фармакотоксикология и эффективность использования
advertisement
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет» На правах рукописи МИГИНА ЕЛЕНА ИВАНОВНА ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЯ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ ТРИЛАКТОСОРБ В МЯСНОМ ПЕРЕПЕЛОВОДСТВЕ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Кощаев Андрей Георгиевич Краснодар – 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ .............................................................................................................. 4 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ........................................................................................ 9 1.1 Роль микроорганизмов, как про- и пребиотических компонентов при разработке кормовых добавок ..................................................................... 9 1.2 Особенности культивирования пробиотических микроорганизмов........ 29 1.3 Применение энтеросорбентов в ветеринарии ........................................... 34 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ........................................... 42 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ .......................... 56 3.1 Состав, технология получения и оценка качества пробиотической кормовой добавки Трилактосорб ..................................................................... 56 3.2 Изучение жизнеспособности микрофлоры, входящей в состав пробиотической кормовой добавки Трилактосорб ........................................ 68 3.3 Оценка общего титра штаммов-пробионтов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб ..................................................................... 70 3.4 Оценка токсикологического и раздражающего действия пробиотической кормовой добавки Трилактосорб ........................................ 71 3.4.1 Определение токсичности на стилонихиях .................................... 72 3.4.2 Определение острой токсичности на лабораторных животных... 73 3.4.3 Определение хронической токсичности на лабораторных животных и птице ...................................................................................... 75 3.4.4 Определение кожно-резорбтивного и раздражающего свойства . 81 3.4.5 Оценка антибактериальной и кислотообразующей активностей штаммов-пробионтов ................................................................................. 84 3.5 Изучение фармакологических свойств пробиотической кормовой добавки Трилактосорб в перепеловодстве ...................................................... 89 3.5.1 Морфологические и биохимические показатели крови птиц ....... 89 3.5.2 Влияние на пищеварение .................................................................. 92 3.5.3 Мясная продуктивность, развитие внутренних органов и качество мяса перепелов ........................................................................................... 95 3.5.4 Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса перепелов ................. 103 3.6 Эффективность использования пробиотической кормовой добавки Трилактосорб .................................................................................................... 107 3.7 Экономическая эффективность применения кормовой добавки Трилактосорб .................................................................................................... 113 ЗАКЛЮЧЕНИЕ ................................................................................................... 118 ВЫВОДЫ ............................................................................................................. 138 ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ................................................................ 140 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ ........................................... 141 ПРИЛОЖЕНИЯ ................................................................................................... 166 3 ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы. Концепцией развития птицеводства, разработанной Министерством сельского хозяйства РФ на период до 2020 г. предусмотрено увеличение производства мяса птицы в стране до 4,5 млн. т. Это требует внедрения инновационных технологий в содержании и кормлении птицы. Развитие биотехнологии в создании новых высокоэффективных ветеринарных препаратов и функциональных кормовых добавок для ветеринарии открывает широкие перспективы повышения уровня реализации генетического потенциала сельскохозяйственных птиц [13; 86]. Одним из перспективным направлений в птицеводстве является перепеловодство, главная задача которого обеспечение населения качественным и экологически безопасным мясом и яйцом, обладающим высокими диетическими свойствами. Перепела – самые мелкие представители отряда куриных, относятся к семейству фазановых. Они имеют ряд существенных продуктивно-хозяйственных преимуществ перед другими видами сельскохозяйственной птицы. Так, у перепелов в пять раз выше интенсивность роста, чем у кур, у них раньше начинается яйценоскость (5–6 недельный возраст), при этом они не требовательны к условиям содержания. На одинаковой площади можно содержать перепелов в десять раз больше, чем кур, и считается, что это отрасль является одной из наиболее рентабельных в птицеводстве [87; 100; 131; 144]. Между тем, одним из сдерживающих факторов дальнейшего развития птицеводства, в частности перепеловодства, являются дисбактериозы, которые в первую очередь вызваны нарушением микробного биоценоза желудочно-кишечного тракта. Нормальное соотношение микроорганизмов играет важную роль в обеспечении иммуностимулирующей, витаминообразующей, ферментативной и других функций организма птиц [18; 79; 133]. Данная проблема приобретает особую остроту еще и потому, что Россия, вступив в ВТО, должна, как и страны ЕС исключить использование антибиотиков в рационах птиц [154]. Мировой опыт свидетельствует, что в решении этих проблем большее значение имеет использование препаратов и добавок микробиологического направления. Попадая в организм хозяина они, вытесняя из кишечника патогенные микроорганизмы за счет секреции антибиотических веществ, не влияют на представителей нормальной кишечной микрофлоры и способствуют нормализации процессов пищеварения [64; 68; 79; 86; 129]. Кроме того, применение сорбентов обеспечивает снижение токсического действия органических поллютантов, которые содержатся в кормах, полученных с нарушением технологии производства [89; 121; 142]. Решение данных вопросов согласуется с «Концепцией государственной политики в области здорового питания населения в РФ», предъявляющей высокие требования к сбалансированности комбикормов и рационов, обуславливающих качество пищевой продукции, а, следовательно, и здоровье нации. В этой связи коллегией Министерства сельского хозяйства РФ 29 ноября 2011 г. принято решение об организации внедрения инновационных технологий кормления сельскохозяйственной птицы. Таким образом, разработка и внедрение биотехнологических препаратов и добавок, альтернативных кормовым антибиотикам – является актуальным в решении важной народнохозяйственной проблемы обеспечения населения России экологически безопасной продукцией птицеводства. В соответствии с темой № 12: «Разработка и научное обоснование способов получения и использования экологически безопасных функциональных кормовых и пищевых концентратов и добавок на основе ресурсосберегающих биотехнологий: высококалорийные концентраты и добавки; микробиологические добавки и биопрепараты», диссертационная работа является частью тематического плана научно-исследовательских и опытно- конструкторских работ, утвержденных ученым советом ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» на 2011–2015 гг. (№ госрегистрации 01201153631). 5 Цель работы – изучить токсикологические и фармакологические свойства комплексной кормовой добавки Трилактосорб, а также определить эффективность её использования в мясном перепеловодстве. В соответствии с целью исследований были поставлены следующие задачи: дать характеристику составу, технологии изготовления и контролю качества кормовой добавки Трилактосорб; определить жизнеспособность микроорганизмов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб в процессе хранения; изучить антагонистические и кислотообразующие свойства штаммов-пробионтов кормовой добавки Трилактосорб; определить токсикологическое и раздражающее действие комплексной кормовой добавки Трилактосорб; исследовать фармакологические свойства кормовой добавки Трилактосорб на перепелах при разных схемах её использования; установить влияние кормовой добавки Трилактосорб мясную продуктивность перепелов, качество получаемой продукции; разработать экономически эффективную схему применения кормовой добавки Трилактосорб в промышленном перепеловодстве. Научная новизна. Впервые разработана кормовая добавка Трилактосорб на растительной основе с сорбирующими свойствами (СТО 9291-010-00493209-14). Изучены ее основные токсикологические и фармакологические свойства. Установлено влияние кормовой добавки Трилактосорб на физиолого-биохимические показатели организма перепелов, сохранность поголовья, мясную продуктивность и качество мясной продукции. Изучено влияние добавки Трилактосорб на пищеварение перепелов. Предложена производству схема применения кормовой добавки Трилактосорб в мясном перепеловодстве. По результатам исследований получен патент РФ на изобретение № 2498608. 6 Практическая значимость. Полученные в результате изучения фармакологических и токсикологических свойств кормовой добавки Трилактосорб данные могут быть использованы в перепеловодческих хозяйствах для повышения жизнеспособности птиц, экономически эффективного получения высококачественной мясной продукции. Разработаны технические условия к кормовой добавке Трилактосорб (СТО 9291-010-00493209-14). Руководителем государственного управления ветеринарии Краснодарского края утверждены «Рекомендации по использованию пробиотической кормовой добавки Трилактосорб в перепеловодстве». Основные положения, выносимые на защиту: состав, технология получения и контроль качества кормовой добавки Трилактосорб; антагонистические и кислотообразующие свойства добавки Трилактосорб; токсикологическое и раздражающее действие добавки Трилактосорб; фармакологические свойства различных схем использования кормовой добавки Трилактосорб в перепеловодстве; физиолого-биохимические показатели организма перепелов после применения Трилактосорба; сохранность перепелов, продуктивность, качество получаемой мясной продукции при применении добавки Трилактосорб; экономическая эффективность использования кормовой добавки Трилактосорб в мясном перепеловодстве. Апробация работы. Материалы научно-исследовательской работы доложены и обсуждены на: VI Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» (Краснодар, 2012); Конференции по итогам научно-исследовательской работы за 2012 год (Краснодар, 2013); IV Международной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Молодежь и аграрная 7 наука XXI века: проблемы и перспективы» (Курск, 2013); Международной научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» (Московская обл., 2013); X Международной научно-практической конференции «Прикладные научные разработки – 2014» (Прага, 2014). Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 12 научных статей, из которых пять в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ: «Ветеринария Кубани» – 2, «Труды Кубанского государственного аграрного университета» – 2, «Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета» – 1. Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, заключение, выводы, предложения производству, список использованной литературы и приложение. Работа изложена на 166 страницах машинописного текста и содержит 28 таблиц, 15 рисунков, а также в себя включает 4 приложения. Список использованной литературы содержит 239 источника, из которых 26 на иностранном языке. 8 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Роль микроорганизмов, как про- и пребиотических компонентов при разработке кормовых добавок Создание и широкое внедрение в ветеринарную практику кормовых добавок на основе живых микробных культур или продуктов их метаболизма является важной и актуальной задачей современной биологической науки 12; 33; 34; 80; 145; 159. Пробиотические кормовые добавки разнообразного спектра действия стали неотъемлемой частью современных рационов. Они используются для балансировки, повышения усвояемости питательных веществ, снижения токсичности и бактериальной обсемененности кормов. Одна из основных целей разработки и использования кормовых добавок – улучшить продуктивность и сохранность сельскохозяйственной птицы. Такой же цели служат про- и пребиотики, которые используются для улучшения здоровья пищеварительного тракта птицы. Последние в свою очередь способствуют восстановлению позитивной микрофлоры и стимулируют ее размножение в кишечнике, повышают переваримость питательных веществ корма. Введенные пробиотические штаммы бактерий взаимодействуют с микрофлорой кишечника, адсорбируют метаболиты, оказывающие положительное действие на активность иммунной, гормональной, пищеварительной систем организма-хозяина 3; 7; 9; 11. Современное промышленное птицеводство направлено на получение максимальной продуктивности птицы при минимальных затратах. Продуктивность птицы напрямую зависит от качества и количества, применяемого комбикорма 146. Сбалансированный рацион – это рацион, снабжающий всеми питательными веществами, необходимыми для суточных потребностей организма птицы, а также энергией, обеспечивающей протекание жизненных про9 цессов. Для того чтобы его оптимизировать по всем питательным веществам, макро- и микроэлементам сейчас активно применяют кормовые добавки, которые в свою очередь повышают усвояемость корма, что стимулирует рост и продуктивность 18; 34; 64; 86. На данном этапе основным сырьем для получения кормовых добавок являются: Кормовые аминокислоты. Метионин, лизин и треонин – основные аминокислоты, которые должны входить в состав рациона. Причем последние две являются незаменимыми лимитирующими аминокислотами. В растительных кормах данные аминокислоты содержатся в незначительных количествах, поэтому в рационах птицы их часто вводят дополнительно в состав премиксов. Метионин в организме является основным источником серы, а также участвует в регуляции белкового и жирового обмена. Это особенно важно при смене оперения у птицы, когда резко возрастает потребность в этой аминокислоте. Минеральные элементы и витамины. Их дефицит в составе комби- кормов причиняет существенный урон птицеводству. Их нехватка в организме птицы приводит к снижению иммунитета, продуктивности, ухудшению качества мяса и яиц, резкому уменьшению массы птицы и сохранности. Высока потребность в минеральных веществах и витаминах у молодняка птицы, находящегося в процессе интенсивного роста. Необходимо учитывать, что минеральные элементы и витамины в организме птицы не образуются, а поступают только извне за счет кормовых добавок. Адсорбенты микотоксинов – кормовые добавки, содержащие орга- нические и минеральные вещества с высокой сорбционной способностью. Их основной функцией является связывание микотоксинов за счет чего происходит их адсорбция, контроль за ростом микроскопических грибов в кормах и их компонентов зерновых. Такие специальные кормовые добавки являются наиболее эффективным подходом в профилактике и лечении микотоксикозов, снижающих продуктивность и приводящих к гибели птицы. 10 Антиоксиданты – кормовые добавки, предназначенные для предот- вращения окисления жиров в кормовом сырье и комбикормах, содержащие питательные белковые вещества и минеральные добавки. Такие корма характеризуются высокой стабильностью компонентов, что позволяет избежать окисления кормов, вследствие чего увеличивается усвоение питательных веществ корма и улучшается вкусовые качества корма, что в конечном итоге приводит повышению привесов птицы. Ингибиторы плесени – кормовые добавки, состоящие из органиче- ских и неорганических кислот и их солей, применяемые для предотвращения поражений кормового сырья микотоксинами и плесневыми грибками. Зараженность кормов грибами приводит к синтезу большого количества токсинов, что приводит к снижению продуктивности и конверсии корма, вызывая отравления в поголовье. Про- и пребиотики – необходимые компоненты кормовых добавок. Пробиотики – препарат, содержащий микроорганизмы, которые оказывают благоприятное воздействие на организм птицы путем улучшения микробного баланса в кишечнике. В основном представлены бифидо- и лактобактериями, бациллами, и редко дрожжами. Пребиотики – добавки, содержащие органические субстраты (инулин, галактоолигосахариды, лактулоза, фиброгам, резистентные крахмалы, полидекстроза и др.), стимулирующие развитие естественной микрофлоры кишечника. Комбинация про- и пребиотиков называется – синбиотиком. Такой комплекс оказывет взаимно усиливающее действие на физиологические процессы и функции обмена веществ в организме птицы. Ферменты – биологические катализаторы белковой природы, уско- ряющие биохимические реакции в организме. Имманентной частью современных комбикормов для птицы стали ферментные препараты, которые повышают усвояемость кормов. Ферменты, которые способны расщеплять некрахмалистые и клеточные углеводы улучшают пищеварение птицы, 11 за счет уменьшения вязкости химуса кишечника происходит более интенсивное усвоение питательных веществ. Каротиноиды – желтые, оранжевые или красные пигменты, синте- зируемые растениями, бактериями и грибами, не растворимы в воде. Увеличение содержания каротиноидов в желтке яйца благотворно влияет на органолептические свойства яйца, при этом повышает биологический и экономический эффект за счет улучшения качества суточного молодняка, укрепления его иммунитета, повышения сохранности и выводимости цыплят, получения более здорового и устойчивого к внешним воздействиям молодняка, повышения стрессоустойчивости птицы. Также, входящие в состав кормовых добавок каротиноиды придают естественную пигментацию кожной и подкожной жировой прослойке птицы, что увеличивает товарно-коммерческую привлекательность продукции. Микробная биомасса – высокоценный белково-аминокислотный продукт. В его состав входят комплекс незаменимых аминокислот, биологически активные пептиды и витамины. Применение в составе комбикормов добавок на основе микробных клеток оказывает положительное влияние на организмы птиц, за счет повышения их жизнеспособность и продуктивности. Таким образом, применение в птицеводстве кормовых добавок оказывает благоприятное влияние на основные качества корма, за счет повышения питательной ценности, что оказывает благотворное влияние физиологическое состояние и продуктивность животных и птицы, на получаемую продукцию птицеводства 4; 64; 131. Перспективным объектом для биотехнологического использования в кормовых целях являются – бактерии. В условиях современного птицеводства наличие микробиологического баланса в желудочно-кишечном тракте птицы является важной проблемой, так как кишечная микрофлора чутко реагирует на все изменения, происходящие в организме вследствие смены рациона, вакцинации, неправильном содержании и применении антибиотиков. 12 В результате происходит изменение естественной микрофлоры – смена полезной на условно-патогенную 144. Поэтому в настоящее время широкую целесообразность получило введение в состав кормовых продуктов микробных культур. Регулярное введение живых микроорганизмов, как представителей нормальной микрофлоры, указывает на своевременную профилактику желудочно-кишечных заболеваний молодняка, основанную на принципе заместительной терапии путем восстановления кишечного биоценоза. Основным аспектом выбора пробиотической добавки является антагонистическая активность в отношении патогенных микроорганизмов. Антагонизм может быть обусловлен продукцией антибиотических веществ, бактериоцинов, органических кислот, перекиси водорода, лизоцима. У аэробных спорообразующих бактерий антимикробный эффект определяется продукцией антибиотиков. У бифидобактерий и лактобацилл ингибирующий эффект связан с продуцируемыми кислотами 79; 144. Пробиотики – класс микроорганизмов и веществ микробного происхождения, применяющихся в терапевтических целях, как биологически активные добавки содержащие живые микрокультуры. В основном представлены молочнокислыми бактериями, а именно бифидо- и лактобактериями, иногда дрожжами 8; 10; 168; 230. В переводе с греческого слово «probios» означает: «pro» – «за» и «bios» – «жизнь». Дословно можно перевести как «за жизнь» 82. Вначале слово «пробиотик» расшифровывали как некую субстанцию, продуцируемую одним простейшим, который в свою очередь стимулировал рост других. На более поздних этапах исследований появилось новое описание: «пробиотик» – кормовая добавка, которая оказывает полезный эффект на организм хозяина путем положительного влияния на кишечную микрофлору. То есть, это субстанции вида «организм–вещества», делающие вклад микробный баланс. Тем не менее, определение являлось неправильным, так как оно 13 обобщало в одну группу пробиотики и антибиотики, которые существенно отличаются по механизму действия на организм 91; 140; 172; 176; 189; 220. В 1989 г. R. Fuller дал следующее определение пробиотиками «…живая микробная кормовая добавка, которая оказывает полезное действие на животное-хозяина путем улучшения его кишечного микробного баланса». Данное определение по настоящее время используется как основным в литературе. Оно подчеркивает значительность живых микробных клеток как основного компонента работающего пробиотика и устраняет беспорядок, который создавали слова «вещества» и «субстанции», к которым относились и антибиотики и антибактериальные препараты, имеющие химическое происхождение 98; 99; 102; 144. В результате многолетних исследований учеными предложено следующее определение: пробиотики – это стабилизированные культуры микроорганизмов и продуктов их ферментации, обладающие свойством оптимизировать кишечные микробиоценозы, подавлять рост и развитие патогенной и условно-патогенной микрофлоры, повышать обменные процессы и защитные реакции организма, активизируя клеточный и гуморальный иммунитет 35; 36; 38; 63; 167. Основные пробиотики для животных, по мнению ведущих микробиологов, состоят из нескольких групп микроорганизмов: Lactobacillus, Bifidobacterium, Lactococcus, Enterococcus, Bacillus, Streptococcus, Escherichia coli (непатогенные штаммы), Saccharomyces 8; 9; 16; 25; 63; 78; 155; 179. При выборе штаммов для производства пробиотиков важно учитывать видовой состав микроорганизмов, входящих в состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта здоровой птицы, при этом не должны быть патогенными и токсичными, а штаммы должны быть стабильными, жизнеспособными и способными к приживлению 90. Основу нормофлоры желудочно-кишечного тракта взрослой птицы в количественном отношении составляют: бактероиды, эубактерии, пептококки, молочнокислые бактерии, бифидобактерии, стрептококки, энтеробак14 терии, стафилококки, бациллы и дрожжи. В то время как у молодняка птицы микрофлора в основном представлена в большей степени бифидобактериями и молочнокислыми микроорганизмами 149. Молочнокислые бактерии – группа микроорганизмов для производства пробиотиков. В литературе опубликовано большое количество экспериментальных данных и клинических наблюдений о профилактической и терапевтической эффективности пробиотиков, приготовленных на основе специально отобранных штаммов молочнокислых бактерий или их ассоциации 3; 16; 21; 27; 35; 128; 183. Лактобактерии характеризуются специфической потребностью к составу питательных сред и нуждаются в полном наборе готовых аминокислот, водорастовримых витаминов группы В, минеральных элементах, углеводов, неорганических соединениях и азотистых основаниях 117; 202; 203; 207. Способность образовывать в качестве основного продукта молочную кислоту – является характерным свойством этой физиологической группы. Они широко распространены в природе, встречаются в молочных продуктах, на поверхности растений, являются облигатными представителями микрофлоры желудочно-кишечного тракта животных и птицы. В настоящее время общепринятой классификации молочнокислых бактерий нет, вследствие недостатка информации, особенно на генетическом уровне. По месту их обитания и условий существования, бактерии приобретают специфические качества, в результате молочнокислые микроорганизмы различаются по своим строго специфическим свойствам. У некоторых бактерий обнаруживают своеобразные признаки, не характерные для всей группы, например, способность к подвижности и спорообразованию. Все эти свойства создают трудности для их точной научной классификации 20; 21; 28; 68; 76; 88; 105. Классификацию молочнокислых бактерий затрудняет также частое выделение штаммов, которые не могут быть причислены к тому или иному подроду или виду, а занимают промежуточное положение, а также изменчи15 востью многих свойств при культивировании микроорганизмов на разных средах и в разных условиях. Так, у молочнокислых бактерий может возникнуть способность положительно окрашиваться по Граму. Они могут изменять морфологические и культуральные свойства и температурные оптимумы роста 21; 82; 147; 151; 156; 169; 188; 197. С. Орла-Йенсен (S. Orla-Jensen) в 1909 г. сделал попытку классифицировать бактерии на основе известных к тому времени физиологических признаков. Это привело к следующим выводам: характер изменчивости молочнокислых микроорганизмов часто является одним из наиболее специфических признаков. Поэтому, как справедливо заметил Браун, совершенные системы классификации должны включать описание общего возможного масштаба изменчивости каждого бактериального вида21; 82; 211; 215; 229. Систематизация молочнокислых бактерий основывается на изучении многих их свойств, при этом ученые придают разнообразное значение изученным признакам. Особое внимание уделяют морфологическим признакам бактерий. Так, за основу морфологии клеток С. Орла-Йенсен принимал разграничения вида кокковых молочнокислых бактерий, В. Девис (В. Davis) – кокковых (Streptococcus lactis и Streptococcus cremoris) и палочковидных (Lactobacillus bulgaricus и Lactobacillus delbrueckii). Ученый Рогоза за диагностический признак – форму колоний для дифференциации L. acidophilus и L. Casei 21; 82; 188; 215. Ввиду повсеместного обитания молочнокислых бактерий в природе и их участия в пищевых цепочках, ученые часто, минуя классификацию молочнокислых палочек и кокков, стремились создать частные классификации, при этом, не пытаясь определить идентичность найденных видов организмам, обитающим в иных источниках. Со временем стали проводиться сравнительные исследования большего числа штаммов, выделенных из самых всевозможных источников, с учетом большего набора признаков. При этом особое внимание стало уделяться поискам признаков устойчивых, отчетливо выраженных и коррелирующих друг с другом, что позволяет со16 вершенствовать классификацию и идентификацию молочнокислых бактерий 21; 169; 184; 185; 211. Характеристика разнообразных представителей группы молочнокислых микроорганизмов и методы дифференциальной диагностики отдельных видов опубликованы в ряде работ ученных M. Goodfellow, W. Holzapfel, E. Stacketbrandt и других 21; 184; 185; 188; 229; 232; 237; 239. М. Бейеринк в 1900 г. объединил группу молочнокислых микроорганизмов и дал название Lactobacter, в которую входили молочнокислые палочки – Lactobacillus и кокки – Lactococcus. Позже С. Орла-Йенсен соединил эти бактерии в одно семейство – Lactobacteriaceae 21; 82; 83; 215; 239. С. Орла-Йенсен систематизировал все данные по молочнокислым микроорганизмам в свою монографию. Его результаты легли в основу современных классификаций данной группы бактерий. Согласно его исследованиям автор делит все микроорганизмы на две основные группы: истинные; ложные 21; 215. Истинная группа состоит из кокковых и палочковидных форм бактерий. Кокковые объединяются в роды Streptococcus и Betacoccus. Род Streptococcus автор разделил на группы согласно количеству клеток в цепочке. Внутри группы виды различаются по отношению к температурным диапазонам роста, потребности в сахарах, расщеплению казеина. Род Betacoccus – на два вида, отличительной характеристикой которых является процесс сбраживание пентоз. Палочковидная форма молочнокислых бактерий истинной группы С. Орла-Йенсен разделил на три группы: Thermobacterium, Streptobacterium и Betabacterium 21; 215. В основе схемы по определению видов бактерий, автором указан главный признак – сбраживания источников углерода, зависящее от количества и качества доступных форм азота. Также С. Орла-Йенсен полагал, что систематическими признаками молочнокислых микроорганизмов являются температуры роста – минимальная, оптимальная и максимальная 21; 84; 197; 215. 17 С. А. Королев высказал ряд положений о принципах классификации: «Реальное разграничение видов и родов (дробление их) должно базироваться не на каких-либо логических построениях, а прежде всего – на реальной возможности определенно и точно находить установленные границы в природе; выбор признаков для составления характеристик должен базироваться на реальной выпуклости, постоянстве и определенности признаков; критерием важности признаков при их отборе следует признать их фактическую связанность между собой» 21; 83; 88. В настоящее время еще не разработана общеустановленная систематика молочнокислых микроорганизмов, которая отображала бы родственные, филогенетические взаимоотношения между отдельными группами молочнокислых бактерий. На сегодняшний день были сделаны существенные успехи в области разработки методов, используемых для выявления свойств бактерий, собранs начальные доказательства существования родства между видами отдельных родов бактерий, а также между этими микроорганизмами и представителями иных семейств 21; 93; 94; 139. Основными представителями молочнокислых микроорганизмов в микрофлоре кишечника птицы являются следующие лактобактерии: Lactobacterium acidophylum, L. brevis, L. casei, L. plantarum. Штаммы этих видов бактерии являются аэротолерантными анаэробами, которые сбраживают некоторые углеводы до молочной, уксусной и муравьиных кислот. Они участвуют в синтезе витаминов, особенно группы В, оказывают содействие в восстановлении слизистых оболочек кишечника, обладают антагонистическим действием против патогенных микроорганизмов 68; 80; 81; 144; 226; 231. Являясь нормальной микрофлорой кишечника птиц, происходит заселение определенных отделов желудочно-кишечного тракта, включая ротовую полость и прямую кишку. Вступая во взаимодействия с другими полезными бактериями организма подавляют гнилостные и гноеродные процессы, вызванные условно-патогенной и патогенной микрофлорой микрофлорой – возбудители острых кишечных инфекций. Лактобактерии являются основным 18 звеном в формировании колонизационной резистентности организма 20; 28; 68; 76; 159; 174; 187. Молочнокислые микроорганизмы в процессе метаболизма в здоровом организме продуцируют – молочную кислоту, лизоцим, лактоцидин, ацидофилин, плантарицин, реутерин, лактолин и перекись водорода, обладающие антибиотической активностью. За счет такой активности обнаруживаются иммуностимулирующие качества таких бактерий, путем влияния на стимуляцию фагоцитоза, синтез иммуноглобулинов, образование интерферона. В процессе пищеварения лактобактерии участвуют в расщеплении сложных органических веществ, таких как целлюлоза и клетчатка. Без этих бактерий не обходится также и липидный обмен. Принимая активное участие в этом обмене, молочнокислые бактерии способны нейтрализовать нейтральные жиры и жирные кислоты, способствуя снижению уровня холестерина в крови, выполняя при этом важную функцию – рециркуляции желчных кислот и глицерина. Под воздействием лактобактерий происходит расщепление белков до конечных продуктов – индол, скатол, фенол, которые в свою очередь влияют на нормальную перистальтику кишечника 11; 12; 27; 63; 88; 186. Представителем данной физиологической группы улучшают усвоение минеральных веществ, особенно кальция, который необходим организму для мышечной работы, построения костной и соединительной ткани, нормального функционирования свертывающей системы крови, укрепления и нормализации проницаемости клеточных мембран, стабилизации межклеточных связей, нормальной возбудимости нервной ткани 90; 95; 103; 144; 223. История открытия бифидобактерий началась в 1899 г., когда Tisser выделил микрокультуру – Bifidobacterium bifidum из кала здорового ребенка, находившегося на грудном вскармливании. В дальнейшем были выделены штаммы B. infantis, B. longum, B. breve, B. infantis, B. animalis 3; 21; 35; 36; 65; 66; 73. 19 За счет увеличения количества бифидобактерий, происходит активная секреция уксусной и молочной кислот. Последняя ингибирует рост патогенной, гнилостной, газообразующей флоры, стимулируя рост нормальной флоры кишечника. Также улучшает всасывание нутриентов, стимуляцию секреторной функции пищеварительных желез, стимуляцию перистальтики кишечника. Повышение кислотности оказывает антибактериальное действие. Роль бифидобактерии в пищеварении и всасывании заключается в усилении гидролиза белков, сбраживания углеводов, растворении клетчатки, стимуляции перистальтики кишечника. Также бактерии принимают участие в печеночно-кишечной циркуляции желчных кислот и холестерина. Важнейшей функцией бифидобактерий является синтез и стимулирование всасывания витаминов группы В, витамина К, фолиевой и никотиновой кислот, адсорбция в кишечнике солей железа, кальция, витамина Д. Кроме того, данные бактерии являются поставщиком высококачественного белка, так как в его состав входят все незаменимые аминокислоты. Являясь природным сорбентом, они участвуют в детоксикации чужеродных веществ, препятствуя повышению гистамина, за счет чего обладают антиаллергическим действием 21; 97; 144; 177; 180. Для молодняка птицы бифидобактерии являются мощным иммуностимулятором, который участвуют в формировании иммунного статуса. Находясь в комплексе с другими представителями нормофлоры они стимулируют лимфоидную систему, участвуют в создании общих иммуноглобулинов, формируют неспецифическую защиту и иммунорезистентность 94; 143; 149; 170; 177; 181; 182; 234. Особое место в составе пробиотических добавок занимают спорообразующие бактерии – представители рода Bacillus (B. subtilis и B. licheniformis). Вода, воздух, почва, пищевые продукты, а также организм человека, животных, птицы и насекомых – места обитания этих бактерий. Они характеризуются нетребовательностью, устойчивостью к неблагоприятным факторам окружающей среды, высокой скоростью роста, а недостаток питательных 20 веществ может включать у бацилл клеточные ответы образованием покоящейся спорой 213; 214; 216; 222; 236. Бактерии рода Bacillus в процессе метаболизма выделяют антибиотические вещества, ферменты (трансферазы, гидролазы, липазы), аминокислоты, белки, витамины, нуклеотиды. Антагонистические свойства выражаются в подавлении роста и размножения патогенных и условно-патогенных микробов. Сами споровые бактерии не приживаются в желудочно-кишечном тракте и не играют значительной роли в процессах пищеварения. Выполнив свою антагонистическую функцию, они выводятся из организма во внешнюю среду. Поэтому их можно рассматривать как альтернативу традиционным антибиотикам 64; 235. Дрожжи являются богатым источником белка, аминокислот, витаминов, минеральных веществ, витамина Д и витаминов группы В, участвующие в белковом обмене. Входят в состав ферментных систем, являясь активными катализаторами, необходимыми для усвоения аминокислот и синтеза белка. Естественное сочетание в дрожжах полноценных белков и витаминов очень важно для питания сельскохозяйственной птицы. Эта группа микроорганизмов широко распространена в природе, в почве, на поверхности растений. Дрожжи отлично взаимодействуют с молочнокислыми бактериями. При их совместном культивировании образуется спирт и молочная кислота, что не допускает развития посторонних микроорганизмов. В процессе своего роста дрожжи обогащают среду продуктами метаболизма и делают ее более благоприятной для развития молочнокислых бактерий 104; 144. В связи с интенсивностью развития птицеводства и предъявляемыми требованиями к качеству получаемой продукции на сегодняшний день огромный интерес представляет совершенствование кормовых добавок, содержащих в своем составе живые микроорганизмы на современных носителях, в качестве которых можно использовать минеральные сорбенты. Соя является уникальной сельскохозяйственной культурой, семена которой широко используются в пищевой и комбикормовой промышленности. 21 Поэтому в 2003 г. Министерством сельского хозяйства России была принята отраслевая программа Российского соевого союза «Развитие производства и переработки сои в Российской федерации на 2015–2020 годы». Реализация, которой привела к увеличению данной культуры в стране уже до 740 тыс. тонн в год, а 2020 г. планируется довести до 12 млн. тонн. По литературным данным, в рамках этой программы, на сегодняшний день 95 % производства сои направленно на переработку ее на кормовые цели 154. Соя культурная (лат. Glycine max) – однолетнее травянистое растение, вид рода Соя (Glycine) семейства Бобовые (Leguminosae), подсемейства (Papilionaceace). Этот род насчитывает более 70 видов 148; 192. Соя пользуется большой популярность в птицеводстве за счет того, что является безотходной культурой. Вегетативная масса незрелых растений используется как компонент, входящий в состав сочных и грубых кормов. Из соломы делают кормовую муку, гранулы. Оставшиеся после извлечения масла остатки семян идут на жмыхи и шроты, которые являются высокоценной кормовой добавкой, восполняющей дефицит белка в комбикормах, что способствует интенсивному развитию мясной и яичной отрасли в птицеводстве и позволяет удешевлять стоимость данных продуктов. Экструдированная соя, соевая суспензия, премиксы, сено, солома, мякина, гранулы, силос – это неполный список побочных продуктов от выращивания сои, который используется в кормлении сельскохозяйственной птицы 1; 2; 5; 6; 136; 191. Среди всех возделываемых в мире сельскохозяйственных культур соя является самой высокобелковой (рисунок 1), вследствие этого, на сегодняшний день эта культура, как сырьевой источник для получения пищевых белков, на мировом рынке занимает лидирующее положение 32; 116; 148. 22 Рожь Кукуруза Рис Картофель Нут Соя Фасоль Чечевица Горох Рисунок 1 – Содержание белка в различных сельскохозяйственных культурах Семена сои по содержанию незаменимых аминокислот в одном ряду с зерновыми, масличными и бобовыми культурами не имеют конкурентов, также их отличает уникальный химический состав и по другим питательным веществам (рисунок 2) 116. 80 70 Полисахариды 60 50 Крахмал 40 Сахара 30 20 Липиды 10 0 Незаменимые аминокислоты Рисунок 2 – Химический состав семян некоторых культур, г в 100 г продукта (Химический состав пищевых продуктов, 1979) 23 Соевый белок признан наиболее близким по аминокислотному составу к животному белку и по этому показателю сопоставим с белком говядины (рисунок 3) 116. 9 8 7 6 5 4 Соя 3 Говядина 2 1 0 Рисунок 3 – Содержание незаменимых аминокислот в сое и мысе говядины, в г/100 г белка Наиболее подробно химический состав семян сои в сравнении с другими белоксодержащими продуктами представлен в таблице 1 116. Таблица 1 – Химический состав сои и других основных белоксодержащих продуктов Творог нежирный 5 18,0 20,6 12,6 17,9 19,9 5,2 7,3 11,5 0,7 7,7 10,3 0,6 1,5 7,7 12,2 7,0 – 2,0 0,14 0,028 0,19 – 0,19 0,007 0,45 – 0,39 0,003 5,0 Соя Фасоль 1 2 34,9 34,4 Белок, % Общее количество аминокислот, г% В том числе: незаменимые заменимые Жиры, г% Углеводы, г% Е В6 Биотин Ниацин 3 22,3 Куриное яйцо 4 12,7 Показатель 12,7 8,0 21,7 12,6 17,3 1,7 26,5 54,3 Витамины, мг%: 17,3 3,84 0,85 0,9 0,06 – 2,2 2,1 24 Говядина 6 20,0 Продолжение таблицы 1 1 Фолацин Рибофлавин Тиамин Калий Кальций Фосфор Магний Железо Марганец Цинк Кобальт Медь Фтор 2 3 0,2 0,09 0,22 0,18 0,94 0,5 Макроэлементы, мг: 1607 1100 34 150 603 541 226 103 Мезоэлементы, мг: 9,7 5,9 2,8 1,34 2,01 3,21 Микроэлементы, мкг: 0,031 0,019 0,5 0,58 0,12 0,044 4 0,007 0,44 0,07 5 0,04 0,25 0,04 6 0,009 0,18 0,07 140 55 215 12 117 120 189 24 305 10,2 188 22 2,5 0,029 0,996 0,3 0,008 0,364 2,9 0,035 3,24 0,01 0,083 0,055 0,002 0,06 – 0,007 0,182 0,063 Биологическая ценность семян сои составляет – 96 усл. ед., куриных яиц – 97, соевого молока – 91, коровьего молока – 90, обезжиренной соевой муки – 81. По данным ученных 32 количества белка в изучаемых образцах колебалось от 38 до 48 %, в зрелых семенах сои количество белка может достигать 55 % 6; 17; 22; 84. Сою называют культурой двойного использования, так как содержание масла в семенах может достигать 15–28 %, а уровень мирового производства на долю соевого приходится до 35 %. Соотношение и содержание жирных кислот – один из главных показателей качества масла. В масле, произведенном из семян сои преобладают ненасыщенные жирные кислоты (до 87 % от общего объема), также входят в состав фосфатиды, относящиеся к группе жироподобных веществ, представленные лецитином (35 %), кефалином и инозитолфосфатидами 71; 72; 114; 115; 163; 166. Таким образом, входящие в состав семян сои белок, масло, а также биологически активные вещества представляют значимый интерес в производстве кормовых добавок 84; 85; 112. Входящие в состав сои углеводы по своему составу уникальны и характеризуются невысоким содержанием их в усвояемой форме в семенах. В сое 25 они представлены в виде растворимых сахаров (глюкозой, фруктозой, сахарозой, рафинозой и др.), гидролизуемых полисахаридов (крахмалом и др.), нерастворимыми структурными полисахаридами (пектиновые соединения, гемицеллюлозой и др.). За счет, входящих в состав сои нативных олигосахаридов и собственной полезной микрофлоры птицы наблюдается стимуляция роста лакто- и бифидобактерий в организме. Таким образом, углеводы сои можно отнести к пребиотическому фактору, а саму сою – пребиотикам 71; 84; 85; 112; 166. Однако установлено, что без предварительной обработки семян питательность сои низка из-за накопления антипитательных веществ, оказывающих специфическое влияние на организм сельскохозяйственной птицы. К таким отрицательно действующим веществам относятся такие ингибиторы как уреаза, липоксигеназа, некоторые протеолитические фермент, трипсин и химотрипсин – наиболее сильные ингибиторы. Действие последних направлено на угнетение роста птицы, нарушение функционирования поджелудочной железы 106; 107; 113; 166; 171; 192; 199; 200. Помимо перечисленных выше компонентов сои, которые оказывают отрицательное влияние, в ней содержится липоксигеназа, под действием которого при хранении могут образовываться альдегиды и кетоны. Гликопротеины лектины, которые влияют на кровообращение в организме птицы, образуя тромбы. Фосфор, который находится в составе фитиновой кислоты также плохо усваивается организмом. Входящие в состав семян сои сапонины, придают им горький вкус и оказывают гемолитическое действие на эритроциты 26; 150; 158; 206; 221; 233. Несмотря на содержание в семенах сои токсичных компонентов, она является перспективным сырьем для использования ее семян и продуктов переработки в кормопроизводстве и создании новых кормовых добавок. Перспективным кормовым средством для использования в птицеводстве является ввод соевых семян и продуктов ее переработки, не уступая традиционным белковым добавкам. Если учесть большую длительность срока 26 хранения, высокую технологичность и энергетическую ценность, то соя обладает неоспоримыми преимуществами 84; 85; 136; 157. Научные разработки ученых Кубанского ГАУ (г. Краснодар) и опыт передовых предприятий показали, что в полноценных комбикормах, предназначенных для птицы, соевый шрот может быть единственным высокобелковым компонентом 86. Обобщая результаты экспериментов, ученые СКНИИЖ (г. Краснодар) пришли к заключению, что в кормовую смесь для мясной птицы можно включать 27–33 % по массе соевый шрот 136. Научные работы, посвященные исследованиям питательности рационов на основе сои и продуктов ее переработки, направлены на изучение хозяйственных показателей: продуктивность, потребления и конверсия кормов, привесов и на биохимические показатели птицы 17; 106. При изучение влияния сои определенных сортов на биохимический статус перепелов, установлено, что включение нативной сои сортов Вилана и Валента в рационы перепелов приводило к снижению уровня витамина А и каротина, холестерина, мочевины, кальция и фосфора в сыворотке крови. Ввод автоклавированной сои не приводил к достоверным изменениям этих показателей. Также автором установлено влияние нативной сои на гематологические показатели: снижается уровень гемоглобина в крови, увеличивается скорость оседания эритроцитов. А ввод в рацион термообратботанной соевой муки способствует повышению уровня гемоглобина и эритроцитов в крови 86; 87;109; 111. Ввод автоклавированной сои сортов Ламберт, Веста и Астра в комбикорма перепелов положительно сказываются на уровне гемоглобина в крови, лейкоформулу, а также на стабилизацию общего количество форменных элементов 31. Кормление перепелов с вводом как автоклавированной, так и нативной сои в рацион не приводит к резкому изменению уровня общего белка в сыворотке крови, но все же способствует повышению уровня альбуминов на фоне 27 снижения доли глобулинов. Данные ученого свидетельствуют о снижении уровня аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы, холестерина, мочевины, кальция, фосфора в сыворотке крови перепелов, в рацион которых вводили большой процент нативной сои 17. Исследователями R. Kastel и P. Nad (1998) установлено, что соевые ингибиторы протеаз способствуют повышению продукции поджелудочного сока, а также химотрипсина в тонком кишечнике у кур. Некоторые авторы утверждают, что уровень холестерина в сыворотке крови снижался при скармливании 42-недельным курам-несушкам необезжиренной сои, а в опыте с 80-недельными несушками не сказывалось на показатель, а также способствовало увеличению уровня холестерина в желтке яиц и молодых, и старых кур 191; 202. Включение полножирной сои как источника протеина, витамина Е, серы, холина и лецитина в сбалансированные рационы значительно восполняет в них дефицит аминокислот, удешевляя стоимость кормосмесей и придают ей дополнительную ценность. Технология приготовления позволяет сохранить в ней ценные компоненты, нейтрализовать действие антипитательной веществ. В экспериментах, по скармливанию сырых, вареных и прожаренных семян сои было установлено, что по сравнению с нативными способствовало повышению яйценоскости и эффективности конверсии кормов у изучаемой птицы. Кроме того, применение обработанных семян сои в комбикормах для птицы экономически целесообразно 26; 84; 85. Лучшие результаты по приросту живой массы цыплят-бройлеров получены в той группе, где сою нагревали до 100 ºС в течение 2 мин, а в других группах с использованием нативной сои и после обработки при температуре более 100 ºС были получены худшие хозяйственные показатели. Таким образом, ученые сделали вывод, что при температуре до 100 ºС наблюдается разрушением ингибиторов трипсина с минимальным повреждением белка 26; 84; 85. 28 Исследования, проведенные J. L. Sell (1984) и C. A. Kan et al. (1987), обнаружили, что в изокалорийных и изоазотистых рационах замена соевого шрота и добавок животных жиров в разных количествах на полножирную сою дает удовлетворительные результаты и в случае использования комбикорма в гранулированном виде. Изучение возможности максимального ввода полножирной сои (2550 %) в кормовой рацион птицы показало увеличение интенсивности роста птицы по сравнению со скармливанием комбикормов, включавших соевый шрот 84; 86; 87; 136. Исследовали ввод экструдированной и прожаренной полножирной сои и соевой муки в рационах кур-несушек. Установлено, что лучшие результаты получены при употреблении птицей экструдированной сои и соевой муки, не оказывая влияния на потребление корма и массу яиц 84; 86; 87; 136; 150; 158. Анализ литературы показывает, что в настоящее время соя является богатой кормовой культурой – источник белка и энергии. Дополнительную привлекательность семенам сои и продуктам на ее основе придает и достаточно низкая себестоимость по сравнению с кормами животного происхождения. Кроме того, наличие уникальных углеводов в ее составе обеспечивает получение кормовых продуктов с пребиотическими свойствами. Поэтому ее использование в качестве пробиотического фактора оправдано при концентрировании функциональных кормовых добавок. 1.2 Особенности культивирования пробиотических микроорганизмов Основные микроорганизмы, водящие в состав каждого пробиотика, представлены следующими группами – молочнокислые и бифидобактерии. Для получения эффективного препарата на основе живых микроорганизмов 29 необходимо учитывать культуральные свойства именно каждого из них 8; 9; 16; 25; 63; 78; 103–105; 143; 155; 179; 195. Молочнокислые микроорганизмы являются факультативными анаэробами или микроаэрофилами. Наиболее благоприятный рост наблюдается при пониженном содержании кислорода с содержанием 510 % углекислого газа. Некоторые представители группы используют молекулярный кислород, который включается в энергетический метаболизм, при этом они способны размножаться в присутствии кислорода, то есть являются аэротолерантными анаэробами. По отношению к температуре стрептобактерии и бетабактерии являются – мезофилами, термобактерии – термофилами 21; 156; 198. Лактобактерии относятся к хемоорганотрофам. Они характеризуются высокой требовательностью к составу питательных сред. На обычных средах они не растут, их выращивают на средах с молоком, вызывая образование однородного плотного сгустка с приятным кисломолочным запахом и вкусом. Также необходимо, чтобы в состав сред входили: полный набор аминокислот, азотистые основания, углеводы, витамины группы В, минеральные и неорганические соединения. Для выращивания молочнокислых микроорганизмов рекомендуются сложные среды, которые могут дополнительно содержать растительные отвары, мясные и дрожжевые экстракты, белковые гидролизаты и др. 21; 27; 28; 94; 117. Молочнокислые бактерии растут и в жидких питательных средах (гидролизованное молоко). При этом наблюдается помутнение среды, осаждение клеток вскоре после прекращения роста. Осадок однородный и гомогенный, редко зернистый или слизистый, поверхностная пленка никогда не образуется. При росте на плотных питательных средах (агар с гидролизованным молоком и мелом, МРС-агар, селективная среда) лактобактерии формируют округлые мелкие гладкие блестящие колонии серо-белого цвета со сферической поверхностью, размером 2–5 мм [21; 37; 38; 55; 126]. Некоторыми авторами 20 установлено, что наиболее экономически выгодной и продуктивной является среда, в состав которой входят – фермен30 тированный пепсин (можно заменять папаином молочной сыворотки), дрожжевой автолизат Дифко (0,5 %) или кукурузный экстракт (3 %), сульфаты марганца, магния и цинка. Также ими предложено в состав некоторых сред вводить лактозу, пептон, дрожжевой автолизат, цитрат натрия. Такие ученые, как S. E. Gilliland 183, J. Bergere и J. Hermier 168 рекомендуют применять для культивирования лактобактерий питательные среды, состоящие из стандартных компонентов: пептон Дифко, дрожжевой экстракт, глюкозу, цитрат натрия. J. Stadhouders с соавторами 230 пришли к выводу, что для производства бактериальных препаратов, на основе искусственных сред эффективно использовать обезжиренное молоко с 1 % дрожжевым экстрактом для стимулирования роста лактобактерий. Но не только от состава питательной среды при производстве биопрепаратов зависит рост бактерий, а также и от температуры, рН, интенсивности перемешивания и скорости разбавления среды. Кислотность среды оказывает влияние на образование конечных продуктов, а так же на морфологию молочнокислых бактерий: в «кислом» диапазоне рН образуют нейтральные продукты метаболизма и культура приобретает более длинные цепи стрептококков, а дальнейшее увеличение рН приводит к появлению «раздутых» клеток. В «щелочном» диапазоне конечным продуктом являются – органические кислоты 82; 205; 208; 209. Перемешивание – важный фактор для снабжения клеток питанием, при этом создается однородность культуральной среды и плотность популяции клеток. Хотя молочнокислые бактерии – факультативные анаэробы и снижение интенсивности перемешивания приводит к нарушению процесса гомогенизации, что приводит к переходу культуры в неустойчивое состояние 196. Также к факторам, замедляющим рост молочнокислых бактерий, являются нерастворимые формы азота и витамины. Учеными доказано, что высокая концентрация углерода в среде отрицательно сказывается на размноже- 31 ние некоторых микроорганизмов, в частности, проявляясь угнетением в начале их развития 69; 73. На рост лактобактерий оказывает торможение и накопление продуктов их жизнедеятельности, таких как, молочной кислоты. На подавление роста молочнокислых стрептококков концентрация 0,70,9 % уже является предельной, для палочковых форм – 2,8 %, так как они являются более кислотоустойчивыми. Существуют два пути решения данной проблемы – нейтрализация молочной кислоты с помощью растворов щелочи и ее удаление. Первый вариант является наиболее распространенным. При этом необходимо уделять внимание, используемой щелочи. Так, например, использование раствора аммиака увеличивает титр клеток в два раза в сравнении с гидроксидом натрия или кальция, а применение пищевой соды обеспечивает максимальный выход биомассы 202; 217. Второй способ это удаление молочной кислоты за счет ее сорбции из культуральной среды ионообменными смолами. Механизм этого действия основан на утилизации лактозы, что сокращает время деления клеток молочнокислых стрептококков и палочек. Биомасса, полученная при этом способе, отличается повышенной кислотообразующей активностью 224. Закваски, состоящие из нескольких видов бактерий, требуют большего внимания при культивировании, так как необходимо учитывать взаимоотношения между бактериальными компонентами. Метаболиты антибиотической природы, несовпадение скоростей роста бактерий, разные условия хранений, чувствительность к молочной кислоте – основные причины, вызывающие нарушения видового баланса 69; 73. Для поддержания бактериального равновесия двух видов микроорганизмов при наличии одного лимитирующего субстрата установлены следующие условия: удельные скорости роста должны совпадать, вид, растущий быстрее, должен ингибироваться собственным продуктом и стимулировать им же рост второго вида 128; 202; 217. 32 Таким образом, на качество, получаемых биопрепаратов на основе лактобактерий, основное влияние оказывает состав питательной среды и условия культивирования. Биопрепараты на основе многоштаммовых композиций требуют большего внимания к культивированию, при этом необходимо учитывать индивидуальные характеристики роста отдельных штаммов и их взаимоотношения. Помимо молочнокислых микроорганизмов в состав пробиотиков давно стали вводить бифидобактерии. Они представляют собой неспоровые грамположительные неподвижные палочки, с характерным полиморфизмом 35; 36; 218. Все виды этого рода при первичном выделении являются строгими анаэробами и изредка в присутствии углекислого газа могут быть терпимыми к кислороду. При дальнейшем культивировании принимают способность развиваться в присутствии кислорода. Ацетат и лактат – основные продукты метаболизма этих бактерий 82; 137. Большинство штаммов бифидобактерий могут проявлять протеолитическую активность, которая видо- и штаммоспецифична. Также бактерии обладают антибиотическими свойствами по отношению к патогенным и условно-патогенным бактериям за счет накопления органических кислот, кроме того, они продуцируют комплекс веществ, обладающих бактерицидным и бактериостатическим эффектом 66; 218; 227. Для данного вида бактерий характерна биосинтетическая недостаточность, так как постоянным местом обитания является кишечник и не обходимые органические вещества находятся в легкоусвояемом виде. Для их размножения необходимы – биотин, пантотеновая кислота, цистеин, рибофлавин, аминокислоты, пептиды, пуриновые и пиримидиновые основания. Из-за нехватки количества усвояемых ими питательных веществ, растворенного кислорода, неспособности гидролизовать белки молока бифидобакетрии в цельном молоке размножаются медленно 65; 66; 173; 175; 227; 228. 33 Стимуляция роста культуры бифидобактерий достигается путем расщепления лактозы молока β-галактозидазой, а также за счет стимуляторов – кукурузный экстракт, обезжиренная соя, морковный сок, экстракты дрожжей, аскорбиновая кислота, цистеин, гидролизаты молока и казеина. Но не только ввод стимуляторов может влиять на рост, но и правильно подобранное совместное выращивание с лактококками и лактобациллами 21; 36; 173; 183. Таким образом, бифидобактерии представляют нормофлору кишечника птицы, обладают антагонистическими свойствами к патогенным и условно-патогенным бактериям, являются очень требовательными к пищевым фактором роста при культивировании. Для получения высокого титра и максимального антибиотического эффекта в составе пробиотика, необходимо тщательно осуществлять подбор оптимального состава питательной среды. 1.3 Применение энтеросорбентов в ветеринарии В современный период развития промышленного птицеводства за счет ввода большого количества химических соединений в рацион птицы для увеличения хозяйственных показателей, таких как, повышение привесов, ускорение интенсивности роста и усвоение питательных веществ корма, а также для лечения и профилактики болезней, приводит к загрязнению получаемой продукции, что является опасным для человека при потреблении мяса птицы и яиц. Поступая внутрь организма человека, вредные вещества вызывают нарушения обмена веществ, острые и хронические токсикозы, снижают резистентность организма и вызывают аллергические реакции 13; 67; 74; 75; 89; 141; 142. Одним из основных путей решения этой проблемы является ввод в состав кормовых добавок и рацион энтеросорбентов природного происхождения. Результаты проведенных экспериментов показывают, что введение таких сорбентов как цеолиты, бентониты, шунгиты и другие, при вводе их в рацион оказывают положительное действие на организм птицы в целом, 34 а также на ее продуктивность. Таким образом, особую актуальность приобретает поиск новых средств, композиций и способов ввода таких минеральных веществ с сорбирующими свойствами в составе кормовых добавок для сельскохозяйственной птицы 14; 24. Энтеросорбенты – вещества многообразной структуры, осуществляющие связывание экзо- и эндогенных веществ в желудочно-кишечном тракте путем адсорбции, абсорбции, ионообмена, комплексообразования. Преимущество сорбентов по отношению к другим препаратам фармакологических групп является их опосредовательность, то есть действуют на саму причину – токсин, оказывая при этом ослабление аллергических и воспалительных реакций в организме 74; 75; 152; 124; 127; 165. Установлено, что основные механизмы действия энтеросорбентов основаны на: поглощение токсических веществ, попадающих в желудочнокишечный тракт извне и диффундирующих в просвет кишечника из крови; связывание токсических веществ, выделяющихся с пищеварительными соками; поглощение токсических метаболитов, образующихся в желудочнокишечном тракте, таких как, индол, скатол и др.; фиксация и перенос физиологически активных веществ (ферменты, желчные кислоты и т. д.); сорбционная трансформация за счет избирательного поглощения аминокислот и свободных желчных кислот; изменение объёма неперевариваемого остатка по типу пищевых волокон; каталитическое действие. К второстепенным действиям энтеросорбентов относятся: обволакивающее и цитопротекторное действие; структуризация кишечного содержимого, содержащих микробы и вирусы; прямое бактерицидное действие; комплексообразование и хелатирование; видоизменение химического состава 35 кишечного содержимого, неблагоприятного для размножения патогенной флоры 74; 75; 152; 124; 127; 165. Таким образом, применение энетросорбентов в ветеринарии позволяет снизить действие токсических веществ, патогенных бактерий и продуктов их жизнедеятельности. Существует широкий спектр сорбентов – органические, неорганические и комбинированные. Экспериментальные данные показывают, что сорбенты, как минеральное сырье (цеолиты, бентониты) при введении их в рацион положительно сказываются на общем состоянии птицы и ее продуктивности 19; 24. Установлено, что природный сорбент – алюмосиликатный минерал, а также препараты на его основе, введенные в смешанные корма, сорбируют плесневые грибы и продукты их жизнедеятельности за счет своих физикохимических свойств. Он представляет собой кристаллическую решетку, способную связывать токсичные вещества, тем самым, сорбент снижает токсическое действие на организм и обменные процессы, протекающие в нем 24; 141; 153; 164. Цеолиты – природные минералы, представляющие собой микропористые каркасные алюмосиликаты кристаллической структуры, состоящие из каналов и пустот, то есть поры, заполненные молекулами воды, обменными катионами, в основном кальция, натрия и калия. Кроме того, в состав цеолитов входит большое количество микро- и макроэлементов. Этот минерал является источником таких макроэлементов – кальций, фосфор, натрий, калий, магний и микроэлементов – марганец, железо, медь, цинк, селен, кобальт, кремний и молибден. Причем эти элементы находятся в усваиваемой для организма форме. Природные цеолиты характеризуются выраженными адсорбционными, ионообменными, каталитическими, молекулярно-ситовыми свойствами, которые оказывают положительное влияние на организм птицы 29; 39; 89;118; 153; 212; 238. 36 Цеолиты обладают связывающим действием с последующим выводом токсических веществ – ртуть, кадмий, а также радиоактивных – цезий и стронций из организма 135. Ввод природного цеолита в качестве кормовой добавки оказывает положительное влияние на морфологический состав крови, повышая ее такие функции как окислительно-восстановительную и дыхательную. Также, установлено позитивное действие данного минерала на стабилизацию аминокислот, за счет поглощения азотного «хвоста», что приводит к снижению энергетических затрат при росте массы тела. Использовании в качестве кормовой добавки у птиц этого цеолита наблюдалась стабилизации пищеварительных процессов, увеличение уровня общей кислотности и активности желудочного сока, а также протеолитической и аминолитической активности поджелудочного сока, усиленное поглощение кальция и фосфора в кишечнике 70; 125; 164; 190; 210. В настоящее время широкое использование получила группа алюмосиликатов или бентонитов – это глина, которая на 70 % состоит из минералов группы монтмориллонита. Они широко используются как адсорбенты, ускорители химических реакций, связывающие вещества в промышленности, как составная часть препаратов в медицине и в качестве кормовых добавок в сельском хозяйстве, обладая высокой адсорбционной, ионнобменной активностью и коллоидальными свойствами 108; 123. В сельском хозяйстве бентонит применяется в качестве ингредиента при производстве кормовых добавок и комбикормов. За счет своих адсорбционных свойств может объединять и переносить биологически активные вещества по организму. Также участвует в адсорбции и дезактивации токсических веществ в толстом кишечнике. За счет своего многокомпонентного состава бентонит в кормлении птицы нормализует перистальтику кишечника, предотвращая быстрое прохождение содержимого по пищеварительному тракту, за счет чего оказывать содействие на лучшее переваривание и всасывание питательных веществ 141; 225. 37 Установлено, что бентонитовые глины характеризуются способностью поглощать алкалоиды, микробные клетки и их токсины. Также они обладают гепатопротекторым свойством, способны оказывать положительное влияние на воспроизводительную функцию. По данным М. П. Семененко (2008) активность действия бентонитов наблюдается при лечебно-профилактических мероприятиях против гипотрофии, анемии, микотоксикозов, стрессах и болезнях обмена веществ 14; 15; 19; 141. Перлитом называют горную породу, созданную в результате гидратации вулканического стекла, обсидиана. Свое название порода приобрела изза внешнего сходства с жемчужинами – ядра перлита имеют округлую форму и характерный блеск. В зависимости от содержания разного рода примесей подразделяется на: сферолитовую (примеси полевого шпата); обсидиановую (примеси обсидиана); смолянокаменную (однородная). В зависимости от этого имеет характерную окраску (белая, черная, зеленая, коричневая или коричневая). Перлит включает следующие химические элементы: двуокись кремния, окись алюминия, окись калия, окись натрия, окись железа, окись кальция, окись магния, вода. Широкое распространение получил продукт переработки перлита в результате его измельчения и термической обработки – вспученный перлит. Он характеризуется: огнестойкость (температура плавления – 90 °С); химическая нейтральность (не взаимодействует с щелочами и слабыми кислотами); перлит является долговечность материалом; устойчив к влаге; не подвержен гниению; легкость; сыпучесть; редкие абсорбирующие свойства; экологичность. За счет положительных свойств он получил широкое распространение в пищевой промышленности, животноводстве и птицеводстве. В пищевой промышленности перлит широко применяется для очистки воды, вин, пива, фруктовых соков, растительных масел. В животноводстве основное распространение получил как подстилка, не намокающая и держа38 щая тепло, препятствуя появлению насекомых в ней. Это помогает поддерживать благоприятные санитарные условия в корпусах и устранению неприятного запаха. В ветеринарии используется как монодобавка в рацион, либо в составе кормовых добавок, для поддержания обмена веществ, профилактики кишечных заболеваний и токсикозов от плохих кормов. Вермикулит – природное вещество, обладающее адсорбционным, катионообменным и каталитическим свойствами. Этот минерал относится к группе гидрослюд, имеющих слоистую структуру. Магний, кальций, калий и натрий – эти катионы присутствуют в добавке в легко извлекаемой форме 89; 125. Химический состав минерала представлен: окись магния, закись железа, окись железа, окись алюминия, двуокись кремния, вода. В настоящее время широкое распространение получил вспученный вермикулит, получаемый обжигом вермикулитового концентрата – гидрослюды, заключающей между элементарными слоями связанную воду и выступает в виде сыпучего, пористого материала чешуйчатых частиц серебристого или золотистого цвета. Является экологически чистым и биостойким продуктом, не выделяет никаких газов и вредных для дыхания пылевых взвесей, что является важным фактором. Также к основным свойствам вермикулита относятся: малая гигроскопичность; теплоизоляция; огнестойкость; долговечность; экологичность; химическая нейтральность; пористость; сыпучесть; отражатель радиации; отсутствие запаха; насыщенный минеральный состав и биологическая ценность. За счет своих положительных свойств вспученный вермикулит применяется в качестве: кормовой добавки животным и птице (для борьбы с интоксикациями организма); подстилки для животных (после применения можно использовать в качестве ценного удобрения); для профилактики элементарных заболеваний и токсикозов, улучшения качества получаемой продукции. Блажнова М. В. (2004) установила, что введение в рацион вермикулита способствует нормализации обменных процессов за счет повышения – коли39 чества эритроцитов, содержания уровня гемоглобина, белка, кальция, фосфора и других полезных элементов. Со стороны желудочно-кишечного тракта наблюдается снижение заболеваемости кишечника, улучшается выведение токсинов из организма. Установлено, что введение вермикулита в рацион птицы с самого раннего возраста оказывает привыкания, за счет чего сокращается смертность молодняка, увеличиваются приросты 23. В опытах на птице установлено, что применение вспученного вермикулита повышает резистентность организма к заболеваниям, возрастает поедаемость корма, продлевается цикл пиковой продуктивности и качество яйца. Замечено, что птицам нравятся блестящие частицы вермикулита 30. Вермикулит применяется в качестве подстилочного материала для создания оптимального микроклимата в птицеводческих помещениях с напольным содержанием. Вермикулитовая подстилка является недорогой и доступной, отличается высокой влаго- и газопоглотительной способностью, низкой теплопроводностью, является безвредной, свободной от болезнетворных микроорганизмов, плесени и токсических веществ. Замечено, что качество подстилочного материала оказывает значительное влияние на эффективность производства продукции, за счет резкого снижения содержания аммиака в воздухе. Подстилка, после ее применения может использоваться в качестве удобрения для повышения урожайности сельскохозяйственной продукции. Вспученный вермикулит применяется в качестве носителей жидких питательных веществ, благодаря своим высоким абсорбционным свойствам. После радиационных заражений местности было рекомендовано вводить вермикулит в виде 5 % добавки к концентрированным кормам 89; 193; 194. Преимущества вермикулита перед перлитом 162: температура использования вермикулита выше, чем у перлита; вермикулит обладает ионообменной способностью, перлит в свою очередь – нет; вспученный вермикулит не причиняет механических повреждений корням в сравнении с перлитом; 40 вермикулит имеет малые пылеобразующие свойства в сопоставлении с перлитом; вермикулит способен сберегать положительные ионы удобрений, перлит не способен, так как не участвует в процессе ионного обмена; вермикулит способен отдавать питательные вещества. Перлит же питательно нейтрален, и даже не способен временно сохранять эти вещества. прочность зерна вермикулита выше, чем у перлита; поглотительная способность вермикулита выше, чем у перлита; вермикулит не образует пустот при засыпке, а перлит образует; срок хранения вермикулита намного больше, чем у перлита; вермикулит можно использовать повторно и как вторичное сырье, в отличие от перлита; вермикулит имеет меньшую усадку при измельчении; вермикулит меньше впитывает влагу, чем перлит. Исследования многих авторов показывают, что применение сорбентов снижают уровень токсического действия при кормовых отравлениях, при этом предохраняет получаемую продукцию от накопления токсинов, не изменяя ее биологической ценности. А введение минеральных сорбентов в рацион птицы позволяет увидеть хорошие привесы, повышение сохранности и продуктивности, при меньшем расходе корма. * * * На наш взгляд, перспективным является исследования влияния комплексной кормовой добавки в птицеводстве, основу которой составляют несколько видов бактерий, обладающих пробиотическим действием в комплексе с вермикулитом и соевой окарой, как средой для роста микроорганизмов. Анализируя все положительные свойства вышеуказанных составных частей этой добавки, целью нашей работы явилось фармакологическое и токсикологическое обоснование применения новой комплексной кормовой добавки в мясном перепеловодстве. 41 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Научная работа проводилась с 2011 по 2014 гг. на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики Кубанского государственного аграрного университета. Исследования, а также опыты на лабораторных животных и птице осуществлялись в научно-исследовательской лаборатории кафедры, виварии факультета ветеринарной медицины. Изучение токсических элементов проводилось в Учебно-научном центре «Нанотехнология» при Кубанском ГУ. Научно-хозяйственные испытания проводились в крестьянско-фермерском хозяйстве «Пуклич Р. М.», Республика Адыгея. Общая схема исследований представлена на рисунке 4. Фармакотоксикология и эффективность использования кормовой добавки Трилактосорб в мясном перепеловодстве Разработка технологии получения кормовой добавки Контроль качества кормовой добавки Токсикологическая оценка кормовой добавки Фармакологическая оценка кормовой добавки Подбор дозы и схемы применения кормовой добавки Биохимические Физиологические Изучаемые показатели Микробиологические Экономическая эффективность Ветеринарно-санитарная оценка Выводы Продуктивные Предложение производству Рисунок 4 – Общая схема исследований 42 В научно-исследовательской работе использовали новую сухую кормовую добавку Трилактосорб (СТО 9291-010-00493209-14), обладающая антитоксическими свойствами и представляющая собой совокупность трех видов термофильных молочнокислых культур (Streptococcus thermophiles В-2894, Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus В-6543, Lactobacillus acidophilus В-8634), выращенных на соевом растительном сырье с использованием сорбента минерального происхождения. Культуры микроорганизмов получены в ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности» (г. Москва). Для сравнения, в качестве аналога, применяли жидкий пробиотик Трилактобакт, который включает в себя ассоциацию трех видов молочнокислых бактерий: Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus B-5788, L. acidophilus B-3235, Lactococcus lactis ssp. lactis B-3145, выращенных на питательной среде, состоящей из воды, мелассы свекловичной, молока или молочной сыворотки. В экспериментах были использованы: простейшие рода брюхоресничных инфузорий (стилонихии), лабораторные животные (60 мышей, 30 крыс, 4 кролика-альбиноса и 18 хомячков), перепела (930 голов), 130 проб крови. Токсикологическая оценка кормовой добавки Трилактосорб изучалась экспресс-методом на стилонихиях (ГОСТ Р 52337-2005) [58], а также путем определения показателей острой и хронической токсичности согласно ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009 [62]. Изучение кожно-резорбтивного действия и раздражающего свойства на слизистые оболочки глаз проводили на кроликах – альбиносах согласно ГОСТ Р ИСО 10993.10-99 [61]. В качестве дополнительного исследования раздражающего действия изучали влияние пробиотической кормовой добавки Трилактосорб на слизистую ротовой полости хомячков (ГОСТ Р ИСО 10993.10-99) [61]. В отдельных опытах лабораторные животные и птица подвергались умерщвлению, с изучением патоморфологических изменений их органов и тканей. Все лабораторные животные находились в стандартных условиях вивария факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ, имели свободный 43 доступ к воде, нормальный температурный и световой режимы, содержались в клетках с древесной стружкой в качестве подстилки и получали лабораторный гранулированный корм ПК 120-3 согласно ГОСТ Р 50258-92 [60]. Перед началом лабораторных экспериментов для акклиматизации подопытные животных выдерживались в течение 5 дней. Токсикологическую оценку кормовой добавки Трилактосорб экспрессметодом осуществляли в условиях кафедры биотехнологии, биохимии и биофизики Кубанского госагроуниверситета на суточной культуре стилонихий (Stylonychia mytilus) за 1,53 ч, находящейся в стадии экспоненциального (активного) роста, путем воздействия на них различных фракций токсических веществ, извлеченных из исследуемой добавки водным и ацетоновым экстрактами. Результат биотестирования оценивали по количеству погибших простейших. Безопасной считается добавка, в которой 70100 % особи сохранили жизнеспособность при одновременном параллельном исследовании как ацетонового, так и водного экстракта. На начало опыта в каждой лунке было от 15 до 20 шт. инфузорий. В качестве контроля использовали 1%-й раствор ацетона (1 %-й РА) и минеральный раствор Лозина-Лозинского (МР ЛЛ). Выживаемость стилонихий N (%) вычисляли согласно формуле: N = N2 : N1 × 100, где N2 – среднеарифметическое (из пяти испытаний) значение количества стилонихий в конце опыта, шт.; N1 – среднеарифметическое (из пяти испытаний) значение количества стилонихий в начале опыта, шт.; 100 – перевод результата в проценты. Оценку острой токсичности осуществляли на клинически здоровых беспородных белых мышах с начальной массой тела 20–25 г (возраст 2,5-3,0 мес.) и половозрелых беспородных белых крысах с массой тела 220-250 г (возраст 2,5–3,0 мес.) путем однократного применения кормовой добавки Трилактосорб в смеси с кормом лабораторным животным натощак. В эксперименте методом групп-аналогов было сформировано пять групп жи44 вотных обоего пола 6 особей в каждой. Согласно данным научной литературы эффективная доза, характерная для данной группы фармакологических добавок составляет 0,2 % от массы корма [64; 95; 96; 97; 98; 99; 100; 101; 102; 120; 132; 133; 160; 161]. В связи с чем, нами было испытано 3 дозы кормовой добавки Трилактосорб от научно-предполагаемой: 3- (0,6 %), 5- (1,0 %) и 10-кратные (2,0 %). В качестве групп-контроля использовались: отрицательный контроль (ОК) – мыши и крысы получали только стандартный лабораторный гранулированный корм ПК 120-3 (ГОСТ Р 50258-92) и контроль модельной среды (КМС), в которой лабораторные животные употребляли стандартный комбикорм и субстрат, входящий в состав кормовой добавки Трилактосорб, в 10-кратной дозе (2,0 %). Наблюдение проводили в течение 14 дней с учетом изменения общего состояния, а также поведения подопытных лабораторных мышей и крыс. Для изучения хронической токсичности кормовой добавки Трилактосорб использовали клинически здоровых беспородных белых мышей с начальной массой тела 6,056,10 г и перепелов мясной продуктивности породы фараон с начальной массой 8,158,27 г. Из лабораторных объектов методом групп-аналогов формировали контрольные и опытные группы по 6 особей в каждой. От предполагаемой эффективной (0,2 % от массы корма) всего испытано три дозы пробиотической кормовой добавки Трилактосорб: 3- (0,6 %), 5- (1,0 %) и 10-кратные (2,0 %). В качестве групп-контроля в опыте использовались следующие: отрицательный контроль (ОК) ‒ мыши получали стандартный лабораторный корм ПК 120-3, а кормление перепелов осуществлялось комбикормом, сбалансированным по основным питательным веществам в соответствии с возрастными нормами ВНИТИП [77]; контроль модельной среды (КМС) – лабораторные мыши и птица употребляли стандартные корма и субстрат, входящий в состав кормовой добавки Трилактосорб, в 10-кратной дозе (2,0 %). Смешивание кормовой добавки Трилактосорб с кормом осуществлялось ежедневно, на протяжении 42 дней, что соот- 45 ветствует периоду выращивания данного вида сельскохозяйственной птицы в условиях производства. За общим состоянием организма лабораторных объектов вели постоянно наблюдение, обращая внимание на следующие показатели: сохранность, внешний вид, поведение, потребление корма, изменение массы тела, морфобиохимические показатели крови, патоморфологические изменения органов и тканей. Изучение кожно-резорбтивного действия испытуемой добавки проводили на 2-х половозрелых кроликах-альбиносах разного пола массой 2,2-2,5 кг, которым за сутки до проведения опыта выстригали шерсть на симметричных участках обоих боков для аппликации, одна из которых служила контролем. Размер обрабатываемой поверхности кожи составлял от 5,0 до 8,0 % поверхности тела подопытного животного. 1,0 г кормовой добавки Трилактосорб разводили небольшим объемом воды, затем смачивали ватным тампоном и наносили на участок кожи, а сверху фиксировали повязкой. Местно-раздражающее действие Трилактосорба на кожу оценивалась после 4-часовой экспозицией, а также через 24; 48 и 72 часов. Обращали внимание на степень кожного проявления (покраснение, повышение чувствительности, припухлость, воспаление), включая эритему и отек, а также возможность появления общей реакции организма кроликов-альбиносов на добавку. Оценка раздражающего действия Трилактосорба на конъюнктиву глаз проводилась на 2-х половозрелых кроликах-альбиносах обоего пола массой 2,8‒3,0 кг. Перед началом опыта, для выявления выраженных повреждений, обращали внимание на состояние глаз каждого подопытного животного. Эксперимент начинали с того, что кроликам-альбиносам аккуратно в нижний отдел конъюнктивального мешка левого глаза вводили такое количество добавки, которое занимает объем 0,1 мл. После инсоляции нижнее и верхнее веки соединяли и в таком положении выдерживали в течение 2–3 сек. Правый глаз служил контролем. Обследование глаза лабораторных животных после введения кормовой добавки Трилактосорб проводили через 1; 24; 48 46 и 72 часа. Обращали внимание на состояние конъюнктивы, роговицы, радужной оболочки, проявление хематоза (отек конъюнктивы), а также наличие выделений из глаза. Изучение дополнительного раздражающего действия кормовой добавки Трилактосорб на слизистую ротовой полости проводили на здоровых половозрелых хомячках обоего пола массой 230–250 г, из которых формировали три группы подопытных животных по 6 голов в каждой, получавших разные дозы добавки. Кормовую добавку Трилактосорб в дозе 0,6; 1,0 и 2,0 г разводили в 10,0 мл 0,9%-го раствора хлорида натрия, затем ими пропитывали ватно-марлевые тампоны. Далее помещали их в один защечный мешок каждого лабораторного животного, а другой мешок служил контролем. Продолжительность контакта слизистой рта с материалов составила десять минут. Для предотвращения выталкивания тампона изо рта на каждого хомячка надевали бумажный воротник, располагающийся вокруг шеи так, чтобы не мешать нормальному питанию и дыханию. В конце эксперимента отчет включал в себя макроскопическое исследование защечных мешков сразу после извлечения тампонов, а также оценку состояния слизистой и степень раздражающей реакции. Антибактериальную активность штаммов-пробионтов, входящих в состав добавки Трилактосорб in vitro изучали по М. Литвинову (1947) в модификации Н. С. Егорова (1965) («чашечный» метод). Для осуществления данного метода в чашки Петри разливали 20,0 мл питательной среды – агаризованное гидролизованное молоко, приготовленное согласно ГОСТ 10444.11-89 (пункт 3.3) [40]. Посев проводили согласно ГОСТ 10444.11-89 (пункт 4.2.2) [40]. В стерильном боксе 1,0 г штамма-пробионта (культивирование осуществляли по технологии кормовой добавки Трилактосорб), в том числе изучаемой добавки, разводили в небольшом объеме физического раствора и вносили в питательную среду предварительно охлажденной до 42–45 °С. Для равномерного распределения суспензии в среде, содержимое чашки круговыми движениями перемешивали и оставляли до застывания агара. После 47 чашки Петри помещали в термостат при (38±1) °С на трое суток. Через 72 часа в ламинар-боксе стерильным скальпелем из чашки Петри удаляли половину застывшей питательной среды с выросшими на ней колониями микроорганизмов. Затем в пустую половину чашки Петри доливали 10,0–15,0 мл универсального питательного агара для культивирования микроорганизмов – сухой (СПА). После застывания питательной среды на нее проводили засев полевых условно-патогенных тест-микроб (Escherichia coli и Staphylococcus aureus). Результат антагонистической активности учитывали через 24 ч. по зоне задержки роста тест-микроба под действием отдельного штамма-пробионта и при их совместном культивировании. Кислотообразующая активность штаммов-пробионтов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб in vitro, как основной фактор антибиотического свойства молочнокислых микроорганизмов изучалась путем определения ассортимента и количества продуцируемых исследуемой микрофлорой органических кислот. Определение проводили методом капиллярного электрофореза на полуавтоматическом приборе «Капель–105», с регистрацией в диапазоне длин волн 370–375 нм, используя в качестве ведущего электролита бензойный буферный раствор. Результаты анализа в виде электрофореграмм выводились на дисплей компьютера через специальную программу «МультиХром». Для определения общего титра жизнеспособных микроорганизмов 1 г соответствующего штамма-пробионта, выращенного раздельно и при их совместном использовании в кормовой добавке Трилактосорб, помещали в ёмкость со 100 см3 стерильного 0,9 % раствора NaCI, оставляли на 1 ч. Таким образом, получали разведение 1:100. Далее готовили ряд последовательных десятикратных разведений до 10-8, из которых последние три (10-6; 10-7; 10-8) высевали на чашки Петри с агаризованным гидролизованным молоком и подсчитывали количество выросших колоний через 72 ч. По формуле, согласно ГОСТ 10444.11-89 [40], определяли общее число жизнеспособных клеток: 48 Х = N × Р / V, где N – число колоний; Р – выбранное разведение; V – объем разведений. Изучение жизнеспособности молочнокислых микроорганизмов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб в процессе хранения, проводили путем определения титра культуры (ГОСТ 10444.11-89) [40] и по нарастанию титруемой кислотности при её активизации (ГОСТ 3624-92) [51] на момент изготовления добавки, а также через 1; 2; 3; 4; 5; 6 и 7 месяцев. Определение титруемой кислотности проводили потенциометрическим методом, который основан на нейтрализации кислот, содержащихся в продукте, 0,1 н раствором NaOH до значения рН = 8,9 ед. с помощью Иономер pH-метр И-500. В стакан вместимостью 50 мл отмеряли 20 мл дистиллированной воды и 10 мл активизированной добавки. Электроды анализатора опускали в смесь и слегка круговыми движениями перемешивали, при этом из бюретки наливали гидроокись натрия для нейтрализации. По достижении точки эквивалентности (рН = 8,9 ед.) процесс прекращали. Затем проводили отсчет количества раствора гидроокиси натрия, затраченного на нейтрализацию. Кислотность в градусах Тернера находили путем умножения объема использованной пробы (10 мл) на объем натрия гидроокиси, пошедшего на титрование. За окончательный результат анализа принимали среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Изучение фармакологических свойств, а также выявление наиболее экономически эффективной дозы и схемы применения кормовой добавки Трилактосорб осуществлялось на перепелах путем анализа их основных обменных процессов, а также хозяйственных показателей при выращивании данного вида птицы на производстве. Испытания кормовой добавки Трилактосорб в условиях производства проводились на перепелах породы фараон мясного направления в КФХ «Пуклич Р. М.» (Республика Адыгея), согласно методике ВНИТИП [77]. Для сравнения применяли кормовую добавку Трилактобакт. 49 Для подбора оптимальной дозы использования кормовой добавки Трилактосорб был проведен первый научно-хозяйственный опыт. Методом групп-аналогов было сформировано четыре группы перепелов по 90 голов в каждой: контрольная группа – в рационе птиц присутствовал только основной полноценный комбикорм, рекомендованный ВНИТИП [77]; 1-я опытная группа – с основным рационом в течение всего периода выращивания задавали перепелам Трилактосорб в дозе 0,2 % к массе корма; 2-я опытная группа – в комбикорм добавляли Трилактосорб в дозе 0,5 % на массу корма; 3-я опытная группа – перепела получали комбикормом с Трилактосорб в дозировке 1,0 % на массу корма. Схема первого опыта представлена в таблице 2. Таблица 2 – Схема первого научно-хозяйственного опыта Количество голов Контрольная 90 1-я опытная 90 2-я опытная 90 3-я опытная 90 Группа Условия кормления ОР – основной рацион ОР + 0,2 % Трилактосорб ОР + 0,5 % Трилактосорб ОР + 1,0 % Трилактосорб Для подбора оптимальной схемы использования кормовой добавки Трилактосорб был проведен второй научно-хозяйственный эксперимент. Методом групп-аналогов было сформировано шесть групп перепелов по 90 голов в каждой: контрольная группа ‒ в рационе присутствовал только основной комбикорм (старт, рост, финиш), рекомендованный ВНИТИП [77]; опытные группы: 1-я опытная группа ‒ с основным рационом в течение всего периода выращивания задавали добавку Трилактобакт в дозе 0,5 % к массе корма; 2-я опытная группа – в стартовый комбикорм (0-13 суток) добавляли Трилактосорб в дозе 0,5 % на массу корма; 3-я опытная группа – перепела получали в период старта и роста (0‒13; 14‒27 сутки) с комбикормом Трилактосорб в дозировке 0,5 % на массу корма; 4-я опытная группа ‒ в период роста и финиша (14‒27; 28‒42 сутки) в комбикорм добавляли добавку Трилактосорб в дозе 0,5 % к массе основного рациона; 5-я опытная группа – 50 в стандартный комбикорм (старт, рост, финиш) в течение всего периода выращивания задавали кормовую добавку Трилактосорб в дозировке 0,5 % на массу корма (таблица 3). Таблица 3 – Схема второго научно-хозяйственного опыта Количество голов Контрольная 90 1-я опытная 90 2-я опытная 90 3-я опытная 90 4-я опытная 90 5-я опытная 90 Группа Условия кормления ОР – основной рацион ОР + 0,5 % Трилактобакт (0‒42 дней) ОР + 0,5 % Трилактосорб (0‒13 дней) ОР + 0,5 % Трилактосорб (0‒13; 14‒27 дней) ОР + 0,5 % Трилактосорб (14‒27; 28‒42 дней) ОР + 0,5 % Трилактосорб (0‒42 дней) В условиях производства птица содержались в металлических клетках. Ярус состоял из трех секций, каждая из которых рассчитана на 30 голов. Система поения – ниппельная, к которым производственная птица имела постоянный свободный доступ. Раздача кормов механическая: в первую неделю перепелята получали комбикорма 3 раза в сутки, а далее – 2 раза. Влажность воздуха, температура, освещенность помещения выдерживались в соответствии с требованиями ВНИТИП [77]. Перепела в опытные периоды потребляли комбикорма, сбалансированные по основным питательным и биологически активным веществам в соответствии с возрастными нормами. Продолжительность производственного опыта составила 42 дня. Динамику живой массы лабораторных животных и перепелов в каждой группе изучали путем индивидуального взвешивания еженедельно. Прирост живой массы определяли за весь период выращивания (42 дня). Абсолютный среднесуточный прирост рассчитывали по формуле [77]: Пабс = (Мк – Мн) / Д, где: Пабс. – абсолютный среднесуточный прирост, г; Мк – живая масса особи в конце периода эксперимента, г; Мн – живая масса особи в начале периода эксперимента, г; Д – количество дней эксперимента, дни. 51 Ежедневно проводили контроль за сохранностью и падежом поголовья. Сохранность рассчитывали в процентах от начального поголовья по отдельным периодам выращивания и за весь период в целом. Потребление кормов и кормовых добавок птицей в каждой группе рассчитывали ежедневно с первого дня и в течение всего эксперимента. По полученным данным вычисляли затраты кормов на одну голову и 1 кг прироста живой массы птицы (конверсия). Для изучения мясной продуктивности в 42-х дневном возрасте проводили контрольный убой и анатомическую разделку птиц из каждой группы. До убоя перепелов выдерживали на голодной диете в течение 12 часов. Учет вели по следующим показателям: живая масса птицы перед убоем, масса потрошеной тушки, масса грудных, ножных и остальных мышц, масса печени, сердца, мышечного желудка, железистого желудка и кишечника. О состоянии и качестве мяса перепелов, после употребления ими кормовой добавки, судили по результатам ветеринарно-санитарной экспертизы. Послеубойную ветеринарно-санитарную экспертизу мяса вынужденно забитых перепелов и проведение её физико-химических исследований (реакции на пероксидазу, с сернокислой медью и формалином, определение количества летучих жирных кислот) осуществляли согласно утвержденной документации [138]. Определение кислотности (pH) мяса птиц изучалось на приборе ‒ Иономер pH-метр И-500, согласно ГОСТ Р 51478-99 [56]. Изучение органолептических показателей проводили по ГОСТ Р 51944-2002 [57], упитанности согласно ГОСТ Р 54673-2011 [59]. Микробиологическую загрязненность мяса перепелов изучали по мазкам-отпечаткам с поверхности тушек, а также более глубоких слоев мышц согласно ГОСТ Р 50396.1-92 [54]. Дегустационную оценку мяса перепелов осуществляли согласно рекомендациям ВНИТИП [77]. Для изучения переваримости и использования питательных веществ комбикорма контрольных и опытных групп перепелов проводился балансо- 52 вый опыт в период с 35 по 42 сутки выращивания птицы, согласно методики ВНИТИП [77]. Химический анализ кормов и продуктов вторичного метаболизма птицы проводили по следующим методикам: отбор проб по ГОСТ 26712-94 [49]; определение влаги ‒ ГОСТ 13496.3-92 [43], сухого остатка – ГОСТ 26713-85 [50], сырого протеина – ГОСТ 13496.4-93 [44], сырого жира – ГОСТ 13496.15-97 [41], сырой золы – ГОСТ 26226-95 [47], сырой клетчатки ‒ ГОСТ 13496.2-91 [42], кальция – ГОСТ 26570-95 [48]. Для изучения морфологических и биохимических показателей крови подопытных групп лабораторных животных и перепелов во время контрольного убоя производили забор крови в специальные пробирки с антикоагулянтом и с активатором свертывания. Изучение морфологических показателей крови мышей проводили на анализаторе Medonic CA 620. Определение морфологических показателей крови перепелов осуществляли в камере с сеткой Горяева. Гемоглобин птиц измеряли на анализаторе НemoCue Hb 201+. Биохимические показатели сыворотки крови лабораторных животных и птиц изучали на полуавтоматическом анализаторе Stat fax 1904 Plus. Определяли уровень общего белка, альбуминов, содержание мочевины, холестерина, фосфора, кальция, активность аланинаминотрансфераз (АлАТ) и аспартатаминотрансфераз (АсАТ). Подсчет глобулинов осуществляли на спектрофотометре Unico 2800 UK/VIS по методике определения белковых фракций в сыворотке крови. В качестве дополнительного показателя белкового обмена рассчитывали альбумин-глобулиновый коэффициент. Изучение химического состава мышечной ткани перепелов проводили следующими методами: отбор проб осуществляли по ГОСТ 9792-73 [52], определение содержания влаги – ГОСТ 9793-74 [53], определение содержания жира – ГОСТ 23042-78 [45], определение количества белка – ГОСТ 25011-81 [46]. Согласно рекомендациям ВНИТИП [77] определяли ин- 53 декс качества мяса птиц путем отношения количества белка к жиру. Энергетическую ценность мышц перепелов рассчитывали по формуле ВНИТИП: ЭЦ (кДж) = белок, г × 23,86 кДж + жир, г × 39,72 кДж. Аминокислотный состав мышц перепелов изучался на полуавтоматическом приборе «Капель – 105» методом капиллярного электрофореза. Белки для электрофореза гидролизовали кислотным способом. Уровень токсических элементов (мышьяка, свинца, кадмия и ртути) в анализируемых образцах мышечной ткани перепелов определяли методом атомно-абсорбционной спектрометрии с электротермической авторизацией химических элементов на спектрометре «Квант-Z.ЭТА». Метод основан на минерализации продукта смесью кислот и реагентов-окислителей, проведении реакций элементов в полученном растворе-минерализате, отгонки летучего соединения потоком аргона в разогретую кварцевую кюветуатомизатор и измерении доли токсического элемента атомно-абсорбционным методом по величине атомного поглощения на резонансной длине волны. Для изучения титра лакто- и бифидобактерий в кишечнике подопытных перепелов, после использования кормовых добавок, во время контрольного убоя (в возрасте 42-х дней) отбирали содержимое слепых отростков и прямой кишки для микробиологических исследований. Из отобранного материала путем последовательных разведений готовили пробы, которые затем переносили на чашки Петри с заранее приготовленной питательной средой: МРС (для лактобактерий) и модифицированная печеночная среда Блаурокка (для бифидобактерий). Отбор проб материала, выделение и идентификация бактерий кишечника птиц осуществлялась согласно методическим рекомендациям «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных» [110]. Расчеты экономической эффективности использования кормовой добавки Трилактосорб на перепелах проводили с учетом стоимости его расхода, потребленного комбикорма на один кг прироста живой массы птицы 54 и сохранностью поголовья. При этом учитывали фактическую стоимость комбикормов и цену продукции перепеловодства в период проведения испытаний. Все результаты проведенных исследований обрабатывали методом вариационной статистики [92]. Различие расценивалось как достоверное при Р < 0,05. 55 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 3.1 Состав, технология получения и оценка качества кормовой добавки Трилактосорб Кормовая добавка Трилактосорб (СТО 9291-010-00493209-14) является инновационной разработкой кафедры биотехнологии, биохимии и биофизики ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет». Добавка представляет собой сухую смесь, состоящей из трех видов термофильных молочнокислых культур (Streptococcus thermophiles В-2894, Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus В-6543, Lactobacillus acidophilus В-8634), выращенных на соевом растительном сырье с применением минерального сорбента. Культуры предоставлены ФГБНУ «Всероссийский научно- исследовательский институт молочной промышленности» г. Москва. В 1 г готового продукта содержится не менее 1,0 × 108 КОЕ микроорганизмов. Благодаря уникальному компонентному составу добавка проявляет сорбирующие и антитоксические свойства, а присутствующая в ней микрофлора способна максимально приживаться в желудочно-кишечном тракте перепелов, в связи с физиологическими особенностями данного вида сельскохозяйственной птицы. Используемые в кормовой добавке Трилактосорб компоненты выполняют определенные функции. Так как молочнокислая флора является естественным представителем микробного биоценоза желудочно-кишечного тракта, она нормализует баланс кишечной микрофлоры в сторону полезных микроорганизмов. Попадая в организм хозяина, молочнокислые микроорганизмы продуцируют органические кислоты, которые в свою очередь снижают рН среды, в результате чего происходит ингибирование роста и развития патогенной микрофлоры. Продукты переработки сои, в частности окара, используемая в составе добавки Трилактосорб содержит клетчатку, белок, макро-, микроэлементы и витамины [163]. Питательная ценность окары определяется белковой составляющей, комплексом олигосахаридов и поли56 ненасыщенных жирных кислот. Научные исследования показали наличие в соевых олигосахаридах бифидогенных свойств, что положительно влияет на микрофлору кишечного тракта. Следует отметить, что соевая окара содержит как заменимые, так и незаменимые аминокислоты, а по аминокислотному окара близка к показателям ФАО/ВОЗ и обладает значительной степенью усвояемости [158]. Присутствующий в добавке сорбент минерального происхождения (вспученный вермикулит) обладает высокими ионообменными свойствами, что позволяет ему отдавать в легкоусвояемой форме ионы магния, калия, кальция, натрия и т. д., а также обеспечивает выведение радионуклидов и других токсических элементов из организма . Совокупность всех компонентов кормовой добавки Трилактосорб говорит о её высоких лечебно-профилактических и питательных свойствах. Культуры, входящие в состав комплексной кормовой добавки Трилактосорб применяются при производстве молочных продуктов на территории РФ и за рубежом, а также включены в список микроорганизмов с документально подтвержденной историей безопасного применения в пищевых продуктах (Бюллетень Международной Молочной Федерации № 377/2002). Согласно санитарным правилам (СанПин 1.2.731-99) используемые культуры относятся к микрофлоре непатогенной для организма человека. Технологическая схема производства кормовой добавки Трилактосорб представлена на рисунке 5. 57 Бактериальный концентрат соответствующего штамма-пробионта Соевое зерно Соевое молоко Промывание, замачивание Активизация культуры Вода Стерилизация 10 % от массы питательной среды (соевая окара) Измельчение Соевая основа Разделение (фильтрация) Твердая масса Стерилизация Культивирование активизированной микрофлоры Внесение сорбента в смесь Соевая окара Высушивание Измельчение Упаковка 58 Рисунок 5 – Технологическая схема производства пробиотической кормовой добавки Трилактосорб Готовый продукт Процесс изготовления кормовой добавки Трилактосорб включает в себя следующие ниже приведенные стадии. 1. Подбор штаммов-пробионтов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб. Используемая в добавке микрофлора входит во Всероссийскую коллекцию промышленным микроорганизмов, включенной Постановлением Правительства РФ от 24.06.1996 г. № 725-47 в «Перечень коллекций, депонирующих для государственных нужд микроорганизмы, культивируемые клетки растений и соматические клетки позвоночных». Микроорганизмы выделены из естественных или производственных источников без применения генных модификаций, идентифицированы и паспортизованы в установленном порядке. Streptococcus thermophilus В-2894 (термофильный cтрептококк) – сильный кислотообразующий компонент молочнокислых заквасок, способный к развитию и кислотообразованию при температурах свыше 50 °С. Представляет собой гомоферментативный, факультативно-анаэробный, термофильный, грамположительный кокк. Интервал температуры роста составляет 15,0–55,0 °С; оптимум – 40,0–46,0 °С. Предельная кислотность достигаемая в молоке – 110,0–120,0 °Т. В микропрепарате культура имеет круглую, овальную и сферическую формы, размером (0,5–0,7) × (0,7–1,0) мкм и представлена одиночно, парно или цепочками различной длины (бусы) (рисунок 6). Рисунок 6 – Микропрепарат чистой культуры Str. thermophilus. Увеличение 1500×. 59 Lactobacillus debrueckii subsp. bulgaricus В-6543 (болгарская палочка) сильный кислотообразующий компонент молочнокислых заквасок, способный к развитию и кислотообразованию при температурах свыше 50 °С. Представляет собой термофильные, гомоферментативные, факультативноанаэробные, грамположительные, не образующие спор палочки правильной формы. Интервал температуры роста составляет 20,0,055,0 °С; оптимум 40,045,0 °С. Предельная кислотность достигаемая в молоке 200,0350,0 °Т. В микропрепарате культура представлена крупными палочками с закругленными концами, размером (0,81,5) × (2,020,0) мкм, расположены одиночно, цепочки различной длины, часто зернистые (рисунок 7). Рисунок 7 Микропрепарат чистой культуры Lbc. debrueckii subsp. bulgaricus. Увеличение 1500×. Lactobacillus acidophilus В-8634 (ацидофильная палочка) сильный кислотообразователь, антагонист патогенной и технически вредной микрофлоры. Представляет собой термофильные, гомоферментативные, факультативно-анаэробные грамположительные неспорообразующие палочки правильной формы. Интервал температуры роста составляет 20,055,0 °С; оптимум 37,045,0 °С. Предельная кислотность, достигаемая в молоке 180,0300,0 °Т. В микропрепарате культура представлена крупными прямыми палочками размером (0,61,5) × (3,040,0) мкм, расположенные одиночно, парно или в виде коротких цепочек (рисунок 8). 60 Рисунок 8 – Микропрепарат чистой культуры Lbc. acidophilus. Увеличение 1500×. 2. Получение продуктов переработки сои – растительной основы кормовой добавки. Для получения соевого молока и окары, как основы для производства кормовой добавки Трилактосорб использовали сою сорта Альба. Соевое зерно тщательно промывали водой, заливали 3–4 частями воды по отношению к массе сухого зерна и оставляется при температуре 16-17 °С на 12–14 часов. Разбухшие зерна вновь промывали водой, размалывали на дробилке и вальцах, с добавлением воды (из расчета 0,5 литра на 1 кг сухого зерна). Затем массу пропускали через вальцы. К размолотой массе добавляли воду температурой 20 °С из расчета 6 частей воды на 1 часть сухого зерна. Массу размешивали с водой, и выдерживали 30 мин, после чего фильтровали через сито с отверстиями, диаметр которых равен 0,2 мм. После фильтрования получали нерастворимый соевый остаток (окару) и суспензию (молоко). Затем соевое молоко и окару автоклавируют для разрушения антипитательных веществ и дальнейшего засева культуры. 3. Технология получения добавки. Для получения кормовой добавки Трилактосорб использовали сухие бактериальные концентраты трех видов молочнокислых микроорганизмов (Streptococcus thermophiles В-2894, Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus В-6543, Lactobacillus acidophilus В-8634). Бактериальную культуры каждого микроорганизма, содержащая 1 ЕА жизнеспособных клеток, совместно акти61 визировали в 1,0 л соевого молока в течение суток при температуре 40‒42 °С. Далее в стерильных условиях от массы стерилизованной питательной среды (соевой окары) засевали на неё 10,0 % активизированной культуры. Засев микрофлоры на указанную питательную среду осуществляли при температуре 38‒40 °С, что способствует снижению температурного «шока» микроорганизмов. В процессе выращивания температуру субстрата повышали на 4-5 °С/ч, доводя до температуры не менее, чем до 50‒52 °С. Культивирование при данной температуре проводили в течение 6‒7 ч, что позволяет ускорить процесс выращивания микроорганизмов, а кроме того, при последующем вводе микрофлоры в виде добавки в организм хозяина обеспечивает их высокую жизнеспособность [126]. По истечению данного времени для снижения влажности субстрата и придания будующей пробиотической добавке сорбирующих и антитоксических свойств, от массы питательной среды, методом ступенчатого смешивания, вводили 10,0 % минерального сорбента (вспученный вермикулит – ТУ 5712-001-76685354-09), что обеспечивало его равномерное распределение в смеси. Затем, для достижения необходимой массовой доли влаги смесь подсушивали в течение 24 ч при температуре 40‒42 °С, что обеспечивало максимальное сохранение жизнеспособных клеток. Высушенную массу измельчали и упаковывали. 4. Контроль качества кормовой добавки Трилактосорб. Оценку качества готовой кормовой добавки проводят по органолептическим, физико-химическим и биологическим показателям, которые должны соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 4. Внешний вид, цвет и запах. Определение внешнего вида и цвета добавки проводили визуально при дневном рассеянном свете. Пробиотическая кормовая добавка Трилактосорб должна представлять собой однородную сыпучую массу, соломенного цвета со слабым запахом. 62 Таблица 4 – Показатели качества их исследования кормовой добавки Трилактосорб и методы Наименование показателя Характеристика и нормы Метод исследования Документ 1 2 3 4 Органолептические показатели Внешний вид, цвет и запах Однородная сыпуМетод определения чая масса, соловнешнего вида, цвета ГОСТ 13496.13-75 менного цвета со и запаха слабым запахом Физико-химические показатели Массовая доля влаги, % не более Токсические элементы мг/кг, не более: свинец кадмий мышьяк ртуть Метод определения влажности 10,0 ГОСТ 24061-89 Метод атомноМУК 4.1.986-2000 абсорбционной спек- МУК 4.1.986-2000 трометрии ГОСТ Р 51766-2001 ГОСТ 26927-86 1,0 0,2 0,2 0,03 Биологические показатели Количество жизнеспособных микроорганизмов, КОЕ/г, не менее Наличие БГКП (колиформы), не более КОЕ/г Наличие S. aureus, не более КОЕ/г Наличие бактерий рода сальмонеллы, не более КОЕ/г Наличие дрожжей и плесеней, КОЕ/г, не более 1,0 × 108 Метод микробиологического анализа (приготовление разведения для посева) ГОСТ 9225-84 (пункт 3.4.3) Методы определения молочнокислых микроорганизмов ГОСТ 10444.11-89 (пункт 4.2.2) Метод микробиологического анализа (подсчет количества клеток) ГОСТ 9225-84 (пункт 4.5.3) Метод определения бактерий группы кишечных палочек ГОСТ 9225-84 (пункт 4.6) 1,0 Методы определения Staphylococcus aureus (без предварительного обогащения) ГОСТ 30347-97 10,0 Метод иммуноконцентрации МР 11-3/278-09 5,0 Метод определения дрожжей и плесневых грибов ГОСТ 10444.12-88 1,0 63 Продолжение таблицы 4 1 Подлинность Токсичность 2 3 4 Должны присутствовать микроорганизмы вида Streptococcus Метод Определитель бакthermophilus, бактериологического терий Lactobacillus контроля в мазках, Берджи delbruеckii subsp. окрашенных по Граму bulgaricus, Lactobacillus acidophilus Методы определения общей токсичности Нетоксичен ГОСТ Р 52337-2005 Массовая доля влаги. Сущность метода заключается в определении уменьшения массы пробы после её высушивания в течении 1 ч при температуре 105 °С. Определение влажности проводили в трех параллельных навесках готовой добавки. 1,0 г навески, выделенной из средней пробы кормовой добавки, тщательно перемешивали и помещали в каждую взвешенную бюксу, после чего их закрывали крышками и ставили в эксикатор. Сушильный шкаф разогревали до 105,0 °С и помещали в него открытые бюксы с навесками добавки. Высушивание добавки проводили в течении 60 мин. По завершению процесса высушивания бюксы с продуктом вынимали из шкафа специальными щипцами, закрывали крышками и переносили в эксикатор для полного охлаждения. Затем охлажденные бюксы взвешивали с погрешностью не более 0,01 г и помещали в эксикатор до окончания обработки результатов анализа. Массовую долю влаги в процентах (Х) вычисляли согласно формуле: Х = 100 × (W1 – W2) / W1 – W0, где W0 – масса бюксы без пробы, г; W1 – масса навески исследуемой добавки до высушивания, г; W2 – масса навески исследуемой добавки после высушивания, г. 64 Расхождение между результатами трех параллельных измерений не должно превышать 0,5 %. За окончательный результат анализа принимали среднее арифметическое результатов трех параллельных измерений. Массовая доля влаги в кормовой добавке Трилактосорб не должна превышать 10,0 %. Содержание токсичных элементов. Уровень токсических элементов в готовом продукте определяли методом атомно-абсорбционной спектрометрии с электротермической атомизацией химических элементов на спектрометре «Квант-Z.ЭТА». Метод основан на минерализации продукта смесью кислот и реагентов-окислителей, проведении реакций элементов в полученном растворе-минерализате, отгонки летучего соединения потоком аргона в разогретую кварцевую кювету-атомизатор и измерении доли токсического элемента атомно-абсорбционным методом по величине атомного поглощения на резонансной длине волны. Определение проводили согласно ниже приведенной документации: свинец и кадмий – МУК 4.1.986-2000; мышьяк – по ГОСТ Р 51766-2001; ртуть – по ГОСТ 26927-86; Кормовая элементов добавка Трилактосорб соответствовала по требованиям содержанию СаНПиН токсичных 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» (индекс 1.2.9). Количество жизнеспособных микроорганизмов. Для определения титра жизнеспособных микроорганизмов 1,0 г кормовой добавки Трилактосорб помещали в колбу со 100,0 см3 стерильного физ. раствора, оставляли на 1 ч и тщательно перемешивали на аппарате для встряхивания жидкости в течение 30 мин. Получали разведение 1:100, после чего готовили ряд последовательных десятикратных разведений до 10-8. Разведения 10-6, 10-7 и 10-8 в параллелях высевали в чашки Петри с питательной средой. Чашки с засеянными средами помещали в термостат и выдерживали при (40,0±1) °С в течение 65 72 ч. По количеству выросших колоний определяли общий титр микроорганизмов по формуле: Х = N × Р, где N – среднеарифметическое значение числа колоний в чашках Петри; Р – порядковый номер десятикратного разведения, в котором отмечается рост бактерий. За окончательный результат испытания принимали среднее арифметическое значение параллельных измерений, расхождение между которыми не должно превышать 10 %. В целом, кормовая добавка Трилактосорб должна содержать не менее 1 × 108 КОЕ/г. Определение бактерий группы кишечных палочек. Метод основан на способности бактерий группы кишечных палочек сбраживать в питательной среде лактозу с образованием кислоты и газа при (37±1) °С в течение 24 ч. Для этого 0,1 г Трилактосорба засевали в пробирки с 5 мл среды Кесслера. Пробирки помещали в термостат при (37±1) °С на 24 часа. Через сутки анализировали результат по наличию или отсутствию газообразования. Через сутки после культивирования в термостате, в изучаемых пробирках, куду делали посев кормовой добавки Трилактосорб, не было выявлено газообразования, что свидетельствовало об отсутствии данных видов бактерий. Определение Staphylococcus aureus. Метод определения S. аureus без предварительного обогащения посевом на агаризованные селективные среды основан на высеве продукта на поверхность плотной среды, инкубировании, подсчете типичных колоний. Для этого 1,0 мл кормовой добавки Трилактосорб в разведении 1:1 с физиологическим раствором наносили на поверхность молочно-солевого агара в три чашки Петри и тщательно растирали шпателем. Посевы инкубировали при (37,0±1) °С в течение 24‒48 ч. Чашки инкубировали дном вверх. После термостатирования подсчитывали количество характерных колоний на каждой чашке. 66 Результаты исследований показали, что после термостатирования на чашках Петри не было выявлено роста колоний, характеризующие золотистого стафилококка. Определение бактерий рода Salmonella. Метод выявления сальмонелл основан на использовании прибора Vidas для процедуры автоматической иммуноконцентрации сальмонелл в наборе Vidas ICS после предварительного неселективного обогащения с последующим автоматизированным определением микроорганизмов в наборе Vidas SLM. При положительном результате на приборе, продолжают дальнейшее выделение бактерий, образующих типичные колонии на агаризованных дифференциально-диагностических средах, имеющих типичные для бактерий рода Salmonella биохимические и серологические характеристики. Результаты теста показали отсутствие в кормовой добавке Трилактосорб бактерий рода сальмонелл. Определение дрожжей и плесеней. Метод основан на высеве продукта в питательные среды, определении принадлежности выделенных микроорганизмов к плесневым грибам и дрожжам по характерному росту на питательных средах и по морфологии клеток. Для дифференцирования дрожжей и плесени от молочнокислых микроорганизмов в добавке использовали питательную среду на основе сывороточного агара БФ в комплекте с антибиотиком левомицетином. Для этого 1,0 г добавки добавляли в чашку Петри и заливали расплавленной питательной средой, охлажденная до 45 °С. Круговым движением чашек Петри в них перемешивали среду и оставляют до застывания агара. Чашки с засеянными средами помещали в термостат и выдерживали при (24±1) °С в течении 5 суток. Рост дрожжей на агаризованных средах сопровождается образованием крупных, выпуклых, блестящих, серовато-белых колоний с гладкой поверхностью и ровными краями. Развитие плесневых грибов на питательных средах сопровождается появлением мицелия различной окраски. 67 Для количественного подсчета отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов. Результаты обрабатывают и пересчитывают отдельно для дрожжей и плесневых грибов согласно требований ГОСТ 10444.12-88 (пункт 5.4). В результате исследований на питательной среде после культивирования кормовой добавки Трилактосорб не было выявлено роста колоний и появления мицелия, характеризующие дрожжи и плесневые грибы. Определение подлинности. Подлинность кормовой добавки Трилактосорб определяли методом бактериологического контроля в мазках, окрашенных по Граму. В мазках должны быть микроорганизмы вида Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus, Lactobacillus acidophilus определение которых проводиться согласно «Определитель бактерий Берджи» [122]. Определение токсичности. Определение безвредности кормовой добавки Трилактосорб проводят согласно ГОСТ Р 52337-2005, который предусматривает экспресс-метод и основной метод. Экспресс-метод основан на культивировании стилонихий и воздействии на них различных фракций токсических веществ, извлеченных из исследуемой добавки водным и ацетоновым экстрактами. Основной метод определения общей токсичности заключается в извлечении токсичных веществ из добавки ацетоном или водой и в ведении данного экстракта однократно в желудок клинически здоровым белым лабораторным мышам. Таким образом, разработана технология получения и контроль качества кормовой добавки Трилактосорб. 3.2 Изучение жизнеспособности микрофлоры, входящей в состав кормовой добавки Трилактосорб Одним из главных показателей технологического процесса является определение изменения жизнеспособности молочнокислых микроорганизмов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб в процессе её хранения. 68 Для проведения данного исследования определяли титр культуры, а также нарастание титруемой кислотности при её активизации на момент изготовления добавки, а также в разные периоды её хранения – через 1; 2; 3; 4; 5; 6 и 7 месяцев. Кормовую добавку Трилактосорб хранили во влагонепроницаемых пакетах, в сухом темном помещении при температуре 20-24 °С. Результаты изучения жизнеспособности микроорганизмов, входящие в состав пробиотической кормовой добавки Трилактосорб, а также титруемой кислотности в процессе хранения представлены в таблице 5. Таблица 5 – Изменение общего титра микроорганизмов и титруемой кислотности кормовой добавки Трилактосорб в течение срока хранения Срок хранения, мес Показатель Общий титр микрофлоры, КОЕ/г Титруемая кислотность, °Т На день изготовления 1 2 3 4 5 6 7 6,3×108 4,2×108 2,3×108 1,2×108 9,4×107 5,3×107 1,7×107 7,3×106 88,33 102,51 132,43 154,71 173,83 181,31 197,74 209,73 Из данных таблицы 5 видно, что общий титр микроорганизмов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб в процессе срока хранения уменьшается. Однако следует отметить, что минимальное количество микроорганизмов, которое будет обеспечивать профилактический эффект добавки выявлено на 6-й месяц хранения, что в сравнении с жидкими пробиотиками, срок хранения которых составляет 1‒3 мес., является положительным показателям качества кормовой добавки Трилактосорб. Изучение кислотности по Тернеру используемой добавки показало, что титруемая кислотность на момент выпуска Трилактосорба составляла 88,33 °Т, что является оптимальной для жизнеспособности микроорганизмов. К моменту окончания срока хранения добавки кислотность составила 197,74-209,73 °Т, что является критическим показателем для жизнедеятельности молочнокислой микрофлоры. 69 Таким образом, результаты наших исследований показали, что максимальный срок хранения кормовой добавки Трилактосорб составляет 6 месяцев. Более длительное хранение и дальнейшее её использование снижает титр и не будет обеспечивать максимальный профилактический эффект. 3.3 Оценка общего титра штаммов-пробионтов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб Определение общего титра жизнеспособных микроорганизмов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб, по отдельности и при их совместном использовании проводили в стерильных условиях ламинар-бокса. По технологии получения кормовой добавки Трилактосорб, аналогично выращивали культуры штаммов-пробионтов по отдельности. Затем готовили ряд последовательных разведений культур соответствующего штаммапробионта и исследуемой добавки до 10-8, из которых последние три (10-6; 10-7; 10-8) высевали на чашки Петри с агаризованным гидролизованным молоком и подсчитывали количество выросших колоний через 72 ч., по формуле согласно ГОСТ 10444.11-89 [40]. Результаты жизнеспособности культур по отдельности и в составе кормовой добавки Трилактосорб представлены на рисунке 9. Результаты исследований показали, что при совместном использовании культур в составе кормовой добавка Трилактосорб общий титр полезной микрофлоры выше, чем их раздельное применение. 70 Рисунок 9 – Общий титр штаммов-пробионтов по отдельности и в составе кормовой добавки Трилактосорб Таким образом, совокупность трех видов термофильных молочнокислых культур (Streptococcus thermophiles В-2894, Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus В-6543, Lactobacillus acidophilus В-8634) в кормовой добавке Трилактосорб будет обеспечивать максимальный желаемый эффект. 3.4 Оценка токсикологического и раздражающего действия кормовой добавки Трилактосорб Одним из главных параметров биологической активности любого нового препарата, в том числе кормовой добавки Трилактосорб, является изучение токсичности и раздражающего свойства, так как их обнаружение может быть основной причиной проявления у сельскохозяйственной птицы токсикозов, а также другой патологии. 71 3.4.1 Определение токсичности на стилонихиях Токсикологическая оценка на стилонихиях изучалась экспресс-методом согласно ГОСТ Р 52337-2005, по условиям которого корма и добавки растительного происхождения, отнесенные к нетоксичным, могут быть использованы по непосредственному способу их применения. В связи с тем, что культура стилонихий чувствительна к химическим реактивам, её выращивание и биотестирование проводили в отдельном помещении, а также в химически чистой лабораторной посуде. Тестирование осуществлялось на суточной культуре простейших, которые находились в стадии активного роста. Для этого за сутки до биотеста стилонихии отсаживали на свежеприготовленный рабочий раствор Лозина–Лозинского с кормом, в качестве которого выступали высушенные пекарские дрожжи. Затем культуру ставили в термостат и культивировали при температуре 22–24 °С. Для проведения опыта готовили раствор ацетонового и водного экстрактов. Для этого в две плотно закрывающиеся колбы помещали навески исследуемой добавки массой 10,0 ± 0,1 г в каждую. В первой колбе содержимое заливали определенным объемом ацетона, но таким образом, чтобы толщина растворителя была не менее 2,0 мм над уровнем исследуемой смеси. Колбу встряхивали не менее 2‒3 мин, а затем отстаивали. Надосадочную жидкость ацетонового экстракта объемом 0,5 мл переносили в колбу с 40,0 мл водного раствора Лозина-Лозинского для получения водного раствора данного экстракта. Во вторую емкость наливали 100,0 мл дистиллированной воды и подвергали её встряхиванию на автоматической качалке в течение 20 мин. Затем содержимое колбы отфильтровывали через бумажный фильтр для получения водного экстракта исследуемой пробиотической кормовой добавки. Пробу пробиотической кормовой добавки Трилактосорб для каждого экстракта исследовали в пяти повторностях. Токсичность определяли по проценту выживаемости простейших в течение определенного времени: при экстракции ацетоном – 1,5 ч, а при экстракции водой – 3 ч. и определяли из расчета: ‒ 70–100 % выживаемости стилонихий – изучаемая добавка нетоксична; 72 ‒ 40–69 % выживаемости стилонихий – изучаемая добавка слаботоксична; ‒ 0–39 % выживаемости стилонихий – изучаемая добавка токсична. На начало опыта в каждой лунке было от 15 до 20 шт. стилонихий. В качестве контроля использовали 1 %-й раствор ацетона (1%-й РА) и минеральный раствор Лозина-Лозинского (МР ЛЛ). Результаты экспресс-метода на инфузориях представлены в таблице 6. Таблица 6 – Токсикологическая оценка кормовой добавки Трилактосорб экспресс-методом на инфузориях Показатель Опыт Повторности, кол. 1 2 3 4 5 N1 19,0 20,0 18,0 17,0 19,0 N2 19,0 20,0 18,0 17,0 19,0 N1 20,0 16,0 17,0 20,0 20,0 N2 20,0 16,0 17,0 20,0 20,0 Водный экстракт Трилактосорба N1 19,0 19,0 17,0 19,0 20,0 N2 19,0 19,0 16,0 19,0 19,0 Ацетоновый экстракт Трилактосорба N1 20,0 20,0 19,0 17,0 19,0 N2 18,0 18,0 19,0 17,0 18,0 Контроль (МР ЛЛ) Контроль (1%-й РА) N, % 100,0 100,0 97,8 94,7 Результаты эксресс-оценки показали, что выживаемость стилонихий при действии на них водного и ацетонового экстрактов кормовой добавки Трилактосорб, соответственно, составила 97,8 и 94,7 %, что согласно ГОСТ Р 52337-2005 находится в пределах, характеризующих её как нетоксичную добавку растительного происхождения. 3.4.2 Определение острой токсичности на лабораторных животных Оценку острой токсичности осуществляли на клинически здоровых беспородных белых мышах и половозрелых беспородных белых крысах путем однократного применения кормовой добавки Трилактосорб в смеси с кормов лабораторным животным натощак согласно ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009 [62]. В эксперименте методом групп-аналогов было сформировано по пять групп животных обоего пола 6 особей в каждой. Согласно научной литературы эф73 фективная доза, характерная для данной группы фармакологических добавок составляет 0,2 % от массы корма [64; 95; 96; 97; 98; 99; 100; 101; 102; 120; 129; 130; 131; 132; 133; 134; 160; 161]. Нами было испытано 3 дозы кормовой добавки Трилактосорб от научно-предполагаемой: 3-; 5- и 10-кратные. В качестве групп-контроля использовали: отрицательный контроль (ОК) ‒ мыши и крысы получали только стандартный лабораторный гранулированный корм ПК 120-3 и контроль модельной среды (КМС), в которой лабораторные животные употребляли стандартный комбикорм и субстрат, входящий в состав кормовой добавки Трилактосорб, в 10-кратной дозе от предполагаемой эффективной. Наблюдение за животными проводили в течение 14 дней с учетом изменения их сохранности, общего состояния и поведения. Результаты острой токсичности кормовой добавки Трилактосорб на подопытных животных представлены в таблице 7. Таблица 7 – Острая токсичность кормовой добавки Трилактосорб на лабораторных животных (n = 6) Вид животного мыши КО крысы мыши КМС крысы мыши 1-я опытная крысы мыши 2-я опытная крысы мыши 3-я опытная крысы Группа Условия кормления Результат испытаний, гол. заболело пало выжило ПК 120-3 0 0 6 ПК 120-3 + 2,0 % субстрата 0 0 6 ПК 120-3 + 0,6 % Трилактосорб 0 0 6 ПК 120-3 + 1,0 % Трилактосорб 0 0 6 ПК 120-3 + 2,0 % Трилактосорб 0 0 6 Из таблицы 7 видно, что однократное пероральное использование исследуемых доз кормовой добавки Трилактосорб не вызывает гибели лабораторных животных за весь период наблюдения. Состояние подопытных мышей и крыс оставалось удовлетворительным, с хорошо выраженным аппетитом, животные были подвижны, реакция на внешние раздражители оставалась такой же, как и до употребления добавки. Нарушения в функциональной 74 активности органов пищеварительной и мочевыделительной систем, а также проявление других токсических явлений – отсутствовали. По результатам изучения острой токсичности кормовой добавки Трилактосорб можно сделать заключение о том, что определить полулетальную дозу (ЛД50) не удалось. Таким образом, учитывая то, что использование кормовой добавки Трилактосорб переносится подопытными животными без каких-либо видимых последствий в максимально-используемой дозе, её можно отнести как малотоксичным препаратам данной фармакологической группы. 3.4.3 Определение хронической токсичности на лабораторных животных и птице Изучение хронической токсичности кормовой добавки Трилактосорб осуществляли согласно ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009. Для постановки опыта использовали клинически здоровых беспородных белых мышей и перепелов породы фараон. Из лабораторных объектов методом групп-аналогов формировали контрольные и опытные группы по 6 особей в каждой. От предполагаемой эффективной (0,2 % от массы корма) всего испытано три дозы пробиотической кормовой добавки Трилактосорб: 3-; 5- и 10-кратные. В качестве групп-контроля в опыте использовали следующие: отрицательный контроль (ОК) ‒ мыши получали стандартный лабораторный корм ПК 120-3, а кормление перепелов осуществлялось комбикормом, сбалансированным по основным питательным веществам в соответствии с возрастными нормами ВНИТИП; контроль модельной среды (КМС) – лабораторные мыши и птица употребляли стандартные корма и субстрат, входящий в состав пробиотической кормовой добавки Трилактосорб, в 10-кратной дозе (2,0 %). Смешивание пробиотической кормовой добавки Трилактосорб с кормом осуществлялось ежедневно, на протяжении 42 дней, что соответствует периоду выращивания данного вида сельскохозяйственной птицы на мясо в условиях производства. Результаты влияния кормовой добавки Трилактосорб на лабораторных животных и птиц представлены в таблице 8. 75 Таблица 8 – Влияние кормовой добавки Трилактосорб на сохранность мышей и перепелов Вид объекта мыши КО перепела мыши КМС перепела мыши 1-я опытная перепела мыши 2-я опытная перепела мыши 3-я опытная перепела Группа Результат испытаний, гол. начало заболело пало выжило Условия кормления ПК ‒ полнорационный комбикорм 6 0 0 6 ПК + 2,0 % субстрата 6 0 0 6 ПК + 0,6 % Трилактосорб 6 0 0 6 ПК + 1,0 % Трилактосорб 6 0 0 6 ПК + 2,0 % Трилактосорб 6 0 0 6 Из таблицы 8 видно, что в опытных группах, как и группах-контроля количество животных и птиц на конец экспериментах не изменилось. Подопытные мыши и перепела удовлетворительно переносили изучаемую кормовую добавку, без какой-либо видимой патологии. Животные и птица были клинически здоровы в течение всего эксперимента, отмечено нарушений в поведении, приеме корма и воды не было. Исследуемые объекты были подвижны, активны, шерстный и перьевой покров оставался гладким с характерным блеском. Данные по влиянию кормовой добавки Трилактосорб на массу тела опытных и контрольных лабораторных объектов представлены в таблице 9. Таблица 9 – Влияние пробиотической кормовой добавки Трилактосорб на массу тела лабораторных животных и птиц (n=6) Показатель КО КМС Мыши Группа 1-я опытная 2-я опытная 3-я опытная Живая масса, г на начало опыта на конец опыта Прирост, г 6,05±0,11 18,45±0,20 12,40 6,09±0,12 6,10±0,09 18,72±0,19 21,24±0,25* 12,63 15,14 Перепела Живая масса, г на начало опыта на конец опыта Прирост, г 8,27±0,17 219,32±1,41 211,05 8,21±0,16 8,15±0,15 8,18±0,19 8,23±0,11 221,23±1,43 229,65±1,42* 232,97±1,51* 235,52±1,53* 213,02 221,50 224,79 227,29 * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) 76 6,07±0,12 21,73±0,22* 15,66 6,09±0,13 22,76±0,21* 16,67 Данные таблицы 9 показывают, что живая масса лабораторных мышей в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах, получавших разные дозы кормовой добавки Трилактосорб, была статистически достоверно выше, чем в группе отрицательного контроля, соответственно, на 15,12; 17,77 и 23,36 % (Р < 0,05), а также достоверно выше, чем в группе контроля модельной среды на 13,46; 16,08 и 21,58 % (Р < 0,05). Прирост лабораторных мышей за весь период эксперимента, в изучаемых опытных группах, составил 15,16; 15,66 и 16,67 г, что выше, чем в группе отрицательного контроля на 22,10; 26,29 и 34,43 %, а в группе контроля модельной среды, соответственно, на 19,87; 23,99 и 31,99 %. Аналогичная статистически достоверная разница по влиянию кормовой добавки Трилактосорб наблюдается на живую массу перепелов породы фараон. Из таблицы 9 видно, что живая масса птиц опытных групп выше изучаемого показателя, относительно группы отрицательного контроля, на 4,71; 6,22 и 7,39 %, а также группы контроля модельной среды, соответственно, на 3,81; 5,31 и 6,46 % (Р < 0,05). В целом, за 42 дня прирост живой массы опытных групп перепелов был выше, чем в группе отрицательного контроля на 4,95; 6,51 и 7,69 %, а также выше группы модельной среды на 3,98; 5,53 и 6,70 %. Далее нами изучалось влияние кормовой добавки Трилактосорб на обмен веществ организма опытных групп лабораторных мышей по их морфологическим, а также биохимическим показателям крови, результаты которых приведены в таблице 10. Данные таблицы 10 свидетельствуют о том, что использование пробиотической кормовой добавки Трилактосорб не оказывает негативного влияния на морфо-биохимические показатели крови лабораторных животных. Так, наблюдалась тенденция возрастания в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах, по сравнению с группой отрицательного контроля и контроля модельной среды, количества эритроцитов, соответственно, на 3,53; 3,77; 2,70 % и 2,22; 2,57; 2,10 %, а также содержание гемоглобина на 8,89; 12,12; 13,79 % и 5,58; 8,72; 10,34 %. Так как гемоглобин способен обратимо связываться с кислородом, а эритроциты переносят его по организму с током крови, то возрастание 77 данных показателей свидетельствует о том, что происходит улучшение насыщения им органов и тканей, а это в свою очередь обеспечивает более ускоренное протекание окислительно-восстановительных процессов. Кроме того, гемоглобин способен связывать в тканях небольшое количество диоксида углерода, что будет обеспечивать лучшее его освобождение в лёгких. Лейкоциты играют важную роль в специфической и неспецифической защите организма от внешних и внутренних патогенных агентов. Таким образом, так как количество данных форменных элементов в крови подопытных мышей после применения добавки Трилактосорб находилось в пределах нормы, то это говорит об отсутствии токсического действия и патологических изменений в организме животных. Таблица 10 – Морфологические и биохимические показатели крови лабораторных мышей после применения добавки Трилактосорб (n = 6) Показатель Эритроциты, 1012/л Гемоглобин, г/л Тромбоциты, 109/л Лейкоциты, 109/л Общий белок, г/л альбумин, г/л глобулин, г/л А/Г коэффициент Холестерин, мМ/л Мочевина, мМ/л Кальций, мМ/л Фосфор, мМ/л АСТ, Ед/л АЛТ, Ед/л Группа 1-я КО КМС опытная Морфологические показатели 8,49±0,19 8,54±0,18 8,79±0,17 129,42±3,21 133,47±3,53 140,92±3,39 259,14±3,13 260,72±3,33 262,80±3,43 7,51±0,10 7,49±0,13 7,53±0,17 Биохимические показатели 52,46±1,00 53,92±1,02 64,55±0,95* 21,82±0,76 22,61±0,69 27,68±0,67* 30,64±0,61 31,31±0,59 36,87±0,46* 0,71±0,01 0,72±0,02 0,75±0,03 1,65±0,04 1,66±0,05 1,60±0,04 20,21±0,37 19,91±0,31 19,78±0,33 2,26±0,03 2,25±0,04 2,27±0,02 1,43±0,02 1,47±0,03 1,50±0,04 301,43±5,76 299,05±5,91 302,17±5,85 233,34±2,57 232,84±2,98 233,84±2,05 2-я опытная 3-я опытная 8,81±0,20 145,11±3,47 265,48±3,41 7,49±0,15 8,85±0,19 147,27±3,50 269,91±3,29 7,56±0,16 65,37±0,96* 29,48±0,72* 35,89±0,51* 0,82±0,03 1,56±0,03 19,73±0,25 2,31±0,03 1,49±0,04 295,46±6,05 230,39±2,78 65,88±1,01* 28,36±0,71* 37,52±0,53* 0,76±0,02 1,57±0,04 19,57±0,29 2,34±0,04 1,49±0,04 297,56±5,86 229,32±3,01 * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) Изучение сыворотки крови мышей опытных групп показало, что после использования кормовой добавки Трилактосорб было выявлено достоверное повышение содержания общего белка по сравнению с группой отрицательного контроля на 23,04; 24,61 и 25,58 %, а к контролю модельной среды, соот78 ветственно, на 19,71; 21,24 и 22,18 % (Р < 0,05). Интенсивность обменных реакций в организме также отражает белковый коэффициент (А/Г), значение которого в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах мышей было выше, чем в группе отрицательного контроля на 5,63; 15,49 и 7,04 %, а также группы модельной среды на 4,17; 13,89 и 5,56 %, что свидетельствует о более интенсивном протекании процессов биосинтеза белка. По остальным изучаемым биохимическим показателям сыворотки крови (холестерин, мочевина, фосфор, кальций, активность АСТ и АЛТ) наблюдалась физиологическая норма, характерная для данного вида лабораторного животного. Результаты влияния кормовой добавки Трилактосорб на морфобиохимические показатели крови подопытных перепелов представлены в таблице 11. Таблица 11 – Морфо-биохимические показатели крови перепелов после применения добавки Трилактосорб (n = 6) Показатель Эритроциты, 1012/л Гемоглобин, г/л Тромбоциты, 109/л Лейкоциты, 109/л Общий белок, г/л альбумин, г/л глобулин, г/л А/Г коэффициент Холестерин, мМ/л Мочевина, мМ/л Кальций, мМ/л Фосфор, мМ/л АСТ, Ед/л АЛТ, Ед/л Группа 1-я КО КМС опытная Морфологические показатели 3,54±0,10 3,57±0,12 3,60±0,11 119,42±3,12 122,85±3,21 122,89±3,32 122,43±3,62 124,49±3,52 127,30±3,44 18,05±0,59 18,45±0,54 19,40±0,61 Биохимические показатели 31,21±0,51 32,68±0,49 34,42±0,41 14,20±0,25 14,90±0,29 15,71±0,27 17,01±0,31 17,78±0,30 18,71±0,29 0,83±0,01 0,84±0,02 0,84±0,02 4,16±0,02 4,13±0,02 4,01±0,03 1,74±0,02 1,73±0,03 1,71±0,03 2,88±0,02 2,90±0,02 2,95±0,03 2,21±0,02 2,25±0,02 2,29±0,02 321,13±6,31 318,13±6,61 316,15±6,16 27,14±0,96 26,49±0,95 26,23±0,99 2-я опытная 3-я опытная 3,67±0,13 125,42±3,19 130,21±3,46 18,78±0,60 3,69±0,11 129,15±3,27 131,59±3,39 19,07±0,58 36,85±0,44* 17,21±0,31* 19,64±0,28* 0,88±0,03 3,82±0,02* 1,71±0,02 3,05±0,03* 2,34±0,02 312,92±6,83 25,21±0,94 37,61±0,50* 17,40±0,30* 20,21±0,32* 0,86±0,01 3,79±0,03* 1,69±0,04 3,10±0,02* 2,36±0,02 310,18±6,09 24,97±0,98 * – Разница с контролем достоверна (P < 0,05) Из таблицы 11 видно, что у подопытных перепелов наблюдаются аналогичные результаты по морфо-биохимическим показателя крови. Так, статистически достоверное повышение (Р < 0,05) было выявлено во 2-й и 3-й опыт79 ных группах птиц при изучение в сыворотке крови таких показателей как общего белка, альбуминов, глобулинов, холестерина и кальция. В 1-й опытной группе наблюдалась тенденция к возрастанию данных показателей. В целом, при использовании в рационе перепелов кормовой добавки Трилактосорб, патологических изменений за весь период эксперимента выявлено не было. Для изучения патологоанатомического состояния внутренних органов и тканей лабораторных мышей, а также перепелов, после использования кормовой добавки Трилактосорб, их подвергали умерщвлению, путем декапитации и вскрытию (рисунок 10). А Б Рисунок 10 ‒ Патологоанатомическое вскрытие подопытных мышей (А) и перепелов (Б) после использования кормовой добавки Трилактосорб Результаты исследований показали, что изменений в структуре органов и тканей лабораторных животных и птиц не обнаружено. Внутренние органы у изучаемых особей располагались анатомически правильно. В плевральной и брюшной полостях зарегистрировано наличие жидкости не было. Просвет органов дыхательной системы (трахея и бронхи) – свободный, ткань легких имела слабо-розовый цвет. Слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта, в частности желудка и кишечника после использования кормовой добавки 80 Трилактосорб имела серо-розовый цвет, наличие эрозий, язв, кровоизлияний и других видимых изъявлений не отмечалось. Почечная капсула легко снималась, мозговое и корковое вещество органа у мышей хорошо различимы на разрезе, в то время как у перепелов выраженной границы не наблюдалось, что связано с видовой особенностью данного вида сельскохозяйственной птицы. В целом, длительное применение кормовой добавки Трилактосорб в различных дозах белым мышам и перепелам не вызвало у них патологических изменений, как на общее состояние организма, так и на внутренние органы, а также выстилающие их ткани, что характеризует её как безопасную кормовую смесь для дальнейшего использования в промышленном перепеловодстве. 3.4.4 Определение кожно-резорбтивного и раздражающего свойства Свободное пероральное использование добавок с кормом сельскохозяйственной птицей, в том числе перепелами в производстве, предполагает возможное их попадание на кожу, а также слизистые оболочки глаз, что может вызывать негативное воздействие на организм. В результате чего, нами изучалось раздражающее свойство кормовой добавки Трилактосорб на кожу и конъюнктиву глаз, а также дополнительное раздражающее действие на слизистую ротовой полости. Изучение кожно-резорбтивного действия испытуемой добавки проводили на 2-х половозрелых кроликах-альбиносах обоего пола массой 2,2-2,5 кг, которым за сутки до проведения опыта выстригали шерсть на симметричных участках обоих боков для аппликации, одна из которых служила контролем. Размер обрабатываемой поверхности кожи составлял от 5 до 8 % поверхности тела подопытного животного. 1,0 г пробиотической кормовой добавки Трилактосорб разводили небольшим объемом воды, затем смачивали ватным тампоном и наносили на участок кожи, а сверху фиксировали повязкой. Местно-раздражающее действие Трилактосорба на кожу оценивалась после 4-часовой экспозицией, а также через 24; 48 и 72 часов. Обращали внимание на степень кожного проявления (покраснение, повышение 81 чувствительности, припухлость, воспаление), включая эритему и отек, а также возможность появления общей реакции организма кроликов-альбиносов. Результаты накожных аппликаций показали, что в ходе эксперимента у лабораторных животных местного покраснения не отмечалось, отсутствовали повышение чувствительности, припухлость, воспаление, образование эритемы и отек кожи. Таким образом, индекс первичного раздражения кормовой добавки Трилактосорб равнялся нулю. Оценка раздражающего действия Трилактосорба на конъюнктиву глаз проводилась на 2-х половозрелых кроликах-альбиносах обоего пола массой 2,8‒3,0 кг. Перед началом опыта, для выявления выраженных повреждений, обращали внимание на состояние глаз каждого подопытного животного. Эксперимент начинали с того, что кроликам-альбиносам аккуратно в нижний отдел конъюнктивального мешка левого глаза вводили такое количество добавки, которое занимает объем 0,1 мл. После инсоляции нижнее и верхнее веко соединяли и в таком положении выдерживали в течение 2–3 сек. Правый глаз служил контролем. Обследование глаза лабораторных животных после введения кормовой добавки Трилактосорб проводили через 1; 24; 48 и 72 часа. Обращали внимание на состояние конъюнктивы, роговицы, радужной оболочки, проявление хематоза (отек конъюнктивы), а также наличие выделений из глаза. Результаты исследований показали, что введение кормовой добавки Трилактосорб в нижний отдел конъюнктивального мешка левого глаза вызывает незначительное покраснение слизистой оболочки и выделение слезных желез сразу после инсоляции, которые исчезали через несколько минут. Дальнейшие наблюдения за кроликами не выявили иной патологии: не отмечалось помутнения роговицы глаза, радужная оболочка была без видимых изменений, хематоз и выделения из глаз отсутствовали. Общее состояние кроликов-альбиносов на всех этапах исследований оставалось удовлетворительным, без изменений. 82 Изучение дополнительного раздражающего действия кормовой добавки Трилактосорб на слизистую ротовой полости проводили на здоровых половозрелых хомячках обоего пола массой 230250 г, из которых формировали три группы подопытных животных по 6 голов в каждой, получавших разные дозы добавки. Кормовую добавку Трилактосорб в дозе 0,6; 1,0 и 2,0 г разводили в 10,0 мл 0,9%-го раствора хлорида натрия, затем ими пропитывали ватно-марлевые тампоны. Далее помещали их в один защечный мешок каждого лабораторного животного, а другой мешок служил контролем. Продолжительность контакта слизистой рта с материалов составила десять минут. Для предотвращения выталкивания тампона изо рта на каждого хомячка надевали бумажный воротник, располагающийся вокруг шеи так, чтобы не мешать нормальному питанию и дыханию. В конце эксперимента отчет включал в себя макроскопическое исследование защечных мешков сразу после извлечения тампонов, а также оценку состояния слизистой и степень раздражающей реакции. Проведенный анализ исследований выявил следующую клиническую картину лабораторных животных: слизистая защечного мешка с обеих сторон во всех опытных группах хомячков была чистой, без покраснений, припухлостей, образование отеков и эритем зарегистрировано не было, состояние животных до и после эксперимента не изменилось. В целом, индекс раздражающего действия Трилактосорба можно оценить как нулевой, что свидетельствует об отсутствии данного явления на слизистую ротовой полости исследуемой пробиотической кормовой добавки. Таким образом, результаты кожно-резорбтивного действия и влияния на слизистую глаз, а также ротовой полости показали, что кормовая добавка Трилактосорб не проявляет раздражающего свойства. 83 3.4.5 Оценка антибактериальной и кислотообразующей активностей штаммов-пробионтов Проявление антибактериальной активности культуры в отношении патогенных микроорганизмов, является одним из основных параметров, обеспечивающий лечебный и профилактический эффект. Антибактериальные свойства используемых штаммов-пробионтов по отдельности, а также в составе кормовой добавки Трилактосорб изучали в отношении кишечной палочки (Escherichia coli) и золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus). Результат учитывали по размеру зоны задержки роста тест-микроба под действием изучаемых пробионтом. Данные антибактериальных свойств штаммов-пробионтов представлены в таблице 12 и рисунке 11. Таблица 12 – Антибактериальные свойства микроорганизмов, входящие в состав кормовой добавки Трилактосорб Тестмикроб E.coli S. aureus Streptococcus thermophilus 3,5 4,1 Штамм-пробионт Lactobacillus Lactobacillus delbruеckii subsp. acidophilus bulgaricus Зона задержки роста, мм 5,7 4,0 5,0 4,4 3,5 мм 4,1 мм Б А 84 Трилактосорб 9,8 9,3 4,4 мм 4,0 мм В Г 5,0 мм 5,7 мм Е Д 9,3 мм 9,8 мм З Ж 85 Рисунок 11 – Антагонистическая активность штаммов-пробионтов по отдельности и в составе кормовой добавки Трилактосорб (слева – E.coli; справа – S. aureus): А, Б – Streptococcus thermophiles; В, Г – Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus; Д, Е – Lactobacillus acidophilus; Ж, З –кормовая добавка Трилактосорб И данных таблицы 12 и рисунка 11 видно, что используемые в составе кормовой добавки Трилактосорб культуры молочнокислых микроорганизмов проявляют антибактериальное свойство по отношению к Escherichia coli и Staphylococcus aureus. Установлено, что при раздельном использовании молочнокислых культур (Streptococcus thermophiles В-2894, Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus В-6543, Lactobacillus acidophilus В-8634) зона задержки роста кишечной палочки составила 3,5; 4,0 и 5,7 мм, а золотистого стафилококка, соответственно, 4,1; 4,4 и 5,0 мм. Однако следует отметить, что при совместном использовании данных культур, в пробиотической кормовой добавки Трилактосорб, антимикробная активность по отношению к E. coli составила 9,8 мм, а зона задержки роста S. аureus увеличилось до 9,3 мм. Одним из главных параметров антибактериальной активности молочнокислых микроорганизмов в отношении патогенной микрофлоры является их способность продуцировать такие продукты метаболизма как органические кислоты. В этой связи, нами изучался ассортимент и количество кислот, которые вырабатывали используемые культуры, как по отдельности, так и в составе кормовой добавки Трилактосорб. Исследование проводили методом капиллярного электрофореза на полуавтоматическом приборе «Капель – 105». Данные кислотообразующих свойств представлены в таблице 13 и на рисунках 12–15. Таблица 13 – Количесвтенный и качественный состав органических кислот штаммовпробионтов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб Органическая кислота Молочная кислота, мг/л Штамм-пробионт Lactobacillus Streptococcus delbruеckii Lactobacillus thermophilus subsp. acidophilus bulgaricus 1797,53 2001,12 2621,30 86 Трилактосорб 4765,57 Уксусная кислота, мг/л Пропионовая кислота, мг/л 135,98 ‒ 375,93 583,75 ‒ 364,86 486,38 606,18 Молочная, 2001.12 Уксусная, 375.93 Пропионовая, 583.75 Рисунок 12 ‒ Электрофореграмма органических кислот Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus Молочная, 1797.53 Уксусная, 135.98 Рисунок 13 ‒ Электрофореграмма органических кислот Streptococcus thermophilus 87 Молочная, 2621.30 Пропионовая, 364.86 Рисунок 14 ‒ Электрофореграмма органических кислот Lactobacillus acidophilus Молочная, 4765.57 Пропионовая, 606.18 Уксусная, 486.38 Рисунок 15 ‒ Электрофореграмма органических кислот кормовой добавки Трилактосорб Из данных таблицы 13 и рисунков 12–15 видно, что при раздельном использовании культур образование органических кислот ниже, чем при их применении в составе добавки. Так, содержание молочной кислоты при использовании кормовой добавки Трилактосорб составило 4765,57 мг/л, уксусной кислоты ‒ 486,38 мг/л, а пропионовой ‒ 606,18 мг/л. Полученные нами результаты согласуются с данными других исследований, в которых продуцирование молочнокислыми микроорганизмами органических кислот, также являлось главным фактором антибактериальной активности полезной микрофлоры, входящих в состав пробиотических добавок и препаратов, в отношении патогенной микрофлоры [95; 96; 97; 119; 121; 160; 201; 204]. 88 Таким образом, кормовая добавка Трилактосорб проявляет высокую антибактериальную активность в отношении патогенной микрофлоры, а это в свою очередь, будет обеспечивать её высокий лечебный и профилактический эффект. 3.5 Изучение фармакологических свойств кормовой добавки Трилактосорб в перепеловодстве Изучение фармакологических свойств кормовой добавки Трилактосорб осуществляли на перепелах породы фараон мясного направления, оценивая их основные процессы обмена веществ, а также хозяйственные показатели, полученные в процессе выращивания данного вида птицы на производстве. Испытания проводились в КФХ «Пуклич Р. М.», Республика Адыгея. Для подбора оптимальной дозы использования кормовой добавки Трилактосорб был проведен первый научно-хозяйственный опыт в производственных условиях. Для этого методом групп-аналогов было сформировано четыре группы перепелов по 90 голов в каждой: контрольная группа ‒ в рационе птиц присутствовал только основной полноценный комбикорм, рекомендованный ВНИТИП; 1-я опытная группа ‒ с основным рационом в течение всего периода выращивания задавали перепелам Трилактосорб в дозе 0,2 % к массе корма; 2-я опытная группа – в комбикорм добавляли Трилактосорб в дозе 0,5 % на массу корма; 3-я опытная группа – перепела получали комбикормом с Трилактосорбом в дозировке 1,0 % на массу корма. Продолжительность научно-хозяйственного эксперимента составила 42 дня. 3.5.11Морфологические и биохимические показатели крови птиц Изучение морфо-биохимического статуса крови живого организма имеет огромное значение не только в диагностике различных заболеваний, но и позволяет выявить влияние новых препаратов и добавок на его состояние в целом. В этой связи, в возрасте 42-х дней проводили забор крови у 10 89 перепелов из каждой исследуемой группы для изучения их морфологических и биохимических показателей после использования различных доз кормовой добавки Трилактосорб. Результаты морфо-биохимических показателей крови перепелов представлены в таблице 14. Таблица 14 – Морфо-биохимический статус перепелов после использования добавки Трилактосорб (n = 10) Показатель Эритроциты, 1012/л Гемоглобин, г/л Тромбоциты, 109/л Лейкоциты, 109/л Общий белок, г/л Альбумины, г/л Глобулины, г/л А/Г коэффициент Холестерин, мМ/л Мочевина, мМ/л АСТ, Ед/л АЛТ, Ед/л Фосфор, мМ/л Кальций, мМ/л Группа контрольная 1-я опытная 2-я опытная Морфологические показатели 3,28±0,04 3,34±0,03 3,52±0,02* 104,31±2,02 111,83±2,15 123,42±2,06* 132,31±3,04 133,82±2,95 139,38±3,10 18,32±0,32 18,27±0,41 17,79±0,27 Биохимические показатели 38,53±0,42 40,82±0,39 45,21±0,49* 15,82±0,31 16,62±0,29 19,83±0,34* 22,71±0,87 24,20±0,93 25,38±0,78 0,69±0,02 0,69±0,03 0,78±0,01 3,76±0,02 3,70±0,03 3,61±0,02* 1,63±0,02 1,62±0,03 1,57±0,03 257,74±4,71 249,84±4,81 246,63±4,56 32,34±0,95 32,12±1,01 31,83±1,07 2,31±0,01 2,37±0,03 2,49±0,02* 2,74±0,01 2,78±0,02 3,02±0,02* 3-я опытная 3,56±0,03* 125,21±1,99* 138,25±3,08 17,64±0,43 45,38±0,40* 19,70±0,30* 25,68±0,83 0,77±0,02 3,62±0,02* 1,56±0,03 245,84±4,65 31,32±1,09 2,51±0,01* 2,98±0,01* * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) Результаты изучения отдельных показателей общего анализа крови птиц, после использования различных доз кормовой добавки Трилактосорб показали, что в 1-й опытной группе, которая получала добавку в дозе 0,2 % к массе корма, количество эритроцитов было больше, чем в контрольной группе на 1,83 %. При этом, статистически достоверная разница по данному показателю была выражена во 2-й и 3-й опытных группах, в 1,0 мл крови которых содержание эритроцитов было значительно выше, чем в контроле на 7,32 и 8,54 % (P < 0,05). Аналогичная тенденция наблюдалась при изучении гемоглобина в крови опытных птиц. Так, во 2-й и 3-й опытных группах содержание гемоглобина было достоверно выше, чем в контрольной группе на 18,32 и 20,03 % (P < 0,05). По содержанию в крови тромбоцитов достоверных отличий в разрезе групп не наблюдалось, однако, была выражена незна90 чительная тенденция к его увеличению в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах по сравнению с группой контроля на 1,14; 5,34 и 4,49 %. Положительные данные были получены при изучении белых кровяных телец крови (лейкоцитов) опытных групп. Так, содержание лейкоцитов в опытных группах было незначительно ниже, чем в контрольной группе на 0,27; 2,89 и 3,71 % Полученные результаты свидетельствуют о том, что использование Трилактосорба способствует стимулированию образования красных клеток крови, насыщенности их гемоглобином, что приводит к нормализации уровня кислорода в организме и ускорению окислительно-восстановительных процессов, при отсутствии тех или иных патологических и воспалительных изменений, о чем говорят данные анализа лейкоцитов. Изучение биохимических показателей сыворотки крови перепелов свидетельствовало о положительном влиянии кормовой добавки Трилактосорб на процесс обмена веществ в организме птиц. Так, наблюдалось статистически достоверная стимуляция обмена белков в организме 2-й и 3-й опытных групп по показателю общего белка в сыворотки крови, содержание которого было выше, чем в группе, которая не получала добавок, на 17,34 и 17,78 % (P < 0,05). Одним из значительных показателей метаболизма белков в организме является белковый коэффициент (отношение альбумина к глобулину), повышение которого выявлено в опытных группах, получавших добавку в дозах 0,5 и 1,0 % к массе комбикорма и было больше, чем в контроле на 13,04 и 11,59 %. Наблюдалось достоверное понижение (P < 0,05) во 2-й и 3-й опытных группах в сыворотке крови холестерина по отношению к контрольной, соответственно, на 3,99 и 3,72 %, что говорит о распаде в организме перепелов избытка жиров, энергия которых используется на интенсивный рост птиц. О физиологически нормальной работе печени и сердца свидетельствовали данные активности в сыворотки крови опытных групп аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы, значение которых находилось в пределах нормы. Наблюдалась незначительная тенденция в опытных группах к снижению уровня АСТ по отношению к контрольной группе на 3,07; 4,31 и 4,62 %, а АЛТ, соответственно, на 0,68; 1,58 и 3,15 %. Следует отметить, что 91 было выявлено статистически достоверное увеличение в сыворотке крови 2-й и 3-й опытных группах по сравнению с контролем содержания кальция на 10,21 и 8,76 %, а также фосфора на 7,79 и 8,66 % (P < 0,05). Таким образом, использование кормовой добавки Трилактосорб в дозах 0,5 и 1,0 % к массе корма способствовало стимуляции метаболизма и энергии в организме перепелов, повышению иммунитета, что в целом обеспечивало птице опытной группе более высокую продуктивность и жизнеспособность. 3.5.2 Влияние на пищеварение На основании данных, полученных по количественному учёту потребленного комбикорма, а также выделенного помета и проведенного анализа их химического состава, нами определялась переваримость питательных веществ комбикорма птицей и коэффициент использования отдельных элементов (фосфор, кальций). Данные анализа представлены в таблице 15. Из данных таблицы 15 видно, что использование кормовой добавки Трилактосорб в рационе опытных перепелов всех групп способствовала повышению анализируемых показателей. Переваримость клетчатки в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах птиц была выше, чем в контрольной на 4,49; 9,91 и 11,42 %. Переваримость белка в рационе 1-й опытной группы была выше по сравнению с контролем на 3,19 %, однако, статистически достоверная разница была обнаружена во 2-й и 3-й опытных группах перепелов, которые получали добавку Трилактосорб в дозах 0,5 и 1,0 % и она была выше, чем в группе контроля на 12,79 и 13,85 % (P < 0,05). Статистически достоверная разница наблюдалась во 2-й и 3-й опытных группах при анализе переваримости жира, которого было выше по отношению к контрольной группе на 8,20 и 9,93 %, а также органического вещества, соответственно, на 8,66 и 9,59 % (P < 0,05). При анализе остальных показателей переваримости питательных веществ комбикорма перепелами в опытных группах наблюдалась тенденция к их увеличению по сравнению с группой, где добавка не применялась. 92 Таблица 15 – Переваримость и коэффициент использования питательных веществ комбикорма перепелами, % Показатель Клетчатка Группа контрольная 1-я опытная 2-я опытная Переваримость питательных веществ 45,20±1,03 47,23±1,06 49,68±1,13 Протеин 55,52±0,54 57,29±0,49 62,62±0,51* Жир 60,62±0,74 62,12±0,70 65,59±0,62* Органическое вещество 48,37±0,31 50,03±0,43 52,56±0,38* Сухое вещество 46,65±1,54 47,72±1,61 49,22±1,65 БЭВ 32,26±0,93 33,41±0,89 34,34±0,91 Коэффициент использования минеральных веществ Фосфор 31,32±0,43 32,56±0,39 35,89±0,40* Кальций 38,32±0,33 39,78±0,38 43,78±0,31* 3-я опытная 50,36±1,18 63,21±0,63* 66,64±0,64* 53,01±0,41* 49,38±1,69 34,71±0,88 36,11±0,35* 44,76±0,39* * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) Коэффициент использования фосфора и кальция из корма перепелами опытных групп был также выше по сравнению с группой контроля. Так, в 1-й опытной группе использование фосфора птицей было выше, чем в группе контроля на 3,95 %, а кальция на 3,81 %, однако разница недостоверна. Следует отметить, что достоверная разница по изучаемым показателям наблюдалась во 2-й и 3-й опытных группах, в которых коэффициент использования фосфора был выше, чем в контрольной – на 14,56 и 15,29 %, а кальция, соответственно, на 14,24 и 16,80 % (P < 0,05). В целом, следует обратить внимание, что полученные данные коррелируют с цифрами полученные при анализе сыворотки крови и химического состава мышечной ткани перепелов, получавшие с кормом кормовую добавку Трилактосорб. Данные научной литературы показывают, что главным местом локализации молочнокислых микроорганизмов и бифидобактерий в желудочнокишечном тракте организма птиц являются слепые кишки (отростки толстого отдела кишечника) [98; 101; 133; 134; 161; 201]. Именно в этом отделе происходит рост и развитие данной микрофлоры, как одного из основного источника нормального физиологического пищеварения. Для того чтобы оценить работу препарата или добавки на основе живой микрофлоры, необходимо 93 определить степень приживаемости микроорганизма в ЖКТ птиц не только в месте их непосредственной локализации, но и в самом отдаленном участке кишечника, как одного из главного показателя транзитного прохождения микрофлоры. В этой связи, нами изучалось содержание лакто- и бифидобактерий в слепых и прямой кишках всех групп перепелов. Результаты исследований представлены в таблице 16. Таблица 16 – Титр лакто- и бифидобактерий в отдельных участках кишечника перепелов (n = 6) Микрофлора Лактобактерии, 108 КОЕ/г Бифидобактерии, 108 КОЕ/г Лактобактерии, 102 КОЕ/г Бифидобактерии, 102 КОЕ/г Группа контрольная 1-я опытная 2-я опытная Слепая кишка 2,64±0,01 2,82±0,02* 3,02±0,02* 4,23±0,08 4,50±0,11 4,71±0,07* Прямая кишка 1,34±0,01 1,27±0,02 1,37±0,01 1,27±0,01 1,28±0,02 1,23±0,03 3-я опытная 3,11±0,03* 4,75±0,06* 1,35±0,03 1,25±0,02 * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) Данные таблицы 16 свидетельствуют об эффективном использовании в комбикормах микроорганизмов кормовой добавки Трилактосорб. Содержание молочнокислых микроорганизмов в слепых кишках перепелов опытных групп было выше, чем в контрольной группе на 6,82; 14,39 и 17,80 % при статистически достоверной разнице (P < 0,05). Достоверная разница наблюдалась при подсчете титра бифидобактерий в слепой кишке перепелов во 2-й и 3-й опытных группах, которых было больше, чем в группе контроля на 11,35 и 12,29 % (P < 0,05). Анализ титра молочнокислых микроорганизмов и бифидобактерий в прямой кишке показал, что в разрезе групп разницы не наблюдалось. Полученные нами данные свидетельствовали о том, что используемая микрофлора в кормовой добавке Трилактосорб обладает высокой приживаемостью и не проходит транзитом через желудочно-кишечный тракт перепелов. Таким образом, использование в комбикорме перепелов кормовой добавки Трилактосорб способствует повышению титра лакто- и бифидобакте94 рий, усилению секреторной функции желудочно-кишечного тракта птиц, а основной расход кислот ЖКТ участвует в переваримости комбикорма. Результатом данных явлений является повышение живой массы перепелов за счет мышечной ткани. 3.5.3 Мясная продуктивность, развитие внутренних органов и качество мяса перепелов Применение кормовых добавок являются актуальным и перспективным направлением для повышения роста и сохранности отрасли птицеводства. В связи с чем, критерии оценки роста и развития организма птицы, в частности перепелов, имеют важное значение для оценки эффективного использования кормовых добавок. Для осуществления опыта в суточном возрасте были отобраны клинически здоровые перепелята с практически одинаковой массой тела. Каждодневные наблюдения за перепелами во время эксперимента показали, что общее состояние птиц во всех изучаемых группах было удовлетворительным, аппетит сохранен. Результаты влияния различных доз кормовой добавки Трилактосорб на хозяйственные показатели перепелов представлены в таблице 17. Таблица 17 – Основные хозяйственные показатели перепелов после использования кормовой добавки Трилактосорб (n = 90) Показатель Суточные 7 сутки 14 сутки 21 сутки 28 сутки 35 сутки 42 сутки Сохранность, % Одной головы, г Среднесуточный, г Группа 1-я опытная 2-я опытная Живая масса, г 8,21±0,37 8,18±0,29 8,24±0,30 33,82±0,91 33,92±0,89 37,48±0,81 75,95±2,12 78,84±2,87 85,21±2,52 110,43±1,13 115,04±1,01 126,11±1,03* 155,59±2,01 163,58±2,28 175,71±2,36* 197,19±1,99 205,52±2,02 216,53±2,06* 214,91±1,61 222,93±1,40 233,86±1,53* 85,55 90,00 94,44 Прирост живой массы (0–42 дня) 206,7 214,75 225,62 4,92 5,11 5,37 Расход комбикормов (0‒42 дня) контрольная 95 3-я опытная 8,19±0,33 37,98±0,93 87,01±2,73 128,39±1,07* 177,60±2,24* 219,82±2,07* 235,41±1,47* 94,44 227,22 5,41 На 1 голову, г Конверсия корма, кг 832,63 4,02 846,93 3,94 852,41 3,78 859,93 3,78 * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) Результаты таблицы 17 показывают, что уже на 7-е сутки выращивания наблюдалась тенденция к увеличению живой массы перепелов при даче им в корм кормовой добавки Трилактосорб, что было особенно выражено в дозах 0,5 и 1,0% к массе корма. На 14-е сутки масса перепелов в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах бала выше, чем в контрольной на 3,81; 12,19 и 14,56 %, соответственно. При контрольном взвешивании птиц на 21-й день было выявлено, что в 1-й опытной группе живая масса перепелов на 4,17 % выше, чем в группе контроля. Однако статистически достоверная разница (P < 0,05) по изучаемому показателю была выражена во 2-й и 3-й опытных группах и составила 126,11 и 128,39 г, что выше, чем в контроле на 14,20 и 16,26 %. Достоверная разница по живой массе перепелов в группах, которые получали кормовую добавку Трилактосорб в дозах 0,5 и 1,0 % наблюдалась также и на 28-е сутки выращивания птицы и была выше, чем в контрольной на 12,93 и 14,15 % (P < 0,05). В первой опытной группе масса птиц в данный период составила 163,58 г, что выше, чем в контрольной группе, на 5,14 %. На 35-е сутки масса перепелов в контрольной группе составила 197,19 г, что достоверно ниже, чем во 2-й опытной группе на 4,05 %, а в 3-й – на 10,30 % (P < 0,05). На 42-е сутки в первой опытной группе наблюдалась тенденция к возрастанию живой массы перепелов по сравнению с контрольной на 3,73 %. Следует отметить, что во 2-й и 3-й опытных группах по изучаемому показателю наблюдалась статистически достоверная разница в отношении группы, где добавок не использовали и, соответственно, была выше на 8,82 и 9,53 % (P < 0,05). Проведенные нами исследования показали, что использование пробиотиков стимулирует иммунитет птиц, тем самым повышая их жизнеспособность. Так, сохранность перепелов при использовании кормовой добавки Трилактосорб в 1-й опытной группе составила 90,0 %, а во 2-й и 3-й – по 96 94,44 %, что выше, чем в группе контроля на 4,45 и 8,89 %, соответственно. Прирост живой массы птиц за весь период выращивания перепелов также в опытных группах был выше, чем в контрольной на 3,89; 9,15 и 9,92 %. Абсолютный среднесуточный прирост в 1-й опытной группе составил 5,11 г, во 2-й – 5,37 г и 3-й – 5,41 г против 4,92 г в контрольной группе. Анализ потребления комбикормов перепелами за весь период выращивания показал, что с возрастанием живой массы птиц увеличивается и расход кормов. Однако следует отметить, что затраты корма на 1,0 кг прироста живой массы птиц в группах где применяли кормовую добавку Трилактосорб были ниже, чем в контрольной. Так, в 1-й опытной группе конверсия корма ниже, чем в контрольной на 2,00 %, а во 2-й и 3-й на 5,97 %. Проведенный нами эксперимент свидетельствует о том, что использование кормовой добавки Трилактосорб способствует повышению живой массы птиц, сохранности поголовья, а также снижению затрат комбикормов на прирост живой массы тела. Достоверные данные по изучаемым показателям выражены при даче добавки в дозах 0,5 и 1,0 % к массе корма. Для изучения мясной продуктивности перепелов после использования кормовой добавки Трилактосорб в 42-х дневном возрасте проводили контрольный убой и анатомическую разделку птиц из контрольной и опытных групп. Учет проводили по показателям живой массы птицы перед убоем, массы потрошеной тушки, массы грудных, ножных и остальных мышц, массы печени, сердца, мышечного и железистого желудка, а также кишечника. Данные мясной продуктивности и развития внутренних органов после использования кормовой добавки Трилактосорб представлены в таблице 18. Таблица 18 – Мясная продуктивность и развитие внутренних органов перепелов (n = 10) Показатель Живая масса птицы перед убоем, г Масса потрошеной тушки, г Масса мышц груди, г контрольная Группа 1-я опытная 2-я опытная 215,02±1,49 223,04±1,41 234,97±1,45* 235,83±1,43* 156,72±1,40 161,49±1,46 172,64±1,46* 173,39±1,50* 44,34±0,90 45,65±0,83 97 47,23±0,89 3-я опытная 47,87±0,87 Масса мышц голени, г Масса мышц бедра, г Масса остальных мышц, г Всего мышц тела, г Масса печени, г Масса сердца, г Масса мышечного желудка, г Масса железистого желудка, г Масса кишечник, г 12,21±0,29 16,43±0,48 7,87±0,15 80,85±1,19 6,54±0,09 3,34±0,05 3,35±0,09 1,03±0,03 11,17±0,32 13,65±0,25 17,12±0,50 8,78±0,17 85,20±1,11 6,58±0,10 3,37±0,06 3,40±0,08 1,05±0,02 11,78±0,33 14,54±0,31* 18,36±0,47 9,78±0,16* 89,91±1,13* 6,60±0,08 3,33±0,04 3,43±0,12 1,09±0,03 12,54±0,34 14,69±0,30* 18,78±0,53 9,98±0,15* 91,32±1,12* 6,61±0,12 3,35±0,05 3,42±0,10 1,10±0,02 12,78±0,33 * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) Как показывают данные таблицы 18, масса птиц перед убоем была достоверно выше по сравнению с контрольной группой во 2-й и 3-й опытных группах на 9,28 и 9,68 % (P < 0,05). Разница наблюдалось при анализе потрошеной тушки, которая во 2-й и 3-й опытных группах была статистически достоверно выше, чем в группе контроля на 10,16 и 10,64 % (P < 0,05), при этом в 1-й опытной группе, где перепела получали добавку в дозе 0,2 % к массе корма наблюдалась лишь тенденция к увеличению данного показателя к контролю на 3,04 %. Аналогичная тенденция наблюдалась при анализе отдельных мышц тела подопытных перепелов. Так в целом, масса всех мышц тела перепелов во 2-й и 3-й опытных группах была достоверно выше, чем в контрольной группе, соответственно, на 11,21 и 12,95 % (P < 0,05). При анализе массы внутренних органов, в частности печени, сердца, мышечного и железистого желудков, а также кишечника статистически достоверного повышения показателя не наблюдалось среди изучаемых групп. С точки зрения анатомо-физиологических норм (расположение, размер, консистенция и другие) все выше перечисленные внутренние органы были без патологии и свойственны именно для данного вида сельскохозяйственной птицы. Качество мяса перепелов в контрольной и опытных группах оценивали по показателям химического и энергетического состава мышц птиц. Индекс качества мяса подопытных птиц рассчитывали путем отношения количества белка к жиру, полученные при химическом анализе. Результаты анализов представлены в таблице 19. 98 Таблица 19 – Химико-энергетический состав мяса перепелов Показатель контрольная 73,21±1,22 22,32±0,48 3,74±0,09 0,73±0,01 Влага, % Белок, % Жир, % Зола, % Энергетическая ценность 6811,50±93,49 1 кг мышц, кДж Индекс качества мяса 5,97±0,17 Группа 1-я опытная 2-я опытная 73,05±1,32 72,43±1,25 22,45±0,39 23,53±0,43 3,71±0,12 3,57±0,07 0,79±0,02 0,47±0,01 3-я опытная 72,51±1,27 23,48±0,41 3,55±0,11 0,46±0,02 6830,60±87,54 7032,30±91,95 7012,08±89,32 6,05±0,15 6,59±0,19 6,61±0,21 Результаты химического анализа мышц подопытных перепелов показали, что в разрезе изучаемых групп статистически достоверной разницы выявлено не было. Однако в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах наблюдалась тенденция к возрастанию количества в мясе птиц белка по сравнению с контролем на 0,61; 5,43 и 5,25 %, а также снижения содержания жира, соответственно, на 0,80; 4,54 и 5,08 %. Энергетическая ценность мяса перепелов в опытных группах, которые получали различные дозы пробиотической кормовой добавки Трилактосорб была выше, чем в контрольной на 0,28; 3,24 и 2,94 %. Одним из важных показателей диетических свойств мясной продукции является соотношение белка к жиру, которое характеризует его индекс качества. Результаты расчета данного показателя свидетельствовали о том, что мясо опытных перепелов обладает более высокими диетическими свойствами, так как их индекс качества был выше, чем в контрольной на 1,34; 10,39 и 10,72 %. Качество мяса также определяется её биополноценностью, а именно, содержанием незаменимых аминокислот, которые входят в состав белка мышц. В этой связи, нами проводился анализ мышц перепелов контрольной и опытных групп по содержанию в них отдельных аминокислот (таблице 20). Таблица 20 – Содержание отдельных аминокислот в мышцах подопытных перепелов, мг/г Аминокислота Лизин Триптофан Фенилаланин Лейцин Метионин контрольная 46,32±1,21 24,54±0,80 56,56±1,46 66,59±1,56 37,32±0,99 Группа 1-я опытная 2-я опытная 46,96±1,32 48,56±1,35 25,12±0,81 27,32±0,79 57,19±1,51 58,94±1,48 67,72±1,43 69,43±1,38 38,27±1,06 39,73±1,08 99 3-я опытная 48,78±1,26 27,43±0,84 58,65±1,54 70,05±1,59 40,24±0,97 Как видно из таблицы 20, в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах, в рационе которых присутствовали различные дозы кормовой добавки Трилактосорб содержание отдельных незаменимых аминокислот в мясе птиц было выше, чем в группе контроля. Так, количество лизина в опытных группах было выше, чем в группе контроля на 1,38; 4,84 и 5,31 %; триптофана на 2,36; 11,33 и 11,78 %; фенилаланина ‒ 1,11; 4,21 и 3,70 %; лейцина ‒ 1,70; 4,26; и 5,20 %; метионина ‒ 2,55; 6,46 и 7,82 %. По решению членов комиссии Продовольственной и сельскохозяйственной организации ООН, а также Всемирной организации здравоохранения, согласно пищевому кодексу и СанПин все продукты питания, потребляемые человеком обязаны подвергаться контролю качества по содержанию токсичных элементов. В этой связи, мясо перепелов контрольной и опытных групп подвергалось анализу на содержание токсичных металлов, результаты которых указаны в таблице 21. Таблица 21 – Содержание токсических металлов в мясе перепелов после использования кормовой добавки Трилактосорб, мг/кг Токсичный элемент Мышьяк Кадмий Ртуть Свинец Мышьяк Кадмий Ртуть Свинец контрольная – 0,0091510 ± 0,0000541 0,0002568 ± 0,0000040 0,0452862 ± 0,0002538 – 0,0040325 ± 0,0000834 0,0008153 ± 0,0000097 0,0648183 ± 0,0003135 Группа 1-я опытная 2-я опытная Мышцы груди – – 0,0083141 ± 0,0073037 ± 0,0000513* 0,0000743* 0,0001648 ± – 0,0000046* 0,0431007 ± 0,0408572 ± 0,0002857* 0,0002115* Мышцы голени и бедра – – 0,0035651 ± 0,0032167 ± 0,0000381* 0,0000341* 0,0006430 ± 0,0005385 ± 0,0000091* 0,0000087* 0,0625032 ± 0,0606203 ± 0,0003648* 0,0003515* * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) 100 3-я опытная – 0,0072769 ± 0,0000314* – 0,0405642 ± 0,0002201* – 0,0030364 ± 0,0000223* 0,0005021 ± 0,0000089* 0,06024317 ± 0,0003245* Из таблицы 21 видно, что использование кормовой добавки Трилактосорб во всех опытных группах способствовало статистически достоверному снижению в мышечной ткани птиц содержания токсичных металлов. Согласно СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» содержание токсичных элементов в мясной продукции не должно превышать следующих ПДК: для свинца – 0,5; кадмия – 0,05; ртути – 0,03 и мышьяка 0,1 мг/кг. При анализе мышц перепелов всех групп выявлено отсутствие мышьяка, а во 2-й и 3-й опытных группах не регистрировалось в грудных мышцах содержания ртути, в то время как в 1-й группе наблюдалось снижение данного токсичного элемента по сравнению с контрольной на 35,83 % при статистически достоверной разнице (P < 0,05). В грудных мышцах перепелов 1-й, 2-й и 3-й опытных групп наблюдалось достоверное снижение по сравнению с группой контроля содержания кадмия на 9,15; 20,19 и 20,48 % (P < 0,05). Количество свинца в мясе перепелов опытных групп также было достоверно ниже, чем в контрольной, соответственно, на 4,83; 9,78 и 10,43 % (P < 0,05). По содержанию токсичных металлов в ножных мышцах опытных и контрольной групп наблюдалась аналогичная тенденция, сопровождающаяся статистически достоверным снижением элементов в группах, которые получали изучаемую кормовую добавку Трилактосорб. Результаты анализа свидетельствовали о том, что эта кормовая добавка, за счет наличия в своем составе сорбента минерального происхождения, проявляет высокие антитоксические свойства, что особенно выражено в её дозах 0,5 и 1,0 % к массе корма. При этом содержание токсичных элементов находилось ниже требований СанПин. Дегустационную оценку мяса перепелов из контрольной и опытных групп проводили с участием сотрудников кафедры биотехнологии, биохимии и биофизики Кубанского госагроуниверситета с целью определения их вкусовых качеств, что немаловажно для потенциального потребителя данной продукции. Оценке подвергались мышцы груди, бедра и голени, а также бу101 льон в которых мясо варилось (таблице 22). Таблица 22 – Дегустационная оценка мяса и бульона, баллы Показатель Мышцы: грудные голени и бедра Бульон контрольная 4,80±0,16 4,80±0,14 4,70±0,21 Группа 1-я опытная 2-я опытная 4,80±0,10 4,80±0,17 4,80±0,16 4,90±0,13 4,90±0,15 4,80±0,16 3-я опытная 4,90±0,20 4,90±0,18 4,80±0,17 Из заключения дегустационной комиссии бульон и мясо перепелов из опытных групп не уступали по качеству из контрольной группы, а даже, наоборот, в отдельных случаях получили более высокую оценку. Бульон из мышц опытных групп перепелов был прозрачным, обладал приятным вкусом и запахом. На поверхности бульона были зафиксированы незначительные капли жира. Мясо во всех изучаемых группах по данным дегустационной оценки имело приятный вкус и было ароматным. По степени жесткости мясо было нежным и было умеренно сочным. Зафиксировано посторонних запахов от применения в опытных группах птиц пробиотической кормовой добавки Трилактосорб не было. Таким образом, изучение мясной продуктивности и качества получаемой продукции показало, что использование кормовой добавки Трилактосорб способствовало улучшение химико-энергетического и аминокислотного состава мышц перепелов, а также достоверному снижению, а в отдельных случаях отсутствию, токсичных элементов. В целом, использование кормовой добавки Трилактосорб, особенно в дозах 0,5 и 1,0 % к массе комбикорма, способствовало снижению в мясе птиц жира, повышения уровня белка, а также составляющих его незаменимых аминокислот, что свидетельствовало о влиянии добавки на обмен веществ в организме птиц, а также эффективном использовании запасов жиров тела, идущих на построение мышечной ткани перепелов. Снижение содержания токсичных металлов в мышцах опытных групп, говорит о высоком показателе экологичности мяса перепелов после использования кормовой добавки Трилактосорб. 102 3.5.4 Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса перепелов Проведение ветеринарно-санитарной экспертизы мышц, как животных, так и птиц позволяет сделать заключение о дальнейшем использовании их мяса в пищу потребителя. В связи с чем, в условиях кафедры биотехнологии, биохимии и биофизики проводилась ветеринарно-санитарная оценка мяса перепелов после использования кормовой добавки Трилактосорб. Перед заключением о качестве мяса птиц, перепела подвергались патологоанатомическому вскрытию. Результаты исследований показали, что изменений в структуре органов и тканей птиц не выявлено. У перепелов всех групп наблюдалось анатомически правильное расположение внутренних органов. В плевральной и брюшной полостях зарегистрировано – жидкости не было. Просвет органов дыхательной системы (трахея и бронхи) свободный, ткань легких имела слабо-розовый цвет. Слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта, в частности желудка и кишечника после использования кормовой добавки Трилактосорб имела серо-розовый цвет, наличие эрозий, язв, кровоизлияний и других видимых изъявлений не отмечалось. В целом, вскрытие показало отсутствие патологии после использования кормовой добавки Трилактосорб. Далее нами изучались органолептические показатели качества мяса перепелов всех групп согласно ГОСТ Р 51944-2002 и ГОСТ Р 54673-2011. Изучение упитанности тушек перепелов контрольной и опытных групп показало, что все группы птиц имели хорошо развитые мышцы, форма груди – округлая, наблюдается умеренное отложение подкожного жира в области живота и груди. Масса тушки перепелов была не ниже требований стандарта. В целом, по состоянию упитанности, согласно ГОСТ Р 54673-2011, тушки перепелов всех групп можно было отнести к 1-й категории. Через сутки после убоя перепелов, на поверхности тушек птиц во всех изучаемых группах регистрировалась «корочка подсыхания», которая имела беловато-желтый цвет с оттенком розового. При пальпации мышцы птиц бы103 ли упругой консистенции, плотные, образующаяся ямка быстро переходила в исходное состояние. При разрезе мышц можно было наблюдать их незначительную влажность, что фиксировали, не только визуально, но также и на фильтровальной бумаге. Цвет мышц был характерным для данного вида сельскохозяйственной птицы: грудные – бело-розового, ножные – красноватые. Запах мяса специфический, свойственный свежему. При проведении пробы варки бульон, приготовленный, непосредственно, из мяса перепелов контрольной и опытных групп, имел приятного аромат, был прозрачный, посторонних запахов выявлено не было. Проведение физико-химических и микробиологических исследований мясо перепелов всех групп осуществляли согласно утвержденной документации «Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарносанитарной экспертизы мяса и мясных продуктов». Результаты исследований представлены в таблице 23. Для проведения реакции с сернокислой медью в колбу помещали 20,0 г перепелинового фарша из каждой группы, добавляли 60,0 мл дистиллированной воды и тщательно перемешивали. Затем колбу накрывали стеклом и нагревали в водяной бане в течение 10 мин. Горячий бульон фильтровали через вату в пробирку, помещая последнюю в стакан с холодной водой. После фильтрации 2,0 мл бульона наливали в пробирку и добавляли 2– 3 капли 5,0%-го раствора сернокислой меди, встряхивали и выдерживали в течении 5 мин. Таблица 23 – Физико-химические и микробиологические показатели качества мяса перепелов после использования добавки Трилактосорб (n = 10) Показатель Реакция с сернокислой медью Реакция с формалином Реакция на пероксидазу Количество ЛЖК, мг КОН/100 г Количество микробных клеток в одном поле зрения микроскопа: контрольная Группа 1-я опытная 2-я опытная 3-я опытная – – – – + + + + 2,17±0,03 2,03±0,02 2,11±0,04 2,08±0,03 3,62±0,13 – 3,32±0,14 – 3,12±0,12 – 3,16±0,14 – 104 ‒ с поверхности тушки ‒ с глубоких слоев 1-е сутки 2-е сутки 3-и сутки рН мяса, ед. 6,94±0,21 6,71±0,18 6,55±0,27 6,38±0,26 6,15±0,15 5,98±0,19 6,64±0,18 6,29±0,23 5,62±0,16 6,78±0,21 6,32±0,22 5,61±0,23 Результаты исследований показали, что мясо перепелов всех групп было свежим, так как бульон после добавления CuSO4 оставался прозрачным, при этом не было зафиксировано образования хлопьев или выпадения желеобразного сгустка сине-голубого или зеленоватого цвета. Для проведения реакции с формалином (формольная реакция) пробу мяса перепелов освобождали от жира и соединительной ткани. Затем 10,0 г навески помещали в ступку, тщательно измельчали ножницами, прибавляли 10,0 мл физиологического раствора и 10 капель 0,01 н NaOH. Пробы мяса растирали в ступке, полученную массу переносили в колбу и нагревали до кипения с целью осаждения белков. Колбу охлаждали водопроводной водой, после чего содержимое ее нейтрализовали добавлением 5 капель 5,0%-го раствора щавелевой кислоты и фильтровали в пробирку. К 2,0 мл вытяжки добавляли 1,0 мл нейтрального формалина. В результате реакции вытяжка приобретала зеленовато-желтый цвет, при этом оставалась прозрачной. Образование сгустка или хлопьев не выявлено, что говорит о свежести мяса птиц. Следовательно, в мясе всех групп перепелов отсутствовали продукты первичного метаболизма белка (аммиак и соли аммония). Для проведения реакции на наличие пероксидазы в пробирку вносили 2,0 мл вытяжки, приготовленной из мясного фарша перепелов и дистиллированной воды в соотношении 1:4, добавляли 5 капель 0,2%-го спиртового раствора бензидина. Содержимое пробирок взбалтывали, затем добавляли пару капель 1,0%-го раствора перекиси водорода. В результате проведенного исследования можно было сделать вывод о том, что мясо было получено от здоровой птицы, так как вытяжка приобретала сине-зеленый цвет, переходящая в буро-коричневый в течение 1–2 мин. Определение количества летучих жирных кислот в мясе перепелов 105 проводили на приборе для перегонки водяным паром. Навеску фарша массой 25,0 г помещали в круглодонную колбу и приливали 150,0 мл 2,0%-го раствора серной кислоты. Содержимое колбы перемешивали и закрывали пробкой. Под холодильник подставляли колбу вместимостью 250,0 мл, на которой отмечали объем 200,0 мл. Дистиллированную воду в колбе доводили до кипения, и паром отгоняли ЛЖК до тех пор, пока в колбе не соберется 200,0 мл дистиллята. Титрование дистиллята проводили 0,1 н раствором гидроокиси калия в колбе с фенолфталеином до появления неисчезающей малиновой окраски. Параллельно при тех же условиях проводили контрольный анализ для определения расхода щелочи на титрование дистиллята с реактивом без мяса птиц. Количество летучих жирных кислот в мясе перепелов вычисляют по формуле, а за результат испытаний принимали среднее арифметическое двух параллельных определений. Результаты испытаний показали, что во всех группах перепелов количество ЛЖК находилось в пределах до 4,5 мг КОН/100 г, что согласно утвержденной документации характерно для свежего мяса птиц. При изучении мазков-отпечатков с поверхности тушек перепелов под микроскопом во всех изучаемых группах перепелов были обнаружены единичные микроорганизмы, преимущественно кокки. При микроскопии мазков-отпечатков глубоких слоев мышц птиц, посторонняя микрофлора не выявлена, остатки распада ткани отсутствовали, что подтверждает свежесть мяса перепелов. Определение pH мяса проводили pH-метром в водной вытяжке, приготовленную в соотношении 1:10. Смесь настаивали в течение 30 мин. при периодическом перемешивании и фильтровали через бумажный фильтр. Испытания проводили в течение трёх суток. Было установлено, что рН мышц перепелов, взятых сразу после убоя птиц в контрольной группе составила 6,94 ед., в 1-й опытной – 6,71 ед.; 2-й – 6,64 ед. и 3-й – 6,78 ед. На следующий день, рН мяса птиц составила, соответственно, 6,55; 6,38; 6,29; 6,32 ед. Ещё через сутки, рН мяса птиц составила, соответственно, 6,15; 5,99; 5,62; 106 5,61 ед., что находиться в пределах нормы для созревшего свежего мяса птицы. Следовательно, такое резкое снижение показателя кислотности мышц в течении первых трех суток характерно для мяса здоровой птицы. Таким образом, результаты проведенных исследований по подбору в рационе перепелов эффективной дозы использования кормовой добавки Трилактосорб показали, что добавка положительно влияет на организм птиц, а именно: стимулирует обмен веществ, повышаются приросты, сохранность, а также способствует биополноценности и биобезопасности мясной продукции перепеловодства. Мясо птиц может быть использовано в пищу независимо от дозы и сроков использования кормовой добавки Трилактосорб. По комплексу изучаемых показателей достоверная разница в отношении группы контроля была, особенно, выражена при использовании пробиотической кормовой добавки Трилактосорб в дозах 0,5 и 1,0 % к массе комбикорма, однако, в разрезе опытных групп перепелов, получавших данные дозировки, значительной разницы для хозяйственного применения выявлено не было. В итоге, с экономической точки зрения, для дальнейших научнохозяйственных испытаний нами была выбрана дозировка пробиотической добавки Трилактосорб, составляющая 0,5 % к массе комбикорма. 3.6 Эффективность использования кормовой добавки Трилактосорб Для подбора оптимальной схемы использования кормовой добавки Трилактосорб был проведен второй научно-хозяйственный эксперимент. Методом групп-аналогов было сформировано шесть групп перепелов по 90 голов в каждой: контрольная группа ‒ в рационе присутствовал только основной комбикорм (старт, рост, финиш), рекомендованный ВНИТИП; опытные группы: 1-я опытная группа ‒ с основным рационом в течение всего периода выращивания задавали пробиотик Трилактобакт в дозе 0,5 % к массе корма; 2-я опытная группа – в стартовый комбикорм (0‒13 суток) добавляли Трилактосорб в дозе 0,5 % на массу корма; 3-я опытная группа – перепела 107 получали в период старта и роста (0‒13; 14‒27 сутки) с комбикормом Трилактосорб в дозировке 0,5 % на массу корма; 4-я опытная группа ‒ в период роста и финиша (14‒27; 28-42 сутки) в комбикорм добавляли добавку Трилактосорб в дозе 0,5 % к массе основного рациона; 5-я опытная группа – в стандартный комбикорм (старт, рост, финиш) в течение всего периода выращивания задавали кормовую добавку Трилактосорб в дозировке 0,5 % на массу корма. Продолжительность научно-хозяйственного опыта составляла период полного выращивания перепелов на мясо (42 дня). Рост и развитие птицы Результаты влияния различных схем использования кормовой добавки Трилактосорб на хозяйственные показатели перепелов представлены в таблице 24. Как видно из таблицы 24, статистически достоверное повышение по живой массе перепелов в сравнении с группой контроля, было выявлено на 21-е сутки в 1-й, 2-й, 3-й и 5-й опытных группах, соответственно, на 5,83; 7,76; 7,80 и 7,16 % (P < 0,05). На 28-сутки в 1-й опытной группе живая масса перепелов была больше, чем в контроле на 13,07 %, во 2-й на 9,05 %, в 3-й ‒ 13,46 % и 5-й ‒ 14,21 % при достоверной разнице (P < 0,05). На 35-й день выращивания птицы достоверное повышение живой массы наблюдалось в 1-й, 3-й и 5-й опытных группах на 10,23; 10,60 и 10,83 % (P < 0,05). Аналогичная тенденция в 1-й, 3-й и 5-й опытных группах по изучаемому показателю наблюдалась на 42-е сутки, в которых по сравнению с контрольной группой живая масса была достоверно больше на 8,11; 9,12 и 9,75 % (P < 0,05). Необходимо отметить, что в 4-й опытной группе, которая получала добавку Трилактосорб с 14-х суток, наблюдалась незначительное повышение живой массы за весь период выращивания. Во 2-й опытной группе, которая перестала получать добавку Трилактосорб после 2-х недель, на конец срока выращивания также наблюдалось незначительное повышение живой массы птиц по сравнению с группой контроля, однако, эти показатели были недостоверны, что, скорее 108 всего, связано, с недостаточной приживаемостью микроорганизмов добавки и низким периодом её применения. Таблица 24 – Основные хозяйственные показатели перепелов (n = 90) Группа 1-я 2-я 3-я контроль опытная опытная опытная Динамика живой массы, г Суточные 8,14±0,33 8,20±0,31 8,17±0,29 8,19±0,34 7 сутки 34,18±0,83 36,31±0,89 37,81±0,91 36,72±0,87 14 сутки 73,74±2,01 77,42±2,33 78,53±2,19 78,94±2,11 21 сутки 113,65±1,01 120,28±0,97* 122,47±1,05* 122,51±1,07* 28 сутки 156,39±1,87 176,83±1,91* 170,55±2,01* 177,44±1,90* 35 сутки 198,49±2,21 218,80±2,13* 207,21±2,20 219,53±2,17* 42 сутки 217,64±2,86 235,28±2,81* 222,29±2,51 237,49±2,76* Сохранность, % 81,11 93,33 87,77 94,44 Прирост живой массы (0–42 дня) Одной головы, г 209,50 227,08 214,12 229,30 Среднесуточный, г 4,99 5,40 5,10 5,46 Расход комбикормов (0‒42 дня) На 1 голову, г 834,56 848,89 840,92 843,45 Конверсия корма, кг 3,98 3,74 3,93 3,67 Показатель 4-я опытная 5-я опытная 8,15±0,30 33,76±0,92 73,12±2,22 115,37±1,03 160,21±2,04 208,37±2,15 223,75±2,68 86,66 8,21±0,27 36,58±0,82 78,39±2,26 121,79±1,09* 178,62±1,97* 219,98±2,11* 238,86±2,78* 95,55 215,60 5,13 230,65 5,49 841,86 3,90 849,87 3,68 * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) Сохранность перепелов, независимо от схем использования добавки Трилактосорб, во всех группах была выше, чем в контрольной на 12,22; 6,66; 13,33; 5,55 и 14,44 %. Прирост живой массы перепелов за весь период выращивания в 1‒5-й опытных группах также был больше, чем в контрольной на 8,39; 2,21; 9,45; 2,91 и 10,10 %. Как видно из таблицы 24, с ростом живой массы опытных птиц повышается и потребление ими комбикормов. При этом затраты кормов на 1 кг прироста живой массы в опытных группах оставались ниже, чем в контрольной на 6,03; 1,26; 7,79; 2,01 и 7,54 %. Таким образом, согласно данным хозяйственных показателей при выращивании перепелов, наиболее эффективной схемой использования кормовой добавки Трилактосорб является период ввода её в комбикорм «старт» и «рост» (0‒13; 14‒27 сутки), а также в течение всего периода выращивания птицы (0‒42 дня). 109 Морфологические и биохимические показатели крови перепелов Результаты морфологических и биохимических показателей крови перепелов после различных схем использования кормовой добавки Трилактосорб представлены в таблице 25. Таблица 25 – Морфо-биохимические показатели крови перепелов (n = 10) Группа 1-я 2-я 3-я 4-я 5-я контрольная опытная опытная опытная опытная опытная Морфологические показатели Эритроциты, 1012/л 3,31±0,02 3,52±0,02* 3,39±0,023 3,49±0,03* 3,41±0,02 3,53±0,03* Гемоглобин, г/л 108,21±1,53 124,59±1,61* 114,41±1,59 123,72±1,71* 115,39±1,65 124,82±1,53* 9 Тромбоциты, 10 /л 133,63±3,82 137,93±3,79 135,73±3,86 136,42±3,77 138,63±3,93 135,39±3,91 Лейкоциты, 109/л 19,47±0,65 18,87±0,71 18,79±0,77 18,82±0,70 19,23±0,74 18,97±0,69 Биохимические показатели Общий белок, г/л 39,34±0,51 46,21±0,49* 41,65±0,51 45,82±0,53* 40,15±0,63 47,02±0,54* Холестерин, мМ/л 3,81±0,01 3,61±0,02* 3,76±0,02 3,63±0,01* 3,78±0,02 3,60±0,02* Мочевина, мМ/л 1,74±0,04 1,64±0,03 1,70±0,04 1,66±0,02 1,69±0,03 1,63±0,04 АСТ, Ед/л 252,29±4,89 243,68±4,91 250,43±4,85 245,39±4,81 250,29±4,83 242,42±4,94 АЛТ, Ед/л 34,36±0,86 32,01±0,88 33,28±0,93 32,87±0,99 33,49±0,89 33,95±0,91 Фосфор, мМ/л 2,42±0,01 2,57±0,02* 2,46±0,01 2,56±0,01* 2,48±0,02 2,59±0,01* Кальций, мМ/л 2,78±0,02 2,91±0,01* 2,86±0,02 2,96±0,01* 2,80±0,02 3,02,±0,02* Показатель * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) Из таблицы 25 видно, что статистически достоверная разница по изучаемым отдельным морфологическим показателям наблюдалась в 1-й, 3-й и 5-й опытных группах. Так, в данных опытных группах по сравнению с группой контроля было выше количество эритроцитов на 6,34; 5,44 и 6,65 %, а гемоглобина, соответственно, на 15,14; 14,33 и 15,35 % (P < 0,05). Анализ содержания в цельной крови тромбоцитов и лейкоцитов показал отсутствие достоверной разницы в разрезе контрольной и опытных групп. В целом, использование добавки Трилактосорб способствовало стимуляции гемо- и эритропоэзу, а это в свою очередь, обеспечивало насыщенность крови кислородом. Результаты биохимических исследований сыворотки крови перепелов свидетельствовали о стимуляции белкового обмена в опытных группах, однако, достоверное повышение общего белка наблюдалось в 1-й, 3-й и 5-й по 110 сравнению с контрольной группой и его было выше на 17,46; 16,47 и 19,52 % (P < 0,05). Содержание холестерина в 1-й, 3-й и 5-й опытных группах было достоверно ниже, чем в группе контроля на 5,24; 4,72 и 5,51 % (P < 0,05). По остальным биохимическим показателям разницы отмечено не было. Таким образом, наилучшие результаты были получены при использование кормовой добавки Трилактосорб по схеме (0‒13; 14-27 сутки), а также при даче добавке в течение всего периода выращивания птицы. Биобезопасность продукции перепеловодства В состав кормовой добавки Трилактосорб входит сорбент минерального происхождения, который обладает антитоксическими свойствами, что делает добавку ещё более эффективной. В этой связи, нами изучалось биобезопасность мышц перепелов по содержанию токсичных элементов после различных схем использования пробиотической кормовой добавки Трилактосорб. Результаты анализа представлены в таблице 26. Таблица 26 – Содержание токсичных элементов в мясе перепелов, мг/кг Токсичный элемент Мышьяк Кадмий Ртуть Свинец Мышьяк Кадмий контрольная 1-я опытная – – Группа 2-я 3-я опытная опытная Мышцы груди – – 0,0092418± 0,0092219 ± 0,0087947 ± 0,0073841 ± 0,0000473 0,0000506 0,0000693* 0,0000462* 0,0002782 ± 0,0002698 ± 0,0001384 ± – 0,0000039 0,0000043 0,0000041* 0,0441916 ± 0,0440569 ± 0,0428558 ± 0,0403211 ± 0,0002421 0,0002479 0,0002174* 0,0002279* Мышцы голени и бедра – – – – 4-я опытная 5-я опытная – – 0,0073060 ± 0,0071491 ± 0,0000499* 0,0000442* – – 0,0401025 ± 0,0400041 ± 0,0002513* 0,0002339* – – 0,0041276± 0,0041038 ± 0,0038283 ± 0,0033371 ± 0,0033174 ± 0,0031498 ± 0,0000754 0,0000741 0,0000461* 0,0000401* 0,0000498* 0,0000530* 111 Ртуть Свинец 0,0007583 ± 0,0007502 ± 0,0006362 ± 0,0000094 0,0000086 0,0000095* 0,0635125 ± 0,0632312 ± 0,0629992 ± 0,0003379 0,0003479 0,0003572* 0,0005132 ± 0,0000081* 0,0601469 ± 0,0003682* 0,0005072 ± 0,0000083* 0,0600932 ± 0,0003729* 0,0004741 ± 0,0000106* 0,06000012 ± 0,0003732* * Разница с контролем достоверна (P < 0,05 Результаты проведенных исследований показали, что при различных схемах использования кормовой добавки Трилактосорб во 2-й, 3-й, 4-й и 5-й опытных группах наблюдалось достоверное снижение содержания в грудных и ножных мышцах перепелов токсичных элементов по сравнению с группой контроля. В 3-й, 4-й и 5-й опытных группах при анализе мышц груди было зафиксировано отсутствие токсичного элемента ртути. Разницы между контрольной группой и 1-й опытной группы, которая получала с рационом пробиотик Трилактобакт отмечено не было, что говорит об отсутствии антитоксических свойств данной пробиотической добавки. Таким образом, снижение содержания токсичных элементов в мышцах опытных групп перепелов, которые получали с кормом кормовую добавку Трилактосорб свидетельствует о высоких сорбирующих и антитоксических свойствах добавки. Микрофлора кишечника перепелов Результаты изучения влияния различных схем использования кормовой добавки Трилактосорб и его аналога на изменение микробиоценоза желудочнокишечного тракта перепелов представлены в таблице 27. Таблица 27 – Титр лакто- и бифидобактерий в кишечнике перепелов (n = 6) Микрофлора Лактобактерии, 108 КОЕ/г Бифидобактерии, 108 КОЕ/г контроль Группа 1-я 2-я 3-я опытная опытная опытная Слепая кишка 4-я опытная 5-я опытная 3,48±0,03 3,69±0,02* 3,66±0,04 3,98±0,04* 3,78±0,02* 4,03±0,05* 4,51±0,07 4,71±0,06 4,60±0,07 4,95±0,05* 4,89±0,05* 5,05±0,07* Прямая кишка 112 Лактобактерии, 102 КОЕ/г Бифидобактерии, 102 КОЕ/г 1,21±0,03 1,31±0,04 1,22±0,02 1,27±0,04 1,19±0,03 1,33±0,03 1,48±0,04 1,39±0,03 1,49±0,03 1,43±0,04 1,51±0,03 1,49±0,03 * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) Из данных таблицы 27 видно, что в слепых кишках перепелов 1-й, 3-й, 4-й и 5-й опытных групп наблюдается достоверное повышение по сравнению с контрольной группой количества молочнокислых микроорганизмов на 6,03; 14,37; 8,62 и 15,80 % (P < 0,05). В 3-й, 4-й и 5-й опытных группах достоверно выше, чем в контроле количество бифидобактерий на 9,76; 8,43 и 11,97 % (P < 0,05), что, скорее всего, вызвано наличием в кормовой добавки Трилактосорб продуктов переработки сои ‒ окары, которая содержит олигосахариды, обладающие бифидогенным свойством. Значительной разнице при анализе лакто- и бифидофлоры в прямой кишке перепелов контрольной и опытных групп не выявлено. В целом, результаты подбора схемы использования кормовой добавки Трилактосорб, свидетельствуют о том, что наиболее эффективными являются применения добавки в рационе перепелов в первые четыре недели в составе стартового и ростового комбикорма, а также при её вводе в комбикорм на протяжении всего периода выращивания птицы. 3.7 Экономическая эффективность применения кормовой добавки Трилактосорб В рамках изучения фармакологических свойств кормовой добавки Трилактосорб путём определения дозы и схемы использования её в перепеловодстве, нами рассчитывалась экономическая эффективность от применения добавки. Для расчета экономических показателей нами использовались данные полученные при подборе эффективной схемы применения кормовой добавки Трилактосорб. В этой связи, с группой перепелов, которая не имела добавок в рационе (контрольная), мы сравнивали опытные группы: 1-я опытная группа ‒ с основным рационом в течение всего периода выращивания задавали 113 пробиотик Трилактобакт в дозе 0,5 % к массе корма; 2-я опытная группа – в стартовый комбикорм (0-13 суток) добавляли Трилактосорб в дозе 0,5 % на массу корма; 3-я опытная группа – перепела получали в период старта и роста (0‒13; 14‒27 сутки) с комбикормом Трилактосорб в дозировке 0,5 % на массу корма; 4-я опытная группа ‒ в период роста и финиша (14‒27; 28‒42 сутки) в комбикорм добавляли добавку Трилактосорб в дозе 0,5 % к массе основного рациона; 5-я опытная группа – в стандартный комбикорм (старт, рост, финиш) в течение всего периода выращивания задавали кормовую добавку Трилактосорб в дозировке 0,5 % на массу корма. Расчеты экономической эффективности использования кормовой добавки Трилактосорб на перепелах проводили с учетом стоимости его расхода, потребленного комбикорма на один кг прироста живой массы птицы и сохранностью поголовья. При этом учитывали фактическую стоимость комбикормов и цену продукции перепеловодства в период проведения испытаний (таблица 28). 114 Таблица 28 – Экономическая эффективность использования кормовой добавки Трилактосорб в мясном перепеловодстве Показатель 1 Поголовье в начале опыта, гол. Сохранность, % Поголовье в конце опыта, гол. 115 Суточные 7 сутки 14 сутки 21 сутки 28 сутки 35 сутки 42 сутки 1-й головы, г Среднесуточный, г На 1 голову, г На все поголовье, кг На 1 кг прироста, кг От 1-й головы, г От всего поголовья, кг Группа контрольная 1-я опытная 2-я опытная 3-я опытная 2 3 4 5 Хозяйственные показатели 90 90 90 90 81,11 93,33 87,77 94,44 73 84 79 85 Динамика живой массы, г 8,14±0,33 8,20±0,31 8,17±0,29 8,19±0,34 34,18±0,83 36,31±0,89 37,81±0,91 36,72±0,87 73,74±2,01 77,42±2,33 78,53±2,19 78,94±2,11 113,65±1,01 120,28±0,97* 122,47±1,05* 122,51±1,07* 156,39±1,87 176,83±1,91* 170,55±2,01* 177,44±1,90* 198,49±2,21 218,80±2,13* 207,21±2,20 219,53±2,17* 217,64±2,86 235,28±2,81* 222,29±2,51 237,49±2,76* Прирост живой массы перепелов (0–42 дня) 209,50 227,08 214,12 229,30 4,99 5,40 5,10 5,46 Затраты комбикорма (0–42 дня) 834,56 848,89 840,92 843,45 60,92 71,31 66,43 71,69 3,98 3,74 3,93 3,67 Масса потрошенной тушки 157,38 173,82 160,50 174,74 11,49 14,60 12,68 14,85 115 4-я опытная 6 5-я опытная 7 90 86,66 78 90 95,55 86 8,15±0,30 33,76±0,92 73,12±2,22 115,37±1,03 160,21±2,04 208,37±2,15 223,75±2,68 8,21±0,27 36,58±0,82 78,39±2,26 121,79±1,09* 178,62±1,97* 219,98±2,11* 238,86±2,78* 215,60 5,13 230,65 5,49 841,86 65,67 3,90 849,87 73,09 3,68 161,32 12,58 173,87 14,95 Продолжение таблицы 28 1 На израсходованный корм всего, кг На израсходованный корм всего, л 2 3 4 Затраты пробиотических добавок (0–42 дня) – – 0,10 – 0,36 – Экономическая эффективность (0–42 дня) 116 Цена 1 кг комбикорма, руб. Стоимость израсходованного корма всего, руб. Цена 1 кг Трилактосорба, руб. Цена 1 л Трилактобакта, руб. Стоимость пробиотических добавок всего, руб. Стоимость израсходованного корма и пробиотических добавок, руб. Цена реализации 1 кг мяса перепелов, руб. Выручка от реализации мяса птицы, руб. Прибыль от реализации мяса птицы, руб. Экономический эффект от использования пробиотических добавок, руб. % 5 6 7 0,19 – 0,17 – 0,37 – 1379,07 1534,89 – 20,40 1399,47 ‒ 44,40 1579,29 21,00 1279,32 – – – 1497,51 ‒ 80,00 28,80 1395,03 1505,49 ‒ 12,00 – 22,80 1279,32 1526,31 1407,03 1528,29 120,00 250,00 2872,50 1593,18 3650,00 2123,69 3170,00 1762,97 3712,50 2184,21 3145,00 1745,53 3737,50 2158,21 – 100 530,51 133,30 169,79 110,66 591,03 137,10 152,35 109,56 565,03 135,47 * Разница с контролем достоверна (P < 0,05) 116 Результаты расчета экономической эффективности от использования кормовой добавки Трилактосорб показали, что применение в рационе перепелов добавки в различных схемах экономически выгодно по сравнению с птицей, которая не получала пробиотиков. Так как эффективность добавки Трилактосорб оценивалась на фоне пробиотика Трилактобакт, то следует отметить, что экономический эффект от использования аналога был выше, чем в группе контроля на 530,51 руб или 33,30 %, в то время как во 2-й опытной группе, данный эффект составил 169,79 руб (10,66 %), в 3-й опытной группе ‒ 591,03 руб (37,10 %), в 4-й ‒ 152,35 руб (9,56 %) и в 5-й ‒ 565,03 руб (35,47 %). Таким образом, использование в рационе перепелов мясного направления кормовой добавки Трилактосорб по схеме 0,5 % добавки к массе комбикорма «старт» и «рост» (0‒13; 14‒27 сутки), экономически оправдано, на фоне не только перепелов, неполучавших пробиотиков, но и по сравнению с птицей, которая употребляла корма с аналогичной добавкой. 117 ЗАКЛЮЧЕНИЕ Промышленное птицеводство – одна из ведущих отраслей сельского хозяйства. По данным официального сайта министерства сельского хозяйства РФ, основным источником мяса населения является как раз таки мясо птицы, так как по содержанию белка оно не отличается от свинины и говядины, при этом менее жирное и на порядок дешевле. Предполагается, что в ближайшие годы можно будет наблюдать стабильное увеличение потребления мяса птицы населением РФ. Так, к 2014 году потребление говядины составит 2,1 млн. тонн, свинины ‒ 3,4 млн. тонн, а мяса птицы ‒ 4,6 млн. тонн. В условиях ведения интенсивного промышленного птицеводства, когда на ограниченных площадях концентрируется большое поголовье птицы, возникает вероятность развития в хозяйствах условно-патогенных и патогенных микроорганизмов. Систематическое применение антибиотиков и химиотерапевтических препаратов приводит к повышению антибиотикорезистентности некоторых патогенных штаммов и широкому распространение желудочнокишечных заболеваний, которые занимают второе место после вирусных и являются основной причиной гибели молодняка в птицеводческих хозяйствах. Установлено, что длительное и бессистемное применение антибиотиков способствует накоплению их в мясе и яйцах птиц, что отрицательно влияет на качество продукции, а это в свою очередь сказывается на здоровье человека, особенно детском организме. В связи с входом России в ВТО, большая часть антибиотиков была запрещена для использования в промышленном птицеводстве, что послужила толчком к поиску высокоэффективных, максимально естественных и безопасных, препаратов и добавок, направленных на коррекцию кишечного биоценоза и повышение колонизационной резистентности слизистой кишечника. Мировой опыт свидетельствует, что в решении этих проблем все большее значение приобретает использование пробиотиков. Попадая в организм хозяина они, вытесняя из кишечника патогенные микроорганизмы путем выделения ан118 тибиотических веществ, не влияют на представителей нормальной кишечной микрофлоры и способствуют нормализации процессов пищеварения. Таким образом, использование пробиотиков в промышленном птицеводстве на сегодняшний день перспективно, а разработка их новых, более эффективных видов, обладающих разносторонним спектром действия, является актуальным направлением. В наших опытах использовалась новая кормовая добавка Трилактосорб, которая представляет собой сухую смесь, состоящей из трех видов термофильных молочнокислых культур (Streptococcus thermophiles В-2894, Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus В-6543, Lactobacillus acidophilus В-8634), выращенных на соевом растительном сырье с использованием сорбента минерального происхождения. В 1 г готового продукта содержится не менее 1,0 × 108 КОЕ живой микрофлоры. Благодаря уникальному компонентному составу добавка проявляет сорбирующие и антитоксические свойства, а присутствующая в ней микрофлора способна максимально приживаться в желудочно-кишечном тракте перепелов, в связи с физиологическими особенностями данного вида сельскохозяйственной птицы. Контроль качества кормовой добавки Трилактосорб проводят по органолептическим (внешний вид, цвет и запах), физико-химическим (токсичные элементы, массовая доля влаги) и биологическим показателям (количество полезных микроорганизмов, наличие БГКП, наличие S. aureus, наличие бактерий рода сальмонеллы, наличие дрожжей и плесеней, подлинность, токсичность), которые должны соответствовать требованиям и нормам утвержденной технической документации. Результаты изучения жизнеспособности микрофлоры, входящей в состав кормовой добавки Трилактосорб показали, что общий титр микроорганизмов в добавке в процессе срока хранения уменьшается. Минимальное количество микроорганизмов, которое будет обеспечивать профилактический эффект добавки выявлено на 6-й месяц хранения. При этом изучение кислотности по Тернеру используемой добавки показало, что титруемая 119 кислотность на момент выпуска Трилактосорба составляла 88,33 °Т, что является оптимальной для жизнеспособности микроорганизмов. К моменту окончания срока хранения добавки кислотность составила 197,74-209,73 °Т, что является критическим показателем для жизнедеятельности молочнокислой микрофлоры. Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что максимальный срок хранения кормовой добавки Трилактосорб составляет 6 месяцев. Более длительное хранение и дальнейшее её использование не будет обеспечивать максимальный профилактический эффект. Результаты изучения общего титра жизнеспособных микроорганизмов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб, по отдельности и при их совместном использовании показали, что при совместном использовании культур в составе добавки Трилактосорб общий титр полезной микрофлоры выше, чем их раздельное применение. Таким образом, совокупность трех видов термофильных молочнокислых культур (Streptococcus thermophiles В-2894, Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus В-6543, Lactobacillus acidophilus В-8634) в кормовой добавке Трилактосорб будет обеспечивать максимальный желаемый эффект. Одним из главных параметров биологической активности любого нового препарата, в том числе кормовой добавки Трилактосорб, является изучение токсичности и раздражающего свойства, так как их обнаружение может быть основной причиной проявления у птицы токсикозов, а также другой патологии. Результаты изучения токсичности добавки Трилактосорб на стилонихиях показали, что выживаемость стилонихий при действии на них водного и ацетонового экстрактов пробиотической кормовой добавки Трилактосорб, соответственно, составила 97,8 и 94,7 %, что согласно ГОСТ Р 52337-2005 находится в пределах, характеризующих её как нетоксичную добавку растительного происхождения. Результаты изучения острой токсичности добавки Трилактосорб на лабораторных животных свидетельствовали о том, что однократное перораль120 ное использование исследуемых доз кормовой добавки Трилактосорб не вызывает гибели лабораторных животных за весь период наблюдения. Состояние подопытных мышей и крыс оставалось удовлетворительным, с хорошо выраженным аппетитом, животные были подвижны, реакция на внешние раздражители оставалась такой же, как и до употребления добавки. Нарушения в функциональной активности органов пищеварительной и мочевыделительной систем, а также проявление других токсических явлений – отсутствовали, в связи, с чем определить полулетальную дозу (ЛД50) не удалось. Таким образом, учитывая то, что использование кормовой добавки Трилактосорб переносится подопытными животными без каких-либо видимых последствий в максимально-используемой дозе, её можно отнести как малотоксичным препаратам данной фармакологической группы. При изучении хронической токсичности кормовой добавки Трилактосорб были получены следующие результаты: в опытных группах, как и группах-контроля количество животных и птиц на конец экспериментах не изменилось. Подопытные мыши и перепела удовлетворительно переносили изучаемую пробиотическую кормовую добавку, без какой-либо видимой патологии. Животные и птица были клинически здоровы в течение всего эксперимента, отмечено нарушений в поведении, приеме корма и воды не было. Исследуемые объекты были подвижны, активны, шерстный и перьевой покров оставался гладким с характерным блеском. Живая масса лабораторных мышей в опытных группах, получавших разные дозы кормовой добавки Трилактосорб, была статистически достоверно выше, чем в группе отрицательного контроля, соответственно, на 15,12; 17,77 и 23,36 % (Р < 0,05), а также достоверно выше, чем в группе контроля модельной среды на 13,46; 16,08 и 21,58 % (Р < 0,05). Аналогичная статистически достоверная разница по влиянию кормовой добавки Трилактосорб наблюдается на живую массу перепелов породы фараон. Результаты изучения морфо-биохимического статуса крови животных и птиц свидетельствовали о том, что использование кормовой добавки Трилактосорб не оказывает негативного влияния на их организм. 121 Так, наблюдалась тенденция возрастания в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах, по сравнению с группой отрицательного контроля и контроля модельной среды, количества эритроцитов, соответственно, на 3,53; 3,77; 2,70 % и 2,22; 2,57; 2,10 %, а также содержание гемоглобина на 8,89; 12,12; 13,79 % и 5,58; 8,72; 10,34 %. Изучение сыворотки крови мышей опытных групп показало, что после использования кормовой добавки Трилактосорб было выявлено достоверное повышение содержания общего белка по сравнению с группой отрицательного контроля на 23,04; 24,61 и 25,58 %, а к контролю модельной среды, соответственно, на 19,71; 21,24 и 22,18 % (Р < 0,05). Значение белкового коэффициента в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах мышей было выше, чем в группе отрицательного контроля на 5,63; 15,49 и 7,04 %, а также группы модельной среды на 4,17; 13,89 и 5,56 %, что свидетельствует о более интенсивном протекании процессов биосинтеза белка. Результаты патологоанатомического вскрытия лабораторных животных и птиц показали, что изменений в их структуре органов и тканей не обнаружено. Внутренние органы у изучаемых особей располагались анатомически правильно. В плевральной и брюшной полостях зарегистрировано наличие жидкости не было. Просвет органов дыхательной системы (трахея и бронхи) ‒ свободный, ткань легких имела слабо-розовый цвет. Слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта, в частности желудка и кишечника после использования кормовой добавки Трилактосорб имела серо-розовый цвет, наличие эрозий, язв, кровоизлияний и других видимых изъявлений не отмечалось. Почечная капсула легко снималась, мозговое и корковое вещество органа у мышей хорошо различимы на разрезе, в то время как у перепелов выраженной границы не наблюдалось, что связано с видовой особенностью данного вида сельскохозяйственной птицы. В целом, длительное использование кормовой добавки Трилактосорб в различных дозах белым мышам и перепелам не вызвало у них патологических изменений, как на общее состояние организма, так и на внутренние ор122 ганы, а также выстилающие их ткани, что характеризовало её как безопасную кормовую смесь для дальнейшего использования в промышленном перепеловодстве. Результаты накожных аппликаций из кормовой добавки Трилактосорб показали, что в ходе эксперимента у лабораторных животных местного покраснения не отмечалось, отсутствовали повышение чувствительности, припухлость, воспаление, образование эритемы и отек кожи. Таким образом, индекс первичного раздражения кормовой добавки Трилактосорб равнялся нулю. Изучение раздражающего действия Трилактосорба на конъюнктиву глаз показали, что введение кормовой добавки в нижний отдел конъюнктивального мешка левого глаза вызывает незначительное покраснение слизистой оболочки и выделение слезных желез сразу после инсоляции, которые исчезали через несколько минут. Дальнейшие наблюдения за кроликами не выявили иной патологии: не отмечалось помутнения роговицы глаза, радужная оболочка была без видимых изменений, хематоз и выделения из глаз отсутствовали. Общее состояние кроликов-альбиносов на всех этапах исследований оставалось удовлетворительным, без изменений. Результаты изучения дополнительного раздражающего действия кормовой добавки Трилактосорб на слизистую ротовой полости свидетельствовали о том, что слизистая защечного мешка с обеих сторон во всех опытных группах хомячков была чистой, без покраснений, припухлостей, образование отеков и эритем зарегистрировано не было, состояние животных до и после эксперимента не изменилось. В целом, индекс раздражающего действия Трилактосорба можно оценить как нулевой, что свидетельствует об отсутствии данного явления на слизистую ротовой полости исследуемой пробиотической кормовой добавки. Таким образом, результаты изучения кожно-резорбтивного действия кормовой добавки Трилактосорб и влияния на слизистую глаз, а также ротовой полости показали, что добавка не проявляет раздражающего свойства. 123 При изучении антибактериальной активности штаммов-пробионтов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб установлено, что при раздельном использовании молочнокислых культур (Streptococcus thermophiles В-2894, Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus В-6543, Lactobacillus acidophilus В-8634) зона задержки роста кишечной палочки составила 3,5; 4,0 и 5,7 мм, а золотистого стафилококка, соответственно, 4,1; 4,4 и 5,0 мм. Однако следует отметить, что при совместном использовании данных культур, антимикробная активность по отношению к E. coli составила 9,8 мм, а зона задержки роста S. аureus увеличилось до 9,3 мм. При изучении кислотообразующей активности штаммов-пробионтов было видно, что при раздельном использовании культур образование органических кислот ниже, чем при их применении в составе добавки. Так, содержание молочной кислоты при использовании кормовой добавки Трилактосорб составило 4765,57 мг/л, уксусной кислоты ‒ 486,38 мг/л, а пропионовой ‒ 606,18 мг/л. Таким образом, кормовая добавка Трилактосорб проявляет высокую антибактериальную активность в отношении патогенной микрофлоры, а это в свою очередь, будет обеспечивать её высокий лечебный и профилактический эффект. Изучение фармакологических свойств кормовой добавки Трилактосорб осуществляли на перепелах породы фараон мясного направления, оценивая их основные процессы обмена веществ, а также хозяйственные показатели, полученные в процессе выращивания данного вида птицы на производстве. Для подбора оптимальной дозы использования кормовой добавки Трилактосорб был проведен первый научно-хозяйственный опыт в производственных условиях. Для этого методом групп-аналогов было сформировано четыре группы перепелов по 90 голов в каждой: контрольная группа ‒ в рационе птиц присутствовал только основной полноценный комбикорм, рекомендованный ВНИТИП; 1-я опытная группа ‒ с основным рационом в течение всего периода выращивания задавали перепелам Трилактосорб в дозе 0,2 % 124 к массе корма; 2-я опытная группа – в комбикорм добавляли Трилактосорб в дозе 0,5 % на массу корма; 3-я опытная группа – перепела получали комбикормом с Трилактосорбом в дозировке 1,0 % на массу корма. Продолжительность научно-хозяйственного эксперимента составляла 42 дня. Результаты изучения влияния различных доз кормовой добавки Трилактосорб на хозяйственные показатели перепелов свидетельствовали о том, что на 7-е сутки выращивания наблюдалась тенденция к увеличению живой массы перепелов при дачи им в корм кормовой добавки Трилактосорб, что было особенно выражено в дозах 0,5 и 1,0% к массе корма. При контрольном взвешивании птиц на 21-й день было выявлено, что в 1-й опытной группе живая масса перепелов на 4,17 % выше, чем в группе контроля. Однако, статистически достоверная разница (P < 0,05) по изучаемому показателю была выражена во 2-й и 3-й опытных группах и составила 126,11 и 128,39 г, что выше, чем в контроле на 14,20 и 16,26 %. Достоверная разница по живой массе перепелов в группах, которые получали кормовую добавку Трилактосорб в дозах 0,5 и 1,0 % наблюдалась также и на 28-е сутки выращивания птицы и была выше, чем в контрольной на 12,93 и 14,15 % (P < 0,05). На 42-е сутки в первой опытной группе наблюдалась тенденция к возрастанию живой массы перепелов по сравнению с контрольной на 3,73 %. Следует отметить, что во 2-й и 3-й опытных группах по изучаемому показателю наблюдалась статистически достоверная разница в отношении группы, где добавок не использовали и, соответственно, была выше на 8,82 и 9,53 % (P < 0,05). Сохранность перепелов при использовании кормовой добавки Трилактосорб в 1-й опытной группе составила 90,0 %, а во 2-й и 3-й – по 94,44 %, что выше, чем в группе контроля на 4,45 и 8,89 %, соответственно. Прирост живой массы птиц за весь период выращивания перепелов также в опытных группах был выше, чем в контрольной на 3,89; 9,15 и 9,92 %. Анализ потребления комбикормов перепелами за весь период выращивания показал, что с возрастанием живой массы птиц увеличивается и расход кормов. Однако затраты корма на 1,0 кг прироста живой массы птиц в груп125 пах где применяли кормовую добавку Трилактосорб были ниже, чем в контрольной. Так, в 1-й опытной группе конверсия корма ниже, чем в контрольной на 2,00 %, а во 2-й и 3-й на 5,97 %. Проведенный нами эксперимент показал, что использование кормовой добавки Трилактосорб способствует повышению живой массы птиц, со- хранности поголовья, а также снижению затрат комбикормов на прирост живой массы тела. Достоверные данные по изучаемым показателям выражены при даче добавки в дозах 0,5 и 1,0 % к массе комбикорма. Результаты изучения отдельных показателей общего анализа крови птиц, после использования различных доз кормовой добавки Трилактосорб показали, что в 1-й опытной группе, которая получала добавку в дозе 0,2 % к массе корма, количество эритроцитов было больше, чем в контрольной группе на 1,83 %. При этом, статистически достоверная разница по данному показателю была выражена во 2-й и 3-й опытных группах, в 1,0 мл крови, которых содержание эритроцитов было значительно выше, чем в контроле на 7,32 и 8,54 % (P < 0,05). Аналогичная тенденция наблюдалась при изучении гемоглобина в крови опытных птиц. Так, во 2-й и 3-й опытных группах содержание гемоглобина было достоверно выше, чем в контрольной группе на 18,32 и 20,03 % (P < 0,05). По содержанию в крови тромбоцитов достоверных отличий в разрезе групп не наблюдалось, однако, была выражена незначительная тенденция к его увеличению в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах по сравнению с группой контроля на 1,14; 5,34 и 4,49 %. Полученные результаты свидетельствовали о том, что использование Трилактосорба способствует стимулированию образования красных клеток крови, насыщенности их гемоглобином, что приводит к нормализации уровня кислорода в организме и ускорению окислительно-восстановительных процессов, при отсутствии тех или иных патологических и воспалительных изменений. Изучение биохимических показателей сыворотки крови перепелов свидетельствовало о положительном влиянии кормовой добавки Трилактосорб на процесс обмена веществ в организме птиц. Так, наблюдалось статистиче126 ски достоверная стимуляция обмена белков в организме 2-й и 3-й опытных групп по показателю общего белка в сыворотки крови, содержание которого было выше, чем в группе, которая не получала добавок, на 17,34 и 17,78 % (P < 0,05). Повышение белкового коэффициента выявлено в опытных группах, получавших добавку в дозах 0,5 и 1,0 % к массе комбикорма и было больше, чем в контроле на 13,04 и 11,59 %. Наблюдалось достоверное понижение (P < 0,05) во 2-й и 3-й опытных группах в сыворотке крови холестерина по отношению к контрольной, соответственно, на 3,99 и 3,72 %, что говорит о распаде в организме перепелов избытка жиров, энергия которых используется на интенсивный рост птиц. Таким образом, использование кормовой добавки Трилактосорб в дозах 0,5 и 1,0 % к массе корма способствовало стимуляции метаболизма и энергии в организме перепелов, повышению иммунитета, что в целом обеспечивало птице опытной группе более высокую продуктивность и жизнеспособность. Для проведения ветеринарно-санитарной экспертизы мяса перепелов после использования кормовой добавки Трилактосорб перепела подвергались патологоанатомическому вскрытию. Результаты исследований показали, что изменений в структуре органов и тканей птиц не выявлено. У перепелов всех групп наблюдалось анатомически правильное расположение внутренних органов. В плевральной и брюшной полостях зарегистрировано наличие жидкости не было. Просвет органов дыхательной системы (трахея и бронхи) – свободный, ткань легких имела слабо-розовый цвет. Слизистая оболочка желудочнокишечного тракта, в частности желудка и кишечника после использования кормовой добавки Трилактосорб имела серо-розовый цвет, наличие эрозий, язв, кровоизлияний и других видимых изъявлений не отмечалось. В целом, вскрытие показало отсутствие патологии после использования кормовой добавки Трилактосорб. Изучение упитанности тушек перепелов контрольной и опытных групп показало, что все группы птиц имели хорошо развитые мышцы, форма груди – округлая, наблюдается умеренное отложение подкожного жира в обла127 сти живота и груди. Масса тушки перепелов была не ниже требований стандарта. В целом, по состоянию упитанности, согласно ГОСТ Р 54673-2011, тушки перепелов всех групп можно было отнести к 1-й категории. При проведении реакции с сернокислой медью, мясо перепелов всех групп было свежим, так как бульон после добавления CuSO4 оставался прозрачным, при этом не было зафиксировано образования хлопьев или выпадения желеобразного сгустка сине-голубого или зеленоватого цвета. При проведении реакции с формалином вытяжка приобретала зеленовато-желтый цвет, при этом оставалась прозрачной. Образование сгустка или хлопьев не выявлено, что говорит о свежести мяса птиц. Следовательно, в мясе всех групп перепелов отсутствовали продукты первичного метаболизма белка (аммиак и соли аммония). При проведении реакции на наличие пероксидазы можно было сделать вывод о том, что мясо было получено от здоровой птицы, так как вытяжка приобретала сине-зеленый цвет, переходящая в буро-коричневый в течение 1–2 мин. Результаты определения количества летучих жирных кислот в мясе перепелов показали, что во всех группах перепелов количество ЛЖК находилось в пределах до 4,5 мг КОН/100 г, что согласно утвержденной документации характерно для свежего мяса птиц. При изучении мазков-отпечатков с поверхности тушек перепелов под микроскопом во всех изучаемых группах перепелов были обнаружены единичные микроорганизмы, преимущественно кокки. При микроскопии мазков-отпечатков глубоких слоев мышц птиц, посторонняя микрофлора не выявлена, остатки распада ткани отсутствовали, что подтверждало свежесть мяса перепелов. При определении pH мяса установлено, что кислотность мышц перепелов, взятых сразу после убоя птиц в контрольной группе составила 6,94 ед., в 1-й опытной – 6,71 ед.; 2-й – 6,64 ед. и 3-й – 6,78 ед. На следующий день, рН мяса птиц составила, соответственно, 6,55; 6,38; 6,29; 6,32 ед. Ещё через 128 сутки, рН мяса птиц составила, соответственно, 6,15; 5,99; 5,62; 5,61 ед., что находиться в пределах нормы для созревшего свежего мяса птицы. Следовательно, такое резкое снижение показателя кислотности мышц в течении первых трех суток характерно для мяса здоровой птицы. Таким образом, кормовая добавки Трилактосорб в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 % к массе корма не проявляет негативных воздействий на патологоанатомические, физико-химические, органолептические, а также бактериологические показатели качества мяса перепелов. Мясо птиц может быть использовано в пищу независимо от дозы и сроков использования кормовой добавки Трилактосорб. Результаты изучения мясной продуктивности перепелов после использования кормовой добавки Трилактосорб показали, что масса птиц перед убоем была достоверно выше по сравнению с контрольной группой во 2-й и 3-й опытных группах на 9,28 и 9,68 % (P < 0,05). Разница наблюдалось при анализе потрошеной тушки, которая во 2-й и 3-й опытных группах была статистически достоверно выше, чем в группе контроля на 10,16 и 10,64 % (P < 0,05), при этом в 1-й опытной группе, где перепела получали добавку в дозе 0,2 % к массе корма наблюдалась лишь тенденция к увеличению данного показателя к контролю на 3,04 %. Аналогичная тенденция наблюдалась при анализе отдельных мышц тела подопытных перепелов. Так в целом, масса всех мышц тела перепелов во 2-й и 3-й опытных группах была достоверно выше, чем в контрольной группе, соответственно, на 11,21 и 12,95 % (P < 0,05). При анализе массы внутренних органов, в частности печени, сердца, мышечного и железистого желудков, а также кишечника статистически достоверного повышения показателя не наблюдалось среди изучаемых групп. С точки зрения анатомо-физиологических норм (расположение, размер, консистенция и другие) все выше перечисленные внутренние органы были без патологии и свойственны именно для данного вида сельскохозяйственной птицы. 129 Результаты химического анализа мышц подопытных перепелов показали, что в разрезе изучаемых групп статистически достоверной разницы выявлено не было. Однако в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах наблюдалась тенденция к возрастанию количества в мясе птиц белка по сравнению с контролем на 0,61; 5,43 и 5,25 %, а также снижения содержания жира, соответственно, на 0,80; 4,54 и 5,08 %. Энергетическая ценность мяса перепелов в опытных группах, которые получали различные дозы пробиотической кормовой добавки Трилактосорб была выше, чем в контрольной на 0,28; 3,24 и 2,94 %. Одним из важных показателей диетических свойств мясной продукции является соотношение белка к жиру, которое характеризует его индекс качества. Результаты расчета данного показателя свидетельствовали о том, что мясо опытных перепелов обладает более высокими диетическими свойствами, так как их индекс качества был выше, чем в контрольной на 1,34; 10,39 и 10,72 %. При изучении содержания незаменимых аминокислот в мышцах перепелов было установлено, что в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах, в рационе которых присутствовали различные дозы кормовой добавки Трилактосорб содержание отдельных незаменимых аминокислот в мясе птиц было выше, чем в группе контроля. Так, количество лизина в опытных группах было выше, чем в группе контроля на 1,38; 4,84 и 5,31 %; триптофана на 2,36; 11,33 и 11,78 %; фенилаланина ‒ 1,11; 4,21 и 3,70 %; лейцина ‒ 1,70; 4,26; и 5,20 %; метионина ‒ 2,55; 6,46 и 7,82 %. При изучении содержания токсичных металлов в мясе перепелов выявлено, что использование кормовой добавки Трилактосорб во всех опытных группах способствовало статистически достоверному снижению в мышечной ткани птиц содержания токсичных металлов. При анализе мышц перепелов всех групп выявлено отсутствие мышьяка, а во 2-й и 3-й опытных группах не регистрировалось в грудных мышцах содержания ртути, в то время как в 1-й группе наблюдалось снижение данного токсичного элемента по сравнению с контрольной на 35,83 % при статистически достоверной разнице (P < 0,05). В грудных мышцах перепелов 1-й, 2-й и 3-й опытных групп наблюдалось до130 стоверное снижение по сравнению с группой контроля содержания кадмия на 9,15; 20,19 и 20,48 % (P < 0,05). Количество свинца в мясе перепелов опытных групп также было достоверно ниже, чем в контрольной, соответственно, на 4,83; 9,78 и 10,43 % (P < 0,05). По содержанию токсичных металлов в ножных мышцах опытных и контрольной групп наблюдалась аналогичная тенденция, сопровождающаяся статистически достоверным снижением элементов в группах, которые получали изучаемую кормовую добавку Трилактосорб. Результаты анализа свидетельствовали о том, что кормовая добавка Трилактосорб, за счет наличия в своем составе сорбента минерального происхождения, проявляет высокие антитоксические свойства, что особенно выражено в её дозах 0,5 и 1,0 % к массе корма. Проведенная дегустационная оценка мяса перепелов показала, что бульон и мясо птиц из опытных групп не уступал по качеству из контрольной группы, а даже, наоборот, в отдельных случаях получили более высокую оценку. Бульон из мышц опытных групп перепелов был прозрачным, обладал приятным вкусом и запахом. На поверхности бульона были зафиксированы незначительные капли жира. Мясо во всех изучаемых группах по данным дегустационной оценки имело приятный вкус и было ароматным. По степени жесткости мясо было нежным и было умеренно сочным. Зафиксировано посторонних запахов от применения в опытных группах птиц пробиотической кормовой добавки Трилактосорб не было. Таким образом, изучение мясной продуктивности и качества получаемой продукции показало, что использование кормовой добавки Трилактосорб способствовало улучшение химико-энергетического и аминокислотного состава мышц перепелов, а также достоверному снижению, а в отдельных случаях отсутствию, токсичных элементов. В целом, использование кормовой добавки Трилактосорб, особенно в дозах 0,5 и 1,0 % к массе комбикорма, способствовало снижению в мясе птиц жира, повышения уровня белка, а также составляющих его незаменимых аминокислот, что свидетельствовало о влиянии добавки на обмен веществ в организме птиц, а также эффективном 131 использовании запасов жиров тела, идущих на построение мышечной ткани перепелов. Снижение содержания токсичных металлов в мышцах опытных групп, говорило о высоком показателе экологичности мяса перепелов после использования кормовой добавки Трилактосорб. При изучении переваримости питательных веществ комбикорма перепелами было установлено, что переваримость клетчатки в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах птиц была выше, чем в контрольной на 4,49; 9,91 и 11,42 %. Переваримость белка в рационе 1-й опытной группы была выше по сравнению с контролем на 3,19 %, однако, статистически достоверная разница была обнаружена во 2-й и 3-й опытных группах перепелов, которые получали добавку Трилактосорб в дозах 0,5 и 1,0 % и она была выше, чем в группе контроля на 12,79 и 13,85 % (P < 0,05). Статистически достоверная разница наблюдалась во 2-й и 3-й опытных группах при анализе переваримости жира, которого было выше по отношению к контрольной группе на 8,20 и 9,93 %, а также органического вещества, соответственно, на 8,66 и 9,59 % (P < 0,05). При анализе остальных показателей переваримости питательных веществ комбикорма перепелами в опытных группах наблюдалась тенденция к их увеличению по сравнению с группой, где добавка не применялась. Коэффициент использования фосфора и кальция из корма перепелами опытных групп был также выше по сравнению с группой контроля. Так, в 1-й опытной группе использование фосфора птицей было выше, чем в группе контроля на 3,95 %, а кальция на 3,81 %, однако разница недостоверна. Следует отметить, что достоверная разница по изучаемым показателям наблюдалась во 2-й и 3-й опытных группах, в которых коэффициент использования фосфора был выше, чем в контрольной на 14,56 и 15,29 %, а кальция, соответственно, на 14,24 и 16,80 % (P < 0,05). Таким образом, использование в комбикорме перепелов кормовой добавки Трилактосорб способствует усилению секреторной функции желудочно-кишечного тракта птиц, а основной расход кислот ЖКТ участвует в пере- 132 варимости комбикорма. Результатом данных явлений является повышение живой массы перепелов за счет мышечной ткани. Изучение микробиоценоза кишечника птиц свидетельствовало об эффективном использовании в комбикормах микроорганизмов кормовой добавки Трилактосорб. Содержание молочнокислых микроорганизмов в слепых кишках перепелов опытных групп было выше, чем в контрольной группе на 6,82; 14,39 и 17,80 % при статистически достоверной разнице (P < 0,05). Достоверная разница наблюдалась при подсчете титра бифидобактерий в слепой кишке перепелов во 2-й и 3-й опытных группах, которых было больше, чем в группе контроля на 11,35 и 12,29 % (P < 0,05). Анализ титра молочнокислых микроорганизмов и бифидобактерий в прямой кишке показал, что в разрезе групп разницы не наблюдалось. Полученные данные свидетельствовали о том, что используемая микрофлора в кормовой добавке Трилактосорб обладает высокой приживаемостью и не проходит транзитом через желудочно-кишечный тракт перепелов. Таким образом, результаты проведенных исследований по подбору в рационе перепелов эффективной дозы использования кормовой добавки Трилактосорб показали, что добавка положительно влияет на организм птиц, а именно: стимулирует обмен веществ, повышаются приросты, сохранность, а также способствует биополноценности и биобезопасности мясной продукции перепеловодства. По комплексу изучаемых показателей достоверная разница в отношении группы контроля была, особенно, выражена при использовании кормовой добавки Трилактосорб в дозах 0,5 и 1,0 % к массе комбикорма, однако, в разрезе опытных групп перепелов, получавших данные дозировки, значительной разницы для хозяйственного применения выявлено не было. Для подбора оптимальной схемы использования кормовой добавки Трилактосорб был проведен второй научно-хозяйственный эксперимент. Методом групп-аналогов было сформировано шесть групп перепелов по 90 голов в каждой: контрольная группа ‒ в рационе присутствовал только основ133 ной комбикорм (старт, рост, финиш), рекомендованный ВНИТИП; опытные группы: 1-я опытная группа ‒ с основным рационом в течение всего периода выращивания задавали пробиотик Трилактобакт в дозе 0,5 % к массе корма; 2-я опытная группа – в стартовый комбикорм (0-13 суток) добавляли Трилактосорб в дозе 0,5 % на массу корма; 3-я опытная группа – перепела получали в период старта и роста (0‒13; 14‒27 сутки) с комбикормом Трилактосорб в дозировке 0,5 % на массу корма; 4-я опытная группа ‒ в период роста и финиша (14‒27; 28‒42 сутки) в комбикорм добавляли добавку Трилактосорб в дозе 0,5 % к массе основного рациона; 5-я опытная группа – в стандартный комбикорм (старт, рост, финиш) в течение всего периода выращивания задавали кормовую добавку Трилактосорб в дозировке 0,5 % на массу корма. Продолжительность научно-хозяйственного опыта составляла период полного выращивания перепелов на мясо (42 дня). Результаты влияния различных схем использования кормовой добавки Трилактосорб на рост и развитие перепелов показали, что статистически достоверное повышение по живой массе птиц в сравнении с группой контроля, было выявлено на 21-е сутки в 1-й, 2-й, 3-й и 5-й опытных группах, соответственно, на 5,83; 7,76; 7,80 и 7,16 % (P < 0,05). На 28-е сутки в 1-й опытной группе живая масса перепелов была больше, чем в контроле на 13,07 %, во 2й на 9,05 %, в 3-й ‒ 13,46 % и 5-й ‒ 14,21 % при достоверной разнице (P < 0,05). На 35-й день выращивания птицы достоверное повышение живой массы наблюдалось в 1-й, 3-й и 5-й опытных группах на 10,23; 10,60 и 10,83 % (P < 0,05). Аналогичная тенденция в 1-й, 3-й и 5-й опытных группах по изучаемому показателю наблюдалась на 42-е сутки, в которых по сравнению с контрольной группой живая масса была достоверно больше на 8,11; 9,12 и 9,75 % (P < 0,05). В 4-й опытной группе, которая получала добавку Трилактосорб с 14-х суток, наблюдалась незначительное повышение живой массы за весь период выращивания. Во 2-й опытной группе, которая перестала получать добавку Трилактосорб после 2-х недель, на конец срока выращивания также наблюдалось незначительное повышение живой массы птиц по 134 сравнению с группой контроля, однако, эти показатели были недостоверны, что, скорее всего, связано, с недостаточной приживаемостью микроорганизмов добавки и низким периодом её применения. Сохранность перепелов, независимо от схем использования добавки Трилактосорб, во всех группах была выше, чем в контрольной на 12,22; 6,66; 13,33; 5,55 и 14,44 %. Прирост живой массы перепелов за весь период выращивания в 1‒5-й опытных группах также был больше, чем в контрольной на 8,39; 2,21; 9,45; 2,91 и 10,10 %. Затраты кормов на 1 кг прироста живой массы в опытных группах оставались ниже, чем в контрольной на 6,03; 1,26; 7,79; 2,01 и 7,54 %. Таким образом, согласно данным хозяйственных показателей при выращивании перепелов, наиболее эффективной схемой использования кормовой добавки Трилактосорб является период ввода её в комбикорм «старт» и «рост» (0‒13; 14‒27 сутки), а также в течение всего периода выращивания птицы (0‒42 дня). Результаты морфологических и биохимических показателей крови перепелов после различных схем использования кормовой добавки Трилактосорб показали, что статистически достоверная разница по изучаемым отдельным морфологическим показателям наблюдалась в 1-й, 3-й и 5-й опытных группах. Так, в данных опытных группах по сравнению с группой контроля было выше количество эритроцитов на 6,34; 5,44 и 6,65 %, а гемоглобина, соответственно, на 15,14; 14,33 и 15,35 % (P < 0,05). Анализ содержания в цельной крови тромбоцитов и лейкоцитов показал отсутствие достоверной разницы в разрезе контрольной и опытных групп. В целом, использование добавки Трилактосорб способствовало стимуляции гемо- и эритропоэзу, а это в свою очередь, обеспечивало насыщенность крови кислородом. Результаты биохимических исследований сыворотки крови перепелов свидетельствовали о стимуляции белкового обмена в опытных группах, однако, достоверное повышение общего белка наблюдалось в 1-й, 3-й и 5-й 135 по сравнению с контрольной группой и его было выше на 17,46; 16,47 и 19,52 % (P < 0,05). Содержание холестерина в 1-й, 3-й и 5-й опытных группах было достоверно ниже, чем в группе контроля на 5,24; 4,72 и 5,51 % (P < 0,05). По остальным биохимическим показателям разницы отмечено не было. Таким образом, наилучшие результаты были получены при использовании кормовой добавки Трилактосорб по схеме (0‒13; 14–27 сутки), а также при даче добавке в течение всего периода выращивания птицы. При изучении биобезопасности мышц перепелов по содержанию токсичных элементов после различных схем использования кормовой добавки Трилактосорб установлено, что во 2-й, 3-й, 4-й и 5-й опытных группах наблюдалось достоверное снижение содержания в грудных и ножных мышцах перепелов токсичных элементов по сравнению с группой контроля. В 3й, 4-й и 5-й опытных группах при анализе мышц груди было зафиксировано отсутствие токсичного элемента ртути. Разницы между контрольной группой и 1-й опытной группы, которая получала с рационом пробиотик Трилактобакт отмечено не было, что говорило об отсутствии антитоксических свойств данной пробиотической добавки. Таким образом, снижение содержания токсичных элементов в мышцах опытных групп перепелов, которые получали с кормом кормовую добавку Трилактосорб свидетельствовало о высоких сорбирующих и антитоксических свойствах добавки. Результаты изучения влияния различных схем использования кормовой добавки Трилактосорб и его аналога на изменение микробиоценоза желудочно-кишечного тракта перепелов свидетельствовали о том, что в слепых кишках перепелов 1-й, 3-й, 4-й и 5-й опытных групп наблюдается достоверное повышение по сравнению с контрольной группой количества молочнокислых микроорганизмов на 6,03; 14,37; 8,62 и 15,80 % (P < 0,05). В 3-й, 4-й и 5-й опытных группах достоверно выше, чем в контроле количество бифидобактерий на 9,76; 8,43 и 11,97 % (P < 0,05), что, скорее всего, вызвано наличием в кормовой добавке Трилактосорб продуктов переработ136 ки сои ‒ окары, которая содержит олигосахариды, обладающие бифидогенным свойством. Значительной разнице при анализе лакто- и бифидофлоры в прямой кишке перепелов контрольной и опытных групп не выявлено. В целом, результаты подбора схемы использования кормовой добавки Трилактосорб, свидетельствовали о том, что наиболее эффективными являются применения добавки в рационе перепелов в первые четыре недели в составе стартового и ростового комбикорма, а также при её вводе в комбикорм на протяжении всего периода выращивания птицы. Результаты расчета экономической эффективности от использования кормовой добавки Трилактосорб показали, что применение в рационе перепелов добавки в различных схемах экономически выгодно по сравнению с птицей, которая не получала пробиотиков. Так как эффективность добавки Трилактосорб оценивалась на фоне пробиотика Трилактобакт, то следует отметить, что экономический эффект от использования аналога был выше, чем в группе контроля на 530,51 руб или 33,30 %, в то время как во 2-й опытной группе, данный эффект составил 169,79 руб (10,66 %), в 3-й опытной группе ‒ 591,03 руб (37,10 %), в 4-й ‒ 152,35 руб (9,56 %) и в 5-й – 565,03 руб (35,47 %). Таким образом, использование в рационе перепелов мясного направления кормовой добавки Трилактосорб по схеме 0,5 % добавки к массе комбикорма «старт» и «рост» (0‒13; 14‒27 сутки), экономически оправдано, на фоне не только перепелов, неполучавших пробиотиков, но и по сравнению с птицей, которая употребляла корма с аналогичной пробиотической добавкой. Пробиотик Трилактобакт, учитывая его эффективность использования, может быть рекомендован в случаях отсутствия наличия кормовой добавки Трилактосорб или более высоких экономических показателях в сравнении с ним на конкретных перепелиных хозяйствах. 137 ВЫВОДЫ 1. Разработана новая кормовая добавка Трилактосорб (СТО 9291-010-00493209-14), представляющая собой совокупность трех видов молочнокислых культур (Streptococcus thermophiles В-2894, Lactobacillus delbruеckii subsp. bulgaricus В-6543, Lactobacillus acidophilus В-8634), выращенных на соевом растительном сырье с использованием сорбента минерального происхождения, содержащая не менее 1,0 × 108 КОЕ/г живой микрофлоры. 2. Результаты изучения жизнеспособности микроорганизмов Трилактосорба показали, что максимальный срок её хранения составляет 6 месяцев. Совместное использование штаммов-пробионтов в Трилактосорбе способствует повышению общего титр бактерий, увеличению зоны задержки роста E. coli до 9,8 мм и S. аureus до 9,3 мм, а также стимуляции секреции органических кислот, что в совокупности обеспечивает ей высокие антибактериальные свойства. 3. Острая и хроническая токсичность Трилактосорба показала, что его можно отнести к малотоксичный препаратам и добавкам. В хроническом опыте использование добавки обеспечивало высокие приросты живой массы, оказывало стимулирующее действие на обмен веществ, в частности белковый. Не выявлены патологические изменения в органах и тканях лабораторных животных и перепелов. Раздражающее свойство Трилактосорб на кожу, слизистые глаз и ротовой полости не проявляет. 4. Трилактосорб способствует гемо- и эритропоэзу, за счет увеличения в крови птиц количества эритроцитов на 5,4 % и гемоглобина на 14,3 %. Обладает стимулирующим действием на: обмен белков, который характеризуется повышением содержания в сыворотки крови перепелов общего белка на 16,5 % и белкового коэффициента на 13,1 %; обмен жиров – за счет снижением количества холестерина на 4,7 %; обмен минеральных веществ – за счет повышения уровня фосфора на 5,6 % и кальция – 6,5 %. 138 5. Изучение фармакологических свойств добавки Трилактосорб на перепелах показало, что наиболее эффективной схемой её использования является ввод добавки в дозе 0,5 % к массе стартового и ростового комбикормов (0‒27 сутки). При этом наблюдаются повышения жизнеспособности перепелов на 13,3 %, прироста живой массы птицы на 9,5 %, а также снижение конверсии корма на 7,8 %. 6. Использование добавки Трилактосорб в перепеловодстве способствует повышению мясной продуктивности и качеству получаемой продукции, о чем свидетельствуют: положительная ветеринарно-санитарная экспертиза мяса перепелов; увеличение содержания в мышечной ткани белка на 5,4 % и незаменимых аминокислот (лизина на 4,8 %, триптофана ‒ 11,3 %, фенилаланина ‒ 4,2 %, лейцина 4,3 %, метионина ‒ 6,5 %), при снижении жира на 4,5 %. 7. Кормовая добавка Трилактосорб стимулирует жизнедеятельность полезных микроорганизмов в кишечнике перепелов, о чем свидетельствует увеличение количества молочнокислой микрофлоры на 14,4 % и бифидобактерий на 9,7 % (P < 0,05) в слепых отростках кишечника. 8. Экономический эффект от применения Трилактосорба по схеме 0,5 % добавки к массе комбикорма в первые 4 недели выращивания перепелов достигает до 37,1 %. 139 ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ Для профилактики желудочно-кишечных заболеваний перепелов, повышения сохранности их поголовья, мясной продуктивности, получения высококачественной, диетической, а также биобезопасной продукции, при снижении расхода кормов, рекомендуется использование кормовой добавки Трилактосорб в дозировке 0,5 % к массе комбикорма в первые 4 недели выращивания птицы. 140 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 1. А. с. 2162289 РФ, МКИ7 А 23 L 1/20. Способ производства продук- тов из сои / В. Н. Кузнезов, А. В. Подобедов (РФ). – № 99118414/13; заяв. 26.08.99; опубл. 27.01.2001, Бюл. № 3. 2. та из А. с. 2202230 РФ, МКИ7 А 23 L 1/20. Способ производства продуксои, заменяющего орех / П. А. Никулин [и др.] (РФ). – № 2001115927/13; заяв. 08.06.2001; опубл. 20.04.2003, Бюл. № 11. 3. А. с. 232905 СССР, МКИ5 С 12 D 9/22. Способ получения бактери- альной закваски / Л. А. Банникова, И. В. Лагода (СССР). – № 1178799/28–13; заяв. 14.08.67; опубл. 18.12.68, Бюл. № 2. 4. А. с. 695649 СССР, МКИ2 А 23 К 1/14. Способ приготовления кормовых добавок / Г. А. Богданов, В. И. Гноевой, П. В. Свиридов (СССР). – № 2454410/30–15; заяв. 10.01.77; опубл. 05.11.79, Бюл. № 41. 5. Агафонова, О. В. Содержание флавоноидов, белка и активность ингибиторов трипсина в листьях Trifolium pannonicum Jacq, выращиваемого в Новосибирске / О. В. Агафонова, Е. В. Жмудь, Р. Е. Крогулевич, Т. С. Черникова // Растительные ресурсы. – 2002. – Вып. 1. – С 86–91. 6. Адамень, Ф. Ф. Использование сои в народном хозяйстве / Ф. Ф. Адамень, В. Н. Письменов. – Симферополь: Таврида, 1995. – 208 с. 7. Антипов, В. А. Биологические препараты симбионтных микроога- низмов и их применение в ветеринарии / В. А. Антипов // Сел. хоз-во за рубежом. – 1981. – № 2. – С. 43–47. 8. Антипов, В. А. Биологические препараты симбионтных микроога- низмов и их применение в ветеринарии / В. А. Антипов // Сел. хоз-во за рубежом. – 1981. – № 2. – С. 43–47. 9. Антипов, В. А. Использование пробиотиков в животноводстве / В. А. Антипов // Ветеринария. – 1991. – № 4. – С. 55–58. 10. Антипов, В. А. Использование пробиотиков в животноводстве / В. А. Антипов // Ветеринария. – 1994. – № 4. – С. 55–57. 141 11. Антипов, В. А. Использование пробиотиков в животноводстве / В. А. Антипов // Ветеринария. – 1990. – № 12. – С. 56–59. 12. Антипов, В. А. Об обращении лекарственных средств для животных / В. А. Антипов, А. Н. Гришин // Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность России: материалы Международ. науч.-практ. конф., посвященной 50-летию Федерального Центра токсикол. и радиац. безопасности. Казань, 2010. – С. 7–10. 13. Антипов, В. А. Эффективность и перспективы применения пробиотиков / В. А. Антипов, В. М. Субботин // Ветеринария. – 1980. – № 12. – С. 55–57. 14. Аракелян, Ф.Р. Биологические основы применения бентонита в животноводстве: автореф. дис... док. биол. наук / Ф. Р. Аракелян. – Ереван, ЕрЗВИ, 1991. – 47 с. 15. Аракелян, Ф. Р. Применение бентонитовой глины Саригюхского месторождения в качестве кормовой добавки к рациону сельскохозяйственных животных / Ф. Р. Аракелян // Ученые записки. Ереванский зооветеринарный ин-т. – 1986. – С. 17–18. 16. Бабенко, Ю. С. Ростстимулирующая активность лизоэнзимного комплекса, синтезируемого S. recifensis var. lyticus 2435 / Ю. С. Бабенко, Н. В. Кукушкина, Н. П. Черногор // Микробиол. журн. – 1990. – № 1. – С. 15–19. 17. Бабий, Г. А. Использование трех сортов сои в комбикормах при выращивании перепелят и кормлении перепелок-несушек: автореф. дис...канд. с.-х. наук / Г. А. Бабий. – Краснодар, 2002. – 25 с. 18. Башкиров, О. Г. Выращивание птицы без антибиотиков / О. Г. Башкирова // Био. – 2003. – № 4 (31). – С. 35–36. 19. Белекова, В. Минеральные подкормки. Использование бентонитов в кормлении высокопродуктивных коров // В. Белекова, А. Булатов, А. Хлопин // Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии: матер. второго международ. симпозиума (22–24 апреля 2003 г.). – Спб, 2003. – С. 92–94. 142 20. Белова, Г. А. Концентраты молочнокислых бактерий и способы применения их в сыроделении / Г. А. Белова, О. К. Николаева, К. И. Некрасова // ЦНИИТЭИ мясомолпром, сер. маслодельная и сыродел. пром-сть. – М., 1974. – № 2. – С. 21–37. 21. Беспоместных, К. В. Исследование свойств микроорганизмов Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus и разработка тест-системы для их идентификации: автореф. дис.... канд. техн. наук: 05.18.04 / К. В. Беспоместных. – 2011. – 123 с. 22. Биологические и технологические аспекты использования сои при получении пищевых продуктов / С. В. Иваницкий [и др.] // Изв. вузов. Пищевая технология. – 1998. – № 1. – С. 8–13. 23. Блажнова, М. В. Эффективность применения вермикулита сухостойным коровам и пробиотика биоспорина для лечения и профилактики диспепсиителят: автореф. дис. … канд. вет. наук : 16.00.01 / М. В. Блажнова. Екатеринбург, 2004. – 23 с. 24. Богатов, В. И. Функции природых минералов в обменном процессе сельскохозяйственной птицы / В. И. Богатов, К. Я. Мотофилов, М. А. Спешилова // Сельскохозяйственная биология. – 1987 г. – № 7. – С. 18–21. 25. Бондаренко, В. М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры / В. М. Бондаренко, В. Г. Петровская // Вестник РАМН. – 1997. – № 3. – С. 7–10. 26. Бородулина, А. А. Влияние термической и химической обработки на структуру лектинов семян сои / А. А. Бородулина, Н. В. Алешина // Науч.– техн. бюл. ВНИИМК. – 1989. – Вып. № 1 (104). – С. 15–17. 27. Ботина, С. Г. Генетическое многообразие штаммов молочнокислых термофильных бактерий на территории стран СНГ / С. Г. Ботина // Биотехнология. – 2004. – № 2. – С. 3–12. 143 28. Ботина, С. Г. Классификация отечественных пробиотических культур рода Lactobacillus / С. Г. Ботина // Журнал микробиологии. – 2010. – № 5. – С. 3–7. 29. Бреслер, В. М. Организм защищается от загрязнений / В. М. Бреслер // Наука и жизнь. – 1989. – № 7. – С. 10–11. 30. Варюхин, A. B. Адсорбционные свойства препарата Энтеросорбент-В и ветеринарно-гигиеническое обоснование его применения при ртутных отравлениях животных: автореф. дисс... канд. вет. наук / А. В. Варюхин. СПбГАВМ, 1998. – 23 с. 31. Викторов, П. И. Сравнительная характеристика трех сортов полножирной сои при выращивании перепелов / П. И. Викторов, Г. А. Бабий // Птицеводство – мировой и отечественный опыт: тез. докл. Междунар. конф.выст. – М., 2002. – С. 29–31. 32. Влияние биохимического состава семян сои на эффективность их использования при кормлении перепелов / В. С. Петибская [и др.] // Науч.техн. бюл. ВНИИМК. – Краснодар, 2003. – Вып. 2 (129). – С. 75–78. 33. Воронин, Е. С. Этиология и профилактика желудочно-кишечных заболеваний телят / Е. С. Воронин, Д. А. Девришов, Л. Я. Ставцева // Вестник с.-х. науки, 1989. – № 9. – С. 105–116. 34. Голунова, О. В. Технология приготовления и оценка эффективности кормовой добавки «Бион»: дис... канд. биол. наук: 03.00.23 / О. В. Голунова. Москва, 2009. – 121 с. 35. Гончарова, Г. И. Бифидофлора человека, ее нормализующие и защитные функции / Г. И. Гончарова, Л. П. Семенова, А. А. Лянная // Антибиотики и медицинская биотехнология. – 1987. – Т. 32. – № 3. – С. 11–15. 36. Гончарова, Г. И. Культуральная, морфологическая и биохимическая характеристика B. bifidum / Г. И. Гончарова, Л. М. Лянная // Сб. науч. раб. / МНИИЭМ. – М., 1969. – Т. 13. – С. 415–426. 37. Горбатова, К. К. Химия и физика молока / К. К. Горбатова, П. И. Гунькова. – СПб.: ГИОРД, 2012. – 336 с. 144 38. Горелов, A. B. Пробиотики: механизмы действия и эффективность при инфекциях желудочно-кишечного тракта / A. B. Горелов, Д. В. Усенко // Эпидемиология и инфекционные болезни. – 2006. – № 4. – С. 53–56. 39. Горчаков, В. Д. Селективные гемосорбенты / В. Д. Горчаков, В. И. Сергиенко, В. Т. Владимиров. – М.: Медицина, 1989. – 224 с. 40. ГОСТ 10444.11-89. Продукты пищевые. Методы определения молочнокислых микроорганизмов. – Введ. 01.01.1994. – М.: Госстандарт России: Изд-во стандартов, 2010. – 15 с. 41. ГОСТ 13496.15-97. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения содержания сырого жира. Введ. 1999-01-01. – М.: Изд-во стандартов, 2005. – 13 с. 42. ГОСТ 13496.2-91. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения сырой клетчатки. Введ. 1992-07-01. – М.: Изд-во стандартов, 2002. – 6 с. 43. ГОСТ 13496.3-92. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения содержания влаги. Введ. 1993-01-01. – М.: Изд-во стандартов, 2002. – 4 с. 44. ГОСТ 13496.4-93. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения содержания азота и сырого протеина. Введ. 1995-01-01. – М.: Изд-во стандартов, 2002. – 17 с. 45. ГОСТ 23042-78. Мясо и мясные продукты. Метод определения жира. Введ. 1988-01-01. – М.: Изд-во стандартов, 2010. – 5 с. 46. ГОСТ 25011-81. Мясо и мясные продукты. Метод определения белка. Введ. 1983-01-01. – М.: Изд-во стандартов, 2010. – 7 с. 47. ГОСТ 26226-95. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения сырой золы. Введ. 2003-07-01. – М.: Изд-во стандартов, 2010. – 8 с. 48. ГОСТ 26570-95. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения кальция. Введ. 1997-01-01. – М.: Изд-во стандартов, 2010. – 16 с. 145 49. ГОСТ 26712-94. Удобрения органические. Общие требования к методам анализа. – Введ. 01.01.1996. – М.: Госстандарт России: Изд-во стандартов, 1996. – 10 с. 50. ГОСТ 26713-85. Удобрения органические. Метод определения влаги и сухого остатка. – Введ. 19.12.1985. – М.: Госстандарт Союза ССР: Изд-во стандартов, 1985. – 7 с. 51. ГОСТ 3624-92. Молоко и молочные продукты. Титриметрические методы определения кислотности. – Введ. 01.01.1994. – М.: Госстандарт России: Изд-во стандартов, 2009. – 10 с. 52. ГОСТ 9792-73. Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мясо других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и метод отбора проб. Введ. 1974-07-01. – М.: Изд-во стандартов, 2010. – 7 с. 53. ГОСТ 9793-74. Мясные продукты. Метод определения содержания влаги. Введ. 1975-01-01. – М.: Изд-во стандартов, 2010. – 4 с. 54. ГОСТ Р 50396.1-92. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов. Введ. 1994-01-01. – М.: Госстандарт России, 1993. – 5 с. 55. ГОСТ Р 51331-99. Продукты молочные. Йогурты. Общие технические условия. – Введ.19.10.1999. – М.: Стандартинформ, 2008. – 22 с. 56. ГОСТ Р 51478-99.Мясо и мясные продукты. Контрольный метод определения концентрации водородных ионов (pH). Введ. 2001-01-01. – М.: Изд-во стандартов, 2010. – 5 с. 57. ГОСТ Р 51944-2002. Мясо птицы. Методы определения органолептических показателей, температуры и массы. Введ. 2003-07-01. – М.: Изд-во стандартов, 2010. – 8 с. 58. ГОСТ Р 52337-2005. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения общей токсичности. – Введ. 01.07.2006. – М.: Госстандарт России: Изд-во стандартов, 2011. – 19 с. 146 59. ГОСТ Р 54673-2011. Мясо перепелов (тушки). Технические условия. Введ. 2013-01-01. – М.: Изд-во стандартов, 2013. – 12 с. 60. ГОСТ Р 50258-92. Комбикорма полнорационные для лабораторных животных. Технические условия. Введ. 1994-01-01. – М.: Госстандарт России, 1992. – 8 с. 61. ГОСТ Р ИСО 10993.10-99. Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 10. Исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия. Введ. 1999-12-29. – М.: Госстандарт России, 2000. – 38 с. 62. ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009. Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 11. Исследования общетоксического действия. Введ. 2009-10-20. – М.: Стандартинформ, 2010. – 27 с. 63. Градова Н. Б. Лабораторный практикум по общей микробиологии / Н. Б. Градова, Е. С. Бабусенко, И. Б. Горнова. – М.: ДеЛи принт, 2004. – 144 с. 64. Гудзь, Г. П. Фармакология и эффективность применения пробиотика Бацелл: Автореф. дис…. канд. биол. наук. – Краснодар, 2008. –23 с. 65. Гудков, А. В. Биологическая активность бифидобактерий в молоке / А. В. Гудков, Т. М. Эрвольдер, Г. М. Свириденко // Молочная пром-сть. – 1984. – № 1. – С. 21–24. 66. Гудков, А. В. Производство молочных продуктов с использованием бифидобактерий / А. В. Гудков, Т. М. Эрвольдер, М. Я. Гудкова. – М.: ЦНИИТЭИ мясомолпром. Обзорная информ., 1981. – 18 с. 67. Донник, И. М. Содержание радионуклидов, солей тяжелых металлов и фтора в воде, растительных кормах, органах и тканях животных из районов промышленного загрязнения / И. М. Донник // ЦНТИ. Екатеринбург, 1996. – № 1014. – 96. – 4 с. 68. Ермакова, Т. И. Пробиотики – перспективная группа лечебнопрофилактических препаратов для животноводства / Т. И Ермакова // Актульные проблемы ветеринарии в современных условиях. Материалы меж- 147 дунар. нач.-практич. конф., посв. 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ. – Краснодар, 2006. – С. 278–280. 69. Жмурин, Л. М. Влияние многократного скармливания метионина и ПАБК на показатели липидного обмена кур / Л. М. Жмурин // Бюл. ВС. – 1970. – 118 с. 70. Зухрабов, М. Г. Влияние цеолитов на обмен веществ и продуктивность животных / М. Г. Зухрабов // Ветеринария. – 1997. – № 2. – С. 55–58. 71. Зятьков, Ю. И. Производство сои и соевого масла в России / Ю. И. Зятьков, Н. А. Курмышева, В. Е. Наконечный. – М., 2002. – 86 с. 72. Зятьков, Ю. И. Производство сои и соевого масла в России / Ю. И. Зятьков, Н. А. Курмышева, В. Е. Наконечный // Масложировая промышленность. – 1999. – № 3. – С. 18–22. 73. Ибрагимов, С. И. Влияние избытка субстрата на некоторые физиологические свойства Propionibacterium schermanii / С. И. Ибрагимов, З. В. Сахарова // Микробиология. – 1972. – Т. 41. – Вып. № 5. – С. 834–840. 74. Иванов, A. B. Изучение миграции тяжелых металлов в системе почва-водные ресурсы – животноводческая продукция (молоко) в условиях техногенеза / А. В. Иванов, К. Х. Папуниди, М. В. Кузина // Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность России: материалы Международ. науч.-практ. конф., посвященной 50-летию Федерального Центра токсикол. и радиац. безопасности. Казань, 2010. – С. 62–66. 75. Иванов, А. В. О проблеме микотоксикозов в животноводстве / А. В. Иванов, М. Я. Тремасов, К. Х. Папуниди // Актуальные проблемы ветеринарной медицины. – 2010 г. – С. 194–202. 76. Ивашкина, Н. Ю. Оригинальный отечественный пробиотик аципол: молекулярно-биологические и метаболические характеристики / Н. Ю. Ивашкина, С. Г. Ботина // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. – 2009. – Т. 19. – № 2. – С. 58–64. 77. Имангулов, Ш. А. Методика проведения научных и производственных исследований по кормлению сельскохозяйственной птицы. Рекоменда148 ции / Ш. А. Имангулов, И. А. Егоров, Т. М. Околелова, А. Н. Тишенков // ВНИТИП. – Сергиев Посад, 2004. –42 с. 78. Интизаров, М. М. Возможности гнотобиологического эксперимента при изучении механизмов бактериального антагонизма и симбиоза / М. М. Интизаров // Теоретические и практические основы гнотобиологии: сб. науч. тр. – М.: Агропромиздат, 1986. – С. 22–29. 79. Каблучеева, Т. И. Влияние пробиотиков «Бифитрилак» и «Ветом 1.1» на зоотехнические показатели цыплят / Т. И. Каблучеева, Г. Г. Силина // Актульные проблемы ветеринарии в современных условиях. Материалы междунар. нач.-практич. конф., посв. 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ. – Краснодар, 2006. – С. 286–289. 80. Каширская, Н. Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры / Н. Ю. Каширская // Русский медицинский журнал. – 2000. – № 13. – С. 38–42. 81. Каширская Н. Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры / Н. Ю. Каширская // Русский медицинский журнал. –2000. – № 5 . – С. 13–17. 82. Квасников, Е. И. Молочнокислые бактерии и пути их использования / Е. И. Квасников, О. А. Нестеренко. – М.: Наука, 1975. – 390 с. 83. Королев, С. А. Основы технической микробиологии молочного дела / С. А. Королев // 3-е изд. М.: Пищевая промышленность, 1974. – 343 с. 84. Кочегура, А. В. Селекция сортов сои для различных направлений использования: автореф. дис...д-ра с.–х. наук / А. В. Кочегура. – Краснодар, 1998. – 47 с. 85. Кочегура, А. В. Селекция сортов сои для различных направлений использования: дис...д-ра с.–х. наук / А. В. Кочегура. – Краснодар, 1998. – 321 с. 86. Кощаев, А. Г. Биотехнология производства и применение функциональных кормовых добавок для птицы: дис... д-ра биол. наук / А. Г. Кощаев. – Краснодар, 2008. – 425 с. 149 87. Кощаева, О. В. Технология получения и оценка биологической ценности растительных белково-витаминных добавок для перепелов: дис... канд. с.–х. наук: 06.02.02 / О. В. Кощаева. – Краснодар, 2003. – 152 с. 88. Красникова, Л. B. Метаболизм молочнокислых бактерий / Л. B. Красникова, И. Е. Кострова, В. И. Шаробайко // Обзорная информация. Серия «Цельномолочная промышленность». – М.: ЦНИИТЭИмясомолпром, 1980. – 40 с. 89. Крюков, Н. И. Научное обоснование и перспективы использования ферроцианидно-бентонитовых сорбентов в ветеринарии: дисс. … докт биол. наук / Н. И. Крюков; КубГАУ. – Краснодар, 2011. – 330 с. 90. Крюков, О. В. Спорообразующий пробиотик при выращивании бройлеров / О. В. Крюков // Комбикорма. – 2006. – № 1. – С 75–79. 91. Куяров, А. В. Микробный аспект сбалансированного питания / А. В. Куяров, А. А. Воробьев, Ю. В. Несвижский // Вопросы птания. – 2001. – № 3. – С. 6–8. 92. Лакин, Г. Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин // М.: Высшая школа, 1990. – С. 351. 93. Леванова, Г. Ф. Размер генома, нуклеотидный состав и гомология ДНК некоторых лактобактерий / Г. Ф. Леванова, И. Н. Мурыгина, Е. И. Квасников // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 1986. – № 7. – С. 26–29. 94. Лихачева, А. Ю. Классификация и методы идентификации бифидобактерий и лактобацилл / А. Ю. Лихачева, Г. Ф. Леванова // Журнал микробиологии. – 1997. – № 5. – С. 114–117. 95. Лысенко, Ю. А. Использование пробиотическо-минеральной кормовой смеси для повышения продуктивности и биобезопасности продукции птицеводства // Современные научные исследования. Выпуск 2 ‒ Концепт. ‒ 2014. ‒ ART 54283. ‒ URL: http://e-koncept.ru/2014/54283.htm ‒ Гос. рег. Эл № ФС 77‒ 49965. ‒ ISSN 2304‒120X. 150 96. Лысенко, Ю. А. Повышение биологического потенциала перепелокнесушек при использовании пробиотических кормовых добавок / Ю. А. Лысенко, А. И. Петенко // Ветеринария Кубани. – 2012. – № 5. – С. 5‒7. 97. Лысенко, Ю. А. Пробиотическая кормовая добавка для повышения продуктивности и биобезопасности продукции птицеводства / Ю. А. Лысенко, А. И. Петенко // VI Международ. научно-практическая конференция «Научно-техническое творчество молодежи – путь к обществу, основанному на знаниях»: М.: Изд-во МГСУ, 2014. – С. 440–444. 98. Лысенко, Ю. А. Эффективность использования пробиотической кормовой добавки «Промомикс С» в птицеводстве / Ю. А. Лысенко, А. В. Лунева // Матерiали IV мiнародноi науково-практичноi конференцii / Подiльський державний аграрно-технiчний университет. Камьянець- Подiльський. – 2014. – С. 112‒115. 99. Лысенко, Ю. А. Изучение влияния пробиотической кормовой добавки «Промомикс С» на продуктивность и биобезопасность продукции птицеводства / Ю. А. Лысенко, А. В. Лунева// материалы Международной научно-практических конференций Общетва Науки и Творчества. ‒ Казань («Science Time»), 2014. ‒ Вып. 5. ‒ С. 112‒122. 100. Лысенко, Ю. А. Влияние пробиотиков на мясную и яичную продуктивность перепелов / Ю. А. Лысенко // Труды КубГАУ. – 2012. ‒ № 5 (38). ‒ С. 145‒148. 101. Лысенко, Ю. А. Использование пробиотических кормовых добавок в перепеловодстве / Ю. А. Лысенко, А. И. Петенко // Материалы международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны». – СПб.: ФГБОУ ВПО «СПбГАВМ». – 2012. – С. 122‒125. 102. Лысенко, Ю. А. Разработка и использование новой пробиотической кормовой добавки на основе функциональной микрофлоры в рецептуре комбикормов для перепелов / Ю. А. Лысенко, А. А. Ширина // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного 151 аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Краснодар: КубГАУ, 2013. – № 07 (091). – IDA [article ID]: 0911307073. – Режим доступа: http://ej.kubagro.ru/2013/07/pdf/73.pdf, 1,188 у. п. л. 103. Малик, Н. И. Ветеринарные пробиотические препараты / Н. И. Малик, А. Н. Панин // Ветеринария. – 2001. – № 1. – С. 46–51. 104. Малик, Н. И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: автореф. дис...докт. биол. наук: 16.00.03 / Н. И. Малик; ВГНКИ. – М., 2002. – 53 с. 105. Малик, Н. И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: дис.... докт. биол. наук: 16.00.03 / Н. И. Малик. – 2002. – 402 с. 106. Мартынов, С. В. Факторы, лимитирующие использование сои в рационах животных и пути их устранения / С. В. Мартынов // Сельское хозяйство за рубежом. – 1984. – № 9. – С. 41–45. 107. Маслов, А. М. Использование аналогов кисломолочных продуктов на соевой основе для лечебного и диетического питания / А. М. Маслов, И. П. Рыкунова // Изв. Вузов. Пищевая технология. – 1990. – № 1. – С. 34–35. 108. Матюшевский, Л. А. Использование бентонитов в животноводстве и ветерианрии // Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных: материалы Междунар. совещания. ВНИВИПФиТ, 1997. – С. 259–260. 109. Мессина, М. Обыкновенная соя и ваше здоровье / М. Мессина, В. Мессина, К. Сотчел. – Майкоп, 1995. – 203 с. 110. Методические рекомендации. Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных. – Москва, 2004. – 90 с. 111. Молодцов, Г. П. Соевый белок в рационе птицы / Г. П. Молодцов // Земля Сибирская. – 1987. – № 12. – С. 44–45. 112. Монари, С. Справочник по использованию необезжиренной (полножирной) сои в кормлении животных, птиц и рыб / С. Монари, Д. Уайзмен; пер. с англ. // Америк. соевая ассоц. – Вена. – 1993. – 44 с. 152 113. Мосолов, В. В. Растительные белки – ингибиторы ферментов / В. В. Мосолов // Растител. белки и их биосинтез. – М., 1975. – С. 172–184. 114. Назаренко, С. В. Оценка качества соевых семян / С. В. Назаренко, В. С. Петибская, И. В. Шведов // Повышение продуктивности сои :сб. науч. тр. / ВНИИМК. – Краснодар, 2000. – С. 117–123. 115. Назаренко, С. В. Оценка качества соевых семян / С. В. Назаренко, В. С. Петибская, И. В. Шведов // Повышение продуктивности сои: сб. науч. тр. / ВНИИМК. – Краснодар, 2000. – С. 123–127. 116. Нестерин, М. Ф Химический состав пищевых продуктов / М. Ф. Нестерина, И. М. Скурихина // Москва: Пищ. пром-сть. – 1979. – С. 3–147. 117. Несчисляев, В. А. Унификация технологии получения и контроля препаратов для бактериотерапии с использованием сред из непищевого сырья: автореф. дис...канд. мед. наук / В. А. Несчисляев. – 1989. – 18 с. 118. Николаев, В. Н. Медико-биологические и гигиенические проблемы использования природных цеолитов / В. Н. Николаев // Природные цеолиты в социальной сфере и охране окружающей среды. – Новосибирск, 1990. – С. 414–420. 119. Новикова, Е. Н. Фармако-профилактика острых послеродовых эндометритов у коров: дисс. … канд. вет. наук / Е. Н. Новикова; КубГАУ. – Краснодар, 2013. – 145 с. 120. Новикова, М. В. Повышение биоресурсного потенциала ремонтных молодок и кур-несушек при использовании пробиотических препаратов Моноспорин и Бацелл: автореф. дис... к-та. биол. наук. – Екатеринбург, 2012. – 20 с. 121. Овчинников, А. А. И пробиотик, и сорбент / А. А. Овчинников // Био. – 2005. – № 6. – С. 10–12. 122. Определитель бактерий Берджи в 2 т. / под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Смита и др. – М.: Мир, 1997. – 746 с. 153 123. Папуниди, К. X. Патология обмена веществ и пути его коррекции / К. X. Папуниди, A. B. Иванов, М. Г. Зухрабов // Ветеринарный врач. – 2000. – № 1. – С. 62–65. 124. Папуниди, К. Х. Применение цеолитов для коррекции нарушения обмена веществ и содержания тяжелых металлов в организме животных / К. Х. Папуниди // Ветеринарный врач. – 2008. – № 1. – С. 13–16. 125. Папуниди, К. Х. Токсикологическая характеристика вермикулитовой руды / К. Х. Папуниди // Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность России: матер. международ. науч.-практ. конф., посвящ. 50-летию Федерального Центра токсикол. и радиац. Безопасности. – Казань, 2010. – С. 112–115. 126. Пат. 2497946, Российская Федерация, C12N1/20, A23C9/123. Способ выращивания ацидофильных кисломолочных микроорганизмов / Т. А. Коротченко, Н. Б. Астафьева, О. Д. Коротченко; заявитель и патентообладатель Коротченко Т. А., Астафьева Н. Б., Коротченко О. Д. – № 2012122985/10; заявл. 04.06.2012; опубл. 10.11.2013 бюл. № 31. – 8 с. 127. Патогенетические аспекты применения сорбентов в районах экологического неблагополучия / К. Х. Папуниди и др. // Учёные зап., КГАВМ. – Казань, 2005. – Т. 181. – С. 174–180. 128. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток / С. Дж. Перт. – М.: Мир, 1978. – 331 с. 129. Петенко, А. И. Влияние пробиотиков на перепелов / А. И. Петенко, Ю. А. Лысенко // Юбилейная научно-практическая конференция / ФГБОУ ВПО Алтайский государственный аграрный университет. Барнаул. – 2012. – С. 40‒44. 130. Петенко, А. И. Значение пробиотиков в птицеводстве / А. И. Петенко, Ю. А. Лысенко // Матерiали мiнародноi науково-практичноi конференцii / Подiльський державний аграрно-технiчний университет. Камьянець-Подiльський. – 2011. – С. 101‒103. 154 131. Петенко, А. И. Кормовые добавки в рационах перепелов / А. И. Петенко, Ю. А. Лысенко // Птицеводство. – 2012. ‒ № 9. ‒ С. 36‒38. 132. Петенко, А. И. Оценка острой токсичности и раздражающего действия пробиотической кормовой добавки «Промомикс С» / А. И. Петенко, А. А. Ширина, Ю. А. Лысенко и др. // Ветеринария Кубани. – 2013. – № 4. – С. 12‒14. 133. Петенко, А. И. Особенность формирования микробиоценозов ЖКТ и эффективность обменных процессов у перепелов при использовании пробиотических кормовых добавок / А. И. Петенко, Ю. А. Лысенко // Ветеринария Кубани. – 2012. – № 4. – С. 24‒26. 134. Петенко, А. И. Перспективы использования пробиотиков на основе молочнокислых и пропионовокислых микроорганизмов в перепеловодстве / А. И. Петенко, Ю. А. Лысенко, И. А. Петенко // Труды Кубанского государственного аграрного университета. – 2013. – № 4 (43). – С. 67–71. 135. Петункин, Н. И. Цеолит в сельском хозяйстве / Н. И. Петункин, А. В. Махалов, В. П. Ворошенко // Методические рекомендации. – Кемерово, 1990. – 27 с. 136. Повышение биологической ценности семян сои пищевого назначения / В. С. Петибская [и др.] // Изв. вузов. Пищевая технология. – 1997. – № 2–3. – С. 19–22. 137. Повышение эффективности профилактики ньюкаслсской болезни птиц путем комплексного применения вакцины и пробиотика / Л. А. Ковальская [и др.] // Пробиот. и пробиот. продукты в профилактике и лечении наиболее распростран. забол. человека: тез. Всерос. конф. – М., 1999. – С. 62–63. 138. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов: Ветеринарное законодательство. – Т. 4. – М.: Агропромиздат, 1988. –38 с. 139. Рябцева, С. А. Сохранение жизнеспособности заквасочной микрофлоры / С. А. Рябцева // Молочная промышленность. – 2010. – № 1. – С. 22–23. 155 140. Самсонов, М. А. Концепция сбалансированного питания и ее значение в изучении механизмов лечебного действия пищи / М. А. Самсонов // Вопросы питания. – 2001. – № 5. – С. 3–9. 141. Семененко, М. П. Влияние природных алюмосиликатов на организм птицы / М. П. Семененко, В. А. Антипов // Птицеводство. – 2006 г. – № 12. – С. 25–26. 142. Семененко, М. П. Фармакология и применение бентонитов в ветеринарии: автореф. дис. ... докт. вет. наук: 16.00.04 / М. П. Семененко; КубГАУ. – Краснодар, 2008. – 21 с. 143. Сидоров, М. А. Нормальная микрофлора животных и ее коррекция пробиотиками / М. А. Сидоров, В. В. Субботин // Ветеринария. – 2000. – № 11. – С. 17–22. 144. Скворцова, Л. Н. Научно-практическое обоснование использования новых кормов и кормовых добавок для повышения биологического статуса мясной птицы: дисс…докт. биол. наук: 06.02.10; 06.02.08 / Л. Н. Скворцова. – 2010. – 315 с. 145. Слабоспицкая, А. Т. Гиалуронидазная активность споровых аэробных бактерий, выделенных из различных экологических источников / А. Т. Слабоспицкая // Микробиол. Журнал. – 1985. – Т. 47. – № 4. – С. 71–74. 146. Смирнова, В. Д. Отходы производства концентрированных белковых продуктов из сои как сырье для получения кормовых добавок: дис… канд. тех. наук: 03.01.06 / В. Д. Смирнова. 2012. – 202 с. 147. Степаненко, П. П. Микробиология молока и молочных продуктов: учебник для студентов вузов / П. П. Степаненко. – Сергиев Посад, 1999. – 412 с. 148. Теплякова, Т. Е. Соя / Т. Е. Теплякова // В сб.: Теоретические основы селекции. Том. III. Генофонд и селекция зерновых бобовых культур (люпин, вика, соя, фасоль) / под ред.: Б. С. Курловича, С. И. Репьева. – С-Пб., 1995. – С. 196–217. 156 149. Тимошко, М. А. Исследование взаимодействия бифидобактерий, молочнокислых бактерий и эшерихий в кишечнике с использованием гнотобиотических цыплят: дис… канд. биол. наук /М. А. Тимошко. – 1973. –215 с. 150. Толстогузов, В. Б. Новые формы белковой пищи / В. Б. Толстогузов. – М.: Агропромиздат, 1987. – 303 с. 151. Точилина, А. Г. Биохимическая и молекулярно-генетическая идентификация бактерий рода Lactobacillus: автореф. дис... канд. биол. наук: 03.00.04, 03.00.07 / А. Г. Точилина. – 2009. – 25 с. 152. Тремасов, М. Я. О поблемах и перспективах ветеринарной токсикологии / М. Я. Тремасов, К. Х. Папуниди, В. И. Степанов // Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность России: материалы Международ. науч.-практ. конф., посвященной 50-летию Федерального Центра токсикол. и радиац. безопасности. Казань, 2010. – С. 153–157. 153. Удельная поверхность минеральных энтеросорбентов / Р. У. Бикташев и др. // Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность России: материалы Международ. науч.-практ. конф., посвященной 50-летию Федерального Центра токсикол. и радиац. безопасности. Казань, 2010. – С. 309–311. 154. Устюжанин, А. П. Стратегия развития соевого комплекса России. Программные цели с прогнозом до 2020 г. / А. П. Устюжанин // Материалы 3-й Всероссийской интернет конференции «Соя, как залог здоровья нации и продовольственной безопасности Российской Федерации». 2011. [Электронный pecypc. – URL: http://www.infotechno.ru/ros-soya/dok_ustuzhanin.php. 155. Филонов, А. Е. Стабильность плазмид и конкуренция плазмидсодержащих и бесплазмидных штаммов в условиях непрерывного культивирования / А. Е. Филонов, А. М. Воронин // Антибиотики и химиотерапия. – 1990. – № 5. – С. 46–50. 156. Хоулт Дж. Краткий определитель бактерий Берги / под ред. Дж. Хоулт, Н. Криг. – М.: Мир. – 1980. – 495 с. 157 157. Чайка, И. К. Влияние технологических способов обработки на содержание ингибиторов трипсина в семенах сои / И. К. Чайка, Б. Н. Егоров, А. П. Левицкий // Науч. тр. / ВСГИ. – Воронеж. – 1982. – С. 73–76. 158. Черников, М. П. Биологически активные белки и пептиды пищи / М. П. Черников // Журн. Всесоюз. хим. о–ва. – 1978. – № 4. – С. 379–389. 159. Шимкус, А. Ю. Применение пробиотиков при выращивании телят / А. Ю. Шимкус // Актуал. вопросы зоотехн. науки и практики как основа улучшен, продуктив. качеств и здоровья с.-х. животных: Сб. науч.тр. – М.: Колос. – 2001. – С. 81–83. 160. Ширина, А. А. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса птицы после использования пробиотика «Промомикс С» / А. А. Ширина, А. И. Петенко, Ю. А. Лысенко и др. // Материалы международной научной конференции «Обеспечение ветеринарного благополучия в животноводстве и птицеводстве». / ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии. – Омск. – 2013. – С. 126–129. 161. Ширина, А. А. Фармакологическое обоснование применения пробиотика «Промомикс С» / А. А. Ширина, А. И. Петенко, Ю. А. Лысенко // Птицеводство. – 2013. ‒ № 9. ‒ С. 35‒39. 162. Шкуратова, И. А. Влияние вермикулита на физиологические показатели цыплят-бройлеров / И. А.Шкуратова, А. А. Гаспарян, Л. Г. Козлова // Здоровье, разведение и защита мелких домашних животных. Уфа, 2001. – С. 128–129. 163. Якимов, А. В. Способы скармливания соевой муки цыплятамбройлерам / А. В. Якимов, Ф. С. Гибадуллина, М. К. Гайнуллина // тез. докл. науч.-практ. конф. – Казань, 1996. – С. 243–244. 164. Якимов, А. В Научное обоснование и перспективы использования цеолитосодержащей добавки в животноводстве: автореф. дис. ... докт. с/х наук: 06.02.02 / А. В. Якимов. Саранск, 1998. – 43 с. 165. Яковлев, Е. Н. О применении местного агрохимического сырья на Дальнем Востоке. Бурые угли и их производные, природные сорбенты (цео158 литы, диатомиты). / Е. Н. Яковлев, Р. Б. Кондратьев // Вестн.РАСХН, 1996. – № 6. – С. 54–56. 166. Aletor, V. A. Feeding differently processed soy bean. Part 1. Effect on performance, protein utilization, relative organ weights, carcass traits and economics of producing broiler-chickens / V. A. Aletor, F. I. Olonimoyo // Nahrung. – 1992. – V. 36, № 4. – P. 357–363. 167. Bengmark, S. Colonic food: pre- and probiotics / S. Bengmark // Am J Gastroenterol. – 2000. – V. 95. – № 1. – P. 5–7. 168. Bergere, J. I. La production massive de cellules de Streptocoques lactiques / J. I. Bergere, J. Hermier // Lait. – 1968. – V. 48. – P. 13–30. 169. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology / Eds Krieg N. R., Holt J. G. et all // Baltimore: Williams and Wilkins. – 1984. – P. 8–11. 170. Biels, M. Effect of yeast culture supplemention of exercising horses /M. Biels. – 1990. – P. 67. 171. Booth, A. N. Effect of raw soybean meal and amino acids on pancreatic hypertrophy in rats / A. N. Booth, D. J. Sobbins, W. E. Kibelin // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. – 1960. – V. 104. – Р. 681–683. 172. Close, W. Producing pigs without antibiotic growth promoters: Implications and Alternatives / W. Close, J. A. Taylor-Picrard, A. Kocher // Alltech Inc. – 2005. – P. 17–19. 173. Collins, E. B. Growth of Bifidobacteria in milk and preparation of Bifidobacterium infantis for a dietary adjunkt / E. B. Collins, B. J. Hall // J. Dairy Sci. – 1984. – V. 67, № 7. – P. 1376–1380. 174. Cоx, W. I. Examining the immunologic and hematopoietic properties of an immunostimulant //Veter. med. (Edwardsville). – 1988. – Vol. 83, № 4. – Р. 424–428. 175. Deguchi, Y. Comparative studies on synthesis of water–soluble vitamins among human species of bifidobacteria / Y. Deguchi, T. Morishita, M. Mutai // Agric. Biol. Chem. – 1985. – № 49(l). – P. 13–19. 159 176. Dunny, G. M. Cell-cell communication in gram-positive bacteria / G. M. Dunny, B. A. Leonard // Ann. Rev Microbiol. – 1997. – № 51. – P. 527–564. 177. Ewans, D. K. Jnactivated Propionibacterium acnes asddjunct to conventional therapy in the treatment of eguine respiratory dislases / D.K. Ewans, J.B. Rollins, G.K. Huff et al. // Eguine practice. – 1988. – Vol. 10. – № 6. – Р. 17–21. 178. Ewe, K. Effect of lactose, lactulose and bysacodyl on gastrointestinal transit studied by metal detector / K. Ewe, B. Ueberschaer, A. Press et al. // Aliment Pharmacol ther. – 1995. – V. 9. – № 1. – P. 69–73. 179. Farcas-Himsley, H. Sensitivity bactericin of murine leukaemias with varying oncogenic potency / H. Farcas–Himsley // Microbios. Lett. – 1980. – V. 15. – P. 89–96. 180. Fuller, R. Probiotics and prebiotics: microtlora management for improved gut health / R. Fuller, G. Gibson // Clin Microbiol Infect. – 1998. – № 4. – P. 477–480. 181. Gauhe, A. P. Bifidus factor. Preparations obtained from human milk / A. P. Gauhe, P. A. Gyorgy, J. R. E. Hoover et al. // Arch Biochem. – 1954. – № 48. – P. 214–224. 182. Gibson, G. R. Probiotics: Jntestinal inoculants for production animals / G. R. Gibson, M. B. Robertroid // Veter. Med. (Edwwardsville). – 1995. – Vol. 83. – № 8. – Р. 806–810. 183. Gilliland, S. E. Frozen concentrated cultures of lactic starter bacteria / S. E. Gilliland, M. L. Speck // J. Milk and Food Technol. – 1974. – V. 37, № 2. – P. 107–111. 184. Goodfellow, M. Introduction to chemosystematics / M. Goodfellow, D. Minnikin // Chemical Methods in Bacterial Systematics. – London: Acad. Press. – 1985. – P. 1–16. 185. Goodfellow, M. Handbook of New Bacterial Systematics / M. Goodfellow, A. O'Donnell // L.: Acad Press Ltd. – 1993. – P. 3–54. 186. Gyorgy, P. A. Hitherto unrecognized biochemical differences between human milk and cow's milk /P.A. Gyorgy //Pediatrics. – 1953. – Mb 11. – P. 98–108. 160 187. Hoffmann, K. Untersuchun-gen uber die Wirkungsweise der Lactulose / K. Hoffmann, D.A. Mossel, W. Korus, J. van de Camer // Klin Woshenschr. – 1964. – № 42. – P. 126–130. 188. Holzapfel, W. H. Taxonomy and important features of probiotic microorganisms in food and nutrition / W. H. Holzapfel, P. Haberer, R. Geisen // Am J. Clin Nutr. – 2001. – Vol. 73. – P. 365–373. 189. Honma, N. On effect of lactic acid bacteria / N. Honma, K. Ohtani, H. Kikuchi // New Medicines and Clinics. Part II. Clinical effects. – 1987. – № 36 (1). –75 p. 190. Howard, B. J. Transfer of radiocaesium to ruminants in natural and semi-natural ecosystems and appropriate countermeasures / B. J. Howard, N. A. Beresford, K. Hove // Health Phys. 1991. – V. 61 – P. 715–725. 191. Howell, R. W. Genetic and other biologicfl characteristics / R. W. Howell, B. E. Caldwell // Soybeans: chemistry and technology. – Westport, Connecticut, 1972. – Р. 27–60. 192. Hymowitz, T. Soybean proteinase inhibitors and human proteolitic enzymes / T. Hymowitz, R. F. Steiner, J. W. Erdman // Agron. J. V. – 1972. – V. 64. – № 5. – Р. 234–237. 193. Jones, B. E. Managing a radioactive fall-out: the shedish experience afner Chernobyl / B. E. Jones // Brit. Vet. J. 1989. – 145. – № 3. – P. 220–225. 194. Jones, B. E. Radicesium uptake in reindeer on natural pasture / B. E. Jones, O. Eriksson, M. Nordkvist // Sci. Total Environ. 1989. – V. 85 – P. 207–212. 195. Jushckiewicz, T. Experimental pasteurella multocida infection in chickens exposed to cold. Biochemical and bacteriological investigations / T. Jushckiewicz // Pol. Arch. Vet. – 1997. –Vol. 5. – P. 180. 196. Keen, A. R. Growth studies on the lactic streptococci. III Observations on continuins growth behaviour in reconstituted skim milk / A. R. Keen // J. Dairy Res. – 1972. – V. 39. – P. 151–159. 161 197. Klein, G. Taxonomy and physiology of probiotic lactic acid bacteria / G. Klein, A. Pack, C. Bonaparte // Int. J. Food Microbiol. – 1988. – V. 41. – P. 103–125. 198. Kociova, Z. Ucinnost probiotica thepax vo vykrme brojlerovych kurciat / Z. Kociova, S. Horovsky, T. Wertheimer // Hydinarstvo. – 1990. – T. 25. – S. 37–46. 199. Liener, I. E. Anti-nutritional factors as determinants of soybean quality / I. E. Liener // World soybean research conference II: proceedings. – Westview Colorado: Press Boulder, 1980. – P. 703–712. 200. Liener, I. E. The effect of suplemental methionine on the nutritive value of diets containing concentrates of the soybean trypsin inhibitor / I. E. Liener, H. J. Deuel, H. J. Fevold // J. Nutr. – 1949. – V. 39. – P. 325–339. 201. Lisenko, U. Use of probiotic mineral feed mixture to increase productivity and poultry product biosafety / U. Lisenko // DOAJ ‒ Lund University: Koncept : Scientific and Methodological e-magazine. ‒ Lund, №4 (Collected works, Best Article), 2014. ‒ URL: http://www.doaj.net/1941/ 202. Lloyd, G. An experimental continuous culture unit for the production of frozen concentrated chees starters / G. Lloyd, E. Pont // J.Dairy Res. – 1973. – V. 40, № 2. – P. 149–155. 203. Lyons, T. P., Fallоn R.J. // Appl. Environ. Microbiol. – 1992. – Vol. 49. – P. 113–117. 204. Lysenko, Yu. A. The influence of probiotics on meat and egg production of quails / Yu. A. Lysenko // Kybernetik@. – 2013. – № 12. – P. 57‒62. 205. Mallick, B. B. Nonspecifis immunostimulation against viruses /B.B. Mallick, S. Kishore, S.K. Das, A. Garg //Comp. Jmmun. Microbiol. Jnfect. Dis. – 1995. – Vol. 8. – № 1. – Р. 53–63. 206. Mattick, L. R. Identification of a volatile component in soybeans that contributes to the raw bean flavour / L. R. Mattick, D. B. Hand // J. Agric. Fd. Chem. – 1969. – V. 17. – P. 15–17. 207. Mitic, S. Uniticai liofilizacije na transformaciju i digebistibinost aminoxiseli na simbiozebacterila Streptococcus thermophilus u Lactobacillus bul162 garucus / S. Mitic, M. Cuperlovic // Hrana i iahrana. – 1989. – V. 30. – № 1. – P. 35–36. 208. Mitsuoka, T. Effect of FOS on Intestinal Microflora / T. Mitsuoka, H. Hidaka, T. Eida // Die Nahrung. – 1987. – № 31. – P. 427–436. 209. Mitsuoka, T. Recent trends in Research on intestinal flora / T. Mitsuoka // Вifidobact. and Microflora. – 1982. – V. 1. – Mb 1. – P. 3–24. 210. Mumpton, F. The application of natural zeolites in animal scinece and agriculture / F. Mumpton, P. Fishman // J. оf animal Sei., 1977. – V. 15. – № 5. – P. 1180–1203. 211. Mündt, J. O. Lactic acid streptococci. Bergey's manual of systematic bacteriology, vol. 2: The Williams & Wilkins o., Baltimore, Md. – 1986. 212. Nisbet, E. Y. RNA hydrothermae systems, zeoelites and the origin of life / E. Y. Nisbet // Episodes. – 1986. – V. 9 – № 2. – P. 83–90. 213. Nyman, M. Degradation of water-soluble fibre polysaccharides in carrots: after different types of processing /M. Nyman, T. Nylander, N. G. Asp // Food Chem. – 1993. – № 47. – P. 169–176. 214. Oggioni, M. R. Bacillus spores for vaccine delivery /M.R. Oggioni, A. Ciabattini, A.M. Cuppone, G. Pozzi //Vaccine. – 2003. – Vol. 21. – Suppl. 2. – P. 96–101. 215. Orla-Jensen, J. Hauptlinien des naturlichen Bacterien-sustems / J. OrlaJensen // Zbl. Bact. Paras. Infect. Hyg. – 1960. – Bd. 22. – Р. 305–346. 216. Ouwehend, A. C. Probiotics: an overview of beneficial effects / A. C. Ouwehend, S. Salminen, E. Isolauri // J. Microbiol. – 2003. – Vol. 41. – № 2. – P. 63–72. 217. Pettersson, H. Growth of a mixed species lactis starter in a continuous pH-stat fermenter / H. Pettersson // Appl. Microbiol. – 1975. – V. 29, № 4. – P. 437–443. 218. Rašic, G. L. Bifidobacteria and their role: microbiological, nutrional – physiological, medical and technological aspects and bibliography / G. L. Rašic, G. A. Kurmann // Basel – Boston – Stuttgart; Birkhauser Verlad, 1983. – 295 p. 163 219. Reddy, M. S. Associative growth studies in tree – strein mixtures of lactic Streptococci / M. S. Reddy, E. R. Vedamuthu, C. J. Washam // Appl. Microbiol. – 1972. – V. 24, № 6. – P. 953–956. 220. Reddy, A. R. M. Factors contributing to immunosuppession in chicken / A. R. M. Reddy, P. R. Redde // Poultry Adviser. – 1988. – № 46. – P. 8–11. 221. Rhee, K. C. Annual Progress Report of Food Protein Research and Development Center / K. C. Rhee, Y. R. Choi // Texas A&M University. – College Station. – 1981. – T. XX. – P. 203–233. 222. Roberfroid, M. B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods? / I. B. Roberfroid // Am J Clin Nutr. – 2000. – V. 71. – № 6. – P. 1682–1687. 223. Rowland, I. R. The effects of transgalactosylated oligosaccharides on gut flora metabolism in rats associated with a human faecal microflora / I. R. Rowland, J. Tanaka // AppI. Bacteriol. – 1993. – № 74. – P. 67–74. 224. Rymaszewski, J. Application of ion exchangers in removal of lactic acid from medium during cultivation of milk bacteria / J. Rymaszewski, K. Kornacki, A. Kramkowska // Acta aliment polon. – 1975. – V. 1, № 1. – P. 21–32. 225. Santurio J. Effect of sodium bentonite on the performance and blood variables of broiler chickens intoxicated with aflatoxins / J. Santurio, C. Mallmann, A. Rosa // Brit. Poultry Sc. 1999. – Vol. 1. – № 1. – P. 115–119. 226. Shahani, K. M. Health and Disease / K.M. Shahani, B.A. Friend // J. Аppl. Nutr. – 1984. – № 36. – P. 125–152. 227. Shuler, R. Die Microorganismen der Bifidusgruppe / R. Shuler, A. Ruppert, F. Miller // Milchwissenschaft. – 1986. – Bd. 23, № 6. – S. 356–360. 228. Skeggs, H. The nutritional requirements of L. bifidus and L. leichmanii / H. Skeggs, A. Chalotte, H. Driscoll // J. Bacteriol. – 1985. – V. 65, № 6. – P. 733–737. 229. Stackerbrandt, E. Molecular taxonomy and phylogenetic position of lactic acid bacteria / E. Stackerbrandt, M. Tauber // Biochimie. – 1988. – Vol. 70. – P. 317–324. 164 230. Stadhouders, J. Prevervation of starters and mass production of starter bacteria / J. Stadhouders, L. A. Jansen, G. Hup // Neth.Milk Dairy J. – 1969. – V. 23. – P. 182–183. 231. Stephen, A. M. Mechanism of action of dietary fiber in the human colon / А. M. Stephen, J. H. Cummins // Nature. – 1980. – № 284. – P. 283–284. 232. Stiles, M. E. Lactic acid bacteria of foods and their current taxonomy / M. E. Stiles, W. H. Holzapfel // Int. J. Food Microbiol. – 1997. – Vol. 36(1). – P. 1–6. 233. Stob, M. Toxicants Occurring Naturally in Foods / M. Stob // Nat. Acad. Sci. – 1973. – P. 550–557. 234. Tanaka, R. Effect of administration TOS and B. breve 4006 on the human fecal flora / R. Tanaka, H. Takayama, M. Morotomi (et al.) //Bifidobacteria microflora. – 1983. – № 2. – P. 17–24. 235. Van, Loo. Functional food properties of non-digestible oligosaccharides: a consensus report from the HVDO project (DGXII AIRII-CT94-1095) /Van Loo, J. A Cummings et al. // Br J Nutr. – 1999. – V. 81. – № 2. – P. 121–132. 236. Vanbelle, M. Probiotics in animal nutrition: a review / M. Vanbelle, E. Teller, M. Focant //Arch-Tierernahr. – 1990. – Vol. 40. – № 7. – Р. 543–567. 237. Vandamme, P. Polyphasic taxonomy, a consensus approach to bacterial systematics / P. Vandamme, B. Pot, M. Gilis // Microbiol. Rev. – 1996. – V. 60. – P. 407–438. 238. Vzxgula L. Sorpens vlastnosti prironenu zediti (klinoptilolitu) v biologickom materiali in vitro / L. Vzxgula, H. Seidel // Vet. Med. (Praga). – 1989. – 34:9. – P. 537–544. 239. Woese C. R. Bacterial evolution // Microbiol. Rev. – 1987. – V. 51. – P. 221–271. 165 ПРИЛОЖЕНИЯ 166
