по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке... крови и моче человека кинетическим методом

ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме
крови и моче человека кинетическим методом
«а-АМИЛАЗА - UTS»
Набор «а-АМИЛАЗА –UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05459
Информация для заказа набора «а-АМИЛАЗА –UTS»
Кат. №
Комплектация
АА-09-010-100
где v – объем фотометрической ячейки анализатора.
Реагент 100 мл
Количество определений
100/v
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «а-АМИЛАЗА -UTS» предназначен для определения активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме крови и моче
человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения
пациентов.
1.2. Альфа-амилаза относится к группе гидролаз, катализирующих гидролиз полисахаридов (крахмала, гликогена) до моно- и дисахаридов
(мальтоза, глюкоза). Наиболее богаты амилазой поджелудочная железа и слюнные железы (Р-тип и S-тип), соответственно. Альфа-амилаза
попадает в кровь вследствие цитолиза клеток, содержащих этот фермент, с мочой секретируется Р-тип амилазы [1,2,3]. На этом основано
клиническое значение анализа.
1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата
анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного
риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в
соответствии с ОСТ 91500.13.0001-2003.
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Альфа-амилаза катализирует реакцию гидролиза субстрата 2-хлор-4-нитрофенил-α-D-мальтотриозида (CNPG3) с образованием следующих
соединений: 2-хлор-4-нитрофенола (CNP), 2-хлор-4-нитрофенил-α-D-мальтозида (CNPG2), мальтотриозы (М3) и глюкозы (G) по следующей схеме
реакции:
10CNPG3
Амилаза
9CNP + CNPG2 + М3 + G
Скорость образования 2-хлор-4-нитрофенола (CNP) пропорциональна активности фермента и определяется фотометрическим методом при длине
волны 405 нм [4].
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны
405 нм молекулами 2-хлор-4нитрофенола. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски 2-хлор-4нитрофенола и, следовательно, прямо пропорционально активности альфа-амилазы в анализируемом образце.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Набор реагентов поставляется в виде готового раствора реагента.
Реагент и его состав:
Состав
Концентрация
Буферный раствор MES, pH 6,0
50 ммоль/л
CNPG3
2,25 ммоль/л
NaCl
300 ммоль/л
Ацетат кальция
5,0 ммоль/л
Тиоцианат натрия
450 ммоль/л
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Набор обеспечивает линейную область определения активности альфа-амилазы от 4,0 МЕ/л до 1600 МЕ/л, отклонение от линейности во всем
указанном диапазоне не превышает 5%.
4.2. Чувствительность – не более 4 МЕ/л.
4.3. Воспроизводимость - коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
4.4. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данным методом (CNPG3).
4.5. Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется использовать сывороточные калибраторы, аттестованные по
значению активности альфа-амилазы данным методом (CNPG3).
4.6. Нормальные величины активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме взрослого человека составляют: 23-100 МЕ/л; в моче 10-490 МЕ/л
[3].
4.7. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение активности альфа-амилазы, приведены в обзоре [4].
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Реагент содержит 2-хлор-4-нитрофенил-α-D-мальтотриозид и тиоцианат натрия. Следует избегать попадания реагента на кожу и слизистые. В
случае попадания их на кожу и слизистые оболочки необходимо промыть поражённые участки большим количеством проточной воды.
5.2. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной
санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических
учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека
следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой
другой возбудитель вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
6.1. Для выполнения анализа по определению активности альфа-амилазы с применением набора реагентов «альфа-АМИЛАЗА-UTS»
рекомендуется использовать полуавтоматический или автоматический биохимический анализатор, позволяющий выполнять измерение скорости
изменения оптической плотности при длине волны 405 нм (кинетический режим) и обеспечивающий термостатирование фотометрической ячейки
при температуре +(37±0,5) ОС.
6.2. Общелабораторное оборудование.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1. Негемолизированная сыворотка или плазма крови.
7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови немедленн о после взятия крови.
7.3. Образцы сыворотки или плазмы стабильны 7 суток при комнатной температуре, 1 месяц при
+(2-8) ОС, образцы не замораживать [3].
7.4. Образцы мочи стабильны не более 24 часов при +(2-8) ОС, не замораживать [3]. Проверьте уровень pH. Моча с pH < 5 может приводить к
снижению стабильности фермента.
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Реагент готов к использованию.
8.2. Реагент перед применением необходимо прогреть до температуры +(37±0,5) ОС.
8.3. Оптическая плотность реагента при 405 нм должна составлять не более 0,2 ед. опт. плотн. (Б), (при использовании кювет с длиной оптического
пути 10 мм).
8.4. Для проведения анализа на полуавтоматическом анализаторе должен быть выбран кинетический режим измерения с калибровкой по фактору и
установлены следующие значения параметров методики:
Параметр
Имя теста
Основной светофильтр
Дополнительный светофильтр
Фактор сыворотка, плазма крови, мочи, F
Время лаг-фазы
Время измерения
Единицы измерения
Линейность, МЕ/л
Значение
Амилаза
405
600
3367*
1 мин.
1-3 мин не менее 3 измерений.
Е/l, МЕ/л
5,0 - 1600
* значение F приведено для случая, когда в анализаторе используются кюветы или пробирки с оптическим путем L0=10мм. При использовании
кювет или пробирок с иным оптическим путем (L1) следует приведенное значение изменить и установить следующее значение фактора: F1=FохL0/L1
 Проведение реакции.
8.5. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:
Внести в кювету
Анализируемый образец,
мкл
Реагент
1000
проба
20
8.5.1. При использовании биохимических анализаторов с другим фотометрическим объемом количество реагента и анализируемых образцов в
зависимости от объема используемой кюветы может быть пропорционально изменено (соотношение пробы к реагенту составляет 1:50)
8.5.2. Пробы перемешать, поместить в фотометрическую ячейку анализатора. На стадии лаг-фазы в течение 1 минуты скорость изменения
концентрации альфа-амилазы выходит на линейный режим. Далее измерения оптической плотности провести не менее 3 раз (в течение 1-3 мин)
через равные промежутки времени.
8.5.3. Результат анализа - активность альфа-амилазы - рассчитывается автоматически при введении в память полуавтоматического
биохимического анализатора фактора, указанного в таблице.
8.5.4. Если результат определения активности альфа-амилазы превышает 1600 МЕ/л, то следует разбавить пробу физраствором (0,9% NaCl) в 2 раза
и повторно провести измерение, а полученный результат умножить на 2.
8.6. Для выполнения измерения на автоматическом биохимическом анализаторе следует:
8.6.1. Установить программу определения активности альфа-амилазы согласно таблице:
Наименование параметра
Значение
Метод измерения
кинетический
Длина волны, нм
основная 405, дифференциальная 600
Измерение против
Воздух или дист. вода
Температура реакции
37 ОС
Единица измерения
Е/л, (МЕ/л)
Число знаков после запятой
0
Изменение оптической плотности
Увеличивается
Фактор*
Зависит от длины оптического пути
Соотношение реагент/проба (сыворотка или плазма)
50:1
Соотношение реагент/проба (моча)
100:1
Количество измерений, не менее
3
Время лаг-фазы, мин
1
Время реакции, мин
1
Верхний предел абсорбции реагента против воды, Б
0,2
Нижний предел абсорбции реагента против воды, Б
0
Максимальная скорость изменения абсорбции, Б/мин
0,15
Границы линейности, МЕ/л
5-1600
Максимум нормы, МЕ/л
100
Минимум нормы, МЕ/л
23
* - Перед первым использованием набора необходимо определить значение фактора по мультикалибратору, аттестованному по активности
альфа-амилазы методом с использованием CNPG3, полученное значение ввести в память анализатора.
8.6.2. Если результат измерения активности альфа-амилазы выше 1600 МЕ/л, следует разбавить пробу физраствором (0,9% NaCl) в 2 раз, повторно
провести измерение, полученный результат умножить на 2.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1. Набор реагентов «а-АМИЛАЗА-UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2-8 ОС в течение всего срока
годности. Допускается хранение набора до 25 ОС не более 10 суток. Замораживание реагента не допускается.
9.2. Срок годности набора 18 месяцев с даты его изготовления.
9.3. Реагент после вскрытия флакона может храниться при температуре +2–8 ОС в темном месте в течение всего срока годности набора.
9.4. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
Список литературы
1. McNeely M. Amylase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-1116.
2. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
3. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
4. Ying Foo A et al. Amilase measurement with 2-chloro-4nitrophenyl.
5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».
По вопросам, касающимся качества набора «а-АМИЛАЗА –UTS», следует обращаться в ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул.
Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31, 8-800-333-91-31,
Факс: (495) 564-86-41;
E-mail: office@unimedao.ru; http://www.unimedao.ru