Инструкция к набору ФИБРИНОГЕН ТЕСТ

ФИБРИНОГЕН-ТЕСТ
Набор реагентов для определения содержания
фибриногена в плазме человека по методу
Клаусcа
Определение содержания фибриногена в плазме крови человека
является одним из четырех базовых тестов. Измерения содержания фибриногена в плазме проводят при гиперфибриногенемии,
которая связанна с тяжестью воспалительных, имунных, деструктивных процессов, а также является одним из факторов повышенного риска развития гипервискозного синдрома, артериальных тромбозов и инфарктов органов. Снижение концентрации
фибриногена наблюдается при остром ДВС-синдроме, при лечении фибринолитиками, при врожденных гипо- и дисфибриногенемиях.
Принцип метода.
Определение содержания фибриногена основано на измерении
времени свертывания разведенной плазмы избытком тромбина. В
этом случае время свертывания зависит только от концентрации
фибриногена в плазме. Концентрацию фибриногена определяют
по калибровочной прямой, используя плазму с известным содержанием фибриногена.
Состав набора.
1. Тромбин для определения фибриногена (2 мл) - 8 флаконов,
2. Плазма-калибратор (1мл) - 1 флакон,
3. Буфер имидазоловый концентрированный (5 мл) - 1 флакон.
Приготовление реагентов.
1. Рабочий буферный раствор. Буфер имидазоловый концентрированный (5 мл) перелить в мерную колбу вместимостью 100
мл и долить до метки дистиллированной водой (разведение в 20
раз), тщательно перемешать. Рабочий буферный раствор хранить
при температуре +2-8 0 С не более 1 месяца.
2. Тромбин для определения фибриногена. Тромбин человека,
лиофильно высушенный с активностью около 50 МЕ/мл. Внести
во флакон с лиофильно высушенным тромбином 2 мл дистиллированной воды и растворить содержимое при острожном покачивании. Реагент готов к проведению анализа через 20 минут после
разведения.
3. Раствор плазмы-калибратора. Во флакон с плазмой-калибратором внести 1 мл дистиллированной воды, растворить при
осторожном покачивании. Раствор готов к проведению анализа
через 20 минут после разведения.
Стабильность реагентов.
Реагенты
Тромбин для определения фибриногена
Раствор плазмы – калибратора
+2-80С
5 дней
+18-220С
2 дня
-18-200С
2 месяца
8 часов
4 часа
2 месяца
Чувствительность тромбина к гепарину.
В состав тромбина входит инактиватор гепарина, что позволяет
использовать данный реагент для измерения содержания фибриногена в гепаринизированных образцах плазмы больных.
Получение исследуемой плазмы для анализа.
Венозную кровь взять в пластиковую или стеклянную силиконированную пробирку на 3,8% (0.11моль/л) цитрате натрия (9:1),
центрифугировать 7 мин при 1000 об/мин, плазму перенести в
другую пробирку и повторно центрифугировать 15 мин при 3000
об/мин. Центрифугирование следует проводить как можно скорее
после взятия крови. Немедленно после центрифугирования перенести плазму в пластиковую пробирку. Для анализов достаточно
0,2 мл бедной тромбоцитами плазмы. Время хранения при комнатной температуре - не более 4 часов, при 2 - 8С не более 8 часов. Допускается однократное замораживание плазмы при температуре - 200С.
Построение и использование калибровочного графика.
Использовать только пластиковые или силиконированные стеклянные пробирки. Приготовить следующие разведения плазмыкалибратора:
Пробирка, №
Содержание фибриногена
в плазме-калибраторе, г/л
Рабочий буферный раствор, мл
Раствор плазмы-калибратора, мл
Перемешать и перенести в
пробирку, мл
1
2А*
2
А
3
0,5А
4
0,25А
0,8
0,5
0,5
0,5
0,2
-
-
-
0,5
0,5
0,5
*А – содержание фибриногена в плазме-калибраторе, указанная в
паспорте на набор.
Значения содержания фибриногена в г/л отложить на оси Х. На
оси Y отложить значения времени свертывания каждого разведенного образца плазмы-калибратора в секундах. Через полученные точки провести калибровочный график, который в билогарифмических координатах должен представлять собой прямую
линию. Линейность в диапазоне концентраций фибриногена от
0,6 - 1 до 5 – 6 г/л в зависимости от чувствительности коагулометра.
Проведение анализа.
Исследуемую плазму больного развести рабочим буферным раствором в 10 раз.
Внести в кювету анализатора:
Объем
Разведенная плазма-калибратор (исследуемая)
100мкл
Инкубировать при 37°С точно 2 минуты.
Тромбин для определения фибриногена
50 мкл
Зафиксировать время свертывания в секундах на коагулологическом анализаторе.
По калибровочному графику определить содержание фибриногена в плазме больного в г/л.
Интерпретация результатов.
В норме содержание фибриногена составляет 1,8 - 4г/л.
При анализе плазмы пациентов с высоким (более 4 г/л) содержанием фибриногена развести плазму в 20 раз, а полученное по
графику значение умножить на 2. Если содержание фибриногена
в плазме больного около 1 г/л, для уточнения полученного результата необходимо развести плазму в 5 раз и полученный результат разделить на 2.
Набор предназначен для всех типов коагулологических анализаторов, кроме тех, где используют суспензию каолина (необходимо обратить внимание на инструкцию, прилагаемую к коагулологическому анализатору). Кроме того, в инструкции к анализатору
обратите внимание на чувствительность прибора к данному тесту.
Меры предосторожности.
Все компоненты данного набора предназначены только для диагностики in vitro. Компоненты набора следует рассматривать, как
потенциально биологически опасные вещества, при работе с которыми необходимо соблюдать все меры предосторожности.
При работе с исследуемыми образцами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы
плазмы крови человека следует рассматривать как потенциально
инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать вирусы иммунодефицита ВИЧ1 и ВИЧ2, гепатита В или
любой другой возбудитель вирусной инфекции.
Контроль качества.
Нормальные и патологические значения содержания фибриногена следует контролировать с помощью контрольных плазм НПО
РЕНАМ:
Плазма контрольная на 4 параметра (Плазмы Н)
код КМ-1
Плазма контрольная на 11 параметров
код КМ-2
Плазмы контрольная патологическая на 4 параметра
код КМ-3
Плазмы контрольная патологическая на 11 параметров код КМ-4