Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
advertisement
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РФ ТЮМЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ На правах рукописи УДК БОНДАРЕНКО ОКСАНА МИХАЙЛОВНА ФОРМИРОВАНИЕ ГЕНЕРАТИВНОЙ СИСТЕМЫ И ЕЕ МОДИФИКАЦИЯ ЭКОЛОГИЧЕСКИМИ ФАКТОРАМИ В РАННЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ СИГОВЫХ И ОСЕТРОВЫХ РЫБ 03.00.16 - экология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научные руководители: д.б.н. Мухачев И.С. к.б.н. Селюков А.Г. Тюмень – 2003 СОДЕРЖАНИЕ Стр. ВВЕДЕНИЕ ................................................................................................................ Глава 1. Обзор литературы ....................................................................................... 1.1. Особенности раннего онтогенеза у сиговых и осетровых рыб при различном температурном режиме ................................................ 1.2. Происхождение половых клеток ............................................................ 1.2.1. Ооплазматическая сегрегация и цитоскелет .............................. 1.2.2. Зародышевая плазма и детерминация линии половых клеток ............................................................................. 1.2.3. Структура зародышевой плазмы. Детерминанты половых клеток ............................................................................. 1.3. Морфологические особенности и ультраструктура ППК у рыб ......... 1.4. Обособление, миграция и концентрация первичных гоноцитов у рыб ...................................................................................... Глава 2. Материал и методы .................................................................................... Глава 3. Формирование линии половых клеток и модификация их параметров у пеляди в период эмбрионального развития .................... 3.1. Формирование линии половых клеток в эмбриогенезе пеляди............................................................................ 3.2. Трансформационная модификация ППК у эмбрионов пеляди под влиянием СИМП с момента оплодотворения .................. 3.3. Трансформационная модификация ППК у эмбрионов пеляди под влиянием СИМП с момента бластуляции ........................ Глава 4. Пластические признаки сиговых в раннем постэмбриогенезе при различных температурных режимах инкубации .............................. 4.1. Морфометрические параметры пеляди на ранних этапах постэмбрионального развития ................................ 4.1.1. Морфометрические параметры пеляди на этапе вылупления ..................................................................... 4.1.2. Морфометрические параметры пеляди перед переходом на активное питание ....................................... 4.2. Морфометрические параметры муксуна на ранних этапах постэмбрионального развития ................................ Глава 5. Формирование гонад у сиговых рыб в раннем посэмбриогенезе при различных температурных режимах инкубации ................ 5.1. ППК у пеляди в постэмбриональный период ....................................... 5.2. Соотношение уровня развития генеративных показателей и пластических признаков у пеляди в ранний постэмбриональный период .................................................. 5.3. ППК у муксуна в постэмбриональный период ..................................... 5.4. Соотношение уровня развития генеративных показателей и пластических признаков у муксуна в ранний постэмбриональный период .................................................. Глава 6. Модификация предличинок сиговых рыб под влиянием слабых импульсных магнитных полей ..................................................... 6.1. Модификация морфометрических параметров предличинок пеляди........................................................... 6.2. Модификация морфометрических параметров предличинок муксуна ............................................................................ 6.3. Модификация параметров ППК у пеляди в раннем постэмбриогенезе ................................................................... 6.4. Влияние СИМП на соотношение генеративного и соматического развития пеляди в ранний постэмбриональный период................................................................... 6.5. Модификация параметров ППК, соотношения генеративного и соматического развития у предличинок муксуна под влиянием СИМП .............................................................................. Глава 7. Формирование половых желез у стерляди в раннем онтогенезе в норме и под влиянием СИМП ............................................................. 7.1. Морфометрические характеристики стерляди на ранних этапах постэмбрионального развития ................................ 7.2. Становление репродуктивной системы у стерляди в постэмбриональный период ............................................ 7.3. Модификация морфометрических характеристик предличинок стерляди под влиянием СИМП ...................................... 7.4. Модификация генеративных показателей у предличинок стерляди под влиянием СИМП ............................................................. Глава 8. Обсуждение результатов ........................................................................... ВЫВОДЫ .................................................................................................................. Список литературы ................................................................................................... Введение Актуальность темы. В связи с большой ценностью многих видов рыб, как объектов промысла и товарного рыбоводства, никогда не снижался интерес к исследованиям экологической пластичности их гамето- и гонадогенеза. Проблема надежного функционирования репродуктивной системы у рыб, обитающих в Обь-Иртышском бассейне, особенно остро встает на фоне сложившейся экологической обстановки. Изменение ряда абиотических факторов, обусловленных многолетней динамикой погодных условий, имеющих тенденцию к потеплению климата, привело к увеличению численности и биомассы представителей бореального равнинного комплекса (окунь, плотва, ерш). Они являются не только серьезными пищевыми конкурентами, но и потребителями икры и молоди сиговых рыб. Высокий уровень загрязненности водоемов, естественных нерестилищ у многих видов рыб вызывает существенные аномалии в репродуктивной системе, ведущие к снижению генеративной функции. Помимо этого, большой прессинг на водные экосистемы оказывает селективный вылов ценных видов рыб. Все это не могло не сказаться на резком уменьшении их численности. Для эффективного восстановления запасов ценных видов рыб необходимы знание особенностей формирования репродуктивной системы, понимание этапов и стадий онтогенеза, целенаправленная, мягкая коррекция которых будет способствовать повышению репродукционного потенциала, в частности, и адаптационной пластичности организмов в целом. Изучение гаметогенеза и особенностей размножения сиговых и осетровых рыб проводились многими исследователями, ими накоплен большой фактический материал (Казанский, 1956, 1975; Персов, 1963, 1969, 1975; Вотинов, 1963а,б; Гинзбург, 1968; Бурлаков, Хапчаева, 1984; Селюков, 1986, 2002; Семенов, Федоров, 1997 и мн. др.). Однако большая часть работ посвящена изучению гаметогенеза при половом созревании и в ходе половых циклов. Тогда как исследованиям гаметогенеза на ранних этапах постэмбрионального развития уделялось несопоставимо меньшее внимание (Персов, 1975; Статова, Томнатик, 1970; Селюков, 1985; Федоров и др., 1991; Федоров, Бурлаков, 1993; Бурлаков, 2002). Становление линии половых клеток в эмбриогенезе сиговых почти не изучалось. Между тем, именно в этот период развивающийся организм проходит такие этапы, которые являются ключевыми для всего последующего онтогенеза (Белоусов, 1987, 1993) и определенное воздействие на которые может иметь судьбоносное значение для его морфобиологического статуса. Изучение формирования линии клеток зародышевого пути имеет и фундаментальное значение. Известно, что первичные половые клетки (ППК) имеют экстрогонадное происхождение (Турдаков, 1972; Персов, 1975; Айзенштадт, 1984; Макеева, 1992; McLaren, 1999), но до сих пор остается открытым вопрос о происхождении и моменте их обособления от сомы. Для многих видов рыб не изучены пути, темп и характер миграции первичных гоноцитов в область половых зачатков. Кроме того, анализ происхождения ППК у разных видов рыб является необходимым этапом для реализации идеи организации криобанков с целью сохранения генетической информации редких и исчезающих видов животных (Божкова и др., 1993). Для интенсификации товарного рыбоводства все большее распространение получают экспериментальные работы, направленные на выявления потенциальных возможностей организма при его адаптации к изменяющимся условиям. Это, в первую очередь, изучение влияния на генеративную систему факторов различной природы – механической, физической, химической (Чмилевский, 1985, 1997, 2000; Захарова, 1984, 1997 и др.). Широко внедряются и новые методы селекции, такие как химический и радиационный мутагенез, индуцированный гино- и андрогенез, экспериментальная полиплоидия, отдаленная гибридизация (Черфас, Цой, 1984; Андрияшева, 1988; Рекст, Полякова, 1990; Барминцев В.А., 1997; Богданова, 1997 и др). Но эти методы пока не получили широкого применения в рыбохозяйственной практике. Эксперименты, проводимые со слабыми искусственными магнитными полями, близкими к естественным полям или значительно ниже их по напряженности, свидетельствуют о высокой чувствительности к ним живых объектов и оказывают на них выраженное влияние (Пресман,1968; Сиротина и др., 1971; Дубров, 1974; Казначеев, Михайлова,1981; Пичугин и др., 1996, 1998 и др.). Исследования в этой области предполагаются достаточно перспективными, поскольку применение подобного подхода не требует внесения химических агентов (гормонов и др. БАВ) и не связано с использованием сильных физических воздействий, приводящих к различным аномалиям, в том числе – генетическим. Нами изучалось два вида внешних воздействий: сильные и слабые экологические связи (Казначеев, Спирин, 1991). Первые обусловлены влиянием на объекты температурного режима, так как преимущественно данным фактором определяется темп эмбриогенеза (Детлаф, Детлаф, 1960; Лебедева, Мешков, 1969; Детлаф, 1977, 1998; Богданов, 1997). Вторые представлены применявшимися в работах слабыми импульсными магнитными полями сверхнизкой напряженности, не превышавшей 0,00002 А/м (Солодилов, 2000, 2001), то есть на уровне естественных геомагнитных полей и ниже, что позволяет их классифицировать как сверхслабые. Ц е л ь и с с л е д о в а н и я . Изучение формирования линии половых клеток, характера соматического развития и соотношения между ними в раннем онтогенезе сиговых и осетровых рыб при разных температурных режимах и под влиянием слабых импульсных магнитных полей. Для достижения поставленной цели решали следующие задачи: 1. Изучить характер и темп миграции первичных половых клеток в эмбриогенезе пеляди. 2. Описать особенности становления линии половых клеток у пеляди и муксуна в период предличиночного развития. 3. Оценить видоспецифические особенности динамики морфометрических параметров и становление линии половых клеток у пеляди в раннем постэмбриогенезе при различных температурных режимах инкубации. 4. Оценить возможность модификации генеративных показателей в эмбриогенезе пеляди при воздействии слабыми импульсными магнитными полями как модели геомагнитных аномалий. 5. Исследовать особенности формирования генеративной системы и ее соотношение с уровнем развития пластических признаков под влиянием слабых магнитных полей у пеляди, муксуна и стерляди. Научная новизна. Впервые изучены темп и характер миграции первичных половых клеток в эмбриогенезе пеляди. Описаны видоспецифические особенности формирования гонад и пластических признаков в предличиночный период развития пеляди, муксуна и стерляди. Установлена корреляция уровня развития линии половых клеток с пластическими параметрами у пеляди и муксуна на ранних этапах постэмбрионального развития. Показана возможность модификации генеративной системы в раннем онтогенезе пеляди, муксуна и стерляди под влиянием слабых импульсных магнитных полей. Выявлены специфика формирования линии половых клеток и пластических параметров пеляди в условиях различных температурных режимов инкубации и влияние на этот процесс СИМП. Определены наиболее компетентные к проводимому воздействию этапы эмбриогенеза. Положения, выносимые на защиту: 1. В раннем онтогенезе сиговых рыб корреляция между генеративным и соматическим развитием не выявлена; характеризуясь видовой спецификой, она начинает проявляться к концу предличиночного этапа. 2. Температурный режим влияет на количество ППК, скоррелированность пластических признаков, эмбрионизацию, сказывается на сбалансированности генеративной системы и соматических параметров у сиговых рыб в раннем онтогенезе. 3. Воздействие слабыми магнитными полями на ранние этапы онтогенеза вызывает конструктивные модификации в формировании линии половых клеток. Практическая значимость. При выборе диагностических признаков для разработки индикаторов состояния репродукционного потенциала у молоди, морфометрические признаки предличинок сиговых рыб на этапе вылупления не могут являться производственных адекватным экспериментов критерием. стадии Установленные развития, сроки в и ходе режимы проведения обработки эмбрионов пеляди (Аракульский рыбоводный завод) и стерляди (Абалакский осетровый завод) слабыми импульсными магнитными полями могут послужить основой для разработки и внедрения данных методик в рыбоводство. Выявленное конструктивное влияние СИМП на формирование генеративной системы и сбалансированность пластических признаков в постэмбриональном периоде у пеляди, муксуна и стерляди целесообразно использовать в рыбоводных мероприятиях Апробация работы. Основные результаты работы докладывались и обсуждались на VII Международном симпозиуме «Биология и разведение сиговых рыб» (Мичиган, 1999); IV Всероссийском научно-производственном совещании «Биология, биотехника разведения и промышленного выращивания сиговых рыб» (Тюмень, 2001); VIII Международном симпозиуме «Биология и разведение сиговых рыб» (Рованиеми, 2002); V научно-практической конференции «Особо охраняемые природные территории Алтайского края и сопредельных регионов, тактика сохранения видового разнообразия и генофонда» (Барнаул, 2002); на заседаниях кафедры зоологии и ихтиологии Тюменского государственного университета (1999-2002). Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Особенности раннего онтогенеза у сиговых и осетровых рыб при различном температурном режиме Морфологические исследования эмбрионального периода или отдельных его этапов у с и г о в ы х проводили на сиге-пыжьяне (Юхнева, 1967), ряпушке (Лебедева, 1981), сиге-лудоге (Вернидуб, 1956; Лебедева, Завьялова, 1985), чире (Кугаевская, 1967; Юхнева, 1967; Лебедева, 1976; Богданов, 1987), байкальском омуле (Черняев, 1968, 1983), тугуне (Малышев, 1974). Имеются достаточно подробные сведения об эмбриогенезе пеляди (Кузьмин, 1963; Волкова, 1965; Лебедева, 1974, 1976, 1985, 1989; Галактионова, 1975) и в меньшей степени – муксуна (Юхнева, 1963). Нерест большинства сиговых рыб проходит в пресных водах, за исключением некоторых популяций сибирской ряпушки, нерестящихся в солоноватых водах морских лиманов и эстуариев (Решетников, 1980). Он приурочен к осенне-зимнему периоду, когда температура воды падает ниже +70С. Однако имеются весенне-нерестящиеся виды: баунтовские сиги, баунтовская ряпушка и некоторые популяции из озер Швеции (Скрябин, 1977; Решетников, 1980; Карасев, 1987). Сроки и условия нереста пеляди носят черты широкой адаптивной изменчивости: для речных популяций этого вида отмечают начало нереста при охлаждении воды ниже +5оС, а «пик» приходится на период с температурами +10С и ниже (Крохалевский, 1978). По данным В.Д.Богданова (1983а), нерест пеляди в верховьях р.Северная Сосьва начинается при падении температуры воды до +0,2...+0,8 0С. Начало нереста озерной пеляди в естественном ареале (оз.Ендырь, оз.Пяку-то) связано с охлаждением воды до +2,7...+0,30С, тогда как отдельные популяции озерной пеляди в Якутии приступают к нересту в сентябре при температуре воды +5...+90С (Венглинский, 1977). Для муксуна характерен более узкий диапазон нерестовых температур: +1...+20С (Вотинов, 1963), однако в условиях СевераЗапада России отмечается повышение температурного порога перехода самок муксуна в нерестовое состояние на 2-30С по сравнению с маточным водоемом (р.Обь) (Крупкин, 1975). Темп эмбрионального развития сиговых рыб также зависит, главным образом, от температуры (Юхнева,1963; Мешков, Лебедева, 1980; Лебедева, 1989; Черняев, 1981, 1982, 1983; Головкова, 1986). Одной из адаптаций сиговых рыб к существованию в субарктических и арктических водоемах стала, например, возможность развития икры во льду (чир) с температурой около 0 0С (Богданов, 1997). В естественных условиях для пеляди и муксуна в начале эмбриогенеза характерна температура воды около +10С, в дальнейшем она снижается и колеблется от +0,2 до +0,40С. При повышенной температуре инкубации процесс развития протекает быстрее, чем при низкой, однако существуют пороговые температуры развития и потому достижение оптимальной температуры инкубации на рыбоводных заводах решает успех искусственного разведения. Для муксуна такой температурой считается +0,2...+0,30С, пороговой – +40С, а при температуре +60С отмечается гибель зародышей (Юхнева, 1963; Мешков, Лебедева, 1980). Пелядь более термолабильна и способна нормально развиваться при среднесуточной температуре инкубации +0,2...+30С (Кузьмин, 1963). По данным О.А. Лебедевой (1981, 1989), для пеляди, инкубируемой в условиях Псковской области, характерны более высокие оптимальные температуры воды: от +1,5 до +50С. Низкие температуры оптимальной зоны способствуют увеличению роста зародышей, а повышенные температуры в пределах этой зоны развитие зародыша ускоряют, но несколько замедляют ростовые процессы. Вместе с тем, температура не на всех этапах эмбриогенеза является ведущим фактором. Как было показано Ж.А.Черняевым (1982, 1983), эмбриогенез байкальского омуля и байкальского озерного сига разделен на два периода. Первый включает этапы оплодотворения, дробления, бластулы и органогенеза – до начала пигментации глаз и образования эмбриональной системы кровообращения. В это время воздействие температуры свыше +0,50С вызывают замедление темпа развития. Экологически такое замедление обусловлено необходимостью предотвращения преждевременного вылупления личинок в зимний период в случае затяжной теплой осени. Второй период включает этапы эмбриональной системы кровообращения, жаберно-челюстного аппарата и вылупления, воздействие температур выше +0,50С на которые ускоряет эмбриогенез. Но главным фактором, регулирующим темп развития эмбрионов во второй период, является солнечная радиация. светопоглощающей Это подтверждается способностью (более 80%) резко возрастающей развивающейся икры, значительным развитием меланиновой пигментации на поверхности тела эмбриона; в этот период за 7-10 дней до поверхности нерестилищ доходит столько же световой энергии, сколько за весь предыдущий период инкубации (Черняев, 1983). В эмбриональном развитии пеляди от оплодотворения до вылупления различаются семь этапов и 14 стадий. Периодами высокой чувствительности (критическими) считаются оплодотворение, дробление, замыкание бластопора и вылупление. В эти периоды наблюдается наибольшая вариабельность зародышей по ряду признаков и свойств, темпам развития, снижается устойчивость, повышается элиминация, отражающаяся на численности потомства. Эмбриональная дивергенция наиболее ярко проявляется при вылуплении, когда выявляются как положительные свойства, так и дефекты эмбриогенеза (Мешков, Лебедева, 1980; Лебедева, 1989). В природных условиях длительность эмбриогенеза сиговых достигает 200 суток. Однако, в зависимости от конкретных условий, складывающихся на нерестилищах, вылупление эмбрионов приходится на разные календарные сроки, но всегда совпадает с распалением льда на водоеме. В искусственных условиях вылупление пеляди может происходить на 80 сутки развития при среднесуточной температуре +50С, и на 170 сутки – при среднесуточной температуре +0,20С. При оптимальных температурах эмбриогенез пеляди продолжается в среднем 150-170 суток (Лебедева, 1989). Длительность эмбрионального развития муксуна также обусловлено температурой и составляет в среднем 160-190 суток. В постэмбриональном онтогенезе рыб выделяют предличиночный период, который продолжается с момента вылупления до перехода предличинок на активное питание. Рядом авторов показано, что у только что вылупившихся личинок сиговых рыб морфологические признаки имеют разную степень развития и определенный характер варьирования (Мешков, Лебедева, 1977; Богданов, 1997). Отмечалось, что диапазон варьирования морфологических и физиологических показателей у личинок волховского, чудского, севанского сигов, сига-лудоги и пеляди очень широк, а на видовом уровне проявляется в еще большей степени (Лебедева, Завьялова, 1985). Так, при сравнении длины тела личинок сигов коэффициент вариации составлял 6-25,5%. При сравнении этого признака на подвидовом уровне оказалось, что наибольший диапазон изменчивости оказался у севанского сига (8,5-15,2мм), наименьший – у волховского сига (11,1-12,4мм). При этом следует иметь ввиду, что севанский сиг – результат гибридизации акклиматизированных в оз.Севане чудского сига и сига-лудоги (Решетников, 1980). Длина тела в меньшей степени подвержена изменчивости, чем размеры отдельных его частей. Изменчивыми также оказываются физиологические параметры личинок: двигательные реакции, частота сердечных сокращений, дыхательные движения и другие. Вместе с тем, на этапе вылупления проявляются те отклонения от нормального развития, которые накопились в течение всего эмбриогенеза и обусловлены как воздействием неблагоприятных экологических факторов – запредельные значения температур, рН, СО2 и другие, – так и хромосомными нарушениями (Кайданова, 1986; Горшкова и др., 1986; Головкова, 1986). Личинки сиговых рыб вылупляются на разных стадиях раннего онтогенеза (Мешков, Лебедева, 1977; Богданов, 1997; Сергиенко, 1995) и сразу же начинают вести активный образ жизни. На этапе вылупления у предличинок сиговых рыб хорошо развиты грудной пояс, органы зрения, челюстно-жаберный аппарат. Форма плавниковой каймы специфична для сиговых – в спинной части в ней имеется вилка определенной формы. Личинки прозрачны, кровеносные сосуды на желточном мешке развиты слабо. На теле личинок присутствуют меланиновые пигментные клетки. Характерная особенность сиговых рыб – отсутствие меланофоров на средней части тела и их концентрация на дорсальной и вентральной сторонах (Кузьмин, 1963; Юхнева, 1963; Богданов, 1983б). При характеристике личинок отдельных видов (Богданов, 1983а; Лебедева,1989) было показано, что длина тела личинок речной пеляди составляет 6,8-10,0 мм, масса – от 2,8 до 3,5 мг. Меланофоровая пигментация у этого вида выражена слабо – количество меланофоров наименьшее среди остальных сиговых. Рот у личинки открыт, он занимает нижнее положение, стенка кишечника с хорошо выраженной складчатостью. У личинок пыжьяна длина тела в этот период варьирует от 8,3 до 11,3 мм, масса – 4,9-6,5 мг. Меланофоровая пигментация у них хорошо развита. Наиболее интенсивная пигментация отмечается в области желточного мешка, кишечной трубки и в хвостовом отделе. Наиболее крупными среди сиговых рыб на этапе вылупления являются предличинки чира – 10,5-14,0 мм и массой 8,3-9,7 мг. Число меланофоров у этого вида наибольшее. Верх головы и туловища слегка зеленоватые. Плавниковая кайма начинается от 4-5 туловищного миомера. Продолжительность пребывания на этапе эндогенного питания у предличинок сиговых обусловлена видовыми особенностями и температурным режимом. Переход предличинок на активное питание происходит только в конце резорбции желтка. Эмбрионы сиговых рыб на этапе вылупления характеризуются различными запасами трофических веществ. У чира желток составляет 13,9% от массы тела в начале и 8,7% в конце периода вылупления; у муксуна уменьшается от 7,8 до 4,6%; у речной пеляди – от 2,6 до 1,9%. Муксун при +0,7...+0,80С расходует желток за 24-30 суток, речная пелядь – за 10-18 суток. При +4,00С эти показатели составляют у муксуна – 13-17, у речной пеляди – 7-10 суток (Сергиенко, 1995). Температура влияет не только на интенсивность утилизации желтка, но и на активность потребления корма при переходе на активное питание. В заводских условиях личинки муксуна начинают активно потреблять корм при температуре воды выше +4...+5 0С, пеляди – +80 (Сергиенко, Кугаевская, 1990). Таким образом, личинки разных видов сиговых рыб, наряду с общими морфологическими признаками, имеют характерные только для данного вида особенности в строении, которые, вероятно, обусловлены разным темпом зародышевого развития и, очевидно, как и среди остальных лососевидных, различным уровнем эмбрионизации при вылуплении. Особенности эмбрионального развития осетровых описаны достаточно полно (Гинзбург, 1959; Шмальгаузен, 1968; Гинзбург, Детлаф, 1969, 1975; Детлаф, 1977; Детлаф и др., 1981). Осетровые размножаются в реках и почти все относятся к рыбам, нерестящимся весной и в летние месяцы. Границы температур, при которых возможно получение икры стерляди, широко варьируют. Нерест стерляди в Волге и Каме наблюдается при температурах от 10,3-10,40С до 15-160С, в низовье Волги – при 8,9-17,00C. В Иртыше стерлядь нерестится при температуре воды 9,6-12,90C(Третьякова, 1998). Максимальные температуры, при которых еще наблюдается нерест, составляют 20,6-20,70C. Нерест прекращается при повышении температуры до 21 0C и при понижении до 9,00C (Детлафи др. 1981). Благоприятные для инкубации икры севрюги температуры лежат в пределах от 14-150C до 25-260C. Для зародышей русского осетра на Дону благоприятные температуры воды находятся в диапазоне от 100C до 20210C, а 250C является повреждающей (Детлаф, 1977). Ленский осетр идет на нерест при температурах не ниже 8-90C. По данным Н.Г.Никольской и Л.А.Сытиной (1978), развитие икры ленского осетра может проходить при температурах от 80C до 200C, но оптимальные – 11-170C. Таким образом, температуры от 9-100C до 20-210C, по-видимому, являются благоприятными для нереста и последующего развития зародышей большинства видов осетровых. Только для ленского осетра верхние повреждающие температуры несколько ниже. Эмбриогенез осетровых продолжается от 2-3 до 10 суток, в зависимости от температуры воды. При низких температурах быстрее развиваются холодолюбивые виды. При температуре воды ниже 150C осетр развивается быстрее севрюги, а при 180C и выше севрюга развивается быстрее осетра. Зародыши белуги при 130C развиваются с той же скоростью, что и эмбрионы осетра, а при 100C и 110C – быстрее (Детлаф и др., 1981). Как и у сиговых, у осетровых выделяют критические этапы развития. Так, высокая температура (около 300) в период оплодотворения и в начале дробления убивает яйцо, в конце гаструляции вызывает резкие нарушения развития, после начала пульсации сердца не вызывает заметных нарушений строения, а в период перед вылуплением вызывает параличи. В предличиночном периоде осетровых выделяют две стадии: от вылупления до начала активных дыхательных движений (1) и вторая – до перехода на активное питание (Шмальгаузен, 1975). Различия между предличинками разных видов на этапе вылупления незначительны. Предличинки имеют длину 9-10,5 мм. Их голова относительно туловища мала, ротовое отверстие отсутствует, зачатки усиков не выражены. Хвост предличинки на этой стадии еще протоцеркальный. Жаберных щелей еще нет, дыхание осуществляется поверхностью тела и посредством сети сосудов. Глаза практически не развиты (Чусовитина, 1963; Гинзбург, Детлаф, 1969; Детлаф, Гинзбург, 1981). В момент перехода предличинок на активное питание, в возрасте 10-14 суток, они имеют длину 17-18 мм. Спинной и анальный плавники еще не полностью отделены от хвостового. Появляются зачатки вторичных жаберных лепестков в первом ряду третьей жабры. Предличинки способны к хватательным движениям рта, начинают потреблять корм. 1.2. Происхождение половых клеток 1.2.1. Ооплазматическая сегрегация и цитоскелет Происхождение половых клеток в онтогенезе и особенности их строения – одна из центральных проблем биологии развития. В основе первичной дифференциации клеток зародыша лежит ооплазматическая сегрегация зрелого яйца. В классической эмбриологии термином «ооплазматическая сегрегация» принято обозначать процесс расслоения ооплазмы в результате перемещения ее составных частей. В ходе этого процесса намечаются основные элементы пространственной организации зародыша – осуществляется так называемый проморфогенез (Белоусов, 1980). Региональность, т.е. пространственная неоднородность цитоплазмы и мембраны яйца, возникает на ранних стадиях оогенеза задолго до оплодотворения. В неоплодотворенном яйце амфибий выявлен аномальновегетативный градиент в локализации внутримембранных частиц (Bluemink, Tertoolen, 1978), градиентные различия в латеральной подвижности мембранных липидов (Dictus et al., 1984) и полярность в локализации желточных Обнаружены и пигментных гранул пространственные (Elinson, различия в 1980; Дорфман, строении 1986). поверхности неоплодотворенного яйца мыши (Longo, Chen, 1985). Установлено также, что кортикальная цитоплазма поблизости от метафазного веретена свободна от кортикальных гранул, комплекса Гольджи и митохондрий (Nicosia et al., 1977). Эти различия также могут определять пространственную организацию зародыша. Предполагается, что в результате сегрегации ооплазмы при делениях дробления идентичные ядра оказываются в разнородном цитоплазматическом окружении, что определяет различный характер экспрессии генома и, в конечном счете, клеточную дифференцировку (Davidson, 1976; Костомарова, 1986; Прудовский, 1986). Впервые гипотезу о неравноценности цитоплазмы зрелого яйца и возможности влияния цитоплазмы на активность генов сформулировал Т.Морган (1937). Открытие детерминирующей роли цитоплазмы в развитии половых клеток в значительной мере способствовало возникновению этой гипотезы. В конце XIX века у личинок двукрылых (Chironomus sp.) на заднем полюсе яйца были описаны гранулы и высказано предположение об их отношении к развитию будущих половых клеток (Ritter, 1890; цит. по: Eddy, 1975). Факторы, детерминирующие судьбу отдельных зачатков эмбриона, известны в эмбриологии под названием «морфогенетические детерминанты» (Детлаф, 1990). Под детерминирующими факторами следует понимать такие, от которых зависит качественный сформулированного результат П.Г.Светловым (1978) развития. понятия Это вытекает детерминации: из это качественное определение судьбы системы, т. е. процессов, ведущих зачаток к состоянию, которое мы рассматриваем как конечное. Хотя существование морфогенетических детерминант можно считать доказанным, локализация их молекулярная неизвестны. морфогенетические По природа, мнению детерминанты способ функционирования некоторых представлены и исследователей, специфическими рибонуклепротеидами (РНП), к которым относятся, вероятно, половые детерминанты насекомых и амфибий (Райцина, 1982; Айзенштадт, 1984). В роли морфогенетических детерминант могут выступать также и белки (Whittaker, 1980). Выяснено, что иРНК и белки неравномерно распределены в цитоплазме яиц и зародышей различных животных: асцидии (Jeffery, 1983), кольчатых червей (Capso, Jeffery, 1982), амфибий (Capso, 1982; Gurdon et аl., 1985; Smith, 1986; Рябова, Васецкий, 1990). Известно, что цитоплазма содержит непрерывную структурную сеть, состоящую из микротрубочек, актиновых и промежуточных филаментов (цитоскелет). Пространственная неоднородность распределения РНП, скорее всего, и связана с системой цитоскелета. В частности, показана связь ядерного РНП и цитоплазматических полирибосом с филаментами (Lenk, Penman, 1977; Fulton et al., 1981; Иваненков, Минин, 1986). Кроме РНП с цитоскелетом связаны многие органоиды яйца: кортикальные и пигментные гранулы (Merriam et al., 1983), желточные гранулы (Colombo, 1983), мембранные органеллы (Shimizu, 1982). Цитоскелет определяет также перемещение субклеточных структур в ходе ооплазматической сегрегации. Сделан вывод, что перемещения ооплазмы осуществляются посредством кортикальной/субкортикальной кооперативного системы функционирования микрофиламентов, а ключевым элементом механизма ооплазматической сегрегации могут быть динамические перестройки микрофиламентов в яйце (Костюченко, Дондуа, 2000). По какой причине возникает неоднородность в системе цитоскелета яйца, неизвестно. Предполагают, что на пространственное расположение компонентов яйца влияют такие факторы, как сила тяжести, адгезия, силы электростатического притяжения или отталкивания и множество других факторов. Возможно, что полярность яйца устанавливается до появления различий в системе цитоскелета – неоднородность впервые может возникнуть в строении мембраны, распределении ионных каналов и уже затем трансформироваться в систему цитоскелета. По мнению Уайли (Wylie et al., 1986), поляризация первичных половых клеток зависит от элементов цитоскелета в зародышевой плазме (производных тела Бальбиани), локализующейся у поверхности вегетативного полушария и дающей в ходе делений дробления линию половых клеток. 1.2.2. Зародышевая плазма и детерминация линии половых клеток Одна из первых теорий наследственности – гипотеза пангенезиса – принадлежала Ч. Дарвину, который считал, что все соматические клетки участвуют в образовании половых клеток с помощью маленьких частиц – геммул. M.Нуссбаум был сторонником концепции экстрагонадного происхождения половых клеток, согласно которой половые клетки возникают на ранних стадиях эмбрионального развития вне области половых зачатков и затем мигрируют в формирующиеся гонады – идея “зародышевого пути”. В работах A.Вейсмана гипотеза зародышевого пути получила дальнейшее развитие, им была сформулирована “теория зародышевой плазмы”. Согласно гипотезе Вейсмана (Мизрукова, 1996), дифференцировка клеток в развивающемся организме связана с неравномерным распределением между дочерними клетками наследственного вещества, которое локализуется в хроматине ядер и представлено дискретными частицами – детерминантами. Вскоре после опубликования работ A.Вейсмана его теория нашла, как казалось, экспериментальное подтверждение в исследованиях T.Бовери. Он описал диминуцию (фрагментация хромосом) хроматина в клетках соматической линии лошадиной аскариды и раннее обособление первичных половых клеток (ППК). В 1936 году C.Г.Навашин предпринял попытку повторить работу Т.Бовери и не нашел диминуции хроматина (цит.: по Айзенштадт, 1984). По данным Roth и Moritz (1981), элиминационный хроматин у аскариды представляет собой сателлитную ДНК. В конце XIX века было опубликовано множество работ, в которых говорилось о ранней детерминации полового зачатка и о существовании независимой от сомы линии половых клеток у всех многоклеточных. В эти же годы Г.Ру была предложена мозаичная теория развития, согласно которой яйцо представляет собой мозаику предсуществующих зачатков, а развитие – распределения этих зачатков по клеткам. Эта теория просуществовала недолго, хотя и оказала положительное влияние на развитие экспериментальной эмбриологии. Разработанная Вейсманом теория зародышевой плазмы, как видно из исследования Е.Б.Мизруковой (1996), по-прежнему актуальна, хотя изменилось представление о зародышевой плазме. В настоящее время з а р о д ы ш е в а я п л а з м а рассматривается как специфический участок цитоплазмы яйца, содержащий факторы, детерминирующие развитие половых клеток. Термин «половые детерминанты», или «детерминанты клеток зародышевого пути», предложил Хегнер (Hegner, 1914, цит. по: Айзенштадт, 1984). Однако он вкладывал в него несколько иной смысл, чем современные авторы, называл детерминантами специфические для половых клеток структуры (их маркеры) и не отождествлял эти структуры с факторами, детерминирующими развитие половых клеток. Под о б о с о б л е н и е м половых клеток обычно понимается появление клеток, содержащих зародышевую плазму и имеющих иное, чем окружающие эмбриональные клетки, строение. Однако присутствие зародышевой плазмы еще не свидетельствует об обособлении клеток зародышевого пути, а характерные структурные признаки этих клеток могут появиться лишь спустя какое-то время после их обособления. Так, у Anura (бесхвостых амфибий) первичные половые клетки проходят определенный путь «соматического» развития в составе энтодермы, а у млекопитающих эти клетки – потомки стволовых клеток, присутствующих в эктодерме раннего зародыша, и не ясно, когда обособляется собственно гонобласт. Ньюкоп и Сутасурья (Nieuwkoop, Sutasurya, 1979) полагали, что об обособлении первичных половых клеток можно говорить только после начала в них специфической транскрипции, а так как об этом ничего не известно, детерминация половых клеток с молекулярной точки зрения пока не определена. Некоторые современные исследователи отрицают непрерывность зародышевого пути. Так, известный бельгийский зоолог П. Бриан (1968) рассматривал половое размножение как эквивалент бесполого. Другая точка зрения, сторонником которой является Т.Б. Айзенштадт (1975, 1984), утвердилась в науке, благодаря исследованиям Л.Бунура, А.Блеклера и ряда других исследователей. Согласно их мнению, половые клетки отличаются от соматических сохранением своей тотипотентности. Начало половым клеткам дают бластомеры, попадающие при дроблении в зону зародышевой плазмы, которая предохраняет их от вступления на путь соматической дифференцировки. Один из авторов этой протекторной гипотезы линии половых клеток П.Бунур (1968) считал, что в цитоплазме вегетативного полушария яйца Anura локализуются факторы, оказывающие тормозящее влияние на дифференцировку ядер. Известно, что половые клетки позвоночных вскоре после своего обособления продолжают сохранять контакт с энтодермой и ее производными. У бесхвостых амфибий гоноциты, локализуясь в желточной энтодерме, затем перемещаются в вентральную область зародыша, наиболее удаленную от серого полумесяца, т. е. они как бы избегают те зоны зародыша, где происходят наиболее активные превращения клеток, и сохраняют тесную связь с энтодермальными производными вплоть до сформирования медиального полового тяжа. В то же время ядра первичных половых клеток остаются тотипотентными на тех стадиях, когда энтодермальные клетки частично утрачивают способность поддерживать развитие зародыша при трансплантации в энуклеированное яйцо (Smith, 1965, цит. по: Айзенштадт, 1984). Не все исследователи принимают эту гипотезу, полагая, что зародышевая плазма не «защищает» ядра, а детерминирует их развитие в ядра половых клеток (Ijiri, Egami, 1976). Проблема усложняется, происхождения если первичных предположить, что половых клеток обособление еще более гоноцитов не сопровождается появлением в них специфической транскрипции, а, напротив, происходит в результате начинающейся специфической транскрипции в окружающих эмбриональных клетках. Другими словами, в развитии обособляются линии соматических клеток, в то время как тотипотентные половые клетки остаются без изменений (Айзенштадт, 1984). 1.2.3. Структура зародышевой плазмы. Детерминанты половых клеток С помощью электронной микроскопии в цитоплазме половых клеток у многих животных были обнаружены скопления тонковолокнистого или гранулярно-волокнистого имеющие пограничной материала, мембраны. окруженные Этот митохондриями материал имеет и не ядерное происхождение, на электронно-микроскопических снимках он виден внутри ядерных пор и поблизости от них в цитоплазме (Кегг, Dixon, 1974); существуют и авторадиографические доказательства его ядерного происхождения. Скопления этого материала получили в литературе различные названия: «интермитохондриальный цемент» (Balinsky, Devis, 1963; Odor, 1965), nuage (фр. – облачко) (Kessel, 1966), «хроматоидное тельце» (Comings, Okada, 1972) или «ядрышкоподобные тельца» (Kessel, 1969). Наиболее часто в зарубежной литературе используется термин «nuage» и, реже, «перинуклеарные тельца». При описании половых детерминантов, когда скопления ядерного материала достаточно велики и видны в световом микроскопе, они носят названия: «эктосомы» и «полярные гранулы» – у насекомых; «плотные тела» – у амфибий; «ядрышкоподобные тела» – у некоторых кишечнополостных и амфибий. Если структуры типа зародышевой плазмы или полярных гранул обнаруживаются в световом микроскопе лишь у некоторых видов, то перинуклеарные тельца – характерная структура половых клеток всех животных (Zissler, Sander, 1973; Delbos et al., 1982). Данные о химическом составе зародышевой плазмы и перинуклеарных телец довольно отрывочны и в какой-то мере противоречивы. Это объясняется тем, что в ряде случаев под названием перинуклеарных телец описывается материал ядрышка. ядрышкового Целый ряд происхождения авторов не скоплений исключает возможности фибриллярно-гранулярного материала, однако в этом случае не следует, по-видимому, использовать термин «перинуклеарные тельца» (Abirached, Brun, 1978). В составе перинуклеарных телец были обнаружены рибонуклеопротеиды у Nereis, морских ежей, насекомых, рыб и гидры (Dhainaut, 1970; Conway, 1971; Mahowald, 1971; Айзенштадт, 1974). Гистохимическими методами была выявлена РНК в полярных гранулах насекомых (Mahowald, 1971). Методом электронно-микроскопической авторадиографии было показано включение аминокислот в перинуклеарные тельца половых клеток головастика (Eddy, 1970). По мнению Колта (Kalt, 1973), обобщившего литературные данные о строении и химическом составе половых детерминантов, основной компонент этих структур – кислые белки. Во фракции полярных гранул из полоцитов дрозофилы был обнаружен уникальный белок с молекулярным весом 95000 и было высказано предположение, что он представляет собой структурный матрикс мРНК, которая кодирует синтез специфических белков, детерминирующих, в свою очередь, развитие половых клеток (Waring et al., 1977). Эта точка зрения согласуется с мнением, высказанным ранее Смитом и Икером (Smith, Ecker, 1970), о присутствии в зародышевой плазме в форме стабильных матриц нуклеиновых кислот, действующих как детерминанты линии половых клеток. Начиная с 70-х годов ХХ в., во многих работах высказывалось мнение, что перинуклеарные тельца – не только маркер половых клеток, но и детерминант их развития, т. е. эти структуры отождествлялись с факторами, детерминирующими линию половых клеток (Kalt, 1973; Beams, Kessel, 1974; Eddy, 1975). Однако при этом возникает ряд противоречий. Наиболее распространена точка зрения на перинуклеарные тельца как на скопление мРНК, которая кодирует синтез белков, детерминирующих линию половых клеток. Бимс и Кесл (Beams, Kessel, 1974) полагали, что в перинуклеарных тельцах накапливаются информосомы и здесь же может начаться трансляция. Возможно, мРНК принадлежит детерминирующая роль в обособлении линии половых клеток, но это не означает, что мРНК или другие детерминирующие факторы должны иметь структурное выражение. Детерминирующее влияние на развитие половых клеток таких структур, как перинуклеарные тельца, пока не доказано. Смещение полярных гранул центрифугированием нарушает процесс формирования полоцитов у насекомых, по-видимому, потому, что смещается и зародышевая плазма. У амфибий же присутствие плотных тел не ограничивается зоной зародышевой плазмы (Айзенштадт, 1984). Можно предположить, что выделение из ядра материала перинуклеарных телец может происходить под влиянием цитоплазматических факторов, концентрирующихся в зародышевой плазме и детерминирующих развитие половых клеток (Айзенштадт, 1975). Если принять точку зрения авторов, считающих, что зародышевая плазма имеет протекторную функцию и несет репрессоры, благодаря которым сохраняется тотипотентность ядер половых клеток, можно предположить, что выделение материала перинуклеарных телец из ядра – морфологическое выражение репрессии генома. 1.3. Морфологические особенности и ультраструктура ППК у рыб Происхождение половых клеток у рыб изучено довольно слабо. Как правило, изучение гаметогенеза, а также исследование ранних стадий формирования линий половых клеток у этих животных проводилось ихтиологами. Отчего эти работы носили преимущественно описательный характер. Экспериментальные эмбриологические работы практически отсутствовали из-за технических трудностей при использовании, например, трансплантации зародышевых тканей у эмбрионов рыб. Точность сведений о происхождении половых клеток в значительной мере зависит от критериев, которые были использованы авторами для их идентификации. Прежде всего, многие исследователи распознают первичные гоноциты по цитологическим признакам. Обнаружение у рыб ППК во время их обособления от соматических клеток обычными методами световой микроскопии представляет значительные трудности. Это обусловлено тем, что в них отсутствуют вещества, легко распознаваемые гистохимическими методами, которые можно было бы принимать за маркеры первичных половых клеток. У представителей других классов позвоночных такие маркеры ППК имеются: гликоген у ряда птиц и некоторых млекопитающих, щелочная фосфатаза у аксолотля, цыпленка, мыши (Ando, Fujimoto, 1983; Макеева, 1992 и др.). Однако у хрящевых ганоидов и ряда костных рыб в ППК обнаружены глыбки желтка, исчезающие у осетровых при переходе личинок на экзогенное питание (Персов, 1975). Исследование морфологии ППК в период их миграции у зародышей атлантического лосося проводилось Бои (цит.: Персов, 1975), балтийского – Г.М.Персовым (1975), у форели – Муром (1937), С.Lebrun et al (1982), Н.И.Захаровой (1984). ППК этого периода у тихоокеанских лососей рода Oncorhynchus – кеты, горбуши, нерки, кижуча и симы – были описаны Г.М.Персовым (1975). У такой крупной группы лососевидных рыб, как сиговые, исследований развития репродуктивной системы в эмбриональный период не проводилось. Имеются немногочисленные данные о состоянии половых желез и морфологии ППК у только что вылупившихся личинок реципрокных гибридов чудского сига и сига-лудоги (Леманова, 1965), у личинок рипуса (Гоголева, 1983), сига-пыжьяна, чира, муксуна, озерной и речной пеляди (Селюков и др., 1988), чира (Белоусов, 1991). Несколько более подробно описана генеративная система у личинок озерной пеляди (Рязанцева, Сакун, 1980; Селюков, 1985; 1987). Морфологию ППК в эмбриогенезе карповых рыб изучали Hamaguchi (1982), Timmermans и Taverne (1989), В.П. Божкова с соавторами (1993). ППК от остальных клеток зародыша отличаются своими крупными размерами. Например, у Micropterus salmoides они превосходят гемоцитобласты в 3,6 раза. Величина ППК у разных животных меняется от 10 до 22 мкм. У рыб размеры ППК также сильно варьируют: 9-12.8 мкм у Fundulus heteroclitus; 13-19 мкм – у Lebistes reticulatus; 10.4-20.5 мкм – у Salmo salar. У личинок рипуса и сига-лудоги ППК имеют в диаметре 17.1-19.3 мкм, у кеты в конце эмбриогенеза – 15.4 мкм (Персов, 1969, 1975), у радужной форели при вылуплении – 14.3 мкм, а через две недели после вылупления – 16 мкм, у байкальского омуля размеры ППК меньше – от 11.4 до 12.9 мкм (Захарова, 1984,1997). У только что выклюнувшихся личинок пеляди диаметр ППК составляет 13.5 мкм, через 2 недели – 14.5 мкм, а в месячном возрасте размеры ППК достигают 15.7 мкм (Селюков, 1987). Размеры ППК возрастают перед их вступлением в митозы. У атлантического и тихоокеанских лососей диаметр половых клеток достигает 30 мкм. Первичный гоноцит отличается четкими границами ядра и клетки, хорошей окрашиваемостью ядра и, наоборот, слабой – цитоплазмы, большими ее размерами, благодаря чему ядерно-цитоплазматическое соотношение, по сравненнию с соматическими клетками, резко выражено в пользу цитоплазмы. По периферии ядра отмечаются характерные скопления хроматина. Ядра ППК в определенные моменты гаметогенеза имеют различную конфигурацию – от многолопастной до округлой. По-видимому, существует известная последовательность в появлении ППК с ядром той или иной формы. Так, у семги и балтийского лосося в общем устанавливается одна и та же закономерность: первоначально наблюдается явное преобладание половых клеток с полиморфными ядрами, которые постепенно исчезают и в период митотических делений ППК часто обнаруживаются только с округлыми ядрами (Персов, 1975). У осетровых, как и у костистых рыб, ядра ППК в период миграции и, в особенности, в период концентрации тоже имеют округлую форму. Постепенно они приобретают полиморфный вид, затем количество полиморфноядерных клеток уменьшается. Многолопастность увеличивает поверхность ядра, что ведет к увеличению интенсивности ядерно-плазматического транспорта. Отличается тесная связь полиморфии ядер с физиологическим состоянием половых клеток (Персов, 1975). Помимо округлой формы клетка и ядро могут быть слегка вытянутыми. Это может быть связано с механическим давлением, оказываемым на формирующуюся гонаду желточным мешком (Захарова, 1983). Количество ядрышек в ядре варьирует: как отмечает Г.М.Персов (1975), у лососевых рыб одно, реже – два ядрышка, хотя у байкальского омуля можно насчитать 3-4 ядрышка; возможно, это свидетельствует о его полиплоидности, поскольку полиплоидизация имела место в эволюции многих видов лососевидных рыб (Захарова, 1997). У пеляди ядра ППК содержат 1-2 пиронинофильных ядрышка, окруженных глыбками хроматина (Селюков, 1985). У пыжьяна, чира и муксуна - 2-4 ядрышка (Селюков и др., 1988). У предличинок пеляди в первые сутки после вылупления цитоплазма ППК характеризуется низкой оптической плотностью, лишь в перинуклеарной области заметна незначительная базофилия. По мере концентрации ППК в области зачатка гонад происходит увеличение оптической плотности цитоплазмы, а перед вступлением ППК в митотический цикл базофилия цитоплазмы еще больше возрастает (Селюков, 1987). Ультраструктура ППК у рыб и других животных отличается от ультраструктуры соматических клеток. Наиболее характерным признаком служит наличие в цитоплазме электронно-плотного материала ядерного происхождения, расположенного между митохондриями. Как отмечалось, этот материал называют интермитохондриальный цемент, или перинуклеарные тельца. Обычно эти тельца настолько малы, что в световой микроскоп не видны. В ППК рыб обнаружены удлиненные цистерны эндоплазматической сети, малое число пор в ядерной мембране, у некоторых видов – присутствие пористых пластинок, образующихся почкованием от ядерной мембраны (Макеева, 1992). В период закладки гонад в цитоплазме ППК осетровых можно увидеть одно или несколько “околоядерных телец” разной формы. При окраске железным гематоксилином по Гейденгайну палочковидные тельца становятся интенсивно черными. Размеры “околоядерных телец” сильно варьируют, достигая иногда двух и более микрон, их расположение в цитоплазме не имеет строго определенного порядка. “Околоядерные тельца” у стерляди можно найти только в ППК, а у осетра и севрюги они сохраняются на более длительном отрезке гаметогенеза и встречаются еще в спермато- и оогониях. “Околоядерные тельца” хорошо видны также и при митотических делениях половых клеток. Их можно найти либо на одном из полюсов веретена, либо несколько в стороне, но всегда только в единственном числе (Персов, 1975). У осетровых в цитоплазме ППК видны многочисленные мелкие митохондрии с пластинчатыми кристами, рассеянные по всей цитоплазме рибосомы, уплощенные цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума и агранулярный ретикулум везикулярной формы, а также включения липидов и гликогена (Семенов и др., 1997). 1.4. Обособление, миграция и концентрация первичных гоноцитов у рыб Ряд исследователей считает, что половые клетки рыб могут иметь двойное происхождение: от рано обособившихся половых клеток и от соматических клеток герминативного эпителия (Персов, 1975). Первичные половые клетки появляются очень рано. Например, у Micrometrus aggregatus они отмечаются уже на стадии 5-го деления дробления (Персов, 1975). Однако у большинства видов – на стадии образования зародышевых листков в конце гаструляции, во внезародышевой энтомезодерме. У рисовой рыбки – медаки Oryzias latipes – и большеротого окуня Micropterus salmoides ППК отмечались незадолго до замыкания желточной пробки (завершения эпиболии) в задней части зародыша среди клеток энтомезодермы (гипобласта). В.С.Кауфман (1990) отмечал, что у круглоротых (Cyclostomata) местом первичного сосредоточения ППК является зона латеральной мезодермы во время ее обособления от энтодермы. У пластиножаберных (Elasmobranchii) эти клетки концентрируются во внезародышевой мезодерме и энтодерме, в месте соприкосновения энтодермы с желтком, у костных ганоидов (Holostei) – в периферической энтодерме или в вентро-латеральной части кишечной энтодермы. Для карпозубых Oryzias и Fundulus предположено энтодермальное происхождение ППК (Hamaguchi, 1982), а у карпа и розового барбуса ППК были выявлены в области мезодермы (Timmermans, Taverne, 1989). Первичные половые клетки после обособления от соматических мигрируют к месту закладки гонад. У тех видов, у которых обособление ППК связано с энтодермой (Amia calva, Lepisosteus osseus, Cottus bairdii, Oryzias latipes), миграционный путь проходит по вентральной стороне зародыша. У видов, обособление половых клеток которых протекает в недифференцированной энтомезодерме (Lophius piscatorius, Oncorhynchus keta, Lebistes reticulatus), миграция происходит через миотомы и, минуя энтодерму, в боковую пластинку, а оттуда – в зачаток гонады (Турдаков, 1972). В работах Г.М.Персова (1966, 1975), посвященных изучению формирования репродуктивной системы лососевых рыб, большое внимание уделено миграции ППК у рыб. Он отмечал, что у Lepidosteus, Fundulus, Oryzias, Cottus ППК мигрируют из энтодермы через область миотомов по спланхноплевре в боковые пластинки мезодермы, а оттуда в область закладки гонад. Миграция может быть пассивной и активной. Пассивное перемещение ППК происходит в результате морфогенетических движений зародышевых пластов, в составе которых эти клетки находятся. Так, Г.М.Персов обнаруживал экстрарегиональную локализацию ППК – в составе клеток почечных канальцев, куда они попадают в период гаструляции. Здесь они могут находиться довольно долго, пока не резорбируются (1975). Подобные факты нахождения ППК в стенке кишечника продемонстрированы у зародышей лосося И.П. Мигаловским (1971), пеляди – А.Г.Селюковым (1985). При активной миграции ППК часто приобретают амебоидную форму. Предполагается также, что выбор пути миграции осуществляется ППК под влиянием хемотаксиса (Кауфман, 1990). Существует точка зрения, что закладки гонад выделяют вещество – телоферон, привлекающий гоноциты (Райцина, 1981). Телоферон, по видимому, не обладает видовой специфичностью. Миграция ППК у разных видов рыб завершается в различные сроки. У стерляди в возрасте 12 суток большинство половых клеток уже находится в области закладки гонад – под вольфовыми протоками, на уровне участка средней кишки со спиральным клапаном. Следующий этап – концентрация первичных гоноцитов. У осетровых она совпадает с исчезновением желтка и с появлением половых складок. По одним данным это происходит в возрасте более трех недель, по другим – одного месяца. Концентрация ППК и начало формирования гонад у лососевых обнаружены в более ранние сроки онтогенеза, чем у осетровых. У пеляди концентрация ППК характеризуется значительной продолжительностью – до 30-32 суток после вылупления. При завершении концентрации и перехода некоторых клеток к митотическому делению, ППК отмечены на протяжении с 10 по 30 миомер, при этом их наибольшее количество сосредоточено на уровне 13-24 миомеров, где находилось 81,8% всех ППК (Селюков, 1985). Первые митозы ППК у зародышей горбуши найдены в возрасте между 9 и 15 сутками, у молоди осетровых митотические деления ППК начинаются в возрасте 40-90 суток (Персов, 1975). Переход ППК к митозам у личинок радужной форели происходит спустя 2 недели после вылупления, в возрасте 1217 суток (Захарова, 1984). При установлении межвидовой дивергенции сиговых рыб р.Coregonus на этапе вылупления А.Г. Селюков с соавторами (1988) в качестве критериев морфофункционального состояния ППК использовали их размеры, ядерно- плазматическое отношение, количество и диаметр ядрышек. В результате было показано, что видовая специфика в состоянии воспроизводительной системы у сиговых рыб на этапе вылупления отчетливо проявляется по степени варьирования количества ППК в области зачатков гонад, числу ядрышек в ППК и объему цитоплазмотических включений; эта тенденция нарастает в ряду пелядь - пыжьян - муксун - чир. Кроме рассмотрения раннего гаметогенеза рыб в норме, были проведены работы по его изучению на фоне различных экстремальных воздействий: рентгеновского облучения, различного температурного режима, закисления воды и т.д. (Мигаловский,1971; Персов, 1975; Чмилевский, 1990, 1997а,б, 2000; Захарова, 1984, 1990, 1997; Зеленников, 1997). Н.И.Захаровой (1984) было показано, что в эмбриогенезе радужной форели наибольшей радиопоражаемостью отличаются именно ППК, наиболее же чувствительным к пониженным температурам является период раннего онтогенеза, в котором большинство половых клеток также представлено ППК. Таким образом, большинство авторов считают, что обособление линии клеток зародышевого пути у животных происходит уже на начальных этапах эмбриогенеза, однако детерминирующих до судьбу морфогенетические сих пор половых детерминанты неизвестна клеток. природа факторов Предполагается, представлены что специфическими рибонуклепротеидами (РНП), в роли детерминант могут выступать также и белки. Не все исследователи согласны с тем, что зародышевая плазма детерминирует развитие ядер половых клеток, а полагают, что она «защищает» их от вступления на путь соматической дифференцировки. Эколого-морфологические особенности эмбрионального развития сиговых и осетровых рыб описаны достаточно полно, однако практически отсутствуют данные о формировании линии клеток зародышевого пути, немногочисленны сведения и об уровне развития генеративной системы в предличиночный период. Не изучены вопросы, связанные с соотношением развития генеративной и соматической системы на ранних этапах постэмбрионального развития. Глава 2. Материалы и методы исследования Исследования формирования репродуктивной системы в эмбриогенезе пеляди проводили в период с декабря 1996г. по май 1997г. на базе Аракульского рыбоводного завода (Челябинская область). Инкубация икры пеляди осуществлялась в аппаратах Вейса в диапазоне температур от 0,2 до 2,00С (рис.1). Для оценки возможного влияния слабых импульсных магнитных полей (СИМП), не превышающего по напряженности естественных геомагнитных полей, на формирование линии клеток зародышевого пути у пеляди, проводили обработку оплодотворенной икры и развивающихся эмбрионов посредством приборного комплекса из трех генераторов “Т-101” (ТУ 4237-001-29646556-99) с излучателями по технологии «Телос» (Солодилов, патенты №2155081, №2162736). Воздействие слабыми импульсными магнитными полями (СИМП) продолжалось 60-70 минут. При первой обработке использовали частоты активирующего режима (927/71 кГц), при повторных – поддерживающего (927/44 кГц). t0С 7 6 5 4 3 2 1 0 дата 9 24 XII 9 25 I 9 24 II 8 23 III 13 28 IV 12 V Рис.1. Динамика температурного режима инкубации пеляди в условиях Аракульского РЗ (1996-1997гг.) Для определения этапов раннего онтогенеза, компетентных к проводимому воздействию, выделяли стадии эмбриогенеза, в которые протекают наиболее существенные изменения статуса формирующегося организма (Кузьмин, 1963; Лебедева, 1974, 1989; Ротт, 1987; Сергиенко, 1995). В дальнейшем осуществляли поэтапный ввод в эксперимент очередных групп и, соответственно, вывод из эксперимента ранее обработанных партий. Первая серия работ началась 11 декабря 1996г. В качестве I-го этапа был принят этап оплодотворения и образования перивителлинового пространства. Была заранее проведена обработка воды из оз.Аракуль, а после активации ею осемененной икры, обработана и сама икра в 1 и 2 вариантах опыта – с момента оплодотворения до завершения процесса набухания. Объем обработанной икры составил 1,5 млн. шт. Этим вариантам соответствовал контроль I. У всех партий, поочередно вводимых в эксперимент, икра была получена от тех же производителей и оплодотворена в те же сроки. Во в т о р о й с е р и и 1,5 млн. штук эмбрионов пеляди, находящихся при завершении периода синхронных делений дробления – перед началом бластуляции, были обработаны в режиме активирующих частот 9 декабря 1996г. Эта икра была оплодотворена 3 декабря (вариант 3, контроль II). В дальнейшем проводилась их обработка в режиме поддерживающих частот (табл.1). 5-6 января 1997г., в момент закладки осевых органов, была проведена очередная обработка. На данной стадии введен из контроля очередной (4) вариант. После обработки из опыта был выведен 1 вариант. В возрасте 60 (1 серия) и 68 (2 серия) суток – 8 и 9 февраля – проведена очередная обработка обеих серий, приуроченная к дифференцировке отделов головного мозга, формированию зрительной, слуховой, обонятельной и дыхательной систем зародышей. Введен из контроля 5 вариант 22-23 марта, в возрасте 102 и 110 суток, проведена последняя обработка эмбрионов. В этот период проходило активное формирование сердечно- сосудистой, выделительной, пищеварительной систем и челюстного аппарата зародышей. В эксперимент из контрольной партии введен 6 вариант. Таким образом, было получено 6 опытных вариантов, которым соответствовали 2 контрольных партии (табл. 1). Исследования завершающих этапов миграции первичных гоноцитов и закладки гонад у пеляди и муксуна на ранних этапах постэмбрионального развития проводились в 2000-2001гг. Икру пеляди и муксуна за несколько дней до вылупления доставляли из Тобольского инкубационного цеха в лабораторию экологических исследований и реконструкции биосистем кафедры зоологии и ихтиологии ТюмГУ. Дальнейшее развитие предличинок происходило в холодильных установках. Для сравнительного анализа предличинок пеляди и муксуна на этапе вылупления использовали материал, зафиксированный 27 апреля 1987г. в Тобольском инкубационном цехе – от икры пеляди, полученной в октябре 1986г. на базе сбора икры на р.Рахтынья (Сев.Сосьва). Икра муксуна была получена от производителей, отловленных на р.Послон (Средняя Обь) в октябре 1986г. Температуры инкубации икры сиговых рыб из вариантов разных лет не различались (рис.2). Таблица 1 Схема обработки эмбрионов пеляди слабыми магнитными полями I серия (варианты) II серия (вариант) Дата №1 №2 №4 №5 №6 Дата №3 (возраст) (возраст) 11.12.1996* + + 09.12.1996** + (0 сут.) (6 сут.) 05.01.1997 х х + 06.01.1997 х (26 сут.) (34 сут.) 08.02.1997 х х + 09.02.1997 х (60 сут.) (68 сут.) 22.03.1997 23.03.1997 х х х + х (85 сут.) (93 сут.) Примечание: * - этап оплодотворения, ** - этап асинхронных делений дробления; + - активирующие частоты; х - поддерживающие частоты. 0 tС 7 6 5 4 3 2 1 дата 0 25 X 9 24 XI 9 25 9 XII 24 I 1987 8 23 13 28 12 27 12 II 2000 III IV V 2001 Рис.2.Динамика температурного режима инкубации икры в Тобольском инкубационном цехе и подращивания молоди в холодильной установке сиговых рыб в разные годы Для установления влияния слабых магнитных полей на развитие репродуктивной системы пеляди и муксуна проводили обработку предличинок на этапе вылупления. Контрольные и опытные партии содержались в сходных условиях. В 2002г. был поставлен эксперимент, предназначенный выявить специфику формирования генеративной системы у пеляди при повышенных температурах инкубации и влиянии СИМП на этот процесс. Развитие эмбрионов пеляди проходило в лабораторных условиях (в холодильной камере) с момента гаструляции (рис.3). Температуры инкубации колебались от 4 до 50С, и значительно превышали температуры в Тобольском инкубационном цехе (рис.4). Исследования формирования репродуктивной системы у стерляди в норме и под влиянием слабых магнитных полей проводили в 1999г. на базе Абалакского экспериментального осетрового рыбозавода. Рис.3. t0 С 6 5 4 Б 3 2 1 А 0 25 X 9 24 XI 9 25 XII 9 24 I 8 23 II 13 28 III 12 27 дата IV Рис.4. Динамика температурного режима инкубации пеляди в условиях Тобольского инкубационного цеха (А) и в холодильной уствновке (Б) (2002г.) Обработку стерляди осуществляли в эмбриогенезе на стадии бластуляции, гаструляции, нейруляции, а также на этапе вылупления. В 2000г. для морфометрического анализа пеляди и муксуна отбирали по 20 экземпляров на этапе вылупления и фиксировали в 4% формалине, а в 2001 – дополнительно проводили фиксацию контрольных и подопытных предличинок и через 14 суток после вылупления. В 2002г. фиксировали контрольных и подопытных предличинок пеляди на этапе вылупления и через 14 суток, перед переходом молоди к активному питанию. Предличинок измеряли по 16 морфометрическим параметрам (рис.5). Для морфометрического анализа стерляди также на этапе вылупления и в возрасте 10 суток отбирали по 20 предличинок из контроля и опыта и фиксировали в 4% формалине. Измерения на этапе вылупления проводились по 16, а перед переходом к активному питанию – по 26 пластическим признакам (рис.6, 7). Оценку дистанции расстояний между признаками, степень согласованного развития морфометрических параметров у предличинок пеляди, муксуна и стерляди осуществляли с помощью кластерного анализа. С этой целью в «1-r» (коэффициент корреляции Пирсона) использовали взвешенный метод “средней связи” (weighted pair group average) пакета STATISTICA, разработанного StatSoft, Inc.(Боровиков, 1998). Для г и с т о л о г и ч е с к о г о анализа в 1996-1997гг. после каждой спецобработки, а также 6 марта и 8 апреля из опытных и контрольных партий отбирали по 20 развивающихся эмбрионов пеляди и фиксировали в смеси Серра. В 2000-2002гг. подопытных и контрольных предличинок пеляди и муксуна по 10-20 экземпляров фиксировали в смеси Буэна на этапе вылупления, через 7 и 14 суток. С такой же периодичностью в 1999г. проводили фиксацию стерляди, используя для этого смесь Серра. Гистологические препараты с целью детального гисто- и цитоморфологического анализа изготавливали с применением стандартных гистологических методик (Ромейс, 1953). Эмбрионов, предварительно отделенных от желточного мешка, и предличинок проводили через спирты, спирт-изопропанол, хлороформ-парафин и заливали в парафин; резали в сагиттальной и фронтальной плоскостях. Полученные срезы толщиной 5-6мкм окрашивали железным гематоксилином по Гейденгайну. Проводили цитометрические исследования первичных гоноцитов, их ядер, ядерно-плазматическое отношение, составлявшие вместе с количеством ППК интегральный показатель уровня развития линии половых клеток у молоди. Для анализа и описания гистологических срезов использовали микроскоп «Biolar» Р-111 при увеличениях: окуляра - 10х, объективов - 10х, 20х, 40х, 100х. Фотографирование препаратов производили с использованием микрофотонасадки (МФН–12.У.4.2.) на фотопленку “Микрат-200”. Большая часть микрофотографий выполнена с применением цифровой фотокамеры (Nicon Coolpix 885) разрешением 3,21 Megapixels. Макрофотосъемку развивающихся эмбрионов проводили под бинокуляром МБИ-9 при разных увеличениях на цветную фотопленку (Fuji-200). РL HVS HC R ОС ОР H HM C LVS AA CL L1 L Рис.5. Схема промеров предличинок сиговых рыб: L - зоологическая (общая) длина тела; L1 -длина без хвостового плавника; AAантеанальное расстояние; H - наибольшая высота тела; HM - наименьшая высота тела; CL - длина хвостового стебля; BS - наибольшая толщина тела; C длина головы; R - длина рыла; OC - горизонтальный диаметр глаза; OP заглазничное расстояние; OO - межглазничное расстояние; HC - наибольшая высота головы; PL - длина грудного плавника; LVS - длина желточного мешка; HVS - высота желточного мешка; P – масса. H HVS R ОС ОР LVS AA CL L1 L Рис.6. Схема промеров предличинок стерляди на этапе вылупления: L - зоологическая (общая) длина тела; L1 -длина без хвостового плавника; AAантеанальное расстояние; H - наибольшая высота тела; HM - наименьшая высота тела; CL - длина хвостового стебля; BS - наибольшая толщина тела; C длина головы; R - длина рыла; OC - горизонтальный диаметр глаза; OP заглазничное расстояние; OO - межглазничное расстояние; HC - наибольшая высота головы; BC - наибольшая ширина головы; LVS - длина желточного мешка; HVS - высота желточного мешка; P – масса. AD DL DH C HM HC RS PL VL PV VA AL Рис.7. Схема дополнительных промеров предличинок стерляди в возрасте 14 суток: AD - антедорсальное расстояние; PV- пектовентральное расстояние; VA вентроанальное расстояние; RCR - расстояние от конца рыла до основания передней пары усиков; CR - длина наибольшего усика; RS - расстояние от конца рыла до хрящевого свода рта; SO - ширина рта; DL- длина основания спинного плавника; DH - высота спинного плавника; AL - длина основания анального плавника; PL - длина грудного плавника; VL - длина брюшного плавника; BF - ширина лба. Для установления степени согласованности развития морфометрических показателей и уровня генеративного развития предличинок пеляди и муксуна, их в 2001г. и в 2002г. перед приготовлением гистологических препаратов отмывали от фиксатора в проточной воде, производили промеры тех же морфометрических признаков, что и у объектов из формалиновых фиксаций. А затем проводили через спирты возрастающей концентрации, начиная с 50%ного этанола. В качестве показателя силы связи между числом, диаметром первичных гоноцитов, их ядер, ядерно-цитоплазматического отношения и пластическими признаками предличинок использовали коэффициент парной корреляции Бравэ-Пирсона (r). Общий объем исследованного материала приведен в таблице 2. Таблица 2 Объем исследованного материала Дата Вид пелядь муксун 1996-1997 пелядь стерлядь 1999 пелядь 2000-2001 муксун пелядь 2002 Итого 1987 Количество экземпляров, взятых на анализ: Морфометрический Гистологический Всего 70 50 20 70 50 20 180 180 140 80 60 210 110 100 210 110 100 140 80 60 480 540 1020 Глава 3. Формирование линии половых клеток и модификация их параметров у пеляди в период эмбрионального развития 3.1. Формирование линии половых клеток в эмбриогенезе пеляди Как и у всех костистых, яйцеклетки сиговых рыб относятся к полилецитальному типу с дискоидальным дроблением. Борозда первого деления дробления у эмбрионов пеляди появилась через 20-22 часа после оплодотворения, или согласно методике учета возраста зародыша – 2о, что соответствует продолжительности двух митотических циклов в период синхронных делений дробления (Ротт, 1987). Период синхронных делений дробления характеризуется низкой продолжительностью. В возрасте 6 суток (при среднесуточной температуре инкубации в этот период +1,2оС) зародыши находились на стадии асинхронных делений дробления (рис.8 а,б). К 26 суткам зародышевая пластинка была уже хорошо сформирована (рис.9). В данном возрасте, у эмбриона пеляди перед закрытием "желточной пробки", обычно формируется 4 сомита. Мы отмечали от 6 до 8 дифференцирующихся сомитов. Эпиболия завершилась, бластопор замкнулся, а на его месте сформировался купферов пузырек (рис.10). По мере удлинения энтодермального зачатка он смещается в каудальном направлении и со временем исчезает, а на его месте образуется анальное отверстие (Иванов, 1937). Гаструляция завершилась, осевые органы – нервная пластинка, хорда, мезодермальные тяжи и энтодермальная пластинка – уже сформированы. Обнаруживалось клеточное скопление в области будущего глазного бокала – начинали формироваться зачатки глазных пузырей. Отделы головного мозга, расположенные сразу за глазными пузырями, на данной стадии еще не были дифференцированы. На этом этапе развития у эмбрионов пеляди нами были отмечены первые первичные половые клетки. Все обнаруженные ППК располагались среди клеток формирующихся спланхнотомов (табл.3). Незначительное их Фото 8 9 10 количество, в среднем на один эмбрион приходилось 0,4 первичных гоноцита (табл.3), объясняется трудностью идентификации в массе недифференцированных клеток мезодермы. Несмотря на морфологические отличия (большие размеры, четкие границы ядра, оптически прозрачная цитоплазма), они имели большое сходство с мезодермальными клетками. На 34 сутки развития у зародышей пеляди продолжали формироваться глазные бокалы (рис.11). Нервная пластинка трансформировалась в нервный тяж, на спинной стороне которого обнаруживалось утолщение, соответствующее ганглиозной пластинке. Начиналось формирование отделов головного мозга. Вакуолизировались клетки хорды. Внутри спланхнотомов отмечались щелевидные полости, продолжалась дифференциация миотомов. Энтодермальная пластинка характеризовалась многорядностью. В ходе происходило дальнейших некоторое морфологических увеличение преобразований количества первичных зародыша гоноцитов. Изменялась их локализация: большую часть ППК отмечали среди клеток спланхнотомов (табл.3, рис.12 а,б), 20% первичных гоноцитов находилось на перибласте, в районе формирующегося нефротома. Таблица 3 Динамика распределения ППК в эмбриогенезе пеляди (Аракульский рыбоводный завод, январь–апрель 1997г.) Сутки от момента оплодотворения 26 Распределение ППК по регионам среднестатистического зародыша, % спланхнопериспланхно под вольф. половые том бласт плевра протоками складки 100 – – – – Х Sх n 0,40,2 5 34 80 20 – – – 1,00,6 5 60 8,3 75 – 16,7 – 2,40,5 5 85 – – 68,7 – 31,3 3,20,5 5 118 – – 28,1 37,5 34,4 6,40,6 5 Фото 11 12 Спустя месяц, в 60 суток, зародыш охватывал до 3/4 желточного мешка, над которым приподнимались его головной и хвостовой отделы (рис.13). Головной мозг дифференцировался на пять отделов, начиналась пигментация глазных бокалов (рис.14). Под хордой, в сформированной из “промежуточных масс” спинной аорте, присутствовали многочисленные гемоцитобласты – зародышевые форменные элементы крови. В районе головного отдела зародыша мезенхимные клетки формировали предсердие и желудочек сердца. Продолжалось формирование спланхнотомов. Первичные половые клетки продолжали миграцию. На данном этапе только незначительная часть ППК еще располагалась среди клеток спланхнотомов (8,3%), тогда как большее их количество концентрировалось в области перибласта (75%), а некоторые уже были отмечены под вольфовыми протоками (16,7%). Количество первичных гоноцитов продолжало возрастать, в среднем на один эмбрион приходилось 2,4 ППК (табл.3). У эмбрионов на 85 сутки развития, что в условиях Аракульского инкубационного цеха в 1997г. пришлось на 6 марта, глаза были интенсивно пигментированы, плавниковая кайма сформирована. На гистологических срезах хорошо видно продолжавшееся формирование отделов головного мозга, дальнейшее усложнение среднего мозга и мозжечка (рис.15). У более развитых особей дифференцировано сердце, головной мозг, глаза. Клетки хорды полностью вакуолизированы и ядра в них почти не отмечались. У зародышей ППК локализовались отдельными группами в области спланхноплевры (68,7%), а 31,3% уже достигли половых складок (рис.16). 20% отмеченных в этой области ППК характеризовались полиморфноядерностью (п/я), что, как ранее отмечалось, является морфологическим критерием повышенной биосинтетической активности ядра (Персов, 1975). Количество ППК в среднем на один эмбрион составило 3,20,5. Фото 13 14 15 16 К 118 суткам (8 апреля) у зародышей пеляди сокращались размеры желточного мешка, продолжалась пигментация тела, увеличивались жаберные крышки, развивался челюстной аппарат. В еще большей степени возрастали размеры мозжечка, были уже хорошо развиты отделы сердца (рис.17). Усложнялась морфология желудочно–кишечного тракта: образовывались складки слизистой желудка, во всех отделах кишечника была хорошо развита полость, формировалась печень. Количество ППК возрастало до 6,40,6 на один эмбрион. Большая часть клеток (37,5%) отмечалась под вольфовыми протоками, в области герминативных валиков находилось 34,4% первичных гоноцитов (рис.18). Таким образом, первичные половые клетки обнаруживаются среди клеток спланхнотомов у 26-суточных (16,2 градусо-дней) зародышей пеляди по характерным морфологическим признакам на начальной стадии сомитогенеза. По мере дальнейшего развития эмбрионов прослеживается динамика локализации ППК. Уже в 34 суток часть первичных гоноцитов располагалась в области перибласта, а на стадии пигментации глазных бокалов некоторое их количество мигрировало под вольфовы протоки. У эмбрионов первые ППК в области половых складок появлялись в 85 суток, за два месяца до вылупления. В течение эмбриогенеза отмечалось постепенное увеличение числа первичных половых клеток, но не вследствие их делений, поскольку картин митозов не было выявлено, а, скорее всего, по причине более отчетливого их распознавания среди дифференцирующихся соматических клеток. 3.2. Трансформационная модификация ППК у эмбрионов пеляди под влиянием СИМП с момента оплодотворения Первый цикл работ был осуществлен 7-8 и 11 декабря 1996 г. Проводили обработку икры в момент оплодотворения. Экспозиция продолжалась в течение всего периода набухания (65мин.). Нередко отмечались погибшие или неоплодотворенные икринки (рис.19), хотя в целом состояние эмбрионов было Фото 17 18 удовлетворительным. После оплодотворения и формирования в икринках I контрольной партии перивителлинового пространства каких-либо отклонений в их морфологии не было установлено (рис.20), несмотря на то, что они были получены от впервые созревших производителей низкого рыбоводного качества, – аномалии еще не успели проявиться. Первые первичные половые клетки отмечались среди клеток спланхнотомов у 26-суточных зародышей, перед закрытием бластопора. Во 2 опытном варианте в среднем на один эмбрион учитывали 2,8 ППК, а в соответствующем ему I контроле – 0,4 первичных гоноцита (табл.4). Кроме количественных различий, отмечали расхождение и по характеру локализации ППК. Большая их часть (71,4%) у подопытных эмбрионов находилась в области перибласта, тогда как в контрольной партии все обнаруженные гоноциты располагались среди клеток спланхнотомов. Морфологических различий в ППК между 2 вариантом опыта и I контролем не было выявлено. Спустя месяц, в 60 суток (8 февраля), когда у эмбрионов формировались головной мозг – дифференцировались отделы переднего, среднего, промежуточного и мозжечка, – частотой активации была обработана введенная в эксперимент 5 опытная партия, а остальные варианты – поддерживающей. Внешних различий зародышей в контроле (I) и опытных вариантах (1-2) не отмечали, не было установлено различий и у эмбрионов, находящихся на той же стадии развития в партиях, введенных в эксперимент 5 января (4 вариант) и 8 февраля (5 вариант) (рис.21, 22). Исследования, проведенные на гистологическом и цитологическом уровнях, позволили выделить позиции, по которым прослеживались отчетливые расхождения контроля с опытными вариантами. Во-первых, это проявлялось в уровне развития эмбриона в целом: в контроле первично-почечные (вольфовы) протоки, кишечная трубка, миотомы и спланхнотомы сформированы в меньшей степени, чем в опытных вариантах, то же отмечено для дифференцирующихся отделов головного мозга. Фото 19 20 21 22 Таблица 4 Распределение ППК у эмбрионов контрольной (I) и опытных (варианты 1-2; 4-6;) партий пеляди, модифицированных СИМП Распределение ППК по регионам среднестатистического зародыша, % Дата Возраст, сутки 5 янв. 26 8 фев. 60 6 март 85 8 апр. 118 Вариант спланхнотом перибласт спланхноплевра под вольф. протоками всего п/я половые складки всего п/я всего п/я всего п/я всего п/я Контр. 100 – – – – – – – – 2 Контр. 1 2 Контр. 1 2 28,6 8,3 15,3 5,9 – – – – – – – – – – 71,4 75 46,2 41,2 – – – – 16,7 28,6 – – – – – – – 68,7 33,3 – – – – – – – – – 16,7 38,5 29,4 – – 27,8 – – 60 – – – 20 4 – – – – 7,1 – 7,1 5 Контр. 1 2 – – – – – – – – – – – – – – – – – 28,1 16,7 2,6 – – – – 4 – – – – – 5 – – – – 6 – – – Х+Sx n всего п/я – 0,4 0,2 – 5 – – – 23,5 31,3 66,7 72,2 – – – – 20 25 – 2,80,3 2,40,5 2,60,8 3,40,4 3,20,5 2,40,9 4,00,3 – – 0,8 0,4 0,2 0,4 0,2 5 5 5 5 5 5 5 – 85,8 – 2,81,0 – 5 – 37,5 10 18,4 – 8,3 – 42,9 100 34,4 73,3 79,0 13,3 – 4,5 – 3,00,8 6,40,6 6,01,2 7,60,8 0,4 0,2 0,2 0,8 5 5 5 5 – – – 100 18,2 4,42,0 0,8 5 – – – – 100 10,7 5,62,3 0,6 5 – – – – 100 15 4,00,1 0,6 5 Во-вторых, несмотря на то, что у контрольных зародышей существенно, по сравнению с предыдущей датой, увеличилось количество первичных гоноцитов, их по-прежнему было меньше, чем в опыте, к тому же почти все они локализовались в области перибласта (табл.4). У подопытных зародышей во 2 варианте основную часть ППК наблюдали в районе перибласта, а некоторые достигали половых складок. У эмбрионов, выведенных из эксперимента (вариант 1), миграция первичных гоноцитов замедлялась, и в области зачатка гонад они не были выявлены (табл. 4). В обоих опытных вариантах (1 и 2) отмечали полиморфноядерные ППК. У эмбрионов из контроля такие клетки отсутствовали. Количество первичных гоноцитов у контрольных зародышей пеляди в 85 суток несколько возросло, они локализовались отдельными группами в области спланхноплевры, но значительная часть ППК достигала половых складок (табл. 4). В этот период у контрольных эмбрионов также были отмечены единичные полиморфноядерные клетки. У эмбрионов 1 опытной партии к этому времени численность ППК не изменялась, некоторое их количество отмечалось в области спланхноплевры, тогда как большая часть уже достигла половых зачатков (табл.4). У эмбрионов во 2 варианте большинство отмеченных первичных гоноцитов концентрировалось в регионе половых складок (рис.23, 24). Зародыши из 4 варианта, впервые обработанные на стадии, предшествующей закрытию бластопора, к 85 суткам имели несколько меньше ППК, чем контрольные. Сходное количество первичных гоноцитов отмечали и у зародышей 5 опытной партии, введенной в эксперимент в 60 суток – 3,0+0,8. Но при этом все клетки находились вблизи половых складок. За исключением эмбрионов в 4 варианте, у остальных встречались полиморфноядерные гоноциты (табл. 4). В 118 суток (8 апреля) после оплодотворения, меньше чем за месяц до вылупления, у эмбрионов контрольной партии большая часть ППК находилась в области половых складок, но все еще значительная доля клеток Фото 23 24 локализовалась в районе спланхноплевры (табл. 4). У подопытных из 1 варианта, при сходном с контролем количестве ППК, часть их локализовалась под вольфовыми протоками. Наибольшее число первичных гоноцитов установлено во 2 опытной партии, в которой на протяжении эмбриогенеза зародыши прошли четырехкратную обработку, начиная с этапа оплодотворения. Единичные ППК еще отмечались в районе спланхноплевры, но большая их часть локализовалась в области половых складок. Увеличивалось при этом и количество полиморфноядерных клеток (табл. 4). У введенных в эксперимент на последующих стадиях развития партий эмбрионов (4,5 и 6), в данном периоде практически все гоноциты располагались в области половых складок (табл. 4). При этом у зародышей отмечали значительное варьирование количества ППК при их невысокой численности. Очевидно, на стадии замыкания бластопора и последующих проведенная обработка у эмбрионов сопровождается лишь ускорением процесса формирования репродуктивной функции и поэтому в дальнейшем количество первичных гоноцитов уже не возрастает или замедляется. Проводимая обработка, не вызывая количественных изменений, стимулирует только функциональную активность клеток, обусловливая их полиморфноядерность. 3.3. Трансформационная модификация ППК у эмбрионов пеляди СИМП с момента бластуляции У зародышей во II контрольной партии и 3 опытном варианте в возрасте 34 суток зародыши были более развитыми. Более поздняя стадия развития зародышей характеризовалась и большим количеством выявленных первичных половых клеток. На один развивающийся подопытный эмбрион в среднем приходилось уже 7,8 ППК. Во II контроле, по сравнению с контролем I, первичных гоноцитов было несколько больше (1,0), но, как можно видеть, данный показатель почти в 8 раз ниже, чем в опыте (табл.5). При этом основная часть ППК (80%) во II контроле еще находилась среди клеток спланхнотомов и только 20% мигрировали в область перибласта. Первичные половые клетки подопытных зародышей в 3 варианте характеризовались более высокой миграционной подвижностью (рис. 25а,б). Если 12,8% ППК еще находилось в спланхнотоме и 69,3% было обнаружено в области перибласта, то 5,1% располагалось под вольфовыми протоками, а 12,8% гоноцитов уже локализовалось в области закладки гонад. Обнаружены и некоторые различия в морфологии первичных гоноцитов. Так, в 3 опытном варианте у 12,5% ППК отмечалась полиморфноядерность. У контрольных зародышей на данной стадии эмбриогенеза такие клетки отсутствовали. У 68-суточных эмбрионов в 3 опытном варианте возрастало количество отчетливо идентифицируемых ППК – в среднем 9,6 на один зародыш, в контроле – только 2,0 (табл.5). У подопытных 35,9% всех ППК располагалось под вольфовыми протоками, а 26,7% – в области половых складок, увеличивалось и количество полиморфноядерных ППК (рис.26 а,б). Гоноциты контрольных эмбрионов обнаруживались в области перибласта (50%), такое же количество клеток отмечалось в области половых складок. На данной стадии они имели обычные характеристики и полиморфноядерностью не отличались. Спустя месяц, в 93 суток после оплодотворения, количество первичных гоноцитов у эмбрионов контрольной партии возросло вдвое, большая их часть находилась в районе половых складок, но немалое количество еще не достигло этой области (рис.27 а,б). В отличие от контроля, ППК подопытных зародышей характеризовались повышенной динамикой – основная масса гоноцитов, в том числе полиморфноядерных, локализовалась в области закладки гонад (табл.5, рис. 28 а,б). Таблица 5 Морфо-динамические характеристики ППК эмбрионов контрольной (II) и опытной (вариант 3) партии пеляди, модифицированных СИМП Локализация ППК по участкам эмбриона в % Дата Возраст сутки 6 янв. 34 9 фев. 68 6 мар 93 8 апр. 126 Вариант спланхнотом перибласт спланхноплевра под вольф. протоками всего п/я половые складки всего п/я всего п/я всего п/я всего п/я Контр. 80 – 20 – – – – – – Опыт 12,8 – 69,3 13,3 – – 5,1 25 Контр. – – 50 – – – – Опыт – – 37,4 29,4 – – Контр. – – – – – Опыт – – – – Контр. – – – Опыт – – – Х+Sx n всего п/я – 1 0,6 – 5 12,8 20 7,81,2 0,8 5 – 50 – 20,3 – 5 35,9 6,7 26,7 2,0 5 – 33,3 – 66,7 – 5 2,0 – 18,8 – 79,2 1,2 5 – – – 27,8 20 72,2 – 3,60,9 0,2 5 – – – 4,2 – 95,8 – 9,60,5 0,6 5 31,3 9,60,4 – 4,21,2 15,8 9,60,7 Фото 25 26 Фото 27 28 В 126 суток у эмбрионов контрольной партии ППК распределялись в половых зачатках или под вольфовыми протоками (рис.29 а,б). Их общее количество было втрое меньшим, чем у подопытных зародышей, почти все гоноциты которых находились в области формирования гонад (рис. 30 а,б). Резюмируя вышеприведенные сведения о морфо-динамических характеристиках ППК у подопытных и контрольных особей в данной серии эксперимента, выделим в качестве существенной составляющей специфические цитометрические особенности гоноцитов подопытных эмбрионов. Так, в 34 суток у них были отмечены полиморфноядерные ППК, тогда как у контрольных такие клетки не выявлялись ни на одном из этапов эмбриогенеза. Значительно возрастало число полиморфноядерных гоноцитов у 68-суточных эмбрионов. Особенно резко оно увеличилось в области перибласта, где была отмечена и наибольшая концентрация ППК, а при завершении миграции в область половых валиков постепенно снижалась (табл. 5). Полученные результаты позволяют предположить, что обработка икры именно в период бластуляции приводит к резкому увеличению количества первичных гоноцитов, тогда как на других стадиях зародышевого развития спецобработка лишь стимулировала миграционную активность ППК, не приводя к увеличению их численности. Таким образом, основные различия в становлении линии половых клеток у подопытных и контрольных зародышей пеляди в течение всего эмбриогенеза состояли в 3-8 кратном их превышении, более интенсивной миграции ППК к зачатку гонад, высокой морфофункциональной активности ядра у подопытных. При этом морфологических различий в ППК эмбрионов сравниваемых партий не было установлено. проведенного Считаем воздействия, гетерохронии, как полученные инициирующего результаты проявление следствием такой важной эмбрионизация (Белоусов, 1987), по крайней мере, в отношении формирования линии клеток зародышевого пути. Фото 29 30 Глава 4. Пластические признаки сиговых в раннем постэмбриогенезе при различных температурных режимах инкубации 4.1. Морфометрические параметры пеляди на ранних этапах постэмбрионального развития 4.1.1. Морфометрические параметры пеляди на этапе вылупления Ответственным моментом в раннем онтогенезе является этап вылупления, в течение которого происходит резкое изменение состояния организма и его связи с окружающей средой. Своеобразие этого периода явилось причиной выделения в онтогенезе костных рыб особого, предличиночного, этапа развития, который начинается с выхода зародыша из оболочек и завершается переходом на активное питание. Проследим проявление некоторых морфометрических параметров у предличинок речной пеляди на этапе вылупления в разные годы. Так, в 1987г. длина предличинок пеляди в среднем составляла 8,20,05 мм и находилась в пределах от 7,2 мм до 9,4 мм. В 2000-2001гг. этот показатель был несколько выше: 9,50,06 мм и 8,80,07 мм, соответственно (табл.6). Значения большинства пластических признаков – длина желточного мешка (LVS), высота тела (H), длина головы (С), диаметр глаза (ОС), высота желточного мешка (HVS), высота головы (НС), длина грудного плавника (PL) – также были выше в 2000г., чем в 1987г. и несколько превосходили соответствующие показатели предличинок пеляди, зафиксированных в 2001г. То есть за прошедшие 13-14 лет морфологические характеристики предличинок стали несколько больше, что должно было давать определенные стартовые преимущества в последующем онтогенезе. Дополнительные промеры пеляди, проведенные на этапе вылупления в 2000 и 2001гг., показали, что и по таким пластическим показателям, как антеанальное расстояние (АА), длина хвостового стебля (CL), заглазничное расстояние (ОР) предличинки 2000 года превосходят особей, вылупившихся в 2001 году. Таблица 6 Морфометрические показатели предличинок пеляди на этапе вылупления по вариантам разных лет Дата 1987 (n=50) X S 2000 (n=20) min-max CV,% X S 2001 (n=20) min-max CV,% X S 2002 (n=20) min-max CV,% X S min-max CV,% Показатели, мм L1 8,2±0,05 7,2-9,4 4,5 9,5±0,06 9,3-10,0 2,0 8,8±0,07 7,9-9,7 4,1 9,9±0,14 9 -10,9 4,6 LVS 1,1±0,01 0,9-1,3 8,1 1,5±0,04 1,4-1,7 8,5 1,4±0,02 1,2-1,6 7,23 2,1±0,18 1,7-3,8 28,1 HVS 0,7±0,01 0,5-0,8 11,7 0,9±0,04 0,7-1,1 13,8 0,9±0,02 0,6-1,1 10,6 1,3±0,13 1,11-2,6 33,7 AA – – – 6,3±0,06 6,1-6,6 3,1 5,7±0,05 5,2-6,5 4,6 6,6±0,08 6,1-6,9 3,8 H 0,5±0,01 0,4-0,7 13,0 0,8±0,02 0,7-0,9 6,8 0,7±0,01 0,6-0,9 6,24 1,0±0,09 0,8-1,9 30,9 HM – – – 0,4±0,01 0,3-0,5 11,1 0,3±0,01 0,2-0,4 12,7 0,4±0,02 0,3-0,6 19,8 CL – – – 3,3±0,08 3,1-3,9 7,2 3,1±0,03 2,8-3,6 5,11 3,5±0,25 3,2-6,0 23,6 C 1,5±0,02 1,2-1,7 7,8 1,7±0,03 1,6-1,8 5,1 1,6±0,02 1,4-1,9 7,02 1,9±0,07 1,7-2,5 12,6 R – – – 0,3±0,03 0,2-0,5 34,0 0,3±0,02 0,2-0,5 25,1 0,3±0,02 0,2-0,4 17,2 OC 0,6±0,01 0,5-0,7 10,7 0,8±0,02 0,7-0,9 7,5 0,7±0,01 0,6-0,8 5,0 0,8±0,06 0,7-1,3 22,8 OP – – – 0,8±0,05 0,6-1,1 17,1 0,7±0,01 0,6-0,9 10,6 0,8±0,04 0,7-1,2 17,1 HC 1,0±0,01 0,9-1,3 8,1 1,4±0,04 1,2-1,6 9,0 1,2±0,02 1,0-1,4 6,93 1,5±0,1 1,3-2,5 22,4 ОО – – – – – – 0,6±0,01 0,5-0,8 7,2 0,9±0,03 0,8-1,0 11,2 ВS – – – – – – 0,4±0,01 0,3-0,5 11 0,7±0,05 0,6-1,2 23,0 PL 1,0±0,01 0,8-1,1 9,9 1,2±0,04 1,0-1,4 9,7 1,3±0,02 1,1-1,6 9,48 1,5±0,11 1,2-2,5 24,0 Р (мг) 3,3±0,15 2-4 16,7 3,8±0,11 3,0-4,0 9,2 2,2±0,06 1,9-3 13,9 – – – X X X X Сравнение изменчивости морфометрических признаков у предличинок пеляди указывает на меньшую вариабельность длины тела (коэффициент вариации не превышал 4,5 %), по сравнению с остальными пластическими показателями, характеризующимися высокой вариабельностью, что свидетельствует о большой степени асинхронности в процессе развития особей. В 2002 году, при инкубации икры пеляди в лабораторных условиях, вылупление произошло почти на месяц раньше (3 апреля), чем в условиях Тобольского инкубационного цеха в сравниваемые годы. Это обусловлено более высокими предличинки по температурами всем воды (4-50C). морфометрическим На этапе показателям вылупления значительно превосходили особей, зафиксированных в 1987г., а также были несколько крупнее, чем в 2001г. (табл.6). По сравнению с вариантом 2000г., предличинки в 2002г. отличались большими размерами тела (L1), антеанального расстояния (АА), хвостового стебля (CL) и желточного мешка (LVS и HVS). По таким характеристикам, как наименьшая высота тела (НМ), длина рыла (R), диаметр глаза (ОС), заглазничное расстояние (ОР) различия отсутствовали (табл.6). В 2002г. у пеляди отмечалась сильная изменчивость большинства пластических признаков. Наименьшей вариацией характеризовались длина тела (L) и антеанальное расстояние (АА), наибольшей – длина желточного мешка (HVS), что вызвано повышенной конверсией трофических веществ на пластический обмен при более высоких температурах воды. Для выявления степени согласованности рассматриваемых морфометрических признаков пеляди на этапе вылупления, был проведен кластерный анализ. На дендрограммах хорошо видно, что при вылуплении скоррелированность признаков у предличинок низкая (рис.31 А,Б). Вместе с тем, для личинок пеляди, зафиксированных в разные годы, можно выделить несколько признаков, по которым установлена тесная корреляция. Так, в 1987г. наибольшая согласованность (r = +0,62) была установленна между длиной (С) и высотой (НС) головы. С данными параметрами обнаруживала слабую связь (r = +0,45) длина желточного мешка (LVS). Столь же низкая корреляция (+0,43) отмечалась между диаметром глаза (ОС) и длиной грудного плавника (PL). Коэффициент парной корреляции между остальными параметрами не превышал +0,35. При этом связь длины тела со всеми остальными показателями была наименьшей (+0,13), что свидетельствовало о высокой асинхронности формирования признаков в ходе эмбриогенеза. У предличинок, зафиксированных в 2000г., отчетливо выделялись два кластера. В первый входят длина тела (L) и высота желточного мешка (HVS). Коэффициент корреляции между ними составляет +0,53. Во второй группе наибольшая связь выявлена между высотой тела (Н) и высотой (НС) головы (+0,87). С данными морфометрическими признаками столь же тесно связаны длина (LVS) желточного мешка (+0,73) и длина грудного (PL) плавника (+0,66). В варианте 2001г. корреляция между признаками у предличинок также была низкой (рис.32А). Наибольшая связь (+0,63) обнаружена между длиной головы (C) и ее высотой (HC). Но в отличие от предличинок, вылупившихся в 1987г., с данными показателями связана высота желточного мешка (HVS). Напротив, длина желточного мешка (LVS) обнаруживает слабую связь (+0,47) с длиной тела (L). У предличинок варианта 2002г., проинкубированных при более высоких температурах воды, при вылуплении наблюдалась сильная связь всех морфометрических признаков (рис.32Б). Наиболее тесно (r = +0,97) коррелировали высота тела (Н) и головы (НС), длина (LVS) и высота (HVS) желточного мешка. С данными показателями сильно связана (+0,95) длина грудного плавника (PL). Также высоко (+0,95) скоррелированы длина головы (С) и диаметр глаза (ОС). Длина тела (L) и антеанальное расстояние (АА) со всеми пластическими признаками связаны средней обратной связью (–0,6). Дендр 31 Дендр 32 Таким образом, проведенный на этапе вылупления морфометрический анализ пеляди показал существенное расхождение параметров предличинок разных лет. В 2000г. все показатели были значительно выше, чем в 1987г. и несколько превосходили соответствующие параметры предличинок в 2001г. На этапе вылупления у пеляди отмечается слабая согласованность морфометрических показателей. В 1987 и 2001гг. выявлена тесная корреляция только между линейными характеристиками головы. При более высоких морфометрических параметрах предличинок в 2000г. наблюдалась и более тесная связь между ними. Параметры головы между собой согласованы слабо, однако высота головы (НС) сильно скоррелирована с высотой тела (Н). Установленная связь между длиной тела (L) и высотой желточного мешка (HVS) свидетельствует о высокой согласованности их вариации. Сравнительно высокие температуры воды в искусственных условиях содержания обусловили повышенную интенсивность морфогенеза. При этом отмечена и тесная скоррелированность между морфометрическими параметрами. Однако сильная изменчивость последних свидетельствует о неоднозначной реакции зародышей на подобные условия инкубации. 4.1.2. Морфометрические параметры пеляди перед переходом на активное питание Для изучения динамики морфометрических параметров в ранний постэмбриональный период, в 2001 и 2002гг. осуществлялись промеры личинок пеляди спустя две недели после вылупления, перед их переходом на активное питание. На данном этапе развития у молоди варианта 2001г. повышалась масса (3,40,12 мг), увеличивались такие линейные параметры, как общая длина тела (L) и антеанальное расстояние (АА), а высота тела (Н) и длина хвостового стебля (СL) возрастали незначительно (табл.7). Практически все морфометрические параметры головы – длина рыла (R), диаметр глаза (ОС), заглазничное расстояние (ОР), межглазничное расстояние (ОО), наибольшая ширина головы (ВС) – не изменялись. Незначительно увеличивались длина (С) и высота (НС) головы. Размеры желточного мешка (HVS, LVS) уменьшались, что связано с интенсивной утилизацией желтка (табл.7). Таблица 7 Динамика морфометрических характеристик предличинок пеляди в 2001г. Дата Показатели, мм 27 апреля (n=20) X S min-max X 11 мая (n=20) CV,% X S min-max CV,% X L 9,30,07 8,3-10,2 0,93 4,2 9,90,14 9,0-10,5 0,51 5,2 L1 8,80,07 7,9-9,7 0,36 4,1 9,40,13 8,5-10,0 0,48 5,2 LVS 1,40,02 1,2-1,6 0,10 7,2 0,960,04 0,7-1,1 0,16 16,6 HVS 0,90,02 0,6-1,1 0,09 10,6 0,60,02 0,5-0,7 0,07 11,9 AA 5,70,05 5,2-6,5 0,26 4,6 6,10,08 5,5-6,5 0,29 4,8 H 0,70,01 0,6-0,9 0,05 6,2 0,80,01 0,7-0,9 0,05 6,9 HM 0,30,01 0,2-0,4 0,04 12,7 0,40,01 0,4-0,5 0,03 9,5 CL 3,10,03 2,8-3,6 0,16 5,1 3,20,05 2,7-3,5 0,19 6,1 C 1,60,02 1,4-1,9 0,11 7,0 1,70,02 1,5-1,8 0,07 4,4 R 0,30,02 0,2-0,5 0,08 25,1 0,30,02 0,2-0,4 0,07 19,9 OC 0,70,01 0,6-0,8 0,03 5,0 0,70,01 0,6-0,8 0,04 5,2 OP 0,70,01 0,6-0,9 0,08 10,6 0,70,01 0,6-0,8 0,06 7,6 HC 1,20,02 1,0-1,4 0,08 6,9 1,30,02 1,2-1,5 0,06 4,4 ОО 0,60,01 0,5-0,8 0,04 7,2 0,60,02 0,4-0,7 0,09 16,4 ВS 0,40,01 0,3-0,5 0,05 11,0 0,40,01 0,38-0,43 0,03 6,5 PL 1,30,02 1,1-1,6 0,13 9,5 1,50,03 1,3-1,6 0,11 7,3 Р (мг) 2,20,06 1,9-3 0,31 13,9 3,40,12 3-4 0,45 13,3 В варианте 2002г., через две недели после вылупления, так же как и в 2001г., у личинок наблюдалось значительное увеличение длины тела (L) и антеанального расстояния (АА). Длина (LVS) и высота (HVS) желточного мешка существенно варьировали, что сокращались, однако свидетельствовало о данные разной параметры степени сильно интенсивности утилизации желтка различными предличинками. Средние значения остальных морфометрических характеристик либо слабо возрастали, либо оставались на прежнем уровне (табл.8). Таблица 8 Динамика морфометрических характеристик предличинок пеляди, проинкубированных при повышенных температурах воды (2002г.) Дата Показатели, мм 3 апреля (n=15) X S min-max X 17 апреля (n=15) CV,% X S min-max CV,% X L1 9,9±0,14 9 -10,9 0,46 4,6 10,6±0,14 9,8-11,2 0,46 4,3 LVS 2,1±0,18 1,7-3,8 0,59 28,1 1,0±0,23 0,1-1,8 0,73 73,9 HVS 1,3±0,13 1,1-2,6 0,44 33,7 0,6±0,13 0,01-1,1 0,42 74,5 AA 6,6±0,08 6,1-6,9 0,25 3,8 7,3±0,12 6,7-7,9 0,39 5,4 H 1,0±0,09 0,8-1,9 0,31 30,9 1,0±0,04 0,8-1,2 0,12 12,2 HM 0,4±0,02 0,3-0,6 0,08 19,8 0,4±0,0 2 0,3-0,5 0,05 11,5 CL 3,5±0,25 3,2-6,1 0,84 23,6 3,4±0,06 3,1-3,8 0,20 5,9 C 1,9±0,07 1,7-2,5 0,23 12,6 2,0±0,02 1,9-2,1 0,07 3,5 R 0,3±0,02 0,2-0,4 0,06 17,2 0,3±0,01 0,2-0,4 0,05 13,8 OC 0,8±0,06 0,7-1,3 0,18 22,8 0,9±0,02 0,8-1,0 0,06 6,7 OP 0,8±0,04 0,8-1,2 0,14 17,1 0,9±0,02 0,8-1,0 0,05 5,4 HC 1,5±0,1 1,3-2,5 0,33 22,4 1,4±0,01 1,4-1,5 0,04 2,8 ОО 0,9±0,03 0,8-1,0 0,10 11,2 0,8±0,03 0,7-0,1 0,10 12,2 ВS 0,7±0,05 0,6-1,2 0,17 23,2 0,6±0,04 0,5-0,8 0,11 17,8 PL (мг) 1,5±0,11 1,2-2,5 0,36 24,0 1,7±0,04 1,4-1,8 0,12 7,5 Кластерный анализ показал изменение скоррелированности признаков у двухнедельных личинок (рис.33 А, Б). Но при содержании предличинок в разных температурных режимах характер и величина корреляции между параметрами существенно расходятся. В варианте 2001г. корреляция возрастала (рис.33А) – длина хвостового стебля (CL) проявляла сильную связь (r = +0,7) с длиной тела (L) и антеанальным расстоянием (АА). С данными показателями обнаруживали среднюю связь (+0,62) длина головы (С) и заглазничное (ОР) расстояние (+0,5). Скоррелированы и такие морфологические параметры, как высота тела (Н) и длина грудного плавника (PL), а также ширина тела (BS) и наименьшая высота тела (НМ). Тесно связаны (+0,82) между собой длина (LVS) и высота желточного мешка (HVS), тогда как с другими пластическими признаками они проявляли сильную отрицательную связь (–0,7). В варианте согласованности 2002г. у двухнедельных морфометрических личинок параметров, пеляди напротив, степень понижалась (рис.33Б), однако они по-прежнему оставались более тесно скоррелированы, чем у молоди на данном этапе развития в 2001 году. Длина тела (L) тесно связана (+0,94) с диаметром глаза (ОС). А антеанальное расстояние (АА) проявляла сильную связь (+0,77) с целой группой признаков, внутри которой длина желточного мешка (LVS) и толщина тела (BS) скоррелированы в наибольшей степени (+0,9). С ними сильно связаны (+0,84) длина головы (СL) и высота (HVS) желточного мешка (r = +0,79). Высокоскоррелированы (+0,77) наибольшая высота тела (Н) с длиной рыла (R). Со всеми признаками заглазничное расстояние (ОР) имело сильную обратную связь (–0,78). Дендр 33 Таким образом, перед началом активного питания у личинок пеляди несколько увеличивались такие линейные характеристики, как общая длина тела (L) и антеанальное расстояние (АА). Практически все параметры головы оставались неизменны. В варианте 2001г. скоррелированность признаков возрастала. А понижение связи морфометрических показателей в эксперименте 2002г. можно объяснить следующим образом. При экстремально высоких температурах инкубации высокая интенсивность сопровождалась повышенной эмбрионизацией, эмбриогенеза пеляди проявившейся в тесной корреляции большинства параметров и их высоких значениях. Однако в постэмбриональном онтогенезе, когда трофические запасы желточного мешка исчерпались, а на экзогенный тип питания организм еще не вступил, он осуществляет поиск оптимального пути развития в данных условиях при имеющихся эндогенных ресурсах, что проявляется в “раскоррелированности” прежде тесно связанных признаков. 4.2. Морфометрические параметры муксуна на ранних этапах постэмбрионального развития В отличие от пеляди – вида, ранний онтогенез которого сравнительно хорошо исследован (Кузьмин, 1963; Игнатьева, 1975; Ротт, 1987; Лебедева, 1985,1989; Селюков, 1985 и др.), развитие муксуна изучено в значительно меньшей степени (Юхнева, 1963). В связи с чем постэмбриональный онтогенез этого вида мы рассмотрим более подробно. На этапе вылупления муксуна из варианта 2000г. почти все пластические признаки – длина тела (L), длина и высота желточного мешка (LVS, HVS), длина головы (С), диаметр глаза (ОС), высота головы (НС) и др. – были выше, чем в вариантах 1987 и 2001гг. (табл.9). Только длина рыла (R) и длина грудных плавников (PL) у предличинок муксуна в 2001г. были более высокими, чем у муксуна 2000г. Наибольшая масса тела также отмечена в 2000 году (8,30,23мг), тогда как в 2001 – 7,30,13мг. Таблица 9 Морфометрические показатели предличинок муксуна на этапе вылупления в вариантах разных лет Дата Показатели, мм L1 1987 (n=50) X S X 2000 (n=20) min-max CV,% X S min-max X 2001 (n=20) CV, % X S min-max X CV, % 10,10,05 9,3-11,0 3,7 12,10,16 11,0-12,9 4,2 11,40,06 10,7-12,0 2,7 LVS 1,60,02 1,3-1,9 10,0 2,20,05 1,9-2,4 7,7 2,00,03 1,8-2,3 6,0 HVS 1,00,02 0,6-1,5 17,4 1,20,04 1,0-1,4 10,4 1,10,02 0,9-1,2 7,8 AA - - - 8,20,12 7,7-8,8 4,6 7,60,05 7,3-8,2 3,0 H 1,00,02 0,8-1,2 11,6 1,10,03 1,0-1,4 8,9 1,10,02 0,9-1,2 7,2 HM - - - 0,40,02 0,4-0,5 11,4 0,450,01 0,4-0,5 6,6 CL - - - 3,60,10 3,0-3,9 8,6 3,60,03 3,4-3,9 4,6 C 1,90,02 1,5-2,1 6,8 2,10,07 1,7-2,4 10,0 2,20,02 2,0-2,3 4,5 R - - - 0,30,03 0,1-0,4 36,0 0,40,02 0,2-0,5 26,0 OC 0,80,01 0,7-0,9 5,4 1,00,03 0,9-1,1 8,9 0,80,01 0,6-0,9 7,3 OP - - - 1,20,05 0,9-1,4 13,0 1,00,02 0,8-1,2 11,2 HC 1,30,01 1,1-1,5 7,7 1,60,01 1,5-1,7 4,0 ОО - - - - - - 0,90,01 0,8-1,0 7,6 ВS - - - - - - 0,60,01 0,5-0,7 8,1 PL 1,30,02 0,9-1,6 11,4 1,50,07 1,1-1,8 15,8 1,70,02 1,5-1,9 5,4 Р (мг) 7,90,15 6-11 13,6 8,30,23 7,5-10,0 8,6 6-8 8,4 Скоррелированность 1,70,03 1,62-1,89 5,1 морфометрических 7,30,13 параметров у предличинок муксуна на этапе вылупления была низкая (рис.34А,Б). Так, в 1987 году ни в одной паре признаков не были выявлены ни сильная, ни средняя связи. Самое высокое значение коэффициента корреляции при слабой связи (r = +0,38) было установлено между высотой головы (НС) и длиной грудного плавника (PL). Между остальными признаками коэффициент корреляции не превышал +0,26. Предличинки варианта 2000г. отличались не только более высокими значениями, но и большей степенью скоррелированности пластических признаков. Сильная связь (+0,75) отмечалась между диаметром глаза (ОС) и длиной желточного мешка (LVS), несколько меньшая (+0,68) – между длиной (С) и высотой (НС) головы. В варианте 2001г. морфометрические признаки группировались в два кластера, связанные между собой сильной отрицательной связью (–0,9). В первый входили длина тела (L), грудного плавника (PL), длина (LVS) и высота (HVS) желточного мешка (рис.35А). Во второй – длина (С) и высота (НС) головы, диаметр глаза (ОС) и высота тела (Н). Связь внутри групп была слабая, несколько больше остальных – между высотой тела (Н) и диаметром глаза (ОС), где коэффициент корреляции составлял +0,42. Через две недели после вылупления, перед переходом на экзогенное питание, предличинки муксуна характеризовались большими размерами тела (L), увеличились антеанальное расстояние (АА) и длина хвостового стебля (CL). Несколько возросли длина (С) и высота (НС) головы, длина грудного плавника (PL). Такие показатели как высота (Н) и толщина (BS) тела, длина рыла (R), диаметр глаза (ОС), заглазничное (ОР) и межглазничное (ОО) расстояния, увеличивались незначительно (табл.10). В варианте 2001г. у предличинок муксуна в возрасте 14 суток степень скоррелированности пластических признаков возросла (рис.35Б). Наиболее тесно связаны: длина тела (L) и антеанальное (АА) расстояние (r = +0,88), длина хвостового стебля (CL) и толщина (BS) тела (+0,78). А также длина головы (С) и наибольшая высота (Н) тела (r = +0,81). С данными признаками обнаруживали сильную связь высота головы (НС) и наименьшая высота тела (НМ), соответственно +0,78 и +0,75. Тесная обратная связь (-0,83) длины желточного мешка (LVS) с остальными параметрами свидетельствует об интенсивной утилизации трофических резервов. Дендр 34 Таблица 10 Динамика морфометрических характеристик предличинок муксуна в 2001г. Дата Показатели, мм 27 апреля (n=20) X S min-max 11 мая (n=20) CV,% X X S min-max CV,% X L 12,00,08 11,2-12,8 3,0 12,80,12 12,2-13,8 3,6 L1 11,40,06 10,7-12,0 2,7 12,20,13 11,5-13,3 3,9 LVS 2,00,03 1,8-2,3 6,0 1,30,05 1,0-1,6 13,9 HVS 1,10,02 0,9-1,2 7,8 0,90,03 0,6-1,0 12,6 AA 7,60,05 7,3-8,2 3,0 9,10,08 8,6-9,6 3,1 H 1,10,02 0,9-1,2 7,2 1,20,03 1,0-1,4 10,5 HM 0,450,01 0,4-0,5 6,6 0,50,01 0,4-0,6 10,7 CL 3,60,03 3,4-3,9 4,6 3,90,04 3,5-4,1 4,3 C 2,20,02 2,0-2,3 4,5 2,50,03 2,2-2,7 5,2 R 0,40,02 0,2-0,5 26,0 0,50,03 0,2-0,7 26,2 OC 0,80,01 0,6-0,9 7,3 1,00,02 0,7-1,03 8,4 OP 1,00,02 0,8-1,2 11,2 1,10,02 1,0-1,2 6,0 HC 1,60,01 1,5-1,7 4,0 1,90,02 1,7-2,1 4,7 ОО 0,90,01 0,8-1,0 7,6 0,80,02 0,7-0,9 8,8 ВS 0,60,01 0,5-0,7 8,1 0,70,01 0,5-0,7 7,6 PL 1,70,02 1,5-1,9 5,4 2,00,03 1,8-2,3 6,3 Р (мг) 7,30,13 6-8 8,4 8,90,04 6,2-12,0 16,5 Дендр 35. Таким образом, так же как и у пеляди на этапе вылупления более высокими морфометрическими параметрами отличались предличинки муксуна варианта 2000г., по сравнению с особями, зафиксированными в 1987 и 2001гг. У муксуна при вылуплении во всех вариантах отмечалась еще меньшая скоррелированность параметров, чем у пеляди. Только у предличинок в 2000 году между пластическими признаками была отмечена средняя и сильная связь. Спустя две недели, перед переходом предличинок к экзогенному питанию, увеличивались не только линейные размеры тела, но и значительно возрастала связь между морфометрическими показателями. Глава 5. Формирование гонад у сиговых рыб в раннем постэмбриогенезе при различных температурных режимах инкубации 5.1. ППК у пеляди в постэмбриональный период На этапе вылупления у пеляди все половые клетки представлены ППК. Они крупных размеров, округлой или эллипсовидной формы. Ядра, в отличие от цитоплазмы, имели более интенсивную окраску за счет диффузно распределенного хроматина. В первичных половых клетках присутствовали 1-2 ядрышка (рис.36). В околоядерной области цитоплазмы некоторых первичных гоноцитов отмечались отчетливые базофильные скопления, но у большей части клеток такие скопления были незначительны или отсутствовали. Большее количество ППК локализовалось ближе к краниальному отделу формирующейся гонады, под вольфовыми протоками, где они располагались в виде более или менее отчетливых цепочек (рис.37, 38). Одиночно лежащие клетки чаще отмечались и в каудальном отделе половых складок. В 1987г. в среднем на одну предличинку пеляди приходилось 29,51,68 ППК (табл.11). Сходное количество первичных гоноцитов (28,63,90) отмечалось и в 2001 году, но данный показатель варьировал сильнее – у разных особей насчитывалось от 6 до 49 ППК. Еще большая изменчивость этого признака наблюдалась у предличинок пеляди, зафиксированных в 2000 году (табл.11), а среднее количество первичных гоноцитов у них было ниже (18,37,13). В 2001г. диаметр ППК составил 15,3±0,17мкм, что несколько выше, чем в 1987 и 2000гг. Больше были и размеры ядер (табл.11). Несмотря на обнаруженные различия размеров половых клеток и их ядер в сравниваемые годы, ядерно-плазматическое отношение оставалось практически неизменным. В условиях повышенных температур инкубации (2002г.) у предличинок пеляди на этапе вылупления отмечалось большее количество ППК. В среднем на одну предличинку учитывалось 34,03,50 первичных гоноцита. Несмотря на их более высокие цитометрические характеристики (табл.11), ядерно- Таблица 11 Количество и цитометрические характеристики первичных половых клеток у предличинок пеляди на этапе вылупления в разные годы CV (%) Vя *100% Vц Vя CV X S X (%) 8,3±0,12 5,4 34,3±1,40 18,4 5,0 7,9±0,095 2,1 28,2±1,85 11,4 45,6 15,30,17 3,6 9,10,13 4, 5 30,41,99 20,7 31,1 15,80,10 2,3 9,50,06 1,5 Количество ППК Дата n D ППК, мкм minmax CV (%) 10 29,5±1,68 23-42 10 18,3±7,13 D ядра, мкм CV (%) X S 22,1 14,3±0,17 4,6 3–44 95,1 13,1+0,37 10 28,63,90 6-49 3 апр. 10 34,03,50 2002 17-52 X S 23 апр. 1987 26 апр. 2000 27 апр. 2001 X X S X X 29,71,60 12,2 плазматическое отношение сохранялось на том же уровне, что и у эмбрионов пеляди, развивавшихся при обычных условиях. Через 7 суток после вылупления у предличинок пеляди в вариантах 2000 и 2001гг. отмечалось некоторое увеличение количества первичных гоноцитов (табл.12). В округлых ядрах присутствовали 1-2 ядрышка. На данном этапе развития хроматин в нуклеоплазме располагался не равномерно, а образовывал плотные скопления, окружавшие ядрышки и распределявшиеся вдоль ядерной оболочки, придавая ей отчетливые очертания (рис.39). У предличинок в варианте 2000г. за счет увеличения размеров ядра возрастало ядерноплазматическое отношение. В 2001г. размеры гоноцитов в формирующихся гонадах повышались, тогда как диаметр ядра практически не изменялся, вследствие чего ядерно-плазматическое отношение снижалось. Фото 36 37 38 39 Таблица 12 Динамика количества и цитометрических характеристик первичных половых клеток у предличинок пеляди в вариантах разных лет Кол-во ППК 14 суток 7 суток Этап вылупления Возраст Год D ППК, мкм Vя *100% Vц Vя D ядра. мкм n X S X minmax CV % X S X CV % X S X CV % X S X CV % 2000 10 18,37,13 3-44 95,3 13,10,37 5,0 7,90,10 2,1 28,21,85 11,4 2001 10 28,33,90 6-49 45,6 15,30,17 3,6 9,10,13 4,5 30,41,99 20,7 2002 10 34,03,50 17-52 31,1 15,80,10 2,3 9,50,06 1,5 29,71,60 12,2 2000 10 26,12,80 13-35 28,3 14,40,30 4,2 9,50,20 4,2 45,57,07 31,1 2001 10 30,32,70 17-48 31,0 16,30,31 6,1 9,40,14 4,4 25,11,53 19,3 2002 10 23,75,30 14-44 55,1 15,30,17 2,5 9,50,10 2,5 36,62,97 18,4 2000 10 21,04,90 7-43 62,0 13,60,28 4,7 8,40,16 4,3 33,12,51 16,9 2001 10 38,45,60 13-72 48,8 15,50,23 4,7 9,30,11 3,6 30,31,61 16,9 2002 10 18,45,30 8-38 63,9 15,80,36 5,1 9,30,09 2,2 28,82,13 16,6 У предличинок в варианте 2002г. в течение 7 суток с момента вылупления наблюдалось снижение количества ППК. Уменьшались и их размеры, тогда как средний диаметр ядер остался на прежнем уровне, отчего ядерно- плазматическое отношение увеличилось. В возрасте 14 суток, перед переходом личинок пеляди на активное питание, в варианте 2000г. несколько уменьшалось количество ППК, снижались их цитометрические характеристики. Ядерно-плазматическое отношение восстанавливалось. В 2001г., напротив, количество ППК к этому возрасту увеличивалось (38,45,60), а их диаметр несколько снижался, ядерноплазматическое отношение достигало прежних размеров (30,31,61%). В варианте 2002г. продолжалось уменьшение количества ППК, а их размеры возрастали. Ядерно-плазматическое отношение, как и в предыдущие годы, приобрело то же значение, что и при вылуплении. Таким образом, на ранних этапах постэмбрионального развития у пеляди наблюдается сильная вариация количества ППК. Изменяется характер распределения хроматина в ядре – от диффузного на этапе вылупления, до компактного, концентрирующегося около ядрышек и у нуклеолеммы в возрасте 7 суток. На этапе вылупления у предличинок пеляди из вариантов 1987г. и 2001г., близких по величине морфометрических параметров, отмечалось одинаковое же число ППК. Тогда как у предличинок из варианта 2000г., имевших более высокие пластические характеристики, первичных гоноцитов было выявлено значительно меньше. В недельном возрасте у предличинок из данного варианта число первичных гоноцитов по-прежнему ниже, чем в 2001г. Перед переходом таких предличинок к активному питанию не только не происходило увеличения числа ППК и их цитометрических параметров, но отмечалось дальнейшее снижение данных показателей. Инкубация пеляди при повышенных температурах воды привела к большему количеству ППК на этапе вылупления, чем у предличинок, проинкубированных в обычных условиях. Однако на протяжении двух недель после вылупления количество первичных гоноцитов у них устойчиво снижалось. Поскольку никаких следов деструкции нами не отмечалось, уменьшение количества ППК через две недели после вылупления предличинок в 2000 и 2002гг. можно объяснить сильной изменчивостью числа первичных гоноцитов, и, как вероятное следствие, попаданием в последние выборки особей с минимальным числом ППК. 5.2. Соотношение уровня развития генеративных показателей и пластических признаков у пеляди в ранний постэмбриональный период Корреляционный анализ количества и цитометрических параметров ППК – показателей, в определенной степени характеризующих уровень развития линии клеток зародышевого пути – с морфометрическими параметрами предличинок пеляди на этапе вылупления позволил установить, что по большинству пластических признаков у них наблюдалась слабая связь (рис.40 I). Так, в варианте 2001г. сильная связь (r = +0,7) количества первичных гоноцитов была установлена только с толщиной тела (BS). Среднюю связь (+0,5) с числом ППК показали межглазничное (ОО) и заглазничное (ОР) расстояния, а также длина желточного мешка (LVS). Диаметры ППК и их ядер коррелировали (+0,6) с длиной хвостового стебля (CL). Сходная связь отмечалась между диаметром ядра первичных гоноцитов и длиной грудного плавника (PL). При этом наименьшая высота тела (НМ) и длина желточного мешка (LVS) связаны с диаметром ядра средней отрицательной связью: – 0,5 и –0,6, соответственно (рис.40 I). Через 14 суток после вылупления характер связи изменился (рис.40 II). Среднюю связь (+0,5...+0,6) с количеством первичных гоноцитов обнаруживали диаметр глаза (ОС), наименьшая высота тела (НМ) и длина желточного мешка (LVS). Диаметр ППК характеризовался сильной отрицательной связью (–0,7) с длиной рыла (R) и наименьшей высотой (НМ) тела. Отмечалась средняя корреляция (+0,6) диаметра ядра ППК с длиной желточного мешка (LVS), слабая (+0,5) – с диаметром (ОС) глаза. В варианте 2002г. у предличинок на этапе вылупления (рис.41) количество ППК характеризовалось сильной отрицательной корреляцией (–0,7) с длиной грудного плавника (PL). Была установлена средняя связь (+0,6) числа гоноцитов с длиной рыла (R) и межглазничным расстоянием (ОО). Кор 40 Кор41 Диаметр первичных гоноцитов тесно коррелировал (+0,9) с длиной хвостового стебля (CL), а с морфометрическими параметрами желточного мешка (LVS, HVS) имел среднюю отрицательную связь: –0,5 и –0,6, соответственно. В свою очередь, диаметр ядра (рис.41) был связан сильной положительной связью (+0,7 ...+0,8) с морфометрическими параметрами головы – высотой головы (С), длиной рыла (R) и межглазничным расстоянием (ОО). А с наименьшей высотой головы (НС), толщиной тела (BS) и длиной грудного плавника (PL) – сильной отрицательной связью (–0,7... –0,9). Таким образом, слабая связь количества и цитометрических параметров ППК с морфометрическими характеристиками предличинок пеляди, а также меньшее их число у молоди, характеризующейся большими размерно-весовыми показателями, свидетельствует об относительной независимости процессов генеративного и соматического развития, по крайней мере, на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза. 5.3. ППК у муксуна в постэмбриональный период У муксуна на этапе вылупления цитоплазма первичных половых клеток базофильная, ядро имело большое сродство к гематоксилиновому лаку, вследствие равномерного распределения хроматина по всему его объему. У единичных особей гонадки почти сформированы (рис. 42 а,б ). Так же как и у пеляди, отмечалась большая степень варьирования числа ППК (табл.13). Так, в 1987г. насчитывалось от 8 до 78 первичных гоноцитов, и в среднем на одну предличинку муксуна приходилось 29,7±4,80 ППК. Сходное количество половых клеток (31,1±5,57) было отмечено и в 2000 году. Предличинки из варианта в 2001г. отличались значительно большим числом ППК (55,8±6,00) и меньшей изменчивостью данного показателя, размеры клетки и ядра также были выше (табл.13). Таблица 13 Количество и цитометрические характеристики первичных половых клеток у предличинок муксуна на этапе вылупления в вариантах разных лет CV (%) Vя *100% Vц Vя CV X S X (%) 62,6 14,1±0,20 5,3 8,2±0,12 5,5 27,8±1,28 17,9 8-58 47,3 13,0±0,45 6,0 7,9±0,24 5,3 32,6±1,54 8,2 26-93 36,0 15,70,18 3,8 8,90,12 4,3 23,50,62 8,4 Кол-во ППК Дата n minmax CV (%) 10 29,7±4,80 8-78 10 31,1±5,57 10 55,86,00 X S 23 апр. 1987 26 апр. 2000 27 апр. 2001 D ППК, мкм X X S X CV (%) D ядра, мкм X S X Через неделю после вылупления в 2000 году наблюдалось уменьшение количества ППК (22,0±5,67) и некоторый рост ядерно-плазматического отношения (40,0%). Данный показатель сильно варьировал, что свидетельствует об активной подготовке части половых клеток к делению. Перед переходом муксуна к активному типу питания количество первичных гоноцитов возрастало (40,4±11,67) (табл.14). В течение двух недель среднее количество ППК у предличинок, зафиксированных в 2001 г., практически не изменялось (табл.14). Возрастало ядерно-плазматическое отношение, но не за счет увеличения размеров ядра, а вследствие уменьшения размеров самого гоноцита. Хроматин в ядре располагался компактно около ядерной оболочки. Наблюдались четкие картины цитокинеза (рис.43 а,б). В этом возрасте были отмечены и первые гониальные клетки. Фото 42 43 Таблица 14 Динамика количества и цитометрических характеристик первичных половых клеток у предличинок муксуна в разные годы. Кол-во ППК 14 суток 7 суток Этап вылупления Возраст Год D ППК, мкм D ядра, мкм n X S X minmax CV % X S X CV % X S X Vя *100% Vц Vя CV % X S X CV % 2000 10 31,1±5,57 8-58 47,3 13,0±0,45 6,0 7,9±0,24 5,3 32,6±1,54 8,2 2001 10 55,86,00 26 93 36,0 15,70,18 3,8 8,90,12 4,3 23,50,62 8,4 2000 10 22,05,67 5-42 63,1 13,20,61 8,1 8,390,22 4,5 40,09,23 40,1 2001 10 54,94,7 34 73 24,3 15,60,31 6,4 8,630,11 4,1 21,81,08 15,7 2000 10 40,411,6 9106 76,4 15,10,14 2,1 8,870,16 3,9 27,51,84 15,0 2001 10 51,66,96 25 99 44,8 14,80,19 4,2 8,690,10 3,7 27,71,13 12,9 Таким образом, у муксуна уже на этапе вылупления отмечается большее количество ППК, чем у пеляди. Хотя данный показатель также подвержен сильной изменчивости. Как и у пеляди, предличинки муксуна с большими морфометрическими параметрами характеризовались меньшим количеством первичных гоноцитов (2000г.). Однако, если у предличинок из варианта 2001г. в течение двух недель не происходило увеличения числа ППК, то у молоди 2000г., после некоторого снижения данного показателя, у отдельных особей наблюдалось его резкое возрастание. Это приводило к тому, что перед переходом к активному питанию предличинки разных лет по количеству и цитоморфологическим характеристикам ППК различались не столь разительно, как вначале. Выявлено у муксуна и большее, по сравнению с пелядью, количество митозов ППК. 5.4. Соотношение уровня развития генеративных показателей и пластических признаков у муксуна в ранний постэмбриональный период Как выше отмечалось, у пеляди в постэмбриональном онтогенезе связь морфометрических параметров с числом ППК и их цитометрическими показателями очень слабая. Предпринятый кластерный анализ и для молоди муксуна позволит установить величину видоспецифической пластичности у этих сиговых. В 2001 году на этапе вылупления у предличинок муксуна была выявлена сильная связь (r = +0,7) между количеством первичных гоноцитов, с одной стороны, антеанальным расстоянием (АА) и наибольшей высотой тела (Н) – с другой (рис.44 I). Длина желточного мешка (LVS), длина тела (L1) и межглазничное расстояние (ОО) с количеством ППК проявляли среднюю связь (+0,5...+0,6). Менее скоррелированы морфометрические показатели предличинок с цитометрическими характеристиками ППК. Так, диаметр первичных гоноцитов связан сильной отрицательной связью (–0,8) лишь с длиной грудного плавника (PL), а средней отрицательной (–0,5) – с длиной головы (С). Диаметр ядра проявлял среднюю положительную связь (+0,5) с антеанальным расстоянием (АА) и высотой желточного мешка (HVS), и отрицательную (–0,6) – с длиной грудного плавника (PL). Перед наблюдалось переходом усиление предличинок связи муксуна количества ППК к активному с питанию морфометрическими характеристиками (рис.44 II). С данным показателем оказались тесно связаны (+0,7 - +0,9) длина тела (L – L1), антеанальное расстояние (АА), наименьшая высота тела (НМ), длина хвостового стебля (CL), диаметр глаза (ОС). Среднюю связь (+0,6) проявляли длина грудного плавника (PL), длина головы (С) и межглазничное расстояние (ОО). Цитометрические характеристики самих половых клеток были слабо связаны с большинством пластических признаков. Отмечалась, например, средняя отрицательная связь (–0,5; –0,6) диаметра ядер первичных гоноцитов с межглазничным расстоянием (ОО) и высота желточного мешка (HVS). Диаметр ППК с данными пластическими характеристиками обнаруживал несколько большую, но также обратную связь (–0,6; –0,7). Кор 44 Таким образом, морфологическими проявляющаяся у молоди признаками перед муксуна и вступлением числом увеличивается ППК, первичных связь наиболее гоноцитов между отчетливо в период митотической активности – через 14 суток после вылупления. Прослеживается четкая видоспецифичность пеляди и муксуна как в становлении линии клеток зародышевого пути, так и в отношении их связи с ростом морфологических признаков. У муксуна эти процессы более синхронизированы, прослеживается повышенная степень эмбрионизации, в отличие от пеляди, характеризующейся в данном отношении большей ригидностью. Следовательно, сильная изменчивость и слабая скоррелированность пластических признаков у предличинок обоих видов на этапе вылупления свидетельствует о высокой асинхронности в эмбриогенезе, в наибольшей степени выраженной у муксуна. На ранних этапах постэмбрионального онтогенеза из всех вариантов наибольшими морфометрическими показателями отличались предличинки обоих видов в 2000г. В течение двух недель после вылупления у пеляди и муксуна увеличивались общая длина (L) и антеанальное расстояние (АА), но практически все морфометрические параметры головы оставались неизменными. В этот период скоррелированность признаков возрастала, причем у предличинок муксуна отмечалась несколько большая связь пластических признаков, чем у пеляди. При температурах воды вблизи верхнего порога инкубации для пеляди (Лебедева, 1989) нами отмечалась повышенная эмбрионизация зародышей, проявлявшаяся в интенсивном развитии морфометрических признаков, а также их высокой скоррелированности. Однако в последующем, на этапе перехода предличинок к активному питанию происходило существенное снижение корреляции между параметрами, что косвенно свидетельствует о «поисковой реакции» организма – выбора оптимального пути развития. В раннем постэмбриогенезе у пеляди и у муксуна проявляется повышенная вариабельность в числе ППК. На этапе вылупления предличинки обоих видов с большими значениями пластических признаков характеризовались меньшим количеством первичных гоноцитов (2000г.). Однако уже к моменту перехода молоди на активное питание у муксуна, в отличие от пеляди, различия между вариантами 2000 и 2001гг. по числу и цитоморфологическим показателям ППК постепенно сглаживались. Четкая видоспецифичность прослеживается и в соотношении уровня развития линии клеток зародышевого пути, представленной первичными гоноцитами, с количественными показателями соматического роста – значениями пластических признаков. У молоди муксуна проявлялась большая, по сравнению с пелядью, скоррелированность морфологических показателей с числом и цитометрическими характеристиками ППК, в особенности, перед вступлением первичных гоноцитов в период митотической активности. ГЛАВА 6. Модификация предличинок сиговых под влиянием слабых импульсных магнитных полей 6.1. Модификация морфометрических параметров предличинок пеляди В варианте 2001г., спустя две недели после обработки эмбрионов пеляди на этапе вылупления, наблюдалось некоторое расхождение предличинок в контроле и опыте по морфометрическим Подопытная молодь несколько превосходила характеристикам контрольную (табл.15). по таким показателям, как длина тела (L1), антеанальное расстояние (АА), длина хвостового стебля (CL), заглазничное расстояние (ОР) и высота головы (НС). Меньшая длина желточного мешка (LVS) у предличинок опытной партии свидетельствует о более интенсивной утилизации желтка. Характеризовались они и большей, по сравнению с контролем, массой тела (табл.15). У пеляди перед переходом к активному питанию как в опыте, так и в контроле возрастала скоррелированность пластических признаков. У предличинок в опыте на фоне более высоких значений морфометрических показателей наблюдалась и большая степень их согласованности (рис.45). Сильно связаны (r = +0,75) между собой длина головы (С) и межглазничное расстояние (ОО), сходная связь установлена между длиной хвостового стебля (CL) и длиной грудного плавника (PL). Длина тела (L1) коррелировала (+0,65) с наибольшей высотой тела (Н), а антеанальное расстояние (АА) с загазничным расстоянием (ОР). Высота желточного мешка (HVS) и длина рыла (R) с остальными признаками были тесно связаны обратной зависимостью (–0,85 – 0,92). Таким образом, эффект обработки пеляди на этапе вылупления проявлялся уже через две недели и был выражен в некотором превосходстве подопытных предличинок как по степени развития морфометрических параметров, так и по тесноте их связи. Таблица 15 Морфометрические характеристики контрольных и подопытных предличинок пеляди перед переходом к активному питанию (11 мая 2001г.) Вариант Контроль (n=20) Показатели, мм X S L 9,90,14 L1 Опыт (n=20) CV,% min-max CV,% 9,0-10,5 0,51 5,2 10,00,08 9,5-10,8 0,29 2,9 9,40,13 8,5-10,0 0,48 5,2 9,50,08 9,1-10,0 0,28 3,0 LVS 0,960,04 0,7-1,1 0,16 16,6 0,90,04 0,7-1,1 0,15 16,1 HVS 0,60,02 0,5-0,7 0,07 11,9 0,60,02 0,5-0,7 0,06 10,5 AA 6,10,08 5,5-6,5 0,29 4,8 6,20,06 6,0-6,6 0,21 3,4 H 0,80,01 0,7-0,9 0,05 6,9 0,80,01 0,7-0,9 0,05 6,7 HM 0,40,01 0,3-0,4 0,03 9,5 0,30,01 0,3-0,4 0,03 7,9 CL 3,20,05 2,7-3,5 0,19 6,1 3,40,04 3,1-3,7 0,16 4,7 C 1,70,02 1,5-1,8 0,07 4,4 1,70,02 1,6-1,9 0,08 4,6 R 0,30,02 0,2-0,4 0,07 19,9 0,30,03 0,2-0,4 0,09 28,8 OC 0,70,01 0,7-0,8 0,04 5,7 0,70,01 0,7-0,8 0,04 5,7 OP 0,70,01 0,7-0,8 0,06 7,6 0,80,02 0,7-0,9 0,06 7,7 HC 1,30,02 1,2-1,5 0,06 4,4 1,40,01 1,3-1,5 0,05 3,8 ОО 0,60,02 0,4-0,7 0,09 16,4 0,60,02 0,5-0,8 0,08 13,1 ВS 0,40,01 0,38-0,43 0,03 6,5 0,40,01 0,38-0,49 0,03 7,1 PL 1,50,03 1,3-1,6 0,11 7,3 1,50,04 1,2-1,7 0,14 9,7 Р (мг) 3,40,12 3-4 0,45 13,3 3,60,10 3-4 0,37 10,5 min-max X X S X Дендр.45 По условиям эксперимента 2002г., эмбриогенез пеляди, начиная с гаструляционного периода, осуществлялся в термостатированной камере, температурный режим в которой поддерживался на уровне 4-5оС вплоть до вылупления. Обработка эмбрионов слабыми магнитными полями с применением частоты 927/71 кГц (активирующая частота) была произведена в начале гаструляции. На этапе вылупления, который произошел 3 апреля, т.е. почти на месяц раньше обычных сроков, подопытные предличинки превосходили контрольных только по длине тела (L1) и антеанальному расстоянию (АА). В контроле большинство морфометрических параметров было выше (табл.16). Однако если у контрольных предличинок пеляди наблюдалось сильное варьирование практически всех морфометрических признаков, то у подопытных высокой изменчивости была подвержена только толщина тела (BS). Коэффициент вариации остальных морфометрических характеристик значительно ниже, чем в контроле (табл.16). Кластерный анализ показал, что на этапе вылупления скоррелированность признаков контрольных особей была намного выше, чем у подопытных. Сильная связь установлена между 12 морфометрическими параметрами, из которых у 9 коэффициент корреляции превышал +0,9 (рис.46). У подопытных тесная связь (+0,8) обнаруживалась только между длиной хвостового стебля (CL) и заглазничным расстоянием (ОР). С этими признаками сильно коррелировала (+0,72) длина тела (L1). Средняя связь (+0,52...+0,68) показана между антеанальным расстоянием (AA) и длиной желточного мешка (LVS); длиной головы (С) и высотой желточного мешка (HVS); межглазничным расстоянием (ОО), толщиной тела (BS) и длиной грудного плавника (PL); наименьшей (НМ) и наибольшей (Н) высотой тела (рис.46). Через две недели после вылупления как в контроле, так и в опыте длина тела (L1) предличинок увеличивалась за счет возрастания антеанального расстояния (АА), тогда как средняя длина хвостового стебля (СL) снижалась. Таблица16 Денд46. У контрольных предличинок уменьшались и такие показатели, как высота головы (НС), межглазничное расстояние (ОО) и толщина тела (BS). В опыте же большинство морфометрических характеристик оставались на прежнем уровне. Резко снижалась в контроле и скоррелированность признаков (рис.47). Сильно связанными (r>0,7) оказались лишь 9 показателей, из которых только между 5 коэффициент корреляции превышал +0,8. У подопытных предличинок пеляди в этот период онтогенеза степень связи между морфометрическими параметрами возрастала (рис.47). Сильно скоррелированы (+0,84) длина тела (L1) и антеанальное расстояние (АА). С данным кластером обнаруживает тесную связь (+0,82) длина грудного плавника (PL). Подобная же связь (+0,82) выявлена между межглазничным расстоянием (ОО) и толщиной тела (BS). Таким образом, в эксперименте 2002г., при инкубации пеляди в условиях субпороговых вылупления температур отличались характеристик, по воды, контрольные большими сравнению с предличинки значениями подопытными. на этапе морфометрических Высокие температуры интенсифицировали эмбриогенез, на зародышевый период смещались ранние стадии постэмбрионального развития (явление эмбрионизации) и, как следствие, происходило исчерпание ресурсов для последующего онтогенеза. Отчего происходил массовый отход наиболее крупных особей, еще не достигших личиночного этапа – не перешедших к экзогенному питанию. Корм был, но молодь его не потребляла. Очевидно, что снижение у контрольных особей некоторых размерно-весовых параметров и степени скоррелированности признаков через две недели после вылупления явилось результатом отхода более крупных особей. Подопытные же предличинки уже на этапе вылупления представляли достаточно однородную группу с устойчивыми характеристиками. В последующем степень скоррелированности у них нарастала, отход был незначительным. Это свидетельствует морфофункциональной сбалансированности подопытных особей в целом. о Денд.47 6.2. Модификация морфометрических параметров предличинок муксуна Обработка муксуна с применением СИМП была проведена в момент вылупления 27 апреля 2001г. Через две недели, в 14-суточном возрасте, подопытные предличинки муксуна незначительно отставали от контрольных по таким морфометрическим показателям, как длина тела (L), антеанальное расстояние (АА), длина хвостового стебля (CL), длина головы (С), межглазничное расстояние (ОО) и толщина тела (BS). Отличалась подопытная молодь и меньшей массой тела (табл.17). В этот период, перед переходом личинок на активное питание, скоррелированность морфометрических показателей в обоих партиях возрастала (рис.48). Существенных расхождений между контролем и опытом по величине связи пластических признаков не было установлено. Как в контроле, так и в опыте коэффициент корреляции между большинством признаков превышал +0,5. Наиболее тесно связанными (r = +0,96) в опыте оказались длина тела (L1) и антеанальное расстояние (АА). С данным кластером коррелировала (+0,78) высота головы (НС). Наибольшая высота тела (Н) связана (+0,78) с длиной хвостового стебля (CL), а наименьшая высота тела (НМ) скоррелирована (+0,72) с длиной грудного плавника (PL). Как и в опыте, у контрольных личинок наибольшая связь (+0,88) проявлялась между длиной тела (L1) и антеанальным расстоянием (АА). Длина хвостового стебля (CL) связана (+0,78) с толщиной тела (BS). Тесно скоррелированы (+0,81) и длина головы (С) с высотой тела (Н). Таким образом, реакция предличинок муксуна на проведенное воздействие проявилась в некотором снижении их морфометрических характеристик, по сравнению с контрольными предличинками. Однако при несколько меньшем темпе соматического роста подопытных предличинок скоррелированность морфометрических признаков у них была достаточно высокой. Таблица 17 Морфометрические характеристики контрольных и подопытных предличинок муксуна перед переходом к активному питанию (11 мая 2001г.) Вариант Контроль (n=20) Показатели, мм X S L 12,80,12 L1 Опыт (n=20) CV,% min-max CV,% 12,2-13,8 0,46 3,6 12,50,21 11,4-14,0 0,79 6,3 12,20,13 11,5-13,3 0,48 3,9 11,90,21 10,8-13,4 0,78 6,6 LVS 1,30,05 1,0-1,6 0,18 13,9 1,40,04 1,1-1,7 0,16 11,6 HVS 0,90,03 0,6-1,0 0,11 12,6 0,80,02 0,7-1,0 0,08 10,7 AA 9,10,08 8,6-9,6 0,28 3,1 8,80,11 8,3-9,5 0,4 4,5 H 1,20,03 1,0-1,4 0,13 10,5 1,20,03 0,9-1,3 0,1 8,9 HM 0,50,01 0,4-0,6 0,06 10,7 0,480,01 0,4-0,5 0,04 7,5 CL 3,90,04 3,5-4,1 0,17 4,3 3,80,04 3,5-4,2 0,17 4,3 C 2,50,03 2,2-2,7 0,13 5,2 2,40,03 2,2-2,5 0,12 4,9 R 0,50,03 0,2-0,7 0,12 26,2 0,50,03 0,3-0,7 0,11 23,3 OC 1,00,02 0,7-1,03 0,08 8,4 0,90,01 0,8-1,0 0,05 4,9 OP 1,10,02 1,0-1,2 0,07 6,0 1,10,03 0,9-1,3 0,1 9,6 HC 1,90,02 1,7-2,1 0,09 4,8 1,80,03 1,6-2,1 0,11 6,2 ОО 0,80,02 0,7-0,9 0,07 8,8 0,70,01 0,6-0,8 0,05 6,8 ВS 0,60,01 0,5-0,7 0,05 7,6 0,60,01 0,5-0,7 0,05 8,8 PL 2,00,03 1,8-2,3 0,13 6,3 2,00,03 1,8-2,2 0,11 5,8 Р (мг) 8,90,39 6,2-12 1,4 16,5 7,80,26 6-10 0,98 12,5 min-max X X S X Днендр. 48 Установленные особенности индивидуального развития контрольной и подопытной молоди пеляди и муксуна в раннем постэмбриональном онтогенезе, величина и характер сбалансированности их морфологических показателей, очевидно, должны каким-то образом согласовываться с развитием линии половых клеток. Оказывает ли СИМП какое-либо воздействие на характер соотношения между соматическим ростом и генеративным развитием и в чем оно проявляется? Рассмотрим эти вопросы в следующих разделах. 6.3. Модификация параметров ППК у пеляди в раннем постэмбриогенезе Как ранее отмечалось, нами установлены некоторые этапы эмбриогенеза, воздействием слабыми магнитными полями на которые можно существенно корректировать ряд характеристик формирующейся генеративной системы: количество ППК и темп миграции в область половых зачатков, инициировать биосинтетическую активность ядра. Последующее исследование направлено на выяснение возможностей коррекции устойчивого развития репродуктивной функции сиговых после воздействия слабыми магнитными полями на предличинок в момент вылупления. Выше были показаны существенные изменения характера морфометрических параметров у подопытной молоди под влиянием СИМП. В варианте 2000г. у подопытных предличинок пеляди недельного возраста отмечали меньшее количество первичных половых клеток, чем в контроле (табл.18). По таким же цитометрическим характеристикам ППК, как диаметр клетки и ядра, количество ядрышек подопытные и контрольные предличинки практически не различались. В возрасте 14 суток количество ППК у контрольных несколько снижалось, тогда как в опыте этот показатель резко возрастал. На данном этапе развития у контрольных предличинок уменьшались также размеры гоноцитов и их ядер, в отличие от подопытных, у которых диаметр ядра оставался на прежнем уровне, а диаметр ППК даже увеличивался (табл.18). Таблица 18 Динамика количества и цитометрических характеристик первичных половых клеток у контрольных и подопытных предличинок пеляди (2000г.) Количество ППК Дата Вариант X S X CV min-max (%) 26 Контроль 18,3±7,13 апреля (n=10) Контроль (n=10) 3 мая Опыт (n=10) Контроль (n=10) 10 мая Опыт (n=10) D ППК, мкм X S X CV (%) Vя *100% Vц Vя CV CV (%) X S X (%) D ядра, мкм X S X 3-44 95,3 13,1±0,37 5,0 7,9±0,10 2,1 28,2±1,85 11,4 26,1±2,80 13-35 28,3 14,4±0,30 4,2 9,5±0,20 4,2 45,5±7,07 31,1 11,3±2,04 6-19 44,2 14,8±0,02 5,0 9,7±0,30 5,4 43,5±8,07 35,1 21,0±4,90 7-43 62,0 13,6±0,28 4,7 8,4±0,16 4,3 33,1±2,51 16,9 39,6±7,70 14-79 51,5 15,5±0,28 4,7 9,8±0,20 4,9 40,5±3,1 18,7 В 2001г. у восьмисуточных предличинок пеляди опытной партии учитывалось большее количество первичных гоноцитов (табл.19). Как у контрольных, так и у подопытных происходило увеличение размеров первичных половых клеток, средний диаметр ППК в контроле составлял 16,30,30мкм, в опыте – 16,60,20мкм. Средний диаметр ядер увеличивался незначительно, вследствие чего ядерно-плазматическое отношение несколько снижалось. В возрасте 14 суток у контрольных личинок возрастало количество ППК (табл.19). В опыте увеличения числа ППК не отмечалось, но происходило активное формирование располагались цепочками, гонадок, в отмечались которых первичные отдельные митозы гоноциты (рис.49). У контрольных митотическая активность не была выявлена, чаще отмечались одиночные ППК (рис.50) . Размерные характеристики ППК контрольной молоди несколько снижались – средний диаметр гоноцитов составил 15,50,20мкм. В опыте же данный показатель понизился незначительно, а средний диаметр ядра возрос (табл.19). Несмотря на расхождение подопытных и контрольных личинок по цитометрическим показателям ППК, ядерно-плазматическое отношение у них почти не различалось. В условиях повышенных температур воды в течение инкубационного периода в 2002г. у подопытных предличинок на этапе вылупления наблюдалось несколько меньшее число ППК. От контрольных подопытные отличались и меньшими размерами гоноцитов (табл.20). Но если у контрольных особей большое количество ППК еще отмечалось ближе к каудальному отделу, у подопытных они локализовались в центральном и краниальном отделах формирующихся гонадок. В первичных гоноцитах контрольных предличинок хроматин распределялся диффузно по всему объему ядра (рис.51), ППК подопытных характеризовались компактным расположением хроматина у границ ядра и ядрышек (рис.52). Все это свидетельствовало о более высокой формационной активности репродуктивной функции подопытных особей. Через 7 суток в контроле уменьшалось количество ППК и снижались их размеры (табл.20). Число гоноцитов, их цитометрические характеристики у предличинок в опыте практически не изменялись. Таблица 19 Динамика количества и цитометрических характеристик ППК у контрольных и подопытных предличинок пеляди (2001г.) Кол-во ППК Дата Вариант X S X 27 Контроль 28,3±3,90 апреля (n=10) Контроль (n=10) 4 мая Опыт (n=10) Контроль (n=10) 11 мая Опыт (n=10) D ППК, мкм CV min-max (%) X S X CV (%) Vя *100% Vц Vя CV CV (%) X S X (%) D ядра, мкм X S X 6-49 45,6 15,3±0,20 3,6 9,1±0,10 4,5 30,4±2,00 20,7 30,3±2,70 15-48 31,0 16,3±0,30 6,1 9,4±0,10 4,9 25,1±1,50 19,3 35,9±3,00 20-48 26,5 16,6±0,20 4,1 9,4±0,10 4,1 24,6±1,00 12,3 38,4±5,60 13-72 48,8 15,5±0,20 4,7 9,3±0,10 3,6 30,3±1,60 16,9 32,8±3,90 18-55 38,0 16,2±0,30 5,9 10,1±0,2 7,6 34,1±1,90 17,4 Фото 49 50 51 52 В возрасте 14 суток в контроле происходило дальнейшее снижение количества первичных половых клеток при том, что их размеры несколько увеличивались (табл.20). У подопытных предличинок количество ППК не только не уменьшалось, но даже несколько повышалось, возрастали и размерные характеристики гоноцитов. Диаметр ядра увеличивался в большей степени, нежели диаметр самой клетки, вследствие чего повышалось ядерноплазматическое отношение (табл.20). Таблица 20 Динамика количества и цитометрических характеристик ППК у контрольных и подопытных предличинок пеляди (2002г.) Кол-во ППК Дата Вариант X S Контроль (n=10) 3 апреля Опыт (n=10) Контроль (n=10) 10 апреля Опыт (n=10) Контроль (n=10) 17 апреля Опыт (n=10) X D ППК, мкм min- CV max (%) X S X CV (%) CV (%) Vя *100% Vц Vя CV X S X (%) 1,5 29,7±1,6 12,2 D ядра, мкм X S X 34,0±3,5 17-52 31,1 15,76±0,1 2,3 9,5±0,06 29,8±4,5 16-53 42,3 14,53±0,21 3,2 8,7±0,18 4,66 30,23±2,28 16,9 23,7±5,3 14-44 55,1 15,3±0,17 2,5 9,45±0,1 2,52 36,6±2,97 18,4 29,2±3,7 15-41 30,9 14,47±0,17 2,6 8,92±0,2 5,02 32,31±1,47 10,2 18,4±5,3 8-38 63,9 15,76±0,36 5,1 9,25±0,09 2,16 28,78±2,13 16,6 32,6±6,7 11-53 45,9 14,95±0,42 6,3 9,32±0,26 6,17 34,75±3,09 19,9 Резюмируя вышесказанное, выделим основные расхождения в формировании генеративных показателей у контрольных и подопытных особей. В 2000г. к моменту перехода пеляди на активное питание подопытные предличинки по количеству первичных гоноцитов почти в два раза превосходили контрольных, выше у них были и цитометрические характеристики ППК. В 2001г. отмечалась не столь однозначная реакция предличинок пеляди на проведенное воздействие: в недельном возрасте большим количеством ППК характеризовались подопытные предличинки. Но уже к 14 суткам несколько большее число первичных гоноцитов отмечалось в контроле. В экстремально высоких температурных условиях 2002г. на этапе вылупления в контроле установлено большее число ППК, но отмеченные в опыте цитометрические характеристики первичных гоноцитов и характер их локализации были обусловлены высоким уровнем концентрации в области половых зачатков. В последующем число ППК у подопытной молоди лишь увеличивалось. Все это может свидетельствовать о повышенной эффективности СИМП при воздействии на организмы, находящихся на более высоком уровне соматического развития. 6.4. Влияние СИМП на соотношение генеративного и соматического развития пеляди в ранний постэмбриональный период Отмеченная в раннем постэмбриогенезе слабая связь уровня развития ряда характеристик линии клеток зародышевого пути с большинством пластических признаков личинок пеляди, свидетельствующих о характере соматического развития, инициировала наш поиск в направлении установления степени и характера взаимосогласованности данных параметров после обработки эмбрионов и молоди слабыми магнитными полями. Корреляционный анализ варианта 2001г. показал, что в двухнедельном возрасте связь количества ППК с морфометрическими характеристиками предличинок низкая. И если в контроле, как ранее отмечалось, установлена средняя положительная связь (r = +0,5...+0,6) данного показателя с длиной желточного мешка (LVS), диаметром глаза (ОС) и наименьшей высотой тела (НМ), то у подопытных предличинок низкая корреляция практически по всем показателям находится в области отрицательных значений (рис.53 I, II). У контрольных особей диаметр ППК связан сильной обратной связью (–0,7) лишь с длиной рыла (R) и наибольшей высотой тела (НМ). У подопытных данный показатель также скоррелирован сильной отрицательной связью (–0,7) с длиной рыла (R) и длиной грудного плавника (PL), а средней положительной (+0,5) с заглазничным расстоянием (ОР) и наименьшей высотой тела (Н). Данные параметры подопытных предличинок коррелируют также и с диаметром ядра. Кор 53 В контроле диаметр ядра связан средней связью (+0,5...+0,6) с диаметром глаза (ОС) и длиной желточного мешка (LVS). Таким образом, в варианте 2001г. в опыте, в отличие от контроля, практически все морфометрические характеристики предличинок оказались не связаны с количеством ППК. Несмотря на это, цитометрические характеристики ППК были выше у подопытных предличинок, они же проявляли и более тесную, по сравнению с контрольными, связь с пластическими признаками. Это и понятно, так как ППК формируются на ранних этапах эмбриогенеза и в начале постэмбрионального периода (когда проводилась обработка), до перехода к митозам, их количество произвольно не изменяется. Параметры же самих гоноцитов более пластичны. В напряженных условиях развития зародышей в 2002г. как у контрольных, так и у подопытных предличинок пеляди связь количества ППК с морфометрическими характеристиками низкая (рис.54 I, II). Так, у контрольных особей выявлена средняя связь (r = +0,6) числа гоноцитов только с длиной рыла (R) и межглазничным расстоянием (ОО). Сильную отрицательную связь (–0,7) данный показатель проявлял с длиной грудного плавника (PL). У подопытных длина грудного плавника (PL) скоррелирована с количеством ППК средней положительной связью (+0,5), более высокая связь (+0,62) была показана для антеанального расстояния (АА). Тогда как толщина тела (BS) с числом ППК проявляла сильную связь (+0,72). В отношении цитометрических параметров ППК отметим, что в отличие от контроля, в опыте обнаружена более тесная связь диаметра первичных гоноцитов с рядом пластических признаков предличинок (рис.54 II). Так, в контроле обнаружена тесная связь (+0,9) данного показателя только с длиной хвостового стебля (CL), тогда как в опыте диаметр ППК сильно скоррелирован (+0,7) не только с этим параметром (CL), но и с наименьшей высотой тела (НМ), и с межглазничным расстоянием (ОО). Кроме того, в опыте выявлена сильная отрицательная связь (–0,7...–0,9) морфометрическими признаками предличинок. данного показателя с 4 Кор 54 В свою очередь, такой показатель как диаметр ядра, в контроле более скоррелирован с морфометрическими параметрами предличинок, чем в опыте. С данным показателем у подопытных предличинок тесную отрицательную корреляцию (–0,9) имели только толщина (BS) и длина тела (L1). У остальных показателей связь с диаметром ядра ППК практически отсутствовала. В возрасте 14 суток в контроле уже 6 морфометрических признаков предличинок были связаны средней и сильной связью (+0,5...+0,8) с количеством ППК (рис.55 I). В опыте также происходило увеличение корреляции числа первичных гоноцитов с пластическими признаками предличинок, но большинство значений коэффициента корреляции находилось в области отрицательных значений (рис.55 II). Диаметр ППК с морфометрическими характеристиками пеляди проявлял более тесную связь в контроле, чем в опыте. Так, у подопытных предличинок была выявлена сильная положительная связь (+0,8) данного показателя только с длиной хвостового стебля (CL), тогда как в контроле подобная связь (+0,7...+0,9) характерна для 8 морфометрических признаков. Сходный характер связи отмечали и для диаметра ядра. Таким образом, корреляция количества первичных половых клеток с пластическими признаками предличинок весьма неоднозначна. Высокая связь между ними не установлена, обычно связь слабая, реже – средняя, а у подопытных, как правило, обратная. С диаметром гоноцитов и ядер корреляция пластических признаков в обеих партиях выше, но также по-преимуществу отрицательная. При содержании эмбрионов в условиях относительно высоких температур воды, у предличинок соотношения между оцениваемыми генеративными и соматическими показателями существенно иные. Впрочем, количество ППК высоко коррелирует лишь по одному признаку в контроле и опыте: в первом – сильной отрицательной связью с длиной грудного плавника, во втором – сильной положительной с толщиной тела. Кор 55 С другими генеративными параметрами у контрольных и подопытных особей для ряда признаков показана высокая связь, но чаще – средняя. В ходе дальнейшего развития предличинок выявлены более четкие различия обеих партий. В опыте и в контроле связь пластических признаков предличинок с количеством и цитометрическими показателями ППК достаточно высокая, однако у контрольных предличинок коэффициенты корреляции находились в основном в области положительных значений, тогда как у подопытных – в области отрицательных. Кроме того, у контрольных особей отмечались более скоррелированные параметры клетки и ядра с большим количеством пластических признаков, чем у подопытных. Это обусловлено активным нарастанием числа половых клеток, увеличением их параметров у молоди в опыте. Данное явление, обусловленное СИМП, отражает определенную рассогласованность в генеративном и соматическом развитии. В целом, у пеляди в разных условиях развития, независимо от того или иного варианта, развитие линии половых клеток не согласуется (или обратно скоррелировано) с процессом соматического роста, по крайней мере, в начале постэмбрионального развития. Возможно, в последующем уровень скоррелированности у подопытных возрастет. Для утверждения о данном явлении, как о видоспецифичном или общем для остальных представителей р. Coregonus, проанализируем состояние ППК и их соотношение с пластическими признаками у предличинок муксуна. 6.5. Модификация параметров ППК, соотношения генеративного и соматического развития у предличинок муксуна под влиянием СИМП Установленные расхождения контрольных и подопытных предличинок пеляди по цитометрическим показателям позволяют предполагать, что и в процессе формирования репродуктивной системы муксуна на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза будут выявлены определенные различия. У муксуна (2001г.) уже через неделю после вылупления первичные половые клетки вступали в митозы. Гоноциты в половых валиках располагались цепочками, причем в опыте большее их количество находилось ближе к краниальному отделу, что свидетельствовало о более высоком темпе формирования гонады (рис. 56, 57). К этому возрасту число ППК у подопытных предличинок увеличивалось, тогда как у контрольных не изменялось (табл.22). Размеры первичных гоноцитов и в контроле, и в опыте оставались прежними, диаметр ядра несколько уменьшался, отчего снижалось ядерно-плазматическое отношение (табл.21). В возрасте 14 суток, несмотря на большее количество выявленных митозов, как у контрольной (в меньшей степени), так и у подопытной молоди наблюдалось снижение числа ППК (табл.21). Уменьшался в контроле и диаметр половых клеток, в опыте же данный показатель сохранялся на прежнем уровне, но возрастали размеры ядер первичных гоноцитов, тогда как в контроле изменения данного показателя не происходило. Отчего различий в ядерноплазматическом отношении у них не было выявлено, хотя контрольные и подопытные предличинки муксуна значительно расходились по цитометрическим характеристикам ППК. Таблица 21 Динамика количества и цитометрических характеристик ППК у контрольных и подопытных предличинок муксуна (2001г.) Количество ППК Дата D ППК, мкм D ядра, мкм Вариант X S X min- CV max (%) X S X CV (%) 27 Контроль 55,8±6,0 26-77 36,0 15,7±0,2 3,8 апреля (n=10) Контроль (n=10) 4 мая Опыт (n=10) Контроль (n=10) 11 мая Опыт (n=10) X S X CV (%) Vя *100% Vц Vя X S X CV (%) 8,9±0,1 4,3 23,5±0,7 8,4 54,9±4,7 34-73 24,3 15,6±0,3 6,4 8,6±0,1 4,1 21,8±1,1 15,7 58,3±6,4 25-77 31,2 15,9±0,2 3,7 8,7±0,1 4,8 22,0±1,5 22,1 51,6±7,0 25-99 44,8 14,8±0,2 4,2 8,7±0,1 3,7 27,7±1,1 12,9 42,3±6,8 21-79 43,9 15,7±0,2 4,1 9,3±0,2 3,8 28,4±0,6 6,6 Фото 56 57 Таким образом, повышенные темпы концентрации ППК в формирующихся гонадах у подопытных предличинок муксуна, как и у подопытной пеляди, увеличение их количества к недельному возрасту и размеров ядра через две недели после вылупления свидетельствуют о повышенной формационной активности генеративной системы в результате проведенной обработки. Для установления величины и характера модификации слабыми магнитными полями соотношения уровня развития линии половых клеток с характером соматического роста предличинок муксуна был осуществлен корреляционный анализ. В возрасте 14 суток у контрольных особей нарастала корреляция количества ППК с пластическими признаками (рис.58 I). Так, сильную связь (r = +0,7...+0,9) с данным показателем проявляли 6 параметров (L, L1, AA, HM, CL, OC), а среднюю (+0,6) – 4 (PL, H, C, OO). Напротив, у подопытных связь не только слабая, но большинство значений коэффициента корреляции отрицательные (рис.58 II). Цитометрические параметры ППК и пластические признаки предличинок в опытной партии более скоррелированы, чем в контроле. Так, диаметр первичных гоноцитов у контрольных предличинок имел среднюю (–0,6) и высокую (–0,7) обратную связь лишь с межглазничным расстоянием (ОО) и высотой желточного мешка (HVS). Среднюю обратную связь (–0,5...–0,6) данные морфометрические характеристики проявляли и с диаметром ядра (рис.58 I). В опыте у молоди была выявлена средняя и сильная положительная связь (+0,5...+0,8) диаметра ППК с длиной желточного мешка (LVS), наименьшей высотой тела (НМ) и длиной головы (С). Тогда как межглазничное расстояние (ОО), диаметр глаза (ОС) и высота головы (НС) проявляли с данным показателем среднюю и высокую отрицательную связь (–0,5...–0,7). Еще более скоррелированы морфометрические показатели подопытных предличинок с диаметром ядра ППК (рис.58 II). Тесно связаны (+0,7...+0,9) с этим параметром длина желточного мешка (LVS), длина головы (С) и наименьшая высота тела (НМ). Средняя связь (+0,5...+0,6) характерна для заглазничного расстояния (ОР) и длины тела (L, L1). Кор 58 Таким образом, воздействие, оказанное на предличинок муксуна при вылуплении, уже через 2 недели проявилось в определенном своеобразии соотношения уровня развития половых клеток с характером соматического роста, отмеченное на данном этапе развития и у пеляди. Как и у пеляди, связь числа ППК с уровнем соматического развития у подопытных предличинок муксуна отсутствует, хотя у контрольных особей муксуна, в отличие от контрольной пеляди, она значительно выше (по 6 параметрам). Объясняется столь низкая корреляция количества гоноцитов с пластическими признаками существенным их увеличением у подопытных уже к недельному возрасту при том, что соматический рост у предличинок, еще не перешедших на активное питание, подчиняется иным закономерностям, отличным от процессов генеративного развития. Однако, как и у подопытной пеляди, у подопытной молоди муксуна отчетливо проявлена связь с параметрами гоноцитов — диаметром клеток и ядер, она более высокая и для большего числа пластических признаков, чем в контроле. Дальнейшее формирование линии клеток зародышевого пути выходит за рамки настоящего исследования. Мы лишь отметим, что в отличие от пеляди, репродуктивная система муксуна более развита, но не менее активно и вполне адекватно реагирует на поступающий сигнал в процессе обработки магнитными полями. Тем не менее, для получения значимого положительного результата уже на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза, точку применения воздействия следует искать в раннем эмбриогенезе. Очевидно, что как и у пеляди, наиболее эффективные результаты могут быть достигнуты при обработке зародышей в период бластуляции – гаструляции. Но это тема предстоящих исследований. . Глава 7. Формирование половых желез у стерляди в раннем онтогенезе в норме и под влиянием СИМП 7.1. Морфометрические характеристики стерляди на ранних этапах постэмбрионального развития Низкая скоррелированность пластических признаков у сиговых рыб при вылуплении иллюстрирует утверждение, что в эмбриональный период процессы количественнго роста еще не сбалансированы. В последующем степень согласованности между параметрами возрастает, уровень аллометрии снижается, что отмечалось уже на ранних этапах постэмбрионального развития. Становление этого процесса у стерляди в раннем онтогенезе, формирование генеративной системы и влияние на данные параметры слабого магнитного поля рассматриваются в настоящей главе. На этапе вылупления общая длина (L) предличинок стерляди составляла 7,00,1мм. Антеанальное расстояние (АА) превосходило длину хвостового стебля (CL) практически вдвое (табл.23). Молодь имела большой продолговатый желточный мешок, длина которого составляла 34% от общей длины тела, а высота – 24%. Несколько прижатая к желточному мешку голова, в передней части имела отчетливые углубления, ведущие в обонятельные ямки. Ротовое углубление, глаза и жаберные карманы развиты еще слабо. Морфометрические параметры головы были относительно невелики: длина составляла 15% от общей длины тела (табл.22). К возрасту 10 суток происходило увеличение длины и массы тела (табл.22). Отношение антеанального расстояния (АА) к длине предличинки уменьшалось до 55%, тогда как относительная длина хвостового стебля значительно возрастала (табл.22). Таблица 22 Динамика морфометрических характеристик контрольных предличинок стерляди (Абалакский ОРЗ, 1999) Показатели, мм 16 июня (n=20) 26 июня (n=20) L 7,00,09 minmax 6,2-7,6 L1 6,10,08 5,2-6,8 AD - - AA 5,00,06 4,5-5,5 PV - - - 4,50,10 3,8-5,2 27,6/... 7,7 VA - - - 1,20,10 0,8-1,8 7,4/... 20 H 0,90,04 0,7-1,3 12,9/... 19 1,90,10 1,5-2,3 11,7/... 12 HM 0,50,02 0,4-0,7 7,1/... 16 0,70,01 0,6-0,8 4,3/... 9 CL 2,00,05 1,4-2,4 28,6/... 12 6,50,10 5,4-7,4 39,9/... 8,4 BS C R OC OP OO HC BC RCR CR RS SO DL DH AL PL VL BF LVS HVS P (мг) X S X 100/... CV % 5,5 87,1/... L*/ C* 84,3/... min-max L*/ C* 16,30,24 14,9-18,2 100/... CV % 6,53 5,8 12,20,33 10,5-16,9 74,8/... 11,9 - 9,30,12 8,4-10,3 57,1/... 5,8 5,6 9,00,14 8,0-10,0 55,2/... 6,84 5,7/... 16 0,40,02 0,3-0,6 8,9 1,10,02 0,9-1,3 15,7/... 17 0,40,01 0,3-0,6 .../36,4 .../9,1 13 0,10,003 0,1-0,2 23 0,60,03 0,3-0,8 .../54,5 16 0,90,03 0,5-1,1 .../81,8 11 0,80,02 0,7-0,9 .../72,7 19 0,40,02 0,2-0,5 .../36,4 8,6 2,40,05 2,1-2,8 34,3/... 12 1,70,04 1,4-2,0 24,3/... 12 6,70,28 4,5-8,5 Примечание: L* - процент от длины тела (L); X S X 1,1-1,7 8,6/... 12 1,40,04 3,2-4,0 21,5/... 6,6 3,50,10 0,8-1,3 .../28,6 13 1,00,03 0,6-0,7 .../17,1 7,6 0,60,01 1,6-2,2 .../54,3 8,0 1,90,03 1,1-1,8 .../40,0 12,7 1,40,04 1,7-2,6 .../60,0 12 2,10,10 2,0-2,7 .../68,6 8,2 2,40,04 0,4-0,7 .../14,3 17,4 0,50,02 1,3-1,9 .../45,7 10,5 1,60,04 1,2-1,9 .../48,6 10,6 1,70,04 0,9-1,3 .../28,6 13,2 1,00,03 1,4-2,2 11,0/... 10,6 1,80,04 0,9-1,2 6,1/... 9,6 1,00,02 1,3-2,4 12,3/... 15,5 2,00,10 0,9-2,0 9,2/... 22,2 1,50,10 0,6-1,3 6,7/... 17,6 1,00,04 32,1 15,81,2 10,0-20,0 C* - процент от длины головы (С) Вследствие увеличения размеров предличинки и практически полного исчезновения желточного мешка, ее тело стало более прогонистым. Процентное отношение наименьшей высоты (НМ) к общей длине предличинки уменьшилось до 4,3%. Размеры головы возросли и длина ее составляла 21,5% от общей длины предличинки, главным образом за счет рострума. К этому возрасту плавники не были еще полностью сформированы. Кластерный анализ показал, что на этапе вылупления у предличинок стерляди наиболее тесно (r = +0,87) связаны длина головы (С) и заглазничное расстояние (ОР) (рис.59А). Сильно скоррелированы (+0,8) наибольшая (Н) и наименьшая высота тела (НМ). Данные показатели связаны средней связью (+0,6) с кластером, включающим общую длину тела (L), длину без хвостового плавника (L1) и антеанальное расстояние (АА). Высокая связь (+0,68) также выявлена между высотой желточного мешка (HVS) и массой тела (Р). В возрасте 10 суток, перед переходом предличинок стерляди к активному питанию, скоррелированность признаков возрастала (рис.59Б). Сильно связаны (+0,88....+0,9) между собой общая длина тела (L), антедорсальное расстояние (AD), масса тела (Р) и длина головы (С). Наибольшая высота (Н) тесно скоррелирована (+0,88) с наибольшей толщиной тела (BS) и шириной головы (ВС). Высокий коэффициент корреляции (+0,79) был установлен между диаметром глаза (ОС) и антеанальным расстоянием (АА); межглазничным расстоянием (ОО) и шириной рта (SO); высотой головы (НС) и длиной основания анального плавника (AL). Таким образом, предличинки стерляди уже на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза характеризовались достаточно высокой, по сравнению с сиговыми, степенью скоррелированности морфометрических параметров. Что во многом может быть объяснено более высокими температурами воды, при которых происходило их развитие. Денд 59 7.2. Становление репродуктивной системы у стерляди в постэмбриональный период У предличинок стерляди на этапе вылупления средний диаметр ППК составлял 15,51,0мкм. Ядра имели округлую форму, лишь несколько клеток характеризовались полиморфноядерностью. Миграция ППК еще продолжалась, но большая их часть уже локализовалась в области закладки гонад (рис. 60 а,б). На данном этапе развития в цитоплазме первичных гоноцитов еще находилось большое количество глыбок желтка, маскирующих половые клетки на фоне многочисленных желточных включений в цитоплазме клеток кишечника и вольфовых протоков, между которыми встречались учитываемые ППК, что сильно затрудняло их подсчет. В среднем на одну предличинку было отмечено 7,20,2 ППК (рис. 61). Через 5 суток после вылупления миграция первичных гоноцитов завершилась, все половые клетки локализовались в области закладки гонад. В их цитоплазме Полиморфноядерные по-прежнему ППК присутствовали отсутствовали. Кратно глыбки возросло желтка. число идентифицируемых гоноцитов, достигавших 35,85,70 в среднем на одну предличинку. В возрасте 10 суток у личинок наблюдалось интенсивное развитие всех систем органов. В спиной аорте возрастало число эритроцитов, увеличивалась сеть почечных канальцев, в стенке кишечника появлялись слизистые клетки. Практически весь желток в цитоплазме ППК утилизировался. Продолжалась концентрация половых клеток в гонадах, количество которых на одну предличинку возрастало до 59,415,20. Как можно видеть (рис.61), этот показатель отличается сильной вариабельностью. Фото 60 59,4+15,7 шт. 60 50 35,8+ 5,70 40 30 20 7,2+0,2 10 0 16 июня 21 июня 26 июня Дата Рис. 61. Динамика количества ППК у предличинок стерляди (1999г.) Таким образом, формирование репродуктивной системы у стерляди проходило достаточно быстро, что в первую очередь проявляется в быстром завершении концентрации ППК. Очевидно, это может быть обусловлено высокими температурами воды, при которых происходит развитие осетровых рыб. 7.3. Модификация морфометрических характеристик предличинок стерляди под влиянием СИМП Установленные различия реакции молоди сиговых рыб в раннем посэмбриональном развитии, проявленные в характере роста и взаимосвязи целого ряда пластических параметров, на предъявленное слабое магнитное воздействие, позволяют рассчитывать на соответствующие результаты и у стерляди. Тем более что опытная партия была обработана на самых ранних этапах эмбрионального периода – в момент осеменения. На этапе вылупления подопытные предличинки несколько отставали от контрольных по таким морфометрическим характеристикам, как общая длина тела (L), длина тела без хвостового плавника (L1), антеанальное расстояние (АА), наибольшая высота тела (Н), длина хвостового стебля (CL), межглазничное расстояние (ОР), высота (НС) и ширина головы (ВС) (табл.23). Таблица 23 Динамика морфометрических характеристик подопытных предличинок стерляди Показатели, мм 16 июня (n=20) 26 июня (n=20) L 6,70,1 6,2-7,1 100/... 4,3 16,10,2 L1 5,80,1 5,2-6,4 86,6/... 5,1 11,90,1 AD - - - - 9,10,1 minmax 14,818,0 10,912,8 8,4-10,1 AA 4,70,1 4,1-5,5 70,1/... 8,0 8,90,1 8,1-10,1 55,3/... 5,7 PV - - - - 4,30,1 3,6-4,9 26,7/... 7,5 VA - - - - 1,40,04 1,1-1,6 8,7/... 13,0 H 0,70,01 0,6-0,8 10,4/... 7,5 1,80,1 1,4-2,2 11,2/... 12,0 HM 0,50,01 0,4-0,6 7,5/... 7,1 0,70,01 0,6-0,9 4,3/... 8,4 CL 1,90,1 1,4-2,1 28,4/... 12,0 6,50,1 6,0-7,4 40,4/... 5,0 BS 0,50,01 0,4-0,5 7,5/... 7,3 1,50,04 1,1-1,7 9,3/... 11,0 C 1,00,02 0,8-1,1 14,9/... 7,5 3,50,1 3,2-3,9 21,7/... 5,9 R 0,40,01 0,3-0,5 .../40,0 14,0 1,10,03 0,9-1,5 .../31,4 12,0 OC 0,10,004 0,1-0,2 .../10,0 12,8 0,60,01 0,5-0,7 .../17,1 9,1 OP 0,50,02 0,3-0,6 .../50,0 16,0 1,80,04 1,1-2,0 .../51,4 11,0 OO - - - - 1,30,02 1,1-1,5 .../37,1 8,6 HC 0,70,02 0,6-0,8 .../70,0 9,9 2,00,02 1,7-2,3 .../57,1 5,6 BC 0,70,02 0,4-0,8 .../70,0 15,0 2,30,03 1,9-2,5 .../65,7 6,6 RCR - - - - 0,50,01 0,4-0,6 .../14,3 7,6 CR - - - - 1,60,03 1,3-1,9 .../45,7 8,2 RS - - - - 1,60,03 1,3-1,9 .../45,7 8,2 SO - - - - 1,10,03 0,9-1,3 .../31,4 12,0 DL - - - - 1,80,03 1,4-2,0 11,2/... 5,0 DH - - - - 0,90,02 0,8-1,0 5,6/... 7,5 AL - - - - 1,70,1 1,0-1,9 10,6/... 14,0 PL - - - - 1,40,1 1,0-1,9 8,7/... 17,0 VL - - - - 6,8/... 1,10,06 0,9-1,3 13,0 7,5 13,0 12,0 16,51,1 10-20 C* - процент от длины головы (С) 12,0 X S X minmax L*/ C* CV % X S BF 0,40,01 0,4-0,5 .../40,0 LVS 2,50,04 2,1-2,8 37,3/... HVS 0,8-2,2 28,4/... 1,90,1 P 6,0-9,0 7,30,2 Примечание: L* - процент от длины тела (L); X L*/ C* CV % 100/... 4,8 73,9/... 4,4 56,5/... 5,0 29,7 В отличие от интактных предличинок, подопытные характеризовались большей толщиной тела (BS), имели большие размеры желточного мешка (LVS, HVS) и, как следствие, характеризовались более высокой массой тела (Р). В возрасте 10 суток и в опыте, и в контроле, несмотря на увеличение длины антеанального расстояния (АА), наблюдалось снижение процентного отношения данного показателя к общей длине тела (L). Это было обусловлено значительным возрастанием хвостового стебля (CL) (табл.23). У подопытных предличинок, при одинаковом с контролем пектовентральном расстоянии (PV), относительная длина вентроанального расстояния (VA) больше. Однако на данном этапе развития, так же как и при вылуплении, подопытные предличинки стерляди по большинству морфометрических показателей отставали от контрольных. Кластерный анализ показал, что на этапе вылупления в опыте была выявлена тесная связь (r = +0,93) между общей длиной тела (L) и длиной тела без хвостового плавника (L1) (рис.62А). С данным кластером связано (+0,78) антеанальное расстояние (АА). Высоко скоррелированы (+0,89) наименьшая (НМ) и наибольшая (Н) высота тела, а также длина головы (С) и заглазничное расстояние (ОР) (r = +0,78). В контроле данные морфометрические характеристики также были сильно связаны (r > +0,7), однако коэффициент корреляции между ними был несколько ниже (рис. 59А). Через 10 суток после вылупления у предличинок стерляди и в контроле, и в опыте уже между 17 морфометрическими признаками выявлена тесная связь (r > +0,7). Однако у контрольных предличинок коэффициент корреляции выше 0,8 обнаружен между 7 пластическими характеристиками, а у подопытных между 11 (рис.62Б). В контроле наиболее тесно связаны (r = +0,9) общая длина тела (L) и антедорсальное расстояние (AD). Данные пластические характеристики в еще большей степени (+0,98) скоррелированы у подопытных. Дендр 62 У интактных предличинок с этими признаками тесно связаны (+0,88....+0,89) масса тела (Р) и длина головы (С), а у подопытных – антеанальное расстояние (АА) (+0,97), пектовентральное расстояние (PV) (+0,87), длина тела без хвостового плавника (L1) (+0,85) и длина хвостового стебля (CL) (+0,77). Таким образом, в опытной партии происходит замедление развития некоторых пластических признаков стерляди в эмбриональный период, что проявляется и в раннем постэмбриональном онтогенезе. По-видимому, это может быть обусловлено перестройкой процессов морфогенеза, инициированной обработкой эмбрионов слабыми магнитными полями. Однако у подопытных предличинок наблюдается большая синхронность в их развитии, усиливающаяся к моменту их перехода на активное питание. 7.4. Модификация генеративных показателей у предличинок стерляди под влиянием СИМП При анализе роста и развития морфометрических характеристик у предличинок стерляди в раннем постэмбриональном онтогенезе мы отметили сравнительно низкие характеристики подопытных особей. При этом скоррелированность параметров у них несколько возрастала. Проведенное исследование формирования генеративной функции у предличинок на этапе вылупления показало, что в контроле и в опыте количество первичных половых клеток у них различалось незначительно. У контрольных число первичных гоноцитов составляло 7,21,66, у подопытных – 9,82,65 (табл.24). Не было установлено различий и по морфометрическим характеристикам ППК (табл.25). У контрольных предличинок некоторые гоноциты еще находились в состоянии миграции, хотя большая их часть достигла места формирования гонад. Напротив, все учтенные ППК подопытных локализовались в районе половых складок (рис.63). Кроме того, практически у всех подопытных предличинок обязательно встречались 1-2 полиморфноядерные первичные половые клетки и даже отмечались митозы (рис. 64). Через 5 суток после вылупления и в контроле, и в опыте увеличивалось количество ППК (табл.24). У подопытных предличинок первичные гоноциты концентрировались ближе к краниальному отделу формирующейся гонадки, в отличие от контрольных, у которых большая часть отмеченных ППК локализовалась ближе к каудальному отделу. В возрасте 10 суток между контрольными и подопытными предличинками выявлены существенные расхождения в степени сформированости гонад. Так, в опыте на данном этапе развития в среднем на одну предличинку учитывалось 93,910,30 гоноцитов, тогда как в контроле данный показатель был значительно ниже – 59,415,2. Кроме того, у подопытных предличинок отмечена и меньшая изменчивость числа ППК; они локализовались группами (рис.65), что может косвенно свидетельствовать о недавно прошедших митозах, в контроле же чаще встречались одиночные ППК (рис. 66). Таблица 24 Локализация ППК (%) Дата Вариант Контроль 16 июня 21 июня 26 июня (n=10) Опыт (n=10) Контроль (n=10) Опыт (n=10) Контроль (n=10) Опыт (n=10) под место закладки спланхнотомом гонад всего п/я всего п/я Среднее кол-во ППК у 1 предличинки всего п/я 8,3 33,3 91,7 15,1 7,20,2 1,2 - - 100 16,3 9,80,2 1,6 - - 100 - 35,85,7 - - - 100 - 36,46,1 - - - 100 - 59,415,2 - - - 100 - 93,310,3 - Фото 63 64 65 66 Таблица 25 Цитометрические характеристики ППК у контрольных и подопытных предличинок стерляди на этапе вылупления Вариант CV, % 15,51,00 2,24 14,5 Dядра, мкм 7,780,20 0,45 5,8 Vя *100% Vц Vя 16,72,80 6,27 37,5 DППК, мкм 15,71,06 2,37 15,1 Dядра, мкм 7,940,48 1,08 13,6 Vя *100% Vц Vя 16,72,60 5,94 60,6 Параметры X S DППК, мкм Контроль (n=100) Опыт (n=100) X Таким образом, уже на этапе вылупления отмечено несколько большая степень сформированности линии половых клеток у подопытных экземпляров, чем у интактных: меньшее количество желтка в цитоплазме, наличие ядерного полиморфизма и у отдельных особей – постмитотических картин гоноцитов. По мере развития предличинок стерляди наблюдалось все большее расхождение между контролем и опытом, проявлявшееся, в частности, почти в двукратном превышении числа ППК у подопытных. Кроме того, в опыте отмечена более высокая степень концентрации первичных гоноцитов, раньше они вступали и в митотический цикл. Ускорением развития репродуктивной функции (генеративная составляющая) у подопытных особей также может быть объяснено и более замедленное развитие пластических признаков (соматическая) На основании вышеизложенного, можно заключить, что обработка стерляди в раннем эмбриогенезе слабыми магнитными полями приводит на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза к замедлению формирования некоторых морфометрических параметров, но к большей синхронности их развития. По мере роста предличинок наблюдается усиление положительного эффекта, вызванного репродуктивной системы. применяемым воздействием на формирование Глава 8. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Нами показано, что ППК у зародышей пеляди, как и у карповых рыб, обнаруживаются по характерным морфологическим признакам с начальной стадии сомитогенеза. Но если у карпозубых и карповых первые ППК отмечались на границе между мезодермой и энтодермой или в энтодерме (Gamo, 1961; Hogan, 1978; Hamaguchi, 1982; Timmermans, Taverne, 1989), у пеляди они были выявлены среди клеток спланхнотомов. Поскольку более ранние этапы эмбриогенеза нами не рассматривались, вряд ли целесообразно дискутировать о мезодермальном происхождении первичных половых клеток. И все-таки наши данные подтверждают мнение В.П.Божковой с соавторами (1993) свидетельствующее против энтодермального происхождения ППК. Положение первичных гоноцитов в энтодерме можно считать временным, куда, как было показано, первичные половые клетки у эмбрионов пеляди мигрируют из мезодермы на поверхность перибласта и далее в область герминативных валиков, где они появляются у 85 суточных зародышей, за два месяца до вылупления. Важным моментом в процессе формирования линии половых клеток является установление количества первичных гоноцитов, как своеобразной стартовой позиции, с которой начинается поступательное развитие генеративной функции. В течение эмбриогенеза пеляди нами отмечено некоторое увеличение числа ППК. Однако, даже на этапе вылупления у эмбрионов, выращенных в условиях Аракульского рыбоводного завода, отмечалось низкое количество первичных половых клеток, по сравнению с их числом у пеляди в естественном ареале. По-видимому, это обусловлено длительной практикой близкородственных скрещиваний при искусственном разведении. Так, у пеляди уже первого поколения инбридинга отмечается существенное снижение онтогенетического гомеостазиса, возрастание уровня паратипической компоненты изменчивости размеров овулировавших ооцитов, что приводит к повышенной гибели эмбрионов в начале органогенеза (Андрияшева, Черняева, 1985). Это же, как можно видеть, сопровождается угнетением генеративной функции, в первую очередь проявлявшейся в сокращении количества ППК. Количество ППК, обнаруженное разными авторами у молоди лососевых и сиговых рыб в постэмбриональный период, сильно варьирует. По мнению Г.М. Персова (1975), этот факт является результатом разных сроков наблюдений. Однако, нами отмечена сильная изменчивость числа ППК и у особей, находившихся на одном этапе развития, полученных от одних производителей. Так, у пеляди на этапе вылупления количество ППК варьировало от 6 до 49, а у муксуна их насчитывалось от 8 до 78. Следовательно, уже на этапе вылупления наблюдается гетерогенность предличинок по степени сформированности генеративной системы, они имеют разные репродуктивные потенциалы. Высокая изменчивость числа ППК является важным показателем при оценке формирования линии половых клеток. У разных видов рыб существуют значительные расхождения по темпам миграции и срокам концентрации первичных гоноцитов в области герминативных валиков. Концентрация ППК и начало формирования гонад у тихоокеанских лососей р.Oncorhynchus осуществляются на ранних этапах онтогенеза. У горбуши это происходит у 12-15 дневного зародыша (108-135 градусо-дней); у кеты концентрация ППК заканчивается к 49-му дню (152 градусо-дня); у 22-дневных зародышей симы уже формируются гонады (Персов, 1975). Нами отмечено, что у пеляди на этапе вылупления все ППК находились в области закладки гонад. Основное количество ППК у предличинок этого вида локализовалось в области краниального отдела гонады, где они располагались в виде более или менее отчетливых цепочек, но одновременно достаточно большое количество одиночно лежащих клеток отмечалось и в каудальном отделе половых складок. Это же было показано у предличинок пеляди, интродуцированной в условия Северо-Запада России (Селюков, 1985). Соматическая часть гонады в этот период еще практически не сформирована. У муксуна на этапе вылупления также продолжается концентрация ППК, и у отдельных особей гонадки почти сформированы. Следовательно, у сиговых, в отличие от тихоокеанских лососевых, концентрация первичных гоноцитов в области половых валиков более продолжительна, что подтверждается и литературными данными (Селюков, 1985, 1987). Переход первичных половых клеток к митотическим делениям зависит и от темпов их миграционной активности. Так, у лососевых, миграция ППК у которых завершается достаточно рано, первые митозы найдены в возрасте между 9 и 15 днями (90-155 градусо-дней). Для пеляди, отличающейся более продолжительной миграцией ППК, первые митозы указывались в возрасте 30 суток после вылупления (Селюков, 1985). По нашим данным, можно предположить, что у пеляди и муксуна первые деления ППК могут начаться уже в недельном возрасте. Хотя картины митозов первичных гоноцитов у пеляди на данном этапе развития нами не были отмечены, по характеру динамики ядерно-плазматического отношения начало митотической активности вполне можно предположить. Так, ядерно-плазматическое отношение ППК у пеляди на этапе вылупления и через две недели находилось на одном уровне (около 30%), тогда как в недельном возрасте значение данного показателя у предличинок сильно варьировало. По мнению некоторых исследователей, до деления клетки и после него ядерно-плазматическое отношение остается неизменным, но в период делений значительно изменяется (Ташкэ, 1980). Следовательно, в нашем случае можно предположить, что именно в недельном возрасте у пеляди мог произойти митотический цикл ППК. У муксуна, в отличие от пеляди, прослеживается более четкая закономерность в динамике варьирования цитометрических показателей первичных половых клеток. Изменение объема ядра, наступающее в результате функциональных сдвигов, предшествует изменениям объема цитоплазмы (Ташкэ, 1980). Так, в варианте 2000г. у недельных предличинок муксуна отмечалось увеличение объема ядер при неизменных размерах самих ППК, в результате чего возрастало и ядерно-плазматическое отношение. И только к возрасту 14 суток отмечалось повышение диаметра ППК и, как следствие, снижение ядерно-плазматического отношения. На данном этапе развития у предличинок муксуна были найдены первые гониальные клетки. Таким образом, можно предположить, что и у пеляди, и у муксуна активная подготовка ППК к делениям начинается уже в недельном возрасте. Наличие более раннего, чем у пеляди, появления картин митозов первичных гоноцитов у муксуна можно расценивать в качестве одного из видовых показателей. Помимо выявленных цитоморфологических различий ППК и темпов формирования линии половых клеток у предличинок одной партии, обнаруживаются существенные расхождения по данным параметрам у особей разных лет, но инкубируемых в сходных условиях. Так, молодь пеляди и муксуна из варианта 2000г. на этапе вылупления характеризовались меньшим количеством ППК, по сравнению с предличинками 1987, 2001гг., ниже у них были и цитометрические показатели первичных гоноцитов. Считается, что степень сформированности репродуктивной системы может отражать качество предличинок (Чмилевский, 2000). Однако чаще всего качество подращиваемых личинок связывают с размерно-весовыми показателями и их жизнеспособностью, которые определяются свойствами, полученными от родителей, а также условиями развития (Владимиров, 1974; Смирнов, 1975; Никандров, 1985; Грусевич, Чаплинская, 1988; Князева, 1988). Проведенный морфометрический анализ пеляди и муксуна показал существенное расхождение параметров предличинок разных лет. Так, средняя длина тела у пеляди при вылуплении в варианте 2000г. составила 9,50,06 мм, тогда как в 1987г. – 8,20,05 мм, а в 2001г. – 8,80,07 мм. Значения большинства пластических признаков – длина желточного мешка, высота тела, длина головы, диаметр глаза, высота желточного мешка, высота головы, длина грудного плавника – также были выше в 2000г., чем в 1987г. и несколько превосходили соответствующие показатели предличинок из варианта 2001г. Для многих рыб на ранних этапах по стэмбрионального развития отмечается большая изменчивость длины и массы тела, по сравнению с другими морфометрическими характеристиками (Слуцкий, 1987; Халатян, Алексеева, 1990). Проведенное нами сравнение изменчивости морфометрических признаков у предличинок пеляди и муксуна показало, что на этапе вылупления именно длина тела отличается наименьшей вариабельностью (коэффициент вариации не превышал 4,5%), по сравнению с остальными пластическими показателями, что свидетельствует о повышенной асинхронности развития молоди. К 14-суточному возрасту у пеляди и муксуна увеличивались такие линейные параметры, как общая длина тела и антеанальное расстояние, а высота тела и длина хвостового стебля возрастали незначительно. У предличинок муксуна, в отличие от пеляди, несколько увеличивалась длина грудного плавника. У обоих видов практически все морфометрические параметры головы оставались неизменны. Вследствие интенсивной утилизации желтка, размеры желточного мешка значительно сокращались. Существенно снижалась и вариабельность морфометрических параметров. Аллометрическое соотношение между общим ростом тела и ростом его отдельных частей может являться одним из критериев, отражающих жизнеспособность личинок. В частности, некоторые участки тела могут развиваться с некоторым отставанием или в течение продолжительного периода. Другие, наоборот, развиваются ускоренно, и если этого не происходит, личинки чаще всего погибают (Аношко, 1997; Гутиева, 2000). Некоторые авторы указывают на преобладающее развитие организма в раннем онтогенезе в направлении формирования морфологических признаков, обеспечивающих увеличение скорости движения (Халатян, Алексеева, 1990). Речная пелядь и муксун являются типичными реофилами, предличинки которых вынуждены противостоять течению, чем и вызвано существенное возрастание длины тела, антеанального расстояния и размеров грудного плавника. Проведенный нами кластерный анализ показал, что на этапе вылупления предличинки пеляди и муксуна характеризуются низкой скоррелированностью большинства морфометрических параметров. Вместе с тем, для личинок можно выделить несколько признаков, по которым установлена тесная корреляция. Для предличинок пеляди разных лет наибольшая связь была установлена между длиной и высотой головы. В вариантах 1987 и 2001гг. остальные морфометрические характеристики были слабо между собой согласованны, тогда как у предличинок из варианта 2000г., имеющих большие значения морфометрических параметров, сильная связь обнаруживалась между высотой тела и высотой головы. С данными морфометрическими признаками столь же тесно связаны длина желточного мешка и длина грудного плавника. Следовательно, уже на этапе вылупления предличинки 2000г. имели более высокие стартовые возможности. В данный период у предличинок муксуна в 1987 году ни в одной паре признаков не были выявлены ни сильная, ни средняя связи. А предличинки варианта 2000г., также как и у пеляди, отличались не только более высокими значениями, но и большей степенью скоррелированности пластических признаков. По мере развития особей происходит значительное увеличение связи между параметрами. На основе анализа морфометрических показателей предличинок разных лет, по молоди пеляди и муксуна варианта 2000 г. можно дать ретроспективную оценку производителям этих видов в 1999г., как обладавших наилучшими репродуктивными характеристиками. предличинки варианта из 2000г., При этом, несмотря как на уже отмечалось, высокие значения морфометрических признаков, имели наименьшие, по сравнению с вариантами 1987, 2001гг., показатели степени сформированности генеративной системы. Если принимать в качестве критерия качества предличинок именно линейно- весовые характеристики (Владимиров, 1974; Никандров, 1985; Князева, 1988 и др.), то молодь этого варианта, несомненно, высокожизнестойка. До сих пор нет однозначного мнения о взаимосвязях процессов соматического роста и уровня развития генеративной функции у рыб. Одни исследователи считают, что гонадогенез обладает большой физиологической автономностью, а взаимосвязь между ростом и временем наступления половой зрелости выражена слабо (Кузьмин, 1967; Кошелев, 1971). Но существует точка зрения о неразрывном единстве темпа полового созревания и скорости роста рыб (Никольский, 1974; Колядин, 1990). Другие авторы отмечают, что решающее влияние, как на абсолютную, так и на относительную плодовитость оказывает не характер роста особи за отдельные годы, а темп роста в год нереста (Решетников, 1980). Отмечалось также, что у самок карпа в разные периоды онтогенеза темп линейного роста и уровень развития гонад находятся в различном соотношении — от тесной связи в период протоплазматического роста, до слабой при половом созревании (Смирнов, 1982). Более того, при одинаковом темпе роста рыб у них могут проявляться противоположные тенденции в развитии гонад (Чмилевский, 2000). При оценке взаимосвязи развития морфометрических признаков и репродуктивных характеристик у половозрелых рыб было показано, что существует средняя связь рабочей плодовитости с размерно-весовыми показателями, а связь размеров тела с относительной плодовитостью, диаметром икринок и их вариабельностью либо низкая, либо вообще отсутствует (Андрияшева, Ляшенко, 1985; Яблоков, 1985). В каком же соотношении находятся генеративная и соматическая составляющие на ранних этапах постэмбрионального развития, когда организм только начинает реализовывать свои потенциальные возможности? Обобщая результаты проведенного корреляционного анализа, можно заключить, что у пеляди в течение предличиночного периода развития, до перехода на активное питание, связь количества ППК и их цитометрических параметров – показателей, характеризующих уровень развития генеративной системы, – с большинством морфометрических признаков была слабой. На этапе вылупления лишь толщина тела сильно коррелировала с количеством первичных половых клеток. Межглазничное и заглазничное расстояния, а также длина желточного мешка проявляли среднюю связь с числом ППК. В момент перехода предличинок на активное питание у пеляди слабая связь большинства пластических признаков с цитометрическими параметрами ППК сохранялась, хотя характер ее несколько изменялся. Так, наименьшая высота тела была связана средней связью с количеством первичных гоноцитов, а с их диаметром – сильной отрицательной связью. Между длиной желточного мешка и числом первичных гоноцитов, а также диаметром их ядер установлена средняя связь. Таким образом, слабая связь количества и цитометрических параметров ППК с морфометрическими характеристиками предличинок пеляди, а также меньшее их число у молоди, характеризующейся большими размерно-весовыми показателями, свидетельствует об относительной независимости процессов генеративного и соматического развития, по крайней мере, в конце эмбрионального развития и на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза. У муксуна, также как и у пеляди, на этапе вылупления отмечалась слабая связь между развитием генеративной системы и пластическими признаками. Однако перед скоррелированность переходом между предличинок на морфологическими активное параметрами питание и числом первичных половых клеток существенно возрастала. Так, уже 6 пластических признаков были связаны с числом ППК сильной связью (r > +0,7). Цитометрические показатели самих половых клеток (диаметры ППК и ядра, цитоплазматическое отношение) были менее скоррелированы с морфометрическими характеристиками. Таким образом, у муксуна можно констатировать повышение степени эмбрионизации, проявляющейся как в становлении линии клеток зародышевого пути, так и в отношении их связи с морфологическими признакми. Одним из важнейших факторов, от которого зависят выживание икры и эмбрионов, их жизнестойкость, темпы морфогенеза и рост личинок является температура. Для развивающейся икры ряда промысловых рыб определены наиболее благоприятные и пороговые температуры. Эти показатели для разных видов различны, что обусловлено биологическими особенностями и экологией размножения рыб. Для сиговых, большинство видов которых нерестится в зимний период, характерны низкие температуры развития: 0,2-0,80С. При искусственном разведении, а также при интродукции сиговых за пределы естественных ареалов температуры инкубации часто остаются в пределах +1,3....+4,00С (Кузьмин, 1963; Лебедева, 1981, 1989; Сергиенко, Кугаевская, 1990; Сергиенко, 1995). Многие авторы отмечают, что отклонение температуры от оптимальной вызывает различные нарушения в развитии эмбрионов (Вовк, 1974; Крупкин, 1975; Котова, 1981; Головкова, 1986; Грусевич, 1988). Существует прямая зависимость между температурой и скоростью эмбрионального развития (Детлаф, Детлаф, 1960; Лебедева, Мешков, 1969; Детлаф, 1977, 1998; Богданов, 1997). Поставленный эксперимент по инкубации зародышей пеляди в лабораторных условиях при среднесуточной температуре +4,50С показал, что сравнительно высокие температуры воды обусловили повышенную интенсивность морфогенеза. Массовое вылупление пеляди началось 3 апреля, что было почти на месяц раньше, чем при оптимальных условиях инкубации. Однако количество градусо-дней при этом намного превышало соответствующие показатели особей, развивающихся в нормальных условиях, соответственно, 415,8 и 93,3. По всем морфометрическим параметрам подопытные предличинки превосходили последних, что несколько противоречит литературным данным. По мнению многих исследователей, высокая температура ускоряет рост в меньшей степени, чем дифференцировку, следствием чего являются более ранние сроки вылупления, но меньшие размерно-весовые характеристики предличинок (Татарко, 1966; Клевезаль, 1975; Ziluas et al, 1983; Головкова, 1986). У предличинок на фоне высоких значений пластических признаков отмечалась их сильная вариация. Незначительная изменчивость была свойственна лишь длине тела (CV=4,6%) и размерам антеанального расстояния (CV=3,8%), тогда как у большей части морфометрических показателей коэффициент вариации превышал 20%. Столь сильная вариация размеров пластических признаков не отразилась на сбалансированности развития предличинок. На этапе вылупления пеляди тесная скоррелированность была отмечена между всеми морфометрическими параметрами. Вариабельность размеров на протяжении первого года жизни рыб, по мнению некоторых авторов, испытывает закономерные изменения – она возрастает с момента вылупления и до окончания первого сезона (Турдаков, 1969; Поляков, 1970). Однако проведенная бонитировка предличинок пеляди в возрасте 14 суток показала, что изменчивость морфометрических характеристик существенно снизилась. У пеляди, развивающейся при нормальном (0,30С) температурном режиме, коэффициент вариации пластических признаков в момент перехода предличинок на активное питание практически не изменился. Следовательно, указанная закономерность для этого вида, возможно, проявится на последующих этапах онтогенеза; в раннем постэмбриогенезе она не выявлялась. Причины вариабельности размеров личинок, мальков и сеголеток неоднозначны, поэтому у разных авторов имеются этот счет различные мнения. Изменчивость размеров молоди обусловливается как разнокачественностью вылупившихся личинок, так и разнообразием условий инкубации. Некоторые авторы под разнокачественностью понимают различия в размерах вылупившихся личинок и в величине запаса желтка, которые в той или иной мере и вызывают расхождение в росте в последующие периоды жизни молоди (Лебедев, 1967; Поляков, 1970). Другие исследователи (Cridland, 1959; Ястребков, 1966; Владимиров, 1974) показали, что при выращивании личинок, полученных из икры разных размерных групп от одной самки осетра и лососей, различия в размерах личинок сглаживаются полностью уже к концу резорбции желтка. А молодь некоторых видов рыб, выведенная из мелких и крупных икринок, при содержании в сходных условиях характеризуется одинаковым темпом роста. Таким образом, они пришли к выводу, что размеры вылупившихся личинок и количество их желтка сами по себе не могут оказывать значительного, и тем более решающего, влияния на вариабельность размеров молоди на последующих этапах ее жизни. А расхождения в скорости развития и роста, по их мнению, определяются, главным образом, в различных конституционных свойствах, полученных от родителей и приобретенных в период эмбрионального развития. Учитывая литературные данные и результаты наших исследований, мы склонны предполагать, действительно, что важнейшим морфометрических при оптимальных фактором, характеристик, условиях влияющим являются на развития, изменчивость конституционные качества организма. Так, при нормальном температурном режиме инкубации у предличинок пеляди при сходном темпе роста к моменту резорбции желточного мешка, коэффициент вариации пластических признаков сохраняется практически на том же уровне, как и при вылуплении. При этом скоррелированность морфометрических параметров существенно возрастает. Однако, как отмечалось выше, в критических условиях инкубации, при повышенных температурах воды, изменчивость морфометрических характеристик пеляди в ходе предличиночного развития существенно снижалась. Данное явление объяснить повышением или снижением темпа роста у разноразмерных предличинок не представляется возможным, поскольку к моменту их перехода на активное питание большинство пластических признаков увеличилось незначительно, а некоторые параметры даже уменьшились. Скорее всего, снижение гетерогенности предличинок по морфометрическим характеристикам произошло за счет элиминации более крупных особей. Известно, что потомства, обладающие большей вариабельностью размеров, менее жизнеспособны и дают в среднем более высокие отходы за период выращивания (Княжева, 1966; Владимиров, 1974), что в большинстве случаев связывают с условиями питания (Поляков, 1970). Но в предличиночный период развития обеспечение трофическими ресурсами происходит за счет эндогенного усвоения желтка и пищевая конкуренция не может повлиять на выживаемость особей. На наш взгляд, высокие температуры стимулировали интенсивное развитие эмбрионов, смещение на зародышевый период ранних стадий постэмбрионального развития – явление эмбрионизации – и, как следствие, исчерпание ресурсов для последующего онтогенеза. Отчего происходил массовый отход наиболее крупных особей, еще не достигших личиночного этапа, т.е. не перешедших к экзогенному питанию. Корм в виде науплиев артемии был в наличии, но молодь его не потребляла. Известно, что при более высоких темпах роста возрастают и траты на энергетический обмен (Винберг, 1975). Следовательно, при неблагоприятных условиях развития сохранение особей, обладающих невысокими размерными показателями, скорее всего, имеет адаптивное значение. При изучении влияния теплового отбора на морфологические признаки радужной форели было показано, что более теплоустойчивыми оказались характеристиками, чем особи с меньшими размерно-весовыми более крупные, но менее теплоустойчивые (Голод, 1986). Ибо на поддержание их метаболического статуса требуется меньшее количество энергетических ресурсов. Адекватно оценить влияние какого-либо лимитирующего фактора можно только с учетом изменений репродуктивных характеристик, которые являются более чувствительными, чем показатели смертности или угнетения роста (Чмилевский, 2000). Достаточно большое количество работ посвящено изучению особенностей формирования репродуктивной системы рыб в постэмбриональный период в условиях повышенной температуры. Так, было показано, что повышенная температура значительно ускоряет процесс размножения ППК и гониальных клеток; в более ранние сроки происходит цитологическая и анатомическая дифференцировка пола (Чмилевский, 1997, 2000; Захарова, 1997). При этом отмечалось, что если на ранних этапах онтогенеза повышенная температура оказывает благоприятное влияние на формирование генеративной системы, то ближе к моменту созревания ооцитов она приводит к их массовой резорбции (Лаврова, Чмилевский, 1987; Акимова, 1988; Чмилевский 1990, 1997, 2000). Становление генеративной системы в ранний постэмбриональный период сиговых, эмбриогенез которых проходил при повышенных температурах, практически не изучено. При инкубации пеляди в условиях повышенных температур термостатированной камеры в лаборатории (2002г.) у предличинок на этапе вылупления мы отмечали большее количество ППК, чем у молоди, эмбриогенез которой проходил при оптимальном температурном режиме. Выше у них были и цитометрические характеристики первичных гоноцитов. Однако в течение предличиночного периода происходило устойчивое снижение числа первичных половых клеток. Таким образом, повышенные температуры инкубации пеляди приводят на этапе вылупления к достаточно сильной гетерогенности предличинок по морфометрическим параметрам, с одной стороны, а с другой – к высоким репродуктивным характеристикам. Однако следствием ускоренного эмбриогенеза явилось снижение не только пластических признаков и степени их скоррелированности, но и уровня развития генеративных качеств на ранних этапах постэмбрионального развития. О с е т р о в ы е , в отличие от сиговых, относятся к весенне нерестующим видам. На этапе вылупления общая длина предличинок стерляди составляла 7,00,1мм. Антеанальное расстояние превосходило длину хвостового стебля практически вдвое. К возрасту 10 суток отношение антеанального расстояния к длине тела уменьшалось до 55%, тогда как относительная длина хвостового стебля значительно возрастала. Кластерный анализ показал, что предличинки стерляди уже на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза характеризовались достаточно высокой, по сравнению с сиговыми, степенью скоррелированности пластических признаков. Что во многом может быть объяснено более высокими температурами воды, при которых происходило их развитие. В отличие от эмбрионов костистых рыб, характеризующихся меробластическим дроблением, у осетровых дробление яиц относится к голобластическому типу – полное неравномерное дробление. Следствием чего является нахождение в бластомерах глыбок желтка. Большое количество внутриклеточного желтка не позволило нам идентифицировать первичные гоноциты и проследить формирование линии половых клеток в эмбриогенезе стерляди. Количество ППК удалось подсчитать лишь на этапе вылупления, хотя желток все еще затруднял их выявление. На трудности при обнаружении ППК у осетровых на ранних этапах онтогенеза указывал и Г.М. Персов (1975), подсчитавший ППК лишь у одной личинки ленского осетра. При этом автор указывал, что эти клетки имели размеры от 16х20 до 20х60мкм. По нашим данным, предличинки иртышской стерляди имели значительно меньшие размеры первичных половых клеток. Так, средний диаметр ППК на этапе вылупления составлял 15,51,0мкм. Концентрация первичных гоноцитов в половых валиках у осетровых совпадает с исчезновением в них глыбок желтка. У стерляди в возрасте 5 суток все отмеченные нами первичные половые клетки уже локализовались в области половых валиков. К 10 суткам, когда весь желток в ППК практически утилизировался, их число существенно возросло. Таким образом, формирование репродуктивной системы у стерляди проходит быстрее, чем у сиговых, но несколько медленнее, чем у лососевых, что обусловлено не столько температурными условиями, сколько видовыми особенностями. Оцениваемое с позиций классических принципов биологического морфогенеза становление линии половых клеток в процессе эмбрионального развития изученных нами сиговых и, в меньшей степени, стерляди, лишний раз подтверждает их незыблемость. Некоторые коррективы вносит отмеченная нами асинхронность в процессе формирования линии ППК и уровня соматического развития эмбрионов и предличинок. Но и это вполне объяснимо с точки зрения, отстаиваемой рядом исследователей (Бунур, 1968; Айзенштадт, 1984) независимого становления линии клеток соматического и зародышевого пути. Вместе с тем, установленное нами влияние слабых импульсных магнитных полей в ультразвуковом диапазоне частот приводит к определенным изменениям некоторых характеристик раннего онтогенеза. К ним относятся значительное увеличение количества и миграционной подвижности ППК в эмбриогенезе, изменение характера развития пластических признаков и их видоспецифическое (у пеляди и муксуна) соотношение с уровнем развития первичных гоноцитов и их параметров, что вынуждает рассмотреть обозначенные проблемы раннего онтогенеза с точки зрения, несколько отличающейся от общепринятой. Начиная с известной книги Т. Моргана «Наследственность и развитие» (1937), проблема соотношения генетики и эмбриологии сводилась к стремлению разобраться, каким образом генотип, содержащий весь набор генов, определяет дифференцировку (специализацию) десятков клеточных типов, в которых проявляется (экспрессируется) только часть этих генов. До недавнего времени решение этой проблемы сводилось к выяснению того, происходит ли в ходе развития: а) необратимая потеря части генотипа (идея, идущая еще от А. Вейсмана); б) осуществляется дифференциальная активация одних генов и репрессия других (представление Т. Моргана). Трудность состоит в том, чтобы понять, как могут сочетаться два, казалось бы, противоречащих утверждения: развитие целиком определяется генетической информацией, механизмы развития не сводятся лишь к дифференциальной активности генов в клетках. Но вся проблема в том, что эти утверждения относятся к различным уровням – клеточному и надклеточному. Когда анализируется ранний этап реализации генетической информации, исследователь имеет дело с клеточным уровнем: активацией генов, синтезом специфических белков, изменениями формы или поведения клеток. Но все это само по себе не может в принципе объяснить процессов морфогенеза, которые происходят на надклеточном уровне и начинаются, прежде всего, с возникновения различий между одинаковыми до того клетками (Нейфах, 1990). В ходе развития специализация единожды возникшего клеточного типа возрастает, и, следовательно, по ходу этой специализации происходит последовательное включение новых специфических генов и, вероятно, выключение некоторых работавших раньше. Однако включение специфических наборов генов, определяющих специализацию клеток, – не причина, а скорее следствие первоначально возникших различий между клетками, следствие уже осуществившегося выбора путей развития. Оставаясь на уровне генов, мы неизбежно сталкиваемся с проблемой, которая только лишь на этом уровне решена быть не может: что заставляет гены, до того одинаково действующие во всех клетках, например клеточного пласта, изменить свой вектор и действовать по-разному в разных частях этого пласта? Признание необходимости некоторого универсального механизма морфогенеза, как самостоятельной, не сводимой только лишь к генетической программе, составляющей эмбриогенеза, привело к оформлению нового подхода, основными морфогенетическое понятиями поле, которого разметка, стали групповое самоорганизация, поведение клеток (Белинцев,1991). Установление пространственной организации в развивающемся зародыше связывают с функцией морфогенетического поля (МП). Понятие “биологическое поле” впервые было предложено А.Г.Гурвичем (1944) и подробно рассмотрено Б.С.Кузиным (1992), который подразделял его на “морфогенетическое”, “морфофилактическое” и “таксономическое” поля. Реальность морфогенетического поля, обладавшего определенным специальным механизмом пространственной организации, как самостоятельной составляющей онтогенеза, рассматривал в биологии индивидуального развития Л.В.Белоусов (1970, 1979, 1993). Оно же было описано Б.Н.Белинцевым (1991) с использованием физического и математического подходов на основе теории самоорганизующихся систем – синергетики. По Б.Н.Белинцеву, морфогенетическое поле определяет пространственный контроль развития на элементарном уровне самоорганизации надклеточного порядка в эмбриогенезе. Все больше появляется свидетельств межклеточных и внутриклеточных взаимодействий волновой природы в живых организмах. Сверхслабые свечения в ультрафиолетовой и видимой частях спектра в межклеточных взаимодействиях изучаются уже много десятилетий (Гурвич, 1944; Казначеев, Михайлова, 1981 и др.). Согласно биофотонной концепции, развиваемой с 1977 Г. Поппом, утверждается исключительное значение сверхслабого когерентного электромагнитного излучения для внутри- и внеклеточных связей. Показано, что эмбрионы низших позвоночных (рыбы и амфибии) разных стадий развития способны дистантно взаимовлиять друг на друга (Бурлаков, 1998; Бурлаков и др.,1999, 2000, 2002). Согласно концепции полевой организации живого вещества, в земных условиях она определяется материально-энергетическими потоками, имеющими электромагнитную природу, включая космические излучения, о которых писали А.Л.Чижевский (1973) и В.И.Вернадский (1989). Такие потоки организуют пространство на поверхности планеты, занятой сложными органическими соединениями. Данная концепция была сформулирована на основе исследований феномена дистантных межклеточных взаимодействий и обусловленного ими “зеркального” цитопатического эффекта (Казначеев, Спирин, 1991). Исследования 70–х годов XX века показали, что одним из основных проводников солнечного влияния на Землю является геомагнитное поле (ГМП) (Дубров, 1974). Прямым доказательством значимости ГМП для биологических объектов являются эксперименты, в результате которых становится очевидным, что устранение именно ГМП резко нарушает функциональное состояние организмов. Это, прежде всего, эксперименты с использованием специальных экранов, когда биологические объекты оказываются в гипомагнитной среде с остаточной напряженностью поля порядка 50-1000 гамм. При длительном нахождении биологических объектов в условиях полного экранирования резко нарушаются физиолого–биохимические свойства, наблюдается атипический рост клеток и тканей, нарушение морфологии и функционирования внутренних органов, отмечается преждевременная смерть. У микроорганизмов в гипомагнитных условиях появляются мутантные формы клеток (Чуваев, 1969). Природные ЭМП оказывают на живые организмы регулирующее действие, способствуя нормализации процессов жизнедеятельности, нормальному взаимодействию организмов с внешней средой. Помимо уже доказанного влияния ГМП на биологические объекты (Пиккарди,1967; Пресман, 1968; Дубров, 1970; Владимирский, 1995; Белишева, Попов, 1995; Рапопорт и др., 1998; Гурфинкель и др., 1998), накоплен достаточно обширный фактический материал, свидетельствующий о высокой чувствительности растений, животных и человека к искусственным магнитным полям различного типа и интенсивности (Судаков, Антимоний, 1973; Сиротина и др., 1971; Аксенов и др. 1996; Виллорези и др., 1998 и др.; Новикова и др., 1998; Галат и др., 1999; Сташков, Горохов, 1999). Определенный интерес представляют данные о положительном воздействии на биообъекты полей низких частот в диапозоне от долей до десятков герц (Пресман, 1968; Аксенов и др., 1996; Шейман, Фесенко, 1999). При этом основным фактором, действующим на организмы считается магнитная компонента (Буначенко, 1978; Никольская и др., 1996; Новиков, 1998; Узденский, 1998). Несмотря на большое количество экспериментальных данных по влиянию ЭМП на биологические объекты, в настоящее время общепринятые представления о реализующих его механизмах. отсутствуют Достаточно устоявшимся мнением в литературе является то, что взаимодействие ЭМП с биологическим объектом происходит на молекулярноионном уровне. При этом должен изменяться мембранный потенциал клеток, приводящий к ответным физиологическим, психическим и другим реакциям организма. Кроме того, в последнее время появились представления, позволяющие сделать предположение о том, что возможным физическим механизмом этого воздействия является циклотронный резонанс низкочастотного ЭМП с ионами Ca2+ и Mg2+ в присутствии слабого постоянного магнитного поля Земли. Такое взаимодействие может привести к изменению концентрации свободных ионов во вне- и внутриклеточных средах. Однако, указанный механизм слишком сужает номенклатуру мишеней резонансного действия ЭМП и не позволяет объяснить влияние на биологический объект ЭМП с частотами ниже 1 Гц (Сидоренко, 2001). Предполагается также, что при действии электромагнитного излучения уменьшается количество растворенного в межклеточной среде воздуха, тем самым обеспечивая ответную биологическую реакцию (Емец, 1999). По мнению некоторых исследователей, кванты электромагнитного поля могут выступать как одни из наиболее значимых материальных носителей потоков информации в биосистемах. Биосистемы же в ответ на внешние воздействия способны осуществлять реакции, связанные с усилением, ослаблением, а также аккумуляцией магнитных сигналов. Перераспределение состава потока магнитных квантов области видимого спектра осуществляет важную информационную функцию в регуляции обмена веществ в организмах (Казначеев, Спирин, 1991). Многие экспериментальные работы показали, что действие на живые объекты слабых магнитных полей осуществляется через воду – внутреннюю среду всех живых существ (Привалов, 1968; Дардымов, 1966; Марков, 1979; Капель-Боут, 1995 и др.). Аномальные свойства воды обусловлены особенностью структуры ее молекулы. Среди существующих моделей структуры воды наиболее интересной, по видимому, является модель, разработанная Берналом и Фаулером и развитая Поплой и Самойловым (Марков, 1979). Предполагается, что, магнитное воздействие на воду увеличивает длину водородных связей, и потому магнитное влияние следует связать с информационным маршрутом, при котором существенна не столько величина введенной энергии, сколько информация, которую она несет (Марков, 1979). Эксперименты с разными биосистемами показывают, что биологическое воздействие магнитообработанной воды обусловлено структурными изменениями во внутриклеточной и внеклеточной воде. Следовательно, для проведения экспериментов по влиянию ЭМП на биообъекты, особый интерес представляют организмы, онтогенез которых проходит в водной среде. В установке “Т-101”, применямой в наших работах, не только использовались частоты ультразвукового диапазона, но и сами генерируемые магнитные поля имели сверхнизкую интенсивность, в 100 000 раз ниже естественного магнитного поля Земли. Это подтверждено в Центре радиобиологии неионизирующих излучений ГНЦ Институт Биофизики МЗ РФ. Имеются и соответствующие заключения о немутагенной природе этих воздействий, а также заключение Главного Санитарного Врача России о соответствии государственным санитарно эпидемиологическим правилам и нормам (№ 50 РВ 01 423 П 006291 04 02). Хорошо известно, что в раннем онтогенезе животных существуют критические периоды развития. Эта теория применительно к рыбам была разработана еще в 30-40-ые годы Ленинградской школой эмбриофизиологов (А.Н. Трифонова, Н.Д. Никифоров, Т.И. Привольнев, М.Ф. Вернидуб). Экспериментально доказывалось, что воздействие разных факторов на развивающуюся яйцеклетку далеко не всегда приводит к ее поражению. Имеются стадии, когда эти факторы не оказывают на зародыш заметного влияния, однако воздействие этих же факторов и в тех же дозах на другие стадии вызывают значительный процент уродств или гибели развивающихся эмбрионов. Кроме снижения резистентности, критические периоды характеризуются и рядом физиологических особенностей. Так, уменьшается количество митозов, ослабляется нуклеиновый обмен, снижается количество реактивных групп белка (SH-групп), значительно снижается синтез РНК, падает и анаэробный гликолиз (Недовесова, 1986). Высока связь критических периодов развития и с морфогенетическими процессами. Замечено, что периоды повышенной чувствительности по времени совпадают с важнейшими узловыми этапами развития всего организма или его зачатков. Именно в этот момент происходит восприятие детерминирующих импульсов и перестройки в клетках, ведущих к видимым процессам дифференциации (Светлов, 1978). По мнению П.Г.Светлова, в критические периоды имеется возможность восприятия организмом воздействий даже небольшой силы. Следовательно, при изучении влияния слабых импульсных магнитных полей (СИМП) на формирование генеративной системы у сиговых и осетровых рыб необходимо было не только выявить эффект от осуществляемого воздействия, но и установить этапы онтогенеза, наиболее к нему чувствительные. Обработка икры в момент ее оплодотворения и набухания (1 и 2 варианты опыта) проводилась с целью активации эмбриона и перивителлиновой воды, остающейся под оболочкой в течение всего эмбриогенеза. Известно, что у костистых рыб завершение набухания сопровождается прекращением обмена с окружающей средой (исключая газообмен), который осуществляется лишь в системе «зародыш — перивителлиновое пространство» (Зотин, 1961). Выбор момента асинхронных делений дробления для проведения спецобработки (вариант 3) обусловлен спецификой данной фазы развития. Именно к этому этапу у зародыша резко сокращается запасенный в оогенезе информационный материал (цитидин- и тимидин-3-фосфаты, мРНК, рибосомы, гистоны и пр.) и он начинает переходить на реализацию программы собственного генома (Нейфах, Тимофеева, 1977). Перестройка клеточного цикла и начало морфогенетической функции ядер (МФЯ) у пеляди приходится на 130 (Игнатьева, 1974; Ротт 1979, 1987), что соответствует формированию XII-XIII борозды дробления (Ротт, 1987). При проведении обработки эмбрионов пеляди СИМП на этапе бластуляции основные различия у подопытных и контрольных зародышей в течение всего эмбриогенеза состояли в 3-8-кратном превышении количества ППК, более интенсивной миграции ППК к зачатку гонад, высокой морфофункциональной активности ядра у подопытных. У зародышей, введенных в эксперимент на более поздних этапах развития (4-6 варианты), проводимая обработка не вызывала количественных изменений, а стимулировала только миграционную подвижность ППК. При оценке морфодинамики ППК отмечено, что у эмбрионов в опытных вариантах постоянно встречались полиморфноядерные первичные гоноциты, что считается морфологическим критерием повышенной биосинтетический активности ядра (Персов, 1975). Их стали выявлять уже через 26 (1 и 2 варианты) и 34 (3 вариант) суток после оплодотворения. Полиморфноядерные ППК у контрольных особей обнаруживали редко. У подопытных зародышей (3 вариант) в возрасте 68 суток число таких ППК возрастало в области перибласта, где была зафиксирована и наибольшая концентрация этих клеток. В дальнейшем, при локализации ППК в области половых зачатков, число полиморфноядерных ППК снижалось. Таким образом, полученные результаты позволяют предположить, что существенные изменения морфофункциональных характеристик генеративной функции эмбрионов пеляди происходят при воздействии на них СИМП именно в момент бластуляции. Количество первичных гоноцитов при завершении эмбриогенеза, характер и темп их миграционной активности существенно превышают соответствующие значения в контроле, что нами рассматривается как проявление эмбрионизации у подопытных зародышей. При обработке эмбрионов пеляди на этапе гаструляции в условиях экстремальных температур были выявлены существенные расхождения подопытных и контрольных предличинок. На этапе вылупления подопытные особи отличались меньшими морфометрическими характеристиками и низкой их скоррелированностью. Но по числу первичных гоноцитов различий между контролем и опытом не установлено. В ходе дальнейшего развития у контрольных предличинок пеляди происходило снижение не только морфометрических, но и репродуктивных характеристик. Тогда как у подопытных увеличивались возрастала число и скоррелированность цитоморфологические пластических признаков, показатели первичных гоноцитов. Следовательно, можно полагать, что слабые магнитные поля с указанными частотами для эмбрионов пеляди в условиях экстремальных температур играют протекторную функцию – роль фактора, инициирующего переход организма в оптимальный режим взаимодействия с окружающей средой как в период зародышевого развития, так и в постэмбриональном онтогенезе. Поскольку одним из критических этапов развития считается момент вылупления, особый интерес представляет установление возможности коррекции развития репродуктивной системы сиговых воздействием СИМП на предличинок именно в этот момент развития. Несмотря на то, что организм на этапе вылупления почти сформирован, эффект на оказанное воздействие у пеляди проявлялся уже в возрасте 14 суток и выражался в превосходстве подопытных предличинок по степени развития и тесноте связи пластических признаков и более высоких темпах формирования репродуктивной системы. Следует отметить, что обработка предличинок пеляди СИМП не всегда сопровождалась увеличением числа ППК, но она стимулировала их миграционную и митотическую активность – процессы, свойственные именно данному моменту развития. Реакция предличинок муксуна на проведенное воздействие проявилась в некотором снижении их морфометрических характеристик, по сравнению с контрольными предличинками. Однако, при несколько меньшем темпе соматического развития подопытных предличинок, скоррелированность морфометрических признаков у них была достаточно высокой. Темп миграции, митотическая активность ППК были выше у подопытных предличинок, но по числу и цитометрическим характеристикам первичных гоноцитов они уступали контрольным. В возрасте 14 суток у контрольных особей нарастала корреляция количества ППК с пластическими признаками. Напротив, у подопытных связь не только слабая, но с большинством признаков – обратная. Однако, как и у подопытной пеляди, у подопытной молоди муксуна более отчетливо проявлена связь пластических признаков с параметрами гоноцитов, чем в контроле. Следовательно, у муксуна, для которого характерна повышенная эмбрионизация, слабые магнитные поля вызывают не столь существенные изменения в формировании генеративной системы, по крайней мере, на предличиночном этапе развития. Можно предположить, что для получения значимого положительного результата уже на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза точку применения воздействия следует искать в раннем эмбриогенезе. При оценке влияния СИМП на формирование генеративной системы у рыб, особый интерес представляют осетровые, поскольку, в отличие от сиговых, их эмбриогенез протекает при более высоких температурах воды и в более короткие сроки. Обработка стерляди в раннем эмбриогенезе слабыми магнитными полями, также как и у муксуна, приводит на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза к замедлению формирования некоторых морфометрических параметров, но в то же время к большей их синхронизации. По мере роста предличинок наблюдается усиление положительного эффекта, вызванного применяемым воздействием на формирование репродуктивной системы. Так, у подопытных предличинок стерляди насчитывалось почти в два раза больше ППК, чем у контрольных, отмечена и более высокая степень их концентрации, раньше они вступали и в митотический цикл. Таким образом, воздействия, проводимые слабыми импульсными магнитными полями, оказывают конструктивное влияние на формирования генеративной системы у рыб. При этом ответная реакция организма зависит как от стадии развития, на которой была проведена обработка СИМП, так и от видовых особенностей. По всей видимости, СИМП оказывают корректирующее влияние на те процессы, которые свойственны данному моменту развития. Следствием чего и явилось существенное увеличение числа ППК при обработке эмбрионов пеляди на этапе бластуляции, но только усиление миграционной активности при оказании воздействия на более поздних этапах эмбриогенеза. Как было показано, муксуну свойственна повышенная степень эмбрионизации, потому и обработка предличинок на этапе вылупления СИМП не могла привести к столь существенным результатам, как это наблюдалось у предличинок пеляди. Резюмируем целесообразность проведения обработки рыб на ранних этапах эмбриогенеза для получения наиболее существенных результатов по модификации формирования генеративной системы, что подтверждается данными по влиянию СИМП на эмбрионы стерляди. ВЫВОДЫ: 1. Первичные половые клетки впервые отмечаются у 26-суточных зародышей пеляди на начальной стадии сомитогенеза, среди клеток спланхнотомов; ППК мигрируют через перибласт под вольфовы протоки, а в области половых складок впервые появляются в 85 суток, за два месяца до вылупления. 2. Обработка зародышей слабыми импульсными магнитными полями (СИМП) в период бластуляции стимулирует увеличение количества и миграционной подвижности первичных гоноцитов; обработка зародышей на других стадиях не приводила к увеличению численности ППК. 3. У сиговых рыб на этапе вылупления скоррелированность всех пластических признаков слабая, она возрастает при переходе личинок на активное питание; предличинки с более высокими морфометрическими параметрами при вылуплении характеризовались и большей степенью их взаимной сопряженности. 4. Слабая связь количества и цитометрических параметров ППК с пластическими признаками предличинок пеляди, меньшее их число у крупной молоди свидетельствуют об относительной независимости процессов генеративного и соматического развития на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза; менее отчетливо это проявляется у муксуна. 5. При инкубации в режиме субпороговых температур предличинки пеляди на этапе вылупления скоррелированностью отличались большими пластических значениями параметров. В и высокой последующем наблюдалось существенное снижение как соматических, так и генеративных характеристик. Обработка предличинок в эмбриогенезе СИМП обладает протекторным эффектом, при этом генеративные показатели и корреляция пластических параметров возрастали. 6. По степени скоррелированности морфометрических признаков и по уровню развития генеративной системы предличинки стерляди на этапе вылупления более развиты, по сравнению с холодноводными сиговыми. 7. Даже кратковременная обработка зародышей сиговых и осетровых рыб слабыми импульсными магнитными полями (СИМП) с напряженностями не превышающими естественных полей, способна модифицировать скорость процессов генеративного развития в эмбриогенезе и на ранних этапах постэмбрионального онтогенеза; эффект зависит от стадии начала воздействия. 8. Полученный эффект свидетельствует о высокой биологической значимости влияния слабых импульсных магнитных полей и делает целесообразным разработку методов воздействия с использованием данной технологии в рыбоводстве. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Айзенштадт Т.Б. Исследование оогенеза у гидры I. Ультроструктура интерстициальных клеток на ранних стадиях превращения их в ооциты// Онтогенез. 1974. Т.5. С. 13-20. 2. Айзенштадт Т.Б. Современные представления о детерминантах клеток зародышевого пути// Онтогенез. 1975. Т.6. С. 427-441. 3. Айзенштадт Т.Б. Цитология оогенеза. М.: Наука, 1984. 247с. 4. Акимова Н.В. Нарушения в развитии половых клеток у сибирского осетра при тепловодном выращивании// IV Всес.конфер. по раннему онтогенезу рыб. М., 1988. С.4-6. 5. Аксенов С.И., Булычев А.А., Грунина Т.Ю., Туровецкий В.Б. О механизмах воздействия низкочастотного магнитного поля на начальные стадии прорастания семян пшеницы// Биофизика. 1996. Т. 41. Вып. 4. С. 919-924. 6. Андрияшева М.А. Актуальные проблемы разведения и селекции сиговых рыб// Биология сиговых рыб. М.: Наука, 1988. С.192-204. 7. Андрияшева М.А., Черняева Е.В. Последствия инбридинга у пеляди (Corigonus peled Gm.)// Сб. науч. тр. Генетич. и экологич. проблемы разведения лососевых рыб. Л., 1985. Вып.228. С. 3-22. 8. Андрияшева М.А., Ляшенко А.Н. Компоненты изменчивости размерновесовых и репродуктивных признаков у самок пеляди (Corigonus peled Gm.)// Сб. науч. тр. Генетич. и экологич. проблемы разведения лососевых рыб. Л., 1985. Вып.228. С. 23-33. 9. Аношко П.Н. Аллометрия и этапы роста двух видов голомянок (Comephoridae, Cottoidei) оз. Байкал// 1 Конгресс ихтиологов России. Тез.докл.. Астрахань, 1997. С. 35. 10.Барминцев В.А. Развитие исследований по созданию трансгенных рыб и перспективы их использования в аквакультуре России// 1Конгресс ихтиологов России. М.: ВНИРО, 1997. С.347. 11.Белинцев Б.Н. Физические основы биологического формообразования. М.: Наука, 1991. 251с. 12.Белишева Н.К., Попов А.Н. Динамика морфофункционального состояния клеточных культур при вариациях геомагнитного поля в высоких широтах// Биофизика. 1995. Т. 40. Вып. 4. С. 755-763. 13.Белоусов И.Ю. Оогенез и особенности созревания яйцеклеток чира Coregonus nasus (Pallas) в естественном ареале и в условиях аквакультуры за его пределами. Автореферат дисс ... канд.биол.наук. Л. 1991. 17 с. 14.Белоусов Л.В. Поля и клеточные взаимодействия в морфогенезе// Межклеточные взаимодействия в дифференцировке и росте. М.: Наука, 1970. С. 164-181. 15.Белоусов Л.В. Целостные и структурно-динамические подходы к онтогенезу// Общая биология. 1979. Т.XL. №4. С. 514-529. 16.Белоусов Л.В. Введение в общую эмбриологию. М.: Изд-во МГУ, 1980. 210с. 17.Белоусов Л.В. Биологический морфогенез. М.: МГУ, 1987. 126 с. 18.Белоусов Л.В. Основы общей эмбриологии. М.: МГУ, 1993. 301с. 19.Богданов В.Д. Морфологическая характеристика покатных личинок некоторых видов сиговых рыб нижней Оби// Тез.докл. Второго Всесоюз. сов. по биологии и биотехнике разведения сиговых рыб. Петрозаводск, 1981. С.28-30. 20.Богданов В.Д. Видовые особенности личинок некоторых сиговых (Corigonidae) рыб на этапе вылупления// Вопр. ихтиол. 1983а. Т.23. Вып.3. С.449-459. 21.Богданов В.Д. Эмбриональное развитие обского чира в естественных условиях// Морфология, структура популяций и проблемы рационального использования лососевидных рыб. Л., 1983б. С. 16-17. 22.Богданов В.Д. Изучение динамики численности и распределения личинок сиговых рыб реки Северной Сосьвы. Свердловск: ИЭРиЖ УрО АН СССР, 1987. 59с. 23.Богданов В.Д. Экология молоди и воспроизводство сиговых рыб нижней Оби. Автореф. дис. … доктора биол. наук. М. 1997. 38 с. 24.Богданова В.А. Гаметогенез у гиногенетических и гибридных форм сиговых рыб. Автореф. дисс ... канд.биол.наук СПб. 1991. 17 с. 25.Богданова В.А. Нарушение оогенеза у гиногенетических и гибридных форм сиговых рыб// Труды БиНИИ СПбГУ. 1997. Вып. 44. С 91-99. 26.Божкова В.П., Карпова Е.Г., Цыганкова Н. В. Происхождение первичных половых клеток у вьюна// Онтогенез. 1993. Т. 24. №5. С. 405-408. 27.Боровков В.П. Популярное введение в программу STATISTICA. М.: Компьютер пресс, 1998. 267с. 28.Бриан П. Бластогенез и гаметогенез// Происхождение и развитие половых клеток в онтогенезе позвоночных и некоторых групп беспозвоночных. Л.: Медицина, 1968. С. 17-67. 29.Буначенко А.Л., Сагдеев Р.З.,Салихов К.М. Магнитные и спиновые эффекты в химических реакциях. Новосибирск: Наука, 1978. 296 с. 30.Бунур Л. Линия половых клеток у бесхвостых амфибий// Происхождение и развитие половых клеток в онтогенезе позвоночных и некоторых групп беспозвоночных. Л.: Медицина, 1968. С. 186-211. 31.Бурлаков А.Б. Внутривидовая волновая коррекция раннего эмбрионального развития// Пространственно-временная организация онтогенеза. М.: МГУ, 1998. С. 183-193. 32.Бурлаков А.Б., Хапчаева Е.В. Изучение половой специфичности гипофизарных гонадотропинов русского осетра Acipenser guldenstaedti Brandt. (Acipenseridae). II Биологическое действие гонадотропинов, обладающих высокой электрофоретической подвижностью, на созревание и овуляцию ооцитов вьюна Misgurnus fossilis (L.) (Cobitidae)// Вопр. ихтиол. 1984. Т.24. Вып.2. С. 287-296. 33.Бурлаков А.Б., Бурлакова О.В., Королев Ю.Н., Голиченков В.А. Дистантное оптическое взаимовлияние эмбрионов низших позвоночных в процессе развития// Онтогенез. 1999. Т. 30. №6. С. 464-465. 34. Бурлаков А.Б., Бурлакова О.В., Голиченков В.А. Дистантные волновые взаимодействия в раннем эмбриогенезе вьюна Misgurnus fossilis L// Онтогенез. 2000. Т. 31. №5. С. 343-349. 35.Бурлаков А.Б., Бурлакова О.В., Королев Ю.Н., Голиченков В.А. Поляризационные эффекты при дистантном взаимодействии биологических объектов// Вестник МГУ. 2002. Серия 16. №2. С. 3-7. 36.Венглинский Д.Л. Экологические черты адаптации сиговых к условиям существования в водоемах Субарктики// Эколого-физиологические адаптации животных и человека к условиям Севера. Якутск: Якут.фил. СО АН СССР, 1977. С. 96-121. 37.Вернадский В.И. Биосфера и ноосфера. М.: Наука, 1989. 261с. 38.Вернидуб М.Ф. Морфофизиологические этапы в развитии яиц и личинок осетровых рыб и их значение для рыбоводства// Ученые зап. Ленинградского ун-та. Сер. биол. наук. 1951. №142. Вып. 29. С. 75-106. 39.Виллорези Дж., Птицына Н.Г., Тясто М.И., Юччи Н. Инфаркт миокарда и геомагнитные возмущения: анализ данных о заболеваемости и смертности// Биофизика. 1998. Т. 43. Вып. 4. С. 623-631. 40.Винберг Г.Г. Взаимозависимость роста и энергетического обмена у пойкилотермных животных// Количественные аспекты роста организмов. М.: Наука, 1975. С. 7-25. 41.Владимиров В.И. Вариабельность размеров рыб на ранних этапах жизни и выживаемость// Разнокачественность раннего онтогенеза у рыб. Киев: Наукова думка, 1974. С.227-254. 42.Владимирский Б.М. «Солнечная активность - биосфера» - первая в истории науки масштабная междисциплинарная проблема// Биофизика. 1995. Т. 40. Вып. 5. С. 950-968. 43.Вовк П.С. Реакции эмбрионов и личинок белого амура на температурные воздействия// Разнокачественность раннего онтогенеза у рыб. Киев: Наукова думка, 1974. С.191-226. 44.Волкова Л.В. Эколого-морфологические закономерности развития пеляди. Автореф. дисс. канд. биол. наук. Минск. 1965. 17с. 45.Вотинов Н.П. Муксун как объект искусственного разведения и акклиматизации// Тр. Обь-Тазовского отд-ния ГосНИОРХ. 1963а. Т. 3. С. 115-137. 46.Вотинов Н.П. Биологические основы искусственного воспроизводства обского осетра// Тр. Обь-Тазов.отд. ГосНИОРХ. Нов.серия. 1963б. Т. 3. С. 2133. 47.Галактионова Е.Л. Создание и эксплуатация маточных стад пеляди на Урале в связи с особенностями ее естественного и искусственного воспроизводства в данном регионе// Опыт пром. рыбоводства в Челябинской обл. Челябинск: Южно-Уральское кн. изд-во, 1975. С. 147-168. 48.Галат В.В., Межевикина Л.М., Зубин М.Н., Лепихов К.А., Храмов Р.Н., Чайлахян Л.М. Действие миллиметровых волн на раннее развитие зародышей мышей и морских ежей// Биофизика. 1999. Т. 44. Вып.1. С.137-140. 49.Гинзбург А.С. Оплодотворение у осетровых рыб. 1. Соединение гамет// Цитология. 1959. №5. С.510-526. 50.Гинзбург А.С. Оплодотворение у рыб и проблема полиспермии. М.: Наука, 1968. 358с. 51.Гинзбург А.С., Детлаф Т.А. Развитие осетровых рыб. Созревание яиц. Оплодотворение и эмбриогенез. М.: Наука, 1969. 132 с. 52.Гинзбург А.С., Детлаф Т.А. Осетр Acipenser guldenstadti// Объекты биологии развития. М.: Наука, 1975. С.217-263. 53.Гоголева Т.Е. Период раннего гаметогенеза у рипуса при выращивании в садках// Сб. науч. тр. Гос.НИИ озерн. и речн. рыб. хоз-ва. 1983. №195. С.134140. 54.Головков Г.А., Кузьмин А.Н., Волошенко Б.Б. Инструкция по разведению пеляди в прудах и озерах. Л. :ГосНИОРХ, 1978. 36 с. 55.Головкова Г.А. Эмбриональное развитие сига-пыжьяна Сoregonus lavaretus pidschian (Cmel.) в условиях ЦЕС ГосНИОРХ «Ропша»// Экологические основы рыбохозяйственного освоения внутренних водоемов. Сб.науч.тр. Л., 1986. Вып. №247. С. 44-54. 56.Голод В.М. Влияние температурного отбора на морфологические признаки двухгодовиков радужной форели// Экологические основы рыбохозяйственного освоения внутренних водоемов. Сб.науч.тр. Л., 1986. Вып. №247. С. 68-70. 57.Горшкова Г.В., Горшков С.А., Чебанов Н.А., Ежкова Н.М. Оценка жизнеспособности смежных поколений горбуши Oncorhynchus gorbuscha (Walbaum), по уровню цитогенетических нарушений в раннем эмбриогенезе// Генетика. 1986. Т. XXII. №9. С. 2339-2346. 58.Грусевич В.В. Влияние колеблющихся температур на развитие и выживаемость канального сома в эмбриональном периоде// IV Всесоюзн. конфер.по раннему онтогенезу рыб. М., 1988. Ч.1. С.67-69. 59.Грусевич В.В., Чаплинская Т.Л. Влияние условий содержания производителей канального сома на их созревание и качество потомства в раннем онтогенезе// IV Всесоюзн. конфер.по раннему онтогенезу рыб. М., 1988. Ч.1. С.69-71. 60.Гурвич А.Г. Теория биологического поля. М.: Сов. наука, 1944. 155с. 61.Гурвич А.Г. Принципы аналитической биологии и теории клеточных полей. М.: Наука, 1991. 288 с. 62.Гурфинкель Ю.И., Кулешова В.П., Ораевский В.Н. Оценки влияния геомагнитных бурь на частоту появления острой сердечно-сосудистой патологии// Биофизика. 1998. Т. 43. Вып. 4. С. 654-658. 63.Гутиева З.А. Аллометрический рост как одна из причин проявления критических этапов развития личинок карповых рыб// Фауна Ставрополья. 2000. № 9. С. 13-15. 64.Дардымов И.В. Влияние воды, обработанной магнитным полем, на биологические объекты// Совещание по изучению влияния магнитных полей на биологические объекты. Тез.докл. М., 1966. 25 с. Т.А. 65.Детлаф Некоторые эмбрионального температурно-временные развития пойкилотермных закономерности животных// Проблемы экспериментальной биологии. М.: Наука, 1977. С. 269-287. Т.А. 66.Детлаф Температурно-временные закономерности и временная программа индивидуального развития пойкилотермных животных, как они представляются в свете данных, полученных с помощью безразмерных критериев продолжительности развития (n/0)// Онтогенез. 1998. Т.29. №6. С. 418-428. 67.Детлаф Т. А. Понятия «детерминация» и «коммитирование» в исследованиях закономерностей индивидуального развития// Механизмы детерминации. М.: Наука, 1990. С.5-12. Т.А., 68.Детлаф Детлаф А.А. О безразмерных характеристиках продолжительности развития в эмбриологии// Докл. АН СССР. 1960. №1. С. 199-202. 69.Детлаф Т.А., Гинзбург А.С., Шмальгаузен О.И. Развитие осетровых рыб. М.: Наука, 1981. 132с. 70.Дормидонтов А.С. Особенности гаметогенеза сигов в северных водоемах Якутии// Зоологические исследования Сибири и Дальнего Востока. Владивосток: Ин-т биологии моря ДВНЦ АН СССР, 1974. С. 169-173. 71.Дорфман Я.Г. Новые данные об ооплазматической сегрегации желтка у амфибий, полученные с помощью компьютерной микроскопии// Материалы VII всесоюзного совещания эмбриологов. М: Наука, 1986. Ч.I. С 55. 72.Дубров А.П. Геомагнитное поле и жизнь. Л.: Гидрометеоиздат, 1974. 175с. 73.Емец Б.Г. О физическом механизме влияния низкоинтенсивного электромагнитного излучения на биологические клетки// Биофизика. 1999. Т. 44. Вып. 3. С. 555-558. 74.Захарова Н. И. Развитие половых желез у радужной форели пострадиационный период// Вопр. ихтиол. 1983. Т.23. Вып.6. С.951-960. в 75.Захарова Н.И. Морфофункциональные закономерности раннего гаметогенеза радужной форели (Salmo gairgneri, Rich) при различном температурном режиме и рентгеновском облучении. Автореф. дисс. … канд. биол. наук. Л., 1984. 17с. 76.Захарова Н.И. Дифференцировка пола байкальского омуля при различных температурных режимах выращивания// Тез. докл. IV Всес. совещ. по биол. и биотехнике развед. сиговых рыб. Л., 1990. С. 47-48. 77.Захарова Н.И. Дифференцировка пола у байкальского омуля при различных температурных режимах выращивания// Труды БиНИИ СПбГУ. 1997. Вып. 44. С 65-73. 78.Захарова Н.И. Гаметогенез и половые циклы байкальского омуля// Биология и биотехника разведения сиговых рыб. Тюмень, 2001. С.52-54. 79.Зеленников В.М. Развитие половых желез и становление индивидуальной плодовитости у беломорской сельди Clupea harengus marisalbi Berg и обыкновенного окуня Perca fluviatilis L. Автореф. дисс. … канд. биол. наук. М., 1982. 24 с. 80.Зотин А.И. Физиология водного обмена у зародышей рыб и круглоротых. М.:Изд-во АН СССР, 1961. с.153. 81.Иваненков В.В., Минин А.А. Исследование механики сегрегации ооплазмы в яйце вьюна методом микроинъекций цитохалазина Д и ДНКазы I// Материалы VII всесоюзного совещания эмбриологов. М: Наука, 1986. Ч.I. С.16. 82.Иванов П.П. Общая и сравнительная эмбриология. М.-Л.: Биомедгиз, 1937. 810с. 83.Игнатьева Г.М. Радужная форель. Объекты биологии развития. М.: Наука, 1975. С.278-307. 84.Иоганзен Б.Г. Плодовитость рыб и определяющие ее факторы// Вопросы ихтиологии. 1955. Вып 3. С. 57-68. 85.Казанский Б.Н. Оогенез и адаптации, связанные с размножением у рыб. Автореф. дисс. … доктора биол. наук. Л., 1956. 36с. 86.Казанский Б.Н. Закономерности гаметогенеза и экологическая пластичность размножения рыб// Экологическая пластичность половых циклов и размножения рыб. Л., 1975. С. 3-32. 87.Казначеев В.П., Михайлова Л.П. Сверхслабые излучения в межклеточных взаимодействиях. Новосибирск: Наука, 1981. 144 с. 88.Казначеев В.П., Спирин Е.А. Космопланетарный феномен человека. Проблемы комплексного изучения. Новосибирск: Наука, 1991. 303 с. 89.Кайданова Т.И. Выживаемость эмбрионов пеляди и их цитокариологическая характеристика// Сб. науч. тр. Биология и воспроизводство ласосевидных рыб. Л., 1986. Вып.253. С.111-129. 90.Капель-Боут К. Факторы окружающей среды, ответственные за флуктационные явления. Трудности восприятия соответствующих фактов научным сообществом// Биофизика. 1995. Т.40. Вып. 4. С. 732-735. 91.Карасев Г.Л. Рыбы Забайкалья. Новосибирск: Наука, Сиб.отдел, 1987. 296с. 92.Кауфман З.С. Эмбриология рыб. М.: Наука, 1990. 271 с. 93.Клевезаль Г.А. Факторы, влияющие на рост животных// Количественные аспекты роста организмов. М.: Наука, 1975. С.161-167. 94.Княжева К.В. влияние плотности посадки на рост, изменчивость и выживаемость молоди гибридных карпов// Изв. ГосНИОРХ. 1968. С.61. 95.Князева О.М. Разнокачественность молоди в зависимости от содержания липидов в половых продуктах леща Куйбышевского водохранилища// IV Всесоюзн. конфер.по раннему онтогенезу рыб. М., 1988. С.137-138. 96.Колядин С.А. Особенности полового созревания пеляди в озерах юга Красноярского края// Тез.докл. четвертого всесоюзного совещ. по биол. и биотех. развед. сиговых рыб (ноябрь 1990г., Вологда). Л., 1990. С.47-48. 97.Костомарова А.А. Ядерно-цитоплазматические взаимодействия при трансплантации ядер у зародышей амфибий и рыб// Биология развития и управление наследственностью. М.: Наука, 1986. С180-192. 98.Костюченко Р.П., Дондуа А.К. Ооплазмическая сегрегация и формирование морфологических осей зародыша полихеты Nereis virens// Онтогенез. 2000. Т. 31. №2. С. 120-131. 99.Котова О.П. Анализ условий инкубации икры сиговых рыб и особенности их эмбриогенеза в новосибирском рыбопитомнике// Тез.докл. Второго Всесоюз. сов. по биологии и биотехнике разведения сиговых рыб. Петрозаводск, 1981. С.187-189. 100.Кошелев Б.В. Некоторые закономерности роста и времени наступления первого икрометания у рыб. М: Наука, 1971. С.186-218. 101.Кошелев Б.В. Экология размножения рыб. М.: Наука, 1984. 309 с. 102.Краснодембская К.Д., Дробышева Э.Б., Евграфова В.Н., Семенкова Т.Б. Выращивание молоди сибирского осетра в условиях Северо-Запада// В кн.: Биологические основы осетроводства. М.: Наука, 1983. С. 270-280. 103.Крохалевский В.Р. Некоторые данные о сезонной изменчивости морфологических признаков пеляди реки Оби// Изв. ГосНИОРХ. 1978. Т.133. С.56-65. 104.Крохалевский В.Р. Половые циклы, созревание и периодичность нереста обской пеляди// Биология и экология гидробионтов экосистемы Нижней Оби. Свердловск, 1983. С. 93-110. 105.Крупкин В.З. Биология и биотехника разведения муксуна Corigonus muksun (Pallas) в водоемах северо-запада. Автореф. дис. конд. биол. наук. Л., 1975. 21с. 106.Кугаевская Л.В. Обской чир как объект искусственного разведения// Озерн. и пруд. хоз-во в Сибири и на Урале. Тюмень, 1967. С. 150-169. 107.Кузин Б.С. О принципе поля в биологии// Вопр. философии. 1992. №5. С. 148-153. 108.Кузьмин А.Н. Эмбриональное развитие пеляди// Тр. Обь-Тазов. отд-ния ГосНИОРХ. Нов.сер. Тюмень, 1963. Т.3. С.148-164. 109.Кузьмин А.Н. Гаметогенез и сравнительный анализ развития воспроизводительной системы у пеляди, выращиваемой в разных климатических зонах// Изв. ГосНИОРХ. 1967. Т. 63. С. 9-40. 110.Лаврова Т.В., Чмилевский Д.А. Влияние повышенной температуры на оогенез тиляпии (Oreochromis mossambicus, Peters)// Изв. ГосНИОРХ. 1987. Вып.259. С.134-143. 111.Лебедев В.Н. Элементарные популяции рыб. М.: Пищевая промышленность, 1967. 105с. 112.Лебедева О.А. Эколого-морфологические особенности развития сиговых рыб. Автореф. дис. … кан. биол. наук. М., 1974. 28с. 113.Лебедева О.А. Сравнительная характеристика раннего онтогенеза сиговых рыб// Природа и хозяйственное использование озер Северо-Запада Русской равнины. Л.: ЛГУ, 1976. Т. I. С.114-130. 114.Лебедева О.А. Экологическая толерантность сиговых рыб на ранних этапах развития// Тез. докл. II Всес. совещ. по биол. и биотехнике развед. сиговых рыб. Петрозаводск, 1981. С. 13-16. 115.Лебедева О.А. Развитие икры и личинок пеляди// Тр. ГосНИОРХ. 1985. Т.236. С. 74-85. 116.Лебедева О.А. Развитие икры и личинок// Пелядь. Систематика, морфология, экология, продуктивность. М.: Наука, 1989. С.211-228. 117.Лебедева О.А., Завьялова М.Н. Морфофизиологические изменения в эмбриогенезе сиговых рыб при заводском воспроизводстве// III Всес. Совещ. По биол. и биотех. развед. сиговых рыб. Тюмень, 1985. С. 8-11. 118.Лебедева О.А., Мешков И.М. Изменение сроков закладки органов и продолжительности эмбриогенеза у радужной форели (Salmo qairdneri) в зависимости от температуры// Изв. ГосНИОРХ. 1968. С.68. 119.Леманова Н.А. Исследование диагностических признаков, биологии и гаметогенеза реципрокных гибридов рипуса Corigonus albula infrsp. ladogensis и сига-лудоги Corigonus lavaretus ludoga. Автореф. дис. … канд. биол. наук. Л., 1965. 20с. 120.Липская Н.Я. Об оценке энергетических затрат на построение половых продуктов// Вопр. ихтиол. 1967. Т. 7. Вып. 6. С. 1123-1126. 121.Макеева А.П. Эмбриология рыб. М.: МГУ. 1992. 216с. 122.Малышев В.И. Эмбриональное развитие тугуна// Изв. ГосНИОРХ. 1974. Т.92. С. 98-101. 123.Марков М.С. Изменения структуры воды и ее биологической активности под влиянием постоянных магнитных полей// Тр. Междунар. симпоз. «Взаимодействие между водой и живым веществом». М.: Наука, 1979. С. 912. 124.Мешков М.М., Лебедева О.А. Видовая специфика темпа индивидуального развития лососевидных рыб (Salmonidei)// Эволюция темпов индивидуального развития животных. М.: Наука, 1977. С. 206-216. 125.Мешков М.М., Лебедева О.А. Разнокачественность раннего онтогенеза лососевидных рыб// Сб.науч.тр. Лососевидные рыбы. Л.: Наука, 1980. С.3040. 126.Мигаловский И.П. Развитие икры в ранний период гаметогенеза у зародышей и личинок севрюги в условиях радиактивного загрязнения воды// Тр. ПИНРО, 1971. Вып.29. С. 32-44. 127.Музрукова Е. Б. Теория зародышевой плазмы А.Вейсмана: новый методический подход к проблемам общей биологии// Жур. общ. биол. 1997. Т.58. №6. 99-107с. 128.Недовесова З.П. Рибонуклеиновые кислоты в эмбриогенезе белого амура// Тез. докл. Закономерности индивидуального развития живых организмов. Материалы VII Всесоюзного совещания эмбриологов. М.: Наука, 1986. Ч.1. С. 117. 129.Нейфах А.А. Гены и механизмы развития: детерминизм и самоорганизация// Механизмы детерминации. М.: Наука, 1970. С. 19-30. 130.Нейфах А.А., Тимофеева М.Я. Молекулярная биология процессов развития. М.: Наука, 1977. 312с. 131.Нейфах А. А. Гены и механизм развития: детерменизм и самоорганизация// Механизмы детерминации. М.: Наука, 1990. С.19-30. 132.Никандров В.Я. Выбор и оценка элитных самцов радужной форели по качеству их потомства// Сб. науч. тр. Генетич. и экологич. проблемы разведения лососевых рыб. Л., 1985. Вып.228. 1985. С. 117-126. 133.Никольская Н.Г., Сытина Л.А. Температурные условия, необходимые для развития икры ленского осетра// Рыб. хоз-во. 1978. №9. С.17-20. 134.Никольская К.А. Штемлер В.М., Савоненко А.В., Осипов А.И., Никольский С.В. Слабые магнитные поля и познавательная деятельность// Биофизика. 1996. Т.41 Вып.4. С.887-893. 135.Никольский Г.В. О некоторых закономерностях динамики плодовитости рыб// Очерки по общим вопросам ихтиологии. М.-Л., 1953. С. 199-206. 136.Никольский Г.В. Экология рыб. М.: Наука, 1974. 366с. 137.Новиков В.В. Электромагнитная биоинженерия// Биофизика. 1998. Т. 43. Вып. 4. С. 588-593. 138.Новикова Н.И., Новиков В.В., Кураковская В.Е. Комбинированное действие слабых постоянного и переменного магнитных полей, настроенных на циклотронный резонанс ионов аминокислот, на развитие асцитной карциномы Эрлиха у мышей// Биофизика. 1998. Т. 43. Вып. 5. С. 772-775. 139.Персов Г.М. «Популяционная» и «конечная» плодовитость рыб на примере горбуши, акклиматизируемой в бассейнах Белого и Баренцева морей// Вопр. ихтиол. 1963. Вып.3. С. 490-496. 140.Персов Г.М. Ранний период гаметогенеза у проходных лососей// Труды Мурм.Морск.биол.ин-та. 1966. Вып.12(16). С.7-44. 141.Персов Г.М. Дифференцировка пола и становление индивидуальной плодовитости у рыб. Автореф. дисс... докт. биол. наук Л., 1969. 49 с. 142.Персов Г.М. Надежность функционирования воспроизводительной системы рыб// Вопр. ихтиол. 1972. Вып. 2. С. 258-272. 143.Персов Г.М. Дифференцировка пола у рыб. Л.: ЛГУ, 1975. 148с. 144.Пиккарди Дж. Химические основы медицинской климатологии. Л.: Гидрометиздат, 1967. 96 с. 145.Пичугин В.Ю., Энговатов В.В., Агнаев А.К., Козлов А.А. Модификация влияния элеутерококка на мышей после воздействия низкоинтенсивных микроволн// Проблемы электромагнитной безопасности человека. М., 1996. С. 135-136. 146.Пичугин В.Ю., Солодилов А.И., Энговатов В.В. Влияние слабых импульсных магнитных полей на радиационные нарушения в организме// Проблемы противолучевой защиты. М., 1998. С. 57-58. 147.Поляков Г.Д. Некоторые закономерности популяционной изменчивости рыб. Автореф. дис…. доктора биол. наук. М., 1970. 35с. 148.Пресман А.С. Электромагнитные поля и живая природа. М.: Наука, 1968. 288 с. 149.Привалов П.Л. Вода и ее роль в биологических системах. Биофизика. 1968. Т.13. Вып. 1. С. 163-177. 150.Прудовский И.А. Роль цитоплазматических факторов в регуляции дифференцировки и пролиферации соматических клеток// Биология развития и управление наследственностью. М.: Наука, 1986. С. 192-206. 151.Райцина С.С. Происхождение и развитие половых клеток// Современные проблемы сперматогенеза. М.: Наука, 1982. С. 5-24. 152.Рапопорт С.И., Большакова Т.Д., Малиновская Н.К., Ораевский В.Н. Магнитные бури как стрессовый фактор// Биофизика. 1998. Т. 43, Вып. 4. С. 632-639. 153.Рекст Т.Э., Полякова Л.А. Продуктивность геногенетических самок пеляди и их использование в селекции// Тез. докл. IV Всес. совещ. по биол. и биотехнике развед. сиговых рыб. Л., 1990. С. 139-140. 154.Решетников Ю.С. Экология и систематика сиговых рыб. М.: Наука, 1980 300 с. 155.Решетников Ю.С. Метод экспертной оценки состояния особи и популяции сиговых рыб// Биология и биотехника разведения сиговых рыб. Материалы пятого Всеросс. сов. С.-Пб. 1994. С. 115-118. 156.Решетников Ю.С. Сиговые рыбы в водоемах Арктики// Биология и биотехника разведения сиговых рыб. Материалы пятого Всеросс. сове. Тюмень, 2001. С. 144-148. 157.Решетников Ю.С., Вышегородцев А.А., Венглинский Д.Л. Естественный ареал// Пелядь. Систематика, морфология, экология, продуктивность. М.: Наука, 1989. С. 9-22. 158.Ромейс Б. Микроскопическая техника. М.: Иностр. литер., 1953. 719с. 159.Ротт Н.Н. Клеточные циклы в раннем онтогенезе пеляди// Онтогенез. 1979. Т. 10. №3. С.209-219. 160.Ротт Н.Н. Клеточные циклы в раннем эмбриогенезе животных. М.: Наука, 1987. 205 с. 161.Рябова Л.В., Васецкий С.Г. Цитоскелет и ооплазмическая сегрегация// Механизмы детерминации. М.: Наука, 1990. С. 31-41. 162.Рязанцева М.В., Сакун О.Ф. Половые клетки и развитие гонад карпа Ciprinus carpio L. в раннем онтогенезе// Вопр. ихтиол. 1980. Т.20. Вып.3. С. 524-533. 163.Светлов П.Г. Физиология (механика) развития. Л.: Наука, 1978 Т.1. 279с.; Т.2. 262с. 164.Селюков А.Г. Ранний гаметогенез пеляди// Вестн.ЛГУ. Биология. 1985. №17. С.26-32. 165.Селюков А.Г. Оогенез и половые циклы самок пеляди Coregonus peled (Gmelin) озера Ендырь (бассейн Оби)// Вопр. ихтиол. 1986. Т. 26. Вып. 2. С. 294-302. 166.Селюков А.Г. Оогенез и овариальные циклы озерной пеляди Coregonus peled (Gmelin) в естественном ареале и в условиях Ленинградской области. Дисс...канд.биол.наук. Л., 1987. 237 с. 167.Селюков А.Г., Степанов А.М., Васильева Л.В. Состояние воспроизводительной системы сиговых рыб на этапе вылупления// IV Всесоюзн. конфер.по раннему онтогенезу рыб. М., 1988. С.88-89. 168.Селюков А.Г. Репродуктивная система сиговых рыб (Coregonidae, Salmoniformes) как индикатор состояния экосистемы Оби. I. Половые циклы пеляди Coregonus peled// Вопр. ихтиол. 2002. Т. 42. №1. С. 85-92. 169.Селюков А.Г. Репродуктивная система сиговых рыб (Coregonidae, Salmoniformes) как индикатор состояния экосистемы Оби. II. Половые циклы муксуна Coregonus muksun. Вопр. ихтиол.. 2002. Т. 42. №2. C. 225-235. 170.Семенов В.В., Федоров К.Е., Ахундов М.М., Ультроструктурный анализ закладки и половой дифференцировки гонад у стерляди и ленского осетра// Тр. Биол. НИИ СПбГУ. Вып.44. 1997. С. 7-14. 171.Сергиенко Л.Л., Кугаевская Л.В. Нижний температурный порог начала питания личинок сиговых рыб// Тез. докл. IV Всес. совещ. по биол. и биотехнике развед. сиговых рыб. Л., 1990. С. 67-68. 172.Сергиенко Л.Л. Биологические основы совершенствования заводского воспроизводства сиговых рыб// Автореф. дисс. … канд.биол.наук. С.-Пб. ГосНИОРХ. 1995. 19 с. 173.Сидоренко В.М. Механизмы влияния слабых электромагнитных полей на живой организм// Биофизика. 2001. Т. 46. Вып.№3. С. 500-504. 174.Сиротина Л.В., Сиротин А.А., Травкин М.П. Некоторые особенности биологического действия слабых магнитных полей// Реакция биологических систем на слабые магнитные поля. М., 1971. С.95. 175.Скрябин А.Г. Рыбы Баунтовских озер Забайкалья. Новосибирск: Наука, Сиб.отдел., 1977. 232с. 176.Слуцкий Е.С., Вишниченко О.Ю., Колтакова Л.И., Лебедкина К.М., Леманова Н.А., Святко Н.Ю. Динамика развития рыб в экспериментальных условиях. Морфогенетические корреляции в раннем постэмбриогенезе// Морфогенетические корреляции и селекция рыб. Сб.научн.тр.ГосНИОРХ. Л. 1987. Вып.263. С. 13-22. 177.Смирнов Е.В. Возрастные изменения соотношения между размерами тела и уровнем развития яичников у самок карпа и их хозяйственное значение// Сб.научн.тр.ГосНИОРХ. 1982. Вып. 187. С. 108-117. 178.Смирнов Н.В. Характеристика самок байкальского омуля разных сроков нерестового хода и полученной от них икры// Тез.докл. Второго Всесоюз. сов. по биол. и биотехнике разведения сиговых рыб. Петрозаводск, 1981. С.233-235. 179.Солодилов А.И. Патент №2155081. Способ обработки вещества магнитным полем и устройство для его осуществления. М., 2000. 180.Солодилов А.И. Патент №2162736. Способ катализа реакций. М., 2001. 181.Статова М.П., Томнатик Е.Н. Процесс анатомической и цитологической дифференцировки пола у пеляди// Изв.АН Молд.ССР. Сер.биологич. и химич. наук. 1970. № 1. С. 36-39. 182.Сташков А.М., Горохов И.Е. Функциональное значение циркуляторной анемии, индуцированной в организме слабым магнитным полем сверхнизкой частоты// Биофизика. 1999. Т. 44. Вып. 1. С. 141-144. 183.Судаков К.В., Антимоний Г.Д. Центральные механизмы действия электромагнитных полей// Успехи физиол. наук. 1973. Т. 42. №2. С. 101. 184.Татарко К.И. Влияние температуры на ранние этапы постэмбрионального развития прудового карпа// Гидробиол. журн. 1966. №3. С.95-103. 185.Ташкэ К. Физиологические изменения ядра// Введение в клиническую цито-гистологическую морфологию. Изд-во: Академии соц. респ. Румынии. 1980. С. 11-19. 186.Третьякова Т.В. Морфология, экология и разведение сибирской стерляди (Acipenser ruthenus marsiglii, Brandt) нижнего Иртыша// Автореф. дисс. … канд. биол. наук. Тюмень. 1998. 21с. 187.Турдаков А.Ф. Происхождение и миграция первичных половых клеток у рыб// Изв. АН Кирг.ССР. 1969. №4. С. 61-67. 188.Турдаков А.Ф. Воспроизводительная система самцов рыб. Фрунзе, 1972. 280с. 189.Узденский А.Б., Кутько О.Ю. Реакции изолированных механорецепторных нейронов речного рака на слабые сверхнизкочастотные магнитные поля// Биофизика. 1998. Т. 43. Вып. 5. С. 797-802. 190.Федоров К.Е. Ахундов М.М. Влияние половых стероидных гормонов и гипофизарных гонадотропинов на ранний гамето- и ганадогенез// Репродуктивная физиология рыб. Тез.докл. Всесоюз. совещ. Минск, 1991. С. 49-50. 191.Федоров К.Е., Бурлаков А.Б. Влияние гипофизарных полоспецифических гонадотропинов осетра на дифференцировку гонад и уровень половых стероидных гармонов в крови молоди севрюги Asipenser stellatus// Журн.эволюц. биохимии и физиол. 1993. Т.29. №3. С.38-44. 192.Халатян О.В., Алексеева М.Ю. Функциональная изменчивость морфологических признаков молоди ряпушки р. Индигирка на ранних этапах онтогенеза// Тез. докл. IV Всес. совещ. по биол. и биотехнике развед. сиговых рыб. Л., 1990. С. 71-72. 193.Чанг Р. Физическая химия с приложениями к биологическим системам// М.: Мир, 1980. 662 с. 194.Черняев Ж.А. Эмбриональное развитие байкальского омуля. М.: Наука, 1968. 91с. 195.Черняев Ж.А. Особенности воздействия температурного и светового факторов на эмбриональное развитие сиговых рыб Байкала// Тез. докл. II Всес. совещ. по биол. и биотехнике развед. сиговых рыб. Петрозаводск, 1981. С. 22-25. 196.Черняев Ж.А. Воспроизводство байкальского омуля. М.: Легкая и пищевая пром-ть, 1982. 127 с. 197.Черняев Ж.А. Эколого физиологические особенности эмбриогенеза байкальского омуля и байкальского озерного сига// Морфология, структура популяций и проблемы рац. исп. Лососевидных рыб. Л., 1983. С. 237-239. 198.Черфас Н.Б., Цой Р.М. Новые генетические методы селекции рыб. М.: Наука, 1984. С. 1-104. 199.Чижевский А.Л. Земное эхо солнечных бурь. М.: Мысль, 1976. 350 с. 200.Чмилевский Д.А. Влияние рентгеновского облучения на оогенез тиляпии// Тез.докл. VII Всесоюз. сов. эмбриологов. Л., 1985. С.38. 201.Чмилевский Д.А. Развитие репродуктивной системы самок рыб при экстремальных воздействиях// Экологические и морфофункциональные основы адаптации гидробионтов. Л., 1990. С. 104-105. 202.Чмилевский Д.А. Оогенез теляпии (Oreochromis mossambicus, Peters) при повышенной температуре// Первый конгресс ихтиологов России. ВНИРО, 1997а. С. 260. 203.Чмилевский Д.А. Влияние экстремальных воздействий на оогенез рыб. Итоги и перспективы исследований// Проблемы надежного функционирования воспроизводительной системы у рыб// Труды БиНИИ СпбГУ. 1997б. Вып. 44. С. 49-64. 204.Чмилевский Д.А. Оогенез рыб в норме и при экстремальных воздействиях. Автореф. дисс. … доктора биол. наук. С-Пб., 2000. 31 с. 205.Чуваев П.П. Влияние сверхслабого постоянного магнитного поля на ткани корней проростков и на некоторые микроорганизмы// Материалы 2 Всес. совещ. по изучению влияния магнитного поля на биологические объекты. М., 1969. С. 252. 206.Чусовитина Л.С. Постэмбриональное развитие сибирского (Acipenser baeri, Brandt) осетра// В кн.: Искусственное разведение осетровых в ОбьИртышском бассейне. Тюмень, 1963. С. 103-114. 207.Шейман И.М., Фесенко Е.Е. Действие слабого электромагнитного излучения на морфогенез планарий//Биофизика. 1999. Т.44. Вып.6. С.10731077. 208.Шмальгаузен О.И. Развитие пищеварительной системы у осетровых// Морфо-экологические исследования развития рыб. М.: Наука, 1968. С. 40-70. 209.Шмальгаузен О.И. Осетр Acipenser guldenstadti colchicus. Развитие предличинок// Объекты биологии развития. М.: Наука, 1975. С.264-277. 210.Юхнева В.С. Эмбриональное развитие муксуна// Тр. Обь-Тазовского отдел. ВНИОРХ. Тюмень, 1963. Т.III. С. 138-147. 211.Юхнева В.С. Наблюдения за нерестом и развитием икры сиговых рыб на р. Сынья// Озерн. и пруд. хоз-во в Сибири и на Урале. Тюмень, 1967. С. 190199. 212.Яблоков А.Г. Морфобиологическая характеристика шестилетних самок радужной форели// Сб. науч. тр. Генетич. и экологич. проблемы разведения лососевых рыб. Ленинград, 1985. Вып.228. 1985. С. 127-162. 213.Ястребков А.А. О зависимости размеров и темпа роста личинок горбуши от величины икринок// Тр. Мурманского морского биол. ин-та. Вып.12. 1966. С.54-57. 214.Abirached M., Brun J. L. Ultrastructural changes in the nuclear and perinuclear regions of the oogonia and primary oocytes of Caenorhabditis elegans, Bergarac strain// Rev. nematol. 1978. Vol. 1. P. 63-72. 215.Ando Y., Fujimoto T. Uitrastructural evidence that chick primordial germ cells leave the blood-vascular system prior to migrating to the gonadal anlagen// Develop., Growth and Differ. 1983. 25(4), p. 345-352. 216.Balinsky B. I., Devis R. J. Origin and differentiation of cytoplasmic structures in the oocyte of Xenopus laevis// Acta embroil. et morphol. exp. 1963. Vol. 6. P. 55108. 217.Beams H. W., Kessel R. G. The problem of germ cell determinants// Intern. Rev. Cytol. 1974. Vol. 39. P. 413-479. 218.Bluemink J.G., Tertoolen L.G. The plasma membrane I. M. P. pattern as related to animal-vegetal polarity in the amphibian egg// Develop. Biol. 1978. Vol. 62. P. 334-343. 219.Capso D. G. The spatial pattern of RNA in full grown oocytes of an amphibian Xenopus laevis// J. Exp. Zool. 1982. Vol. 219. P. 147-155. 220.Capso D. G., Jeffery W. R. Transient localizations of messenger RNA in Xenopus laevis oocytes// Develop. Biol. 1982. Vol. 82. P. 1-2. 221.Colombo R. Actin in Xenopus yolk platelets: a reculiar and debated presense// J. Cell Sci. 1983. Vol. 63. P. 263-270. 222.Comings D. E., Okada T. A. The chromatoid bogy in mouse spermatogenesis: evidence that it may be formed by the exstrusion of nucleolar components// J. Ultrastruct. Res. 1972. Vol. 39. P. 15-23. 223.Conway C. M. Evidence for RNA in the heavy bodies of see urchin eggs// J. Cell. Biol. 1971. Vol. 51. P. 889-893. 224.Cridland С.С. Laboratory experiments on the growth of Tilapia spp// Annual Reft. E. Afric Fish. Res. Organiz. 1959. P. 41-42. 225.Davidson E.H. Gene activity in early in early development. N.Y.: Acad. press, 1976. 226.Delbos M., Gipouloux J.-D., Guennoun S. Intpaendodermal and intramesenteric migration of anuran amphibian germ cells: transmission and scanning electron microscopy//J. Morphol. 1982. Vol. 171. P. 355-360. 227.Dhainaut A. Etude en microscopie electronique et par autoradiographie a haute resolution des exstrusions nucleaires au cours de l´ovogenese de Nereis pelagica (annelide polychete)// J. Microsc. (Gr. Brit.). 1970. Vol. 9. P. 99-118. 228.Dictus W.J.G., Zoelen E., van, Tetteroo P. A. T., Tertoolen L. C. J., de Laat S. W., Bluemink J. Lateral mobility of plasma membrane lipids in Xenopus eggs: regional differences related to animal-vegetal polarity become extreme upon fertilization// Develop. Biol., 1984. Vol. 101. P. 201-211. 229.Eddy E.M. Germ plasm and the differentiation of the germ cell line. Intern., Rev. Cytol., 1975. Vol. 43. P. 333-362. 230.Elinson R.P. The amphibian egg cortex in fertilization and early development// The cell surface: mediator in developmental processes. N. Y. Acad. press , 1980. P. 134-140. 231.Fulton A.B., Wan R.M., Penman S. The spatial distribution of polyribisomes in 3T3 cells and the associated assembly of proteins into the skeletal framework// Cell. 1981. Vol.20. P. 849-857. 232.Gamo H. On the origin of germ-cells and formation of gonad primordia in the medaka Oryzias latipes. Jap. J. Zool, 1961. Vol. 13. P. 101-116. 233.Gurdon J.B., Mohun T.J., Brennan S., Cascio S. Actin genes in Xenopus and their developmental control// J. Embryol. and Exp. Morphol. 1985. P. 125-136. 234.Hamaguchi S. A light and electron-microscopic study on the migracion of primordial germ cells in the teleost, Oryzias latipes// Cell Tiss. Res. 1982. V. 227. P.139-151. 235.Hogan J.C. An ultrastructural analysis of «cytoplasmic markers» in germ cells of Oryzias latipes. J. Ultrastruct. Res., 1978. Vol. 62. P. 237-250. 236.Ijiri K., Egami N.A. Mathematical model for germ determination process and effect of ultraviolet light of the process// J. Theor. Biol. 1976. Vol. 58. P. 15-32. 237.Jeffery W.R. Meier S. A yellow crescent cytoskeletal domain in ascidian eggs and its role in early development// Ibid. 1983. Vol. 96. P. 125-143. 238.Kalt M.R. Ultrastructural observations on the germ line of Xenopus laevis// Ztschr. Zellforsch. 1973. Bd. 138. S. 41-62. 239.Кеrr J.B., Dixon K.E. An ultrastructural study of germ plasm in spermatogenesis of Xenopus laevis// J. Embryol. and Exp. Morphol. 1974. Vol. 32. P. 573-592. 240.Kessel R.G. An electron microscope study of nuclear-cytoplasmic exchange in oocytes of Ciona intestinalis// J. Ultrastruct. Res. 1966. Vol.15. P. 181-196. 241.Kessel R.G. Fine structure of the poreannulus complex in the nuclear envelope and annulate lamellae of germ cells// Ztschr. Zellforsch. 1969. Bd. 94. S. 441-453. 242.Lebrun C., Billard R., Jalabert B. Changes in the number of germ cells in the gonade of the rainbow trout (Salmo gairdneri) during the first 10 post-hatching weeks // Reprod. Nutr. Develop. 1982. V. 22. №2. P. 405-412. 243.Lenk R., Penman S. The cytoskeletal framework and poliovirus metabolism// Cell. 1977. Vol. 16. P. 289-301. 244.Longo F. J., Chen Da-Yuan. Development of cortical polarity in mouse eggs: involvement of the meiotic apparatus// Develop. Biol., 1985. Vol. 107. P. 382-394. 245.Mahowald A.P. Polar granules of Drosophila. 4. Cytochemical studies showing loss of RNA from polar granules during early stages of embryogenesis// J. Exp. Zool. 1971. Vol.176. P. 345-352. 246.Merriam R. W., Sauterer R. A., Christensen K. A subcortical, pigmentcontaining struture in Xenopus eggs with contractile properties// Develop. Biol. 1983. Vol. 95. P. 439-446. 247.McLaren A. Signaling for germ cell// Genes and Dev. 1999. V.13. №4. P. 373376. 248.Moore G.A. The germ cells of the trout (Saimo irideus Gibbons)// Tr.Amer.Micr.Soc. 1937. V.56. N I. P.105-112. 249.Nicosia S.V., Wolf D. P., Inoue M. Cortical granule distribution and cell surfase characteristics in mouse eggs// Develop. Biol., 1977. Vol. 57. P. 56-74 250.Nieuwkoop P. D., Sutasurya L.A. Primordial germ cells in the chordates. Embriogenesis and phylogenesis. Cambridge ets.: Cambridge Univ. press. 1979. 187 p. 251.Odor D. L. The ultrastructure of unilaminar follicles of the hamster ovary// Amer. J. Anat. 1965. Vol. 116. P. 493-522. 252.Roth G. E., Moritz K. B. Restriction enzyme analysis of the germ line limited DNA of Ascaris suum// Chromosoma. 1981. Bd. 83. S. 169-190. 253.Shimizu T. Ooplasmic segregation in the Tubifex egg: Mode of pole plasm accumulation and possible involvement of microfilaments// W. Roux´ Arch. Develop. Biol. 1982. Vol. 191. P. 246-256. 254.Smith R.C. Protein synthesis and messenger RNA levels along the animalvegetal axis during early Xenopus development// J. Embryos and Exp. Morphol. 1986. Vol. 95. P. 15-35. 255.Smith L. D., Ecker R. E. Regulatory processes in the maturation and early cleavage of amphibian eggs// Curr. Top. Develop. Biol. 1970. Vol. 5. P. 1-38. 256.Timmermans L.P.M., Taverne N. Segregation of primordial germ cells, their numbers and their fates during early development of Barbus conchonius L.(Ciprinidea, Teleostei). A study with 3H-thimidine incorporation// J. Morphol. 1989. V.202. P. 225-237. 257.Waring G. L., Allis C. D., Mahowald A. P. Isolation of polar granules and the identification of polar granule specific protein// J. Cell. Biol. 1977. Vol. 75. P. 43a. 258.Whittaker J. R. Acetylcholinesterase development in extra cells caused by changing the distribution of myoplasm in ascidian embryos// J. Embryos and Exp. Morphol. 1980. Vol. 55. P. 343-354. 259.Wylie C. C., Heasman J., Parke J. M., anderton B., Tang P. Cytoskeletal changes during oogenesis and early development Xenopus laevis// J. Cell Sci. Suppl. 1986. Vol. 5. P. 329-341. 260.Ziluas V., Penaz M., Prokes M. The posthatching steps in the early ontogenes of Coregonus peled// Folia Zool. 1983. V.1. P/85-93. 261.Zissler D., Sander K. The cytoplasmic archutecture of the egg cell of Smittia spec. (Diptera, Chironomidae). I. Anterior and posterior pole regions// W. Roux´ Arch. Entwicklungsmech. Organism. 1973. Bd. 172. S. 175-186.
