Иммунологические методы специфической аллергодиагностики

Иммунологические
методы
специфической
аллергодиагностики
Сафин Владислав Рауисович
Руководитель проекта «Аллергодиагностика»
ООО «Алкор Био» Санкт-Петербург, Россия
Распространенность
аллергических заболеваний
Западная Европа
25 - 30%
Отдельные экологически неблагоприятные регионы
50 - 60%
Промышленные районы России
15 - 35%
Заболеваемость среди детей
в крупных промышленных городах
10 - 40%
Методы специфической диагностики
1.
Сбор аллергологического анамнеза
2.
Аллергологическое обследование

Проведение тестов in vivo:
Кожные пробы
Провокационные тесты с аллергенами




Диагностика in vitro:
Определение общего IgE
Определение уровня специфических IgE
Определение уровня специфических IgG
Кожное тестирование – основной метод
специфической аллергодиагностики
Аллерген воздействует на клетки кожи
•
Prick (укольный) тест
•
Внутрикожные пробы
•
Patch (аппликационный) тест
•
Скарификационные пробы
Укольный тест (prick-test)
•
Учѐт реакции через 15
минут по отношению к (+) и
(–) контролям.
• Самый специфичный из
всех кожных тестов.
Внутрикожная проба
• Учѐт реакции через 20
минут по отношению к
(+) и (–) контролям и
через 24 часа.
• Самый чувствительный
из всех кожных
тестов.
Аппликационный path-тест
•
Учѐт реакции через 48 и 72 часа.
•
Для выявления аллергических реакций
замедленного типа на контактные
аллергены.
•
Для диагностики пищевой аллергии при
атопическом дерматите у детей.
- Положительная проба ассоциируется
с поздней фазой клинической
реакции, наблюдаемой при пищевом
провокационном тесте.
Провокационные пробы
Аллерген воздействует на клетки
шокового органа
• Ингаляционный тест
• Назальный тест
• Конъюктивальный тест
• Пищевой провокационный тест
Лабораторные
методы диагностики
Преимущества использования
тестов in vitro
- Нет противопоказаний к обследованию.
- Не вызывают дополнительной сенсибилизации, нет риска
анафилактических реакций.
- Нет возрастных ограничений, возможно проводить в самом
раннем возрасте.
- Любое число тестируемых аллергенов, выявление
поливалентной сенсибилизации.
- Использование сыворотки для исследования в любой
лаборатории (тесты на расстоянии).
Показания к определению
общего IgE
1. Первичная диагностика атопии.
2. Первичная и вторичная профилактика аллергии.
3. При первичных иммунодефицитных состояниях.
4. При IgE-миеломе.
5. Вспомогательный метод диагностики гельминтозов.
Показания к определению
специфических IgE
1. Необходимость уточнения причинно-значимого
аллергена во всех случаях, особенно при сомнительных
результатах кожного тестирования
2. Дифференциальная диагностика аллергических и
неаллергических (псевдоаллергических) заболеваний
Показания к определению
специфических IgE
3. Затруднение или невозможность проведения тестов
in vivo:
- ранний детский возрас;
- пациенты с высокой степенью сенсибилизации;
- обострение основного заболевани;
- декомпенсированные состояния болезней сердца,
печени, почек и системы крови;
- период после острой аллергической реакции;
- невозможность отмены антигистаминных,
гормональных и других препаратов;
- измененная реактивность кожи;
- исследование с большим количеством аллергенов
одновременно.
Показания к определению
специфических IgE
4. Выявление скрытой (субклинической)
сенсибилизации – обнаружение высоких уровней
специфических IgE-антител при отсутствии
клинических проявлений свидетельствует о
повышенном риске возникновения аллергических
реакций на данные аллергены.
5. Мониторинг концентрации IgE при проведении
специфической иммунотерапии.
Классификация тест-систем по
принципу анализа
- аллергосорбентный тест
- реверсивный аллергосорбентный тест
(«capture» метод)
Аллергосорбентный тест
IgG
IgG
IgE
IgE
Меченое
антитело
к IgE
IgG
Аллергены иммобилизованы на твердой фазе
(лунка, бумажный диск, нитроцеллюлозная
мембрана)
IgE
IgE
Специфический
IgE
Аллерген
IgG
G
Ig
IgG
IgG
IgG
IgE
IgG
IgG
IgG
Аллерген
IgG
IgG
IgG
IgG
IgG
Особенности аллергосорбентных
тест-систем
- Высокие требования к сорбционной ѐмкости твѐрдой фазы.
- Фиксированные панели аллергенов (лунки, мембраны).
- Для тест-систем на дисках: большая трудоѐмкость,
невозможность полной автоматизации.
- Количественный или полуколичественный результат.
Реверсивный аллергосорбентный
тест («capture», REAST)
- Используются жидкие биотинилированые
аллергены
- На твѐрдой фазе иммобилизованы антитела к IgE
IgE
Меченый аллерген
IgG
IgG
IgG
IgG
IgE
IgE
IgG
IgE
IgG
IgG
G
Ig
IgG
IgG
IgE
IgG
IgG
IgG
Антитело к IgE
Специфические антитела к IgE
G
Ig
IgG
IgG
Специфический
IgE
Особенности реверсивных
аллергосорбентных
тест-систем
- Емкость твердой фазы имеет меньшее значение.
- Нет фиксированных панелей аллергенов – свободный
выбор в каждом анализе.
- Возможна постановка на автоматических
анализаторах.
- Количественный результат.
Набор реагентов
«АллергоИФА-специфический IgE»
для количественного определения
специфических антител класса IgE
в сыворотке крови человека
Состав тест-системы
«АллергоИФА-специфический IgE»
Набор на 96 определений
- Комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов.
- Калибровочные пробы, содержащие известные
количества общего IgЕ: 0, 0,5, 1, 5, 25 и 100 МЕ/мл.
- Конъюгат Анти-IgE-биотин.
- Конъюгат стрептавидин-пероксидаза.
- Концентрированный буферный раствор для
промывки лунок.
- Раствор ТМБ.
- Стоп-реагент.
- Контрольная сыворотка.
Аллергены
- 426 отдельных наименований аллергенов и
смесей в 14 группах.
- Полностью готовы к использованию.
- Свободный выбор аллергенов для
тестирования, в зависимости от потребностей.
- Тест-система полностью совместима с
аллергенами производства компании RADIM
(Италия).
- Выпущены первые 17 аллергенов собственного
производства.
Аллергены производства
Алкор Био
Код Название аллергена
Смеси аллергенов
gm1
Смесь луговых трав (g3-g4-g5-g6-g8)( ежа
сборная + овсяница луговая + райграс
многолетний + тимофеевка + мятлик луговой)
wm2 Смесь сорных трав (w1-w6-w7-w8-w9)
(амброзия обыкновенная + полынь
обыкновенная + нивяник + одуванчик +
подорожник)
tm2 Смесь аллергенов деревьев (раннее цветение:
t2-t3-t4-t15) (ранее цветение: ольха серая +
береза бородавчатая + орешник, лещина +
американский ясень)
mm1 Смесь плесневых аллергенов (m1-m2-m3-m4m6) (Penicillium notatum + Cladosporium
herbarum + Aspergillus fumigatus + Mucor
racemosus + Alternaria alternata (tenius)
Код Название аллергена
Клещевые аллергены
d1 Dermatophagoides pteronyssinus
d2 Dermatophagoides farinae
Эпидермальные и белки животного
происхождения
e1 Эпителий кошки (Felis domesticus)
Пищевые аллергены
f1 Яичный белок
f2 Молоко коровье
f3 Треска (Gadus morhua)
f11 Греча
f35 Картофель
f75 Яичный желток
Аллергены домашней пыли
h1 Пыль домашняя (Greer Labs, Inc.)
Пыльца деревьев
t3 Береза бородавчатая (Betula verrucosa)
Сорные травы
w6 Полынь обыкновенная (Artemisia vulgaris)
Плесневые и дрожжевые грибы
m6 Alternaria alternate (tenius)
Схема постановки анализа
на планшете
96 определений
Аллергены (до 80 наименований)
Калибраторы
Бланк
Контрольная
сыворотка
Метод, заложенный в
основу тест-системы
«АллергоИФА-специфический IgE»
Количественный иммуноферментный метод определения
концентрации специфического IgE, вариант “capture”
(реверсивный аллергосорбентный тест)
Меченый аллерген
Специфический
IgE
Антитело к IgE
Набор реагентов
«АллергоИФА-специфический IgE»
ТИП АНАЛИЗА
«Capture» вариант
ИФА
ОБЪЕМ
ПРОБЫ
50 МКЛ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ
0,15 МЕ/мл
КАЛИБРОВКА
УЧЕТ ОТВЕТА
0; 0,5; 1; 5; 25;
100 МЕ/мл
Количественный
МЕ/мл,
В класс.
от I до V
СТОИМ. 1
ИССЛ.
55 рублей
Преимущества набора
«АллергоИФА-специфический IgE»
- Удобная комплектация - калибраторы и контрольная сыворотка
входят в состав набора, аллергены приобретаются отдельно, в
зависимости от потребности.
- Проведение анализа при температуре +37оС снижает
вероятность влияния внешних факторов на результат.
- Не требуется дополнительное разведение образцов.
- Определение оптической плотности Бланка и контрольной
сыворотки проводится в дубликатах.
- Длительный срок годности (12 мес).
- Себестоимость анализа (55 руб).
- Время анализа(1 час 45 мин).
Спасибо за внимание!