Начало формы КЕНЖЕБЕКОВА Г.Д., КАБИДОЛДАНОВА Г.Ж

КЕНЖЕБЕКОВА Г.Д., КАБИДОЛДАНОВА Г.Ж., РИАД М. РИАД., САВИЦКАЯ И.С., *ЯКИЕВА
Б.С.
ПОПУЛЯЦИОННЫЙ УРОВЕНЬ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ В КИШЕЧНИКЕ
ЧЕЛОВЕКА И ЕГО ОПРЕДЕЛЕНИЕ НА РАЗЛИЧНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ
(Казахский национальный университет имени аль-Фараби, *12 Городская поликлиника
г.Алматы )
В условиях обострившейся экологической обстановки, в результате массового
применения высокоактивных антибиотических и химиотерапевтических препаратов, при
нерациональном питании и воздействии радиоактивных веществ наблюдается резкое
увеличение патологий связанных с изменениями нормальной микрофлоры человека [1, 2].
Являясь частью микроэкологичес-кой системы организма, кишечная микрофлора в
нормальных условиях характеризуется относительным постоянством видового состава,
определенным экологическим равновесием с макроорганизмом (эубиозом) [3].
Глубокие нарушения микроэкологии кишечника, именуемые терминами «дисбактериоз»
или «дисбиоз», обуславливаются, прежде всего, дефицитом молочнокислых бактерий и
проистекающим отсюда беспрепятственным размножением условно-патогенных
микроорганизмов, что сопровождается цепью целого ряда расстройств, причем не только
пищеварительной, но и иммунной и эндокринной систем [4, 5].
Поэтому определение содержания лактобактерий в кишечнике имеет важное
диагностическое значение [6, 7].
В медицинской практике для диагностики дисбактериозов кишечника используется, как
правило, классический бактериологический анализ, требующий наличия большого
количества дорогих питательных сред и длителен во времени (5 дней и более).
Колонии лактобацилл формируют на используемых питательных средах полиморфные,
плоские или выпуклые, белого, бело-палевого цвета колонии с зернистой или гладкой
поверхностью. На этих же средах могут расти также дрожжеподобные грибы в виде
выпуклых плотных колоний белого цвета. Поэтому из однородной по морфологии группы
колоний отвивают по 1-3 колонии и приготавливают препараты для бактериоскопического
исследования, которые затем окрашиваются методом Грамма. Обнаружение в поле зрения
крупных (длиной до 4-5 мкм) грамположительных палочек, прямых или слегка изогнутых,
располагающихся одиночно или парными цепочками, бесспоровых и неподвижных,
считается положительным результатом [8, 9].
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Бактериологическому исследованию подверглись фекалии человека. Забор материала
производился в стерильную посуду, стерильной лопаточкой без консерванта. Доставка
осуществлялась в течение 2 часов.
Молочнокислые бактерии выделяли на четырех питательных средах, состав которых
приведен в таблице 1.
Таблица 1. Состав сред, используемых для выделения лактобацилл.
Реактивы
Богданова
Рогозы
МРС-1
Кукурузно-сахарная среда
1
Меласса
Кукурузный экстракт
Мясной экстракт
Дрожжевой автолизат
Дрожжевой экстракт
Гидролизат молока
2
-
3
-
4
-
20,0
50,0
25,0
-
10,0
5,0
-
5
7,0
30,0
-
Пептон
Глюкоза
К2НРО4
КН2РО4
цитрат Симонса
марганец хлористый
MnSO4-2H2O
FeSО4
МgSO4
MgSO4-7H2O
ледяная уксусная кислота
1
Натрий уксуснокислый
10,0
20,0
0,5
0,5
0,034
2
5,0
10,0
20,0
6,0
2,0
0,14
0,12
0,04
0,575
1,32
3
25,0
10,0
20,0
2,0
0,58
4
5,0
0,3
20,0
0,7
0,3
0,5
5
-
Аммоний лимонокислый
двузамещеный
-
-
-
2,0
(NH4)2SO4
-
-
-
1,0
KCl
-
-
-
0,17
CaCO3
-
-
-
10,0
NaCl
CoCl2
-
-
-
0,7
3,0
Твин-80
-
1,0
1,0 -
-
Агар-агар
РН
20,0
7,0
20,0
5,4
15,0
6,5
20,0
6,5-7,0
Стерилизация
1210С - 15/
1210С - 15/
1210С - 15/
1210С- 15/
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Содержание молочнокислых бактерий в кишечнике при проведении стандартного
бактериологического анализа рекомендуется определять только в последние два года, до
этого их количество не определялось.
Питательной средой, которая предлагается для их выделения, является среда Рогозы
[10]. Она содержит необходимые для лактобактерий ростовые факторы, а низкий уровень
значения рН среды (5,4) задерживает рост сопутствующей микрофлоры - энтеробактерий,
стафилококка. Тем не менее, в большинстве лабораторий, проводящих этот вид анализа,
молочнокислые бактерии не определяются, поскольку на этой среде при выделении из
кишечника они растут очень плохо. Это может быть связано с тем, что лактобактерии,
обитающие в кишечнике в силу своей экологической приспособленности, предпочитают
анаэробные условия, поэтому низкое количество молочнокислых бактерий в проведенных
нами анализах может объясняться недостаточно адекватной методикой их выделения из
кишечника.
В связи с этим для повышения эффективности выделения лактобацилл из кишечника мы
попытались использовать несколько традиционных питательных сред и видоизменили
условия их культивирования при выделении. Использовали среду Рогозы, Богданова с
уксуснокислым натрием, среду МРС-1 и кукурузно-сахарную среду. Посев производили из
10-3, 10-5, 10-7 разведений в 4 вариантах, инкубировали 48 - 72ч при 370С.
I вариант - обычным поверхностным способом и распределением на поверхности среды
стерильным шпателем;
II вариант - на поверхность засеянных чашек заливали тонкий слой водного агара;
III вариант - засеянные чашки инкубировали в эксикаторе, в которую помещали
зажженную свечку для удаления кислорода.
IV вариант - предварительно засеянные глубинным способом чашки Петри, затем
инкубировали в эксикаторе со свечой.
Результаты этих экспериментов приведены в таблице 2.
Таблица 2. Эффективность использования различных питательных сред для выделения
лактобактерий из кишечника.
Разведения
Количество КОЕ при росте на различных питательных средах
Среда Богданова
II
III
Среда Рогозы
Среда МРС-1
IV
III
I
II III IV l
10-3
-
7 18 32 10 800 1200 2100
42
2800 3100 3900 15 900 1500
2500
10-5
-
-
15
2
600 1200 1500 3 400 620
45 145 180 - 10 35
930
52
2 7 2 125 350
- - - 5
24
I
410
38
II
IV
I
Кукурузно-сахарная
среда
II
III
IV
Оказалось, что наименее эффективной из всех питательных сред является среда Рогозы
даже при создании частично анаэробных условий. На среде Богданова и кукурузно-сахарной
среде наблюдался значительный рост колоний в особенности во II и III вариантах посева.
Однако максимальное количество колоний из тех же разведений удалось получить на среде
МРС-1, число колоний превышало количество КОЕ, обнаруживаемых на среде Богданова и
кукурузно-сахарной.
Таким образом, среда МРС-1 из четырех изученных наиболее адекватна для выделения
молочнокислых бактерий из кишечника.
Следует отметить, что эффективность диагностических приемов в большой степени
зависит от набора и качества используемых селективных питательных сред и все они
являются очень богатыми по своему составу: включают сложные органические компоненты,
содержащиеся в кукурузном, дрожжевом и мясном экстрактах, а также имеют сложный
набор минеральных элементов. Трудно предположить качественные преимущества для
развития молочнокислых бактерий на основании той или иной среды.
Среда Рогозы отличается более низким уровнем рН, видимо такое значение уровня
кислотности среды не является благоприятным для развития молочнокислых бактерий,
обитающих в кишечнике человека.
Для их выращивания в случае отсутствия микрокультиваторов, достаточно использовать
эксикаторы, в которых создаются анаэробные условия.
ЛИТЕРАТУРА
1. Горская Е.М., Лизько Н.Н., Ленцнер А.А., Бондаренко В.М., Соколова К.Я., Лихачева
А.Ю. Биологическая характеристика штаммов лактобацилл, перспективных в
качестве эубиотиков. // Микробиол. 1992. №3. С.17-20.
2. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья
кишечника // Гастроэнтерология, гепатология и колопроктология. 1998. №1. С.61-65.
3. Гончарова Г.И., Дорофейчук В.Г., Смолянская А.З., Соколова К.Я. Микробная
экология кишечника в норме и патологии // Антибиотики и химиотерапия. 1989. Т.34.
№ 6. С.462-465.
4. Куваева И.Б., Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей. М.:
Медицина. 1991. 240с.
5. Маянский А.Н. Дисбактериоз: иллюзии и реальность, // Педиатрия 2000. №4. С.80-85.
6. Костюк О.П., Чернышова Л.И., Волоха А.П. Физиологические и терапевтические
свойства лактобактерий // Педиатрия. 1998. №1. С.71-76
7. Воробьев А.А., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические
свойства и защитные функции, // Журн. микробиол. 1999. № 6. С.102-105.
8. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.
Медицина. 1978. В.1. 390с
9. Минушкин О.Н., Минаев В.И. Комплексная диагностика, лечение и профилактика
дисбактериоза кишечника в клинике внутренних болезней. // Методические
рекомендации. 1997. 40с
10. Квасников Е.И., Нестеренко О.А. Молочнокислые бактерии и пути их использования.
М.: Наука. 1975. 384с
***
Aaai ioaaiiai n?o ?uo?ue aaeoa?eyea?ui a?eoai» oeiiaieiaii a?ou?o?a i?ieiiaie aa?aoii ?ain
?ci?eaiaai.
***
There is the procedure allowing to promote the effectiveness of the isolation of lactobacillus out
of human intestine.