Суншева Альбина Ануарбиевна - Московский государственный
advertisement
На правах рукописи СУНШЕВА Альбина Ануарбиевна АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФНЫХ ГЕНОВ, КОДИРУЮЩИХ ФЕРМЕНТЫ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЙ ЗАЩИТЫ, У ЖЕНЩИН С КЛИМАКТЕРИЧЕСКИМ СИНДРОМОМ 14.00.01 – акушерство и гинекология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук МОСКВА 2008 2 Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Росздрава» Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Стрижова Нина Владимировна доктор биологических наук, профессор, Носиков Валерий Вячеславович Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Кирющенков Александр Прокопьевич ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава доктор медицинских наук, профессор Акуленко Лариса Вениаминовна ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава Ведущее учреждение: Московский областной научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии (МОНИИАГ) Защита состоится «___»__________________2008г. на заседании диссертационного совета _____________________ Д 208.041.06. ГОУ ВПО «Московского Государственного медико-стоматологического университета Росздрава» (127006 Москва, ул. Долглрукова,4). Почтовый адрес: 127473 Москва, ул. Делегатская, д.20/1 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского Государственного медико-стоматологического университета (125206, Москва, ул. Вучетича, д.10А). Автореферат диссертации разослан «____»______________________2008г. Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор М.М. Умаханова 3 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ Важнейшим стратегическим направлением политики государства является профилактика, сохранение и укрепление здоровья населения, возрастная структура которого стабильно смещается в сторону постарения, причем среди пожилых людей преобладают женщины. Центральным звеном в процессе старения женщин является прекращение менструальной, а затем и репродуктивной функции. Здоровье женщины в период постменапаузы имеет важную социальную и медицинскую значимость, как в отдельных странах, так и во всем мире. Особенностью климактерического периода является то, что наряду с выключением репродуктивной функции и нарастанием дефицита эстрогенов, развиваются возрастные и, нередко, патологические изменения в органах, и тканях, возникают и проявляются многие заболевания. С наступлением менопаузы связывают целый ряд заболеваний. В частности общепризнанными последствиями менопаузы являются сердечнососудистые заболевания, остеопороз, метаболические нарушения, тромбофилия, доброкачественные и злокачественные опухоли, психозы, болезнь Альцгеймера и ряд других заболеваний. Развитие молекулярной биологии, изучение генетических факторов участвующих в процессах старения, дает основание рассматривать старение, как итог воздействия различных генетических факторов, проявляющихся под воздействием вредных влияний окружающей среды, поведенческих, психоэмоциональных и экономических условий (Биркхаузер, 2004). Процессы старения организма связывает с нарастанием молекулярных повреждений, вызванных свободными радикалами и снижением функций защитных механизмов. В настоящее время проведено большое число экспериментальных исследований, подтверждающих свободнорадикальную теорию старения, выдвинутую Хартманом в 1956 году. 4 Образование свободных радикалов - один из ведущих патогенетических факторов в развитии многих заболеваний пожилых людей (Schul, 1955). В научной литературе обсуждается роль окислительного стресса в развитии нейродегеративных заболеваний, болезни Паркинсона и Альцгеймера (Ерин А.Н., с соавт., 1955, Coyle et al., 1993). Усиление интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ) у женщин в постменопаузальном периоде показано в исследованиях Крыжановской И.О. (2000) и Стрижовой Н.В. с соавт.(2005). Исследование, проведенное Абусуевой З.А. (2006) показало, что развитие климактерического синдрома происходит на фоне усиления интенсивности перекисного окисления липидов, которое взаимосвязано со степенью его тяжести. На снижение антиокислительной активности у женщин с патологическим течением климактерического периода указывает и исследование А.А. Галкина (2000 год). Развитие окислительного стресса у людей, по всей видимости, связано с изменением соотношения между антиокислительными системами в организме, и виновником этого являются митохондрии, участвующие в энергетическом обеспечении клеток, но по совместительству продуцирующие основное количество свободных радикалов (А.Я. Анисимов, 2000; В.А. Вилков с соавт., 1997; А.Н. Подколзин с соавт., 2001). В литературе имеются данные о существенном снижении в сыворотке крови пожилых и стареющих людей уровня глутатиона и повышении продуктов ПОЛ (Nozaki M. et al., 1992; П.К. Анохин, 1962; В.Н. Анисимов с соавт., 1999). При старении наблюдается альтерация в системе антиоксидантных ферментов, что дает основания рассматривать старение как хронический стресс. Менопауза у женщин не всегда протекает тяжело, ухудшая качество жизни. Это дает основание предполагать, что осложненное течение климактерия и, в частности, развитие окислительного стресса, который, 5 безусловно, ухудшает состояние женщины, может быть генетически детерминировано. В связи с этим, представляется перспективным исследование ассоциации генов, кодирующих ферменты антиокислительной защиты у женщин с климактерическим синдромом, что может способствовать прогнозированию осложненного течения климактерия. ЦЕЛЬЮ ИССЛЕДОВАНИЯ был поиск ассоциации полиморфных маркеров генов, кодирующих ферменты антиокислительной защиты у женщин с климактерическим синдромом. ЗАДАЧАМИ ИССЛЕДОВАНИЯ были: 1. Изучение интенсивности перекисного окисления липидов, по его вторичному продукту малоновому диальдегиду, у женщин с климактерическим синдромом. 2. Исследование взаимосвязи клинических проявлений климактерического синдрома с генотипами полиморфных маркеров C1167T гена каталазы (CAT), Ala(-9)Val гена митохондриальной супероксиддисмутазы (SOD2) и гена внеклеточной супероксиддисмутазы Arg213Gly гена (SOD3). 3. Изучение взаимосвязи между интенсивностью перекисного окисления липидов и генотипами полиморфных маркеров C1167T гена каталазы (CAT), Ala(-9)Val гена митохондриальной супероксиддисмутазы (SOD2) и гена внеклеточной супероксиддисмутазы Arg213Gly гена (SOD3) у женщин с климактерическим синдромом. 4. Исследование прогностической значимости развития климактерического синдрома, в зависимости от генотипов полиморфных маркеров C1167T гена CAT, Ala(-9)Val гена SOD2 и Arg213Gly гена SOD3. ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ: 1. В патогенезе развития климактерического синдрома важная роль принадлежит развитию окислительного стресса. Включение антиоксидантов в схему лечения и профилактики климактерических расстройств является патогенетически обоснованным. 6 2. Окислительный стресс может быть генетически детерминирован, и его развитие ассоциируется с носительством полиморфных маркеров гена каталазы (CAT) и гена супероксиддисмутазы (SOD2). НАУЧНАЯ НОВИЗНА: Впервые изучена и доказана ассоциативная связь полиморфных генов кандидатов, кодирующих ферменты антиокислительной защиты, с климактерическим синдромом. Определена взаимосвязь интенсивности ПОЛ с генотипами полиморфных маркеров генов каталазы CAT, и митохондриальной супероксиддисмутазы (SOD2). Выявлена достоверная ассоциативная взаимосвязь аллелей T и Val полиморфных маркеров генов каталазы CAT, супероксиддисмутазы SOD2 с развитием окислительного стресса и климактерического синдрома. Показано развитие окислительного стресса у женщин с КС, который ассоциируется с носительством генотипов TT гена каталазы CAT, Val/Val гена супероксиддисмутазы SOD2. Не выявлена вовлеченность маркера гена SOD3 в развитие окислительного стресса и климактерического синдрома. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ заключается в том, что результаты исследования показали патогенетически обоснованную целесообразность использования антиоксидантов для лечения климактерических расстройств. и профилактики тяжелых Определена возможность прогнозирования развития окислительного стресса, утяжеляющего течение климактерического синдрома, посредством определения полиморфных маркеров генов каталазы CAT и супероксиддисмутазы SOD2 у женщин в пременопаузальном периоде и своевременно рекомендовать включение антиоксидантов в комплекс лечебных мероприятий, направленных на коррекцию нарушений пероксидации липидов. ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ: На основании результатов проведенных исследований даны рекомендации и внедрены в практическую работу клинических баз кафедры 7 акушерства и гинекологии лечебного факультета с курсом акушерства и гинекологии вечернего отделения ГОУ ВПО Российского государственного медицинского университета – гинекологического отделения ГКБ № 4 и гинекологического отделения родильного дома № 3 ЗАО г. Москвы. Основные положения работы и рекомендации включены в семинары и лекции для аспирантов и клинических ординаторов. АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ: Состоялась на объединенной научно-практической конференции сотрудников кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета с курсом акушерства и гинекологии вечернего отделения ГОУ ВПО РГМУ и сотрудников родильного дома № 3 ЗАО г. Москвы 3 апреля 2006 г. ПУБЛИКАЦИИ: По теме диссертации опубликовано 4 научные статьи, отражающие её основное содержание. СТРУКТУРА И ОБЬЕМ РАБОТЫ: Диссертация состоит из введения; обзора литературы, материалов и методов исследования, описания результатов, полученных в ходе выполнения работы и их обсуждению; а так же из выводов; практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 101 листах машинописного текста, содержит 16 таблиц и 9 рисунков. Библиографический указатель включает 223 источников, из них 79 – на русском и 144 - на иностранных языках. Диссертация выполнена на кафедре акушерства и гинекологии лечебного факультета с курсом акушерства и гинекологии вечернего отделения ГОУ ВПО РГМУ. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Во введении обоснована актуальность работы, сформулированы цели и задачи исследования, представлены основные положения, выносимые на защиту, сведения об апробации и реализации полученных результатов. В главе I «Обзор литературы» представление о климактерическом синдроме. охарактеризовано современное 8 В главе II «Материалы и методы исследования» приведено описание использованных в работе методик и дана характеристика материалов исследования. Материалы исследования В исследовании приняли участие 253 пациентки в возрасте от 48 до 61 года. Из них 80 – с климактерическим синдромом и 173 без проявлений климактерического синдрома. Длительность клинических проявлений колебалась от 1 года до 12 лет. Из перенесенных соматических заболеваний следует отметить высокую частоту инфекционных заболеваний, артериальную гипертензию, ожирения. Частота перенесенных соматических заболеваний представлена на рисунке 1. Рис.1 Перенесенные соматические заболевания Заболевания щитовидной железы 3,7% 15,0% Инфаркт миокарда и ИБС 36,2% Гипертоническая болезнь Инфекционные заболевания Желудочно-кишечные заболевания 57,5% 7,5% 47,5% Ожирение 21,2% n=80 Варикозная болезнь Из гинекологических заболеваний наиболее частыми были воспалительные заболевания – 33,7%, бесплодие первичное и вторичное – 38,7%. Операции на придатках в анамнезе отмечены у 21,2% женщин, переломы 22,5%. Основные жалобы пациенток на момент обследования представлены на рисунке 2. 9 Рисунок 2. Основные жалобы на момент проведения исследования. 17,50% Недерж ание мочи 22,50% ССЗ 38,70% Депрессивное состояние 53,70% Беспокойство 63,70% Сниж ение либидо 83,70% Тахикардия 86,20% Остеопороз 86,20% Нарушение сна Приливы ж ара 97,50% Никтурия 100% Наиболее частым проявлением КС был нейровегетативный симптомокомплекс – у 100% женщин, в тяжелой степени – в 63 наблюдениях, метаболический симптомокомплекс у 74%, тяжелая форма у 5 женщин, и у 73 женщин отмечены психоэмоциональные симптомы, т.е. у 91,3%, причем у 37 женщин в тяжелой степени. Рисунок 3. Характер и частота заболеваний перенесенных матерями обследованных женщин Заболевания щитовидной железы 8,7% 21,2%% Сахарный диабет II типа 46,2% Гипертоническая болезнь Климактерические расстройства тромбоэмболии 60% 6,2% Сердечно-сосудистые заболевания 53,7% 23,7% Варикозная болезнь 10 При анализе семейного анамнеза были получены следующие данные: сердечно-сосудистыми заболеваниями страдали 53,7% матерей, сахарным диабетом II типа – 21,2%, тромбоэмболии перенесли 5 женщин с КС (6,2%), варикозная болезнь была выявлена у 23,7%, климактерическими расстройствами страдали 60% женщин, матерей обследованных пациенток. Методы исследования, использованные в работе. Общеклиническое обследование включало тщательное изучение анамнеза пациенток с обращением внимания на выявление наследственной предрасположенности. Помимо клинического анализа крови и общего анализа мочи проводилось ультразвуковое исследование органов малого таза. Степень тяжести климактерического синдрома оценивалась по менопаузальному индексу в баллах, предложенному Куперманом в 1959 году, в модификации В.М. Вихляевой и М.И. Уваровой (1998). Изучение генетической предрасположенности к развитию окислительного стресса исследовали ассоциацию полиморфных маркеров (аллеля и генотипа) генов, кодирующих антиокислительную защиту. Под ассоциацией понимали достоверно различающуюся частоту встречаемости исследуемых полиморфных маркеров у женщин основной и контрольной групп. Выделение геномной ДНК человека проводилось методом фенол/хлороформной эстракции. Амплификация ДНК – методом ПЦР на ампфлификаторе РМС-2 («Techne», Великобритания) или «Терцик» (“ДНК Технология”, г. Москва). Интенсивность перекисного окисления липидов по его вторичному продукту, малоновому диальдегиду, определяли по методу Yashinara в модификации И.С. Гончарова и А.М. Латинова (1985). Статистический анализ количественных переменных (параметров) заключался в сравнительном анализе средних показателей с помощью однофакторного дисперсионного анализа (или анализа вариаций, ANOVA), то 11 есть для каждой группы пациентов определялись групповые средние и дисперсия (вариация). Показателем, по которому определялась достоверность различий, являлся критерий F (Фишера) с поправкой Бонферрони. Относительный риск (OR) с помощью программы Calculator for confidence intervals of odds ratio (David Hutchon), а также ANOVA (Analysis of variance) – анализ отклонений, вариаций. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Поиск ассоциации полиморфных маркеров генов, кодирующих ферменты антиокислительной защиты, проводили, исследуя полиморфные маркеры C1167T гена каталазы супероксиддисмутазы (CAT), (SOD2) Ala(-9)Val и гена Arg213Gly митохондриальной гена внеклеточной супероксиддисмутазы (SOD3). При изучении распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера гена каталазы CAT полученные данные, представленны в таблице 1. Таблица 1 Частота аллелей и генотипов полиморфного маркера C1167T гена каталазы CAT у женщин с климактерическим синдромом (КС+) и группе сравнения Частота аллелей и Генетический генотипов P OR 95%CI маркер «КС+» «КС–» n = 80 n = 170 Аллель C 0,550 0,754 <0,01 0,40 0,27-0,59 Аллель T 0,450 0,246 <0,01 2,51 1,69-3,73 Генотип C/C 0,380 0,555 0,04 0,51 0,30-0,87 Генотип C/T 0,325 0,399 0,805 0,73 0,42-1,27 Генотип T/T 0,288 0,046 <0,01 8,32 3,53-19,65 Из данных представленных в таблице можно заключить, что носители полиморфного аллеля T и пациентки, относящиеся к гомозиготному генотипу TT полиморфного гена каталазы CAT, имеют высокий риск развития 12 окислительного стресса у пациенток с климактерическим синдромом (OR = 8,32). Мутация в гене каталазы характеризуется низким содержанием эритроцитарной каталазы (Wen et al., 1990). Введение каталазы с использованием других антиоксидантов типа маннитола, витамина Е и др. в значительной мере ослабляет окислительный стресс (Юсупова, 1985, Sagethal et al., 1998). Генотип TT по данным Yiang et al. (2001) связан с артериальной гипертензией и диабетической микроангиопатией. Взаимосвязь развития окислительного стресса у женщин с климактерическими расстройствами при носительстве полиморфного аллеля T выявляется и при анализе интенсивности перекисного окисления липидов, что отображено в таблице 2. Таблица 2 Концентрации МДА в группах с различными генотипами полиморфного маркера С116СТ гена каталазы (CAT) МДА* Уровень мкмоль/л, Генотипы n = 80 значимости n = 170 p 32 7,25 ± 3,69 CC 0,02 27 8,5 ± 3,62 TC 21 10,25 ± 6,18 TT *- Среднее ± стандартное отклонение. Тест ANOVA Концентрации малонового диальдегида были выше у носителей аллеля T достоверно различались с носителями аллеля С, а наибольшие его концентрации, были у носителей гомозиготного генотипа ТТ. Следует отметить, что независимо от имеющейся разницы в концентрации МДА у носителей аллеля T или C, у носительниц аллеля С концентрация МДА была выше нормативных показателей. Это можно объяснить тем, что в контрольной группе были пациентки пожилого возраста – до 60 лет, с различными соматическими заболеваниями, которые сами по себе могут сопровождаться развитием окислительного стресса. Усиление перекисного окисления липидов у женщин в постменопаузальном периоде жизни свидетельствуют о том, что они 13 находятся в состоянии хронического окислительного стресса, что необходимо учитывать при терапии этого контингента пациенток. Более высокие концентрации МДА у женщин с климактерическими расстройствами можно объяснить наличием симптомокомплексов с тяжелыми степенями проявлений КС, которые усиливают проявление окислительных процессов. Исследуя распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Ala(-9)Val гена супероксиддисмутазы SOD2 мы получили следующие данные (табл.3). Таблица 3 Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Ala(-9)Val гена SOD2 в группе женщин с климактерическим синдромом (КС+) и группе контроля (КС–) Частота аллелей и генотипов Генетический P OR маркер «КС+» «КС–» n=80 n=170 Аллель Ala 0,468 0,588 0,01 0,62 Аллель Val 0,532 0,413 0,01 1,62 Генотип Ala/Ala 0,197 0,413 0,03 0,93 Генотип Ala/Val 0,543 0,525 0,888 1,97 Генотип Val/Val 0,260 0,150 0,04 0,50 Легко видеть, что в группе пациентов с климактерическим синдромом частота аллеля Ala существенно ниже, чем в контрольной группе женщин. В то же время полиморфная аллель Val статистически чаще встречается среди пациентов основной группы и относительный риск развития окислительного стресса у носителей полиморфного аллеля Val составил 1,62, а у носителей генотипа Val/Val - 1,97. Эти данные позволяют считать, что носители аллеля Val и генотипа Val/Val имеют повышенный риск развития окислительного стресса и тяжелого течения климактерических расстройств. 14 Следовательно, вовлеченность полиморфного маркера Ala(-9)Val гена SOD2 в развитие окислительного стресса у женщин с климактерическим синдромом не вызывает сомнений. Полученные нами данные согласуются с исследованиями SchimodaMatsubayshi (1996), в которых высказывается предположение, что носители аллеля Val обладают менее эффективной системой инактивации супероксидных радикалов в митохондриях. В результате замены остатка Ala на остаток Val происходит изменение конформации лидерной последовательности белка с αспиральной на β-слоистую, начиная с 16 позиции. Результатом такой замены является нарушение в отдельных стадиях сложного механизма доставки фермента к митохондриям, создается дефицит фермента внутри митохондрий и, как следствие этого, снижение уровня активного белка в митохондриях (Rosenblum Y.S. et al., 1996). В задачу нашего исследования входило определение взаимосвязи тяжести клинических проявлений климактерического синдрома с генотипами полиморфного маркера Arg213Gly гена внеклеточной супероксиддисмутазы SOD3. Внеклеточная супероксиддисмутаза SOD3 содержит однонуклеотидный полиморфизм (C760G), которому соответствует аминокислотный полиморфизм Arg213Gly, расположенный в домене, связывающем сульфат гепарана. Исследуя распределение аллелей и генотипов данного полиморфного гена у женщин основной (КС+) и контрольной (КС-) групп, мы получили распределение частот встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера Arg213Gly гена SOD3 в группе женщин с климактерическим синдромом (КС+) и группе контроля, которые отображены в таблице 4. 15 Таблица 4. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Arg213Gly гена SOD3 в группе женщин с климактерическим синдромом (КС+) и группе контроля Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов P OR Аллель Arg «КС+ » n = 80 87/0,544 «К - » n = 170 182/0,526 0,773 1,07 0,74-1,56 Аллель Gly 73/0,456 164/0,474 0,773 0,93 0,64-1,36 Генотип Arg/Arg 32/0,400 63/0,364 0,580 1,16 0,68-2,01 Генотип Arg/Gly 23/0,288 56/0,324 0,661 0,84 0,47-1,51 Генотип Gly/Gly 25/0,313 54/0,312 1 1,00 0,57-1,77 При исследовании частоты значение распределения аллелей 95%CI и генотипов полиморфного маркера Arg213Gly гена внеклеточной супероксиддисмутазы (SOD3) между исследуемыми группами, нами определено, что их различия статистически не достоверны. Частота генотипов Arg/Arg, Arg/Gly, Gly/Gly в основной группе превышает частоту этих генотипов в контрольной группе (р>0,05) (OR = 0,84). Представленные данные свидетельствуют об отсутствии вовлеченности гена супероксиддисмутазы SOD3 в развитие окислительного стресса у женщин с КС. Полученные нами данные концентраций малонового диальдегида и их взаимосвязи с генотипа полиморфных генов супероксиддисмутазы SOD2 и супероксиддисмутазы SOD3 представлены в таблице 5. В таблице показаны статистически различимые групповые средние значения концентраций малонового диальдегида в зависимости от генотипов исследованных генов. Наибольшие концентрации МДА определялись у носителей генотипов Val/Val гена супероксиддисмутазы SOD2. Достоверных различий между группами генотипов полиморфного маркера Arg213Gly гена SOD3 мы не получили (p=0,28). 16 Таблица 5 Интенсивность перекисного окисления липидов у женщин с разными генотипами полиморфных маркеров Ala(-9)Val гена SOD2 и Arg213Gly гена SOD3 Количество в МДА* Уровень мкмоль/л Генотип группе, значимости p n = 80 26 7,25 ± 3,78 Ala/Ala Ala/Val 31 7,85 ± 3,10 Val/Val 23 11,83 ± 6,90 Arg/Arg 24 8,02 ± 3,99 Arg/Gly 32 8,37 ± 4,93 Gly/Gly 24 10,62 ± 6,08 0,02 0,28 *- Среднее ± стандартное отклонение. Тест ANOVA В задачу исследования входила оценка взаимосвязи тяжести климактерического синдрома с генотипами полиморфных маркеров изучаемых генов каталазы CAT, супероксиддисмутазы SOD2, супероксиддисмутазы SOD3. Для сравнения были взяты две группы женщин: 53 пациентки с тяжелой степенью КС и 27 – с легкой КЛ (табл. 6). Таблица 6 Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера С116СТ гена каталазы (CAT) у женщин с тяжелой (КТ) и легкой (КЛ) формами климактерического синдрома КТ КЛ Аллели и генотипы n = 53 n = 27 Аллель C 23 – 43,4% 21 – 77,7% Аллель T 30 – 56,6% 6 – 22,2% Генотип CC 19 – 35,8% 18 – 66% Генотип CT 8 – 15% 9 – 33,3% Генотип TT 26 – 49% --- КТ – тяжелая форма КС, КЛ – легкая форма КС 17 Так же, как максимальное усиление перекисного окисления липидов ассоциировалось взаимосвязью с аллелем T и генотипом TT, так и частота встречаемости гомозиготного генотипа TT в наблюдениях с тяжелой степенью КС была выше относительно генотипа СС. Следует отметить, что из 30 женщин-носительниц аллеля T, у 14 основным проявлением КС был психоэмоциональный симптомокомплекс, у 11 – нейровегетативные расстройства, у 5 – метаболические, причем у 3-х из них сахарный диабет I типа, и все они относились к гомозиготному типу TT. В 11 наблюдениях женщины с проявлениями психоэмоционального симптомокомплекса страдали депрессивными расстройствами, из них с гомозиготным генотипом ТТ. были взаимосвязаны 5 наблюдений. Исследование взаимосвязи между тяжестью проявлений КС у женщин и полиморфным маркером Ala(-90)Val гена супероксиддисмутазы SOD2, представлена в таблице 7. Таблица 7 Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера Ala(-9)Val гена супероксиддисмутазы SOD2 с тяжелой (КТ) и легкой (КЛ) формами климактерического синдрома КТ КЛ Аллели и генотипы n = 53 n = 27 Аллель Ala 21 – 40% 19 – 70,3% Аллель Val 32 – 60% 8 – 29,6% Генотип Ala/ Ala 17 – 32% 15 – 59% Генотип Ala/ Val 8 – 15% 8 – 29,6% Генотип Val/ Val 28 – 53% 4 – 14,8% КТ – тяжелая форма КС; КЛ – легкая форма КС. Среди женщин с тяжелой степенью КС преобладали носительницы полиморфного аллеля Val гена супероксиддисмутазы SOD2 и носители генотипа Val/Val. Следует отметить, что в отличие от женщин носительниц полиморфного аллеля T гена каталазы CAT, у преобладающего большинства женщин 18 с гомозиготным генотипом Val/Val супероксиддисмутазы SOD2, полиморфного маркера Ala(-9)Val гена проявлением КС был нейровегетативный симптомокомплекс. У 12 женщин отмечалась гипертоническая болезнь, у 2-х в анамнезе микроинфаркт, ишемия миокарда. Японские ученые показали в своих исследованиях, что аллель Val ассоциируется с фактором риска развития идиопатической кардиомиопатии и окислительного стресса (Hirois et al., 1999, Wang X.S., 1998). В своем исследовании (данные таблицы 5) мы показали, что наиболее выраженное усиление ПОЛ оказывается у пациентов, имеющих гомозиготный генотип Val/Val. Такая замена остатка Ala на Val приводит к нарушению отдельных стадий сложного механизма доставки фермента в митохондрии, к его относительному дефициту в митохондриях и как следствие этого приводит к снижению уровня активности SOD2 внутри митохондрий. Наши данные позволяют говорить об ассоциативной взаимосвязи полиморфного аллеля Val с развитием КС. Таблица 8 Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера Arg213Gly гена супероксиддисмутазы SOD3 с тяжелой (КТ) и легкой (КЛ) формами климактерического синдрома КТ КЛ Аллели и генотипы n=53 n=27 Аллель Arg 35 – 66,0% 15 – 55,5% Аллель Gly 18 – 34% 12 – 44,4% Генотип Arg/Arg 28 – 52% 14 – 51,8% Генотип Arg/Gly 7 – 13,2% 6 – 22,2% Генотип Gly/Gly 18 – 34% 9 – 17% КТ – тяжелая форма КС; КЛ – легкая форма КС Данные исследования взаимосвязи тяжести климактерических расстройств тяжелой и легкой форм у женщин с носительством различных 19 аллелей и генотипов полиморфного маркера Arg213Gly гена супероксиддисмутазы SOD3 представлены в таблице 8. Мы не получили достоверного подтверждения, что полиморфный маркер Arg213Gly гена супероксиддисмутазы SOD3 обуславливает развитие тяжелых форм климактерического синдрома. Рисунок 3. Взаимосвязь генотипов полиморфного маркера Arg213Gly гена SOD3 c формами КС Распределение частоты генотипов в группе женщин с климактерическим синдромом тяжелой формы n=53 34,00% 52,00% 13,00% Arg/Arg Arg/Gly Gly/Gly 17,00% 22,20% 51,80% Распределение частоты генотипов в группе женщин с климактерическим синдромом легкой формы n=27 Следует отметить, что количество пациенток с КС, у которых окислительный стресс достоверно взаимосвязан с полиморфными генами, кодирующими ферменты антиокислительной защиты, составляет по аллелю T 20 гена каталазы CAT – 45%, по аллели Val гена супероксиддисмутазы SOD2 – 52,3% и Arg гена супероксиддисмутазы SOD3 – 33,7%. Рисунок 4. Частота встречаемости полиморфных аллелей генов САТ, SOD2 и SOD3 у женщин с климактерическим синдромом 33,70% Частота аллеля полиморфного маркера гена SOD3- Arg 52,30% Частота аллеля полиморфного маркера гена SOD2 -Val 45,00% Частота аллеля полиморфного маркера гена САТ- Т Поскольку выше было сказано, что у 60% обследованных нами пациенток основной группы матери страдали климактерическим синдромом, согласуется и частота генетической детерминированности развития КС и окислительного стресса у женщин, бывших под нашим наблюдением. Данный фактор имеет научное и практическое значение, поскольку из него вытекает вывод о том, что при семейной отягощенности развития КС, обследование и терапия с климактерическими расстройствами должна предусматривать возможность генетической детерминированности и включение антиоксидантов в лечебнопрофилактические составили схемы. Следует также отметить, что группу сравнения 173 женщины постменопаузального периода, сопоставимые по возрасту с женщинами основной исследуемой группой. И у женщин данной контрольной группы также определялось усиление интенсивности перекисного окисления липидов, по вторичному молекулярному продукту МДА. Это говорит о том, что данный процесс характерен для лиц пожилого возраста, согласно теории старения Хартмана, поэтому всем женщинам с 21 заболеваниями, ассоциированными с менопаузой необходимо при лечении использование антиоксидантов. Таким образом, можно говорить о том, что в патогенезе развития КС важным фактором является развитие окислительного стресса. Носители полиморфных аллелей генов cупероксиддисмутазы SOD2 и каталазы CAT, определяющие повышенную активность Mn-SOD (аллель Ala) в митохондриях и аллеля С гена каталазы САТ, лучше защищены от прогнозируемого развития КС, чем носители аллелей Val cупероксиддисмутазы гена SOD2 и аллелей T гена каталазы CAT и достоверно взаимосвязаны с повышенной интенсивностью перекисного окисления липидов. ВЫВОДЫ 1. Поиск ассоциации полиморфных генов, кодирующих антиокислительную защиту у женщин, выявил участие полиморфных генов C1167T каталазы (CAT), Ala(-9)Val гена супероксиддисмутазы (SOD2) в развитии обнаружена климактерического синдрома. В исследовании не достоверная вовлеченность полиморфного маркера Arg213Gly супероксиддисмутазы SOD3 в развитии окислительного стресса и климактерическими расстройствами. 2. В патогенезе климактерического синдрома важная роль принадлежит развитию окислительного стресса. 3. Развитие окислительного стресса ассоциируется с носительством гомозиготных генотипов T/T гена каталазы (CAT), Val/Val гена Ala(-9)Val гена супероксиддисмутазы SOD2, у носителей, которых определялось достоверное усиление перекисного окисления липидов. 4. Имеется зависимость тяжести течения климактерического синдрома от генотипов полиморфных генов C1167T каталазы (CAT) и Ala(-9)Val гена супероксиддисмутазы (SOD2). Среди женщин с тяжелым течением 22 климактерического синдрома преобладали носители гомозиготных генотипов T/T, Val/Val . 5. У гомозиготных генотипов аллеля T гена CAT основным проявлением КС был психоэмоциональный симптомокомплекс. У гомозиготных генотипов Val/Val гена SOD2 преобладающим симтомокомплексом КС был нейровегетативный. 6. Определение полиморфных маркеров генов C1167T каталазы (CAT) и Ala(-9)Val гена антиокислительную прогнозирования супероксиддисмутазы (SOD2), кодирующих защиту, может быть использовано с окислительного стресса и тяжелого целью течения климактерических расстройств. 7. В схему лечения женщин с климактерическими расстройствами и прогнозируемым развитием патологического течения климактерия следует включать прием антиоксидантов. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Женщины, матери которых страдали климактерическими расстройствами, составляют группу риска по развитию КС. 2. В пременопаузальном периоде женщинам, составляющим группу риска по развитию климактерического синдрома целесообразно исследование полиморфных маркеров генов, кодирующих антиокислительную защиту генов каталазы CAT, митохондриальной супероксиддисмутазы SOD2. 3. В пременопаузальном периоде следует рекомендовать пациенткам использование антиоксидантов с целью предупреждения окислительного стресса (витамин Е, аскорбиновая кислота). и лечения 23 СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Суншева А.А., Стрижова Н.В., Носиков В.В., Коробейников А.П. Ассоциация полиморфных маркеров генов, кодирующих ферменты антиокислительной защиты, с климактерическим синдромом и прогнозом развития // Сборник н трудов XX Международного конгресса: Современные технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний. Москва. 4-7.06.07.г. С. 581-582. 2. Суншева А.А., Стрижова Н.В., Носиков В.В., Коробейников А.П. Полиморфные маркеры антиокислительной генов, защиты, кодирующие ассоциативная ферменты взаимосвязь с климактерическим синдромом и его прогнозом развития // Вестник Российского Государственного медицинского университета. – Москва, 2007.- №5 (58). – С. 38-43. 3. Суншева А.А., Стрижова Н.В., Носиков В.В., Коробейников А.П. Поиск ассоциации полиморфных маркеров генов, кодирующих ферменты антиокислительной защиты, с климактерическим синдромом и прогнозом развития. // Акушерство и гинекология. – Москва, 2008. - № 2. С. 33-36 4. Суншева А.А., Стрижова Н.В., Носиков В.В., Коробейников А.П. Ассоциативная кодирующих взаимосвязь ферменты полиморфных маркеров антиокислительной генов, защиты, с климактерическим синдромом и прогнозом развития // Сборник научных трудов 3-й Международный Научный Конгресс: Новые технологии в акушерстве и гинекологии. Санкт- Петербург. 301.XI.2007г. Р-47.
