Биотехнологии размножения и искусственное осеменение

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени ШАКАРИМА г. СЕМЕЙ
Документ СМК 3 уровня
УМКД
Учебно-методические материалы
по дисциплине
«Биотехнологии размножения
и искусственное осеменение»
УМКД
Редакция №1 от УМКД 042-1.18.24.29/03-2013
18.09.2013
УЧЕБНО - МЕТОДИЧЕСКИЙ
КОМПЛЕКС
ДИСЦИПЛИНЫ
«Биотехнологии размножения и искусственное осеменение»
для специальности
5В120200 – «Ветеринарная санитария»
УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ
Семей
2013
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Содержание
1
2
3
4
5
Глоссарий
Лекции
Практические и лабораторные занятия
Курсовая работа (проект)
Самостоятельная работа студента
Страница 2 из 40
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 3 из 40
2 ЛЕКЦИИ
Введение
1. Значение изучение дисциплины
2.Роль дициплины в подготовке ветеринарных специалистов
3.Краткая характеристика истории развития искуствегнного осеменения
лошадей
4.Биотехнологические методы, применяемые в коневодстве
1. Значение изучение дисциплины
Интенсификация воспроизводства животных и получение от них
продукции высшего качества — основные задачи зоотехнической и
ветеринарной науки. Важная роль в решении этих вопросов принадлежит
«Организация биотехнологии размножения лошадей».
Одно из главных условий дальнейшего развития коневодства, улучшения
качества и снижение себестоимости продукции - полноценное кормление.
Организация биотехнологии размножения лошадей — раздел,
рассматривающий норму и патологию оплодотворения, беременности, родов и
послеродового периода кобыл. Организация биотехнология размножения
лошадей
основана на учении о половых циклах, оплодотворении и
беременности, использовании естественного и искусственного осеменения
кобыл, пересадки зародышей.
2. Роль дициплины в подготовке ветеринарных специалистов
Основная роль в изучении дисциплины «Организация биотехнология
размножения лошадей» является приобретение глубоких теоретических знаний
и практических навыков биотехнике размножения лошадей.
Изучение курса позволит специалисту разрабатывать и осуществлять
необходимые средства, способы и мероприятия по выполнению
профилактической работы, разрабатывать новые биотехнологические способы
размножения животных.
3.Краткая характеристика истории развития искуствегнного осеменения
лошадей
Возникновение простейших приемов ветеринарного родовспоможения
относится к глубокой древности. В первобытном родовом обществе, конечно,
не было теоретически обоснованных способов акушерской помощи животным.
Но у скотоводов складывался жизненный опыт в этой области. «Акушерский»
опыт постепенно стал концентрироваться у определенных людей, которые
передавали свои знания из поколения в поколение. Так постепенно создавалась
каста знахарей, занимающихся лечением больных животных.
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 4 из 40
В период развития рабовладельческого строя и в период феодализма для
обслуживания конского состава армий, а также скота крупных
животноводческих хозяйств возникла потребность в подготовке ветеринарных
специалистов. В первых ветеринарных школах учебными планами
предусматривалось изучение техники родовспоможения как особого раздела
ветеринарной хирургии. Однако практическая деятельность ветеринарных
специалистов в области акушерства имела ограниченное значение. Помощь
животным при родах по-прежнему в основном находилась в руках конюхов,
скотников и знахарей.
В арабской летописи отмечается, что в 286 г. бедуин из Северной Африки,
не имея возможности получить приплод от жеребца, принадлежащего его
сопернику, ввел во влагалище одной из кобыл, пасшихся вместе с этим
жеребцом, пучок конских волос, извлек его после коитуса, быстро перевез и
ввел во влагалище своей кобылы и таким образом искусственно осеменил ее.
В период развития капитализма ветеринарное акушерство начало
оформляться в самостоятельную научно-практическую дисциплину; появились
научные работы и учебные пособия по ветеринарному акушеству, а в учебных
заведениях выделились специальные курсы и даже кафедры.
В России эти изменения произошли в конце прошлого и начале текущего
столетия. На протяжении многих лет наши ветеринарные специалисты изучали
акушерство по руководствам Сен-Сира и Виоле, Франка и Гермса.
«Руководство к ветеринарному акушерству» (F. Saiat-Cyr, Th. Violet, Traite
d'obstetrique veterinaire, P., 1875, рус. пер., Харьков, 1891); Наличие этих
хороших для того времени учебников в оригинале и в переводах в сочетании с
широким рекламированием всего иностранного при недооценке и даже
игнорировании достижений отечественных специалистов препятствовало
обобщению и популяризации научно-практических достижений отечественных
ветеринарных специалистов, работавших в области акушерства.
4.Биотехнологические методы, применяемые в коневодстве
В настоящее время ветеринарное акушерство, гинекология и искусственное
осеменение оформились в важную отрасль клинической ветеринарии,
обогащенную теорией и комплексом диагностических и терапевтических
приемов, широко применяемых в животноводческой практике. Ветеринарное
акушерство относится к дисциплинам, завершающим ветеринарное и
зоотехническое образование. Эта отрасль знаний строится на базе анатомии,
гистологии, эмбриологии, биохимии, нормальной и патологической
физиологии, микробиологии, общей и оперативной хирургии и на базе других
общетеоретических и практических дисциплин, на основе его мы развиваем
«Организацию биотехнологии размножения лошадей»
Профессор А. Ю. Тарасевич (1873-1940) разработал новый принцип
клинической диагностики беременности лошадей, рекомендовал ряд способов
лечения при гинекологических заболеваниях (грязелечение, пункции кист
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 5 из 40
яичников, применение фарадического тока, диатермии и др.). Он научно
обосновал целесообразность использования оперированных жеребцовпробников для выявления половой охоты, стимуляции половой функции;
впервые предложил проводить осеменение кобыл в сочетании с ректальным
контролем времени овуляции. Это предложение теперь широко внедрено в
практику благодаря работам X. И. Животкова, В. К. Кедрова, П. И. Шаталова и
других отечественных специалистов. Свой богатый клинический опыт А. Ю.
Тарасевич обобщил в изданной в 1936 г. монографии «Бесплодие
сельскохозяйственных животных».
Профессор Н. А. Флегматов (1903 -1986) разработал метод диагностики
беременности ослиц, предложил эффективный метод использования плодных
вод при задержании последа и для профилактики субинволюции матки.
В 1899г. И. И. Иванов начал изучать искусственное осеменение лошадей и
коров и, получив положительные результаты, высказал идею максимально
использовать сперму выдающихся производителей для быстрого улучшения
породных качеств животных и их продуктивности. Он доказал, что эякулят
можно разделить и осеменить им 12 кобыл и более; разработал систему учета
эффективности искусственного осеменения, принципы организации этого
метода на производстве, изобрел инструменты для получения спермы и
осеменения. Некоторые из этих инструментов (корнцанг Иванова, мягкий катетер) применяют и в настоящее время. Его наблюдения и специальные
эксперименты по сохранению спермы вне организма при пониженной
температуре явились теоретической и практической основой современных
методов сохранения и транспортировки спермы. Вначале он проводил опыты
на свои скудные средства, затем добился организации ряда лабораторий в
конных заводах. С 1900 по 1904г. И. И. Иванов проводил опыты по
искусственному осеменению в пяти конных заводах, изучая оптимальное время
осеменения кобыл, влияние рациона жеребцов на состав спермы, разрабатывал
рецепты для разбавления спермы. Им были созданы физиологический отдел в
ветеринарной лаборатории Министерства внутренних дел в Петербурге, зоотехническая станция в Аскании-Нова, несколько земских пунктов искусственного
осеменения. На курсах усовершенствования при ветеринарной лаборатории
Министерства внутренних дел с 1908 г. читали лекции и вели практические
занятия по искусственному осеменению, готовили инструкторов и заведующих
пунктами искусственного осеменения кобыл. В 1913 г. искусственное
осеменение лошадей применялось уже в более чем 30 губерниях.
После Октябрьской революции И. И. Иванов широко развернул научноисследовательскую работу по искусственному осеменению скота и птиц;
организовал ряд лабораторий: центральную станцию по размножению
животных при Наркомземе, лабораторию физиологии размножения, решением
президиума ВАСХНИЛ реорганизованную в 1931 г. в лабораторию искусственного осеменения животных Всесоюзного научно-исследовательского
института животноводства.
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 6 из 40
И. И. Иванов заложил теоретические основы и принципы почти всех
существующих приемов искусственного осеменения животных. Современные
методы получения, разбавления, сохранения спермы, по существу, являются
усовершенствованием и развитием тех методов, которые впервые применил
И.И.Иванов. В процессе совершенствования метода искусственного осеменения
было разработано много технических приемов. Изобретение в 1931г.
Н.В.Комиссаровым, В.И.Липатовым и И. И. Родиным искусственной вагины
явилось ценнейшим усовершенствованием метода искусственного осеменения
сельскохозяйственных животных всех видов. Методы получения спермы при
помощи искусственной вагины известны в мировой литературе как русские
методы. Дальнейшие исследования отечественных ученых позволили решить
ряд новых проблем: оценка и разбавление спермы, сохранение и
транспортировка ее. Разработаны способы замораживания спермы. А. Д.
Бернштейн и В. В. Петропавловский (1936) впервые в мире доказали
необходимость применения глицерина при замораживании спермы.
2. Воспpоизводство лошадей.
Расширенное воспроизводство и улучшение качества лошадей
Планирование типа осеменения(естественное, искусственное)
Использование жеребцов
Расширенное воспроизводство и улучшение качества лошадей - одна
из основных задач коневодства. Современные достижения в области
искусственного осеменения с широким использованием высокоценных
жеребцов-производителей
позволяют
значительно
ускорить процесс
качественного преобразования конского поголовья. При этом повысить
эффективность
воспроизводства
можно
путем
совершенствования
организационных форм естественной случки.
Организация работ по воспроизводству. При конюшенном и конюшеннопастбищном содержании лошадей обычно применяют как естественную
случку, так и искусственное осеменение. Оба метода используют в настоящее
время в конных заводах и на племфермах. В хозяйствах, где применяют
культурно-табунный и табунный способ содержания лошадей, основным
методом осеменения является естественная случка.
Планирование типа осеменения (естественное, искусственное) должно
проводиться с учетом наличия подготовленных кадров, материальнотехнической базы, численности кобыл, а также способа их содержания. В
хозяйствах при небольшой численности кобыл может быть использован такой
вариант как создание сезонных случных табунов, а также пунктов
искусственного
осеменения,
как
внутрихозяйственных,
так
и
межхозяйственных.
Использование жеребцов. Успех работы по воспроизводству во многом
определяется отбором жеребцов-производителей. Требования отбора должны
быть дифференцированы в зависимости от уровня племенной работы. В конных
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 7 из 40
заводах как для искусственного осеменения, так и для случки отбор жеребцов
проводят согласно долгосрочным селекционным программам. На племфермах
колхозов и совхозов отбирают жеребцов класса элита. Использование жеребцов
на товарных фермах должно соответствовать плану породного районирования.
Всех взрослых жеребцов и жеребчиков старше двух лет, не отобранных для
воспроизводства, необходимо кастрировать.
В хозяйствах, где содержат одного жеребца-производителя, необходимо
проводить плановую замену жеребца через четыре года его использования в
целях
предупреждения
инбридинга.
Плановая
ротация
жеребцов
осуществляется под контролем сельскохозяйственных органов, которые
занимаются организацией племенного дела в коневодстве.
В табунном коневодстве при отборе жеребца-производителя обращают
внимание на тип, происхождение, промеры и экстерьер, оценивают
приспособительные качества и косячные инстинкты.
3. Воспpоизводство лошадей.
Сроки проведения случной кампании.
Подготовка к случной кампании.
Режим использования жеребцов
Сроки проведения случной кампании. Сроки начала и окончания
случного сезона зависят от природно-климатических условий и принятой в
хозяйстве технологии содержания лошадей. Особое внимание обращают на
обеспеченность кормами и коневодческими постройками.
В племенном коневодстве при конюшенном и конюшенно-пастбищном
содержании оптимальным для искусственного осеменения и случки считают
период с 1 февраля по 15 июня, а при культурно-табунном, в зависимости от
наличия конюшен для ранней выжеребки кобыл, - с 1 апреля по 15 июня или с 1
мая по 1 июля.
При табунном способе содержания лошадей выпуск косяков следует
проводить, начиная со второй половины апреля, и изымать жеребцов из
косяков, формируя табуны, не позднее 1 августа. На севере Сибири и в Якутии,
на товарных фермах Казахстана и в некоторых других зонах практикуют
круглогодовое содержание жеребцов в косяках.
В рабочее пользовательном коневодстве с целью эффективного
использования кобыл на работах в весенне-летний период желательно начинать
случную кампанию с 1 марта и заканчивать 15 июля.
Подготовка к случной кампании. Перед началом случной кампании не
менее чем за месяц необходимо провести ветеринарно-зоотехнический осмотр
всего производящего состава. Это позволит выделить для лечения больных
животных.
При стойловом содержании кормление жеребцов и кобыл должно
осуществляться в соответствии с детализированными "Нормами и рационами
кормления сельскохозяйственных животных"(М.: Агропромиздат, 1985).
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 8 из 40
Особое внимание следует обращать на проведение систематического моциона
жеребцов и кобыл.
Физиология воспроизводства лошади довольна сложна. Половой зрелости
кобылы достигают к 1 -1,5 годам, жеребцы немного позже, но случать кобыл
можно, как правило, только в возрасте 3 лет, а жеребцов использовать в случке
только с 4–х лет. Приведем некоторые физиологические показатели половой
системы жеребцов. Так, количество выделяемой спермы составляет 50–200 мл,
цвет мутно-белый, консистенция водянистая. Количество спермиев в 1 мм3 : от
50 до 100 тыс, показатель рН – 6,7 – 7,8; выживаемость спермиев в матке 24 –
48 ч. Половой цикл кобылы составляет в среднем 22 дня, из них 5-7 дней
продолжается половая охота и 15-17 дней стадия полового покоя. Цикличность
кобыл бывает более выраженной в конце зимы, весной и летом. Осенью она
затихает или прекращается вовсе. Появление охоты у кобыл чаще всего бывает
незаметным, в связи с чем для ее определения приходится использовать
специальных жеребцов-пробников.
Начало охоты у кобылы ещё не
свидетельствует о ее готовности к оплодотворенному осеменению. Обычно
овуляция зародышевого пузырька яичнике и выход из него яйцеклетки
происходят в конце охоты, примерно за сутки до её окончания. В коневодстве
возможно и применение искусственного осеменения кобыл свежей или глубоко
замороженной спермой. Такие способы позволяют шире использовать особо
ценных жеребцов-производителей и получат приплод от наиболее желательных
сочетаний.
В коневодстве нередки случаи отсутствия у кобыл охоты или полноценных
половых циклов, заканчивающихся овуляцией. Для стимуляции половой охоты
и полноценного цикла применяются биологические методы и специальное
медикаментозное лечение.
При косячном методе случки жеребец выпускается в сформированный для
него косяк 20-25 кобыл) и весь сезон ходит с ним на отведенном участке
пастбища. Настоящий косячный жеребец сам управляет всей жизнью косяка,
водит его на водопой и соль, укрывает от ветров в затишные места, охраняет
его от хищников и других жеребцов.
4. Физиологические основы и техника получения спермы
Способы получения спермы
Условия для нормальной эякуляции в искусственной вагине при
получении спермы
Особенности и внешние признаки эякуляции у лошадей
1. Способы получения спермы
При получении спермы нужно добиваться выполнения следующих
условии: 1) получать без потерь весь эякулят; 2) не загрязнять сперму; 3) не
допускать заражения производителя: 4) не травмировать половые органы
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 9 из 40
производителя и не причинять ему болевых ощущений. Способ получения
спермы должен быть простым и общедоступным.
В процессе развития искусственного осеменения были предложены
различные способы получения, спермы, которые можно подразделить на
влагалищные (собственно влагалищный и губочный),
уретральные
(маструбации, фистульный, спермасобирателя, массажа ампул семяпроводов,
электроэякуляции и искусственной влагины)
и хирургические. При
влагалищных способах сперму получают из влагалища самки в охоте после
садки на нее производителя, при уретральных – непосредственно из
уретрального канала самца.
Влагалищный способ. Этот способ был предложен в конце позопрошлого
столетия для получения спермы от жеребцов. Для этого проиводителю давали
естественную садку на здоровую кобылу в охоте, а затем извлекали сперму из
влагалища щприцем, ложкой, при помощи влагалищного зеркала или рукой.
Губочный способ. Впервые предложен И.И.Ивановым. Чистую
обеззараженную греческую губку при помощи корнцанга вводят во влагалище
самки в охоте и допускают к ней производителя для садки. Затем губку
извлекают и выжимают из нее сперму рукой или специальным прессом. Так как
влагалищний и губочный способы получения спермы имеют много серьезных
недостатков (значительные потери эякулята, загрязнение спермы, возможность
распространения возбудителей заразных заболеваний через сперму, опасность
заражения производителя при половом контакте с больной самкой,
необходимость иметь самок в охоте), они в настоящее время не применяются.
Способ мастурбации. Сущность этого способа заключается в
механическом раздражении головки полового члена рукой через кожу
препуция, в результате чего наступает рефлекс эякуляции и выделение спермы.
Этот способ применяется для получения спермы у собак и лисиц. Более быстро
и успешно удается получить сперму от самцов в помещении, где находится
самка в охоте.
Фистульный способ. Этот способ получения спермы от жеребцов
предложил Х. И. Животков. В промежности, путем уретростомии делают
фистулу мочеполового канала, открывающуюся на 10-12 см ниже ануса. Во
время садки жеребца на кобылу в охоте сперму получают через очищенную и
продезинфицированную фистулу в подставленную посуду. Указанный способ
практического использования не получил.
Способ спермособирателя. Сперму получают в резиновый мешок –
спермособиратель. Пользоваться им можно двумя способами: путем введения
спермособирателя во влагалище перед садкой или как искусственной вагиной.
Зарубежные специалисты для получения спермы от жеребцов пользуются
иногда резиновым мешком – презервативом, который надевают на половой
член перед садкой (Польша, Вл. Белянский).
Способ массажа ампул семяпроводов. Этот способ предложил Миллер и
Эванс (США) для получения спермы от быков, от которых нельзя получить ее
на искусственную вагину.
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 10 из 40
Способ электроэякуляции. Сущность этого способа заключается в
раздражении нервных волокон тазовой и пояснично – крестцовой областей
электрическим током низкого напряжения и малой силы, в результате чего
происходят эякуляция. В первое время для этого один из электродов вводили в
прямую кишку, а другой накладывали на кожу в области поясницы или на кожу
мошонки. В дальнейшем были предложены бинолярные электроды, которые
вводят в прямую кишку быкам на глубину до 30 см
Способ электроэякуляции применяют в ряде случаев, когда от ценных
производителей не удается получить сперму на искусственную вагину (очень
большой вес, старость, болезни копыт, поражение суставов, связок и мышц
тазовых конечностей, анатомические дефекты и новообразования полового
аппарата, торможение половых рефлексов). На некоторых станциях
искусственного осеменения этот метод находило широкое практическое
применение.
2. Получение спермы от производителей на искусственную вагину
Из всех способов получения спермы наиболее простым, общедоступным,
универсальным и самым распространенным является метод искусственной
вагины, предложенный советскими учеными.
Искусственная вагина
- прибор, в котором искусственным путем
создаются механические и термические раздражители нервных окончаний
полового члена производителя, аналогичные имеющимся во влагалище самки,
необходимые для вызывания рефлекса эякуляции.
Устройство, сборка и подготовка искусственной вагины.
В искусственной вагине имеются следующие части.
1. Цилиндр, или корпус. Он может быть эбонитовый (для барана ), из
толстой резины ( для быков и хряков ), из оцинкованного железа или
алюминия ( для жеребцов ). В искусственной вагине для хряка,
предложенной лабараторией А. В. Квасницкого, цилиндр жестяной,
двустенной. В цилиндре имеется патрубок с отверстием, через которое
в вагину наливают воду и нагнетают воздух.
2. Тонкостенная резиновая трубка – камера.
3. Резиновые кольца для закрепления камеры на цилиндре вагины ( для
быков, хряков, жеребцов ).
4. Эбонитовый краник для регулирования давления в вагине.
5. Спермоприемник. В искусственных вагинах для барана и быка
применяют стеклянные одностенные и двустенные спермоприемники (
рис. 180 ). К вагине для хряка предложены специальные пласт
массовые спермоприемники или используют стеклянную банку
емкостью 500 – 800 мл. Для жеребца спермоприемник имеет вид
широкого резинного стакана.
6.
Резиновый держатель спермоприемника имеется только в
искусственной вагине для быка
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 11 из 40
Для получения спермы от производителя искусственную вагину следует
правильно собрать и подготовить. Сборка ее включает следующие элементы
работы: 1) натягивание резиновой камеры на цилиндр; 2) фиксацию камеры на
цилиндре резиновыми кольцами; 3) присоединение краника к патрубку.
Искусственную вагину для получения спермы надо подготовить так, чтобы
создать в ней нужную температуру (40-42° ), определенное давление (40-50 мм
рт. ст.) и сделать внутреннюю поверхность резиновой камеры скользкой.
Подготовка собранной искусственной вагины к получению спермы
состоит из таких последовательно сменяющихся этапов работы: очистка или
мытье, подготовка спермоприемника, обеззараживание,
Наполнение межстенного пространства горячей водой, смазывание внутренней
поверхности вазелином, присоединение обезжиренного спермоприемника,
нагнетание воздуха, измерение температуры.
Мытье собранной искусственной вагины проводят в специальном тазике или
ванне теплым 3%-ным раствором двууглекислой соды, 1,5%-ным раствором
кальцинированной соды или щелоком приготовленным з древесной золы. Для
того пользуются волосяным или пластмассовым ершом, куском ваты или
марли, захваченным корнцангом или длинным пинцетом. Вмытую вагину
тщательно ополаскивают чистой горячей водой для удаления остатков соды и
высушивают или насухо вытирают чистой салфеткой или полотенцем.
Чистую и сухую вагину можно обеззараживать путем протирания ватным
тампоном, смоченным 96%-ным спиртом-ректификатом или раствором
фурацилина 1 : 5000, кипячением или текучим паром из парообразователя. В
условиях госстанций и на хорошо оборудованных пунктах искусственные
вагины стерилизуют кипячением в специальных электрических стерилизаторах
в течение 10-15 минут.
Спермоприемники обеззараживают кипячееним, споласкиванием 65-70%-ным
спиртом или раствором фурацилина, горячим паром, фламбированием,
выдерживанием в течение 20-30 минут в сушильном шкафу при температуре
160-180%. Пластмассовые и резиновые спермоприемники фламбировать и
обеззараживать в сушильных шкафах нельзя. Для обогревания искусственной
вагины в меж стенное пространство наливают теплую воду, имеющую
температуру 55-60%. В вагину для жеребца – 1 -1.5 л. Смазывают внутренную
поверхность камеры стерильным нейтральным белым или желтым вазелином с
помощью обеззараженной стеклянной или эбонитовой палочки.
Кроме
вазелина, можно применять специально приготовленную тратакантовую или
силиконовые смазки, которые не портят резину. Борный вазелин применять
нельзя, так как борная кислота вредно влияет на сперматозоидов. Конец
вагины, к которой присоединяют спермоприемник, нужно оставить
несмазанным на 3-5 см для предотвращения попадания вазелина в
спермоприемник . Заранее обеззараженный спермоприемник присоединяют со
стороны несмазанного вазелином конца. К вагине для жеребца спермоприемник
прикрепляют путем надевания его на узкий конец (горловину).
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 12 из 40
Особенности и внешние признаки эякуляции у лошадей
Для получения высококачественной, не загрязненной микроорганизмами
спермы и предупреждения заразных бодезней животных необходимо
применять комлекс профилактических мер. Перед работой в помещении
манежа, где берут сперму, очищают воздух от частиц пыли и микробов. Для
этого рпспыляют волу в воздухе из распылителя и увлажняют пол. Помещение
облучают бактерецидными лампами, которые подвешивают к потолку и
устанавливают около станка. Чтобы в сперму не попадали микробы с кожного
покрова животных, перед выводом в манеж чистят щеткой или пылесосом,
теплой водой в душеыой и обсушивают в сушилке.
Перед получением спермы у жеребца чистой водой с мылом. Не реже
одного раза в 10 дней полость препуция у производителей обрабатывают
спринцеванием 3 %-ным раствором перекиси водорода, растворовом
фурозолидона 1 : 10 000 или фурацилина 1: 5000. Такую обработку проводять в
специпльно отведенном месте, имеющем хорошие стоки жидкости.
За каждым производителем закрепляют по две искусственные вагины.
Каждый эякулят необходимо брать на отдельно приготовленную вагину.
Нрименение одной и той же вагины для получения нескольких эякулятов от
одного и того же производителя или от разных производителей недопустимо,
так как это ведет к сильному загрязнению спермы микробами качество ее
снижается. Перед использованием искусственные вагины стерилизуют в
автоклаве, или кипятят в дистилированной воде, или исключение,
обеззараживают 96°-ным спиртом-ректификатом. Перед стерилизацией,
кипячением млм автоклавированием на оба конца собранной и вымытой
вагины надевают надевают колпаки или закрывают оба отверстия прибора
пергаментной бумагой, закрепленной резиновыми кольцами. Пред получением
от жеребца ему подвязывают стерильный нарудный фартук. Такой фартук во
время садки жеребца предохраняют сперму от попадания в нее микробов с
шерсти животго. На входном отверстии искусственной вагины рекомендуется
закреплять резиновыми кольцами, вырезанными их камеры, эластичную
стерильную поролоновую наклажку в форме равностороннего треугольника с
трехлучевым
разрезом. При получении спермы накладка в значительной
мере рчищает поверхность пениса производителя от остатков грязи и песка и
тем самым ограничивает попадание их в искусственную вагину и в сперму.
Половая зрелость кобылок и жеребчиков наступает в довольно раннем
возрасте. Как правило, уже в год - полтора лошадь находится в состоянии
половой зрелости. Но использовать в этом возрасте, конечно, лошадей с целью
воспроизводства ни в коем случае нельзя, так как незрелость организма может
нанести огромный вред лошади и приводить к спонтанным абортам и
появлению нежизнеспособного потомства. Жеребцы, как правило, более
позднеспелые, чем кобылы. Жеребцы при ранней случке задерживаются в
своем развитии. Это тоже говорит о недопустимости использования для
воспроизводства слишком молодых жеребцов. Итак, кобыл пускают в случку в
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 13 из 40
возрасте трех-четырех лет, жеребцов тяжеловозных пород - в три - четыре года,
а верховых - в четырех- пятилетнем возрасте. Как правило, верховые породы
лошадей способны приносить ценное потомство до 18-20 лет; тяжеловозные
породы до 15-16. Особенно ценных, выдающихся по приплоду и другим
параметрам жеребцов, используют до тех пор, пока они продуцируют сперму
нормального качества, то есть до 20-25 лет. А ценных, племенных кобыл - пока
они способны к зажереблению и выжеребке. К случке жеребца начинают
готовить за месяц до ее начала. Жеребцов расковывают и содержат в светлых,
чистых, просторных денниках, увеличиваются нормы кормления в зависимости
от состояния жеребца. При конюшенном содержании жеребцов пускают в
случку один- два раза в сутки. Интервал между двумя садками должен быть не
менее 8 часов. Молодых (до 5 лет) и старых (после 16 лет) жеребцов
используют один раз в день. Совершенно необходимым представляется
еженедельный выходной день, когда состояние абсолютного полового покоя
позволяет жеребцу улучшить состояние своей репродуктивной системы.
В крупных хозяйствах делают лабораторные анализы на качество спермы.
Существует 10-ти бальная система оценки качества спермы. В искусственном
осеменении используется сперма, набравшая 5 и более баллов. Необходима для
повышения потенции жеребцов - регулярная работа, купание и солнечный свет.
Поэтому их нужно выпускать в левады для разминки и отдыха. Конюшни
должны быть очень хорошо освещены. Желательно чтобы в теплое время года
жеребцы находились в леваде большую часть суток, а зимой не менее двух
часов. Лишь на легких работах в течение двух-трех часов в сутки можно
использовать жеребцов-производителей при подготовки к случной компании.
Для того, чтобы поддерживать нормальные санитарно-гигиенические условия в
денниках жеребцов, необходимо расходовать 15 -20 кг сухих опилок на замену
подстилки. Отбивка денников должна происходить два раза в день. Очень
важным является ежедневная, добротная чистка, а в теплое время года купание
или мытье под душем в течение 10-15 мин (при температуре воды не ниже 15ти градусов и температуре воздуха не менее 18 градусов выше нуля при
отсутствии ветра). Зимой при обычном денниковом содержании температура
воздуха в конюшне не должна опускаться ниже плюс четырех градусов.
Жеребцов-производителей расчищают не реже одного раза в два месяца.
Кормят жеребцов-производителей из следующего расчета на лошадь массой
500 кг - разнотравного сена 10 кг,4 кг овса, 3 кг моркови, килограмм
пшеничных отрубей, не менее 4-5 яиц в день и 30 г поваренной соли. Если
лошадь приучена, то у нее в кормушке всегда должен быть соль-лизунец. В
некоторых случаях для повышения качества спермы дается обезжиренное
коровье молоко.
5. Биохимия спермы. Сперма и ее состав
Строение и физиология спермиев
Продолжительность жизни спермия - сперматозоидов у жеребцов
Оценка свойства спермы у жеребцов
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 14 из 40
Cтроение и физиология спермиев .
Сперма животных состоит двух частей: спермиев и плазмы (смесь секретов
придаточных половых желез). По химическому составу сперма представляет
одну из нпиболее сложных жидкостей. От 85 до 98 % массы спермы составляет
вода.
Спермий (иначе сперматозойд) - высокоспециализированная клетка,
отличающаяся рядом особенностей от обычных «соматических» клеток. Его
головка
содержит
ядро-склад
наследственного
вещества
(иначе
«наследственной информации») и акросому. Прочие три части - шейка, тело и
хвост- образуют единую моторную систему спермия.
Головка спермия – плоская пластинка, слегка изогнутая на переднем
конце. Благодаря изгибу пластинка с одной стороны кажется углубленной и
способна при движении спермия вращаться вокруг продольной оси. Головка
содержит ядро, покрытое тончайшей пленкой – ядерной оболочкой,
пронизанной мелкими отверстиями. Поверх нее находится акрозома - колпачок,
закрывающий верхние две трети ядра. Под давлением акрозомы передняя часть
ядра заметно утончена. Ядро с налегающей на него акросомой покрыто второй,
более плотной оболочкой – мембраной, которая с головки переходит на
остальную часть спермия. Акрозома содержит два белка – липогликопротеиды,
состоящие из ;
Рибонуклеиновая кислота (РНК) отличается от дезоксирибонуклеиновой
(ДНК) окислением дезоксирибозы в рибозу и переходом тимина в урацил. Она
большей частью состоит из одной нити. В спермиях РНК очень мало.
В нити ДНК с радиусом около 10 миллионных частей миллиметра и
длиной
несколько
сантиметров
закодирована
наследственность
(последовательностью и числом четырех вышеупомянутых азотистых
оснований).Лишь четыре различные «буквы» записывают огромные количество
генного материала. Каждый ген состоит приблизительно из 2500 нуклеотидных
пар, а число генов, по вычислению Гудвина, у высших животных не ниже
50000.
При изучении ДНК найдено большое число «повторяющихся
последовательностей» азотистых оснований.
При делении клеток цепь ДНК распадается на отдельные участки, образуя
определенное число хромосом-пакетов генов. Например, соматические клетки
лошадей и ослов -по 66 пар. Спермии содержат то же количество, но не пар а
единичных хромосом. После слияния спермия с яйцом восстанавливается
характерное число пар. Таким образом, по числу хромосом, а следовательно, и
по количеству ДНК спермий соответствует половине обычной клетки. И на
самом деле у быка весовое количество ДНК в спермии оказалось равно 3,3-10 -9
мг, а в клетках печени, почек, поджелудочной железы -5,9-6,9 10-9 мг на клетку .
Двойная спираль ДНК окружена короткими нитями-молекулами
щелочного белка, который у млекопитающих был назван гистоном. У рыб и
птиц этот белок получил название протамина. Щелочность тому и другому
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 15 из 40
белку придает большое количество диаминокислоты аргинина, имеющего
формулу
NH2-C(NH)-NH-CH2-CH2-CH2-CH(NH2)-COOH,
ДНК у быка имеет ми (угнетателями) ДНК. Они препятствуют переходу
ДНК в РНК, и поэтому в ядре спермиев никаких изменений и превращенний,
до оплодотворения не происходит.
Головка спермиев почти целиком построена из белков. Липопротеид, как
указано, находится в значительном количестве в акрозоме. В ней, содержится
кроме того, немного углеводов и нуклеиновых кислот. В головках спермиев
найдено 2,1% минеральных веществ.
Шейка, тело и хвост спермия. Эти три отдела спермия представляют, как
уже было сказано, части единой моторной системы спермия. Они резко
отличаются от головки по составу головки: головка окрашивается кислыми
красками, тогда как эти отделы – щелочными. Внутри их от шейки до конца
хвоста проходит осевая нить, обвитая одной или несколькими спиральными
нитями. По самой середине осевой нити проходят две центральные фибриллы, а
на некотором расстоянии, окружая их, расположены два кольца боковых
фибрилл; кольцо «тонких» состоит из девяти фибрилл и кольцо «грубых»также из девяти. При этом центральные и тонкие фибриллы идут внутри осевой
нити до конца хвоста, а грубые фибриллы имеются только в шейке и теле, а в
хвосте отсутствуют. Шейка и тело в продольном разрезе и тела спермия в
поперечном разрезе, где можно видеть упомянутые три группы фибрилл,
проходящие внутри осевой нити. Видна и спиральная нить, состоящая из
овальных митохондрий. Центральные фибриллы осевой нити представляют две
тонкие трубочки, скрепленные одна к другой. Внутри их имеется прозрачная
жидкость. Их назначение точно не установлено. Каждая тонкая фибрилла
состоит из двух спаянных тонких трубочек: субфибриллы А, заполненной
темной массой, и субфибриллы В, прозрачной внутри. На субфибрилле А со
свободной стороны находится ряд выступов – «ручек». Кроме того,
субфибриллы А связаны с центральными тонкими нитями –«спицами», причем
пять субфибрилл А соединены с одной центральной фибриллой, четыре – с
другой. Благодаря этому тонкие фибриллы удерживаются на определенном
расстоянии от центральных.
К тонким фибриллам снаружи прилегают «грубые» фибриллы, образуя
наружное кольцо из девяти фибрилл. Они в 10 -12 раз толще соответствующих
тонких фибрилл. Грубые фибриллы в шейке утолщены и широкие передние
концы их в шейке утолщены и широкие передние концы их в шейке
соединяются друг с другом, образуя косо поставленную рамку с отверстием
внутри - проксимальную центриоль. Ниже проксимальной центриоли в начале
тела спермия находятся несколько утолщенные передние концы тонких
фибрилл, образующие дистальную центриоль. По – видимому, тонкие
фибриллы притягиваются верх к толстым.
Вещество фибрилл содержит белок, названный спермозином. Подобно
миозину мишц он способен разлагать аденозинтрифосфат по уравнению;
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 16 из 40
Аденозинтрифосфат+вода—аденозиндвуфосфат+фосфорная
кислота+8ккал энергии.
Этой реакции способствует ионы кальция.
Выделяющаяся свободная энергия служит для сокращения фибрилл хвоста.
Найден в небольших количествах другой белок, названный спактином,
аналогичный актину мышц. Таким образом, сокращение хвоста спермия по
химизму напоминает мышечное. Осевая нить в теле спермиев обвита
несколькими спиральными нитями, описывающими около нее многочисленные
обороты около 10-12. Эти спиральные нити состоят из цепей овальных
пузырьков – митохондрий, являющихся наиболее важными частями моторного
аппарата спермия. Созревающие спермии во время спермиогистогенеза в виде
целых пучков погружены своими головками в цитоплазму внутренних частей
клеток тесному соприкосновению между обоими видами клеток происходит
интенсивный обмен веществ, так что клетки Сертоли можно считать не только
опорными образованиями, но и клетками с трофической функцией. Спермии,
расположенные веерообразно группами и погруженные в клетки Сертоли,
вместе
с
соответствующей
частью
их
цитоплазмы
называются
сперматобластами.
После ослабления этой связи дифференцированные
спермии попадают в водянистую жидкость, заполняющую просветы извитых
канальцев семенной железы. Их хвост и центриоли представляют собой
локомоторный аппарат, позволяющий спермиям бойко передвигаться. Хвост
совершает волнообразные движения винтового характера таким образом, что
головка спермия вращается вокруг своей длинной оси и одновременно
движется вперед. Скорость движения составляет приблизительно 1—2 мм в
минуту, однако она зависит от интенсивности потока в среде, в которой
находятся спермин. Их движение зависит также и от так называемого
отрицательного реотаксиса, под которым подразумевается способность
передвигаться против течения секрета. Это особенно важно для движения
спермий по яйцеводу (овидукту), в котором секрет эпителия слизистой
оболочки, благодаря мерцанию ресничек, движется по направлению к полости
матки, в то время как спермин, для того чтобы встретиться с яйцевой клеткой и
оплодотворить ее, должны передвигаться в противоположном направлении. На
подвижность спермий воздействуют и химические факторы; спермин обладают
положительным химиотаксисом по отношению к слабо щелочной среде
(щелочной секрет желез шейки матки, влияющий на среду в своде влагалища).
Кислая среда, в зависимости от степени кислотности, замедляет или
останавливает движение спермия.
Эволюция полового процесса нашла отражение в морфологии и физиологии
спермия, что особенно ярко выявляется при сопоставлении характера движения
спермиев животных с внешним и с внутренним осеменением. У первых движение спермиев происходит по кругу, что облегчает встречу спермиев с яйцом,
так как прямолинейное движение в водной среде приводило бы к расхождению
спермиев по радиусам, т. е. в стороны от места положения яйцевых клеток,
возле которых осуществляется процесс эякуляции. Напротив, движение
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 17 из 40
спермиев по кругу у животных с внутренним осеменением оказалось бы
нецелесообразным вследствие того, что у них для встречи с яйцом спермий
должны переместиться по половым путям самки в сторону яичника. Таким
образом, для спермиев млекопитающих считается нормальным только
прямолинейное, поступательное движение.
6. Разбавление спермы лошадей
Значения разбавления спермы
Основные компоненты разбавителей и требования к разбовителям
Правила разбавление спермы и его уровень разбавления
Значения разбавления спермы
Разбавление спермы увеличивает ее объем, что позволяет осеменить
большее количество самок, предохраняет сперматозоиды от холодового
удара, удлиняет сроки сохранения спермы и повышает оплодотворяемость
самок.
Кроме того, в состав разбавителей входят питательные вещества, служащие
материалом для выработки энергии и поддержания реакции среды, необходимой
для сперматозоидов.
Вносимые в разбавитель антибиотики и сульфаниламидные препараты
губительно действуют на микробов, попадающих в сперму при ее получении,
разбавлении и осеменении.
Разбавители для станций и пунктов искусственного осеменения можно
получить по заявкам. Они рассылаются в специальных флаконах или пакетах.
Для приготовления разбавителя к полученному порошку добавляют лишь
нужное количество дистиллированной воды. При изготовлении разбавителя на
станции или пункте искусственного осеменения строго соблюдают рецепт
разбавителя. При этом наиболее часто пользуются глюкозо-желточноцитратными разбавителями.
Разбавители готовят перед получением спермы. При этом вначале растворяют в
нужном объеме дистиллированной воды порошкообразные составные части
разбавителя (стрептоцид, лимоннокислый натрий, глюкозу или ее заменители).
Затем добавляют желток куриного яйца и антибиотики. Для получения
желтка свежее куриное яйцо от здоровой птицы обмывают, обтирают ватным
тампоном, смоченным спиртом, разбивают и отделяют желток от белка в
стеклянную чашку.
Стерильной пипеткой или стеклянным шприцем прокалывают
оболочку желтка, набирают нужное количество его и вводят в приготовленную
синтетическую среду
2.Основные компоненты разбавителей и требования к разбавителям
Рецепты сред для разбавления спермы. Сперму жеребца разбавляют
глюкозно – желточной, лактозно – желточной, молочно – желтозной или
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 18 из 40
лактозно – хелатоцитратио – желточной (ЛХЦЖ) средой (табл. 24). В качестве
санирующих веществ в разбавитель добавляют 50 тыс. ед. спермосана – 3 на
такое же количество среды
Таблица 1
Рецептура сред для разбавления спермы жеребца
Составные
вещества
Вода
дистиллированная (мл)
Глюкоза (г)
Лактоза (г)
Хелатон, двунатриевая
соль (ЭДТА),г
4,2 % - ный раствор
бикарбоната натрия (мл)
35,7% - ный раствор
цитрата
натрия
трехзамещенного (мл)
Желток куриного яйца
(г)
Среда
Глюкозн
Лактозноо-желточная желточная
100
100
ЛХ
ЦЖ
100
7
-
11
-
11
0,1
-
-
0,2
-
-
0,25
0,8
0,8
1,6
Приготовление сред. Для приготовления глюкозно – желточной или
лактозно – желточной среды в стерильную стеклянную колбу наливают
необходимое количество свежекипяченой дистиллированной воды, добавляют
глюкозу или лактозу.Содержимое подогревают до 80 – 90 ° и взбалтывают до
полного растворения осадка. После охлаждения раствора до 30 – 35 °
добавляют санирующие вещества и желток свежего куриного яйца (1 – 2
суточного хранения).Яйца перед использованием моют, протирают тампоном,
смоченным 70 °-ным спиртом, раскалывают пополам, желток отделяют от
белка и осторожно выливают в чашку Петри или на листок фильтровальной
бумаги. Оболочку желтка прокалывают стерильной пипеткой и отвешивают
необходимое количество желтка в стерильном тигельке или бюксе. К
отвешенному желтку добавляют раствор компонентов среды в количестве,
превышающем объём желтка в 2 – 3 раза. Тщательно растирают желток
стеклянной палочкой или пипеткой и вносят в колбу с раствором компонентов
среды, встряхивая до получения однородного раствора.
При приготовлении ЛХДЖ – среды лактозу растворяют также с
подогреванием раствора до 80 – 90 ° , затем охлаждают до 35 – 37 °.Остальные
компоненты вносят в следующий последовательности: хелатон, раствор
бикарбоната натрия, раствор цитрата натрия, санирующие вещества, желток.
Санирующие препараты (пенициллин, спермосан – 3) предварительно
растворяют в минимальном количестве дистиллированной воды и стерильной
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 19 из 40
пипеткой вносят необходимое количество в среду. Стрептоцид вносят в среду
без предварительного растворения.
Молочно – желточную среду приготавливают следующим образом:
свежевыдоенное молоко от кобылы или коровы процеживают через марлю,
доводят до кипения, вторично процеживают через стерильную марлю и
охлаждают до 30 – 35 °. Затем добавляют 20 мл желтка куриного яйца на 100 мл
молока, антибиотики и стрептоцид в количествах, указанных для других сред.
3.Правила разбавление спермы и его уровень разбавления
Сперму жеребца разбавляют, постепенно приливая к ней среды, постоянно
помешивая стерильной стеклянной палочкой. Среда должна иметь температуру
25 – 30 °.
Для разбавления используют сперму с оценкой не ниже 5 баллов и с
концентрацией не менее 150 млн. спермиев в 1 мл. При использовании
глюкозно – желточной, лактозно – желточной и молочно – желточной сред
сперму разбавляют в 3- 4 раза, т.е. к одному объёму спермы приливают 2 – 3
объёма среды. При использовании ЛХЦЖ – среды сперму разбавляют в 4-5 раз.
Разбавленную сперму обязательно проверяют под микроскопом.
7. Значение хранение спермы лошадей
Краткосрочное хранение спермы
Долгосрочное хранение спермы
Хранение и перевозка спермы. Сперму, разбавленную глюкозно –
желточной, лактозно – желточной или молочно – желточной средой, можно
хранить в течение 24 - 26 ч при температуре 2 – 4 °. Сперму, разбавленную
ЛХЦЖ – средой, можно харнить при такой же температуре в течение трех
суток.
Для перевозки и хранении разбавленную сперму разливают в баночки с
притертыми пробками ёмкостью 50 – 100 мл или флаконы из – под
антибиотиков (12 – 20мл).
Баночки и флаконы со спермой сверху фиксируют резиновым пояском и
помещают в термос со льдом. Чтобы сперма охлаждалась постепенно, сосуды с
ней ставят в термос в полиэтиленовых или марлевых мешочках. Поверхность
льда в термосе покрывают тонким слоем (1 -2 см) ваты.
Перед осеменением активность спермиев оценивают в термостате или на
электрическом обогревательном столике.
2.Долгосрочное хранение спермы
Хранение спермы жеребца в замароженном состоянии. Свежеполученную
сперму жеребца разбавляют лактозно – хелато – цитратно – желточной (ЛХЦЖ)
средой состава: дистиллированная вода – 100мл, лактоза – 11 г, хелатон
(двунатриевая соль ЭДТА) – 0,1 г, 4,2 % - ный раствор бикарбоната натрия -
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 20 из 40
0,2 мл, 35,7 % - ный раствор цитрата натрия - 0,25 мл, желток куриного яйца –
1,6 – 2,0 г, глицерин – 3,5 мл. Сперму с концентрацией 150 -350 млн/мл
разбавляют в 4 раза, а пр и концентрации 400 млн/мл и выше – в 5 раз.
Методика замораживания спермы. Сперму, разбавленную ЛХЦЖ –
средой, выдерживают в холодильнике с температурой 0° в течение 2 ч, затем
на 30 мин помещают в тающий лёд. При этом объём разбавленной спермы в
одной колбе не должен превышать 100 мл при высоте слоя спермы 2 – 2,5 см.
После такой выдержки спермы при нулевой температуре приступают к её
замораживанию с использованием одного или двух хладагентов ( твердой
двуокиси углерода и жидкого азота). При использовании двумя хладагентами
сперму намораживают в форме гранул по 0,2 мл на блоке твердой двуокиси
углерода ( сухого льда). Предварительно на блоке сухого льда делают лунки
при помощи пластика с выступами, которая должна быть нагрета перед
использованием. Разбавленную сперму наносят в лунки и сухого льда с
помощью пипетки или специальной капельницы, выдерживают в течение 5 - 6
мин и переносят в жидкий азот. Для хранения замороженных гранул спермы в
жидком азоте можно пользоваться алюминиевыми тубами диаметром 30,
длиной 125мм. В такую тубу входят 20 – 25 мл спермы в форме гранул –доза,
рассчитанная на одно осеменение. Гранулы ссыпают в тубу, пользуясь
специальной воронкой, туба при этом должна находиться в жидком азоте.
После ее наполнения гранулами верхний конец тубы зажимают пинцетом и
укладывают в сосуд Дьюара с жидким азотом. Для складывания гранул можно
пользоваться и специальными пластмассовыми или алюминиевыми баночками.
При использовании одним хладагентом – жидким азотом – сперму,
разбавленную ЛХЦЖ – средой, замораживают в алюминиевых пакетах
объёмом по 25 мл в холодных парах азота на расстоянии 1 см от поверхности
жидкого азота. Для получения таких условий наливают жидкий азот в
специальную морозильную камеру, на поверхность азота помещают
пенопластовый поплавок с металлическим ситом, на сито кладут тубы со
спермой и закрывают его крышкой.
В качестве морозильной камеры можно использовать двухстенные
алюминиевые сосуды с вакуумным межстенным пространством или любой
подходящий алюминиевый сосуд, изолированный снаружи пенопластом.
Пакеты с семенем в холодных парах азота выдерживают в течение 6 -7
мин, а затем опускают в жидкий азот.
Для изготовления пакетов пригодны алюминиевые тубы длиной 145,
диаметром 30 мм, которые выпускаются Московским тубным заводом. Края
пакета закрывают с двух сторон с помощью прямого кровоостанавливающего
зажима и крепко зажимают тисками или плоскогубцами. При закатывании
пакетов со спермой необходимо строго следить, чтобы в них не остался воздух,
иначе возможны разрывы пакетов при оттаивании спермы. Пакет после
упаковки имеет следующие размеры: длину 120-125 мм, ширину 45, толщину 45 мм. На пакете делается надпись с указанием клички жеребца, от которого
взята сперма, и даты намораживания.
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 21 из 40
Хранят замороженную сперму в жидком азоте в сосудах Дьюара
различной ёмкости. Пакеты со спермой можно укладывать как канистры, так и
на дно сосуда. В последнем случае рекомендуется пакет со спермой помещать
в марлевый мешок ещё до её замораживания.
Необходимо строго следить за своевременной доливкой азота в сосуды.
Хранение спермы в парах азота не допускается.
Оттаивание спермы, замороженной в форме гранул, проводят следующим
образом. Тубу со спермой вынимают из жидкого азота, быстро пересыпают
гранулы в стерильную коническую колбу, добиваясь однослойного
расположения гранул на её дне. Колбу со спермой погружают в воду с
температурой 40° и держат до полного оттаивания.
При оттаивании спермы, замороженной в пакетах, пакет погружают в воду
с такой же температурой (40° ) и выдерживают 50 с.Вынутый из воды пакет
вытирают чистым полотенцем или марлей, один конец протирают спиртовым
тампоном или отрезают ножницами. Оттаянную сперму просматривают под
микроскопом для определения ее активности и сразу же используют для
осеменения.
Доза оттайянной спермы на одно осеменение – 20 -25 мл, осеменение
кобыл начинают при 3 - 4-й степени зрелости фолликула и повторяют до
наступления овуляции через 24 ч, если оттаянная сперма имела активность не
менее 3 баллов. Если активность оттаянной спермы 2-2,5 балла, то осеменение
повторяют через 12 ч. Сперму с активностью ниже 2 баллов использовать не
рекомендуется.
При осеменении кобыл спермой, замороженной описанным способом и
сохраненной при -196°
в течение многих месяцев, получают вполне
удовлетворительные результаты. Зажеребляемость кобыл в одну охоту
составляет в среднем 60%.
8 Биологические особенности кобыл.
Определение времени осеменения
Виды случки лошадей
Определение времени осеменения
Физиология воспроизводства лошади довольна сложна. Половой зрелости
кобылы достигают к 1 -1,5 годам, но случать кобыл можно, как правило, только
в возрасте 3 лет. Половой цикл кобылы составляет в среднем 22 дня, из них 5-7
дней продолжается половая охота и 15-17 дней стадия полового покоя.
Цикличность кобыл бывает более выраженной в конце зимы, весной и летом.
Осенью она затихает или прекращается вовсе. Появление охоты у кобыл чаще
всего бывает незаметным, в связи с чем для ее определения приходится
использовать специальных жеребцов-пробников. Начало охоты у кобылы ещё
не свидетельствует о ее готовности к оплодотворенному осеменению. Обычно
овуляция зародышевого пузырька яичнике и выход из него яйцеклетки
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 22 из 40
происходят в конце охоты, примерно за сутки до её окончания. В коневодстве
возможно и применение искусственного осеменения кобыл свежей или глубоко
замороженной спермой. Такие способы позволяют шире использовать особо
ценных жеребцов-производителей и получат приплод от наиболее желательных
сочетаний.
В коневодстве нередки случаи отсутствия у кобыл охоты или полноценных
половых циклов, заканчивающихся овуляцией. Для стимуляции половой охоты
и полноценного цикла применяются биологические методы и специальное
медикаментозное лечение.
Виды случки лошадей
В случной период необходимо следить за содержание, кормлением и
использованием лошадей. Случку начинают на второй день после обнаружения
охоты. После первой случки кобылу пробуют через день, и если в охоте, то
покрывают.
В зависимости от системы содержания и разведения применяют
искусственное осеменение, ручную, варковую, а также косячную (в табунном
коневодстве) случки.
При искусственном осеменении за сезон от 1 жеребца можно осеменить
200-300 кобыл.
Ручная случка позволяет экономно использовать ценных жеребцов,
получать меньше жеребят. Производиться в манеже, нагрузка на жеребца—3540 кобыл.
Варковая случка — позволяет регулировать количество садок. Косяк
кобыл загоняют в варок и пускают жеребца. Он находит кобыл в охоте и
покрывает их, после случки с 1-2 кобылами его выводят из загона.
Косячная – на период случной кампании табуны кобыл разделяют на
косяки (по 20-25). В каждый косяк выпускают жеребца, которого содержат в
косяке в течении всего случного периода (оплодотворённость кобыл 95-100%)
и весь сезон ходит с ним на отведенном участке пастбища.
Настоящий косячный жеребец сам управляет всей жизнью косяка, водит его на
водопой и соль, укрывает от ветров в затишные места, охраняет его от
хищников и других жеребцов.
Жеребость кобылы продолжается 11 мес. В этот период происходит сложная
перестройка её физиологического состояния, которая требует соответствующих
условий для нормального развития плода и развития здорового жеребенка.
Организм жеребой кобылы очень чувствителен к различным нарушениям
режима содержания и кормления, что иногда может привести к выкидышу
плода. Абортами заканчиваются обычно и двойные жеребости.
Жеребая кобыла может работать в достаточно напряженном режиме до 6-7 мес
жеребости, затем нагрузки снижаются вдвое. А с 9 мес она полностью
освобождается от работы. Перед выжеребкой кобыла становится беспокойной,
роет подстилку, ложится, встает. У нее набухает вымя и на соках появляются
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 23 из 40
капельки молозива. Выжеребка происходит обычно в ночные часы и
продолжается 20-40 мин. Помощь кобыле в абсолютном большинстве случаев
не требуется. Сразу при выжеребке или впервые минуты после неё у кобылы
выходит и послед. Если кобыла не ослабла при выжеребке, то кобыла быстро
встает и облизывает детёныша, этим она высушивает и массирует его тело,
стимулируя дыхание. Слизываемая околоплодная жидкость оказывает
стимулирующее воздействие на инволюцию матки и быстрое наступление
половой охоты (на 7-11 день после родов). Родившийся жеребенок способен
впервые же часы встать на ноги и даже следовать за матерью.
Молодая кобыла может и не проявить материнского инстинкта и не кормить
своего
жеребенка.
Первая
охота
после
родов
наступает.
При скрещивании домашних лошадей с родственными им представителями
рода Equus – ослами, зебрами, куланами – получаются гибриды (мулы, лошаки,
зеброиды, куланоиды), которые обычно бесплодны. При скрещивании с
лошадью Пржевальского потомство бывает плодовитым.
9. Искуственное осеменение кобыл
Значение и проведения мероприятии искусственного осеменения кобыл.
Методы определения половой охоты у кобыл
Время осеменеия кобыл
Методы искусственного осеменеия кобыл
1.Значение и проведения мероприятии искусственного осеменения кобыл.
Искусственное осеменение имеет значительное количество преимуществ.
Первое: спермой одного жеребца-производителя, полученной от одной
садки, можно осеменить до 20 кобыл.
Второе: искусственно полученную сперму можно хранить длительное
время в замороженном виде.
Третье: искусственное осеменение является профилактическим методом
по борьбе с инфекционными заболеваниями, передающимися контактным
путем.
Осеменние кобыл проводили и проводят на пунктах искусственного
осеменения куда транспортируют с племстанции лошадей проволят станции по
племенному делу и искусственному осеменению, конюшни, которые
комплектуются высокоценными племенными жеребцами производителями
класса элита. Хозяйства могут организовать пункты для осемения 50-200 кобыл
из разных хозяйств, расположенных в радиусе до 10 км. Осемение кобыл на
подпункте возлагается на техника основного пункта. Для выполнения работ на
пункте правления хозяйства выделяет техника по искусственному осеменению,
конюха и уборщицу.
Проводить искусственное осемение лошадей имеют право только техники,
получившие специальную подготовку на курсах.
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 24 из 40
Пункты искусственного осеменения лошадей устраивают в типовых или
приспособленных помещениях. Они должны иметь манеж, лаборатлорию,
моечную комнату, кладовую, конюшню, помещение для хранения сбруи и
фуража и выгульную площадку для жеребцов.
Для повышения эффективности искусственного осеменения кобыл
необходим хорошо подготовить, создать им благоприятные условия
содержания и кормления. В стойловый период животным необходимо давать
сено хорошего качества, богатое азотистыми и минеральными веществами, а
также витаминами. Благоприятно сказывается добавка в рацион сочных кормов.
Для каждого кобылы уставливают нормальный мрежим работы. В дни,
свободные от работы, животных следует выпускать в левады и на пастбище, а
зимой – в поле, чтобы они могли двигаться в длительное время находится в
воздухе.
Движение кобыл на свежем воздухе, солнечное освещение стимулируют
их половые функции и повышают плодовитость. Следует также следить за
состоянием органов размножения кобыл, выявить больных животных и
своевременно проводить лечение, чтобы закончить его до наступления сезона
искусственного осеменения.
2.Методы определения половой охоты у кобыл
Охоту выявляют при помощи жеребца - пробника с нормальным
проявлением половых рефлексов. Его держат два конюха на длинных поводьях
или один конюх во вторым поводом, перекинутым черех шею жеребца, и
подводят к нему раскованную на задние ноги кобылу, или же кобылу ставят в
станок и жеребца подводят сбоку станка.
В станке проводить пробу более удобно, так как легче удерживать
кобылу, а жеребец не может покрыть ее и предохранен от ушибов. Станок
устривают так: прочнло врывают в землю две обычные крепкие коновязи,
паральнено расположенные на расстоянии 80 - 85 см одна от другой. Длина
коновязи 2,5 -3.0 м, высота над землей 1 м. Для пробы кобылу заводят между
коновязями, а удерживающий ее конюх стоит сбоку, с противоположной
стороны от жеребца.
Холостых, абортировавших кобыл и молодых, впервые идущих в случку,
необходимо проверять на наличие охоты с начала случного сезона, а
выжеребившихся – с пятого дня после выжеребивки. Охоту у каждой кобылы
следует выявлять не реже чем через день, а лучше ежедневно, чтобы не
пропустить тех кобыл, у которых она продолжается всего лишь два – три дня.
Кобыл с признаками охоты проверяют ежедневно, чтобы определить наиболее
яркое проявление и затухание процесса. Пробу лучше проводить рано утром
или к вечеру.
Различают следующие степени проявления охоты. Охота первой степени
1
(О ): при приблежении жеребца кобыла стоит спокойно, хотя и не проявляет
других признаков охоты.
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 25 из 40
Охота второй степени (О2): кобыла допускает жеребца, поднимает хвост,
у нее заметны сокращения мускулатуры наружных половых органов.
Охота третьей степени (О3): в дополнение к описанным признакам
кобыла при пробе жеребцом выделяют мочу.
Охота четвертой степени (О4): в дополнение к ярко проявленным
признакам, свойственнм второй и третьей степени охоты, кобыла при
обнюхивании ее жеребцом клонится в его сторону, при вспрыгивании жеребца
стоит спокойно.
Отбой (обв) : при пробе жеребцом кобыла признаков охоты не проявляет,
прижимает уши, бьет задними ногами.
У поступивших на пунк искусственного осеменения кобыл сначала
пробником проверяют степень охоты, а затем ректальным исследованием
устанавливают время следующего привода их на пункт.
Определение зрелости фолликула ректальным методом. Для ректального
исследования кобылу заводят или надевают ненее случную шлею с
постромками, которые закрепляют на путовых или скакательных суставах.
Удержать кобылу можно, подняв у нее переднюю ногу.
Исследование удобнее начинать с левого яичника. Кисть правой руки,
введенная в кишку, плавно вводится в поясничную область к левому подвздоху.
Здесь на ладонь ниже и в сторону от позвоночника, позади почек, у холостых
кобыл кисть руки наталкивается на яичник. Иногда рука сначала наталкивается
на связки яичника и матки, натянутые сверху вниз. В этом случае движением
кисти руки по связке (вверх и вниз) отыскивается яичник.
Яичник подводят (прижимают) ближе к брюшной стенке, осторожно
прощупывают и устанавливают его состояние. Когда исследование левого
яичника закончено, руку перемещают по связке к рогу матки вниз и вправо от
яичника, где на расстоянии 3-5 см от него находится вершина рога матки. Рог
матки захватывают между большим и другими пальцами так, чтобы большой
палец распологался сверху, а остальные спереди и снизу рога. Затем осторожно
его прощупывают, для чего руку постепенно перемещают вправо и вниз к телу
матки, отсюда на правый рог до верхушки рога и далее по связке на правый
яичник. Правый яичник и рог матки удобнее исследовать левой рукой. Матка у
холостых кобыл находится на границе тазовой и брюшной полостей, под
прямой кишкой, над мочевым пузырем.
Ф0 – яичник в покое: форма бобовидная, размеры в среднем: длина 5 см,
ширина 3, толщина 2см, консистенция плотно-эластичная, фолликула нет;
Ф1 - начало созревания фолликула: яичник принимает форму неправильного
боба за счет увелечинения одной его стороны, в которой начинает созревать
фолликул прощупываемый в виде небольшого размягчения;
Ф3 - фолликул почти созрел; яичник увеличивается в размерах, имеет явно
грушевидную форму, фолликул шарообразный и ясно флюктуирует;
Ф4
- фолликул созрел, имеет форму шара, напряженно флюктуирует,
стенки его сильно истончены;
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 26 из 40
ОВ – овуляция; напряженность стенок фолликула ослабла, при осторожном
надавливаниим на них пальцами размер фолликула уменьшпется и изменяется
его форма. После окончания овуляции яичник сильно уменьшается в размерах.
Область яичника, гле развивался фолликул, мягкая, дряблая, складчатая,
флюктуации нет;
ЖТ – желтое тело; на месте лопнувшего фолликула образуется желтое тело.
Оно имеет форму неправильного, сплюснутого с боков шара, диаметром до 2-4
см, упругой консистенции.
3.Время осеменеия кобыл. Осеменение кобыл проводят при наличии у
них фолликула 3-4-й стадии зрелости. Если овуляция не наступила, то кобылу
через 1-2-е суток осеменяют снова, и так до тех пор, пока не произойдет
овуляция. После овуляции кобыл не осеменяют. На пунктах, где не освоен
метод ректального контроля состояния яичников, кобыл осеменяют при ярком
проявлении признаков охоты (охоты 3-й и 4-й степени) и повторяют
осеменение через каждые 24-28 ч до затухания признаков охоты.
Осеменение кобыл Кобылу заводят в станок или удерживая за повод; кроме
того, во время искусственного осеменения поднимают ее переднюю ногу,
чтобы она не могла ударить техника задней ногой. Конюх пункта отводит
хвост кобылы в сторону и омывает ее половую петлю из кружки теплой водой.
Затем техник по искусственному осеменению при участии помощника, который
подает ему шприц со спермой, проводит работу по осеменению кобылы
4.Методы искусственного осеменеия кобыл
Для осеменения кобыл пользуются преимущественно эбонитовым
катетером. Под контролем глаза катетер при помощи влагалищного зеркала
вводят непосредственно в матку на глубину 10-15 см. При использовании
мягкого катетера его конец захватывают рукой, вводят во влагалище и под
контролем пальца направляют через канал шейки в матку. Когда для выбора
времени осеменения наряду с определением течки, общего возбуждения и
охоты выявляют овуляцию, стремятся направлять сперму в тот рог матки, в
стороне которого в яичнике созревает фолликул.
Вследствие значительного объема дозы спермы для введения ее в матку
пользуются 20-граммовым шприцем или специальными ампулами. Ампульный
способ применяют на подсобных пунктах искусственного осеменения. Ампулы
емкостью 30 мл используют для перевозки спермы и для осеменения. Перед
осеменением на узкий конец ампулы, заполненный спермой, надевают
резиновый шланг, соединенный с баллоном. С другой стороны ампулы
снимают резиновый колпачок. Ампулу захватывают рукой, вводят во
влагалище, ее свободный конец закрывают пальцем и направляют в шейку
матки. При сжимании баллона сперма выталкивается воздухом в полость
матки.
Растяпин предложил вводить самкам сперму из ампулы через катетер И. И.
Иванова. Ампула Растяпина имеет расширенный конец, закрытый пробкой, и
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 27 из 40
суженный, который соединяют с мягким резиновым катетером. К катетеру,
введенному в матку, присоединяют ампулу, свободный ее конец открывают, и
сперма самотеком переходит в полость матки через катетер. В
карантинированных хозяйствах следует пользоваться только шприцем и
твердыми катетерами, их можно легко стерилизовать.
Кобылам вводят 20-40 мл спермы.
10. Физиология размножения кобыл
Половое и физиологическое созревание кобыл
Понятие полового цикла
Нейрогуморальная регуляция полового аппарата кобыл
1.
Физиология воспроизводства лошади довольна сложна. Половой
зрелости кобылы достигают к 1 -1,5 годам, но случать кобыл можно, как
правило, только в возрасте 3 лет. Половой цикл кобылы составляет в среднем
22 дня, из них 5-7 дней продолжается половая охота и 15-17 дней стадия
полового покоя. Цикличность кобыл бывает более выраженной в конце зимы,
весной и летом. Осенью она затихает или прекращается вовсе. Появление
охоты у кобыл чаще всего бывает незаметным, в связи с чем для ее определения
приходится использовать специальных жеребцов-пробников. Начало охоты у
кобылы ещё не свидетельствует о ее готовности к оплодотворенному
осеменению. Обычно овуляция зародышевого пузырька яичнике и выход из
него яйцеклетки происходят в конце охоты, примерно за сутки до её окончания.
В коневодстве возможно и применение искусственного осеменения кобыл
свежей или глубоко замороженной спермой. Такие способы позволяют шире
использовать особо ценных жеребцов-производителей и получат приплод от
наиболее желательных сочетаний. В коневодстве нередки случаи отсутствия у
кобыл охоты или полноценных половых циклов, заканчивающихся овуляцией.
Для стимуляции половой охоты и полноценного цикла применяются
биологические
методы
и
специальное
медикаментозное
лечение.
11. Трансплантация зародышей
Трансплантация эмбрионов и его значение
Отбор доноров
Вызывание суперовуляции
1.Трансплантация эмбрионов и его значение
Под трансплантацией зародышей понимают перенос зародышей из
половых органов животных-доноров в половые органы животных-реципиентов.
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 28 из 40
При этом в организме реципиентов наступает нормальная беременность с
развитием зародышей, а затем и плодов.
Трансплантация зародышей является одним из методов интенсификации
воспроизводства сельскохозяйственных животных, позволяющим от одной
выдающейся коровы-рекордистки получать в год до 30-50 телят, что
способствует увеличению приплода от ценных животных. Длительное
сохранение зародышей позволяет создавать запасы (банки зародышей) ценного
генетического фонда и экспортировать или импортировать зародышей
высокопродуктивных и редких пород животных. Пересадка зародышей
животных мясных пород молочным коровам имеет неоспоримое преимущество
по сравнению со скрещиванием мясных быков с такими коровами и,
следовательно, будет способствовать увеличению производства говядины.
Возможно получение двоен путем пересадки по одному зародышу в каждый
рог матки или введением дополнительного зародыша в небеременный рог
матки. Можно получать ценный в племенном отношении приплод от коров
местных пород, имеющих иммунитет к различным болезням.
Пересадку зародышей можно использовать и для изучения многих
вопросов физиологии и патологии беременности, межвидовой гибридизации.
Например, после пересадки овцам зародышей коз рождаются нормальные
козлята, а от коз после трансплантации им зародышей овец - ягнята.
Однако преимущество от трансплантации зародышей в условиях хозяйства
достигается только при четком повседневном осуществлении комплекса
агрозооветорганизационных мероприятий. Важнейшим его элементом является
наличие здоровых, конституционально крепких доноров и реципиентов,
обеспеченных полноценным кормлением, хорошим содержанием и правильной
эксплуатацией;
высококвалифицированных
акушеров-гинекологов
;
специального центра (пункта) трансплантации зародышей с необходимым
оборудованием и оснащением.
Работу по трансплантации проводят в следующем порядке:
1) отбор доноров и реципиентов; 2) вызывание множественной овуляции
(суперовуляции) у доноров и их осеменение; 3) получение зародышей от
доноров; 4) оценка, культивирование и хранение зародышей; 5) синхронизация
полового цикла реципиентов с половым циклом доноров; 6) пересадка
зародышей на стадии морулы или бластулы реципиентам.
2.Отбор доноров.
Донор - это высокоценное, выдающееся животное, от которого после
гормонального вызывания полиовуляции и осеменения спермой проверенного
производителя-улучшателя получают несколько зародышей. Отбирают только
тех животных, которые обладают способностью к множественной овуляции и
дают в течение длительного срока их использования большое количество
зародышей, пригодных к пересадке. В качестве доноров лучше использовать
здоровых коров в возрасте от 4 до 5 лет с хорошо развитой молочной железой,
пригодной к машинному доению, и у которых не было каких-либо осложнений
родов и послеродового периода. Первая стадия возбуждения полового цикла
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 29 из 40
после родов должна быть синхронной и полноценной, с ярко выраженными
феноменами: течки, полового возбуждения и охоты.
Операция пересадки зародышей экономически выгодна только в том
случае, когда в качестве доноров берут выдающихся в племенном отношении
животных. В некоторых случаях для получения зародышей рекомендуют
использовать ценных в племенном отношении коров в заключительные сроки
их продуктивной жизни, чтобы получить от них больше потомков.
2. Вызывание суперовуляции. В решении данной задачи имеются два
принципиальных подхода. Первый подход - это обеспечение множественной
овуляции или полиовуляции у коров, ремонтных телок и у молодых телочек до
наступления половой зрелости; второй подход, находящийся пока в стадии
разработки, - изыскание способов извлечения яйцеклеток непосредственно из
яичников с дальнейшим созданием условий для их созревания и
оплодотворения in vitro. В настоящее время в практике используется в
основном первый способ. Животным, обычно в середине полового цикла,
вводят препараты гонадотропных гормонов, вызывающих усиленный рост и
развитие многих пузырчатых фолликулов и их овуляцию на фоне обратного
развития желтого тела.
Суперовуляцию считают достигнутой, если произошло выделение не
менее трех яйцеклеток (в отдельных случаях у животных их овулирует 100 и
более). Однако основной целью гормональной обработки являе,тся получение в
результате суперовуляции 10-20 оплодотворенных яйцеклеток.
У коров и телок для вызывания множественной овуляции применяют
гонадотропины гипофизарного и плацентарного происхождения; для обработки
используют разнообразные схемы. Наиболее эффективны гонадотропины
сыворотки жеребых кобыл (ГСЖК). Они вырабатываются в оболочках плода
особыми клетками, которые внедряются в эндометрий кобылы примерно с 36го по 40-й день беременности. Гонадотропины выделяются в кровь матери.
Наиболее высокое содержание ГСЖК в крови кобыл отмечается примерно с 60го по 90-й день беременности. Гонадотропины СЖК лучше всего применять в
середине полового цикла: с 8-го по 15-16-й день. Препараты вводят однократно
в дозе от 2 тыс. до 3 тыс. ИЕ. Через 48 ч после введения ГСЖК инъецируют
простагландин Фг (ПГФ2) или один из его синтетических аналогов. Обычно
через 2 дня возникает стадия возбуждения полового цикла с проявлением
течки, общего возбуждения, охоты и овуляции. В этот период осеменяют
животных-доноров.
Преимуществом ГСЖК является их доступность (можно получать в
необходимом количестве при наличии достаточного числа беременных кобыл).
Но они медленно инактивируются в организме, период полураспада
гонадотропинов в организме коров составляет 6 дней, и их еще можно
обнаружить в крови через 10 дней после введения. Гонадотропины после
овуляции оказывают вредное влияние на качество развивающихся
оплодотворенных яйцеклеток. При этом увеличивается возможность
формирования фолликулярных кист яичников. Поэтому были предприняты
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 30 из 40
попытки ограничить действие ГСЖК путем использования сыворотки,
содержащей антитела. Антисыворотку к ГСЖК вводят донорам после
суперовуляторной обработки в начале проявления стадии возбуждения
полового цикла, но результаты не всегда бывают надежными. Многие авторы
считают, что благодаря введению антисыворотки у подопытных животныхдоноров увеличивается количество овулирующих фолликулов по сравнению с
контрольными животными, существенно уменьшается число фолликулов с кистозной дистрофией, а также наблюдается положительное влияние на
оплодотворяемость овулирующих яйцеклеток.
С целью вызывания множественной овуляции можно применять
препараты фолликулостимулирующего гормона (ФСГ). Они дают такую же
эффективность, как ГСЖК, но их сложнее получать. Суперовуляцию можно
вызывать ФСГ, получаемыми из гипофизов свиней и овец. Эти препараты
имеют короткий период активности. Так, период полураспада ФСГ из
гипофизов овец составляет 5 ч. По этой причине их назначают в снижающейся
дозировке по 2 раза в день в течение 5 дней (первый и второй дни утром и
вечером по 5 мг, третий день - соответственно по 4 мг, четвертый - по 3 мг и
пятый - по 2 мг), всего 10 доз. Вводить ФСГ обычно начинают с 9-го по 11-й
день полового цикла. В ряде стран ФСГ используют в комбинации с
лютеинизирующим гормоном (ЛГ) в соотношении 5:1 или в сочетании с
простагландинами, которые инъецируют на третий день после начала
обработки; в среднем через 48 ч после их введения животные-доноры
проявляют стадию возбуждения полового цикла.
Ряд авторов сообщают, что после применения препаратов ФСГ получают
больше зародышей, пригодных к пересадке, чем при использовании ГЖСК.
Некоторые авторы предлагают при использовании ФСГ упростить
стандартную схему обработки и вместо двукратных проводить одноразовые
инъекции в течение 5 дней. Этим достигается снижение затрат труда,
уменьшение стрессорных влияний обработок на донора и повышается
количество овуляций с 6,4 и до 8,1.
При различных режимах обработки число овулировавших фолликулов у
разных животных очень сильно варьирует. Это зависит, от индивидуальных
особенностей животных и многих других факторов. Описаны различия в
чувствительности к ГСЖК у животных отдельных пород и линий крупного
рогатого скота. При этом молочные породы проявляют меньшую реакцию, чем
мясные. У телок наблюдается более высокая реакция, чем у коров.
Коровы-доноры должны всегда получать полноценный рацион. Имеются
четкие доказательства, что голодание коров-доноров в период после введения
ГСЖК заметно уменьшает количество овуляций. Исследования с помощью
лапороскопа показали, что множественная овуляция у коров и телок является
длительным процессом и после общепринятой обработки (ГСЖК, ФСГ +
ПГФг) продолжается 24 ч и более. Если в одном яичнике происходит более 910 овуляций, то он настолько увеличивается, что фимбрии яйцепровода
неспособны его окружить и часть яйцеклеток может попадать в брюшную
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 31 из 40
полость. Имеются предположения, что использование предварительного
анализа индивидуального гормонального фона у конкретных животных
позволит лучше понять причины нарушений при суперовуляторной реакции и,
модифицируя гормональные обработки с учетом физиологического состояния
животных, можно уменьшить вариабельность в количестве овуляций и снизить
число нереагирующих животных.
12. Трансплантация эмбрионов и его значение
1.Осеменение доноров.
2.Извлечение зародышей.
3.Оценка, культивирование и хранение зародышей.
Осеменение доноров. Для их осеменения берут сперму выдающихся
быков-производителей, проверенных по качеству потомства и признанных
улучшателями продуктивности. Имеются доказательства, что при
использовании некоторых быков достигается более высокая степень
оплодотворяемости коров-доноров, поэтому следует оценивать быков и по
данному показателю. Отбор быков и работу со спермой проводят с
соблюдением ветеринарно-санитарных правил и согласно действующей
инструкции по искусственному осеменению коров и телок. После
гормональной обработки доноров у них с помощью быков-пробников выявляют
половую охоту не менее 2 раз в день. Примерно у 10-12% животных признаки
стадии возбуждения полового цикла не проявляются. Осеменение животных, у
которых обнаружена охота, проводят несколько раз с 12-часовыми интервалами
до ее окончания, иногда ее повторяют 3-4 раза. В каждой дозе спермы должно
быть не менее 40-50 млн. живых подвижных спермиев.
Некоторые зарубежные авторы вводят сперму в полость тела матки.
Имеются также рекомендации вводить одну порцию спермы в левый, а вторую
- в правый рог матки. Свежие спермии сохраняют жизнеспособность в половых
путях самок дольше, чем замороженные и оттаянные. Поэтому при
использовании свежей спермы в течение охоты можно проводить 1-2
осеменения. При этом достигается более высокая степень оплодотворяемости.
Нецелесообразно осеменять доноров в отдаленные сроки после окончания
охоты, поскольку в дальнейшем это может оказывать вредное влияние на
степень извлечения пригодных к пересадке зародышей.
Извлечение зародышей. Оплодотворение яйцеклеток происходит в яйцепроводе. Образовавшиеся зиготы подвергаются дроблению, и большинство из
них у крупного рогатого скота попадают в матку на 4-й день. Зародыши
целесообразно извлекать на 7-8-й день после первого осеменения (до
освобождения зародыша из прозрачной оболочки). Для извлечения зародышей
используют два способа: нехирургический и хирургический.
При нехирургическом способе извлечения зародышей животных
фиксируют в станке. Прямую кишку освобождают от содержимого и проводят
тщательное ректальное исследование. Определяют, сколько желтых тел
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 32 из 40
находится в каждом яичнике. Хвост с помощью тесемки привязывают к
ошейнику. Проводят туалет и дезинфекцию наружных половых органов и
промежности. Для прекращения перистальтики прямой кишки эпидурально
вводят 10 мл 2%-ного раствора новокаина. Для вымывания зародышей из матки
применяют различные инструменты. Большинство авторов используют гибкий
одноходовый катетер Фолея с упругим мандреном и надувным баллончиком.
Инструмент должен быть стерильным. Сперва катетер вводят во влагалище по
верхнему его своду и проводят под ректальным контролем через канал шейки
матки в рог матки. Для более полного извлечения зародышей нужно, не
травмируя слизистую оболочку, как можно глубже ввести инструмент в рог
матки. После того как катетер достигнет в роге матки необходимого
положения, мандрен удаляют и в баллончик катетера накачивают 10-15 мл
воздуха. При этом катетер фиксируется в роге матки и промывная жидкость не
вытекает мимо катетера.
Закрепив катетер, промывают полость рога матки с помощью шприца
Люэра емкостью 50-60 мл. В рог матки в зависимости от его величины вводят
порциями от 40 до 60 мл промывной жидкости, затрачивая на промывание
каждого рога не более 500 мл. Наполнение матки промывной средой и степень
ее оттока контролируют ректально.
Для более полного извлечения зародышей верхушку рога матки
приподнимают и выпрямляют. Некоторые авторы рекомендуют яйцепровод
вблизи верхушки рога матки осторожно зажать большим и указательным
пальцами. При этом предотвращается поступление в брюшную полость
жидкости, содержащей зародыши. Однако практика показывает, что
поступление в брюшную полость жидкости из рога матки отмечается только
при наличии большого давления в матке, поэтому яйцепровод можно не
зажимать. Перед извлечением катетера следует удалить воздух из баллончика.
Таким же образом промывают и второй рог.
В качестве среды для промывания используют фосфатно-буферный
солевой раствор (ФБС) Дюльбекко.
Собранную в цилиндр промывную жидкость отстаивают 20-35 мин при
температуре 20-37 °С, чтобы зародыши опустились на дно, после чего верхний
слой удаляют с помощью сифона. Нижний слой жидкости порционно по 20-30
мл для обнаружения зародышей исследуют в больших часовых стеклах или
чашках Петри под бинокулярной лупой при 10-50-кратном увеличении.
Найденных зародышей с помощью пастеровской пипетки переносят в среду для
кратковременного хранения (среда Дюльбекко с добавлением 20% фетальной
сыворотки теленка). После оценки зародышей их культивируют при 37 °С до
момента пересадки или оставляют для хранения.
Хирургическим способом извлечение зародышей проводят при общем или
местном обезболивании. Разрезают брюшную стенку по белой линии или чаще
в области голодной ямки справа или слева, подтягивают рог матки к
поверхности раны, делают разрез вблизи его основания и вставляют
специальный катетер. При этом методе получают до 70% жизнеспособных
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 33 из 40
зародышей. У кролика, свиньи, овцы, коровы и кобылы можно извлекать
зародышей непосредственно из яйцепровода (в течение первых 4 дней после
осеменения). Однако хирургический способ, по мнению многих специалистов,
имеет лишь научное значение. Он трудоемкий, требует больших расходов, и
поэтому в настоящее время его применяют только у мелких животных (овец,
коз и др.). После операции у животного значительно снижается уровень
молочной продуктивности, имеется риск потери высокоценного донора при
общем обезболивании. Его нельзя часто повторять, так как в
послеоперационный период образуются спайки, из-за чего возникают
трудности в извлечении зародышей, а затем могут развиваться необратимые
изменения, приводящие к бесплодию доноров.
Оценка, культивирование и хранение зародышей. Специальные
исследования свидетельствуют, что частота отклонений от нормы у яйцеклеток,
выделившихся во время суперовуляции, более высокая, чем при овуляции у
животных без гормональных обработок. Поэтому после суперовуляции
оплодотворяются не все яйцеклетки, а из оплодотворившихся яйцеклеток не
всегда развиваются полноценные зародыши, пригодные к пересадке. В связи с
этим для достижения высоких результатов отбирают зародышей, способных к
дальнейшему развитию в организме реципиента. Наиболее широкое
распространение получили способы оценки качества и жизнеспособности
зародышей по морфологическим признакам и по результатам их
культивирования.
Морфологическую оценку зародышей проводят с использованием
инвертированного микроскопа МБИ-13. При этом учитывают соответствие
стадии развития зародыша его возрасту, целостность и форму прозрачной
оболочки, равномерность дробления бластомеров и состояние их цитоплазмы,
величину и прозрачность перивителлинового пространства. Зародыши с
признаками дегенерации, уродств и недоразвития для пересадок непригодны.
После морфологической оценки зародышей до пересадки можно
кратковременно хранить в термостате при температуре 37 °С. При этом их
помещают на часовое стекло в 0,5 мл среды Дюльбекко с добавлением 20%
фетальной сыворотки теленка или сыворотки овцы. Часовые стекла с
зародышами ставят в чашки Петри, на дно которых кладут увлажненную
фильтровальную бумагу. Таким образом сохраняется жизнеспособность
зародышей и обеспечивается возможность более точного выявления их
полноценности.
Разработаны и другие способы культивирования зародышей вне
организма, позволяющие сохранять их жизнеспособность до 24-48 ч.
Зародышей можно культивировать в пробирках, а также в ампулах и пайетах из
поливинилхлорида. До 4-7 дней сохранить их можно в перевязанном
яйцепроводе кролика. Однако наиболее перспективным методом является
глубокое замораживание зародышей в жидком азоте при температуре - 196 °С.
Зародыши крупного рогатого скота лучше других переносят замораживание и
размораживание; выживаемость - 50-70%.
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 34 из 40
13. Трансплантация эмбрионов и его значение
Отбор самок рецепиентов
Синхронизация полового цикла животных-реципиентов с половым
циклом доноров
Пересадка зародышей реципиентам.
Отбор реципиентов. Реципиент - животное, которому трансплантируют
(пересаживают) в матку одного или двух зародышей на ранней стадии их
развития. После пересадки в организме реципиента должны быть обеспечены
оптимальные условия для дальнейшего развития зародыша и рождения
жизнеспособного плода. Реципиентов отбирают в количестве 6-8 голов на
каждого донора из числа животных, не имеющих большой племенной
ценности. При этом используют телок в возрасте 16-18 мес с живой массой 350380 кг или коров не старше 7 лет. Животные должны быть здоровыми, без
признаков нарушения обмена веществ. Успех пересадок в значительной
степени зависит от физиологически полноценного течения половых циклов и
правильного определения охоты у реципиентов. Необходимо тщательно
контролировать течение последних двух половых циклов и все дальнейшие
показатели регистрировать в соответствующей документации (календарь
полового цикла). Половые циклы должны протекать регулярно, быть
полноценными, с синхронным формированием стадии возбуждения. Животных
с нерегулярными, неполноценными половыми циклами, с ненормальной
продолжительностью отдельных феноменов стадии возбуждения полового
цикла исключают из числа реципиентов. Реципиенты должны быть в состоянии
средней упитанности, с хорошим физическим развитием, иметь крупный,
правильной формы таз. Яичники и матка должны быть нормально развитые, без
патологических изменений.
Отобранных реципиентов еще раз обязательно обследуют перед
трансплантацией зародышей. Яичники должны быть типичными для
соответствующей стадии полового цикла, без кист. Уточняют степень развития
и положение желтого тела.
Синхронизация полового цикла животных-реципиентов с половым
циклом доноров. При пересадке зародышей состояние всего организма и
половой системы реципиента, в том числе состояние яичников, фаза
дифференцировки эндометрия, должны соответствовать стадии развития
зародышей. Только в этом случае последние попадают в условия,
благоприятные для их приживления и развития. Если разница в сроках
проявления полового цикла между донором и реципиентом составляет более 24
ч, то частота беременностей после пересадок резко снижается. Пересадку
зародышей в производственных условиях лучше проводить при точной
синхронности полового цикла у доноров и реципиентов. В случае неточного
совпадения предпочтение отдается реципиентам, у которых охота проявилась
несколько раньше, чем у доноров.
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 35 из 40
Результаты 2556 пересадок зародышей (Schneider и др., 1980) показали,
что при точной синхронизации доноров и реципиентов беременность после
пересадки развивалась у 67 % животных. Если охота у реципиента была на 12 ч
раньше или позже, чем у донора, беременность устанавливали у 60-61%
реципиентов.
Пересадку зародышей реципиентам удавалось осуществить только до 16го дня после выявления охоты. В более поздние сроки беременность не
развивается, так как начинается обратное развитие желтого тела и в
проводящих половых путях протекают процессы разрушения и обновления
слизистых оболочек и подготовки их к очередной стадии возбуждения
полового цикла. Аналогичные изменения проявляются во всем организме
самки. Поэтому если имеется большое поголовье животных (200-400
реципиентов), то для осуществления пересадок подбирают коров и телок, у
которых стадия возбуждения полового цикла естественно наступила в те же
сроки, что и у доноров. При небольшом количестве животных-реципиентов
возникает необходимость в синхронизации полового цикла у реципиентов и
доноров путем использования простагландинов и гестагенов. Через 2-3 дня
после применения этих препаратов коровы и телки приходят в охоту.
Необходимо учитывать, что проявление начала стадии возбуждения полового
цикла у отдельных животных различное, поэтому в каждом случае для
своевременного и полного выявления охоты нужно проводить тщательные
наблюдения с использованием самцов-пробников.
При использовании замороженных зародышей нет необходимости в
синхронизации полового цикла реципиентов и доноров. В этом случае
зародышей можно пересаживать в сроки, когда у реципиентов естественно
наступят соответствующие дни полового цикла.
Пересадка
зародышей
реципиентам.
Пересадку
зародышей
осуществляют хирургическим и нехирургическим способами. Непосредственно
перед пересадкой еще раз обследуют состояние здоровья и половой системы
реципиентов, выявляют, в каком яичнике находится желтое тело,
соответствуют ли его величина и консистенция срокам полового цикла.
Наилучшим местом пересадки считают верхушку рога матки, прилегающего к
яичнику с желтым телом.
Хирургический способ пересадки зародышей чаще применяют на телках.
Можно использовать оперативный доступ с разрезом по белой линии живота.
Подготовка животного и техника операции почти такие же, как при извлечении
зародышей. Рог матки подтягивают к разрезу, его стенку перфорируют тупой
иглой в участке с наименьшим количеством сосудов, примерно в 4 см от
верхушки рога. Затем через маленькую ранку зародыш с помощью
пастеровской пипетки в небольшом количестве среды для культивирования
вводят в направлении верхушки рога. После этого зашивают брюшную стенку
по всем правилам хирургической операции.
Более удобным, практичным и быстрым является хирургический способ
пересадки зародыша с разрезом брюшной стенки в области голодной ямки.
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 36 из 40
Оперируют животных в стоячем положении с использованием успокаивающих
средств и местного обезболивания. Разрез должен быть расположен как можно
дальше в каудальном направлении. Верхушку рога матки подводят к разрезу,
удерживая пальцами за широкую маточную связку. Зародыша пересаживают по
направлению к верхушке рога матки, как при операции по белой линии живота;
приживляется до 85% зародышей.
Нехирургический способ пересадки зародышей более пригоден для
использования его в производственных условиях. Для этого применяют
различные катетеры. Часто используют прибор для искусственного осеменения
Касу в модифицированной форме с длиной трубки 50 см и наружным
диаметром 2,5 мм. Зародыш подготавливают к пересадке в стерильной тонкой
трубочке диаметром 1 мм и объемом 0,25 мл. Присоединив шприц к трубочке
со стороны фильтра, набирают столбик среды для культивирования (высотой 1
см), затем такой же столбик воздуха и среду с зародышем (контролируя под
бинокулярной лупой). После этого вновь набирают столбик воздуха и среду для
культивирования. Набранная в трубочку среда достигает фильтра с
поливиниловым спиртом; фильтр набухает и больше не пропускает воздуха,
поэтому из пластиковой соломины ничто не вытекает. Подготовленную
трубочку с зародышем вставляют в стерильный прибор для пересадки. Чтобы
предотвратить инфицирование прибора при пересадке, на негр почти во всю
длину надевают пластиковую оболочку.
Реципиентов к пересадке зародышей подготавливают так же, как и
доноров при нехирургическом извлечении. Для уменьшения сокращений матки,
снижения возможности повреждения эндометрия применяют маточный
релаксант.
Прибор вводят во влагалище и при достижении шейки матки снимают
тонкую оболочку. После этого прибор продвигают под ректальным контролем
через канал шейки матки и далее в рог матки ближе к его верхушке (примерно
на глубину 10 см). Затем содержимое из трубочки выталкивают движением
внутреннего поршня и прибор быстро, но осторожно извлекают из матки.
Приживаемость зародышей составляет 50%.
После пересадки животным создают условия кормления и содержания в
соответствии с зоогигиеническими требованиями, не допускают травмирования
и сильных отрицательных стрессовых воздействий. Организуют раннюю
рефлексологическую диагностику беременности, что исключает возможность
пропуска повторной охоты. Через 2 мес после пересадки проводят диагностику
беременности и бесплодия ректальным способом.
Пересадки на 7-й день после оплодотворения более успешны, поскольку
зародыши в этом возрасте меньше повреждаются при колебаниях температуры.
К этому времени снижается моторика матки, что уменьшает возможность
изгнания зародышей. Результативность пересадок снижается под влиянием
стресса при манипуляциях с маткой, травмировании эндометрия. Пересадка
зародышей является одним из. способов получения большого количества телят
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 37 из 40
продуктивных животных, но гарантии, что полученное потомство будет
повторять или превосходить по продуктивности своих родителей, нет.
Широта использования пересадок зародышей в практике зависит от
конкретных условий хозяйственной деятельности.
14. Физиология беременности кобыл.
1. Характеристика беременности как особого физиологического состояния
организма кобыл и ее виды
2. Роль плаценты как органа, обеспечивающего функцию питания, выделения,
дыхания и барьерно-защитную.
3. Влияние беременности на материнский организм
5. Анатомо-топографическое изменение половых органов, нейрогуморальная
регуляция и обмен веществ у самок при беременности. Влияние течения
беременности на получение полноценного приплода
Половой цикл кобылы составляет в среднем 22 дня, из них 5-7 дней
продолжается половая охота и 15-17 дней стадия полового покоя. Цикличность
кобыл бывает более выраженной в конце зимы, весной и летом. Осенью она
затихает или прекращается вовсе. Появление охоты у кобыл чаще всего бывает
незаметным, в связи с чем для ее определения приходится использовать
специальных жеребцов-пробников. Начало охоты у кобылы ещё не
свидетельствует о ее готовности к оплодотворенному осеменению. Обычно
овуляция зародышевого пузырька яичнике и выход из него яйцеклетки
происходят в конце охоты, примерно за сутки до её окончания. В коневодстве
возможно и применение искусственного осеменения кобыл свежей или глубоко
замороженной спермой. Такие способы позволяют шире использовать особо
ценных жеребцов-производителей и получат приплод от наиболее желательных
сочетаний.
В коневодстве нередки случаи отсутствия у кобыл охоты или полноценных
половых циклов, заканчивающихся овуляцией. Для стимуляции половой охоты
и полноценного цикла применяются биологические методы и специальное
медикаментозное
лечение.
При косячном методе случки жеребец выпускается в сформированный для него
косяк 20-25 кобыл) и весь сезон ходит с ним на отведенном участке пастбища.
Настоящий косячный жеребец сам управляет всей жизнью косяка, водит его на
водопой и соль, укрывает от ветров в затишные места, охраняет его от
хищников и других жеребцов. Жеребость кобылы продолжается 11 мес. В этот
период происходит сложная перестройка её физиологического состояния,
которая требует соответствующих условий для нормального развития плода и
развития здорового жеребенка. Организм жеребой кобылы очень чувствителен
к различным нарушениям режима содержания и кормления, что иногда может
привести к выкидышу плода. Абортами заканчиваются обычно и двойные
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 38 из 40
жеребости.
Жеребая кобыла может работать в достаточно напряженном режиме до 6-7 мес
жеребости, затем нагрузки снижаются вдвое. А с 9 мес она полностью
освобождается от работы. Перед выжеребкой кобыла становится беспокойной,
роет подстилку, ложится, встает. У нее набухает вымя и на соках появляются
капельки молозива. Выжеребка происходит обычно в ночные часы и
продолжается 20-40 мин. Помощь кобыле в абсолютном большинстве случаев
не требуется. Сразу при выжеребке или в первые минуты после неё у кобылы
выходит и послед. Если кобыла не ослабла при выжеребке, то кобыла быстро
встает и облизывает детёныша, этим она высушивает и массирует его тело,
стимулируя дыхание. Слизываемая околоплодная жидкость оказывает
стимулирующее воздействие на инволяцию матки и быстрое наступление
половой охоты (на 7-11 день после родов). Родившийся жеребенок способен в
первые же часы встать на ноги и даже следовать за матерью.
Молодая кобыла может и не проявить материнского инстинкта и не кормить
своего
жеребенка.
Первая
охота
после
родов
наступает.
При скрещивании домашних лошадей с родственными им представителями
рода Equus – ослами, зебрами, куланами – получаются гибриды (мулы, лошаки,
зеброиды, куланоиды), которые обычно бесплодны. При скрещивании с
лошадью Пржевальского потомство бывает плодовитым.
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 39 из 40
15Физиология родов и после родовой период
Понятие о родовом акте.
Анатомотопографические взаимоотношения плода и родовых путей во время
родов
Таз как путь для рождения плода
Предвестники родов , стадии ролов
УМКД042-1.18.24.29/03-2013
Редакция №1от «18» «09» 2013
Страница 40 из 40