Оогенез у насекомых и паукообразных

Оогенез у насекомых и паукообразных
Сценарий учебного видеофильма из видеокомплекса
«Видеопрактика по цитологии в НГУ».
Гусаченко А.М., Высоцкая Л.В.
Аннотация
Фильм
«Оогенез
у
насекомых
и
паукообразных»
является
частью
видеокомплекса «Видеопрактика по цитологии в НГУ». Он состоит из трех частей отдельных фильмов суммарной продолжительностью более 30 минут.
Первая часть –теоретическая. Фильм первый «Разнообразие форм оогенеза у
насекомых и паукообразных» описывает клетки зародышевой линии, разнообразие
форм оогенеза. Приводятся схемы организации яичников различного типа, которые
встречаются у насекомых и паукообразных. Длительность 11 мин. 29 с.
Вторая часть – практическая. Фильм второй «Изготовление препарата яичников
насекомых» иллюстрирует методику препарирования насекомых на примере серого
таракана, с выделением, фиксацией и окрашиванием яичников, и изготовления
тотального препарата. Длительность 8 мин. 28 с.
Третья часть – фильм «Галерея фотоснимков» описывает простейшие методики
цитохимического окрашивания для выявления ДНК, РНК, углеводов и липидов, и
препараты
разных
типов
яичников,
окрашенные
описанными
способами.
Длительность 10 мин. 50 с.
Методические материалы «Учебный видеокурс» подготовлен в рамках реализации
Программы развития НИУ-НГУ
Фильм 1.
Заглавный титр:
Гусаченко А.М., Высоцкая Л.В.
Видеопрактика по цитологии в НГУ.
Оогенез у насекомых и паукообразных.
Учебно-методическое пособие
разработано в рамках Программы развития НИУ – НГУ
Новосибирск 2013
Титр.
Фильм 1.
«Разнообразие форм оогенеза у насекомых и паукообразных»
Музыка. Фрагмент «Калимба» из библиотеки Camtasia
Слайд: Оогенез – процесс развития женских половых клеток от первичных половых клеток
до зрелых яйцеклеток
Текст. Оогенезом называют процесс развития женских половых клеток от первичных
половых до зрелых гамет. Все это - клетки зародышевой линии. Кроме того, в оогенезе
участвуют и соматические клетки. Мы проследим судьбу всех этих клеток у представителей
членистоногих животных, имеющих различные типы организации яичников.
Слайд:
КЛЕТКИ ЗАРОДЫШЕВОГО ПУТИ:
Первичные половые клетки (ППК)
Оогонии первичные
Оогонии вторичные
Ооциты 1 порядка
Ооциты 2 порядка
Зрелые ооциты
Текст. Традиционно в развитии клеток зародышевого пути выделяют следующие
стадии развития.
Первые в этом ряду - Первичные половые клетки, их еще называют примордиальными
- обособляются на ранних этапах эмбрионального развития.
Слайд. Эмбрион дрозофилы на стадии 5, видны ППК.
Текст. Например, у дрозофилы это происходит после девятого деления дробления.
Первичные половые клетки хорошо различимы в эмбриональной бластодерме.
Первичные половые клетки мигрируют в зачатки гонад и там становятся оогониями.
Слайд. Схема судьбы оогоний.
Текст. Оогонии делятся митозом. Выделяют первичные гонии. У насекомых это
стволовые клетки зародышевой линии, закрепленные в гермарии. В одних группах
животных дочерние клетки первичных оогониев переходят к мейозу, становясь ооцитами.
Видео. Схема деления вторичных оогониев.
Текст. В других группах дочерние клетки первичных оогониев также делятся митозом,
но уже с неполным цитокинезом. Их называют
вторичными оогониями или
цистобластами. В результате одного или нескольких таких делений образуется циста –
группа дочерних клеток - цистоцитов, соединенных между собой цитоплазматическими
мостиками и специальной внутриклеточной структурой – фузомой. Число клеток в цисте
зависит от количества митозов и равно 2n, где n- число митозов. Такая картина типична
для сперматогенеза, но у самцов эта циста дает 2n синхронно развивающихся
равноценных сперматоцита. У самок ооцитом становится одна из клеток цисты, она
претерпевает мейоз и все необходимые превращения.
Текст. Остальные клетки называют трофоцитами, они полиплоидизируют свой геном,
развивают высокую синтетическую активность и обеспечивают формирование будущего
яйца, после чего гибнут апоптозом.
Видео. Схема клеток цисты.
Текст. Клетки, вступившие в профазу первого деления мейоза, считаются ооцитами 1
порядка. Со стадии диплотены в них наблюдается так называемый «большой рост» - они
сильно увеличиваются в размерах.
Ооциты 2 порядка претерпели первое деление мейоза. Во многих группах животных
это происходит одновременно с овуляцией.
Слайд. Формирование ооцита: увеличение размера, накопление рибосом, мРНК,
белков -морфогенов, запасных веществ, образование оболочки яйца
Текст. В процессе роста и созревания ооцит значительно увеличивается и изменяется.
В нем накапливаются вещества, необходимые для автономного развития: запасы
пластических веществ и энергии в форме желтка, рибосомы, белки и мРНК белков,
регулирующих первые этапы развития эмбриона, образуется сложная защитная оболочка
яйца.
Слайд: Типы оогенеза: солитарный, алиментарный
Текст. В этом процессе всегда в той или иной степени участвуют другие клетки
организма. Для большинства животных характерен алиментарный тип оогенеза, при
котором формирование яйцеклетки происходит при участии вспомогательных клеток.
Слайд: Типы оогенеза: солитарный, алиментарный, фолликулярный, нутриментарный
Текст. В простейшем случае помогают только клетки соматического происхождения,
окружающие развивающийся ооцит – фолликулярные, а тип оогенеза называют
фолликулярным.
Фото. Фрагмент яйцевой трубочки таракана. Указаны ядро, ядрышко, фолликулярные
клетки.
Текст. Ооцит сам синтезирует основную массу необходимых мРНК, рибосом и белков.
Фолликулярные клетки участвуют в транспорте предшественников желтка и синтезе
оболочки яйца. Такой тип оогенеза встречается у некоторых насекомых, у всех
позвоночных животных.
Слайд: Типы оогенеза: солитарный, алиментарный, фолликулярный, нутриментарный
Текст.У многих насекомых и некоторых червей наблюдается нутриментарный тип
оогенеза, при котором в формировании ооцита принимают участие не только
фолликулярные клетки, но и клетки одного происхождения с ооцитом.
Фото: Фрагмент яйцевой камеры яичника мухи. Указаны трофоциты и ооцит.
Текст.Полиплоидные трофоциты или питающие клетки, объединенные в синцитий с
ооцитом, берут на себя основную нагрузку по синтезу и транспорту в него мРНК и
рибосом, а ядро ооцита в той или иной степени инактивируется. Это обеспечивает более
короткие сроки нутриментарного оогенеза по сравнению с фолликулярным.
Слайд: Дрозофила: ооцит + трофоциты= 1.4 х 104 n – 3 -5 дней
Текст. Вот, например, у дрозофилы на каждый ооцит приходится порядка 10 тысяч
гаплоидных геномов, и продолжительность оогенеза составляет всего 3 - 5 дней.
Слайд: Дрозофила: ооцит + трофоциты= 1.4 х 104 n – 3 -5 дней
Сверчок: ооцит = 4n – 3 месяца
Текст. У Сверчка, имеющего паноистический тип оогенеза, при котором трофоциты
отсутствуют, формирование ооцита обеспечивается всего четырьмя гаплоидными
геномами, и оогенез продолжается более трех месяцев.
Титр. Яичник насекомого.
Видео. Схема яичника насекомого. Zoom на отдельные части трубочки.
Текст. Яичник насекомого организован следующим образом. Структурной единицей
яичника является яйцевая трубочка. Проксимальный ее конец заканчивается слепо концевой
нитью, дистальный открывается в яйцевод.
Слайд: Схема трубочки в районе гермария с указанием клеток.
Текст. В начале трубочки вблизи концевой нити располагаются одна или несколько
стволовых клеток зародышевой линии. Они прикреплены к специальным клеткам
соматического происхождения, образующим так называемую нишу. Клетки ниши своими
сигналами поддерживают способность клеток зародышевой линии к делению. Клетка ЗЛ
делится асимметрично: дочерняя клетка, отделившись от ниши, может поделиться несколько
раз и вступить в мейоз или сразу стать мейоцитом. Далее по трубочке расположены
соматические стволовые клетки, дающие начало фолликулярным клеткам.
Рассмотрим, как устроены трубочки разных типов.
Слайд: Схема развития паноистической трубочки. Указан гермарий.
Текст. Паноистическая. В результате деления оогония 1-го порядка образуются клетки,
которые вступят в профазу мейоза. Этот участок называют гермарием.
Фото. Гермарий яйцевой трубочки таракана.
Текст. Далее клетки
выстраиваются в цепочку и окружаются фолликулярными
клетками, Этот район называют вителларием, в нем в ооцитах начинается накопление
желтка.
Слайд:. Схема развития паноистической трубочки, указан вителларий.
Фото. Район вителлария трубочки таракана с молодыми ооцитами. Указаны ядра и
ядрышки.
Текст. В ооците активно работает ядрышко, синтезируются мРНК, необходимые для
начального развития.
Фото. Яйцевые трубочки таракана, окраска по Фельгену. Видны ядра фолликулярных
клеток.
Текст.
Размеры
ооцита
значительно
увеличиваются.
Фолликулярные
клетки
транспортируют в него предшественники желтка.
Фото. Фолликулярные клетки на поверхности ооцита таракана. Митоз.
Текст. Чтобы закрыть поверхность быстро растущего яйца, фолликулярные клетки
делятся митозом, затем полиплоидизируются. Также они синтезируют оболочку хориона.
Слайд:. Схема развития мероистической трубочки.
Текст. Мероистические трубочки. Стволовая клетка- оогоний 1-го порядка- делится,
образуя оогоний 2-го порядка. Эта клетка продвигается по гермарию, делясь еще
несколько раз, образуя цисту.
Слайд: Гермарий дрозофилы, специализация клеток, фузома.
В объеме цисты образуется так называемая фузома – комплекс структурных элементов
цитоскелета и ЭПС, связывающий все клетки цисты. Одна из клеток цисты станет
ооцитом, а остальные – трофоцитами. Ооцит вступит в мейоз, а трофоциты будут
полиплоидизировать свои ядра.
Слайд:Мероистические- политрофные- телотрофные.
Текст.
Мероистические
трубочки
бывают
двух
типов
в
зависимости
от
пространственного расположения ооцита и трофоцитов.
Слайды: Серия схем последовательного развития политрофной трубочки. Указаны
цисты, фолликулярные клетки.
Текст. Политрофная трубочка. О ее структуре хорошо известно на примере дрозофилы.
Клетки цисты сохраняют близкие контакты на протяжении всего развития и продвигаются
по яйцевой трубочке компактно.
Фото. Яйцевая камера мухи, фолликулярные клетки окружают цисту целиком.
Текст. Фолликулярные клетки сначала окружают цисту целиком, потом на
определенном этапе развития они пробираются между трофоцитами к ооциту и окружают
только его.
Слайд: Серия схем последовательного развития политрофной трубочки. Миграция
фолликулярных клеток.
Текст. Плоидность трофоцитов нарастает, они синтезируют различные РНК и
перекачивают их в растущий ооцит, обеспечивая его рибосомами и мРНК белков,
необходимых для раннего развития эмбриона.
Фото. Ядро ооцита мухи.
Текст. Ооцит вступает в мейоз, а его синтетическая активность снижена. У дрозофилы
даже отсутствует ядрышко и тельца Кахала.
Слайд: Схема последовательного развития политрофной трубочки. Более поздние
ооциты.
Текст. Когда ооцит достигает нужных размеров, трофоциты погибают апоптозом.
Фолликулярные клетки полиплоидизируются, обеспечивают транспорт предшественников
желтка и синтез оболочки хориона.
Слайд: Серия схем последовательного развития телотрофной трубочки.
Текст. Телотрофная трубочка. В гермарии происходит деление вторичных оогониев,
далее ооцит и его трофоциты разделяются пространственно. Ооцит окружается
фолликулярными клетками и продвигается вдоль трубочки, а трофоциты остаются в зоне,
следующей за гермарием, которую называют питающей камерой.
Слайд:Подробный рисунок телотрофной трубочки.
Текст. Трофоциты какое-то время сохраняют связь с ооцитом через трофический
стержень – удлинняющийся по мере продвижения ооцита цитоплазматический мост. При
этом трофоциты от разных ооцитов в трофической камере сливаются, образуя вторичный
синцитий. Таким образом, в трофической камере находится множество ядер трофоцитов в
общей цитоплазме.
Слайд:Оогенез солитарный, алиментарный
Текст. Значительно отличается от описанных типов оогенез у пауков и клещей, он –
типичный солитарный.
Слайд: Рисунок женской половой системы пакуа.
Текст. Ооцит развивается не только без питающих клеток, но и вообще не в составе
фолликулов. Яичник представляет собой тяж с прикрепленными к нему ооцитами.
Слайд: Рисунок фрагмента яичника паука.
Текст. Ооцит погружен в фолликулярные клетки только на ранних этапах оогенеза, а
по мере роста выпячивается из тяжа яичника. Весь объем синтеза обеспечивается ооцитом
самостоятельно.
Фото. Фрагмент яичника паука. Указаны ядра, ядрышки, «желточные ядра».
Текст. В ядре видно активно работающее ядрышко. В цитоплазме мы часто наблюдаем
так называемое «желточное ядро» - плотную концентрическую структуру, образованную
цистернами эндоплазматической сети, аппарата Гольджи и продуктами синтеза.
Таким образом, мы познакомились с организацией оогенеза у разных видов
членистоногих, которые наиболее ярко демонстрируют разнообразие типов развития
ооцитов у животных.
Слайд. Используемая литература

Боголюбов Д.С. Морфофункциональная компартментализация ядра ооцитов
беспозвоночных. Автореф.док. дисс. Санкт-Петербург. 2008.

Большой практикум по зоологии беспозвоночных. Типы: Кольчатые черви,
членистоногие / А. В. Иванов, А.С. Мончадский, Ю. И. Полянский, А. А. Стрелков.
М.: Высш. шк., 1983.Ч. 2.

Высоцкая Л.В., Агапова О.А. Оогенез у насекомых и пауков. Методическое
руководство к летней практике по цитологии. Новосибирск: Изд-во НГУ 2006, 26 с.

Дондуа А.К. Биология развития ( в двух томах) Санкт-Петербург 2004. 244 с.

Захваткин Ю.А. Курс общей энтомологии. М.: Колос. 2001. 376 с.

Lighthouse D.V., Buszczak M., Spradling A.C. New components of the Drosophila
fusome suggest it plays novel roles in signaling and transport // Dev Biol. 2008. May 1;
317(1): 59–71.

Calvi B.R., Lilly M.A., Spradling A.C. Cell cycle control of chorion gene amplification //
Genes ©& development. 1998. 12: 734–744.

Margolis J. Sprandling A. Identification and behavior of epithelial stem cells in the
Drosophila ovary // Development. 1995. 121, 3797-3807.
Фильм 2.
Изготовление препарата яичника насекомых
Заглавный титр:
Гусаченко А.М., Высоцкая Л.В.
Видеопрактика по цитологии в НГУ.
Оогенез у насекомых и паукообразных.
Учебно-методическое пособие
разработано в рамках Программы развития НИУ – НГУ
Новосибирск 2013
Титр:
Фильм 2.
Изготовление препарата яичников насекомых
Музыка. Фрагмент «Калимба» из библиотеки Camtasia
Видео. Препарирование таракана.
Текст. Давайте посмотрим, как можно сделать тотальный препарат яичника, предназначенный
для изучения его морфологии, окрашенный ацетоорсеином.
Препарировать насекомых удобно под бинокулярным микроскопом. Лучше использовать
темный фон, на котором неокрашенные органы смотрятся контрастно. Мы выбрали синий.
Используем падающий свет.
В большую чашку Петри наливаем немного физиологического раствора.
Для тренировки возьмем насекомое из лабораторной культуры таракана Nauphoeta cinerea,
личинку последнего возраста. Насекомое мы предварительно замариваем эфиром или
инсектицидным аерозолем.
Ножницами отрезаем брюшко сразу за третьей парой ног. Голову и грудь насекомого бросаем
обратно в морилку. Иголками надрываем или с помощью ножниц отделяем верхнюю часть
хитинового корпуса от нижней целиком или по сегментам, как получается с тараканом.
Процесс препарирования обычно долгий, стараемся не повредить нужные органы.
У этих насекомых много жировой ткани- вот это белое жировое тело, в нем виден коричневый
желудок.
Убираем желудок и кишечник, в жировой ткани ищем яичники.
Парные яичники располагаются в последних члениках брюшка, на спинной стороне, у этого
таракана они маленькие. У таракана яичник прозрачный, погружен в белую жировую ткань.
Видео. Яичник в бинокулярном микроскопе.
Вот мы выделили яичник, это он под микроскопом. Видны отдельные ооциты. А это кусок
жирового тела. А это перистальтика в яйцеводе.
Видео. Как фиксировать.
Текст. Нашли яичник, очищаем его от жирового тела.
Далее кладем яичник в фиксатор, на стекло, в лунку или планшетку. В такой герметичной
планшетке фиксировать лучше всего: фиксатор не высыхает. Смело оставляем яичник в
фиксаторе на 40 минут.
За фиксацией в лунке или на стекле придется постоянно следить: спирт-уксусная смесь будет
испаряться, ее надо постоянно подкапывать.
Видео. Окрашивание в ацетоорсеине.
Помещаем фиксированный яичник в каплю ацетоорсеина, накрываем какой-нибудь
крышечкой, чтобы уксус меньше испарялся.
Не забываем подписать препарат. Это легко сделать карандашом на матированной
поверхности стекла. Надписи карандашом по-прежнему остаются наиболее стойким при всех
последующих манипуляциях с препаратом.
Наблюдаем за окрашиванием ткани. Степень окрашивания обычно оценивают на глаз, это
удобно делать на контрастном фоне. Теперь фон лучше выбрать светлый, белый, или вообще
смотреть препарат с нижним источником света.
Когда ткань окрашена достаточно, убираем фильтровальной бумагой краску и 45 % уксусной
кислотой немного отмываем лишнюю. Пролилось лишнее – вытираем.
Далее отмываем в воде, осторожно, ткань легко цепляется на фильтровашку! Окончательно
укладываем и расправляем. Помещаем в 50% глицерин.
Мы делаем тотальный препарат- стараемся сохранить яичник неповрежденным. Чтобы
предохранить его от раздавливания под весом покровного стекла, подложим под уголки
кусочки пластика от бутылки. Раз, два, три, четыре кусочка.
Накрываем покровным стеклом – препарат готов!
Другие способы окрашивания требуют, как правило, таких же манипуляций, но с другими
реактивами.
Фильм 3.
Галерея фотоснимков
Заглавный титр:
Гусаченко А.М., Высоцкая Л.В.
Видеопрактика по цитологии в НГУ.
Оогенез у насекомых и паукообразных.
Учебно-методическое пособие
разработано в рамках Программы развития НИУ – НГУ
Новосибирск 2013
Титр.
Фильм 3.
Галерея фотоснимков.
Музыка. Фрагмент «Калимба» из библиотеки Camtasia
Текст.
Использование цитохимических реакций и специфических красителей позволяет
выявлять основные компоненты клеток яичника.
Титр. Способы выявления веществ в клетке. Ацетоорсеин – общая морфология
клетки, хроматин.
Текст. Окраска ацетоорсеином после фиксации спирт-уксусной смесью позволяет
выявлять структуру ядра, хромосом, общую морфологию клетки.
Титр. Способы выявления веществ в клетке. Метиловый зеленый с пиронином ДНК и РНК.
Текст. После аналогичной фиксации окраска смесью метилового зеленого и
пиронина выявляет нуклеиновые кислоты в клетке: метиловый зеленый окрашивает ДНК
– ядра и хромосомы, а пиронин – РНК – цитоплазму и ядрышко.
Титр. Способы выявления веществ в клетке. Окрашивание по Фельгену - количественное
связывание реактива Шиффа с ДНК
Текст. Применение реактива Шиффа при гидролизе ДНК клеток соляной кислотой
позволяет количественно окрасить ДНК по Фельгену.
Титр. Способы выявления веществ в клетке. ШИК- реакция -
связывание реактива
Шиффа полисахаридами и протеогликанами.
Текст: Обработка клеток перйодатом гидролизует протеогликаны и полисахариды
и позволяет окрашивать их.
Титр. Способы выявления веществ в клетке. Судан Черный – липиды и фосфолипиды.
Текст: Наконец, жирорастворимый краситель Судан черный позволяет окрашивать
жиры и фосфолипиды, но для этого надо использовать фиксатор, не растворяющий жиры
– формалин.
Титр. Паноистический яичник таракана. Окр. метиловым зеленым с пиронином.
Фото. Яичник таракана, окрашенный метиловым зеленым с пиронином.
Текст. Рассмотрим препарат яичника таракана, окрашенный метиловым зеленым с
пиронином. На малом увеличении хорошо видна цепочка растущих ооцитов разного
размера и концевая нить. При этой окраске ядра окрашиваются в сине-зеленый или
фиолетовый цвет. Ярко окрашены ядра фолликулярных клеток: они мелкие и компактные,
плотность ДНК в них высокая. Окрашивание ядра ооцита слишком бледное и не
различимо глазом: то же самое содержание ДНК, что и в фолликулярных клетках,
приходится на гораздо больший объем. Цитоплазма ооцитов окрашена в розовый цвет
различной интенсивности: эту окраску дает РНК, которая накапливается в ооците.
Фото. Концевая нить яичника таракана.
Текст. Это концевая нить. Ее клетки важны в поддержании статуса стволовых
клеток. Хорошо видны синие ядра.
Фото. Гермарий яичника таракана.
Текст. Это гермарий. Видно много синих ядер. Где-то здесь расположены оогонии,
а в этом районе стволовые фолликулярные клетки.
Фото. Фрагмент яичника таракана с мелкими ооцитами.
Текст. В этом участке трубочки уже видны мелкие ооциты, которые построились в
цепочку и окружаются фолликулярными клетками. Ооциты начали накапливать РНК цитоплазма ярко окрашена. В ядрах видно ядрышко. А эти синие глыбки хроматина –
фрагменты ядер: часть ооцитов погибла апоптозом.
Фото. Ооцит таракана, ядрышко и тельца Кахала.
Текст. А здесь окраска бледная, но ядерные структуры видны по преломлению
света. В ооците - кольцевое ядрышко. А это - тельца Кахала – участки в ядре, где
организована активная транскрипция.
Фото. Трубочки таракана, окрашенные по Фельгену.
Текст. На этой фотографии окраска по Фельгену. В паноистических трубочках
хорошо окрашиваются только ядра фолликулярных клеток. Окраска ядер ооцитов не
видна из-за низкой плотности ДНК.
Титр. Политрофный яичник бабочки.
Текст. Это политрофный яичник бабочки, окрашенный метиловым зеленым с
пиронином. Оогенез у бабочки отличается от оогенеза Diptera тем, что ооцит отделяется
собственной оболочкой из фолликулярных клеток на самых ранних стадиях развития.
Хорошо видны синие ядра столбчатого фолликулярного эпителия вокруг ооцита. Ядра
питающих клеток огромного размера и полиплоидные. На диплоидном ядре ооцита
окраска не выявляется. Интенсивно окрашена в розовый цвет из-за накопления РНК
цитоплазма питающих клеток и центральная часть ооцита.
Фото. Политрофная трубочка бабочки, окрашенная по Фельгену 1.
Текст. Окраска по Фельгену. Интенсивно окрашиваются ядра питающих и
фолликулярных клеток. Ядра трофоцитов в высокой степени полиплоидные. Трофоцитов
в камере около 8, значит в цисте было 3 деления.
Фото Политрофная трубочка, окрашенная по Фельгену 2, 3.
Текст. А на этой стадии питающие клетки уже передали цитоплазму ооциту и
будут дегенерировать. Поверхность ооцита покрыта фолликулярными клетками разной
плоидности, которые также погибнут.
Фото. Яйцевая трубочка бабочки, ШИК-реакция на полисахариды.
Текст. А это ШИК-реакция на полисахариды. Интенсивность окраски ооцитов
нарастает по мере их роста.
Фото. Отдельные яйцевые камеры на большом увеличении, три стадии.
Текст. Цитоплазма ооцита окрашена ярко, все полисахариды переносятся сюда.
Питающие клетки светлые, в них видны отдельные гранулы. С определенной стадии вся
цитоплазма ооцита закрашивается. Участок ядра остается не окрашенным.
Более поздняя фаза. Ядра трофоцитов светлые, цитоплазма слабо розовая. Ооцит
окрашен уже очень плотно, ядро почти не просвечивает.
Фото. Трубочка бабочки, ШИК-окраска.
Текст. Это трубочка другой бабочки, окраска аналогичная. Видна динамика
накопления полисахаридов.
Титр. Политрофные яичники перепончатокрылого, окр. суданом черным.
Фото. Фрагмент яичника перепончатокрылого 1.
Текст. А это политрофные трубочки перепончатокрылого насекомого, окрашенные
метиловым зеленым с пиронином. Для перепончатокрылых характерно сегментирование
трубочки, когда ооцит расположен более изолированно от трофоцитов, как будто в
отдельной яйцевой камере. Камера с трофоцитами, камера с ооцитом.
Здесь хорошо видно, как на определенной стадии развития уже крупного ооцита
трофоциты вступают в апоптоз: ядра сжимаются и ярко окрашиваются.
Фото. Фрагмент яичника, окраска по Фельгену.
Текст. А это яичник того же насекомого, окрашенный по Фельгену. У данного вида
трофоцитов около 30, значит в цисте прошло 5 делений.
Видны ядра ооцита и трофоцитов. Здесь они одного размера. По интенсивности
окраски видно, что плоидность значительно различается: в ооците сейчас 4С, а в
трофоцитах в несколько раз больше.
Фото. Фрагмент яичника перепончатокрылого, окрашенный суданом черным.
Текст. А это тоже яичник перепончатокрылого, но окрашенный суданом черным на
липиды и фосфолипиды.
Фото. Эта же трубочка перепончатокрылого, на большом увеличении.
Текст. Окрашивается цитоплазма и ооцита, и трофоцитов, ядра остаются
слабоокрашенными.
Фото. Фрагмент на большом увеличении.
Фрагмент трубочки на большом увеличении. Во всех клетках- фолликулятных,
трофоцитах и ооците - цитоплазма более окрашена.
Фото. То же, более поздняя стадия.
Здесь то же самое: ободок окрашенной цитоплазмы вокруг трофоцитов и совсем
темный ооцит, где липиды накапливаются.
Титр. Телотрофный яичник.
Фото. Телотрфный яичник жука, окр. Суданом.
Текст. А это телотрофный яичник жука, окрашенный суданом. На конце
расширение – трофическая камера, дальше идет трубочка с растущими ооцитами.
Заметно, как в ооцитах увеличивается количество липидов.
Фото. Другой фрагмент яичника.
Текст. Трубочки у жуков длинные, Много мелких ооцитов.
Фото. Яичник жука, метиловый зеленый с пиронином.
Текст. Это трубочки жука, окраска метиловым зеленым с пиронином. Хорошо
видны трофические камеры, розовые ооциты в ободке из синих ядер фолликулярных
клеток. Рассмотрим все это на максимальном увеличении.
Фото. Тот же препарат. Трофическая камера на большом увеличении.
Текст. Это полиплоидные ядра трофоцитов в трофической камере.
Фото. Выход из трофической камеры.
Текст. Это выход из трофической камеры. Здесь молодые ооциты пока без
фолликулярных клеток выстраиваются в цепочку и проходят дальше по трубочке. Далее
они окружаются фолликулярными.
Фото. Цепочка растущих ооцитов.
Текст. Здесь ооциты разного размера уже окружены фолликулярными клетками. В
этом участке видно 5 ооцитов, последний заметно отличается количеством накопленной
РНК. Еще хорощо виден трофический стержень – длинный цитоплазматический мост, он
протянут как кабель из трофической камеры к крупному ооциту за пределами кадра.
Фото. Фрагмент трубочки, где видно несколько трофических стержней.
Текст. А на этой фотографии трофические стержни проходят по поверхности более
молодых ооцитов. Вот эти фиолетовые участки покрыты фолликулярными клетками, а
здесь лежат стержни.
Фото. Фрагмент яйцевой трубочки клопа.
Текст. А это яйцевая трубочка клопа. Они более короткие.
Титр. Яичник паукообразных
Фото. Фрагмент яичника паука.
А это фрагмент яичника паука, окрашенный ацетоорсеином в формате оттенков
серого. В одном участке яичника расположено ооциты разных размеров на разных стадиях
развития. Вот эти мелкие ядра принадлежат фолликулярным клеткам. В ооцитах крупное
круглое ядро с несколькими ядрышками.
Фото. Ядро ооцита с ядрышком крупно.
Текст. А это ядро ооцита на большом увеличении. Видно кольцевое ядрышко.
Фото. Фрагмент яичника, ооциты с желточными ядрами.
Текст. Это окраска суданом черным. На этой фотографии в ооцитах выявляются
так называемые желточные ядра - концентрические образования в цитоплазме,
образованные ЭПС и аппаратом Гольджи. В углу виден фрагмент крупного сетчатого
ооцита.
Фото. Фрагмент яичника.
Текст. На этой фотографии заметно, что мелкие ооциты погружены в
фолликулярную ткань.
Фото. Фрагмент яичника, окрашенный по Фельгену.
Текст. Это окраска по Фельгену в сером спектре. Отчетливо видны «ножки» из
фолликулярных клеток, с помощью которых более крупный ооцит сохраняет связь с
яичником.
Фото. Фрагмент яичника клеща.
Текст. Это яичник клеща, окрашенный ацетоорсеином. Он устроен так же, как
яичник паука. Хорошо видны длинные тяжи фолликулярных клеток, к которым крепятся
ооциты.
Слайд: Конец фильма
Музыка. Фрагмент «Калимба» из библиотеки Camtasia