роль количественного исследования в экспериментальной

Разработка метода комплексной оценки морфофункционального
состояния клеток ЖКТ
Спиваковская А.Ю., г. Саратов, anya_spivak@mail.ru
ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет им. В.И.Разумовского» Росздрава
Задача экспериментальной медицины - моделирование различных
адаптационно-компенсаторных процессов и патологических состояний на
биомоделях, что позволяет решать целый ряд вопросов, связанных с изучением патогенеза и морфогенеза различных заболеваний, особенностей
воздействия факторов окружающей среды, лекарственных препаратов,
пищевых продуктов и в последующем экстраполировать полученные данные на человека.
Цель исседования – изучить возможность применения комплексной
характеристики морфофункционального состояния клеток ЖКТ для оценки адаптационно-компенсаторных процессов в кишечнике биомодели при
моделировании различных стрессорных воздействий.
Алгоритм исследования включал 2 этапа:
- поиск оптимальных (наиболее информативных) показателей для
оценки состояния ЖКТ, адекватно отражающих реакцию макроорганизма на любое воздействие;
- выбор биомодели.
В работе использовали 12 морских свинок (по 4 животных на группу,
включая контрольных). Стрессорное воздействие моделировали:
- внутрижелудочным введением животным 10 мкг эндотоксина
(очищенного ЛПС Escherichia colli) (1-я группа);
- лишением морских свинок пищи с сохранением питьевого режима
(2-я группа).
Контрольным животным в условиях аналогичных опытным внутрижелудочно вводили 0,5 мл физиологического раствора.
Через сутки животные были умерщвлены декапитацией. Морфологический материал (кишечник) фиксировали в 10 % водном нейтральном
растворе формалина и обрабатывали по общепринятой в гистологии схеме
обезвоживания и заливки материала в парафин 3. Полутонкие парафиновые срезы органов окрашивали гематоксилином и эозином, применяли сочетанную окраску - альциановый синий и Шифф-реактив, импрегнировали серебром по Гримелиусу и по Массону в модификации Гамперля [6].
Количество апудоцитов и бокаловидных клеток определяли в 10 полях зрения правильно ориентированных срезов кишечника при увеличении
Х 200. Морфофункциональное состояние апудоцитов оценивали по изменению интенсивности окрашивания и зоне распределения продукта секреции в клетке, выявляемому в гистохимических реакциях. Секреторный
профиль бокаловидных клеток определяли по количеству элементов, дающих голубую (кислые мукополисахариды - КМПС), красную (нейтральные
мукополисахариды - НМПС) или фиолетовую (смешанные формы) окраску на 100 секреторных клеток.
Количество межэпителиальных лимфоцитов (МЭЛ) тонкого кишечника и лимфоцитов покровного эпителия толстого кишечника определяли
на 1000 ядер энтероцитов при увеличении Х 200.
Через сутки наблюдали изменение количества апудоцитов в кишечнике подопытных животных. Если на введение эндотоксина отмечали в 1,3
раза уменьшение количества аргирофильных клеток в тонком кишечнике
(6,9+1,05), то голодание способствовало увеличению их числа в 1,5 раза
(14,2+2,2) по отношению к контролю (9,5+1,17). Аналогичная тенденция
наблюдалась и со стороны аргентаффинных (EC) клеток, количество которых в 3 раза увеличивалось у голодныхорских свинок (8,7+1,13) и незначительно снижалось у животных, которым вводили эндотоксин (2,01+0,9) по
сравнению с контролем (2,9+0,32). Менялось соотношение аргирофильных
и аргентаффинных клеток. У контрольных морских свинок и у животных,
которым вводили эндотоксин доля EC-клеток составляла 30 %, то у голодных этот показатель был равен 50 %. Менялось и морфофункциональное
состояние апудоцитов. Среди сосчитанных клеток увеличивалась доля
опустошенных форм в 2 раза по отношению к контролю при голодании
животных и в 2,5 раза на введение эндотоксина. При голодание несколько
усиливались синтетические процессы в клетках, а введение эндотоксина
способствовало почти двукратному снижению числа гистохимически активных клеток.
В толстом кишечнике, сохранялась та же тенденция увеличения в
1,7 раза количества аргирофильных клеток при голодании (9,8+3,01) и
снижение их числа в 1,5 раза на введение эндотоксина (3,8+0,86) по сравнению с контролем (5,7+2,06). При неизменной доли EC-клеток в общем
пуле определяемых апудоцитов, их число в 2 раза увеличивалось при голодании и во столько же раз уменьшалось при введении эндотоксина.
Со стороны бокаловидных клеток отмечали некоторое уменьшение
их числа у голодавших морских свинок в тонком и толстом кишечнике
(30,4+6,02 и 59,1+3,65 соответственно) и более выраженное уменьшение
их числа на введение эндотоксина до 2 раз в тонком (21,7+9,13) и в 1,3 раза
в толстом кишечнике (49,6+4,56) животных по сравнению с контрольными
(39,6+4,21 и 62,8+6,54 соответственно). Функциональное состояние клеток
характеризовало увеличение доли среди них элементов с КМПС в обеих
группах и особенно выраженное (почти в 2 раза) снижение доли клеток с
НМПС на введение эндотоксина.
Количество и функциональное состояние клеток эффекторной зоны
иммунной системы кишечника (МЭЛ)ив обеих группах достоверно не отличалось от контрольных показателей.
Таким образом, любое воздействие на организм биомодели влечет за
собой мобилизацию функциональных элементов ЖКТ при этом степень
выраженности морфологических изменений в кишечнике коррелирует с
силой воздействия. Комплексная количественная оценка морфофункционального состояния апудоцитов, бокаловидных клеток и МЭЛ позволяет
характеризовать адаптационно-компенсаторные процессы в кишечнике
биомодели, что упрощает и унифицирует оценку стрессорных воздействий, повышает информативность и качество гистологического анализа
в экспериментальной медицине.
Список литературы:
1. Аруин Л.И., Григорьев П.Я., Исаков В.А.. Яковенко Э.П. Хронический
гастрит.- Амстердам, 1993. - 362 с.
2. Голофеевский В.Ю. Введение в клиническую морфологию желудка и
двенадцатиперстной кишки.- Санкт-Петербург: «ФОЛИАНТ», 2005.- 109 с.
3. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники.- М.: «Медицина»,
1969.-367 с.
4.Писарев В.Б. Бактериальный эндотоксикоз: взгляд патолога: монография
/ В.Б. Писарев, Н.В. Богомолова, В.В.Новочадов – Волгоград: Изд-во
ВолГМУ, 2008.-308 с.
5.Райхлин И.Т., Кветной И.М., Осадчук М.А. APUD-система (общепатологические и онкологические аспекты).- Обнинск, 1993. - Ч. 1-2. – с. 217 с.
6.Саркисов Д.С. Микроскопическая техника: руководство / Д.С. Саркисов,
Ю.Л. Перов. - М.: «Медицина», 1996. – 544 с.