выводы - Белгородский государственный аграрный университет

На правах рукописи
РОМЕНСКАЯ
Наталья Васильевна
НАРУШЕНИЯ КАРТИНЫ КРОВИ ПРИ ДИСФУНКЦИИ ПЕЧЕНИ
У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
16.00.01 – диагностика болезней и терапия животных
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
Белгород - 2007
2
Работа выполнена на кафедре клинической диагностики, терапии, акушерства и хирургии факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия».
Научный руководитель:
Официальные оппоненты:
- доктор ветеринарных наук,
профессор Валентин Васильевич
Концевенко
- доктор ветеринарных наук,
профессор Михаил Ефремович
Павлов
- кандидат ветеринарных наук,
Олег Валентинович
Бабенко
Ведущая организация:
Защита состоится 16 мая 2007 г. в 10:00
- Орловский государственный
аграрный университет
часов на заседании диссер-
тационного совета Д 220.004.01 при Белгородской государственной сельскохозяйственной академии.
Адрес академии: 308503, Россия, Белгородская область, Белгородский
район, поселок Майский, Вавилова,1. Факс (472-2) 39-22-62
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.
Автореферат разослан 13 апреля 2007 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
кандидат биологических наук,
доцент
Ю.Н. Литвинов
3
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Система крови в организме выполняет важную интегрирующую и коммуникативную функцию. Поскольку любые гомеостатические
отклонения неизбежно находят свое отражение в ней, для клиницистов особое значение имеют ее индикаторные свойства. Грамотная интерпретация результатов лабораторного анализа крови является одним из важнейших условий формирования
целесообразной стратегии диагностических и лечебно-профилактических мероприятий. В тоже время до сих пор остается не достаточно изученным вопрос о патогенезе ряда отклонений в крови, возникающих при гепатопатиях.
Анализ современной обстановки в животноводстве свидетельствует о том,
что в хозяйствах эксплуатируется преимущественно больное поголовье (Павлов
М.Е. и др., 1998/00; Дронов В.В., 2000). Как правило, заболевания представлены
широким спектром метаболических расстройств комбинированного характера, которые можно определить как общую обменную патологию. В данном случае, безусловно, следует учитывать, что уровень обменных процессов во многом определяется метаболической активностью печени, то есть ее функциональным состоянием. Нарушение технологии содержания, кормления и эксплуатации обусловливает
высокое напряжение механизмов поддержания гомеостаза, в конечном итоге это
приводит к срыву адаптации и невозможности компенсировать возникшие отклонения. При этом развиваются дистрофическое перерождение печени или мезенхимально-воспалительный процесс в ней.
Большинство болезней печени протекают длительное время скрыто, бессимптомно, что затрудняет их своевременную диагностику и разработку эффективных средств коррекции (Левченко В.И., 1984; Подымова С.Д., 1998). Все это
провоцирует серьезные экономические издержки вследствие снижения продуктивности, потери продуктивных качеств, рождения нежизнеспособного молодняка и
ранней выбраковки животных.
Таким образом, учитывая не раз описанную связь печени и системы крови
(Шерлок Ш. и др., 1999), большой интерес для ветеринарной науки представляет
уточнение особенностей гематологических нарушений при функциональных расстройствах печени продуктивного скота. Помимо теоретической стороны проблемы, разработки в данном направлении имеют важное прикладное значение для
4
ранней диагностики, контроля эффективности терапевтических мероприятий и
прогнозирования исхода большинства заболеваний гепатобилиарной системы.
Цели и задачи исследований. Целью работы было определение особенностей клинического проявления нарушений системы крови у крупного рогатого скота при нарушениях функционального состояния печени в условиях производства.
Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:
- выявить особенности отклонений в системе крови у лактирующих коров
при заболеваниях печени незаразной этиологии;
- выявить особенности отклонений в системе крови у сухостойных коров при
подобных же состояниях печени;
- выяснить основные формы гематологических изменений у новорожденных
телят с нарушениями функционального состояния печени.
Научная новизна исследований. В результате проведенной работы впервые
показана взаимообусловленность нарушений системы крови и дисфункции печени
у крупного рогатого скота в различные периоды онтогенеза.
Предложен алгоритм, отражающий основные пути альтерации и возможной
компенсации системы крови при гепатопатиях.
Разработано устройство для проведения пункционной биопсии у новорожденных телят, применение которой позволяет проводить прижизненную диагностику морфологических изменений в печени и минимизировать риск возникновения осложнений у обследуемых животных. Устройство запатентовано – патент №
49705 от 10.12.2005.
Практическая значимость работы и реализация результатов исследований. На основании проведенных исследований предложены дискретные критерии
оценки функционального состояния печени, как взрослого, так и новорожденного
крупного рогатого скота по результатам гематологических и биохимических лабораторных тестов.
Разработано устройство, позволяющее проводить раннюю диагностику повреждений печени у новорожденных телят при полной минимизации риска для
здоровья обследуемого поголовья. Его применение не требует дополнительной
квалификации ветеринарных специалистов, поэтому вполне может быть использовано не только с целью научных изысканий, но и на практике.
5
Основные материалы исследований используются в учебном процессе при
изучении соответствующих разделов морфологии, нормальной и патологической
физиологии, клинической диагностики и внутренних болезней животных.
Основные положения, выносимые на защиту:
- гиперхромемия, депрессия эритроцитарного ростка кроветворения, клеточная атипия морфологических элементов крови и диспротеинемическая коллоидная
нестойкость плазменных белков как признаки патологии печени у взрослого крупного рогатого скота;
- гипергемоглобинемия, панцитопения, дегенерация эритроцитов и появление клеток раздражения на фоне диспротеинемии, как проявления неонатальной
гепатопатии;
- устройство для пункционной биопсии печени у новорожденных телят и
способ его применения;
- основные пути альтерации и возможной компенсации системы крови при
патологии печени.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на международных научно-практических конференциях «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» (Белгород,
2000/06), а также на 4-й межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения заслуженного ветеринарного врача РФ И.В.
Окунцова (Омск, 2005), Международном съезде терапевтов, диагностов (Барнаул,
2005), Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной 10-летию медицинского факультета и кафедры анатомии и гистологии человека БелГУ (Белгород, 2006) и расширенном заседании кафедр клинической диагностики, терапии, акушерства и хирургии; физиологии, фармакологии и ВСЭ;
морфологии; зоогигиены и кормления с.-х. животных Белгородской государственной сельскохозяйственной академии (2007).
Публикации результатов исследований. По материалам диссертации
опубликовано 14 научных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 135 страницах
машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, заключения, выводов,
6
предложений производству, списка литературы, включающего 247 источников, в
том числе 29 иностранных авторов, приложений. Работа содержит 11 таблиц и 31
рисунок, из них 5 диаграмм, 26 микрофотографий (19 – клетки крови, 7 – гистопрепараты).
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследования проведены в хозяйствах Белгородской области: учхозе Белгородской ГСХА, ООО «Дубовской животноводческий комплекс» (2000/01), ЗАО
«Колос» и ОАО «Агро-Стрелецкое» (2001/06) Белгородского района. Часть работы
выполнена в рамках заказа департамента АПК правительства администрации Белгородской области по теме «Разработка эффективных мероприятий по диагностике,
профилактики и лечению обменных нарушений и патологии системы репродуктивных органов у крупного рогатого скота» (№ 08/04, 1.1.151 от 2004 г.). Клиническому исследованию подвергнуто 52 лактирующих и 27 сухостойных коров чернопестрой породы, аналогов по уровню продуктивности, возрасту и физиологическому состоянию, а также 63 новорожденных теленка с последующим лабораторным
исследованием их крови. Кроме того, части телят была выполнена пункционная
биопсия печени с гистологическим исследованием полученного материала.
Все исследования проводились в зимне-весенний периоды (2000/06, гг.), в
период наибольшего напряжения гомеостатических систем организма. Животные
содержались в аналогичных условиях и получали общепринятый для хозяйств рацион кормления.
Исследования клинико-физиологического состояния коров и выяснение у
них уровня обменных процессов были аналогичными и проводились через каждые
14-15 суток (у лактирующих с 3 по 5 месяцы лактации, у сухостойных – начиная с
седьмого месяца стельности вплоть до отела). Клинические, гематологические и
биохимические исследования телят проводись через каждые 3-4 суток, начиная с
рождения до 2-х недельного возраста. Клинические исследования проводили по
общепринятой схеме с описанием изменений в курационных листах. Материал для
лабораторного исследования во всех случаях отбирали в период физиологического
покоя, до утреннего кормления. Лабораторные исследования крови проводились не
позже 5-6 часов после отбора материала. Проведенные исследования включали:
Общий (клинический) анализ крови с определением следующих показателей:
7
скорость оседания эритроцитов (по Панченкову); содержание гемоглобина – гемиглобинцианидным методом; подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов – на
аппарате ГЦМК-3; выведение лейкоцитарной формулы – путем подсчета лейкоцитов в мазках, окрашенных по Лейшману с использованием общепринятых методик,
а также расчет среднего содержания гемоглобина в одном эритроците (СГЭ) и выведение клеточного коэффициента;
биохимические исследования сыворотки крови с определением: общего белка – рефрактометрическим методом; белковых фракций – нефелометрическим методом, с выведением альбумин-глобулинового соотношения и глобулинового индекса; определение трансаминазной активности в сыворотке крови (АлАт, АсАт)
по Райтману-Френкелю; определение коллоидной стойкости сывороточных белков
– проведением пробы Вельтмана унифицированным методом;
морфологические исследования печени телят методом пункционной биопсии
с применением оригинального устройства собственной модификации, окраска биоптатов проводилась гематоксилином и эозином; изучение гистопрепаратов проведено с применением микроскопа «БИОЛАМ-2» (объектив 40X и 90X, окуляр 7X).
Обработка полученных данных проведена на персональной ЭВМ с применением программы статистической обработки Н.Н. Григорова (1996).
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Клинический, гематологический и биохимический статус коров
Комплексом клинических исследований 52 лактирующих коров были выявлены 20 животных с признаками нарушений обмена и патологии печени. У таких
животных в 100% случаев наблюдалось тахипноэ и тахикардия, у 60% - глухость
сердечных тонов, у 90% - гипотония преджелудков, у 75% - увеличение перкуторных границ печени, у 70% - признаки деминерализации костной ткани, что сопровождалось размягчением последних хвостовых позвонков и поперечных отростков
поясничных позвонков. У 60% животных шерсть тусклая, ломкая, плохо фиксируется в коже. Для выяснения степени обменных нарушений у обследуемого поголовья отбирали кровь с последующим ее гематологическим и биохимическим исследованием (табл. 1,2).
Как видно из таблицы 1, гематологический статус лактирующих коров с признаками заболевания печени отличался от такового у здоровых животных. У боль-
8
ных отмечены эритропения с тенденцией к и гиперхромной анемии, о чем свидетельствует снижение числа эритроцитов (с появлением в крови полихроматофилов
и других форм дегенеративных клеток), клеточного коэффициента и увеличение
цветного показателя. Заболевания печени, склонные к хронификации сопровождаются нарушением гемопоэза, протекающим по типу гиперхромных макроцитарных
анемий,
особенно
это
характерно
для
хронического
мезенхимально-
воспалительного синдрома. По-видимому, это положение подтверждается и в
нашем случае. Со стороны элементов белой крови у больных коров также отмечены некоторые изменения. Об этом свидетельствует увеличение количества лейкоцитов в целом и отдельных их популяций, в частности сегментоядерных нейтрофилов и эозинофильных гранулоцитов. Подобное состояние можно объяснить следующим образом: повреждение структуры печени при различных ее заболеваниях
резко снижает проницаемость гистогематического барьера, это приводит к поступлению во внутреннюю среду организма избыточного количества антигенов и, следовательно, к активизации микрофагов. Поэтому функциональные расстройства
печени часто сопровождаются разнообразными токсико-аллергическими реакциями. К тому же печень является местом синтеза и утилизации ряда цитокинов непосредственно принимающих участие в регуляции гемопоэза, поэтому нарушение ее
функций безусловно отражается на картине крови.
Полученные данные свидетельствуют о достоверном различии по уровню
белкового обмена между группами животных. Биохимический статус больных коров характеризовался гипопротеинемией, при этом было снижено количество альбуминов и альфа-глобулинов. Отмечены выраженная гипербета- и умеренная гипергамма-глобулинемия со снижением коллоидной стойкости белков. Это сопровождалось гиперферментемией за счет повышения активности сывороточных трансаминаз, которые относятся к группе индикаторных энзимов и имеют важное диагностическое значение.
Обнаруженные отклонения являются характерными для функциональной
слабости печени. Повреждение паренхиматозных элементов, как правило, приводит к снижению белково-синтетической функции печени, что сопровождается
прежде всего падением уровня альбуминов и, реже, альфа-глобулинов. Умеренный
холестаз, сопровождаемый хронические заболевания печени, обусловливает
9
Таблица 1 – Гематологические показатели коров
Показатель
Клинически
больные
5,33±0,21
103,7±2,37
1,23±0,06
19,68±0,86
0,46±0,07
9,06±1,03
648,3±59,53
Эритроциты, 10¹²/л
Гемоглобин, г/л
Цветной показатель
СГЭ, пг
СОЭ, мм/ч
Лейкоциты, 109/л
Клеточный коэффициент
Лейкоцитарная формула, %
Эозинофилы
7,2±0,88
Палочкоядерные нейтрофилы
0,6±0,27
Сегментоядерные нейтрофилы
30,6±1,84
Лимфоциты
60,6±1,92
Моноциты
0,8±0,39
Двуядерные лимфоциты
0
Клетки Тюрка
0
Таблица 2 – Биохимические показатели коров
Показатель
Общий белок, г/л
Альбумины, %
Альфа-глобулины, %
Бета-глобулины, %
Гамма-глобулины, %
Альбумины : глобулины
Проба Вельтмана, мл 0,5% р-ра CaCl2
АлАТ, мкмоль/с/л
АсАТ, мкмоль/с/л
Коэффициент де Ритиса
Клинически
больные
73,62±0,88
41,14±1,03
5,85±0,56
23,9±1,01
29,1±0,89
0,7±0,03
0,17±0,02
0,72±0,05
0,74±0,07
1,33±0,36
Лактирующие
Клинически здор<
ровые
0,001
6,49±0,19
0,05
112,38±2,87
0,05
1,08±0,03
0,05
17,41±0,42
0,44±0,05
0,01
6,16±0,27
0,001
1072,94±37,82
0,05
0,05
0,05
0,02
-
5,06±0,53
0,83±0,22
25,72±1,32
66,11±1,4
0,33±0,02
0
0
Лактирующие
Клинически здор<
ровые
0,001
78,43±1,07
0,001
45,79±1,04
0,001
10,85±0,76
0,01
17,3±2,16
0,05
26,93±1,2
0,001
0,85±0,04
0,001
0,31±0,03
0,001
0,31±0,07
0,01
0,46±0,07
2,36±0,71
Сухостойные
Клинически
больные
4,36 ± 0,34
151,6 ± 5,2
1,97 ± 0,09
31,7 ± 1,6
1,08 ± 0,07
7,52 ± 0,35
673 ± 80
0,05
0,001
-
Клинически
здоровые
4,67 ± 0,33
132,2 ± 5,4
1,72 ± 0,1
27,8 ± 1,8
0,97 ± 0,07
5,96 ± 0,25
763 ± 73
8,2 ± 0,69
5,03 ±0,37
20,7 ± 0,55
64,2 ± 1,15
1,72 ± 0,23
0,19 ± 0,05
0,06 ± 0,05
0,02
-
5,9 ± 0,6
5,74 ± 0,64
22,67 ± 1,06
63,5 ± 1,34
1,58 ± 0,23
0,13 ± 0,05
0
р<
Сухостойные
Клинически
больные
82,6 ± 1,7
30,8 ± 1,41
16,0 ± 1,08
6,9 ± 0,75
46,2 ± 1,54
0,46 ±0,03
0,19 ± 0,01
0,155 ± 0,04
0,630 ± 0,08
5,35 ± 2,3
р<
0,001
0,02
0,001
0,001
-
Клинически
здоровые
78,6 ± 2,2
40,3 ± 1,77
12,3 ± 1,12
8,8 ± 1,05
38,6 ± 1,63
0,69 ± 0,05
0,23 ± 0,02
0,198 ± 0,048
0,428 ± 0,095
3,56 ± 2,11
повышение бета-глобулиновой фракции. Раздражение ретикулоэндотелия и, в
частности, системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ), а также сопутствующий
мезенхимально-воспалительный синдром, приводят к повышенному синтезу гамма-глобулиновой фракции, в состав которых входят, в том числе, и иммуноглобулины. Увеличение в плазме крови грубодисперсных фракций обусловливает снижение коллоидной стойкости белков. Повреждение структурных компонентов печени и напряженность обменных процессов усугубляется повышением проницаемости плазматических мембран гепатоцитов, что и объясняет повышение активности сывороточных трансаминаз, в тоже время вне стадии обострения гиперферментемия не носит черты выраженной манифестации.
Таким образом, обследование поголовья лактирующих коров показало, что
нарушение функционального состояния печени сопровождается широким спектром
морфо-функциональных отклонений в системе крови, что в свою очередь отражается на деятельности всех без исключения органов и систем.
Дальнейшие исследования были проведены на поголовье стельных коров в
период сухостоя. Комплексом клинических исследований 27 коров было установлено, что 13 (48,15%) из них имеют клинические признаки хронического нарушения обменных процессов. Симптоматика была следующей: тахипноэ и тахикардия
(100%), глухость сердечных тонов (100%), гепатомегалия (100%), гипотония преджелудков (100%), размягчение остистых отростков поясничных позвонков и последних хвостовых позвонков (70%). Ввиду того, что большинство обменных
нарушений протекает на фоне хронического поражения печени, а те в свою очередь
несут в себе черты неспецифичности, для уточнения диагноза от обследуемых животных отбирали кровь с дальнейшим ее исследованием в лаборатории (табл. 1,2).
Изменения картины красной крови у обеих групп животных носили характер, свойственный для гиперхромных анемий, что, по-видимому, объясняется
нарушением обмена цианкобаламина и железа, при этом количество гемоглобина
имеет тенденцию к повышению. Показатель клеточного коэффициента также подтверждает депрессию эритроидного ростка кроветворения. Что касается картины
белой крови, то количество лейкоцитов у больных коров выше, чем у клинически
здоровых. У животных этой группы отмечено увеличение количества эозинофилов,
что является характерным для заболеваний печени, сопровождающихся процесса-
11
ми аллергизации организма. Отмечаемая в обоих случаях моноцитопения, может
объясняться нарушением процессов утилизации цитокинов (в частности ИХФ), и
циркуляцией в крови иммунодепрессантов различной природы, связанных с физиологическим состоянием. Из характерных для болезней печени признаков следует отметить появление так называемых клеток раздражения (двуядерные лимфоциты и клетки Тюрка). Как правило, эти клетки появляются при стимуляции ретикулоэндотелия и зачастую обусловлены развитием хронического мезенхимальновоспалительного процесса в печени.
Несмотря на статистически недостоверную разницу в содержании общего
белка сыворотки крови (табл. 2), у больных коров отмечена тенденция к увеличению этого показателя. Для хронических заболеваний печени (особенно гепатита)
характерна гиперпротеинемия, обусловленная повышением количества гаммаглобулинов (Чернова Г.В., 1988; Кондрахин И.П., 1989), это положение подтверждается и в нашем исследовании. У обеих групп животных отмечен низкий уровень бета-глобулинов, а так как уровень этих белков напрямую связан с обменом
фосфолипидов, холестерина и его эфиров (Постников В.С. и др., 1988), можно
предположить наличие поражения не только мезенхимальных элементов, но и паренхимы, что характерно для хронического жирового гепатоза. Показательным в
данном случае является альбумин-глобулиновое соотношение, характеризующее
состояние синтеза белков печенью, этот показатель очень низок как у первой, так и
у второй группы животных. Это положение подтверждается коллоидной нестойкостью сывороточных белков (проба Вельтмана). Отсутствие повышения активности
трансаминаз в сыворотке крови объясняется тем, что вне стадии обострения гиперферментемия, как правило, отсутствует. Также низкий уровень индикаторных ферментов может быть обусловлен физиологическим состоянием (Пашков А.Н. и др.,
1997; Козинец Г.И., 1998). В этом плане можно отметить физиологическую особенность организма крупного рогатого скота, у которого отмечена низкая активность АлАт в печени, практически не меняющаяся даже при выраженной деструкции паренхимы (Луцкий Д.Я. и др., 1978).
Проведенные исследования подтверждают, что в настоящее время в хозяйствах эксплуатируется в основном больное поголовье. Заболевания печени в основном протекают скрыто, бессимптомно, обостряясь в периоды наибольшего фи-
12
зиологического напряжения. Не привлекая к себе внимания, они прогрессируют,
приводя к нарушению функции различных органов и систем, что обусловливает
потерю продуктивных качеств, высокую смертность молодняка, выбраковку животных.
Для сравнительной характеристики нарушений картины крови при дисфункции печени в различные онтогенетические периоды дальнейшие исследования проведены на поголовье новорожденных телят.
3.2 Клинический и гематологический статус новорожденных телят
Установлено, что от клинически больных коров получены телята с низкой
массой тела при рождении и симптомокомплексом гипотрофии. Из 63 телят 25
(40%) рождены с выраженными нарушениями клинических показателей. Так, масса
тела у гипотрофичного молодняка при рождении составляла 24,3±0,89 кг против
28,6±0,66 кг у клинически здоровых телят (р < 0,02). Такие животные в течение
первых трех суток заболевали диспепсией, причем заболеваемость была стопроцентной. Известно, что синдром антенатальной гипотрофии сопровождается функциональными расстройствами многих органов и систем, в том числе, и печени. Для
уточнения степени патологического состояния проведен анализ крови обследуемых
животных (табл. 2, 3).
Как видно из данных таблицы 3, гематологические показатели гипотрофичного молодняка характеризовались умеренной панцитопенией с тенденцией к гиперхромной анемии. При этом в крови отмечены явления анизо- и пойкилоцитоза
за счет появления атипичных и дегенеративных форм клеток (шизо-, овало- и акантоциты), последние свидетельствуют о низкой осмотической резистентности и,
следовательно об укорочении их жизни. Увеличение ЦП (и СГЭ) можно объяснить
гемоплацентарной трансфузией и, как следствие, циркуляцией свободного гемоглобина. Низкий показатель клеточного коэффициента указывает на депрессию
эритроцитарного ростка кроветворения, которая, в свою очередь, может быть обусловлена обменными нарушениями в организме матерей. Со стороны картины белой крови отмечено снижение основных классов иммунокомпетентных клеток и на
этом фоне обнаруживаются дегенеративные формы лейкоцитов, так называемые
клетки раздражения (полиморфноядерные лимфоциты и клетки Тюрка). Появление
последних, как правило, обусловлено обменными нарушениями и сдвигами
13
кейлонной регуляции, которая в этот период во многом определяется функциональным состоянием печени.
В целом за период новорожденного гематологический статус гипотрофиков
практически не претерпел изменений, а все регистрируемые показатели оставались
на недостаточном для нормального функционирования организма уровне. У клинически здоровых телят, с нормальными функциональными показателями печени
морфологический состав крови изменился следующим образом: возросло количество лейкоцитов, эозинофильных гранулоцитов и моноцитов, что свидетельствует
о высоких адаптивных возможностях здорового молодняка.
В отличие от морфологического состава крови биохимические показатели
гипотрофичных новорожденных в первые сутки жизни резко отличаются от таковых клинически здорового молодняка. Так, наряду с выраженной гипопротеинемией, показатели белкового обмена у таких телят характеризовались низким уровнем
глобулиновых фракций. Учитывая низкий уровень α-глобулинов, можно предположить снижение общего количества α-1-глобулинов. Известно, что до 90% этой
фракции составляет α-1-антитрипсин, являющийся основным ингибитором эластазы лейкоцитов и других катепсинов (Хендерсон Дж.М., 1997; Шерлок Ш. и др.,
1999), и при его недостаточности в раннем постнатальном периоде развиваются заболевания печени, в последующем прогрессирующие до цирроза. Следовательно, у
гипотрофиков можно предположить наличие структурных нарушений в печени.
Низкий уровень γ-глобулиновой фракции объясняется недостаточной продукцией
собственных белков данной группы и низким их поступлением с молозивом, что
обусловлено низким качеством последнего и нарушением системы его выпойки.
Гиперальбуминемия в данном случае является компенсаторным механизмом.
Прежде всего, альбумины – это резервные белки, а при недостаточном поступлении белка с кормом или при гипопротеинемии другого генеза, печень некоторое
время может компенсировать эту недостаточность. Количество альбуминов возрастает при гипергемоглобинемии, что также носит компенсаторный характер. При
избыточном поступлении гемоглобина в кровяное русло гаптоглобин становится
неспособным к его связыванию, а так как альбумины ответственны за транспорт
веществ плохо растворимых в воде, они компенсируют нарушенный механизм, при
этом в крови появляются патологические пигменты (метгемальбумин) (Кон Р.М.,
14
1986). Подобный механизм развития гиперальбуминемии встречается и при желтухах.
15
Таблица 3 - Гематологические показатели крови новорожденных телят
2-3 сут
Показатели
ГипотроНормоГипотрор<
фики
трофики
фики
Эритроциты, 10¹²/л
4,81± 0,32
0,01
5,88 ± 0,25
4,91± 0,41
Гемоглобин, г/л
131,5 ± 6,94
137,03 ± 4,92 129,31 ± 5,44
Цветной показатель
1,79 ± 0,16
1,5 ± 0,06
1,7 ± 0,1
СГЭ, пг
29,03 ± 2,57
24,12 ± 1,03
27,72 ± 1,76
СОЭ, мм/час
0,72 ± 0,08
0,82 ± 0,07
0,58 ± 0,05
Лейкоциты, 109/л
6,9 ± 0,45
7,47 ± 0,39
7,11 ± 0,56
Клеточный коэффициент
728,06±75,12
824 ± 36,26 730,23 ± 103,52
Лейкоцитарная формула:
Эозинофилы, 109/л
0,03 ± 0,01
0,04 ± 0,01
0,04 ± 0,01
9
Юные нейтрофилы, 10 /л
0,04 ± 0,02
0,03 ± 0,01
0,05 ± 0,02
Палочкоядерные нейтрофилы, 109/л
0,5±0,05
0,55±0,07
0,49±0,08
9
Сегментоядерные нейтрофилы, 10 /л 2,95±0,26
2,88±0,24
2,71±0,3
Лимфоциты, 109/л
3,2±0,31
3,83±0,35
3,62±0,31
Моноциты, 109/л
0,09±0,02
0,09±0,02
0,09±0,02
9
Двуядерные лимфоциты, 10 /л
0,05±0,01
0,05±0,02
0,07±0,02
Трехядерные лимфоциты, 109/л
0,02±0,01
0,05
0
0,01±0,01
9
Клетки Тюрка, 10 /л
0,03±0,01
0,002
0
0,02±0,01
Таблица 4 - Биохимические показатели крови новорожденных телят
2-3 сут
Показатели
ГипотроНормоГипотрор<
фики
трофики
фики
Общий белок, г/л
51,01± 1,36 0,001 59,31 ± 1,3
53,16± 1,42
Альбумины, г/л
30,27 ± 0,79 0,001 26,32 ± 0,72
33,76 ± 0,76
Альфа-глобулины, г/л
5,96 ± 0,76
0,01
8,6 ±0,68
6,49 ± 0,79
Бета-глобулины, г/л
6,93 ± 1,02
7,12 ± 0,48
5,44 ± 0,86
Гамма-глобулины, г/л
7,65 ±1,59 0,001 17,02 ± 1,25
7,65 ± 1,42
Альбумины : глобулины
1,78 ± 0,18 0,001 0,87 ±0,05
1,97 ± 0,18
Глобулиновый индекс
3,69 ± 0,97
0,01
1,1 ± 0,1
2,02 ± 0,31
Проба Вельтмана,мл 0,5% р-ра CaCl2 0,72 ± 0,03 0,001 0,57 ± 0,03
0,65 ± 0,04
АлАТ, мкмоль/мл/час
0,21 ± 0,16
0,15 ±0,07
0,16 ± 0,1
АсАТ, мкмоль/мл/час
0,41 ± 0,08
0,51 ± 0,08
0,3 ± 0,09
6-8 сут
10-12 сут
0,02
0,05
0,05
0,05
-
Нормотрофики
6,05 ± 0,24
136,56 ± 6,65
1,44 ± 0,08
23,26 ± 1,3
0,74 ± 0,06
8,09 ± 0,55
845,63 ± 58,23
Гипотрофики
5,01± 0,51
126,73 ± 6,14
1,64 ± 0,12
26,64 ± 2
0,77 ± 0,11
7,17 ± 0,47
671,6 ± 55,75
0,01
0,05
0,05
0,01
-
Нормотрофики
6,57 ± 0,34
142,94 ± 8,77
1,37 ± 0,07
21,87 ± 1,08
0,97 ± 0,12
9,07 ± 0,55
793,06 ± 59,16
0,05
0,04 ± 0,01
0,02 ± 0,01
0,53±0,06
2,98±0,28
4,3±0,36
0,11±0,03
0,03±0,01
0
0
0,03 ± 0,01
0,01 ± 0,0
0,58±0,06
3,06±0,29
3,9±0,28
0,06±0,02
0,02±0,01
0,02±0,01
0,02±0,01
0,01
0,001
0,05
0,05
0,09 ± 0,02
0,02 ± 0,01
0,71±0,11
3,39±0,37
4,57±0,28
0,22±0,04
0,06±0,02
0
0
Нормотрофики
60,51 ± 0,89
30,53 ± 0,93
8,93 ±0,53
5,78 ± 0,51
15,5 ± 1,04
1,08 ±0,06
1,11 ± 0,13
0,51 ± 0,03
0,16 ±0,05
0,33 ± 0,09
Гипотрофики
51,75± 0,97
34,46 ± 0,97
6,58 ± 0,51
4,72 ± 0,72
5,91 ± 0,71
2,15 ± 0,18
2,37 ± 0,3
0,58 ± 0,03
0,07 ± 0,03
0,28 ± 0,08
р<
6-8 сут
р<
0,001
0,01
0,01
0,001
0,001
0,01
0,01
-
р<
10-12 сут
р<
0,001
0,02
0,01
0,001
0,001
0,001
0,001
-
Нормотрофики
60,88 ± 1,07
30,87 ± 1,01
9,78 ±1,32
4,41 ± 0,44
15,97 ± 1,3
1,09 ±0,08
1,13 ± 0,22
0,46 ± 0,02
0,16 ±0,06
0,37 ± 0,08
16
Укорочение коагуляционной пробы Вельтмана является характерным для состояний, сопровождающихся гипопротеинемией, и особенно для гипоглобулинемии.
Невысокие показатели трансаминазной активности можно отнести к характерным
для крупного рогатого скота особенностям и также отчасти объяснить гипопротеинемией. 50% белка идет на синтез ферментов, поэтому любая белковая патология –
всегда ферментопатия (Шулутко Б.И., 1995), к тому же активность трансаминаз во
многом зависит от возраста и состояния обмена витаминов, в частности группы В.
К 12-м суткам общая закономерность различий между группами сохранилась, при этом внутригрупповые различия по сравнению с показателями первого
возрастного периода оказались следующими: у гипотрофиков возросло количество
альбуминов и улучшились показатели пробы Вельтмана; у нормотрофиков возросло количество альбуминов, понизилось количество β- глобулинов (р < 0,001), произошло удлинение коагуляционной ленты Вельтмана, оставаясь при этом в пределах нормы.
Проведенные нами исследования демонстрируют, что нарушение функционального состояния печени у новорожденных телят сопровождается широким
спектром гомеостатических отклонений, которые находят свое отражение в картине крови. При этом со стороны системы крови отмечен ряд морфологических и
биохимических нарушений, свидетельствующих о тесной функциональной связи
между системой гепатона и гемопоэзом. В тоже время, несмотря на выявленные
отклонения со стороны функционального состояния печени, полученные данные не
позволяют судить о нозологической принадлежности заболевания.
Считается, что печень обладает значительным запасом резервной емкости,
поэтому развивающийся в ней патологический процесс длительное время компенсируется и поэтому клиническое (в том числе и биохимическое) проявление характеризуется стертостью и неспецифичностью. В таких условиях для верификации
диагноза используют специальные инструментальные методы исследования, позволяющие оценить не только функциональную потенцию органа, но и его структуру. К числу подобных методов исследования относится биопсия.
3.3. Морфологическая характеристика печени новорожденных телят
Пункционная биопсия печени достаточно широко используется как в медицинской, так и ветеринарной практике. Но при анализе доступной литературы нами
не было обнаружено описания способа проведения подобной процедуры у новорожденного молодняка крупного рогатого скота. В связи с этим нами было сконструировано устройство, полностью отвечающее поставленным задачам. Проведе-
17
ние процедуры с его использованием не оказало отрицательного эффекта на здоровье новорожденных.
Было установлено, что у больных телят отмечались нарушения архитектоники ткани печени в виде: несформированности печеночных балок, резкого снижения
(или исчезновения) количества двуядерных гепатоцитов, наличия полей деструктивно измененных клеток с явлениями кариолизиса и макрофагальной реакцией.
Также отмечены: ядерный полиморфизм, наличие гиперхромных ядер в гепатоцитах, очаги микро- и макронекроза паренхимы. В синусоидальных пространствах
встречались единичные участки гемопоэтически активной ткани. У одного из телят
обнаружены изменения, характерные для начальной стадии фибропластического
процесса.
Несмотря на ранний постнатальный период, у телят отмечается не только
функциональная неполноценность печени, но и серьезные структурные нарушения.
Особенно такие изменения выражены у гипотрофичного молодняка, что сопровождалось явлениями не только жировой дегенерации, но зачастую и выраженной сосудистой реакцией, а также тенденцией к соединительнотканному перерождению.
Известно, что структурная целостность паренхимы печени является своего рода
регулятором синтеза некоторых цитокинов, оказывающих влияние на систему
крови. Поэтому полученные ранее результаты полностью сочетаются с данными
гистологического обследования.
Обращает на себя внимание, что изменения архитектоники печеночной ткани характеризуются разнообразием альтеративных процессов, которые зачастую
носят смешанный характер. Так, при микроскопии в одном поле зрения регистрировались и крупнокапельная жировая дистрофия, характерная для гепатоза, и выраженная
сосудистая
реакция,
являющаяся
спутником
мезенхимально-
воспалительного синдрома, то есть протекающий процесс имеет форму гепатозогепатита. В рамках общепринятой ветеринарной нозологии такие состояния трудно
классифицировать, поэтому нам представляется целесообразным использовать
термин «недифференцируемая гепатопатия новорожденных». В таких условиях
даже при незначительных нарушениях нейро-гуморальной регуляции весьма вероятна эволюция патологического процесса в фибропластический и даже цирротический, которые сами зачастую начинаются как компенсаторные.
Таким образом, проведенные нами исследования демонстрируют высокую
диагностическую информативность метода пункционной биопсии печени при обследовании новорожденного молодняка. Учитывая, дешевизну изготовления
18
устройства и простоту проведения процедуры, можно рекомендовать данный метод
к широкому использованию в условиях производства и для проведения научных
изысканий.
Проанализировав полученный материал и данные литературы, нами был разработан алгоритм, отражающий основные пути альтерации и возможной компенсации нарушений системы крови при гепатопатиях. В общих чертах он сводится к
следующему. Воздействие патогенных факторов вызывает повреждение печени и
нарушению обменного статуса. Это приводит к появлению в крови нетипичных
метаболитов, которые выступают в роли эндотоксикантов и угнетающие действуют
на все ткани и органы, прежде всего паренхиматозные, в том числе гемопоэза. Далее развиваются явления, обусловленные дефицитом пластического материала или
неспособностью его утилизировать вследствие ферментопатий. Нарушение элементов красной и белой крови усугубляет гомеостатические отклонения, что приводит к порочному кругу и срыву адаптации. При этом механизмы компенсации и
репарации, испытывая недостаток гуморальных стимуляторов (цитокинов и других
биологически активных веществ), становятся несостоятельными, процесс принимает не только функционально, но и морфологически регистрируемую форму. Предложенный нами алгоритм дополняет имеющиеся сведения по патогенезу гематологических нарушений и может быть использован для преподавания соответствующих разделов предклинических и клинических дисциплин.
ВЫВОДЫ
1.
В результате обследования 52 лактирующих и 27 сухостойных коров, а также
63 новорожденных телят установлено, что дисфункция печени в различные периоды онтогенеза сопровождается неспецифичностью клинического проявления, изменениями морфологического и биохимического состава крови с появлением в ней
атипичных и дегенеративных форм клеток, диспротеинемической коллоидной нестойкостью белков плазмы. При неонатальной гепатопатии гиперальбуминемия
носит компенсаторный характер, а для оценки структурных нарушений печени целесообразно использовать способ пункционной биопсии.
2.
Клинический статус больных коров характеризовался рядом отклонений: та-
хипноэ, тахикардия, гипотония преджелудков, глухость сердечных тонов, увеличение перкуссионных границ печени, деминерализация последних хвостовых позвонков.
3.
При проведении общего клинического анализа крови больных лактирующих
коров установлены: эритропения (р<0,001) с явлениями гиперхромной анемии и
19
появлением в крови полихроматофилов и других форм дегенеративных клеток;
снижение клеточного коэффициента (р<0,001) и увеличение цветного показателя
(р<0,05). Со стороны элементов белой крови также отмечено: увеличение количества лейкоцитов в целом (р<0,01) и отдельных их популяций, в частности сегментоядерных нейтрофилов (р<0,05) и эозинофильных гранулоцитов (р<0,05).
4.
У лактирующих коров установлены: гипопротеинемия (р<0,001), при относи-
тельных гипоальбумин- (р<0,001) и гипоальфа-глобулинемии (р<0,001); в тоже
время отмечены выраженная гипербета- (р<0,01) и умеренная гипергаммаглобулинемия (р<0,05) со снижением коллоидной стойкости белков, проба Вельтмана (р<0,001). Эти изменения сопровождались гиперферментемией за счет повышения активности сывороточных трансаминаз (АлАТ, АсАТ) – р<0,001 и р<0,01
соответственно.
5.
При проведении общего клинического анализа крови больных сухостойных
коров установлена тенденция к эритропении, лейкоцитоз (р<0,001), эозинофилия
(р<0,02). Так же в мазках встречались единичные формы атипичных клеток.
6.
Нарушения белкового обмена у сухостойных коров сопровождались тенден-
цией к гиперпротеинемии с гипоальбуминемией (р<0,001), гипо-β-глобулинемией
(до 6,9 ± 0,75%) и гипер-γ-глобулинемией (р<0,001), при этом альбуминглобулиновое соотношение было низким (р<0,001), это сопровождалось коллоидной нестойкостью плазменных белков.
7.
Телята, родившиеся от коров с нарушенным обменом веществ, имели низкую
массу тела (24,3 ± 0,89 кг), что дополнялось симптомокомплексом гипотрофии.
8.
Гематологический статус больных телят имел следующие черты: умеренная
панцитопения (эритроциты – 4,81±0,32 х 1012/л, лейкоциты – 6,9±0,45 х 109/л) с
тенденцией к гиперхромной анемии (ЦП – 1,79±0,16, клеточный коэффициент –
728,06±75,12), снижение количества иммунокомпетентных клеток и появление дегенеративных форм лейкоцитов (трехядерные лимфоциты, клетки Тюрка). В целом
за период новорожденного гематологический статус гипотрофиков практически не
претерпел изменений, а все регистрируемые показатели оставались на недостаточном для нормального функционирования организма уровне.
9.
У телят гипотрофиков отмечались нарушения обмена веществ, характерные
для функциональной недостаточности печени: гипопротеинемия (р<0,001) на фоне
выраженной гипоглобулинемии, при низком соотношении А/Г (р<0,001) и глобулиновом индексе (р<0,01). Лента Вельтмана укорочена (р<0,001).
20
10. Отмечаемая у гипотрофиков гиперальбуминемия, имела тенденцию к увеличению с возрастом (р<0,001).
11. Нарушениям в системе крови у телят гипотрофиков сопутствовало повреждение архитектоники печеночной ткани. У телят гипотрофиков наблюдались несформированность балочного строения, единичные и множественные очаги микрои макронекрозов, очаги гемопоэтически активной субстанции в синусоидальном
пространстве, соответствующие функциональной неполноценности и фетализации
органа.
12. Неонатальная гепатопатия приносит экономический ущерб в размере 540,76
руб. на одно животное.
13. Применение метода пункционной биопсии с использованием разработанного
устройства позволяет объективизировать результаты клинического и лабораторного исследований при неонатальной гепатопатии телят.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Для профилактики врожденной патологии печени у молодняка проводить
своевременную диагностику функциональных расстройств печени у взрослого
крупного рогатого скота.
2. При диспансерном обследовании поголовья с целью ранней диагностики гепатопатий можно ограничится небольшим набором рутинных лабораторных тестов,
среди которых считать обязательными: общий (клинический) анализ крови с расчетом клеточного коэффициента и цветного показателя, определение общего белка
сыворотки крови и пробу коллоидной устойчивости по Вельтману.
3. Интерпретация лабораторных исследований должна проводится с учетом особенностей адаптивно-компенсаторных реакций в раннем постнатальном периоде.
4. В качестве простого в исполнении и безопасного метода определения степени
структурных изменений в печени новорожденных считать целесообразным использование пункционной биопсии печени с применением разработанного устройства.
5. Полученные в процессе исследований результаты могут быть использованы в
учебном процессе при изучении соответствующих разделов клинической диагностики и внутренних болезней животных, а также нормальной и патологической физиологии и патоморфологии.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Роменский Р.В. Устройство для пункционной биопсии / Р.В. Роменский, Н.В.
Роменская, Р.Ф. Капустин // Изобретения. – 2005. - № 34(3). – С.477.
2. Роменский Р.В. Функциональное состояние печени и неспецифическая резистентность организма новорожденных телят / Р.В. Роменский, Н.В. Роменская // Проблемы с.-х. произ-ва на совр. этапе и пути их решения: мат-лы V Междунар. научнопроизводств. конф. – Белгород, 2001. – С. 56 - 57.
3. Роменский Р.В. Биопсия печени у новорожденных телят / Р.В. Роменский, Н.В.
Роменская // Проблемы с.-х. произ-ва на совр. этапе и пути их решения: мат-лы V Междунар. научно-производств. конф. – Белгород, 2001. – С. 57 - 58.
21
4. Роменский Р.В. Влияние функционального состояния печени на возникновение
острых желудочно-кишечных расстройств у новорожденных телят / Р.В. Роменский, Н.В.
Роменская // Белгород, 2002. – С. 141
5. Роменская
Н.В.
Изменение
гематологических
показателей
при
гепатопатологии у крупного рогатого скота / Н.В. Роменская, Р.В. Роменский // Проблемы
с.-х. произ-ва на совр. этапе и пути их решения: мат-лы VII Междунар. научнопроизводств. конф. – Белгород, 2003. – С. 123.
6. Роменский Р.В. Методы ультразвукового сканирования и пункционной биопсии
в диагностике структурных повреждений печени у новорожденных телят / Р.В.
Роменский, Н.В. Роменская // Бюллетень научных работ ФГОУ ВПО «Белгородская
государственная сельскохозяйственная академия», 2003. - Вып. I. – С. 55 – 61
7. Роменский Р.В. Влияние функциональных расстройств печени у крупного
рогатого скота на возникновение общей обменной патологии / Р.В. Роменский, А.В.
Хмыров, Н.В. Роменская // Проблемы с.-х. произ-ва на совр. этапе и пути их решения:
мат-лы VIII Междунар. научно-производств. конф. – Белгород, 2004. – С. 66-67.
8. Роменский Р.В. Динамика гематологических показателей у гипотрофичного
молодняка крупного рогатого скота в раннем постнатальном периоде / Р.В. Роменский,
Н.В. Роменская, Н.И. Сотник // Проблемы с.-х. произ-ва на совр. этапе и пути их
решения: мат-лы VIII Междунар. научно-производств. конф. – Белгород, 2004. – С. 67-68.
9. Роменский Р.В. К вопросу об этиологии вторичной остеодистрофии крупного
рогатого скота / Р.В. Роменский, Н.В. Роменская // Проблемы с.-х. произ-ва на совр. этапе
и пути их решения: мат-лы VIII Междунар. научно-производств. конф. – Белгород, 2004. –
С. 68-69.
10. Роменский Р.В. Гепатопатии новорожденных телят как фактор риска в
возникновении вторичных иммунодепрессивных состояний / Р.В. Роменский, П.И.
Бреславец, А.В. Хмыров, Н.В. Роменская // «Практик», 2004. - № 9-10. – С. 30-35.
11. Роменский Р.В. Нарушения системы крови при заболеваниях печени у крупного
рогатого скота / Р.В. Роменский, П.И. Бреславец, Н.В. Роменская // Материалы IV
межрегиональной научно-практической конференции по проблемам ветеринарной
медицины: Сб. науч. тр. – Омск, 2005. – С. 198-203.
12. Роменский Р.В. Клиническая интерпретация лабораторных тестов при
заболеваниях печени у новорожденных телят / Р.В. Роменский, А.В. Хмыров, Н.В.
Роменская // Актуальные проблемы патологии животных // Материалы международного
съезда ветеринарных терапевтов, диагностов – Барнаул, 2005. – С. 155-156
13. Роменский Р.В. Нарушения системы крови при общей обменной патологии у
крупного рогатого скота / Р.В. Роменский, Н.В. Роменская, Р.В. Пономаренко //
Бюллетень
научных
работ
ФГОУ
ВПО
«Белгородская
государственная
сельскохозяйственная академия», 2006. - Вып. V. – С. 62 – 67.
14. Роменская Н.В. Морфологический мониторинг неонатальных особенностей
печени парнокопытных / Н.В. Роменская //Актуальные вопросы эволюционной,
возрастной и экологической морфологии: материалы Всероссийской научной
конференции с международным участием, 2006. – С.146.
Патент на полезную модель «Устройство для пункционной биопсии» №49705
от 10.12.2005
_____________________________________________________________________
Формат 60х84, 1/16. Усл.печ.л. 1,0
Заказ № ,Тираж 100 экз.
Типография БВЦ