На правах рукописи УДК-340.624.6 ШАКАРЬЯНЦ
advertisement
На правах рукописи ШАКАРЬЯНЦ Жан Эдуардович УДК-340.624.6 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИЖИЗНЕНОСТИ И ДАВНОСТИ ПРИЧИНЕНИЯ МЕХАНИЧЕСКОЙ ТРАВМЫ ПО ЭЛЕКТРОННО-ПАРАМАГНИТНО-РЕЗОНАНСНЫМ СПЕКТРАМ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ 14.03.05 – Судебная медицина Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Москва - 2010 Работа выполнена в ГОУ ВПО «Московский Государственный медикостоматологический университет» Росздрава, ФГУ «Российский центр судебно медицинской экспертизы» Росздрава Научный руководитель: Доктор медицинских наук, профессор ПАШИНЯН Гурген Амаякович Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор АБРАМОВ Сергей Сергеевич доктор медицинских наук, профессор ГЕДЫГУШЕВ Исхак Ахмедович Ведущая организация: ГОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Росздрава Защита состоится «__»_______________2010 г. в ___часов на заседании диссертационного совета ДМ 208.041.04 при ГОУ ВПО «Московский Государственный медико-стоматологический университет» Росздрава, Москва 127006, Долгоруковская д. 4 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ГОУ ВПО «МГМСУ» МЗ РФ, Москва 125206, г. Москва, ул. Вучетича, д.10А Автореферат разослан Учёный секретарь диссертационного совета, Кандидат медицинских наук, доцент Т.Ю.Хохлова АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Одним из важных вопросов, возникающих при расследовании преступлений против жизни, здоровья и достоинства личности, является точное установление прижизненности и давности причинения травмы. От правильного решения этого вопроса в значительной степени зависит дальнейший ход расследования в случаях насильственной смерти или смерти, подозрительной на насилие. Об актуальности указанной проблемы неоднократно подчёркивалось в решении съездов и пленумов Всероссийского общества судебных медиков, совещаний и конференций судебно-медицинских экспертов проблемной комиссии по танатологии и травматологии научного совета по судебной медицине при президиуме РАМН. Вполне естественно, что установление прижизненности и давности возникновения механической травмы невозможно объективно осуществить без учёта сроков давности наступления смерти, так как гнилостные процессы в значительной биофизических степени изменяют параметров определение травмированных морфологических, органов и и тканей (А.В. Рамишвили, 1997; В.П. Подоляко, 1998; Ю.И. Пиголкин, Д.В. Богомолов, А.А. Коровин, 1999; И.И. Резников, 1999, Г.А. Пашинян, В.В Жаров и др.). В связи с изложенным, становится очевидным, что для установления прижизненности и давности причинения травмы необходимо разработать объективные и достоверные критерии, обладающие устойчивостью к процессам гнилостной трансформации. За последние годы, биофизические методы нашли широкое применение в клинической и экспериментальной медицине, при изучении человека и животных на системном, органном, клеточном и субклеточном уровнях. Особенно интенсивно расширились сферы применения парамагнитного, ядерно-магнитного резонанса и их модификаций. 3 электронного На наш взгляд, для установления прижизнености и давности возникновения травмы важное значение может иметь метод электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), получившего широкое применение в биологии и медицине. Одним из наиболее важных достижений развития спектроскопии ЭПР следует считать разработку методов спиновых зондов, которые значительно расширили рамки ее применения. С помощью спиновых зондов экспериментально было подтверждено возникновение тонких конформационных переходов в белках и нуклеиновых кислотах при различных влияниях на них и при воздействиях между этими веществами. Были получены ценные сведения о конформационных превращениях гемоглобина и миоглобина в процессе оксигенации, а также о превращениях различных макромолекул при взаимодействиях такого типа, как субстрат-фермент, ингибитор-фермент, антиген-антитело, гормоны-белки сыворотки крови и т.д. Однако в судебно-медицинской литературе имеются лишь единичные работы, посвященные вопросу о возможности установления прижизненности и давности возникновения механической травмы с учетом давности наступления смерти с помощью метода ЭПР при гнилостной трансформации трупа (В.В. Жаров, 1997; И.И. Резников, 2001). В последние годы все чаще объектами судебно-медицинской экспертизы становятся гнилостно-трансформированные, обугленные, расчлененные трупы или их части. В указанных условиях методы, предложенные с целью установления прижизненности и давности возникновения травмы, становятся малоинформативными или вовсе непригодными. Вышеизложенное определило основное исследования, целью которого явилось: 4 направление нашего ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Разработка объективных и научно обоснованных критериев диагностики прижизненности и давности причинения механической травмы в динамике постмортального периода до 1 года по параметрам скорости восстановления спиновых зондов мышечной тканью. ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Провести исследование параметров скорости восстановления спиновых зондов мышечной тканью непосредственно после причинения механической травмы, а также до 6 часов посттравматического периода. 2. Исследовать параметры скорости восстановления спиновых зондов травмированных при жизни и интактных мышц конечностей в динамике постмортального периода до 1 месяца. 3. Исследовать параметры скорости восстановления спиновых зондов травмированных и интактных мышц до 1 года постмортального периода. 4. Исследовать влияние различных эндогенных и экзогенных факторов на параметры скорости восстановления спиновых зондов травмированных при жизни и интактной мышечной ткани. НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ Для судебно-медицинской диагностики прижизненности и давности возникновения механической травмы разработан и применен метод регистрации скорости восстановления спиновых зондов мышечной тканью с помощью электронного парамагнитного резонанса. Результаты, полученные при исследовании скорости восстановления спиновых зондов мышечной тканью в посмертном периоде до 1 года, показывают возможность использования выбранных критериев как объективных и статистически достоверных для диагностики прижизненности и давности механической травмы в указанный постмортальный период. 5 Установлено, что основной вклад в восстановление спиновых зондов вносят SH-группы белков. Выявленная динамика скорости восстановления спиновых зондов мышечной тканью позволяет рекомендовать её для установления прижизненности и давности причинения травмы в отдалённые сроки посмертного периода до одного года. Точность определения давности наступления смерти по исследованиям мышечной ткани составляет 12–24 часа в первые 4–6 суток, 24–48 часов в последующие 30 суток и 2 недели для последующих месяцев после смерти. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ 1. Полученные результаты исследования расширяют арсенал средств судебно-медицинской диагностики при определении прижизненности и давности причинения травмы. Показывают возможность использования современных биофизических методов применительно к судебно-медицинской практике и расширяют представления о протекании тонких посттравматических и посмертных процессов, происходящих в травмированных, переживающих и интактных тканях. 2. Применение разработанного метода в практике при проведении судебно-медицинской экспертизы позволяет объективно и достоверно определять прижизненность и давность причинения механической травмы в посмортальном периоде при гнилостной трансформации трупа. ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ 1. Для диагностики прижизненности и давности механической травмы разработаны научно-обоснованные объективные критерии, основанные на измерении величины константы скорости реакции восстановления спиновых зондов гомогенатами мышечной ткани. 2. Установлено, что процессы гнилостной трансформации в сроки до одного года не препятствуют выявлению прижизненности и давности механической травмы в динамике постмортального периода до одного года. 6 3. Выявлено, что ряд эндогенных и экзогенных факторов (пол, возраст, наличие этанола в крови и др.) не влияют на параметры ЭПР-спектров гомогенатов скелетных мышц при установлении прижизненности и давности возникновения механической травмы в связи с тем, что при анализе указанных спектров постоянно исследуется интактная мышечная ткань. ЛИЧНОЕ УЧАСТИЕ АВТОРА Автором самостоятельно изъяты кусочки мышц из нижних конечностей травмированных и интактных частей из 163 трупов лиц обоего пола в 9-м танатологическом отделении БСМЭ ДЗ г. Москвы. Подготовлен материал для радиоспектроскопического исследования, проведена радиоспектроскопия, а также расшифровка полученных данных. Проведена статистическая обработка полученных результатов. ФОРМА ВНЕДРЕНИЯ Полученные результаты диссертационного исследования по вопросам установления прижизненности и давности причинения механической травмы по ЭПР-спектрам мышечной ткани внедрены в учебный процесс: кафедры судебной медицины и медицинского права МГМСУ, кафедры судебной медицины с курсом токсикологии Сибирского ГМУ, в практику Кемеровского областного Бюро судебно-медицинской экспертизы. ПУБЛИКАЦИИ По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, одна из которых в журнале, рекомендованном ВАК Минобрнауки РФ. АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ Материалы исследования были доложены в сборнике научных работ кафедры судебной медицины ММА им. И.М. Сеченова в 2006 г., на итоговой научной конференции ФГУ РЦСМЭ Росздрава (2005,2006г), на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 75-летию Российского центра судебно-медицинской экспертизы «Актуальные 7 вопросы судебной медицины и экспертной практики на современном этапе» (Москва 2006),на Всероссийском совещании судебно-медицинских экспертов по применению правил медицинских критериев определения степени тяжести вреда, причиненного здоровью человека и итоговой научно-практической конференции Российского центра судебно-медицинской экспертизы (Москва 2008), на Всероссийской научно-практической конференции «О проблемных вопросах организации производства судебно-медицинских экспертиз» (Москва 2009), результаты диссертационного исследования были доложены на апробации работы на расширенном заседании танатологического отдела ФГУ «РЦСМЭ Росздрава» 24.10.08 г. СТРУКТУРА И ОБЪЁМ ДИССЕРТАЦИИ Диссертация изложена в одном томе на 134 листах компьютерного текста. Состоит из введения ,4х глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 266 источников (135 отечественных и 131 зарубежных авторов), иллюстрирована 9 таблицами, 8 градуированными графиками и 18 рисунками. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объектом исследований явились скелетные мышцы из нижних конечностей лиц обоего пола, в возрасте от 18 до 70 лет, причиной смерти которых явилась механическая травма. В качестве группы сравнения исследовали трупы, причиной смерти которых была механическая странгуляционная асфиксия и заболевания сердечно-сосудистой системы (ишемическая болезнь сердца и кардиомиопатии). При судебно-медицинском исследовании трупов фиксировались номер заключения (акта), фамилия, имя и отчество потерпевшего, пол, возраст, причина смерти, вид механической травмы, время получения травмы, непосредственная причина смерти, наличие и концентрация этанола в крови и моче и др. 8 Травмированные и интактные скелетные мышцы были исследованы из симметричных наступления участков нижних смерти которох правоохранительными органами конечностей было или от трупов установлено учреждениями и лиц, время зафиксировано здравоохранения в сопроводительных документах. Наличие этанола в крови и моче трупов определялось газохроматографическими исследованиями, проводившимися в Бюро СМЭ ДЗ г. Москвы. Всего были исследованы кусочки скелетных мышц из нижних конечностей из 163 трупов лиц обоего пола. Общая характеристика исследованного материала представлена в таблице 1. Таблица 1 Исследуемые ткани Мышцы нижних конечностей Скелетные мышцы, гнилостная трансформация Всего: Вид травмы Характеристика трупа Открытая черепно- Трупы лиц мозговая травма, обоего пола в автомобильная, возрасте 20-70 лет железнодорожная, травма, полученная в результате падения с высоты Закрытая черепноТрупы лиц мозговая травма обоего пола в возрасте 20-30 лет Количество 88 75 163 Приготовление образцов из травмированных и интактных скелетных мышц для исследования ЭПР-спектров заключалось в следующем: кусочки скелетных мышц из бедер или голеней (4 образца) помещали в стеклянные сосуды с герметически закрывающимися пробками и до анализа содержались при комнатной температуре (18–20 С) при относительной влажности 40–60 % в различные сроки (до 1 года). Далее через каждую неделю для проведения исследования образцы измельчали ножницами и отмывали от крови в 0,25 л 9 растворе сахарозы. Избыток влаги удаляли. После этого брали материал в количестве 3-4 грамм, добавляли равное по массе количество 0,25 % сахарозы и гомогенизировали в гомогенизаторах из перексного стекла с помощью механического микроизмельчителя ткани до получения однородной массы. Для исследований мышечную ткань помещали в стеклянные бюксы и подвергали гниению при температуре +18–20°С и относительной влажности 60–80% в течение до одного года. Мышечную ткань замораживали в жидком азоте, измельчали в фарфоровой ступке. После добавления физиологического раствора в соотношении 1:1 и тщательного перемешивания полученный гомогенат центрифугировали в течение 3-х минут при скорости центрифуги об/мин. 3000 Супернатант стандартизировали на микроэлектрофотоколориметре добавлением физиологического раствора до величины поглощения света 40% (длина волны 520 нм). В исследованиях использовались высококачественные химические реактивы ведущих фирм категории чистоты «хч» и «чда». В каждом случае в качестве контроля изымали интактную мышечную ткань из топографически симметричного участка. Исследования были проведены на радиоспектрометре отечественного производства марки «Рубин», характеристики диссертационной работе. 10 которого приведены в Рис. 1. Триплетная структура спинового зонда На Рис. 1 представленана триплетная структкра спинового зонда. Как показали наши исследования, центральная компонента имеет наименьшие колебания значений от воздействия факторов, не связанных непосредственно с проведением анализов. Условия записи подбирались эмпирически, с выбором оптимальных значений для сокращения величины помех и были следующими: падающая мощность электромагнитного излучения была равной 0,25 мВт. Выбор такого значения мощности обусловлен тем, что увеличение мощности могло привести к так называемому явлению насыщения по мощности в ЭПР поглощения. Суть его заключается в следующем: в молекулах исследуемого вещества под влиянием микроволнового излучения резонансной частоты электроны с нижнего энергетического уровня будут переходить на верхний (см. рис. 2), с поглощением энергии с одновременным изменением направления спина. Однако, одновременно Рис. 2. с этим процессом будет происходить и обратный, т.е. возвращение электронов на прежний уровень (В) с уровня (А), так называемая индуцированная эмиссия. Поскольку суммарное 11 количество электронов на нижнем уровне несколько больше, чем на верхнем (N2<N1), поглощение обычно превышает индуцированную эмиссию. Именно этот переход и обуславливает резонансное поглощение. Однако очевидно, что если переходы между энергетическими уровнями происходят только по одному пути (поглощение и индуцированная эмиссия), то N2 будет непрерывно уменьшаться, a N1 увеличиваться до тех пор, пока они не сравняются. Как только это произойдет, микроволновое поглощение прекратится, а, следовательно, исчезнет сигнал ЭПР. Это состояние и называется насыщением по мощности. Из-за насыщения невозможно использовать высокие уровни микроволновой мощности, что ограничивает чувствительность радиоспектрометров. К тому же насыщение приводит к распределению резонансной линии, что опять приводит к снижению разрешения и чувствительности. И хотя это явление само по себе может давать важную информацию о концентрации неспаренных электронов в веществе, в настоящем исследовании оно являлось фактором, снижающим точность получаемых результатов, что и повлекло выбор такого значения мощности микроволнового излучения. Кусочки мышечной ткани из области переломов добавляли два объемных процента спиртового раствора спинового зонда "каприловый эфир" в концентрации 1х10-2 М. После инкубации в течение 10 и 30 минут образцы набирали в стеклянный тонкостенный капилляр объёмом 70 мкл и помещали в резонатор радиоспектрометра. В качестве контроля использовался образец симметричной не травмированной ткани, помещённый в резонатор радиоспектрометра. Запись спектров ЭПР производилась в течение 3-х минут. Всего во всех исследованиях было записано и обработано более 2000 спектров ЭПР. Результаты исследований обрабатывались общепринятых в биологии и медицине. 12 с помощью методик РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Для исследования в качестве исходных данных была использована мышечная ткань из трупов в возрасте от 20 до 60 лет, погибших на месте происшествия от механических повреждений (травма несовместимая с жизнью). В качестве параметра для установления прижизнености механической травмы использовалась величина коэффициента К (скорость реакции восстановления спиновых зондов гомогенатами мышечной ткани). Мышечная ткань была исследована в разных сроках постмортального периода. В качестве контроля была исследована мышечная ткань симметричного участка не поврежденной конечности в сроки от одной недели до 4 недель. Полученные результаты представлены в таблице 2 - приведены средние значения К для групп прижизненной и посмертной травмы в сроки 1 – 4 недели постмортального периода. Таблица 2 Прижизненная травма К, х 10-4 Посмертная травма К, х 10-4 1-ая неделя 1,480,04 1,090,02 2-ая неделя 3-ая неделя 1,470,03 1,580,07 1,150,02 1,120,02 4-ая неделя 1,680,07 1,140,02 График 1 13 Зависимость средних значений параметра К, характеризующего скорость реакции восстановления спинового зонда прижизненно и посмертно травмированной мышечной тканью от постмортального периода показана на графике 1. В дальнейшем были исследованы ЭПР-спектры гомогенатов мышечной ткани в динамике постмортального периода из трупов людей, умерших скоропостижно без каких либо повреждений в сроки от 6 до 25 суток. Была определена скорость реакции восстановления спинового зонда в гомогенатах мышц обеих конечностей. Практически разница полученных результатов в зависимости от топографических особенностей мышц не выявлена. Отмечена четкая динамика увеличения величины К в зависимости от давности наступления смерти. Полученные результаты представлены в таблице 3. Таблица 3 Постмортальный период (сутки) К (х 10-4) 6 10 15 20 25 1,14 ±0,50 1,44 ±0,50 4,62 ±0,50 5,9 ±0,502 8,56 ±0,50 Зависимость константы скорости реакции восстановления спинового зонда тканями мышц от давности наступления смерти показан на графике 2 График 2 14 Как видно из приведённого графика, в пределах месячного постмортального периода К возрастает, причём значения К, полученные в первую и последнюю недели, отличаются почти в десять раз. Полученный результат показывает возможность достоверного определения давности смерти с использованием тканей скелетных мышц в пределах месячного постмортального периода. Переломы костей всегда сопровождаются повреждением окружающей кость мышечной ткани. Механическая травма, соответственно и повреждение мышцы при переломе кости сопровождается резким нарушением метаболизма, что приводит к разрушению и дезинтеграции клеточных структур, изменению различных биохимических показателей, в частности, окислительно- восстановительных процессов. Причём процессы аутолиза протекают более интенсивно в условиях прижизненной травмы, чем посмертной. В дальнейшем была исследована мышечная ткань в сроки до 12 недель посмертного периода с интервалом в 1 неделю. В таблице 4 приведены средние значения К, характеризующего скорость реакции восстановления спинового зонда прижизненно и посмертно травмированной мышечной тканью в сроки 5 – 12 недель постмортального периода. Таблица 4 Постмортальный период Средние (м) значений параметра К Прижизненная травма Посмертная травма 5-ая неделя 6-ая неделя 1,650,09 1,620,07 1,160,02 1,170,02 7-ая неделя 8-ая неделя 1,610,08 1,530,05 1,130,02 1,170,02 9-ая неделя 10-ая неделя 11-ая неделя 1,610,10 1,600,08 1,680,10 1,170,02 1,220,02 1,130,02 15 12-ая неделя 1,550,05 1,140,02 На графике 3 приведены зависимости К от постмортального периода для мышечной ткани взятой из области перелома для прижизненной и посмертной травмы, где верхняя линия прижизненная травма, нижняя линия - посмертная. График 3 Из приведённых данных следует, что, начиная с 1-ой недели постмортального периода и вплоть до 12-ой, динамика значений параметра К, характеризующего скорость реакции восстановления спинового зонда в обеих группах практически не изменяется, хотя при этом значения К для группы прижизненной травмы больше таковых чем для посмертной. Таким образом, изучение значений параметра К для обеих групп наблюдения выявило достоверное их отличие, на основании чего имеется возможность диагностики прижизненности причинения переломов костей в сроки от 1-ой до 12-ти недель постмортального периода. Нами было выявлено также, что значения параметра К в случае прижизненно травмированной мышечной ткани больше, чем в соответствующем случае интактной неповрежденной ткани. На основании полученных данных можно сделать вывод, о возможности достоверной диагностики прижизненности травмы по мышечной ткани из области перелома в сроки до 12 недель постмортального периода и при 16 гнилостном разложении трупа. Прижизненность и давность возникновения механической травмы в сроки от 3-х месяцев до 1-го года посмортального периода Для определения прижизненности механической травмы в динамике постмортального периода с использованием тканей скелетных мышц и фенольного спинового зонда определяли константу К скорости реакции восстановления зонда гомогенатами тканей взятых от 26 трупов лиц обоего пола в возрасте от 20 до 80 лет. Результаты этих исследований представлены в таблице 5 и графически на графике 4. Таблица 5 Постмортальный период (месяцы) 4 4,2 4,5 5 6 7 8 К (х10-4), 1/с 23,6 ±0,8 9,0 ±0,5 5,1 ±0,5 3 ±0,5 1 ±0,5 0,53 ±0,5 0 ±0,5 График 4 Зависимость скорости реакции восстановления фенольного спинового зонда тканями скелетных мышц от постмортального периода Как видно из графика, область наибольшего изменения значений К 17 тканями скелетных мышц находится в интервале от 4-х до 6-ти месяцев постмортального периода. Для определения давности наступления травмы в более отдалённые сроки постмортального периода использовали «бромртутный» зонд и ткани, взятые от 28 трупов лиц обоего пола в возрасте от 40 до 70 лет. Образцы исследовали через 7,0; 7,5; 8,0; 8,5; 9,0; 9,5; 10,0; 10,5; 11,0; 11,5; 12,0; 12,5; 13,0 месяцев постмортального периода. Основные полученные нами результаты представлены в таблице 6 и на графике 5, приведённых ниже. Значения скорости реакции восстановления бромртутного спинового зонда мышечной тканью в различные сроки постмортального периода. Таблица 6 Постмортальный период (месяцы) К(Х 10 -6) 1/с 7 8 9 10 11 12 13 2,8 ±0,3 3,8 ±0,4 4,0 ±0,3 4,5 ±0,4 5,5 ±0,5 5,6 ±0,4 6,5 ±0,5 График 5 Мышцы (экспертный материал) Постмортальный период месяцы 18 Зависимость скорости реакции восстановления бромртутного спинового зонда мышечной тканью от постмортального периода на поздних его этапах (713 месяцев). Результаты наших исследований после статистической обработки показали, что константа скорости реакции восстановления спинового зонда от 7 до 13 месяцев постмортального периода линейно возрастает. Таким образом, результаты наших исследований свидетельствуют, что по величине константы скорости восстановления спинового зонда исследованными тканями скелетных мышц можно определить давность наступления смертельной травмы в интервале 7-13 месяцев постмортального периода, т. е. при поздних гнилостных изменениях трупа. При этом точность определения давности травмы возрастает при одновременном использовании различных тканей, пригодных для исследований. Наши исследования не выявили статистически достоверных различий константы скорости реакции восстановления спинового зонда в зависимости от пола, возраста пострадавших и наличия этанола в крови в концентрации до 2‰. Для установления давности наступления травмы при гнилостной трансформации тканей нами исследована скорость восстановления (К) спинового зонда «каприловый эфир» гомогенатами скелетных мышц до 7-ми месяцев постмортального периода с интервалами в две недели. Для исследования были взяты скелетных мышц из 75 трупов лиц обоего пола в возрасте от 20 до 30 лет, основной причиной смерти которых была закрытая черепно-мозговая травма. Образцы подвергались гниению при комнатной температуре (18—22°С) и относительной влажности 60— 80%. Спектры ЭПР записывались при постоянной температуре 250С. Результаты этих исследований представлены на графике 6 19 График 6 При исследовании скелетных мышц было установлено, что в сроки до 12 дней после наступления смерти практически не выявлены изменения величины константы скорости реакции восстановления спинового зонда. Начиная с 14 дней посмертного периода, отмечены первые сигналы ЭПР-спектров спиновых зондов, восстановленных гомогенатами скелетной мышцы. Полученное значение К - 7,35±0,64 нами условно принято за 100%. Через 30 дней после смерти отмечено статистически достоверное снижение величины константы скорости реакции восстановления спинового зонда гомогенатами скелетной мышцы до 90%, а через 45 дней до 85%. При длительности постмортального периода в 60 дней величина константы скорости восстановления спинового зонда гомогенатами скелетной мышцы составила 78%, а через 75 дней - 70%. Уже через 90 дней постмортального периода величина константы (К) снижается до 60%. В дальнейшем наблюдалось плавное снижение этого показателя до 55% - через 105, 50% - через 120, 45% - через 135 и 40% - через 150 дней после смерти. Снижение величины константы скорости реакции восстановления спинового зонда до 25% было отмечено через 165 дней постмортального 20 периода. Через 180 дней после смерти величина константы составляла 20%, а через 195 и 210 дней после наступления смерти соответственно 16% и 10%. Таким образом, по величине константы скорости реакции восстановления зондов гомогенатами скелетных мышц имеется реальная возможность диагностики давности наступления смертельной травмы при глубоко зашедших процессах гнилостной трансформации трупа (через 6 месяцев - 10%, через 7 12%, а через 8 - 15%). Таким образом, результаты исследования показали, что установление прижизненности, давности причинения механической травмы с учётом давности наступления смерти методом ЭПР осуществимо от 7 дней до 12 месяцев постмортального периода. Дальнейшие исследования выявили возможность более точного определения сроков прижизненности, давности причинения механической травмы с учётом давности наступления смерти при использовании фенольного спинового зонда (5,5-8 месяцев) и бромртутного спинового зонда (от 7 до 12 месяцев). Результаты наших исследований по установлении прижизненности, давности причинения механической травмы с учётом давности наступления смерти методом ЭПР показывают, что для более точного определения указаных вопросов целесообразно трехкратное измерение параметров ЭПР-спектров гомогенатов скелетных мышц в трех разных сроках постмортального периода в динамике (в трех интервалах времени через каждые 15 дней). Полученные результаты необходимо сопоставить с таблицами и рисунками, составленными нами при использовании различных спиновых зондов. При этом целесообразно провести для каждого срока трехкратные измерения и вычислить среднее арифметическое значение. Наши исследования показывают, что такие факторы, как пол, возраст, наличие или отсутствие алкоголя, ряда заболеваний существенно не влияют на параметры ЭПР-спектров гомогенатов скелетных мышц и установление 21 прижизненности, давности причинения механической травмы с учётом давности наступления смерти осуществимо при далеко зашедших процессах гнилостной трансформации. ВЫВОДЫ 1. Для установления прижизненности, давности причинения механической травмы с учётом давности наступления смерти при поздних сроках гнилостной трансформации применен метод регистрации скорости восстановления спиновых зондов гомогенатами скелетных мышц с помощью электронного парамагнитного резонанса. 2. Проведенными исследованиями установлено, что в связи с процессами гнилостной биотрансформации органических структур, характеризующимися определенной последовательностью их распада, величины константы скорости реакции восстановления спиновых зондов гомогенатами скелетных мышц являются объективным и достоверным критерием для установления прижизненности, давности причинения механической травмы с учётом давности наступления смерти. 3. Доказано, что по величине константы скорости восстановления спинового зонда гомогенатами скелетных мышц можно установить прижизненность, давность причинения механической травмы с учётом давности наступления смерти в сроки от 7 дней до 12 месяцев постмортального периода с точностью до 12 дней. При определении давности наступления смерти в сроки от 5 до 8 месяцев целесообразно использование фенольного спинового зонда, а от 7 до 12 месяцев постмортального периода - бромртутного спинового зонда. 4. Результаты исследования показывают, что для более точного установления прижизненности, давности причинения механической травмы с учётом давности наступления смерти целесообразно трехкратное измерение 22 параметров ЭПР-спектров гомогенатов мышц в трех разных сроках постмортального периода (в трех интервалах времени через каждые 15 дней). 5. На величину параметров ЭПР-спектров гомогенатов скелетных мышц в динамике постмортального периода в сроки от 7 дней до 12 месяцев не влияют такие факторы как пол, возраст потерпевших, наличие или отсутствие алкоголя в организме и причина смерти. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Высокочувствительный биофизический метод спиновых зондов, характеризующийся быстротой, объективностью и точностью результатов исследований может быть рекомендован к применению в экспертной практике для диагностики прижизненности и давности причинения механической травмы. Для указанной диагностики необходимо: кусочки мышц следует заморозить в жидком азоте и измельчить в фарфоровой ступке, добавить физиологический раствор в соотношении 1:1 и тщательно перемешать, полученный гомогенат центрифугировать в течение 3-х минут при 300 об/мин. Супернатант стандартизировать на фотоколориметре и в полученный препарат добавить два объёмных процента спиртового раствора спинового зонда «каприловый эфир» в концентрации 10 -²М. После инкубации с зондом в течение 10 и 30 минут записать спектры ЭПР на радиоспектрометре и вычислить параметр К. По параметру К сделать заключение о прижизненности травмы. При диагностике давности наступления травмы с использованием скелетных мышц, в качестве критерия следует использовать значения константы (К) скорости реакции восстановления спиновых зондов, регистрируемые методом электронного парамагнитного резонанса и их соотношения. Для более точного установления сроков давности травмы целесообразно 23 использовать не только значения констант скорости реакции восстановления спиновых зондов, но и учитывать динамику константы "К" на протяжении определённого промежутка времени, зависящую от срока постмортального периода, что позволит устанавливать прижизненность, давность причинения механической травмы с учётом давности наступления смерти с точностью 2448 часов от 7 до 30 суток посмертного периода. Содержание этанола в крови до 2-х промилле, пол и возраст не оказывают существенного влияния на параметры ЭПР-спектров зондов, при наличии соответствующего контроля, а, следовательно, и на установление прижизненности и давности возникновения механической травмы. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ 1. Шакарьянц Ж.Э. Установление давности механической травмы по ЭПР-спектрам мышечной ткани // Актуальные проблемы судебной медицины. Сборник научных работ кафедры судебной медицины Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова. – 2006. – С. 61-62. 2. Шакарьянц Ж.Э. Диагностика давности механической травмы в поздние сроки посмортального периода // Актуальные проблемы судебной медицины. Сборник научных работ кафедры судебной медицины Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова. – 2006. – С. 62. 3. Шакарьянц Ж.Э. Возможности применения электронно - парамагнитного резонанса для определения прижизненности и давности повреждений (по данным литературы) // Материалы итоговой научной конференции российского центра судебно-медицинской экспертизы. – 2006. – С. 74-76. 4. Шакарьянц Ж.Э. Перспективы исследования ЭПР в судебной медицине // Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики на современном этапе 17-20 октября 2006 года. Стендовый доклад. – 2006. 24 5. Шакарьянц Ж.Э. Определение давности наступления смерти в поздние (7-12 месяцев) сроки постмортального периода // Материалы Всероссийского совещания судебно-медицинских экспертов по применению правил и медицинских критериев определения степени тяжести вреда, причиненного здоровью человека и итоговой научно-практической конференции российского центра судебно-медицинской экспертизы. – 2008. – С. 128-130. 6. Шакарьянц Ж.Э. Диагностика прижизненности и давности механической травмы по электронно-парамагнитно-резонансным спектрам скелетных мышц // Судеб. мед. экспертиза. – № 1. 2009. – С. 30-32. 7. Шакарьянц Ж.Э. Использование спиновых зондов для установления прижизненности и давности механической травмы и выбор параметров для оценки давности механической травмы по состоянию органов и тканей. //Материалы всероссийской научно-практической конференции «О проблемных вопросах в организации производства судебно-медицинских экспертиз» М 2009 С. 133-137. 25
