На правах рукописи КАЗАКОВА СВЕТЛАНА БОРИСОВНА СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПОВЕДЕНЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ

На правах рукописи
КАЗАКОВА СВЕТЛАНА БОРИСОВНА
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПОВЕДЕНЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ
СИНТЕТИЧЕСКИХ И РАСТИТЕЛЬНЫХ СЕЛЕКТИВНЫХ
МОДУЛЯТОРОВ ЭСТРОГЕНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ ПРИ ЦИКЛИЧЕСКИХ
КОЛЕБАНИЯХ И ДЕФИЦИТЕ ЭСТРОГЕНОВ
14.00.25 – фармакология, клиническая фармакология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург – 2009 г.
2
Работа
выполнена
в
отделе нейрофармакологии им. С.В. Аничкова
Научно-исследовательского института экспериментальной медицины СевероЗападного отделения РАМН (НИИЭМ СЗО РАМН).
Научный руководитель:
Официальные оппоненты:
Заслуженный деятель науки РФ,
член-корреспондент РАМН,
доктор медицинских наук,
профессор
Сапронов Николай Сергеевич
доктор медицинских наук, профессор
Клименко Виктор Матвеевич
доктор медицинских наук, профессор
Шабанов Петр Дмитриевич
Ведущая
организация:
Санкт-Петербургский государственный
медицинский университет им. Академика
И.П. Павлова
Защита состоится «….» ……………………2010 года в ….часов на заседании совета
Д 001.022.03 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора и
кандидата наук при Научно-исследовательском институте экспериментальной
медицины Северо-Западного отделения РАМН по адресу: 197376, СанктПетербург, ул. Академика И. П. Павлова, 12
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке НИИЭМ СЗО РАМН
по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д.12
Автореферат разослан «….»…………..2010 года.
Ученый секретарь диссертационного совета
Доктор биологических наук, профессор
Л.В. Пучкова
3
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. Не вызывает сомнений, что эстрогены оказывают
модулирующее влияние на когнитивный и психо-эмоциональный статус.
Вынужденная или естественная гипоэстрогения часто сопровождается комплексом
расстройств, включая подавленное настроение, тревогу, плаксивость, депрессию.
Наиболее часто прослеживается корреляция между гормональным фоном и
развитием аффективных расстройств в пубертатный период, при использовании
пероральной контрацепции, во время предменструального синдрома, при
беременности, в послеродовом климактерическом периоде. В основе патогенеза
развития аффективного статуса лежит тесная взаимосвязь между гипоталамогипофизарно-овариальной системой и нейромедиаторными системами головного
мозга. Эстрогены оказывают модулирующее действие на холинергическую,
дофаминергическую, серотонинергическую системы, способствуя развитию
антиамнестического, антидепрессивного, анксиолитического эффектов. Кроме
того, Bruse McEwen (1999, 2002) в условиях доклинических исследований
продемонстрировал зависимость между синаптогенезом в нейронах гиппокампа и
колебанием уровня эстрадиола в крови в течение эстрального цикла у крыс, что
свидетельствует о нейропротективном действии эстрогенов. В настоящее время для
купирования менопаузальных симптомов, для лечения пациенток после
гистерэктомии, а также в качестве пероральной контрацепции широко
используется заместительная гормональная терапия (ЗГТ). Однако применение ЗГТ
связано с риском развития масталгии (болезненность молочных желез),
пролиферации тканей молочной железы и эндометрия, что провоцирует развитие
опухолей, маточного кровотечения, а длительное использование гормональной
терапии может привести к венозной тромбоэмболии и патологическим изменениям
в сердечно-сосудистой и гепатобилиарной системах (Сапронов, Федотова, 2009).
Поэтому возникает необходимость поиска новых лекарственных препаратов для
коррекции психоэмоционального статуса в условиях естественного или
вынужденного дисбаланса эстрогенов. Альтернативой ЗГТ выступает класс
фармакологически активных веществ – селективные модуляторы эстрогеновых
рецепторов (СЭРМ), – проявляющие избирательную активность в эстрогенчувствительных тканях, в том числе в ЦНС. СЭРМ это соединения, которые, в
отличие от «чистых» агонистов и антагонистов эстрогенов, способны проявлять
селективную избирательность к эстрогеновым рецепторам. Пока остается неясным,
по какому механизму СЭРМы реализуют агонист/антагонистические эффекты в
эстроген – чувствительных тканях. Однако наиболее вероятны 3 механизма
действия: различной экспрессией рецептора эстрогена в ткани-мишени; разной
конформацией эстрогенового рецептора и чувствительного к нему лиганда;
различной экспрессией и образованием корегуляторных белков на рецепторе
эстрогенов. Существуют противоречивые сведения и об эффектах СЭРМ на
поведенческие процессы, аффективный статус. Очень мало исследований
анализируют роль СЭРМов в формировании гормонального статуса при их
длительном применении. Таким образом, особую актуальность представляет
вопрос о взаимодействии гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы и
нейромедиаторных систем головного мозга, участвующих в формировании
4
эмоционального
поведения
и когнитивного
статуса,
на
фоне
хронического введения СЭРМ синтетического и растительного происхождения при
циклических колебаниях половых гормонов и при дефиците эстрогенов.
Целью настоящей работы являлся сравнительный анализ эффектов
агонистов\антагонистов эстрогеновых рецепторов, введенных изолированно или в
комбинации с 17α-Э2 и с 17β-Э2, на депрессивноподобное и тревожное поведение у
самок крыс, а также определение их гормонального статуса при естественном
колебании эстрогенов в крови и в условиях экспериментального дефицита
эстрогенов.
В задачи исследования входило:
1. Выяснить участие α- и β-эстрогеновых рецепторов (ЭР) в механизмах развития
депрессии и тревожных расстройств при экспериментальном дефиците эстрогенов;
2. Изучить возможность применения селективных модуляторов эстрогеновых
рецепторов для коррекции аффективных состояний при вынужденном или
естественном дефиците эстрогенов;
3. В эксперименте на животных оценить перспективность сочетанного применения
СЭРМ в комбинации с высокочувствительным лигандом к α-ЭР - 17α-Э2, или в
комбинации с лигандом к β-ЭР - 17β-Э2 в терапии депрессивных и тревожных
состояний в условиях овариоэктомии;
4. Провести сравнительный анализ поведенческих эффектов 17α- и 17β-Э2, а также
синтетических (тамоксифен) и растительных (экстракт цимицифуги, генистейн)
модуляторов ЭР при дисбалансе половых гормонов.
Научная новизна. Впервые показано влияние ряда СЭРМ (тамоксифен, генистейн,
климадинон) на аффективное поведение и гормональный статус при естественных
колебаниях эстрогенов, а также в условиях экспериментального дефицита у самок
крыс. Продемонстрированы разнонаправленные эффекты исследуемых препаратов
и заместительной терапии 17α- и 17β-Э2 на депрессивное поведение и уровень
тревожности у интактных и ОЭ самок крыс. Показано, что тамоксифен, генистейн и
климадинон изолированно и в сочетании с 17α- и 17β-Э2 способны модулировать
аффективный статус и баланс половых гормонов у животных. Установлено, что
эффекты изолированного и сочетанного применения селективных модуляторов
эстрогеновых рецепторов различаются у ОЭ крыс и интактных самок.
Научно-практическое значение работы. Полученные результаты расширяют
представления об участии половых гормонов в патогенезе депрессии и тревожных
расстройств. Кроме того, показана корреляция между степенью вовлечения α- и βЭР, их физиологической активностью, а также уровнем циркулирующих в крови
экзогенных и эндогенных лигандов к этим рецепторам и тревожно-депрессивным
состоянием у грызунов. Результаты работы могут быть использованы для
разработки схем лечения аффективного состояния при дисбалансе и дефиците
половых гормонов у пациенток. Показана перспективность применения СЭРМ в
комбинации с эстрогенами для лечения психоэмоциональных расстройств на фоне
различных патологий репродуктивной системы.
Основные положения, выносимые на защиту: Естественные колебания
эстрогенов на протяжении эстрального цикла у крыс сопровождаются изменением
уровня тревожности и депрессивноподобного состояния. Как высокое содержание
эстрогенов, так и низкое приводит к развитию тревожно-депрессивного состояния
5
у грызунов. Селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов вовлекаются в
формирование психо-эмоционального статуса. Экспериментальная овариоэктомия
у крыс сопровождается нарушением аффективного статуса, что выражается
изменениями в различных поведенческих тестах. Депрессивные и тревожные
нарушения у ОЭ животных лишь частично снижаются на фоне заместительной
терапии 17β-Э2. Применение 17β-Э2 и/или 17α-Э2 в комплексе с тамоксифеном,
генистейном или климадиноном повышает эффективность антидепрессантной и
анксиолитической терапии при дефиците эстрогенов. Важную роль при этом играет
формирование гормонального статуса на фоне указанных комбинаций препаратов.
Личный вклад соискателя. Соискателем написан обзор литературы,
спланированы и выполнены эксперименты, статистическая обработка и анализ
полученных результатов, а также подготовлены основные публикации по теме
работы.
Апробация работы. Результаты были доложены и обсуждались на 2-ой Российскокитайской научной конференции «Фундаментальная фармакология и фармация в
клинической практике» (Пермь, 2006), 1-й конференции Российской ассоциации
психонейроэндокринологии
(2008),
на
научных
заседаниях
отдела
нейрофармакологии (2008, 2009).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 3 статьи в
рецензируемых журналах.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах,
иллюстрирована 22 рисунками и 18 таблицами, включает введение, обзор
литературы, описание методов исследования, изложение результатов их
обсуждение, а также заключение, выводы, список цитированной литературы, из
которых 36 отечественных и 95 иностранных источников.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнена на 740 самках крыс линии Вистар, массой 180-200 г (возраст 4-5
месяцев), полученных из питомника РАМН “Рапполово”. Животных содержали в
стандартных условиях освещения и пищевого режима. Операцию тотальной
овариоэктомии, взятие влагалищных мазков и поведенческие тесты проводили не
ранее, чем через 7 дней после поступления из питомника.
Овариоэктомию осуществляли с соблюдением правил асептики. Методические
особенности и детали операции подробно изложены у Я. Д. Киршенблата (1969).
Отсутствие эстрального цикла у самок подтверждали анализом влагалищных мазков
в течение 4-х дней до начала эксперимента.
Цитологический метод определения стадии полового цикла у самок. Для
анализа влияния разного уровня эндогенных эстрогенов определяли 4 фазы
полового цикла: диэструс, проэструс, эструс и метэструс. Определение стадии
полового цикла у интактных крыс проводили с использованием характерных
морфологических признаков по мазкам согласно описанию у Я. Д. Киршенблата
(1969).
Депрессивноподобное поведение изучали в тесте Порсолта. Животное помещали
в стеклянный цилиндр (23/50 см), заполненный на две трети водой с температурой
25° на 15 минут, затем извлекали из цилиндра и обсушивали в течение 1 часа. Через
24 часа животное повторно опускали в воду. Депрессивноподобное состояние
6
оценивали
по
длительности иммобильности в течение 5 минут. Под
иммобильностью понимали полное отсутствие плавательных движений при
пассивном удержании животного на воде (Porsolt et al., 1978). Уровень
тревожности оценивали в «приподнятом крестообразном лабиринте»,
состоящем из двух «открытых» и двух «закрытых» рукавов. Животное помещали в
центр лабинринта и регистрировали общее время пребывания и число заходов в
открытые и закрытые рукава в течение 5 минут (File,1996; Калуев, 1998; Себенцова
и
др.,
2005).
Эмоциональную
реактивность,
двигательную
и
исследовательскую активность животных изучали в тесте «открытое поле» в
течение 3 минут (Петров и др., 1982; Калуев, 2002). Тестирование проводили в 9.00
– 12.00 часов). Концентрацию ЛГ, ФСГ, Э2 и П в сыворотке крови крыс определяли
методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью наборов для
ИФА. Оптическую плотность измеряли при 450 нм с помощью анализатора
иммуноферментных реакций АИФР-01 (ПИКОН, Россия). Перед началом
исследования проводили раститровку наборов с подбором оптимального
разведения сыворотки крови, концентрацию антигена в исследуемых образцах
рассчитывали на основании калибровочного графика.
В работе использовали СЭРМы синтетического и растительного происхождения:
тамоксифен – синтетического происхождения, (Орион, Финляндия) вводили в дозе
10 мг/кг, внутрибрюшинно; генистейн («Sigma», Германия) – препарат
растительного происхождения, относится к классу изофлавоноидов, получен из
соевых бобов, вводили в дозе 1 мг/кг, внутрибрюшинно; климадинон (Bionorica,
Германия) – лекарственный препарат, представляющий собой экстракт
цимицифуги, вводили в дозе 20 мг/кг, внутрибрюшинно. Фармакологические
вещества вводили в объеме 0,1 мл на животное ежедневно в течение 14 дней, через
2 недели после овариоэктомии. Необходимо отметить, что СЭРМы были
использованы в поведенческих дозах, соответствующих данным литературы
(Dhandapani, 2002; Diez-Perez, 2006). 17α- и 17β-эстрадиол растворяли в стерильном
персиковом масле и вводили внутримышечно в дозе 0,5 мкг на каждое животное. В
данном исследовании были использованы низкие дозы эстрадиолов (Wise, 2000).
Контрольные животные получали физиологический раствор.
Все интактные и ОЭ животные были разделены на следующие группы по 18-20
особей в каждой: 1-я – интактные крысы, получавшие физиологический раствор на
протяжении всего эксперимента (контроль 1); 2-я – интактные крысы, которым
вводили 17α-Э2; 3-я – интактные самки, получавшие 17β-Э2; 4-я группа –
интактные крысы, которым вводили тамоксифен; 5-я – интактные крысы, которым
вводили генистейн; 6-я – интактные самки, получавшие климадинон; 7-я – ОЭ
самки, получавшие масляный растворитель в эквивалентном объеме
внутримышечно (контроль 2); 8-я группа – ОЭ самки, получавшие 17β-Э2; 9-я
группа – ОЭ самки, получавшие 17α-Э2; 10-я группа – ОЭ крысы, которым вводили
тамоксифен; 11-я группа – ОЭ самки, получавшие тамоксифен и 17β-Э2; 12-я
группа – ОЭ самки, которым вводили тамоксифен и 17α-Э2; 13-я группа – ОЭ
самки, получавшие генистейн; 14-я группа – ОЭ крысы, получавшие в комбинации
генистейн и 17β-Э2; 15-я группа – ОЭ самки, которым вводили генистейн и 17α-Э2;
16-я группа – ОЭ животные, получавшие климадинон; 17-я группа – ОЭ крысы,
7
которым вводили климадинон и 17β-Э2; 18-я группа – ОЭ самки, получавшие
климадинон и 17α-Э2. Все интактные самки перед началом эксперимента внутри
каждой группы были разделены по фазам цикла таким образом, что в каждой
стадии эстрального цикла находилось 4 – 5 животных. Поведенческие тесты
проводили через 1 час после последнего введения указанных препаратов.
Статистическую обработку данных проводили с помощью пакетов прикладных
программ ‹‹SPSS 12.0 for Windows›› и ‹‹STATISTICA 6.0›› с использованием
однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA; post-hoc: Fisher’s LSD test) и Uкритерия Манна-Уитни (Mann-Whitney U) (Беленький, 1959; Платонов, 2000).
Различия между значениями считали статистически значимыми при p < 0,05. Все
значения были представлены в виде M ± S.E.M., где M – среднее арифметическое,
S.E.M. – стандартная ошибка среднего арифметического (Standart Error Means).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Влияние эстрального цикла и гормональной терапии 17β- или 17αэстрадиолом на аффективное поведение интактных самок крыс
Как показало исследование, показатели аффективного статуса в зависимости
от фазы цикла. Депрессивное поведение проявляется в стадии ди - и проэструса и
ослабляется в фазах эструса и метэструса. Наряду с депрессивным поведением
уровень тревожности в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» наиболее
высок в фазе проэструса и эструса. В тесте «открытое поле» показатели
вегетативного стресса (груминг, дефекация) существенно не менялись на
протяжении всего цикла (табл. 2). 17α-Э2 и 17β-Э2 (нарушал фазность цикла, все
животные находились в эструсе) значительно повышали депрессивное поведение у
крыс по сравнению с контролем 1 (рис. 1). В тесте «приподнятый крестообразный
лабиринт» анксиолитическая активность 17β-Э2 проявлялась в увеличении числа
заходов в открытые рукава. В то же время, введение 17α-Э2 приводило к резкому
снижению числа заходов в открытые рукава и сопровождалось реакцией замирания
(поведенческий показатель, свидетельствующий о высоком уровне тревожности у
животных) в фазах проэструса и эструса. Анксиолитический эффект 17α-Э2
проявлял в стадии диэструса и метэструса (табл.1). В тесте «открытое поле» 17α-Э2
и 17β-Э2 не оказывали влияния на пространственно-ориентировочную активность
(табл. 2). Таким образом, циклические колебания половых гормонов в крови
интактных крыс сопровождаются изменением аффективного статуса. Хроническое
введение 17α-Э2 или 17β-Э2 приводило к изменению поведенческих реакций,
регистрируемых в тесте Порсолта, «приподнятом крестообразном лабиринте» и
открытое поле». Длительное введение 17β-Э2 сопровождается развитием
анксиолитического эффекта у интактных самок (эструс). Хроническое введение
17α-Э2 интактным животным приводило к развитию анксиолитического действия в
фазах диэструса и метэструса. В стадиях проэструса и эструса 17α-Э2 проявлял
анксиогенные свойства.
Аффективный статус самок в условиях хронического введения СЭРМ
Влияние тамоксифена на аффективный статус интактных самок
Из рисунка 1 видно, что время неподвижности интактных крыс, получавших
тамоксифен, достоверно снижалось в фазы диэструса и метэструса по сравнению с
8
контролем 1 и группой самок, получавших
17α-Э2.
В
стадию
проэструса тамоксифен повышал продолжительность иммобильности по
сравнению с контролем 1 и группой крыс, получавших 17α-Э2. Кроме того,
тамоксифен нарушал фазность цикла и на 7-10 день введения препарата стадия
эструса у крыс отсутствовала. Таким образом, при среднем уровне эстрогенов в
крови в стадии диэструса и метэструса тамоксифен оказывал антидепрессивное
действие. При высоком содержании эстрогенов в крови в фазу проэструса данный
препарат проявлял депрессогенный эффект.
Время иммобильности, с
250
#
200
#
150
#
#
*
*
*
100
#
#
50
0
#
#
1 2
3
диэструс
4
1
2
3
проэструс
4
1
2
эструс
3
4
1
2
3 4
метэструс
Рис. 1. Влияние тамоксифена на
депрессивноподобное поведение
интактных самок крыс в тесте
Порсолта.
Группы животных: 1 – интактные
(контроль 1); 2 – получавшие 17βЭ2; 3 – получавшие 17α-Э2; 4 –
получавшие тамоксифен; * различия между фазами полового
цикла достоверны при р < 0,05; # различия достоверны при р < 0,05
по сравнению с контролем 1.
Как видно из таблицы 1, эффекты тамоксифена зависят от естественных колебаний
эстрогенов в течение эстрального цикла у интактных животных и сопровождаются
значительными изменениями аффективного поведения. Так, в фазу диэструса при
естественном среднем уровне эстрогенов в крови животных хроническое введение
препарата вызывает анксиогенное действие, что выражается в преобладании
фризинга. Однако при наиболее высоком уровне секреции эстрадиола в стадию
проэструса тамоксифен проявляет анксиолитический эффект. В тесте «открытое
поле» тамоксифен выраженно угнетает эмоциональный компонент поведения.
Вместе с тем, в фазу метэструса при постепенном снижении уровня эндогенного
эстрадиола тамоксифен не влияет на аффективное поведение животных. Таким
образом, эффекты тамоксифена зависят от естественных колебаний эстрогенов в
течение эстрального цикла у интактных животных и сопровождаются
значительными изменениями аффективного поведения.
Влияние генистейна на аффективный статус интактных самок
Хроническое введение генистейна интактным крысам (рис. 2) достоверно
снижало время иммобильности в стадиях диэструса, проэструса и метэструса по
сравнению с контрольными животными и группой самок, которые получали 17αЭ2. В стадию эструса данный показатель на фоне генистейна не изменялся по
сравнению с контролем 1, но был меньше по сравнению с группами животных,
получавших 17α-Э2 или 17β-Э2. Таким образом, генистейн оказывал ярко
выраженный антидепрессивный эффект в фазах диэструса, проэструса и метэструса
и не влиял на степень депрессии в стадию эструса. Результаты исследований
показали, что генистейн не влиял на тревожное поведение самок крыс, которые
находились в стадии диэструса, а также не оказывал влияния на параметры
поведения в условиях «открытого поля» (табл. 1, 2). Хроническое введение
генистейна снижало уровень тревожности у животных в фазу проэструса, о чем
свидетельствует увеличение числа заходов в «открытые» и «закрытые» рукава и
9
числа «обследованных» норок, а также снижение эмоциональности крыс в
тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и «открытое поле». В фазу
эструса препарат проявлял анксиолитическое действие, что подтверждается
увеличением времени нахождения крыс в «открытых» рукавах
Таблица 1
Влияние эстрального цикла 17α- и 17β-эстрадиола, СЭРМ на поведение интактных самок крыс в
«приподнятом крестообразном лабиринте»
Группы животных Время пребывания Время нахождения
Количество
Количество
(n=10)
в открытых
в закрытых
заходов в
заходов в
рукавах (сек)
рукавах (сек)
открытые рукава закрытые рукава
Интактные самки + физиол. р-р (контроль 1)
диэструс
86,0 ± 6,20
214,0 ± 8,60
1,2 ± 0,4
2,0 ± 0,4
проэструс
36,4 ± 3,40*
263,6 ± 6,40
1,0 ± 0,2
4,5 ± 0,2*
эструс
42,6 ± 4,20*
257,4 ± 8,40
1,0 ± 0,2
4,0 ± 0,6*
метэструс
80,0 ± 4,80
диэструс
проэструс
эструс
метэструс
100,0 ± 3,5#
289,0 ± 3,2#
283,6 ± 4,3#
108,0 ± 2,4#
диэструс
проэструс
эструс
метэструс
диэструс &
проэструс
эструс
метэструс
80,3 ± 3,0#
299,3 ± 0,70 #
220,0 ± 4,60 #&
220,0 ± 10,20
1,4 ± 0,6
Интактные самки + 17α-эстрадиол
200,0 ± 3,2#
5,0 ± 0,4#
11,0 ± 3,2#
0,5 ± 0,1#
16,5 ± 4,3#
0,5 ± 0,1#
192,0 ± 2,4#
4,0 ± 0,4#
Интактные самки + 17β-эстрадиол
Фаза отсутствовала
Фаза отсутствовала
219,7 ± 2,9#
3,4 ± 0,2#
Фаза отсутствовала
Интактные самки + тамоксифен
10,0 ± 8,90 #&
0,1 ± 0,01 #&
70,0 ± 3,50 #&
2,0 ± 0,20 #
2,2 ± 0,4
6,0 ±0,4#
0,5 ± 0,1#
0,5 ± 0,1#
5,2 ± 0,4#
4,4 ± 0,3
0,3 ± 0,10 #&
3,0 ± 0,20 #&
Фаза отсутствовала
105,0 ± 2,60
190,0 ± 5,60 #
1,5 ± 0,20&
1,5 ± 0,20&
Интактные самки + генистейн
диэструс
90,0 ± 2,0
210,0 ± 2,0
1,0 ± 0,2# &
2,0 ± 0,2&
проэструс
50,0 ± 0,9# &
250,0 ± 1,0 # &
4,0 ± 0,3 #&
5,0 ± 0,3&
эструс
269,0 ± 1,4 # $
31,6 ± 1,4 # $
1,0 ± 0,2$
1,0 ± 0,2 # $
#&
#&
#
метэструс
60,2 ± 0,7
239,8 ± 0,7
5,0 ± 0,4
6,0 ± 0,4 #
Интактные самки + климадинон
&#
диэструс & 297,0 ± 2,50
12,0 ± 6,50&
0
0,2 ± 0,09 & #
проэструс
85,0 ± 6,50 & #
215,0 ± 6,50&
8,0 ± 2,70&
9,0 ± 2,70 & #
& #$
&$
&
эструс
70,0 ± 4,50
230,0 ± 4,50
4,0 ± 1,50
5,0 ± 1,50&
метэструс
88,0 ± 10,20&
222,5 ± 13,20&
1,5 ± 0,50&
3,7 ± 0,70 & #
Примечание: * - различия между фазами полового цикла в контрольной группе достоверны при p
< 0,05 по сравнению с фазой диэструса; # - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с
контролем 1 в соответствующей фазе; & - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с
группой животных, получавших 17α-эстрадиол; $ - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с
группой животных, получавших 17β-эстрадиол.
#
лабиринта,
повышением
исследовательского
поведения
и
снижением
эмоциональности в условиях «открытого поля». У крыс в стадию метэструса
10
генистейн повышал время и число заходов в «открытые» рукава. Эти
данные коррелировали со снижением эмоционального компонента в тесте
«открытое поле», что указывает на анксиолитический профиль препарата у
интактных самок в данной фазе.
Таблица 2
Влияние эстрального цикла, 17α- и 17β-эстрадиола и СЭРМ на поведение интактных самок крыс
в тесте «открытое поле» в течение 180 сек
Группы
Параметры
животных
Двигательная активность
Исследовательская
Эмоциональность
(n=9)
активность
Перемещение
Вставание
Груминг
Дефекация
Интактные самки + физиол. раствор (контроль 1)
Диэструс
45,6 ± 2,4
11,6 ± 0,4
1,6 ± 0,2
2,6 ± 0,4
2,6 ± 0,4
Проэструс
26,8 ± 1,2*
2,8 ± 0,2*
3,0 ± 0,2
3,0 ± 0,2
2,8 ± 0,2
Эструс
63,7 ± 3,8*
14,7 ± 1,8
3,7 ± 0,4
3,3 ± 0,8
2,0 ± 0,2
Метэструс
55,6 ± 2,8*
12,3 ± 0,8
7,1 ± 0,6
3,8 ± 0,8
0,6 ± 0,02*
Интактные самки + 17α-эстрадиол
Диэструс
20,8 ± 10,2
7,8 ± 0,7
1,3 ± 0,6
3,3 ± 0,6
0
#
#
#
#
Проэструс
42,7 ± 4,6
12,8 ± 1,7
2,0 ± 0,5
4,8 ± 0,4
0
#
#
#
Эструс
37,3 ± 3,4
10,2 ± 2,4
1,9 ± 0,4
4,0 ± 0,9
0
Метэструс
98,5 ± 4,3#
12,4 ± 1,8
5,6 ± 0,5#
3,0 ± 0,4
0
Интактные самки + 17β-эстрадиол
Диэструс
Фаза отсутствовала
Проэструс
Фаза отсутствовала
#
#
Эструс
22,9 ± 1,2
2,3 ± 0,3
2,6 ± 0,4#
0,5 ± 0,2#
5,0 ± 0,7#
Метэструс
Фаза отсутствовала
Интактные самки + тамоксифен
#$
Диэструс
77,1 ± 4,4
8,1 ± 1,0#
3,0 ± 0,4# $
0,3 ± 0,1# $
0,5 ± 0,1#
Проэструс
45,3 ± 2,1#
2,6 ± 0,6 $
2,8 ± 0,8
0,9 ± 0,1# $
0,6 ± 0,02#
Эструс
Фаза отсутствовала
#
#$
Метэструс
80,3 ± 0,8
1,5 ± 0,3
5,1 ± 0,2#
0,2 ± 0,02#$
0,2 ± 0,01#
Интактные самки + генистейн
#
Диэструс
16,0 ± 0,9
7,0 ± 1,0#
1,5 ± 0,2
3,3 ± 0,9#
0
#$
#
#$
#$
Проэструс
72,3 ± 1,5
11,0 ± 0,6
4,0 ± 0,6
2,3 ± 0,3
0
Эструс
29,3 ± 3,2#
9,0 ± 0,6#&
5,0 ± 0,5#$&
1,0 ± 0,2#$
3,6 ± 0,5#
Метэструс
12,0 ± 1,2#$
3,0 ± 0,4#$
4,0 ± 0,6#
1,0 ± 0,2#$
1,0 ±0,2#
Интактные самки + климадинон
#
Диэструс
27,3 ± 1,0
10,8 ± 1,3$
3,5 ± 0,3#$
5,6 ± 1,4#$
1,3 ± 0,8#
Проэструс
20,0 ± 1,5#$
3,0 ± 0,2$
3,0 ± 0,2
1,0 ± 0,1#$
0
#$
#$&
#$&
#$
Эструс
43,8 ± 1,5
6,3 ± 1,7
7,2 ± 0,4
2,0 ± 0,2
0,5 ± 0,1#$
Метэструс
33,4 ± 1,3#$
4,6 ± 0,9#$
3,0 ± 0,6#$
2,3 ± 0,8
0,3 ± 0,1#
Примечание: * - различия между фазами полового цикла в контрольной группе достоверны при p
< 0,05 по сравнению с фазой диэструса, # - различия достоверны при <0,05 по сравнению с
контролем 1; $ - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой животных,
получавших 17α-эстрадиол; & - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой
животных, получавших 17β-Э2.
#
#
11
Рисунок 2. Влияние генистейна на
депрессивноподобное поведение интактных
самок крыс в тесте Порсолта.
Группы животных: 1 – контроль 1; 2 –
получавшие 17β-Э2; 3 – получавшие 17α-Э2;
4 – получавшие генистейн
*
- различия между фазами полового цикла
достоверны при р < 0,05; # - различия
достоверны при р < 0,05 по сравнению с
контролем 1.
время неподвижности, с
250
#
200
#
#
#
150
*
#
*
*
100
#
#
50
#
0
1 2 3 4
диэструс
1 2 3 4
эструс
1 2 3 4
проэструс
1 2 3 4
метэструс
Таким образом, можно утверждать, что генистейн проявлял анксиолитическое
действие независимо от уровня эндогенных эстрогенов в крови у животных.
Время неподвижности, с
Влияние климадинона на аффективный статус интактных самок
В фазах физиологического покоя (диэструс и метэструс), которые
характеризуются средним уровнем эндогенных эстрогенов в крови, климадинон
проявляет ярко выраженное антидепрессивное действие. Однако при высоком
(проэструс) и низком (эструс) уровне данный препарат не оказывает существенного
влияния на депрессивноподобное поведение (рис. 3).
В условиях «приподнятого крестообразного лабиринта» климадинон в стадии
диэструса проявлял анксиогенное действие, так как у животных наблюдалась
реакция замирания и снижалось число заходов в открытые и закрытые рукава
(табл. 1). Однако результаты, полученные в «приподнятом крестообразном
лабиринте», не коррелировали с полученными показателями в тесте «открытое
поле». В «открытом поле» у животных в 2 раза повышалось исследовательское
поведение и было снижено количество болюсов дефекации (показатели
анксиолитичности) (табл. 2).
250
200
#
#
*
150
100
#
#
#
1
*
#
1
*
#
1
50
#
1
0
1 2 3 4
диэструс
1 2 3 4
проэструс
1 2 34
эструс
12 3 4
метэструс
Рис.3.
Влияние
климадинона
на
депрессивноподобное
поведение
интактных самок крыс в тесте Порсолта.
Группы животных: 1 – интактные
(контроль 1); 2 – получавшие 17β-Э2; 3 –
получавшие 17α-Э2; 4 – получавшие
климадинон;
*
- различия достоверны при р < 0,05
между фазами полового цикла в контроле
1 по сравнению с фазой диэструса; # различия достоверны при р < 0,05 по
сравнению с контролем 1.
Однако, в стадию проэструса климадинон оказывал ярко выраженный
анксиолитический эффект, о чем говорит значительное увеличение числа заходов в
открытые и закрытые рукава в лабиринте и угнетение эмоциональности при
тестировании крыс в «открытом поле». В стадию эструса климадинон снижал
уровень тревожности, отмечалось увеличение времени пребывания и числа заходов
в открытые рукава лабиринта, что коррелировало с угнетением эмоционального
компонента в тесте «открытое поле». Хроническое введение климадинона не
12
влияло на аффективное поведение грызунов в стадию метэструса. Таким
образом, хроническое введение климадинона приводило к разнонаправленным
эффектам в фазу диэструса. В фазы проэструса и эструса климадинон оказывал
анксиолитическое действие, при этом в стадию проэструса указанный препарат
приводил к более выраженному анксиолитическому эффекту. Однако введение
климадинона не оказывало влияния на уровень тревожности грызунов в стадии
метэструса.
Время иммобильности, с
Аффективное поведение самок крыс в условиях дефицита эстрогенов и
заместительной терапии 17- или 17-эстрадиола
Овариоэктомия у самок крыс резко повышала продолжительность иммобильности
в тесте Порсолта по сравнению с контролем 1 (диэструс). Время неподвижности у
ОЭ самок крыс составляло 233,0 ± 2,6 сек, p < 0,05, в то время как у интактных
крыс - 122,0 ± 1,9 сек, p < 0,05 (рис. 4). Хроническое введение 17β-Э2 ОЭ самкам
приводило к снижению продолжительности иммобильности по сравнению с ОЭ
крысами, получавшими масляный растворитель (контроль 2), но данный показатель
был выше, чем в контроле 1 (рис. 4). Несмотря на отсутствие достоверных
изменений времени неподвижности у ОЭ самок, которым вводили 17α-Э2, по
сравнению с контролем 2, тем не менее, наблюдалась тенденция к снижению
продолжительности иммобильности у этих животных по сравнению с ОЭ самками.
Овариоэктомия у самок крыс приводила к снижению времени пребывания в
открытых рукавах лабиринта в 2 раза и уменьшению числа заходов в них по
сравнению с контролем 1 (табл. 3). Овариоэктомия у самок крыс сопровождалась
незначительным повышением исследовательской активности и снижением
грумингового компонента по сравнению с интактными животными (табл. 4). Таким
образом, искусственный дефицит эстрогенов выраженно повышает степень
депрессии и уровень тревожности у животных, что говорит о депрессогенном и
анксиогенном действии гипоэстрогении, не изменяя при этом ориентировочноисследовательскую активность грызунов.
*
250
*#
200
*
150
100
50
0
1
2
3
4
Рис.4. Влияние ОЭ и хронического
введения 17β- и 17α-Э2 на степень
депрессивного поведения ОЭ самок
крыс в тесте Порсолта.
Столбиками
показано
время
иммобильности (сек.): 1-контроль 1; 2 –
ОЭ самки(контроль 2), 3 – ОЭ самки +
17β-Э2, 4 – ОЭ самки + 17α-Э2; * различия достоверны при р < 0,05 по
сравнению с контролем 1; # - различия
достоверны при р < 0,05 по сравнению с
контролем 2.
Хроническое введение 17β-Э2 в 2 раза повышало время нахождения ОЭ
животных в открытых рукавах лабиринта по сравнению с контролем 2, при этом
данный показатель не отличался по сравнению с контролем 1. Число заходов в
открытые и закрытые рукава не отличалось от тех же показателей в группе ОЭ
крыс (табл. 3). Общее время пребывания в открытых рукавах лабиринта ОЭ самок,
получавших 17α-Э2, также повышалось в 2 раза по сравнению с ОЭ самками.
13
Число заходов в открытые и закрытые рукава грызунов при этом выраженно
повышалось по сравнению с контролями 1 и 2 (табл. 3). Время нахождения в
открытых рукавах, число заходов в открытые и закрытые рукава лабиринта у ОЭ
крыс, получавших 17α-Э2, было выше по сравнению с ОЭ самками из группы,
которым вводили 17β-Э2 (табл. 3). В тесте «открытое поле» 17β-Э2 у ОЭ крыс в 1,8
раза понижал горизонтальную двигательную активность, а также представленность
груминга по сравнению с контрольными ОЭ крысами (табл. 4). ОЭ самки,
получавшие 17α-Э2 характеризовались повышением исследовательской активности
и увеличением уровня эмоционального компонента по сравнению с ОЭ
животными. Число «обследованных» норок, количество болюсов и
исследовательское поведение у ОЭ животных, которым вводили 17α-Э2, было
выше по сравнению с ОЭ крысами, получавшими 17β-Э2.
Таким образом, 17β-Э2 проявлял антидепрессивный и анксиолитический эффекты
при дефиците эстрогенов, но при этом полностью не восстанавливал паттерн
поведения до уровня интактных самок крыс. Хроническое введение 17α-Э2 не
оказывало существенного влияния на время неподвижности ОЭ животных в тесте
Порсолта, что свидетельствует об отсутствии антидепрессивного действия этого
препарата. При этом, в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и
«открытое поле» 17α-Э2 оказывал умеренное анксиолитическое действие, что
выражалось увеличением числа заходов в открытые «рукава» в тесте
«приподнятый крестообразный лабиринт», и повышением исследовательской
активности в «открытом поле». Анализ поведенческих эффектов 17β-Э2 и 17α-Э2 в
условиях ОЭ показал, что 17β-Э2 проявлял антидепрессивный и анксиолитический
эффекты более выраженно, чем 17α-Э2. Ряд авторов в своих исследованиях также
демонстрировали положительные эффекты 17β-Э2 при аффективных расстройствах
и отсутствие эффектов 17α-Э2 на психо-эмоциональный статус (Trent et al., 2005;
Touxefis et al., 2006).
Эффекты СЭРМ на поведенческие реакции ОЭ самок крыс
Влияние тамоксифена на поведение ОЭ самок крыс
Хроническое введение тамоксифена ОЭ самкам уменьшало время
неподвижности по сравнению с контролем 2 и группой крыс, которым вводили
17α-Э2. В то же время, данный показатель был выше, чем в контроле 1 и в группе
крыс, которым вводили 17β-Э2 (рис. 5). Полученные результаты свидетельствуют
об умеренном антидепрессивном эффекте тамоксифена при дефиците эстрогенов.
Однако тамоксифен оказывал менее выраженное антидепрессивное действие,
чем гормональная терапия 17β-Э2. При этом, селективный модулятор эстрогеновых
рецепторов не восстанавливал аффективный статус до уровня интактных крыс.
Введение тамоксифена ОЭ самкам на фоне 17α-Э2 или 17β-Э2 (особенно)
сопровождалось еще более выраженным снижением времени неподвижности в
тесте Порсолта у крыс этой группы. Выполненная серия экспериментов показала,
что тамоксифен снижал уровень тревожности у ОЭ крыс до уровня контрольных
интактных самок, которые находились в фазе покоя. В «тесте приподнятый
крестообразный лабиринт» крысы, получавшие тамоксифен, характеризовались
увеличением времени нахождения и повышением в 2 раза числа заходов в
открытые рукава лабиринта по сравнению с контролем 2, и эти показатели не
14
отличались от таковых в контроле 1 (табл. 3). Приведенные результаты
коррелировали с данными, полученными в тесте «открытое поле» (табл 4).
Таблица 3
Влияние ОЭ, хронического введения 17α- и 17β-эстрадиола и СЭРМ на поведение крыс в
«приподнятом крестообразном лабиринте» при дефиците эстрогенов
Группы
Время пребывания Время нахождения
Количество
Количество
животных
в открытых рукавах в закрытых рукавах
заходов в
заходов в
(n=10)
(сек)
(сек)
открытые рукава
закрытые рукава
Инт. самки
(контроль 1)
86,0 ± 6,2
214,0 ± 8,6
1,2 ± 0,4
2,0 ± 0,4
ОЭ самки +
(контроль 2)
44,0 ± 3,2*
256,0 ± 5,6*
0,5 ± 0,2*
4,0 ± 0,2*
ОЭ + 17α-Э2
94,4 ± 6,6 &
187,4 ± 6,6* &
4,0 ± 0,1* &
5,0 ± 0,9*
ОЭ + 17β-Э2
ОЭ
+тамоксифен
ОЭ + 17αЭ2
тамоксифен
ОЭ + 17β-Э2
тамоксифен
74,0 ± 4,2* &
236,0 ± 4,2* &
0,5 ± 0,2*
3,0 ± 0,6
98,8 ± 5,4* &#
228,0 ± 10,8&$
1,1 ± 0,4 &#$
1,6 ± 0,4& #$
98,3 ± 18,9#&
201,7 ± 18,9&#
3,3 ± 0,9*&#
4,3 ± 0,9*
68,8 ± 4,2&$*
231,3 ± 4,2&$*
0,4 ± 0,1*$
1,3 ± 0,2&$*#
ОЭ + генистейн 186,0 ± 6,9$*#&
114,0 ± 6,9$*#&
6,0 ± 1,7$*#&
7,0 ± 1,7**$*#ОЭ + генистейн
+ 17α-Э2
100,5 ± 8,9*&$€
199,6 ± 9,0*&$€
5,0 ± 1,2*&
6,0 ± 1,8*
ОЭ + генистейн
+ 17β-Э2
212,5 ± 10,3$*#&
87,5 ± 10,3$*#&
3,3 ± 1,3#*&€
4,3 ± 1,3*€
ОЭ
+климадинон
88,0 ± 8,1&#
212,0 ± 8,2&$#
0,5 ± 0,2*$
1,7 ± 0,3&$#
ОЭ + 17α-Э2
климадинон
58,8 ± 4,3*&$#
241,3 ± 4,2*&$
2,5 ± 0,6*&$#
3,5 ± 0,6*$
ОЭ + 17β-Э2
климадинон
194,6 ± 12,8&$#
123,3 ± 12,0*&$#
4,0 ± 0,2*&#
5,0 ± 0,2*&#
Примечание: * - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1, & - различия
достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 2, # - различия достоверны при р < 0,05 по
сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17β-эстрадиол, $ - различия достоверны при р < 0,05
по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17α-эстрадиол; € - различия достоверны при p <
0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших генистейн;  - различия достоверны при p <
0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших климадинон.
Сравнивая эффекты совместного введения указанных препаратов и
изолированного введения тамоксифена на тревожное поведение ОЭ самок, можно
отметить, что 17α-Э2 и тамоксифен, введенные в комбинации, в 3 раза повышали
число заходов в открытые и закрытые «рукава», не влияя на время нахождения
грызунов в этих «рукавах», что коррелировало с высокой норковой активностью и
снижением числа болюсов дефекации у грызунов в тесте «открытое поле».
Сочетанное введение тамоксифена и 17β-Э2 уменьшало время нахождения и число
заходов в открытые «рукава» лабиринта, снижало специфическую норковую
15
активность и увеличивало число актов дефекации в тесте «открытое поле» по
сравнению с изолированным введением тамоксифена.
Таблица 4
Влияние ОЭ, хронического введения 17α- и 17β-эстрадиола и СЭРМ на поведение ОЭ крыссамок в тесте «открытое поле» в течение 180 сек
Группы
Параметры
животных
Двигательная активность
Исследовательска
Эмоциональность
(n=9)
я
Перемещение
Вставание
Груминг
Дефекаци
активность
я
Инт. самки
(контроль 1)
45,6 ± 2,4
11,6 ± 0,4
1,6 ± 0,2
2,6 ± 0,4
2,6 ± 0,4
ОЭ
(контроль 2)
60,8 ± 0,4 #
11,4 ± 1,2
2,5 ± 0,2 #
1,9 ± 0,02 #
1,8 ± 0,3
ОЭ +
17α-Э2
35,6 ± 7,9 #*
11,0 ± 0,6
4,0 ± 0,6 #*
4,3 ± 1,5 #*
4,3 ± 0,4 #*
ОЭ +
17β-Э2
34,2 ± 0,4 #*
10,3 ± 1,2
2,4 ± 0,2 #
0,4 ± 0,02* # 0
ОЭ +
тамоксифен
110,0 ± 2,2*$#& 4,8 ± 0,4*$#&
10,2 ± 0,4*$ #& 0,5 ±0,02*#& 0,6 ± 0,02 #*&
ОЭ+17α-Э2
тамоксифен
37,4 ± 6,4#*
6,7 ± 0,9#*$&
5,3 ± 0,7#*$
1,7 ± 0,5$&
0,6 ± 0,1#*&
ОЭ+тамокси
фен+17β-Э2
17,0 ± 1,2 #*$& 2,8 ± 0,4 #*$&
3,4 ± 0,6 #*$
0,2 ± 0,02#*& 2,8 ± 0,4*&
ОЭ +
генистейн
53,3 ± 1,2 #*$ 9,0 ± 1,2 #
4,0 ± 0,2 #*$
1,5 ± 0,6 #$
0
ОЭ + 17α-Э2
генистейн
39,9 ± 5,3*€
10,3 ± 3,4
4,0 ± 1,2#*
3,5 ± 0,9*€
2,8 ± 0,7&
ОЭ + 17βЭ2
генистейн
40,7 ± 3,5*$€
5,3 ± 1,2 #*$€
2,0 ± 0,5€
3,3 ± 0,7*$€
0
ОЭ +
климадинон 115,8 ± 8,3 #*$& 5,8 ± 0,9 #*$&
13,3 ± 0,5 #*$& 3,7 ± 0,7*$
2,3 ± 0,8&
ОЭ+17α-Э2
климадинон 29,6 ± 6,7 #*
5,8 ± 0,9 #*$&
3,5 ± 0,2 #*$
2,5 ± 0,6&
1,8 ± 0,4*&
ОЭ+17β-Э2
климадинон 159,8 ± 7,5 #*$ 2,5 ± 0,5 #*$
3,2 ± 0,9*$
2,8 ± 0,3 #
1,2 ± 0,5 #
Примечание: # - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с контролем 1; * - различия
достоверны при p< 0,05 по сравнению с контролем 2; $ - различия достоверны при p < 0,05 по
сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17β-эстрадиол; & - различия достоверны при p <
0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17α-эстрадиол,  - различия достоверны
при p < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших генистейн.
Таким образом, в условиях дефицита эстрогенов наиболее выраженное
анксиолитическое действие оказывало введение тамоксифена одного или в
комбинации с 17α-Э2. Совместное введение 17β-Э2 и тамоксифена не оказывало
существенного влияния на тревожное поведение ОЭ самок по сравнению с
изолированным
введением
17β-Э2.
Все
показатели
тревожности,
зарегистрированные в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и
«открытое поле» при комбинированном введении препаратов, не отличались от
таковых в группе крыс, получавших только 17β-Э2, что свидетельствует о
нивелировании поведенческих эффектов тамоксифена при совместном введении
этих препаратов на фоне дефицита эстрогенов у животных.
16
300
*
Время неподвижности, с
250
*
*#$
*#
200
*#
*#
150
100
50
0
1
2
3
4
5
6
7
Рис.5. Влияние тамоксифена на степень
депрессивного поведения у ОЭ самок
крыс в тесте Порсолта. Столбиками
показано время неподвижности в сек: 1контроль 1; 2 – ОЭ самки (контроль 2); 3 –
ОЭ самки, получавшие 17α-Э2; 4 – ОЭ
самки+17β-Э2; 5 – ОЭ + тамоксифен; 6 –
ОЭ + тамоксифен + 17α-Э2; 7 – ОЭ самки
+ тамоксифен + 17β-Э2; *-различия
достоверны при р < 0,05 по сравнению с
контролем 1; # - различия достоверны при
р < 0,05 по сравнению с контролем 2, $ различия достоверны при р<0,05 по
сравнению
с
группой
животных,
получавших 17β-Э2
Влияние генистейна на поведение ОЭ самок крыс
Как видно из рисунка 6, изолированное введение генистейна, особенно, и
комбинация генистейна с 17β-Э2 сопровождались резким снижением времени
неподвижности, что свидетельствует о ярко выраженном их антидепрессивном
действии. Комбинированное введение генистейна и 17α-Э2 также уменьшало
продолжительность иммобильности по сравнению с контролями 1, 2 и
изолированным введением 17α-Э2 ОЭ животным, но в меньшей степени, чем
вышеуказанные препараты, что говорит об умеренном антидепрессивном действии
данной комбинации препаратов. В тестах «приподнятый крестообразный лабринт»
и «открытое поле» (Табл. 3 и 4) было установлено, что генистейн выраженно
снижал уровень тревожности в условиях дефицита эстрогенов. ОЭ самки крыс,
которым вводили генистейн, характеризовались увеличением в 4,2 раза времени
пребывания в открытых рукавах лабиринта, повышением в 12 раз числа заходов в
них по сравнению с контрольными ОЭ крысами, которые получали масляный
растворитель. Показатели, полученные в тесте «приподнятый крестообразный
лабиринт», коррелировали с результатами в тесте «открытое поле». Так, у ОЭ крыс,
получавших генистейн, значительно возрастала норковая активность и было
угнетено эмоциональное поведение (груминг, дефекация).
*
Время неподвижности, сек
250
*
*#
200
150
#$&
100
*#$&
*#$&
50
0
1
2
3
4
5
6
7
Рис.6. Влияние генистейна на степень
депрессивного поведения у ОЭ самок крыс в
тесте Порсолта. Столбиками показано время
неподвижности (в сек): 1- контроль 1; 2 – ОЭ
(контроль 2); 3 – ОЭ + 17α-Э2; 4 – ОЭ + 17β-Э2;
5 – ОЭ + генистейн; 6 – ОЭ самки + генистейн
+ 17α-Э2; 7 – ОЭ + генистейн + 17β-Э2; * различия достоверны при р<0,05 по сравнению
с контролем 1; # - различия достоверны при
р<0,05 по сравнению с контролем 2; $ различия достоверны при р<0,05 по сравнению
с группой ОЭ самок, получавших 17α-Э2; & различия достоверны при р<0,05 по сравнению
с группой ОЭ самок, получавших 17β-Э2.
17
Проведя сравнительный анализ поведенческих реакций ОЭ самок крыс,
получавших 17α-Э2 или 17β-Э2, необходимо отметить, что генистейн проявлял
более выраженное анксиолитическое действие, чем вышеуказанные препараты, о
чем говорит увеличение времени пребывания и числа заходов в открытые рукава
лабиринта и угнетение эмоциональности в тесте «открытое поле». Введение
генистейна в сочетании с 17α-Э2 ОЭ самкам крыс повышало время пребывания и
число заходов в открытые рукава лабиринта по сравнению с контролем 2. По
сравнению с контролем 1 генистейн и 17α-Э2 незначительно увеличивали время
нахождения в открытых рукавах лабиринта и повышали число заходов в эти
рукава. Полученные результаты свидетельствуют о снижении степени тревожности
у ОЭ самок, что коррелирует с повышением норковой активности грызунов в тесте
«открытое поле». Однако комбинация генистейна с 17α-Э2 повышала
эмоциональную реактивность у грызунов, что выражалось увеличением груминга и
числа дефекаций по сравнению с контролями 1 и 2. Сравнивая эффекты
совместного введения генистейна в сочетании с 17α-Э2 и изолированного введения
генистейна в условиях дефицита эстрогенов, можно отметить, что более
выраженное анксиолитическое действие оказывала монотерапия генистейном, что
выражалось увеличением времени нахождения в открытых рукавах лабиринта и
снижением эмоциональности в тесте «открытое поле». При сравнении влияния на
тревожное поведение комбинированного введения генистейна с 17α-Э2 и
изолированного введения 17α-Э2 достоверных изменений зарегистрировано не
было. Совместное введение генистейна и 17β-Э2 снижало степень тревожности у
ОЭ самок, о чем свидетельствует увеличение времени нахождения и числа заходов
в открытые рукава лабиринта, а также отсутствие дефекаций в «открытом поле» по
сравнению с контролем 2. При сравнении хронического введения указанных
препаратов с контролем 1 отмечено повышение времени нахождения в открытых
рукавах лабиринта, числа заходов в них, увеличение норковой активности и
угнетение актов дефекации.
Таким образом, исследование показало, что наиболее отчетливое
анксиолитическое действие в условиях ОЭ оказывает изолированное введение
генистейна. Вместе с тем, очевидно, что 17α-Э2 и 17β-Э2 не восстанавливали
аффективный статус при дефиците эстрогенов, в то время как введенные в
комбинации с генистейном указанные препараты снижали тревожное поведение до
уровня интактных.
Влияние климадинона на поведение ОЭ самок крыс
У ОЭ самок крыс на фоне введения климадинона уменьшалось время
неподвижности по сравнению с контролем 2 и группой крыс, которым вводили
17α-Э2 или 17β-Э2; данный показатель был таким же, как в контроле 1 (Рис. 7), что
свидетельствует об антидепрессивном эффекте климадинона в условиях дефицита
эстрогенов. Климадинон на фоне 17α-Э2 или 17β-Э2 также оказывал
антидепрессивное действие по сравнению с контролем 2 и терапией 17α-Э2 или
17β-Э2. Однако такое сочетание препаратов сопровождалось менее выраженным
снижением времени неподвижности в тесте Порсолта по сравнению с
изолированным введением климадинона. Тем не менее, комбинации климадинона с
17α-Э2 или 17β-Э2 восстанавливали аффективный статус до уровня интактных
крыс. При тестировании ОЭ самок в «приподнятом крестообразном лабиринте» и
18
«открытом поле» климадинон проявлял анксиолитические свойства, вызывая
увеличение времени нахождения в открытых рукавах по сравнению с
контрольными ОЭ крысами, и достигал значений, наблюдаемых у интактных самок
(табл. 3). Эти данные коррелировали со значительным увеличением
исследовательской активности в тесте «открытое поле» (табл. 4). По сравнению с
введением 17β-Э2, климадинон более выраженно проявлял анксиолитические
свойства, повышая время нахождения в открытых рукавах лабиринта и
исследовательское
поведение
в
тесте
«открытое
поле».
Сравнивая
анксиолитические свойства 17α-Э2 и климадинона в условиях ОЭ, можно отметить,
что время пребывания и число заходов (особенно) в открытые рукава лабиринта
были выше у крыс, получавших один 17α-Э2, что свидетельствует о более
выраженном противотревожном действии указанного препарата, чем у
климадинона. Однако, эти результаты не подтвердились в тесте «открытое поле».
Время неподвижности, сек
250
*
*
*#
200
150
#$
#&
*#$&
100
50
0
1
2
3
4
5
6
7
Рис.7. Влияние климадинона на степень
депрессивного поведения у ОЭ самок крыс в
тесте Порсолта.
Столбиками показано время иммобильности
(в сек): 1-контроль 1; 2 – ОЭ (К 2); 3 –
ОЭ+17α-Э2; 4 – ОЭ+17β-Э2; 5 – ОЭ +
климадинон; 6 – ОЭ + климадинон + 17α-Э2;
7 – ОЭ + климадинон + 17β-Э2; * - различия
достоверны при р < 0,05 по сравнению с К 1;
# - различия достоверны при р < 0,05 по
сравнению с К 2, $ - различия достоверны при
р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок,
получавших 17α-Э2; & - различия достоверны
при р 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок,
получавших 17β-Э2.
При тестировании ОЭ самок в «приподнятом крестообразном лабиринте» и
«открытом поле» климадинон проявлял анксиолитические свойства, вызывая
увеличение времени нахождения в открытых рукавах по сравнению с
контрольными ОЭ крысами, и достигал значений, наблюдаемых у интактных самок
(табл. 3). Эти данные коррелировали со значительным увеличением
исследовательской активности в тесте «открытое поле» (табл. 4). По сравнению с
введением 17β-Э2, климадинон более выраженно проявлял анксиолитические
свойства, повышая время нахождения в открытых рукавах лабиринта и
исследовательское
поведение
в
тесте
«открытое
поле».
Сравнивая
анксиолитические свойства 17α-Э2 и климадинона в условиях ОЭ, можно отметить,
что время пребывания и число заходов (особенно) в открытые рукава лабиринта
были выше у крыс, получавших один 17α-Э2, что свидетельствует о более
выраженном противотревожном действии указанного препарата, чем у
климадинона. Однако, эти результаты не подтвердились в тесте «открытое поле».
Совместное введение климадинона с 17β-Э2 оказывало анксиолитическое действие
в условиях ОЭ. При сравнении с изолированным введением климадинона или 17βЭ2, совместное введение климадинона с 17β-Э2 повышало время нахождения в
открытых рукавах лабиринта и число заходов в эти рукава. Однако в условиях
«открытого поля» были получены разнонаправленные данные, не подтверждающие
результаты исследований в «приподнятом крестообразном лабиринте». Сочетанное
19
введение климадинона с 17α-Э2 ОЭ самкам крыс оказывало умеренный
анксиолитический эффект в условиях «приподнятого крестообразного лабиринта»
по сравнению с контрольными ОЭ крысами, о чем говорит повышение числа
заходов в открытые рукава лабиринта. Однако, в условиях «открытого поля» у ОЭ
самок, получавших климадинон в комбинации с 17α-Э2, норковая активность была
снижена, а эмоциональная реактивность повышалась по сравнению с контролем 2,
что свидетельствует о высокой стрессированности животных. Сравнивая
выраженность анксиолитического действия комбинированного введения
климадинона с 17α-Э2 и изолированным введением 17α-Э2, можно сделать
заключение, что 17α-Э2 эффективнее снижал уровень тревожности, о чем
свидетельствуют более высокие показатели анксиолитичности, полученные в
поведенческих тестах, чем в группе ОЭ крыс, которым вводили 17α-Э2 в сочетании
с климадиноном. По сравнению с изолированным введением климадинона,
совместное введение климадинона и 17α-Э2 ОЭ крысам оказывало
разнонаправленное действие на уровень тревожности в условиях «приподнятого
крестообразного лабиринта» и «открытого поля». Так, климадинон в сочетании с
17α-Э2 снижали время нахождения в открытых рукавах лабиринта и число
«обследованных» норок по сравнению с изолированным введением климадинона.
При этом, число заходов в открытые рукава было выше при комбинированном
введении указанных препаратов, а эмоциональная реактивность у грызунов в обеих
группах была одинаковой.
Влияние тамоксифена на концентрацию половых гормонов в сыворотке
крови самок крыс в условиях дефицита эстрогенов
Хроническое введение тамоксифена ОЭ самкам крыс снижало содержание
тропных гормонов в крови по сравнению с контролем 2 и с группой крыс,
получавших 17α-Э2 или 17β-Э2. При этом уровень ФСГ не отличался, а
содержание ЛГ уменьшалось по сравнению с контролем 1. Концентрация
периферических гормонов на фоне введения тамоксифена ОЭ самкам крыс
уменьшалась по сравнению с контролем 1, 2 и группой ОЭ животных, которым
вводили 17α-Э2 или 17β-Э2 (Рис. 8). Хроническое введение тамоксифена в
комбинации с 17α-Э2 ОЭ крысам не приводило к изменению уровня ФСГ в крови
по сравнению с изолированным введением тамоксифена или 17α-Э2, но было
значительно ниже, чем в контроле 2. Концентрация ЛГ на фоне введения
указанных препаратов ОЭ самкам снижалась по сравнению с контролем 2 и тем же
показателем в группе ОЭ самок, получавших только 17α-Э2. В то же время,
тамоксифен, вводимый с 17α-Э2, повышал у ОЭ животных концентрацию ЛГ по
сравнению с изолированным введением тамоксифена и контролем 1. Содержание Э
в крови при введении тамоксифена с 17α-Э2 ОЭ крысам незначительно
повышалось по сравнению с контролем 2 и изолированным введением
тамоксифена, в то время как при сравнении с контролем 1 и изолированным
введением 17α-Э2 уровень Э в крови у крыс в указанной группе был ниже.
Тамокисфен, введенный с 17α-Э2 ОЭ животным, выраженно повышал
сывороточную концентрацию П по сравнению с контролем 2 и изолированным
введением тамоксифена или 17α-Э2. Однако содержание П значений контрольных
интактных крыс не достигало. Хроническое введение тамоксифена в комбинации с
20
17β-Э2 ОЭ крысам снижало уровень ФСГ по сравнению с контролем 1, 2 и
группой крыс, получавших изолированное введение тамоксифена или 17β-Э2.
30
35
ЛГ, МЕд/л
ФСГ, МЕд/л
*#
30
*
25
20
15
*#
10
*#
#
*#&
*#$&
5
*
25
20
*#
15
#$
10
*#$&
5
0
0
1
2
3
4
5
6
1
7
А)
2
3
4
5
6
7
Б)
20
120
*#
100
80
П, нМ/л
Э, пг/мл
15
60
40
20
1
2
#$€
10
*#
5
#
*
0
В)
*#&€
* $&
*#
#€
*#&€
*
*
*#$&
0
3
4
5
6
1
7
2
3
4
5
6
7
Г)
Рис.8. Влияние тамоксифена на уровень половых гормонов в сыворотке крови у ОЭ самок крыс.
Столбиками показано содержание ФСГ (А), ЛГ (Б), П (В), Э (Г) в крови ОЭ животных
получавших 17α- или 17β-эстрадиол и тамоксифен: 1 – интактные самки (контроль 1); 2 – ОЭ
самки (контроль 2); 3 –ОЭ самки при введении 17α-эстрадиола; 4 – ОЭ самки, получавшие 17βэстрадиол; 5 – ОЭ самки при введении тамоксифена; 6 – ОЭ самки при введении тамоксифена и
17α-эстрадиола; 7 – ОЭ самки при введении тамоксифена и 17β-эстрадиола. * - различия
достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1; # - различия достоверны при p < 0,05 по
сравнению с контролем 2; $ - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой ОЭ
животных, получавших 17α-эстрадиол; & - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с
группой ОЭ животных, получавших 17β-эстрадиол; € - различия достоверны при p < 0,05 по
сравнению с группой ОЭ животных, получавших тамоксифен.
Содержание ЛГ в крови у ОЭ крыс на фоне тамоксифена, введенного с 17βЭ2, уменьшалось по сравнению с контролем 2 и изолированным введением 17β-Э2,
однако, при сравнении с контролем 1 и изолированным введением тамоксифена,
сывороточная концентрация ЛГ в указанной группе возрастала. Содержание Э в
крови у ОЭ самок крыс, получавших тамоксифен с 17β-Э2, возрастало по
сравнению с контролем 1, 2 и изолированным введением тамоксифена, но было
выраженно сниженным по сравнению с группой ОЭ крыс, которым вводили только
17β-Э2.
Влияние генистейна на концентрацию половых гормонов в
сыворотке крови у ОЭ самок крыс
Как видно из рисунка 9, хроническое введение генистейна ОЭ животным
снижало содержание ФСГ в крови до уровня интактных контрольных крыс.
Концентрация ЛГ так же снижалась по сравнению с контролем 2 и группой
животных, получавших 17α-Э2 или 17β-Э2, однако, до значений в контроле 1
21
концентрация ЛГ не снижалась. Уровень Э в сыворотке крови у ОЭ самок крыс на
фоне введения генистейна был минимальным по сравнению с контролем 1 и
группой ОЭ крыс, которым вводили 17α-Э2 или 17β-Э2, и не отличался от этого
показателя в контроле 2 (Рис. 9). Совместное введение генистейна с 17β-Э2 ОЭ
самкам крыс достоверно уменьшало содержание ФСГ и П по сравнению с
контролями 1, 2 и группой ОЭ животных, которым вводили 17α-Э2 или 17β-Э2.
Концентрация ЛГ у ОЭ самок на фоне введения генистейна в сочетании с 17β-Э2
снижалась по сравнению с контролем 2 и ОЭ животными, получавшими 17β-Э2, но
до уровня интактных контрольных крыс не уменьшалась.
35
30
*
*#
30
ЛГ, МЕд/л
ФСГ, МЕд/л
25
20
15
10
*#
*#
#$& #$
*#&€
5
25
*
20
*#$€
*
15
*#&
*#$
10
5
0
0
1
2
3
4
5
6
7
1
А)
2
3
4
5
6
7
Б)
16
120
*#
14
100
П, нМ/л
Э, пг/мл
12
80
60
40
20
*#&€
*
#
*$
0
8
*#
6
*
4
*
*$&
*$
*#&€
2
*$
0
1
В)
10
2
3
4
5
6
7
1
2
3
4
5
6
7
Г)
Рис.9. Влияние генистейна на уровень половых гормонов в сыворотке крови у ОЭ самок крыс.
Столбиками показано содержание ФСГ (А), ЛГ (Б), П (В), Э (Г) в крови ОЭ животных
получавших 17α- или 17β-эстрадиол и генистейн: 1 – интаткные самки (контроль 1); 2 – ОЭ
самки (контроль 2); 3 – ОЭ самки при введении 17α-эстрадиола; 4 – ОЭ самки при введении 17βэстрадиола; 5 – ОЭ самки при введении генистейна; 6 – ОЭ самки при введении генистейна и
17α-эстрадиола; 7 – ОЭ самки при введении генистейна и 17β-эстрадиола; * - различия
достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1; # - различия достоверны при p < 0,05 по
сравнению с контролем 2; $ - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с группой ОЭ
животных, получавших 17α-эстрадиол; & - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с
группой ОЭ животных, получавших 17β-эстрадиол; € - достоверны при p < 0,05 по сравнению с
группой ОЭ животных, получавших генистейн.
Содержание Э при введении генистейна с 17β-Э2 в условиях дефицита
эстрогенов было выше, чем в контролях 1, 2 и в группе крыс, получавших только
генистейн, но значительно ниже, чем при изолированном введении 17β-Э2 ОЭ
крысам (Рис. 15). Проведенное исследование показало, что изолированное и
совместное с 17α-Э2 или 17β-Э2 введение генистейна выраженно снижало
сывороточную концентрацию тропных гормонов по сравнению с контрольными
ОЭ самками и группой ОЭ крыс, получавших только 17α-Э2 или 17β-Э2. Эти
22
результаты
говорят
об эстрогеноподобном
воздействии
генистейна на функциональную активность гипофизарно-овариальной системы. В
то же время, хроническое введение генистейна ОЭ самкам не восстанавливало
содержание Э в крови по сравнению с контролем 1 и группой крыс, получавших
17α-Э2 или 17β-Э2. При совместном введении генистейна и 17α-Э2 концентрация Э
незначительно повышалась, но данный показатель был ниже, чем в контроле 1 и
при изолированном введении 17α-Э2. При комбинированном введении генистейна
и 17β-Э2 уровень Э повышался по сравнению с контролями 1, 2 и с группой
животных, где генистейн вводился изолированно, но был значительно ниже, чем
при изолированном введении 17β-Э2.
Влияние климадинона на концентрацию половых гормонов
в сыворотке крови у ОЭ самок крыс
30
30
20
15
*#
10
*#
*#$
*#
ЛГ, МЕд/л
ФСГ, МЕд/л
25
20
*#
15
*#$€
*#&€
*#$&
5
0
0
1
2
3
4
5
6
1
7
А)
2
3
4
5
6
7
Б)
120
25
*#
100
*#$&
20
80
П, нМ/л
Э, пг/мл
*
25
10
#$€
5
60
40
*#&
20
*
*$&
#
*#&€
15
10
*#
#&
*#
*
5
0
*#$€
0
1
В)
*#
35
*
2
3
4
5
6
7
1
2
3
4
5
6
7
Г)
Рис.10. Влияние климадинона на уровень половых гормонов в сыворотке крови у ОЭ самок
крыс. Столбиками показано содержание ФСГ (А), ЛГ (Б), П (В), Э (Г) в крови ОЭ животных
получавших 17α- и 17β-эстрадиол и климадинон: 1 – интаткные самки (контроль 1); 2 – ОЭ
крысы (контроль 2); 3 – ОЭ самки при введении 17α-эстрадиола; 4 – ОЭ крысы при введении
17β-эстрадиола; 5 – ОЭ самки при введении климадинона; 6 – ОЭ самки при введении
климадинона и 17α-эстрадиола; 7 – ОЭ самки при введении климадинона и 17β-эстрадиола; * различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1; # - различия достоверны при p
< 0,05 по сравнению с контролем 2; $ - различия достоверны при p < 0,05 по сравнению с
группой ОЭ животных, получавших 17α-эстрадиол; & - различия достоверны при p < 0,05 по
сравнению с группой ОЭ животных, получавших 17β-эстрадиол; € - различия достоверны при
p < 0,05 по сравнению с группой ОЭ животных, получавших климадинон.
23
Хроническое введение климадинона ОЭ животным снижало содержание ФСГ
в крови по сравнению с контролем 2 (Рис 10). При этом данный показатель был
выше, чем в контроле 1 и в группе ОЭ крыс, получавших 17α-Э2 или 17β-Э2.
Уровень ЛГ при введении климадинона ОЭ самкам выраженно уменьшался по
сравнению с контролями 1 и 2 и с группой ОЭ крыс, получавших 17α-Э2 или 17βЭ2. Сывороточная концентрация Э по сравнению с контролем 2 незначительно
увеличивалась, однако, данный показатель был ниже, чем в контроле 1 и группе
грызунов, которым вводили 17α-Э2 или 17β-Э2. Общий уровень П в крови на фоне
введения климадинона резко возрастал по сравнению с контролями 1, 2 и с ОЭ
самками, которые получали 17α-Э2 или 17β-Э2. Совместное введение климадинона
и 17α-Э2 ОЭ самкам крыс приводило к снижению сывороточной концентрации
ФСГ и П по сравнению с контролями 1, 2 и группой крыс, получавших климадинон
и 17α-Э2 изолированно. Значение ЛГ на фоне климадинона, вводимого с 17α-Э2
ОЭ грызунам, было ниже, чем в контроле 2 или при изолированном введении 17αЭ2. В то же время, данный показатель был выше, чем в контроле 1 и при
изолированном введении климадинона. Сывороточное содержание Э при введении
климадинона с 17α-Э2 ОЭ самкам крыс возрастало по сравнению с контролем 2 и
изолированным введением климадинона; в то же время, этот показатель был ниже,
чем в контроле 1 и при изолированном введении 17α-Э2.
Климадинон в комбинации с 17β-Э2 снижал содержание тропных гормонов в
крови по сравнению с контрольными ОЭ самками, но не до уровня интактных
крыс. Значения ФСГ и ЛГ при введении климадинона и 17β-Э2 существенно не
отличались от таковых в группе ОЭ крыс, получавших только 17β-Э2. В отличие от
крыс, получавших только климадинон, совместное введение животным
климадинона и 17β-Э2 не влияло на содержание ФСГ, тогда как сывороточный
показатель ЛГ возрастал. Концентрация периферических гормонов у ОЭ крыс,
получавших указанную комбинацию препаратов, возрастала по сравнению с
контролями 1 и 2. Однако, сравнивая содержание Э и П в крови в данной группе и в
группе ОЭ крыс, которым вводили только климадинон, можно отметить, что
значения Э увеличивались, а П снижались под влиянием климадинона с 17β-Э2. По
сравнению с изолированным введением 17β-Э2, сочетанное введение указанных
препаратов снижало содержание Э и повышало уровень П в сыворотке крови
животных. Приведенные результаты говорят о том, что изолированное введение
климадинона, как и его комбинаций с 17α-Э2 или 17β-Э2, снижало уровень
тропных гормонов в крови по сравнению с контролем 2 и в меньшей степени по
сравнению с изолированным введением 17α-Э2 или 17β-Э2.
В то же время, введение одного климадинона повышало уровень Э и П,
особенно, по сравнению с контролем 2. Совместное введение климадинона с 17αЭ2 или 17β-Э2 более выраженно повышало уровень Э в крови, чем введение одного
климадинона. Необходимо отметить, что у ОЭ крыс климадинон и его комбинации
с 17α-Э2 или 17β-Э2 не корректировали баланс половых гормонов до уровня
интактных животных.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенное исследование не оставляет сомнений в том, что СЭРМы
синтетического и растительного происхождения влияют не только на
24
периферические ткани и органы, но и вовлекаются в сложные механизмы
формирования эмоционального поведения как при естественном колебании
эндогенных половых гормонов, так и на фоне их дефицита. Данная работа создает
основу для внедрения в клиническую практику модуляторов ЭР с целью коррекции
аффективного статуса пациенток, подвергшихся гистерэктомии в репродуктивном
возрасте, а также во время климактерического периода и глубокой менопаузе.
Кроме того, все исследуемые препараты не вызывают пролиферации в
периферической репродуктивной системе, что позитивно отличает их от 17β-Э2.
Этот факт позволит в дальнейшем осуществлять поиск наиболее эффективных
комбинаций СЭРМ и 17β-Э2 для коррекции высшей нервной деятельности, баланса
половых гормонов при минимальном количестве побочных эффектов. Таким
образом, полученные данные о селективных эффектах различных комбинаций
терапии у животных с экспериментальной ОЭ и при циклических колебаниях
половых гормонов могут быть в дальнейшем использованы для разработки методов
коррекции эмоциональных расстройств при дефиците или дисбалансе эстрогенов.
ВЫВОДЫ
1. Колебания половых гормонов в течение эстрального цикла сопровождаются
изменением аффективного статуса. Фаза эструса и метэструса характеризуется
снижением выраженности депрессивноподобного поведения. Наименьший уровень
тревожности наблюдается в фазы покоя, характеризующиеся низким содержанием
эндогенного Э2, – эструсе и метэструсе.
2. Овариоэктомия у самок крыс приводит к развитию комплекса поведенческих
расстройств, включающих повышение депрессивноподобного поведения и
увеличение тревожности, которые можно охарактеризовать, как нарушение
аффективного статуса.
3. Хроническое введение 17α-Э2 не влияет на аффективное поведение и
фазность цикла у грызунов.
4. Хроническое введение 17β-Э2 интактным самкам приводит к нарушению
эстрального цикла (устойчивый эструс) и развитию аффективных расстройств. На
фоне ОЭ 17β-Э2 частично восстанавливает аффективный и гормональный статус.
5. Поведенческие эффекты тамоксифена у интактных самок зависят от фазы
полового цикла. Степень депрессивноподобного состояния снижается в стадии
покоя (ди- и метэструс). Анксиолитический и антидепрессивный эффекты
наблюдаются на фоне высокого содержания Э (проэструс), и у ОЭ животных при
изолированном введении. При среднем содержании Э в крови (диэструс)
тамоксифен проявляет анксиогенные свойства. В комбинации с 17β-Э2 эффекты
тамоксифена нивелируются, с 17α-Э2 показатели тревожности и депрессии
оставались такими же, как при изолированном введении тамоксифена.
6. Введение генистейна изолированно или в комбинации с 17α-Э2 или 17β-Э2
снижает показатели аффективных расстройств у интактных и у ОЭ крыс, наиболее
выраженно при изолированном введении у ОЭ самок.
7. У интактных и ОЭ самок климадинон в меньшей степени воздействует на
аффективное поведение, чем генистейн.
8. Введение 17β-Э2 резко повышает уровень эндогенного эстрадиола в крови.
Комбинированное введение 17β-Э2 с СЭРМ значительно снижает содержание
25
эндогенного эстрадиола в крови. Все СЭРМы
как
при
изолированном
введении, так и в комбинации с 17α-Э2 или 17β-Э2 выраженно снижают
содержание тропных гормонов в крови.
9. Сравнительный анализ показал, что наиболее яркое антидепрессивное и
анксиолитическое действие проявляет генистейн. В меньшей степени
анксиолитическое и антидепрессивное действие по сравнению с вышеуказанными
препаратами проявляет климадинон. Комбинации СЭРМ с 17α- или 17β-Э2 не
усиливают их поведенческие эффекты. Изолированное введение 17α- или 17β-Э2
не устраняют аффективные расстройства в той же степени, что и СЭРМ.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:
C.Б. Казакова «Влияние климадинона на поведение и гормональный статус
овариоэктомированных самок крыс» // Фундаментальная фармакология и
фармация в клинической практике: Материалы 2-ой Международной
Российско-Китайской конференции – 2006 – с. 63
C.Б. Казакова «Модулирующее влияние тамоксифена на пассивное обучение и
уровень половых гормонов у интактных и овариоэктомированных крыс-самок»
// Фундаментальная фармакология и фармация в клинической практике:
Материалы 2-ой Международной Российско-Китайской конференции – 2006 –
с. 64
C.Б. Казакова, Ю. О. Федотова, Н. С. Сапронов «Влияние тамоксифена на
тревожность у интактных и овариэктомированных самок крыс» // Эксперим.
Клин. Фармакол. - 2007. Т. 70. №. 5. С.3-8
Н. С. Сапронов, С. Б. Казакова «Влияние селективных модуляторов
эстрогеновых рецепторов синтетического и растительного происхождения на
депрессивноподобное поведение у самок крыс» // Бюлл.Экспер. Биол. – 2008.
Т. 146. №. 7. С. 80-83
С. Б. Казакова, Н. С. Сапронов «Сравнительный анализ эффектов эстрогенов и
тамоксифена на высшие функции мозга» // Эксперим. Клин. Фармакол. - 2008.
Т. 71. №. 6. С. 49-53
C.Б. Казакова «Эффекты генистейна на тревожно-депрессивное состояние при
дефиците эстрогенов» // Психофармакол. и биол. наркол. 2008. Т. 8, вып. 1-2.
С. 2364.