особенности эксПрессии тканевого фактора моноцитами

20. Тропин В.В. Трансплантация надкостницы в хирургии туберкулеза позвоночника: Автореф. дис. ... канд.
мед. наук. Л., 1986. 23 с.
21. Ульрих Э.В., Мушкин А.Ю. // Вертебрология в
терминах, цифрах, рисунках. СПб., 2004. 208 с.
22. Чаклин В.Д. // Труды Свердловского НИИ травматол., ортопедии. Свердловск, 1933. С. 113.
23. Шанц А. Практ. ортопедия. М.: Гос. мед. изд-во,
1933. 564 с.
24. Senaran H., Atilla P., Kaymaz F. et. al. // Spin.2004.
Vol. 29, №15. P. 1618-1623.
25. Stauffer R.N., Coventry M.B. // J.Bone Joint Surg.
1972. Vol. 54-A, P. 756.
26. Kuyala S., Ryhanen J., Danilov A. et. al. // Biomaterial.
2003. Vol. 24, №25. P. 4691-4697.
УДК 612.112.95 : 616.5 - 001.19
К.Г. Шаповалов, В.А. Иванов, М.И. Михайличенко, Е.А. Томина, Ю.А. Витковский
Особенности экспрессии тканевого фактора
моноцитами периферической крови
при холодовом повреждении
Читинская государственная медицинская академия, г. Чита
Резюме
При местных поражениях холодом регистрируются серьезные сдвиги свертывающей системы крови и
фибринолиза, которые являются важнейшими звеньями
патогенеза отморожений [2, 4, 8]. Среди причин таких
отклонений особое место отводится морфофункциональным изменениям эндотелиальных клеток сосудов. В
норме эндотелий активно участвует в поддержании равновесия свертывающей и противосвертыващей систем
крови, продуцируя антикоагулянты и фибринолитики
[6]. При различных патологических воздействиях (физических, химических, биологических) на поверхности
эндотелиальных клеток и некоторых других клеток индуцируется экспрессия тканевого фактора, в результате
чего запускается «внешний» путь свертывания крови
[3, 5]. Тканевой фактор является трансмембранным гликопротеином и одновременно поверхностным клеточным
рецептором, кофактором плазменного фактора свертывания VII. Появление его в большом количестве в циркулирующей крови, в основном на поверхности моноцитов,
связано с большим риском развития тромбозов и тромбоэмболии [5]. Нами не обнаружено работ, посвященных
исследованию экспрессии тканевого фактора при отморожениях.
Цель работы — установить экспрессию тканевого
фактора, содержание провоспалительных цитокинов и
количество десквамированных эндотелиальных клеток у
больных с местной холодовой травмой.
В работе впервые проведено исследование экспрессии
тканевого фактора моноцитами периферической крови
у больных с местной холодовой травмой. Обследовано 35
чел. с отморожениями конечностей II-IV ст. Установлено,
что экспрессия тканевого фактора моноцитами периферической крови пациентов возрастает в 1,2-1,9 раза. Данные
изменения сопровождаются увеличением числа десквамированных клеток эндотелия и уровня провоспалительных
цитокинов.
Ключевые слова: тканевой фактор, кровь, холодовая
травма.
K.G. Shapovalov, V.A. Ivanov, M.I. Mikhajlichenko,
E.A. Tomina, Yu.A. Vitkovsky
Peculiarities of expression of tissue
factor by monocytes in peripheric
blood during frostbites
Chita State Medical Academy, Chita
Summary
The aim was to study the expression of tissue factor by
monocytes of peripheral blood in patients with local frostbites.
35 patients with local frostbites of extremities II-IV degrees
were examined. It was established, that expression of tissue factor by monocytes of peripheral blood increased in 1,2-1,9 times.
These changes were accompanied by increase of endothelial
cells and pro inflammatory cytokines levels in blood.
Key words: tissue factor, blood, frostbite.
Материалы и методы
В работе с больными соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской декларацией Всемирной
медицинской ассоциации (1964). Исследование проведено
42
проведен с помощью программы Statistica 6.0 для Windows
с применением критерия t-критерия Стьюдента.
Таблица 1
Экспрессия тканевого фактора и количество
десквамированных эндотелиальных клеток в крови
больных с местной холодовой травмой (М±m)
Контроль,
n=15
1 группа,
n=15
2 группа,
n=20
Экспрессия тканевого
фактора, %
34,1±2,4
66,0±5,1
р<0,001
41,8±2,7
р<0,05
р1<0,001
Содержание десквамированных клеток эндотелия,
×104/л
2,2±0,2
11,4±2,1
р<0,001
4,2±0,7
р<0,05
р1<0,001
Показатель
Результаты и обсуждение
Установлено, что при инкубации цельной крови больных 1 группы с пирогеналом в 1,9 раза возрастает экспрессия моноцитами тканевого фактора (р<0,001) (табл.
1). Такие сдвиги регистрируются на фоне увеличения в 5
раз числа циркулирующих в общем кровотоке десквамированных клеток эндотелия (р<0,001). При этом в крови
пострадавших с местной холодовой травмой возрастает
уровень провоспалительных цитокинов: TNFa — в 5 раз
(р<0,01) и IL-1b — более чем в 10 раз (р<0,001) (табл. 2).
Непосредственное воздействие низких температур на
стенку сосудов может приводить как к клеточному некрозу, так и к фазовым переходам фосфолипидов клеточных
мембран из жидкокристаллического состояния в кристаллическое (теория непосредственного действия низких
температур на ткани) [2]. В результате обнажается субэндотелиальный матрикс и возрастает синтез тканевого
фактора эндотелиоцитами и моноцитами. Увеличение
его экспрессии на фоне резкого повышения числа десквамированных клеток эндотелия у пациентов в ранние
сроки после травмы подтверждает такое рассуждение.
Восстановление температуры в тканях, подвергавшихся действию холода, происходит неравномерно, что
неизбежно сопровождается гипоксией, активацией свободнорадикального перекисного окисления липидов, дегрануляцией тромбоцитов. Кроме того, появление очага
ноцицептивной афферентации приводит к увеличению
синтеза и секреции катехоламинов и прочих стресс-гормонов, на фоне сосудистого спазма изменяется напряжение
сдвига на стенку артерий и артериол (нервно-рефлекторная, нейрогуморальная теории повреждения тканей при
отморожениях) [4]. Все указанные процессы сопровождаются изменениями гемостаза и экспрессией тканевого
фактора [5, 10]. Травма любого генеза, в том числе холодовая, неизбежно приводит к развитию воспалительной
реакции. Известно, что провоспалительные цитокины in
vitro способствуют экспрессии моноцитами периферической крови тканевого фактора [1, 3]. Результаты обследования пострадавших с отморожениями подтверждают
эти данные.
У пациентов с отморожениями 2 группы экспрессия
тканевого фактора в крови при внесении бактериального липополисахарида возрастала в 1,2 раза относительно
контроля (р<0,001) и снижалась по сравнению с 1 клинической группой в 1,6 раза (р1<0,001) (табл. 1). При
этом количество десквамированных эндотелиоцитов
сокращалось относительно 1 группы больных в 2,7 раза
(р1<0,001), однако превышало значения здоровых людей
в 1,9 раза (р<0,05) (табл. 1). Приведенные изменения регистрировались на фоне «затухания» провоспалительной
реакции - уровень как TNFa, так и IL-1b снижался соответственно в 2,1-3,4 раза относительно такового у пациентов в ранние сроки с момента травмы (p1<0,05), но в
2,5-3 раза превышал значения группы контроля (р<0,05)
(табл. 2). Очевидно, что в более поздние сроки с момента
холодового поражения запускаются механизмы компенсации, стабилизируется и восстанавливается структура
эндотелия сосудов. При этом происходит отграничение
зоны повреждения, формирование «грануляционного
Примечания. р — достоверность показателей относительно контроля; р1 — достоверность показателей относительно 1 группы больных.
Таблица 2
Уровень цитокинов в крови больных с отморожениями (М±m)
Контроль,
n=15
1 группа,
n=15
2 группа,
n=20
TNFa
3,1±1,7
16,2±3,5; р<0,01
7,9±1,5
р<0,05; р1<0,05
IL-1b
6±2
64±15; р<0,001
19±5
р<0,05; р1<0,01
Цитокины, пкг/мл
Примечания. р — достоверность показателей относительно контроля; р1 — достоверность показателей относительно 1 группы больных.
у 35 больных мужского пола с отморожениями конечностей II-IV ст. Все пациенты находились на стационарном
лечении в Областном центре термической травмы на базе городской клинической больницы №1 г. Читы в 20072008 гг. Объектом исследования являлась кровь больных.
Возраст пострадавших с холодовой травмой — от 20 до
40 лет, средний возраст — 32 г. Больные распределены на
2 группы в зависимости от сроков с момента получения
травмы. 1 клиническую группу составили 15 больных,
обследованных в течение 10 сут после отморожения, во 2
группу вошли 20 пациентов, кровь которых исследовалась
в более поздние сроки. Контрольные данные получены
при обследовании 15 здоровых добровольцев.
Исследование экспрессии тканевого фактора моноцитами осуществляли по методу, предложенному R.A.
Santucci et al. (2000), в нашей модификации [3]. Забор
крови в количестве 4,5 мл производился в две пробирки,
содержащие 0,5 мл 3,8% раствора цитрата натрия. В одну
из пробирок вносили пирогенал в дозе 10 мкг/мл крови,
во вторую — аналогичное количество физиологического раствора. Пробирки инкубировали в термостате при
температуре 37°С в течение 4 ч. После инкубации 0,1 мл
цельной цитратной крови вносили в полистироловую кювету, добавляли 0,1 мл забуференного физиологического
раствора (рН 7,4) и запускали реакцию добавлением 0,2
мл 1/40 М раствора хлорида кальция. Время свертывания
крови регистрировали с помощью коагулометра фирмы
«Behring» (Германия). Об экспрессии тканевого фактора
судили по степени сокращения времени коагуляции, выражаемой в процентах по формуле: (T1 - Т2)/ Т1×100%, где
T1 — время свертывания нестимулированной крови; Т2
— время свертывания стимулированной крови. Десквамированные клетки эндотелия в крови подсчитывались
методом Hladovec [6]. Определение концентрации TNFa и
IL-1b выполняли методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием наборов реагентов фирмы
«Вектор-Бест» (г. Новосибирск). Статистический анализ
43
вала», отторжение нежизнеспособных тканей [7]. Данные процессы сопровождаются уменьшением уровня
провоспалительных цитокинов, числа циркулирующих
эндотелиоцитов, как следствие, снижается экспрессия
тканевого фактора.
Возрастание концентрации соединений, приводящих
к активации тканевого фактора, и циркуляция последнего в общем кровотоке неизбежно сопровождаются повышением уровня атромбогенных факторов эндотелия
и других клеток, таких как ингибитор тканевого пути
свертывания, тромбомодулин, протеогликаны и пр.[6,
9, 11]. Данные обстоятельства, вероятно, препятствуют
экспрессии тканевого фактора моноцитами in vivo, поэтому при действии пирогенала in vitro такая реакция активно проявляется. Чрезмерное возрастание экспрессии
тканевого фактора эндотелием и моноцитами при отморожениях может иметь фатальные последствия в виде
тромбозов, тромбоэмболии, «истощения» свертывающей
и фибринолитической систем крови, как следствие, ведет
к расширению зоны некроза и неблагоприятному течению раневого процесса [5].
Выводы
1. У больных с местной холодовой травмой в 1,2-1,9
раза возрастает экспрессия тканевого фактора моноцитами периферической крови.
2. Повышение экспрессии тканевого фактора при отморожениях сопряжено с увеличением числа десквамированных клеток эндотелия и уровня провоспалительных
цитокинов.
Л и т е р а т у р а
1. Витковский Ю.А. Роль цитокинов в регуляции системы гемостаза: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. Чита,
1997. 40 с.
2. Вихриев Б.С., Кичемасов С.Х., Скворцов Ю.Р. Местные поражения холодом. Л.: Медицина, 1991. 192 с.
3. Клименко О.В. Влияние оксида азота на иммунитет и гемостаз в норме и при некоторых патологических
состояниях: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. Чита, 2002.
19 с.
4. Котельников В.П. Отморожения. М.: Медицина,
1988. 256 с.
5. Кузник Б.И. Физиология и патология системы крови. Чита, 2002. 320 с.
6. Петрищев Н.Н. Дисфункция эндотелия. СПб., 2003.
184 с.
7. Сизоненко В.А. // III Конф. по проблеме «Холодовая травма». СПб., 2002. С. 202-208.
8. Шаповалов К.Г., Михайличенко М.И., Иванов В.А.
и др. // Дальнев. мед. журнал. 2007. №4. С. 33-34.
9. Fedi S., Gori A. M., Falciani M. et al. // Thrombosis
and Haemostasis. 1999. Vol. 81, №3. P. 874-878.
10. Kuznik В., Tsybikov N., Vitkovsky Yu. // Thrombosis
and Haemostasis / Suppl. Abstracts of XVI th Congress of
the International Society on Thrombosis and Haemostasis.
Florence, Italy, 1997. P. 111.
11. Nemerson Ya., Colman R.W., Hirsh J. et al. //
Hemostasis and Thrombosis. Eds. J.B. Lippincott Company,
Philadelphia, USA. 3rd Edition. 1993. P. 83-93.