Вирусологическая диагностика ОРЗ в сезон 2003

ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ОРЗ В СЕЗОН
2003-2004ГГ в Г. ХАБАРОВСКЕ.
Л.В. Савосина, В.И. Резник, М.А. Перескокова.
Центр госсанэпиднадзора в Хабаровском крае.
С целью установления этиологической структуры ОРЗ
проводили комплексное вирусологическое обследование заболевших
для выделения вирусов гриппа, парагриппа, адено- и РС-вирусов. Для
изоляции вирусов гриппа использовали культуру ткани MDCK,
которую вели на среде с добавлением фетальной сыворотки (5%).
Проводили посев и всегда один пассаж материала. Наличие вирусов
гриппа определяли по гемагглютинации культуральной жидкости,
независимо от наличия ЦПД. Использовали эритроциты человека “0”
группы крови.
Идентификацию гемагглютинирующих агентов
проводили в РТГА с набором типоспецифических сывороток:
А/Н0N1/, A/H1N1/Новая Каледония/99, A/H3N2/Сидней/05/97,
A/H3N2/Панама/2007/99, B/91г., B/Гонконг/330/01.
Выделение вирусов парагриппа вели на культуре ткани МА-104
с последующей гемадсорбцией с эритроцитами “0” группы крови
человека.
Для выделения респираторно-синцитиальных и аденовирусов
использовали культуру клеток L-41 с последующим выявлением
вирусов в РСК со специфическими сыворотками РС и адено.
Этиология заболеваний гриппом и ОРЗ.
Этиологическая расшифровка ОРЗ в г. Хабаровске началась в
октябре 2003г в период начала эпидподъема заболеваемости. При
обследовании больных в 14,5% случаев был изолирован вирус
парагриппа, в 3,2% – аденовирус, в 6,4% случаев доказана
респираторно-синцитиальная
этиология
заболеваний.
Вирусологическая диагностика гриппа в данный период времени не
проводилась.
Первые вирусы гриппа за минувший сезон были выделены в
ноябре 2003г – 30 вирусов от детей и 3 штамма от взрослых. Общая
выделяемость в ноябре составила 20,2%. Это наивысший показатель
за весь эпидсезон. В декабре изолировано 92 штамма – 12,7%
выделяемости, в январе 2004г – 4 штамма – 2,2%, в феврале – 2
штамма – 2,2%. Всего в период с ноября 2003 по февраль 2004гг в г.
Хабаровске при вирусологическом обследовании 1132-х заболевших
1
подтвержден 131 случай заболевания гриппом.(11,3%). Все
изолированные штаммы при детальном типировании в лаборатории
НИИ Гриппа (Санкт-Петербург) отнесены к
разновидности
А/H3N2/Панама/2007/99 вариант А/H3N2/Фуцзянь/411/02.
Показатели общей выделяемости вирусов парагриппа в г.
Хабаровске в зависимости от периода вспышки варьировали от
10,4% в декабре 2003г до 31,2% в феврале 2004г, при средней
выделяемости 13,7%. При этом в начале эпидсезона наивысшие
показатели были в группе взрослых (20,0% против 12,4% у детей –
ноябрь; 19,5% против 8,1% у детей – декабрь), в январе соотношение
было обратным (8,1% против 19,5%), в феврале 2004г выделяемость
резко увеличилась и составила 21,6% у детей и 42,9% у взрослых.
Вирусологическое подтверждение аденовирусной этиологии
заболеваний было осуществлено в единичных случаях в течение
всего эпидсезона и составило 4,4% от общего числа обследованных, с
преобладанием у детского контингента.
По результатам вирусологической диагностики наибольший
удельный вес среди заболеваний ОРВИ негриппозной этиологии в
минувшем эпидсезоне в г. Хабаровске принадлежит респираторносинцитиальной инфекции – она подтверждена в 16,6% случаев. При
этом в начале вспышки заболеваемость была невысокой – 6,4%
изолятов в октябре 2003г. В ноябре-декабре продолжался рост
заболеваемости, и пик ее наступил в январе 2004г, когда показатель
общей выделяемости составил 26,5% от числа всех обследованных, с
преобладанием среди взрослого контингента (37,5% от числа
обследованных взрослых).
Кроме г. Хабаровска расшифровка этиологии гриппа и ОРВИ
проводилась в г. Комсомольске-на-Амуре, где также удалось
получить вирусологические доказательства гриппозной этиологии
заболеваний (таблица 2). В группе детей до 14 лет с диагнозами
«Грипп» и «ОРВИ» в 12,9% случаев были выделены вирусы гриппа
A/H3N2/. Среди обследованного взрослого контингента случаев
подтверждения гриппозной инфекции не было. Всего при
обследовании больных в г. Комсомольске было выделено 8 штаммов
вируса гриппа А/H3N2/, 2 – в декабре 2003г/(7,4% выделяемости), 4 –
в январе(8,7%), 2 – в феврале 2004г (33,3%).
При оценке динамики заболеваемости РС-вирусной инфекцией в
г. Комсомольске наибольшие показатели выделения приходились на
2
декабрь 2003 – январь 2004гг (18,5% и 19,6%). В феврале
выделяемость РС-вирусов снизилась. При этом наблюдалось
увеличение выделения вирусов парагриппа и аденовирусов.
Показатель общей выделяемости парагриппозных вирусов по г.
Комсомольску составил 5,1%, с наивысшим показателем в феврале –
16,7%.
У обследованных взрослых подтверждения гриппозной,
парагриппозной и РС-инфекции не выявлено. Аденовирусная
инфекция подтверждена в 10,8% случаев с преобладанием у детей –
12,1% против 6,25% у взрослых.
При сравнительной оценке данных по гг. Хабаровску и
Комсомольску общие показатели выделяемости вирусов гриппа
составляют 11,3% и 10,1% соответственно, РС-вирусов – 16,6% и
17,6% соответственно. При этом наибольший процент выделения
вирусов гриппа по г. Хабаровску пришелся на ноябрь-декабрь 2003г
(20,2% и 12,7%), по г. Комсомольску-на-Амуре – на февраль 2004г
(33,3%). Показатель общей выделяемости вирусов парагриппа по г.
Хабаровску в 2,5 раза превысил аналогичный по г. Комсомольску и
составил 13,7% против 5,1%. При этом в обоих городах наблюдался
рост выделяемости к концу эпидсезона.
Изучение антигенных связей вирусов гриппа, выделенных в c
2003-2004гг, с вирусами прошлых лет проводили по реакции
торможения гемагглютинации с набором специфических сывороток.
Для исследования антигенных свойств вирусов гриппа типа
А/H3N2/ (в количестве 54-х штаммов) в РТГА были использованы
специфические
сыворотки
А/H3N2/Сидней/5/97
и
А/H3N2/Панама/2007/99 (таблица 3). В результате выяснилось, что
вирусы 2004 года отошли от А/Сидней/97. Лишь 3,7% изученных
штаммов взаимодействовали с сывороткой А/Сидней/5/97 до полного
титра, а 9,3% – до 1/2 титра; 50,0% – до 1/4 титра, а 37,1% вирусов –
лишь до 1/8-1/16 титра.
В то же время с сывороткой А/Панама/2007/99 до полного титра
реагировали все изученные нами штаммы. Можно сделать вывод, что
исследованные изоляты гомогенны в отношении варианта
А/H3N2/Панама/2007/99, но несколько различны по отношению к
варианту А/H3N2/Сидней/5/97, причем только 3,7% из них
гомологичны указанному варианту полностью, то есть мы наблюдаем
3
постепенную эволюцию вируса от варианта А3/Сидней/5/97, что
видно по характеру эпидпроцесса минувшего сезона в г. Хабаровске.
Пять изолятов были направлены в НИИ Гриппа РАМН (г.
Санкт-Петербург) для контрольного исследования. Все они были
отнесены
к
разновидности
А/Панама/2007/99,
вариант
А/Фуцзянь/411/2002. Аналогичные результаты получены и в
отношении 13 штаммов, типированных в ГУ НИИ вирусологии им.
Д.И. Ивановского РАМН г. Москва.*
Часть изолятов (n=24), кроме того, была исследована с
сыворотками прошлых лет: А/Виктория/3/75 и А/Бангкок/1/79
(таблица 6). С вариантом А/Виктория/3/75 большинство штаммов
взаимодействовали только до 1/16-1/32 доли титра, с одним вирусом
торможения гемагглютинации не было вообще; с вариантом
А/Бангкок/1/79 до 1/32 титра взаимодействовали только 33,3%
изолятов, титр остальных с данной сывороткой в РТГА был равен 0.
Полученные данные показывают, что вирусы 2003-2004гг
практически
полностью
потеряли
антигенные
связи
с
вышеназванными вирусами.
Тот факт, что популяция изученных нами штаммов
неоднородна, доказывает и результат изучения их антигенных
свойств с сыворотками, одна из которых получена при иммунизации
петуха
вирусом
из
вспышки
этого
года
(A/Хабаровск/11183/04/H3N2/); вторая – сыворотка крови ребенка в
возрасте 1года 10мес., перенесшего грипп в декабре 2003г, c
сероконверсией только по отношению к антигену гриппа А/H3N2/. В
РТГА с сывороткой ребенка до полного титра реагировали 8,3%
штаммов, большинство – 79,2% – до 1/4-1/8 титра, ниже не
реагировал
ни
один
штамм.
С
сывороткой
A/Хабаровск/11183/04/H3N2/ 54,2% вирусов были гомологичны
полностью; 45,8% - до 1/2-1/4 титра.
Таким образом, эти материалы подтверждают данные о
продолжающемся постоянном антигенном дрейфе вирусов A/H3N2/.
* За проведенные исследования выражаем искреннюю благодарность
научному сотруднику НИИ Гриппа РАМН О.М. Литвиновой и
профессору ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН А.Н.
Слепушкину
4
Динамика заболеваемости гриппом и ОРВИ по результатам вирусологической диагностики в
эпидсезоне 2003-2004гг в г. Хабаровске.
Грипп А/H3N2/
Парагрипп
Аденовирусы
РС-вирусы
КолКолКолКолМЕСЯЦ
Возраст во
Пол. % во
Пол. % во
Пол. % во
Пол.
%
обсл.
обсл.
обсл.
обсл.
0-14 лет
0
0
0
62
9
14,5
62
2
3,2
62
4
6,4
ОКТЯБРЬ 15 лет
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
Всего
0
0
0
62
9
14,5
62
2
3,2
62
4
6,4
0-14 лет 153
30 19,6 153
19
12,4 153
6
3,9 153
16
10,5
НОЯБРЬ
10
3
30,0
10
2
20,0
10
0
0
10
4
40,0
15 лет
Всего
163
33 20,2 163
21
12,9 163
6
3,9 163
20
12,3
0-14 лет 620
81 13,1 529
47
8,9
543
30
5,5 551
90
16,3
106
11 10,4 106
19
17,9
93
2
2,1
93
13
14,0
15 лет
ДЕКАБРЬ
Всего
726
92 12,7 635
66
10,4 636
32
5,0 644 103 16,0
0-14 лет 141
4
2,8
123
24
19,5 121
4
3,3 122
34
27,9
ЯНВАРЬ 15 лет
40
0
0
37
3
8,1
39
1
2,5
40
9
22,5
Всего
181
4
2,2
160
27
16,9 160
5
3,1 162
43
26,5
0-14 лет
51
1
2,0
51
11
21,6
48
1
2,1
47
9
19,1
42
1
2,4
42
18
42,9
29
2
6,9
40
7
17,5
15 лет
ФЕВРАЛЬ
Всего
93
2
2,2
93
29
31,2
77
3
3,9
87
16
18,4
0-14 лет 965 116 12,0 918 110 12,0 927
43
4,6 935 153 16,4
ИТОГО 15 лет
198
15
7,6
195
42
21,5 171
5
2,9 183
33
18,0
Всего
1163 131 11,3 1113 152 13,7 1098 48
4,4 1118 186 16,6
5
Таблица 2.
Динамика заболеваемости гриппом и ОРВИ по результатам вирусологической диагностики в
эпидсезоне 2003-2004гг в г. Комсомольске-на-Амуре.
МЕСЯЦ
Возраст
0-14 лет
ДЕКАБРЬ 15 лет
Всего
0-14 лет
ЯНВАРЬ 15 лет
Всего
0-14 лет
15 лет
ФЕВРАЛЬ
Всего
0-14 лет
ИТОГО
15 лет
Всего
Грипп А/H3N2/
Кол
-во Пол. %
обсл
.
21
2
9,5
6
0
0
27
2
7,4
36
4
11,1
10
0
0
46
4
8,7
5
2
40,0
1
0
0
6
2
33,3
62
8
12,9
17
0
0
79
8
10,1
Парагрипп
Кол
-во Пол. %
обсл
.
21
0
0
6
0
0
27
0
0
36
3
8,3
10
0
0
46
3
6,5
5
1
20,0
1
0
0
6
1
16,7
62
4
6,5
17
0
0
79
4
5,1
Аденовирусы
Кол
-во Пол. %
обсл
.
18
3
16,7
6
0
0
24
3
12,5
35
2
5,7
9
1
11,1
37
3
8,1
5
2
40,0
1
0
0
6
2
33,3
58
7
12,1
16
1
6,25
74
8
10,8
РС-вирусы
Кол
-во Пол. %
обсл
.
21
5
23,8
6
0
0
27
5
18,5
36
9
25,0
10
0
0
46
9
19,6
5
0
0
1
0
0
6
0
0
62
14 22,6
17
0
0
79
14 17,7
6
Таблица 3.
Антигенные связи вирусов гриппа А/Хабаровск/…/04г./H3N2** с вирусами А3/Сидней/5/97 и
А3/Панама/2007/99.
Специфические
сыворотки.
А3/Сидней/5/97
Т=1/320
А3/Панама/2007/
99
Т=1/320
Разведение сывороток, до которого происходит торможение гемагглютинации с
вирусными антигенами.
1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
Абс.* %пол Абс.* %пол Абс.* %пол Абс.* %пол Абс.* %пол
1
1,9
19
35,2
27
50,0
5
9,3
2
3,7
0
0
0
0
0
0
0
0
54
100,0
**Число вирусов – 54
*Число штаммов, взаимодействующих с соответветствующей сывороткой до указанного до
указанного титра.
7
Сравнительная оценка антигенных связей вирусов гриппа
А/Хабаровск/…/04г./H3N2/ с вирусами прошлых лет в РТГА с
эритроцитами 0 группы крови человека.
Таблица 4.
Сыв.
Специфические сыворотки
специф. Сыворотка
Сыв.
Сыв.
Сыв.
Сыв.
Сыв. б-го с
А/Бангкок/ А/Викто- А/Сидней А/Панама А/H3N2/ монопри1/79
рия/3/75
/5/97
/2007/99
11183*
ростом
Вирусы
Т=1/320
Т=1/320
Т=1/320
Т=1/320 Т=1/320
Т=1/2048
1
11183
1/32
1/32
1/8
1
1
1/2
2
11184
0
1/32
1/8
1
1
1/2
3
11188
1/32
1/32
1/4
1
1
1/2
4
11191
1/32
1/32
1/4
1
1
1/2
5
11231
0
1/32
1/8
1
1
1/4
6
11240
0
1/32
1/8
1
1/2
1
7
11246
0
1/32
1/4
1
1/2
1/2
8
11301
0
1/16
---
---
1
1/2
9
11306
0
1/32
1/8
1
1
1/4
10
11313
1/32
1/16
1/8
1
1
1/2
11
11331
1/32
1/32
1/4
1
1/2
1/4
12
11333
1/32
1/32
1/16
1
1
1/4
13
11357
0
1/32
---
---
1/2
1/8
14
11358
0
1/32
1/4
1
1/2
1/2
15
11361
0
1/32
1/4
1
1/2
1/4
16
11364
0
1/32
1/4
1
1/2
1/4
17
11365
0
1/32
1/8
1
1
1
18
11577
0
1/32
1/4
1
1
1/2
19
11630
0
1/32
1/4
1
1/2
1/4
20
11634
0
1/16
1/8
1
1
1/2
21
11724
0
1/32
---
---
1/4
1/8
22
11741
1/32
0
1/4
1
1/2
1/4
23
11766
0
1/16
1/8
1
1/4
1/4
24
409
1/32
1/16
1/4
1
1
1/8
 - сыворотка к вирусу А/Хабаровск/11183/04/H3N2.
8
В таблице указаны доли титра
Этиология эпидемий гриппа в г. Хабаровске
1988 – 2003 гг.
Год
месяцы
1988. I-II
1988. III-IY
1989. I-III
1990. I-II
1991. I-II
1992. I
1993 I-II
1993 III-IV
1994 II-III
1995 I-II
1995 XII-96 I
1996 XI- XII
1997г III
1998г I-II
1998-99гг
XII-I
2000г 1кв.*
2001г
1 кв.*
2002г
1 кв.*
2003г 1 кв.**
2003г
XI-XII
всего
Переболело в %
взрос
лые
7-14
л.
12,7
7,2
11,2
10,5
13,9
6,5
6,8
6,5
4,1
5,9
5,7
6,8
2,0
6,5
3,2
5,2
5,9
6,6
3,5
3,4
2,3
2,0
3,1
3,7
4,4
1,1
25,9
11,1
22,0
15,1
31,0
11,1
13,4
12,8
8,7
13,2
8,3
14,7
3,8
49,7
34,1
44,3
40,0
55,9
26,7
27,2
36,0
15,5
21,4
16,5
16,2
9,5
36,9
31,4
41,3
38,8
49,3
22,9
24,2
25,3
13,5
24,9
20,7
20,9
8,8
4,8
2,4
14,0
19,0
17,7
5,8
3,6
12,8
19,4
23,8
7,7
5,2
16,7
22,8
24,6
A/Н1N1/
A/H3N2/
A/H3N2/+B
A/H3N2/
A/H3N2/+B
B
B+A/H3N2/
B+A/H3N2/
A/H3N2/
A/H3N2/
B
A/H1N1/+
A/H3N2/
A/H3N2/+
A/H1N1/
А/H3N2/+B
4,8
2,3
16,0
17,2
17,0
A/H1N1/
6,1
3,3
16,4
23,9
26,3
4,7
2,5
12,6
17,8
22,7
B+A/H1N1/+
+A/H3N2/
A/H3N2/+ B
3,7
1,7
10,1
16,2
21,6
A/H3N2/
этиология
3-6 л. 0-2 г.
A/Н3N2/
B
9
VIROLOGIC DIAGNOSTICS RESPIRATORY VIRUS INFECTIONS
DURING THE SEASON 2003-2004 IN KHABAROVSK.
L.V.Savosina, V.I.Reznik, M.A.Pereskokova.
The center of Gossanepidnadzor in Khabarovsk edge{territory}.
With the purpose of an ethyological structures Respiratory Virus
Infections (RVI) Center carried out complex inspection of viruses of a flu fallen
ill for influenza, parainfluenza, adeno-and Respiratory Syncytial Viruses.
Viruses of a influenza are isolated on culture cells MDCK and identify by
hemagglutination-inhibition testing, parainfluenza - on culture MA-104,
adenoviruses –on L-41.
Ethyological decoding (RVI) in Khabarovsk began in October 2003г
during the beginning outbreak deseases. At inspection of patients in 14,5 % of
cases the parainfluenza virus, in 3,2 % - adenoviruses has been isolated, in 6,4 %
of cases is proved RS-reason diseases.
The first viruses of a influenza for the past season have been allocated in
November 2003 - 30 viruses from children and 3 isolates from adults. General
isolation in November has made 20,2 %. It is the best parameter for all season.
In December it is isolated 92 isolates - 12.7 % isolation, in January 2004г - 4
isolates - 2,2 %, in February - 2 isolates - 2,2 %. In total during the period since
November 2003 till January 2004 in Khabarovsk at virologic inspection 1132
fallen ill 129 cases of diseases are confirmed with a flu (11,4 %). All isolates are
attributed to version А/H3N2/Panama/2007/99 variant А/H3N2/Fujian/411/02.
Parameters of the common isolation parainfluenza viruses depending on
the period of flash varied - from 10,4 % in December 2003г up to 31,2 % in
February 2004г at average isolation 13,7 %. In the beginning season the best
parameters were in group at adults (20,0 % against 12,4 % at children November; 19,5 % against 8,1 % at children - December), in January a
parity{ratio} were the opposite (8,1 % against 19,5 %), in February 2004г
isolation has sharply increased and has made 21,6 % at children and 42,9 % at
adults.
Virologic confirmation Adenoviruses cases diseases has been carried out
in single instances during all season and has made 4,4 % from the common
number surveyed, with prevalence among a children's contingent.
The greatest densities among diseases RVI in past outbreak belonged
Respiratory Syncytial Viruses infection - in 16,6 % of cases. Thus in the
beginning of flash desease was low - 6,4 % isolates in October 2003г. In
November - December growth of РС-disease is revealed, and the peak of it has
come in January 2004г when common isolation has made 26,5 % from number
of all surveyed, with small prevalence among a children's contingent (27,9 % at
children against 22,5 % at adults).
In 5,1 % of cases at children the virus mixt-infection - always in a
combination only two any viruses is established. At adults this parameter has
made 3,5 %.
10
11