Практическое занятие №

Тема: Биохимия крови.
Занятие №1.
Актуальность темы.
Врач должен знать химический состав и физико-химические свойства крови, поскольку малейшие изменения в
организме сопровождаются изменением в составе крови. В связи с этим, проведение определения в сыворотке крови
белковых фракций и общего белка, мочевины и креатинина имеет важное значение в диагностике различных
заболеваний.
Учебные и воспитательные цели:
Общая цель: привить знания о клиническом значении биохимического анализа крови в практике врача.
Частные цели:
- уметь определять количество общего белка и белковых фракций в сыворотке крови рефрактометрическим методом;
- владеть электрофоретическим методом определения белковых фракций.
1. Входной контроль знаний.
1.1. Тесты.
1.2. Устный опрос.
2.
2.1.
2.2.
2.3.
2.4.
2.5.
2.6.
Основные вопросы темы:
Что такое кровь и каковы ее функции?
Физико-химические свойства и химический состав крови.
Белки крови и их роль в организме.
Гипопротеинемия, гиперпротеинемия, диспротеинемия, парапротеинемия, причины возникновения.
Небелковые азотсодержащие вещества крови. Клиническое значение определения мочевины, креатинина в крови.
Клиническое значение биохимического анализа крови.
3. Лабораторно-практические работы:
3.1. Методика определения общего белка и белковых фракций в сыворотке крови рефрактометрическим методом;
3.2. Методика определения белковых фракций методом электрофореза на бумаге.
4. Выходной контроль.
4.1. Ситуационные задачи.
5. Литература.
5.1. Материал лекций.
5.2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990.С. 567-582.
5.3. Биохимия под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева М.: ГЭОТАР-МЕД, 2011г.
2. Основные вопросы темы.
2.1. Что такое кровь и каковы ее функции?
КРОВЬ – жидкая подвижная ткань, обеспечивающая постоянство внутренней среды организма.
Функции крови:
- Дыхательная – Hb транспортирует кислород и углекислый газ;
- Транспортная – перенос питательных веществ, промежуточных и конечных метаболитов обмена веществ;
- Выделительная функция – удаляет конечные продукты обмена (мочевина, креатинин, мочевая кислота и др.);
- Защитная – участвует в иммунитете (иммуноглобулины), в процессе свертывания (фибриноген);
- Регуляторная – осуществляет транспорт гормонов к органам мишеням;
- Терморегуляторная – поддерживает постоянство температуры тела в разных его частях.
2.2. Физико-химические свойства и химический состав крови.
Общий объем крови взрослого человека составляет 5-6 л или 7-8% массы тела, у детей эта цифра несколько
выше. Кровь состоит из жидкой части плазмы и форменных элементов (эритроциты, лейкоциты и тромбоциты).
Физико-химические свойства крови:
- Поддерживает кислотно-щелочной баланс. В норме рН крови – 7,36-7,4;
- Вязкость крови в 5-6 раз выше вязкости воды;
- Относительная плотность цельной крови – 1,050-1,064;
- Осмотическое давление плазмы крови ≈ 7,6 атм.
Химический состав крови:
1.Белки плазмы (альбумины, глобулины, фибриноген) – 7%;
2.Небелковые компоненты (глюкоза, липиды, аминокислоты, креатин, мочевина, билирубин) – 2%;
3.Неорганические компоненты (NaCl, CaCl2, Na2HРO4) – 0,9%.
2.3. Белки крови и их роль в организме.
Белки крови: альбумины, глобулины, фибриноген
Содержание общего белка у взрослых – 65-85 г/л, у грудных детей – 41-73 г/л
Функции белков крови:
- Обуславливают онкотическое давление крови;
- Поддерживают постоянство рН крови;
- Обуславливают вязкость крови;
- Осуществляют транспорт нерастворимых в воде веществ (жирные кислоты, билирубин, аспирин и др.);
- Участвуют в иммунитете (γ-глобулины);
- Участвуют в свертывании крови (фибриноген);
- Являются резервом аминокислот (при белковом голодании и др.).
Альбумины: содержание – 40-50 г/л, молекулярная масса – 68-70 тыс. дальтон
Глобулины
Содержание глобулинов в крови – 20-30 г/л. Молекулярная масса – 160-180 тыс. дальтон
Методом электрофореза на бумаге выделены α1, α2, β и γ-глобулиновые фракции.
α и β-глобулины синтезируются в печени, а γ-глобулины - В-лимфоцитами.
α1- глобулины:
- Ингибиторы протеиназ (антитрипсин и т.д.);
- Протромбин
α2- глобулины:
- Церулоплазмин – белок небесно-голубого цвета, транспортирует медь, поддерживая нормальный уровень её в тканях,
особенно в печени;
- Гаптоглобины – комплексы белка с гемоглобином. Эти комплексы не могут экскретироваться (высокая м.м.) почками,
предотвращается потеря Fe;
- Антитромбин III
- Ретинолсвязывающий белок – транспорт ретинола
β-глобулины:
- Трансферрин – транспорт Fe в различные ткани;
- Фибриноген
γ-глобулины (иммуноглобулины) – антитела
У новорожденных и детей грудного возраста антитела не синтезируются и должны поступать в составе грудного
молока.
Фибриноген – 2-4 г/л, молекулярная масса – 330 тыс. дальтон.
2.4. Гипопротеинемия, гиперпротеинемия, диспротеинемия, парапротеинемия, причины возникновения.
Гипопротеинемия – уменьшение содержания общего белка крови. Наблюдается при кровотечениях,
злокачественных новообразованиях, нарушениях функции почек, печени, голодании и др.
Гиперпротеинемия – повышение содержания общего белка крови.
Относительная гиперпротеинемия связана с потерей воды, а, следовательно, повышением концентрации общего
белка (поносы, рвота, сахарный и несахарный диабет, холера, дизентерия).
Абсолютная гиперпротеинемия возникает вследствие повышенного образования белков, например, образование
γ-глобулинов при инфекционных заболеваниях.
Диспротеинемии – это изменения в соотношении отдельных белковых фракций.
В норме А/Г=1,5-2,3 (альбумино-глобулиновый коэффициент). Содержание общего белка остается в норме.
Причины:
- Нарушения функций почек, А/Г коэффициент уменьшается за счет потери в большей степени альбуминов;
- Нарушения функций печени. А/Г коэффициент снижается за счет уменьшения синтеза альбуминов и глобулинов;
- Инфекционные заболевания, сопровождающиеся повышением антител.
Парапротеинемии – появление белков, которые не существуют в норме.
- Интерферон – специфический белок, синтезирующийся в организме в результате проникновения различных вирусов;
- С-реактивный белок – появляется в крови в острый период болезни (белок острой фазы) или в период обострения
хронического процесса (пневмония, ревматизм и др.);
- Миеломные белки – при миеломной болезни;
- Макроглобулины – при макроглобулинемия Вальденстрема;
2.5. Небелковые азотсодержащие вещества крови. Клиническое значение определения мочевины, креатинина в
крови.
К ним относятся конечные продукты обмена: мочевина – 50%, аминокислоты – 25%, мочевая кислота, креатин,
креатинин, билирубин, индикан, холин, нуклеотиды, полипептиды. Азот, входящий в состав этих соединений «остаточный азот», т.е. остающийся в фильтрате после осаждения белков.
В норме - 14,2-28,4 ммоль/л. При некоторых заболеваниях эта величина повышается (азотемия).
Азотемия:
1.Ретенционная – почечная и внепочечная (сердечно-сосудистая недостаточность, снижение АД, снижение
почечного кровотока).
2.Продукционная – усиленный распад белков тканей: злокачественные новообразования, ожоги, кахексия.
В настоящее время вместо остаточного азота крови определяют содержание мочевины и креатинина.
В норме: Мочевина- 3,3-8,3 ммоль/л
Креатинин-0,044-0,11 ммоль/л.
2.6. Клиническое значение биохимического анализа крови.
В норме химический состав крови постоянен, но может отражать малейшие изменения в метаболизме организма.
Учитывая доступность этой биологической жидкости и возможность многократного проведения биохимического анализа
крови, создается возможность по анализу крови установить диагноз, прогноз заболевания, а также осуществить контроль
эффективности лечения.
3. Лабораторно-практические работы.
3.1. Методика определения общего белка и белковых фракций в сыворотке крови рефрактометрическим
методом.
ПРИНЦИП МЕТОДА состоит в том, что степень рефракции обусловлена количеством растворенных в растворе
частиц. Практически коэффициент рефракции сыворотки крови довольно точно свидетельствует о количественном
содержании в ней белка.
ХОД АНАЛИЗА:
Взять 2 пробирки для центрифугирования. В одну отмерить 0,6 мл сыворотки крови, а в другую - 0,6 мл
воды. Затем той же пипеткой в обе пробирки добавить по 0,6 мл насыщенного раствора сернокислого аммония.
Раствор сернокислого аммония к сыворотке крови добавляют маленькими порциями, медленно, чтобы не
образовались пузырьки при этом происходит осаждение глобулина. Легкими поворотами содержимое пробирки
осторожно смешивают и центрифугируют пробирку с сывороткой крови 5 мин при скорости 1000 – 1500 об/мин.
Пока происходит центрифугирование сыворотки, рефрактометрируют:
1.Н2О (дистиллированная)
2.Полунасыщенный раствор сернокислого аммония (2-ая пробирка).
3.Неосажденную сыворотку.
Записывают результаты рефрактометрирования - показатель рефракции (НД).
Рефракция солей сыворотки - величина постоянная и равна 0,002.
Из отцентрифугированной сыворотки берут каплю из прозрачного верхнего слоя и также рефрактометрируют.
РАСЧЕТ ДЛЯ АЛЬБУМИНОВ:
НД альбуминов = (НД осажденной сыворотки - НД полунасыщенного р-ра сернокислого аммония х 2 - 0,002/
показатель рефракции солей сыворотки).
1% р-р альбуминов имеет показатель рефракции равный 0,00177, затем рассчитывают процентное содержание
альбуминов:
1% - 0,00177
Х% - НД альбуминов
1х НД альб.
Х = 0,00177
РАСЧЕТ ДЛЯ ГЛОБУЛИНОВ:
НД альбуминов = (НД неосажденной сыворотки - НД воды - НД альбуминов - 0,002). 1% р-р глобулинов
имеет показатель рефракции равный 0,00229. По пропорции находят содержание глобулинов:
1% - 0,00229
1х НД глоб.
Х% - НД глобулинов
Х= 0,00229
По сумме альбуминов и глобулинов находят общий белок и коэффициент А/Г.
3.2. Методика определения белковых фракций методом электрофореза на бумаге.
ПРИНЦИП МЕТОДА: Метод основан на различии величины заряда белков сыворотки крови. Если нанести
каплю сыворотки на полоску хроматографической бумаги, смоченной буферным раствором, и пропустить через эту
полоску постоянный электрический ток, отдельные белки будут продвигаться в электрическом поле с различной
скоростью. При рН=8,6 белки сыворотки крови движутся по направлению к аноду, поскольку они обладают в этих
условиях отрицательным зарядом. Наиболее быстро движутся альбумины, затем 1- и 2-глобулины, далее  - глобулины
и наконец  - глобулины.
АППАРАТУРА: Прибор для определения белков в крови методом электрофореза на бумаге состоит из
выпрямителя, электрофоретической кюветы и денситометра.
ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ:
Кюветы заполняются вероналовым буфером рН = 8,6. Нарезают из хроматографической бумаги полоски длиной
38 см., шириной 3 см., полоски смачивают буферным раствором и помещают в кювету. Ближе к отрицательному
полюсу наносится сыворотка (0,01 мл), затем прибор включается в электрическую сеть.
Электрофоретическое разделение белков сыворотки на бумаге производится обычно в течение 6- 24 часов при
напряжении 150 Вт и силе тока 6-8 А. По истечении указанного срока бумажные полоски сушат в сушильном шкафу при
температуре около 100 градусов в течение 5 мин., затем красят бромфеноловым синим. Остатки красителя, не
связавшегося с белками, отмывают с полоски бумаги 10% уксусной кислотой.
Количественное определение белковых фракций проводится с помощью денситометра или путём экстрагирования спиртовым
раствором щелочи с последующим определением концентрация краски фотоколориметрически.
Тема: Биохимия крови. Метаболизм гемоглобина.
Занятие №2.
Актуальность темы.
Минеральный состав крови чрезвычайно разнообразен и играет большую роль в жизнедеятельности организма,
например, в процессе роста и развития ребенка обмен кальция и связанных с ним фосфатов. Снижение содержания
кальция может сопровождаться повышением нервно-мышечной возбудимости, судорогами (тетания новорожденных).
Развитию гипокальциемии у новорожденных способствует сахарный диабет у матери, недоношенность и т.д.
Чрезмерные дозы витамина «Д» вызывают гиперкальциемию с отрицательными последствиями для организма.
Основным белком, осуществляющим снабжение тканей кислородом и освобождение их от углекислоты, является
гемоглобин. В связи с этим, изучение обмена гемоглобина и определение его концентрации является чрезвычайно
важным, а также актуальным является клиническое значение определения содержания желчных пигментов крови, моче
и кале в дифференциальной диагностике различных видов желтух (гемолитическая, желтуха новорожденных,
обтурационная, паренхиматозная).
Учебные и воспитательные цели:
Общая цель: привить знания о минеральном составе крови, механизме свертывания крови, метаболизме гемоглобина.
Частные цели:
- уметь определять уровень кальция в сыворотке крови;
- владеть методикой определения концентрации гемоглобина в крови.
1. Входной контроль знаний.
1.1. Тесты.
1.2. Устный опрос.
2.
2.1.
2.2.
2.3.
2.4.
2.5.
2.6.
Основные вопросы темы:
Минеральные составные части крови, значение их для организма.
Механизм свертывания крови.
Противосвертывающая система и система фибринолиза.
Метаболизм гемоглобина. Синтез гема, гемоглобина.
Распад гемоглобина. Прямой (конъюгированный) и непрямой (неконъюгированный) билирубин.
Клиническое значение определения содержания желчных пигментов крови, моче и кале в дифференциальной
диагностике различных видов желтух (гемолитическая, желтуха новорожденных, обтурационная,
паренхиматозная).
3. Лабораторно-практические работы:
3.1. Методика определения кальция в сыворотке крови;
3.2. Методика определения концентрации гемоглобина в крови.
4. Выходной контроль.
4.1. Ситуационные задачи.
5. Литература:
5.1. Материалы лекций.
5.2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 582-585, 599-607.
5.3. Биохимия под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева М.: ГЭОТАР-МЕД, 2011г.
2. Основные вопросы темы:
2.1. Минеральные составные части крови, значение их для организма.
Различают несколько фракций кальция: ионизированный кальций, кальций неионизированный, но способный к диализу, и
недиализирующийся (недиффундирующий), связанный с белками кальций.
Кальций принимает активное участие в процессах нервно-мышечной возбудимости (как антагонист ионов К+), мышечного
сокращения, свертывания крови, образует структурную основу костного скелета, влияет на проницаемость клеточных
мембран и т.д.
Отчетливое повышение уровня кальция в плазме крови наблюдается при развитии опухолей в костях, гиперплазии или
аденоме паращитовидных желез. В таких случаях кальций поступает в плазму из костей, которые становятся ломкими.
Важное диагностическое значение имеет определение уровня кальция при гипокальциемии. Состояние гипокальциемии
наблюдается при гипопаратиреозе. Нарушение функции паращитовидных желе приводит к резкому снижению содержания
ионизированного кальция в крови, что может сопровождаться судорожными приступами (тетания). Понижение
концентрации кальция в плазме отмечают также при рахите, спру, обтурационной желтухе, нефрозах и гломерулонефритах.
2.2. Механизм свертывания крови.
Система свертывания крови представляет собой каскадную цепь протеолитических реакций.
Каскадность реакций обеспечивает постепенное усиление первоначального слабого сигнала – воздействия,
вызывающего активацию внутреннего и внешнего пусковых механизмов свертывания. Каждая последующая стадия
приводит к образованию все больших количеств активной формы очередного фактора. Происходит лавинообразное
нарастание «мощности» каждой следующей ступени каскада, в результате стадия превращения фибриногена в фибрин
протекает очень быстро.
Первая стадия – сокращение поврежденного сосуда.
Вторая стадия – образование белого тромба. Протромбин (VII фактор) под действием тромбопластина (III)
тромбоцитов и ионов кальция (IV) превращается в активную форму – тромбин. В этой стадии участвуют факторы
внешнего пускового механизма свертывания: проконвертин (VII); проакцелерин (V); фактор Стюарта (Х), а также
факторы внутреннего пускового механизма свертывания: фактор Кристмаса (IХ); фактор Розенталя (ХI); фактор
Хагемана (ХII)
Третья стадия – образование красного тромба. Тромбин активирует фибриноген (I), превращая его в активную
форму фибрин – мономер. Затем образуется фибрин – полимер (фибриновый гель), который не отличается прочностью.
Его легко может разрушить механическое воздействие. Под действием фермента трансглутаминазы (ХIIIa) образуются
прочные ковалентные связи между мономерами фибрина, а также между фибрином и белком фибронектином,
стабилизируя гель фибрина.
Через час тромб сжимается (ретракция тромба). Затем происходит фибринолиз (четвертая стадия).
Плазминоген под действием фермента урокиназы и тканевого активатора плазминогена (ТАП) превращается в
активную форму – плазмин (частичный протеолиз), который расщепляет в фибрине – полимере пептидные связи.
Тромб в течение нескольких дней рассасывается.
СХЕМА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ФИБРИНОЛИЗА
IX – фактор Кристмаса
XI – фактор Розенталя
XII – фактор Хагемана
X – фактор Стюарта
VII – проконвертин
V – проакцелерин
Тромбопластин
– III
(тромбоцитов )
протромбин – II
Ca2+ - IV
тромбин
фибриноген– I
фибрин (мономер)
урокиназа
плазминоген
плазмин
фибрин (полимер)
ТАП
Расщепляет пептидные связи в фибрине-полимере36
Роль витамина К в свертывании крови.
Витамин К входит в состав ферментов, катализирующих карбоксилирование глутаминовой кислоты с
образованием γ-карбоксиглутаминовой кислоты, входящей в состав факторов свертывания крови: II, VII, IХ, Х.
2.3. Противосвертывающая система.
Ингибиторы факторов свертывания крови:
1. белок плазмы антитромбин III, инактивирующий большинство факторов свертывания крови;
2. другие белки – ингибиторы протеиназ (α- макроглобулин, антиконвертин, тромбомодулин).
Антикоагулянты:
1. гепарин, активирующий антитромбин III;
2. антивитамины К – дикумарин, неодикумарин и др.
2.4. Метаболизм гемоглобина. Синтез гема, гемоглобина.
МЕТАБОЛИЗМ ГЕМОГЛОБИНА
Синтез и распад происходит в клетках РЭС: селезенка, печень, костный мозг.
Схема биосинтеза гемоглобина
аминолевулинсинтаза
аминолевулиновая к-та
COOH
CH2 - COOH
+
(CH2)2
O
C
~ S КоА
СУКЦИНИЛ-КоА
порфобилиоген
NH2
Глицин
протопорфирин
+ Fe 2+
(феррохелатаза)
Гем + глобин- Нb
Регуляция синтеза гемоглобина
Гем и Нв - аллостерические репрессоры аминолевулин -синтетазы, а
стероидные гормоны - индукторы аминолевулинсинтазы(механизм обратной
связи).
18
2.5.Распад гемоглобина. Прямой (конъюгированный) и непрямой (неконъюгированный) билирубин.
Гемоглобин, освобождающийся из эритроцитов, которые разрушаются через 120 дней, в крови соединяется с
гаптоглобином –α2-глобулин и транспортируется в клетки РЭС, главным образом селезенки. Здесь Нb окисляется в
метгемоглобин, а затем подвергается распаду. При этом гаптоглобин отщепляется и переходит в кровь.
Под действием гемоксигеназы происходит расщепление α-метинового мостика гема, соединяющего два
соседних пиррольных кольца. Кольцевая структура гема разрывается и образуется вердоглобин. От вердоглобина
отщепляется железо, которое связывается с белком – трансферином и доставляется с кровью в печень и глобин. Глобин
гидролизуется катепсинами селезенки до аминокислот и в результате образуется биливердин – желчный пигмент
зеленого цвета, который восстанавливается при участии биливердинредуктазы в билирубин – желчный пигмент
красно-желтого цвета. Он является токсичным, неконъюгированным (не связанным с глюкуроновой кислотой),
непрямым (так как не может давать прямую реакцию с диазореактивом), плохо растворим в воде и крови и поэтому,
транспортируется в печень в комплексе с альбумином. Одна молекула альбумина свободно присоединяет 10-35
молекул билирубина. Вследствие прочной связи с белком, билирубин не экскретируется с мочой.
В печени под действием УДФ – глюкуронилтрансферазы билирубин взаимодействует с глюкуроновой кислотой
(в составе УДФ-ГК) образуется билирубинглюкуронид – конъюгированный, прямой, нетоксичный и хорошо
растворимый в воде.
Билирубинглюкурониды лишь в незначительных количествах могут диффундировать в кровеносные капилляры.
Поэтому в плазме крови присутствуют две формы билирубина: неконъюгированный – 75% и конъюгированный – 25%,которые вместе составляют общий билирубин. Концентрация общего билирубина в крови здорового человека - 3,5-19
мкмоль/л, у грудных детей – 3,4-14 мкмоль/л.
В составе желчи прямой билирубин секретируется в 12-перстную кишку, где под действием гидролаз бактерий
происходит отщепление глюкуроновой кислоты.
В тонком кишечнике билирубин под действием бактерий превращается в мезобилиноген (уробилиноген). Часть
мезобилиногена всасывается в кишечнике и по воротной вене поступает в печень, где полностью расщепляется до
моно- и дипирролов.
Большая часть мезобилиногена из тонкой кишки поступает в толстый кишечник, где под действием анаэробных
бактерий восстанавливается до стеркобилиногена, который, как и уробилиноген, бесцветен.
Основная часть стеркобилиногена, выделяемая с каловыми массами, окисляется на воздухе в стеркобилин –
оранжево-желтый пигмент, определяющий цвет каловых масс. В сутки с калом выделяется до 250 мг стеркобилина.
Небольшая часть стеркобилиногена всасывается в прямой кишке, через систему геморроидальных вен поступает в
нижнюю полую вену и через почки выводится с мочой. Стеркобилиноген мочи окисляется в стеркобилин, частично
определяя нормальный соломенно-желтый цвет мочи. В сутки с мочой выделяется 1-4 мг стеркобилина.
СХЕМА РАСПАДА ГЕМОГЛОБИНА
Hв + гаптоглобин (α2- глобулин)
ЭРИТРОЦИТЫ
120 дней
Клетки РЭС
+3
Hв окисляется в метгемоглобин (Fe )
Кровь
- гаптоглобин
гемоксигеназа
ВЕРДОГЛОБИН
катепсины
Аминокис-ты
глобин
ПеченьтрансферинFe+3
БИЛИВЕРДИН – пигмент зеленого цвета
НАДФH+H+
биливердинредуктаза
НАДФ
БИЛИРУБИН – пигмент красно-желтого цвета
( непрямой, неконъюгированный,
+
токсичный)
АЛЬБУМИН
КРОВЬ
25
ПЕЧЕНЬ
БИЛИРУБИН + УДФ-глюкуроновая кислота
УДФ-глюкуронилтрансфераза
Моно-, диглюкуронид билирубин (прямой, конъюгированный,
нетоксичный)
Глюкуроновая кислота
Мезобилиноген (уробилиноген)
Тонкий кишечник
Толстый кишечник
в печени распаддо моно- и
дипирролов
Стеркобилиноген – бесцветный пигмент
В прямой кишке- по системе
геморроидальных вен в
нижнюю полую вену
стеркобилин- желто-оранжевый
(выделяется с фекалиями 250 мг в сутки)
почки
моча
26
Стеркобилин- 1- 4 мг в сутки
2.6.
Клиническое значение определения содержания желчных пигментов крови, моче и кале в
дифференциальной диагностике различных видов желтух (гемолитическая, желтуха новорожденных,
обтурационная, паренхиматозная).
Под влиянием различных факторов в организме может нарушаться образование и выведение билирубина и
продуктов его метаболизма. Повышение содержания билирубина в крови ведет к отложению его в тканях, в том числе в
слизистых оболочках и коже, вызывая их окрашивание в желтый цвет – возникновению желтухи.
В дифференциальной диагностике желтух различной этиологии важное значение имеет определение содержания
желчных пигментов в крови, моче и кале.
Различают несколько видов желтух.
Гемолитическая желтуха
Возникает в результате усиленного гемолиза эритроцитов. Причины возникновения:
серповидноклеточная анемия, талассемии, стимулирующие гемолиз, переливания несовместимых групп крови и
т.д. В результате при распаде Нb образуется большое количество непрямого, токсичного билирубина, который в печени
не успевает конъюгироваться. Неконъюгированный билирубин не выделяется с мочой, так как он нерастворим в воде.
Для гемолитической желтухи характерны:
• гипербилирубинемия за счет неконъюгированного билирубина;
• увеличение содержания стеркобилина в кале и моче. В результате кал становится почти темного цвета, а моча
окрашивается в интенсивно оранжево-желтый цвет.
Желтуха новорожденных
Желтуха новорожденных (гемолитическая желтуха) считается физиологической. Она возникает вследствии:
•недостатка синтеза фермента конъюгации билирубина – УДФ – глюкуронилтрансферазы;
•недостаточного образования УДФ – глюкуроновой кислоты;
Это приводит к повышению в крови уровня неконъюгированного, токсичного билирубина.
Желтуха обычно проходит через 3-5 дней. У недоношенных детей - продолжается дольше. Длительное
повышение неконъюгированного билирубина может быть опасным, вследствие токсического действия билирубина на
развивающийся мозг (билирубиновая энцефалопатия). У взрослых клетки мозга малопроницаемы для билирубина и,
как правило, осложнений при гипербилирубинемии не происходит.
Обтурационная желтуха
Возникает в результате нарушения оттока желчи в кишечник.
Причины: закупорка или сдавление общего печеночного протока камнем или опухолью головки поджелудочной
железы, некоторые формы вирусного гепатита и др.
Обтурационная желтуха сопровождается высоким содержанием в крови конъюгированного билирубина,
вследствие того, что желчь не поступает в кишечник и билирубин всасывается из печени в кровь. Так как
конъюгированный билирубин – водорастворимое соединение, он в больших количествах выделяется с мочой. Из-за
этого моча имеет цвет пива с ярко-желтой пеной. Одновременно и в кале, и в моче снижается содержание
стеркобилина. Кал приобретает серовато-белый, глинистый цвет.
Паренхиматозная желтуха
Возникает вследствие повреждения паренхимы печени (инфекционный и токсический гепатиты, цирроз печени и
т.д.).
Повреждение гепатоцитов снижает захват ими неконъюгированного билирубина из крови и интенсивность
образования в них конъюгированного билирубина. Поэтому, не смотря на нормальный гемолиз, повышается (но не так
выражено, как при гемолитической желтухе) содержание неконъюгированного, а также конъюгированного билирубина
(застой желчи). В каловых массах и в моче снижается содержание стеркобилина. Кал слабо окрашен. В моче
появляется уробилин и небольшое содержание конъюгированного билирубина.
3. Лабораторно-практические работы.
3.1. Методика определения кальция в сыворотке крови.
ПРИНЦИП МЕТОДА: органические соединения-комплексоны взаимодействуют с кальцием. В качестве
комплексона используется трилон Б (ЭДТА-этилендиаминтетраацетат). Трилоном Б титруют ионы кальция,
предварительно связанные с мурексидом (индикатор). Комплекс кальций-мурексид имеет красно-оранжевый цвет.
ХОД РАБОТЫ: свободный от кальция мурексид окрашивается в сине-фиолетовый цвет.
1.Готовится раствор мурексида для всей группы: в колбу вносят 100мл воды и 0,8мл 36% р-ра NaOH,
перемешивают, затем добавляют смесь мурексида до появления ярко-фиолетовой окраски.
2.В широкую пробирку наливают 5мл р-ра мурексида и вносят 0,2мл исследуемой сыворотки (раствор розовеет),
титруют (без промедления) р-ром трилона Б до фиолетовой окраски.
РАСЧЕТ:
1мл 0,1 моль/л р-ра трилона Б эквивалентен 0,12 мг кальция
Х= х 0,12 х 100 мг%
 - количество мл трилона Б, пошедшего на титрование опытной пробы.
Коэффициент перерасчета: 0,2495 на ммоль/л
N = 2,25 – 2,64 ммоль/л
3.2. Методика определения концентрации гемоглобина в крови.
ПРИНЦИП МЕТОДА: Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная
соль) окисляется в метгемоглобин, образующий с ацетонциангидридом окрашенный гемиглобинцианид, поглощающий
свет при длине волны 540 (520-560) нм. Концентрация образовавшегося гемиглобинцианида пропорциональна
концентрации гемоглобина.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:
В пробирку вносят 5 мл трансформирующего раствора, затем добавляют 1 каплю крови и тщательно
перемешивают. Инкубируют при комнатной температуре (+18-+20) в течение 20 минут и затем фотометрируют при
длине волны 540 (520-560) нм.
Концентрация гемоглобина в пробе крови вычисляют по формуле:
Е________
С= Ек*Ск*251, где:
С – концентрация гемоглобина, г/л.
Е – оптическая плотность пробы;
Ек – оптическая плотность в калибровочном растворе гемиглобинцианида;
Ск –концентрация гемиглобинцианид в калибровочном растворе, г/л.
251 –коэффициент разведения пробы крови
Оптическая плотность калибровочного раствора гемиглобинцианида Ек=0,54
Ск = 0,602 г/л
Норма гемоглобина у мужчин равна 130-160 г/л , у женщин – 120-145 г/л