямой кишки до 28 недельного срока беременности также не дало положительных результатов. На препаратах мы обнаруживали лишь равномерное зеленое свечение, что указывает на отсутствие иммуноглобулинов в тканях слизистой оболочки прямой кишки плода человека. Лишь начиная с 28 недельного срока пренатального онтогенеза, появляется характерное для наличия иммуноглобулинов желто-зеленое свечение. Общеизвестно, что иммуноглобулины вырабатываются В-лимфоцитами, ответственными за гуморальный иммунитет, а точнее плазмоцитами. Первоначально, уже достаточно хорошо организованная, лимфоидная ткань содержит незначительное количество плазмоцитов, способных продуцировать иммуноглобулины. Кроме того, плазмоциты неравномерно распределяются в слизистой оболочке прямой кишки плода. Однако заметна некоторая их концентрация в собственной пластинке слизистой оболочки. На 68 препаратах, взятых от плодов, до 28-недельного срока внутриутробного развития лимфоидных образований, при окраске иммунофлюоресцентной сывороткой, яркое желто-зеленое свечение отсутствует. Это, в свою очередь, указывает на отсутствие процессов лимфобластной трансформации и на отсутствие иммуноглобулинов. До 28 – недельного срока пренатального онтогенеза в лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистой оболочкой прямой кишки, преобладают малые и средние лимфоциты. Причем малых лимфоцитов значительно (почти в 2-раза) больше. Лимфоциты, не трансформировавшиеся в плазмоциты, как известно, не могут давать характерного желто-зеленого свечения. На трех препаратах (из 19), при проведении люминесцентной микроскопии, отчетливо прослеживается миграция лимфоцитов через стенку кровеносных сосудов. Таким образом, в процессе исследования мы установили, что иммунокомпетентные клетки, локализованные в слизистой оболочке прямой кишки плода человека, проявляют свою физиологическую активность лишь в 13 поздние сроки беременности, начиная с 28 – недельного срока пренатального онтогенеза. Именно с этого срока внутриутробного развития начинается активная подготовка организма к предстоящему существованию во внешней среде. ЗАКЛЮЧЕНИЕ В результате исследования было установлено, что в прямой кишке плода первоначальные признаки закладки лимфоидной ткани проявляются в 9-10 недельный срок беременности. Именно в этот период внутриутробного развития начинаются процессы дифференцировки клеток покровного эпителия и кишечных желез, расположенных в его слоях. Параллельно идет формирование ретикулярных клеток, клеток фибробластического ряда и гладкомышечных клеток. Дифференцировка покровного эпителия продолжается и в более поздние сроки беременности, например в 12 - 14 недель внутриутробного развития. В этот срок эмбриогенеза происходит активное становление отделов толстой кишки, включая червеобразный отросток и прямую кишку. Таким образом, нами выявлены сроки эмбриональной закладки и дальнейшего развития лимфоидной ткани, локализованной в слизистой оболочке прямой кишки, её взаимоотношения и топографические особенности с другими структурными компонентами, которые окружают лимфоидную ткань в период пренатального онтогенеза. Анализ результатов проведенного комплексного морфологического и морфометрического исследования лимфоидной ткани локализованной в слизистой оболочке прямой кишке плода, позволяет сделать следующие выводы: 1. Впервые лимфоциты, во всех отделах слизистой оболочки прямой кишки плода человека, обнаруживаются на 9-10 неделе пренатального онтогенеза и располагаются по периферии кровеносных сосудов. Появление лимфоцитов сопровождается дифференцировкой покровного эпителия и интенсивным развитием микроциркуляторного русла. 2. На 12-16 неделе пренатального онтогенеза количество лимфоцитов, расположенных в собственной пластинке слизистой оболочки ампулярного отдела прямой кишки в 1,5- 2 раза превышает количество лимфоцитов, локализованных в подслизистой основе органа. Количество малых лимфоцитов в 1,6 раза превышает количество средних лимфоцитов (29,69 ± 2,7 и 18,44 ± 1,8 соответственно). 3. У плодов 20-24 недельного срока развития увеличивается глубина кишечных крипт и количество секретирующих бокаловидных клеток. Обнаруживаются первые Т-лимфоциты в ампулярном отделе прямой кишки, их количество составляет 8,3% от общего числа лимфоцитов, а в анальном отделе их меньше – 6,2%. 4. На 28-32 неделе пренатального онтогенеза в слизистой оболочке ампулярного отдела прямой кишки плода человека появляются единичные 14 макрофаги (1,29 ± 0,06). Количество малых лимфоцитов в 1,5 раза больше чем средних (30,3 ± 3,1 и 20,34 ± 2,08 соответственно). 5. У плодов 32-34-недельного срока пренатального онтогенеза заканчивается структурное формирование покровного эпителия: однослойный призматический - в ампулярном отделе; однослойный призматический - в столбчатой зоне анального отдела; многослойный плоский неороговевающий – в промежуточной зоне; многослойный плоский ороговевающий эпителий в кожной зоне анального отдела. 6. К 34-36 неделям пренатального онтогенеза лимфоидная ткань обнаруживается лишь в тех отделах слизистой оболочки прямой кишки человека, где эпителий однослойный призматический. К этому сроку в лимфоидной ткани впервые обнаруживаются плазматические клетки. Практические рекомендации Результаты исследования рекомендуются для внедрения в учебный процесс медицинских вузов. Представленные данные могут быть использованы морфологами и иммунологами как базисные в решении вопросов развития отдельных звеньев и механизмов иммунитета в процессе онтогенеза. Список опубликованных работ по теме диссертации 1 Аубакиров А.Б., Мауль Я.Я., Хамидулин Б.С Особенности эмбрионального развития лимфоидной ткани в слизистой оболочке прямой кишки человека // //Материалы докладов IX конгресса МАМ. – Бухара. Морфология.- 2008.–том 133 №2 - С.13. 2 Аубакиров А.Б., Мауль Я.Я., Хамидулин Б.С. Морфологическая характеристика лимфоидной ткани слизистой оболочки прямой кишки плодов человека //Материалы конференции, посвященной 100- летию со дня рождения Д.А. Жданова.- Москва. Морфология.- 2008.-том 133 №4 – С.56. 3 Хамидулин Б.С., Аубакиров А.Б., Мауль Я.Я., и др. Клеточный состав лимфоидных образований прямой кишки человека в пренатальном онтогенезе // Вопросы морфологии XXI века, СПбГМА им. И.И. Мечникова. СанктПетербург 2008г. вып.№1.- С. 307-308. 4 Аубакиров А.Б., Мауль Я.Я., Хамидулин Б.С. и др. Качественная характеристика лимфоидной ткани прямой кишки в пренатальном онтогенезе //Международная конференция //Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии – Новосибирск. – 2008. – Том 1(А -Л) – С 31-32. 5 Досмамбетова К.К., Аубакиров А.Б., Хамидулин Б.С. Структура регионарных лимфатических узлов при экспериментальной атипичной резекции печени на фоне применения препарата гиалуроновой кислоты // Валеология. – Астана. – 2008 - №3(11).–С. 78-82 6 Хамидулин Б.С. Состояние лимфоидной ткани и покровного эпителия прямой кишки человека у плодов 34 – 36 недель гестации //Астана медициналық журналы. – 2009. - №1(53). – С.149-151. 15 7 Хамидулин Б.С., Аубакиров А.Б., Мауль Я.Я. Количественная характеристика содержания лимфоцитов и ретикулярных клеток в ампулярном отделе прямой кишки плодов человека //Валеология. – Астана. – 2009 - №2(13). – С. 98-101. 8 Хамидулин Б.С., Мауль Я.Я., Аубакиров А.Б. и др. Лимфоидная ткань в слизистой оболочке прямой кишки плода человека. //Астана медициналық журналы. – 2009. - №3(55).- С.95-197. 9 Мауль Я.Я., Аубакиров А.Б., Хамидулин Б.С. и др. Клеточный состав лимфоидных образований в различных отделах прямой кишки плода человека //Научно-практический журнал Хирургия, морфология, лимфология. – Бишкек.2009. том 6, №11-С. 115-117. 10 Мауль Я.Я., Аубакиров А.Б., Хамидулин Б.С. и др. Морфофункциональные особенности лимфоидной ткани ассоциированной со слизистой оболочкой прямой кишки человека в 8-30 недельный срок гестации// Материалы Евразийского симпозиума посвященный 80-летию Ю.И. Бородина г.ЧолпонАта – 2009. С. 334-336. 11 Аубакиров А.Б., Мауль Я.Я., Хамидулин Б.С. и др. Взаимоотношения лимфоидной ткани и других тканевых структур в слизистой оболочке прямой кишки человека в период пренатального онтогенеза// Материалы докладов YI всероссийского съезда анатомов, гистологов и эмбриологов г. Саратов 2009. Морфология.- 2009-том 136 №4 - С.13. 12 Аубакиров А.Б., Хамидулин Б.С. Морфологические взаимоотношения лимфоидной ткани и эпителиального покрова в слизистой оболочке прямой кишки человека в период пренатального онтогенеза// Материалы международной научно практической конференции руководителей анатомических институтов вузов СНГ и Восточной Европы, посвященной 75летию УО «ВГМУ» г. Витебск 3-4 ноября – 2009. C.150-154. 16 Хамидулин Болат Сағдатұлы Пренаталді онтогенездегі адам тік ішегінің лимфоидты құрылымдарының анатомо-топографиялық ерекшеліктері Медицина ғылымдарының кандидаты ғылыми дәрежесін алуға ұсынылған диссертация 14.00.02- адам анатомиясы ТҮЙІН Зерттеу объектісі: Құрсақішкі дамудың 8 апта мерзімінен бастап 34-36 аптамен аяқтаған пренаталді онтогенез кезеңіндегі адам тік ішегінің шырышты қабығында орналасқан лимфоидты тін. Зерттеу мақсаты: Пренаталді онтогенездегі адам тік ішегінің шырышты қабығында орналасқан лимфоидты тін бастамасының мерзімін және дамуының макро-микроскопиялық ерекшеліктерін зерттеу. Зерттеу әдістері: Макроскопиялық-Хеллман әдісі бойынша тоталді препараттарды дайындау, гистологиялық, морфометриялық және иммунофлюоресцентті әдістер, алынған нәтижелерге статистикалық сараптау жүргізу әдісі. Зерттеу материалы: Адам ұрығы және эмбрионы мәйіттерінен алынған тік ішек препараттары. Зерттеу нәтижелері: Жүктіліктің 9-10 апталық мерзімінде адам тік ішегінің шырышты қабығында лимфоидты тіндердің эмбрионалдық бастамасының алғашқы белгілерінің пайда болуы анықталған. Пренаталді онтогенездің аталған мерзімінде тік ішек шырышты қабығының жамылғылық эпителий жасушаларында, сонымен қатар шырышты қабықта орналасқан ішектік бездерде дифференцировка процестері басталады. Құрсақішкі дамудың соңғы мерзімінде жамылғылық эпителийдің және жасушалық құрылымның дифференцировкасы жалғаса береді. Пренаталді онтогенездің 12-14 аптасында микролимфо-гематоциркулярлық арнаның қалыптасуы басталады. Құрсақішкі дамудың 14 аптасының соңында лимфоидты тіндер жинақталып топтала бастайды, олар әсіресе қан тамыр перифериясында топталады. Пренаталді онтогенез кезеңіндегі адам тік ішегінің шырышты қабығында лимфоидты қатар жасушалар жамылғылық эпителиймен және посткапиллярлық венуламен белсенді араласа бастайды. Пренаталді онтогенез мерзімінің ұлғаюымен лимфоидты құрылымдар мен түйіншелерінің сапасы да ұлғаяды. Бірақта, тік ішектің ампула бөлімінде олардың мөлшері әруақытта 17 практикалық тұрғыда басым, ол ұрық тік ішегінің шырышты қабығына оның құрамының нашар әсер етуіне байланысты. Адам ұрығының тік ішегінің ампула бөлімінде лимфоидты түйіншелер мен диффузды лимфоидты тіндердің мөлшері басымдылығын атауға болады. Пренаталді онтогенездің 20-24 аптасында жамылғылық эпителий жасушаларының соңғы дифференцировкасы аяқталады, ол бокалтәрізді жасушалар секрециясының айқын бөлінуімен жүреді. Құрсақішкі дамудың 28-30 аптасында тік ішектің бөлімдері мен қабықтарының толық қалыптасуы аяқталады. Пренаталді онтогенездің 34-36 апталық мерзімінде лимфоидты түйіншелердің мөлшері көп, олардың мөлшері пренаталді онтогенездің барлық алдыңғы мерзімдерінен басым. 28 апталық мерзімнен бастап макрофагтар мен лимфоциттердің бласты формалары пайда болады, ол антиген әсерімен және де басқа, мысалы генетикалық предетерминді факторларға байланысын көрестеді. Зерттеу нәтижелері адам ұрығы тік ішегінің шырышты қабығында орналасқан лимфоидты тіндердің морфофункционалді жағдайы мен дамуы тікелей пренаталді онтогенез мерзіміне тәуелділігін көрсетеді. Сонымен зерттеу барысында бізбен анықталды: Лимфоидты қатардың алғашқы жасушалары 9-10 аптада анықталады; Лимфоидты қатар жасушалары қан тамыр перифериясында және посткапилляр венула айналасында қалыптасады; Пренаталді онтогенездің 12-16 аптасында ұрық тік ішегінің шырышты қабығында орналасқан лимфоциттер мөлшері ұлғаяды; Пренаталді онтогенездің 34-36 апталық мерзімінде ұрық тік ішегінің шырышты қабығында лимфоидты тін жақсы дамыған. Осы тінді құрайтын иммунокомпетентті жасушалары антиген факторының әсеріне жауап беруге дайын. Адам ұрығы тік ішегінің шырышты қабығында орналасқан лимфоидты тін жергілікті және жалпы қорғаныш механизмінің негізі болып табылады. Зерттеу нәтижелері жұмыстың негізгі теориялық құндылығын құрайды, ол анатомия, гистология және эмбриология дәріс курстерінде, сонымен қатар адам анатомиясы пәнінен оқу құралдарын және оқулықтарын жазуға қолданылуы мүмкін. 18 Khamidulin Bolat Sagdatovich Anatomic and topographic characteristics of lymphoid growth of human rectum in prenatal ontogenesis. Thesis is presented for scientific degree of Candidate of medical science on speciality 14.00.02 anatomy of a human а being SUMMARY Research project: lymphoid tissue localized in mucous membrane of human intestines in the period of prenatal ontogenesis beginning from the 8 th week period and finishing by 34-36 week of intrauterine development. Research goal: to investigate the duration and macro-microscopic characteristics of lymphoid tissue development localized in the mucous membrane of human intestines in prenatal ontogenesis. Research methods: macroscopic-production of total preparations on Hellman’s method, histological, morph metric and immuneflurescent methods, method of statistic analysis of taken results. Research material: in this work, preparations of rectum cadaver embrione and human fetus were used. Research results: It was determined that the first features of embrional onlage of lymphoid tissue in the mucous membrane of human rectum were being revealed on the 9-10th weeks period of pregnancy. During that period of prenatal ontogenesis, cells differentiation processes of integumentary epithelium of rectum mucous membrane as well as of intestine glands localized in the mucous membrane begin. Differentiation of integumentary epithelium, cells structures are being continued even in later periods of intrauterine development. During the 12-14th weeks of prenatal ontogenesis, the formation of micro lymphatic and hematocirculatory channels starts. It was determined that by the end of the 14-th weeks of intrauterine development, the accumulation of lymphoid tissues had been appearing which were grouped as a rule on the periphery side of blood vessels. Cells of lymphoid rows contact actively with integumentary epithelium and postcapillary venules in the mucous membrane of human rectum in the period of prenatal ontogenesis. Also the quality of lymphoid formation and nodulation increases with accelerating of prenatal ontogenesis periods. However, in the ampular parts of rectum, their quantities are predominant constantly, which is due to slightly marked influence on the mucous membrane of fetus rectum by its contents. It should be noted that the most amount of lymphoid 19 nodules and diffuse lymphoid tissue has been met on the ampular parts of human fetus rectum. On the 20-24th weeks of prenatal ontogenesis, the total cells differentiation of integumentary epithelium is finished which the secretion increasing of oval shaped cells accompanies. On the 28-30th weeks of intrauterine development, the total growing of membranes and rectum parts occurs. Remarkable quantity of lymphoid nodules is noted on the 34-36 weeks period of prenatal ontogenesis, the member of which prevails all previous reiods of prenatal ontogenesis. Macrophages and blastular forms of lymphocytes appearance beginning from the 28-th weeks period indicated to the presence except antigens influence and others for example genetically predetermined factors. Research results showed that the development and morph functional condition of lymphoid tissue localized in the mucous membrane of human fetus depended directly on the period of prenatal ontogenesis. Thus, in the process of research, it was found out: The first cells of lymphoid row are found on the 9-10th weeks. Cells of lymphoid row appear on the periphery of blood vessels around post capillary venules. By the 12-16th weeks of prenatal ontogenesis, the quantity of lymphocytes localized in the mucous membrane of fetus rectum. By the 34-36th week’s period of prenatal ontogenesis, lymphoid tissue in the mucous membrane of rectum is rather sufficiently developed. Immune and competent cells composing this tissue are ready potentially to realization of immune response to the influence of antigens factors. Lymphoid tissue localized in the mucous membrane of rectum of human fetus is the basis for realization both local and general protective mechanisms. Research results compose of the main theoretical value of the work and may be used in the lecture course in Anatomy, Embryology and Histology as well as in the composition of books and educational suppliers on the subject of Human Anatomy. 20 Подписано в печать Бумага офсетная. ПечатьRISO Формат издания 60х84/14 Объём 1 п.л. Тираж 100 экз. Заказ № Отпечатано в типографии «Copy Land» Г. Алматы, ул. Сейфуллина, 541 E-mail: print@copyland.kz 21
