ткп/пр_1 производство лекарственных средств
advertisement
ТЕХНИЧЕСКИЙ КОДЕКС УСТАНОВИВШЕЙСЯ ПРАКТИКИ ТКП/ПР_1 Надлежащая производственная практика ПРОИЗВОДСТВО ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ. ВИРУСНАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ПОЛУЧЕННЫХ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИМ СПОСОБОМ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО И ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ Належная вытворчая практыка ВЫТВОРЧАСЦЬ ЛЕКАВЫХ СРОДКАЎ. ВIРУСНАЯ БЯСПЕКА ЛЕКАВЫХ СРОДКАЎ, АТРЫМАНЫХ БIЯТЭХНАЛАГIЧНЫМ СПОСАБАМ З ВЫКАРЫСТАННЕМ КЛЕТАК ЧАЛАВЕЧАГА I ЖЫВЁЛЬНАГА ПАХОДЖАННЯ Настоящий проект технического кодекса установившейся практики не подлежит применению до его утверждения Департамент фармацевтической промышленности Министерства здравоохранения Республики Беларусь Минск ТКП/ПР_1 УДК МКС 11.120.10 КП 01 ключевые слова: лекарственное средство, вирусная безопасность, контаминация, биотехнологический способ Предисловие Цели, основные принципы, положения по государственному регулированию и управлению в области технического нормирования и стандартизации установлены Законом Республики Беларусь «О техническом нормировании и стандартизации». 1 РАЗРАБОТАН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием «ЛОТИОС». ВНЕСЕН Департаментом фармацевтической здравоохранения Республики Беларусь промышленности Министерства 2 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Департаментом фармацевтической промышленности Министерства здравоохранения Республики Беларусь от «___»_________ 201__ г. №______ 3 Настоящий технический кодекс гармонизирован с руководящим документом Международной конференции по гармонизации технических требований к регистрации лекарственных средств для человека (International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use, ICH) Q 5 A (R1) «Quality of biotechnological products: viral safety evaluation of biotechnology products derived from cell lines of human or animal origin» (Качество биотехнологических лекарственных средств: оценка безопасности вирусного заражения биотехнологических лекарственных средств, полученных на основе клеточных линий человеческого и животного происхождения) [1]. 4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ Настоящий проект технического применению до утверждения Издан на русском языке II кодекса установившейся практики не подлежит ТКП/ПР_1 Содержание 1 Область применения ............................................................................................................... 1 2 Нормативные ссылки............................................................................................................... 1 3 Термины и определения.......................................................................................................... 2 4 Обозначения и сокращения .................................................................................................... 4 5 Общие положения.................................................................................................................... 4 6 Потенциальные источники вирусного загрязнения ............................................................... 4 6.1 Вирусы, которые могут содержаться в ГКБ ...................................................................... 4 6.2 Случайная вирусная инфекция в производственном процессе...................................... 5 7 Испытание клеточной линии на вирусы ................................................................................. 5 7.1 Примерные вирусные испытания ГКБ, РКБ и посевной клеточной культуры для их выращивания in vitro ................................................................................................................ 5 7.2 Главный клеточный банк ................................................................................................... 5 7.3 Рабочий клеточный банк.................................................................................................... 5 7.4 Посевная клеточная культура, используемая для выращивания in vitro ....................... 5 7.5 Рекомендуемые испытания для обнаружения и идентификации вирусов .................... 6 7.6 Испытания на наличие ретровирусов............................................................................... 6 7.7 Испытания in vitro ............................................................................................................... 6 7.8 Испытания in vivo................................................................................................................ 6 7.9 Испытание продукцией антител........................................................................................ 7 7.10 Приемлемость клеточных линий..................................................................................... 7 8 Испытания необработанной массы клеток ............................................................................ 7 9 Рациональный план действий для испытаний вирусного клиренса и испытаний на вирусы очищенной массы клеток............................................................................................... 8 10 Оценка и характеристика процедур вирусного клиренса.................................................. 10 10.1Общие положения ........................................................................................................... 10 10.2 Выбор вирусов для оценки и характеристики вирусного клиренса ............................ 10 10.2.1 Релевантные» и модельные вирусы ...................................................................................... 10 10.2.2 Информация для производителя ........................................................................................... 11 10.3 Разработка и проведения испытаний оценки и характеристики вирусного клиренса11 10.3.1 Оборудование и персонал ...................................................................................................... 11 10.3.2 Масштабируемые производственные процессы ................................................................... 12 10.3.3 Анализ пошагового удаления вирусов ................................................................................... 12 10.3.4 Сопоставление физического удаления вирусов с инактивацией вирусов ........................... 12 10.3.5 Оценка инактивации................................................................................................................ 13 10.3.6 Назначение и регенерация колонок ....................................................................................... 13 10.3.7 Особые предосторожности ..................................................................................................... 13 10.4 Интерпретация исследований вирусного клиренса. Приемлемость .......................... 14 10.5 Пределы методик испытаний вирусного клиренса ...................................................... 15 10.6 Статистическая обработка результатов ....................................................................... 16 10.7 Повторения испытаний вирусного клиренса ................................................................ 16 Приложение А ........................................................................................................................... 17 Приложение Б ........................................................................................................................... 22 Приложение В ........................................................................................................................... 24 Приложение Г............................................................................................................................ 26 Приложение Д ........................................................................................................................... 27 Библиография ........................................................................................................................... 28 III ТКП/ПР_1 Введение Настоящий технический кодекс установившейся практики регламентирует тестирование и оценку вирусной безопасности биологических (биотехнологических) лекарственное средство, получаемых из клеточных линий человеческого либо животного происхождения (млекопитающие, птицы, насекомые и др.). Данные о вирусной безопасности прилагаются к комплекту документов для регистрации продукта. В техническом кодексе не рассматриваются нетрадиционные инфекционные агенты, вызывающие такие болезни, как губчатая энцефалопатия крупного рогатого скота (BSE). Требования технического кодекса следует выполнять совместно с требованиями ТКП 030-2013 Надлежащая производственная практика, ТКП ХХХХ-ХХХХ Производство лекарственных средств. Валидация методик измерений, ТКП ХХХХ-ХХХХ Производство лекарственных средств. Контроль и критерии приемлемости для лекарственных средств и субстанций, полученных биотехнологическими способами IV ТКП/ПР_1 ТЕХНИЧЕСКИЙ КОДЕКС УСТАНОВИВШЕЙСЯ ПРАКТИКИ Производство лекарственных средств ВИРУСНАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ПОЛУЧЕННЫХ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИМ СПОСОБОМ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО И ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ Вытворчасць лекавых сродкаў ВIРУСНАЯ БЯСПЕКА ЛЕКАВЫХ СРОДКАЎ, АТРЫМАНЫХ БIАТЭХНАЛАГIЧНЫМ СПОСАБАМ З УЖЫВАННЕМ КЛЕТАК ЧАЛАВЕЧАГА I ЖЫВОТНАГА ПАХОДЖАННЯ Manufacture of medicinal products Viral safety evaluation of biotechnology products derived from cell lines of human or animal origin Дата введения 201х – хх – хх 1 Область применения Настоящий технический кодекс установившейся практики (далее – технический кодекс) распространяется на все лекарственные средства, получаемые из клеточных культур охарактеризованных клеточных банков. Настоящий технический кодекс может быть также применён к лекарственным средствам, полученным из клеточных культур, выращенных вне организма, таким как как интерферон, моноклональные антитела, продукты экспрессии рекомбинантных ДНК, включая рекомбинантные вакцины, а также распространяется на лекарственные средства, полученные при помощи клеток- гибридом, культивируемых в организме, как асциты. Настоящий стандарт не распространяется на инактивированные вакцины, все живые вакцины, содержащие самореплицирующиеся агенты, и генетически сконструированные ретровирусные векторы. Настоящий стандарт устанавливает общие требования для тестирования на вирусы, расчёта вирусного клиренса, а также общие рекомендации для разработки методик и проведения вирусных испытаний. Настоящий технический кодекс применим к лекарственным средствам, производимым в Республике Беларусь, а также к импортируемым лекарственным средствам. Требования технического кодекса не распространяются на уже зарегистрированные лекарственные средства. Настоящий технический кодекс может быть использован в производстве ветеринарных препаратов. 2 Нормативные ссылки В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие технические нормативные акты в области технического нормирования и стандартизации (далее—ТНПА): ТКП 030-2013 Надлежащая производственная практика ТКП ХХХХ-ХХХХ Производство лекарственных средств. Лекарственные средства на основе технологии рекомбинантной ДНК ТКП ХХХХ-ХХХХ Производство лекарственных средств. Валидация методик измерений ТКП ХХХХ-ХХХХ Производство лекарственных средств. Контроль и критерии приемлемости для лекарственных средств и субстанций, полученных биотехнологическими способами Примечание – При пользовании настоящим техническим кодексом целесообразно проверить действие ТНПА по каталогу, составленному на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочные ТНПА заменены (изменены), то при пользовании настоящим техническим кодексом следует руководствоваться замененными (измененными) ТНПА. Если ссылочные ТНПА отменены без замены, то положение, в котором дана ссылка на них, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. 1 ТКП/ПР_1 3 Термины и определения В настоящем техническом кодексе применяют следующие термины с соответствующими определениями, установленные в [1], ТКП 030, ТКП ХХХХ Производство лекарственных средств. Лекарственные средства на основе технологии рекомбинантной ДНК, а также следующие термины с соответствующими определениями: 3.1 антитела (antibodies): Глобулярные белки, относящиеся к классу иммуноглобулинов, которые продуцируются иммунной системой животного организма в ответ на появление чужеродных молекул и специфически с ними взаимодействуют. 3.2 асцит (ascite): Патологическое скопление жидкости в брюшной полости, возникающее в результате разных патологических процессов, включая цирроз печени. Формирование асцита у мышей при внутрибрюшинном введении им гибридомных клеток используется для получения моноклональных антител 3.3 вакцина (vaccine): Искусственно приготовленный медицинский или ветеринарный препарат, содержащий антиген, который используется для усиления образования специфических антител, обеспечивающих активный и/или пассивный иммунитет в организме. 3.4 аттенюированная вакцина (attenuated vaccine): Ослабленная вакцина; вакцина, приготовленная с использованием ослабленных тем или иным образом вирулентных организмов, сохраняющих при этом способность вызывать синтез антител против природной вирулентной формы. 3.5 вирус: Внутриклеточно реплицирующийся потенциально патогенный инфекционный агент, содержащий только один тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), неспособный расти и размножаться бинарным делением и размножающийся в форме своего генетического материала: 3.6 случайный вирус: Непреднамеренно внесённый вирус; 3.7 эндогенный вирус: Форма вируса, геном которого является ковалентно внедрен в ДНК животного, из которого выделена клеточная линия. 3.8 экзогенный вирус: Вирус из внешних источников, присутствующий в ГКБ. 3.9 неспецифичный модельный вирус: Вирус, использующийся в процессе характеристики вирусного клиренса, целью которой является показать способность производственного процесса удалять и (или) инактивировать вирусы в целом, т.е. устойчивость процесса очистки. 3.10 релевантный вирус: Вирус, использующийся в оценочных испытаниях, который идентичен или того же вида, как и вирус, присутствие которого известно или предполагается в клеточном субстрате, или любом другом реагенте, или материале, использующимся в производстве. 3.11 специфичный модельный вирус: Вирус, использующийся для тех же целей, что и релевантный вирус, близкородственный по отношению к обнаруженному или предполагаемому вирусу (того же рода или семейства), имеющий те же химические и физические свойства. 3.12 ретровирус (retrovirus): РНК-содержащий вирус который способен распространяються без переносчика. Синтезированная на вирусной РНК двухцепочечная ДНК может встраиваться в хромосому инфицированной этим вирусом клетки. 3.13 ретровирусный вектор (retroviral vector): Вектор, содержащий элементы генома ретровируса, необходимые для его репликации в клетках. 3.14 вируцид (virucide): Агент (химическое вещество, физический фактор), инактивирующий вирусы. 3.15 вирусный клиренс: Элиминация целевого вируса путем удаления вирусных частиц или инактивации вирусной активности. 3.16 вирусоподобные частицы: Образования, видимые в электронный микроскоп и морфологически подобные известным вирусам. 3.17 возраст клеток in vitro: Период времени между размораживанием образцов клеток ГКБ и окончанием их выращивания, измеренное в реальном времени, в количестве генераций (время, разделённое на время удвоения культуры). 3.18 гибридома (hybridoma): Гибридная клетка, искусственно полученная на основе слияния продуцирующей антитела В-лимфоцита с раковой клеткой, придающей этой гибридной клетке способность неограниченного размножения при культивировании in vitro, которая осуществляет синтез специфических иммуноглобулинов одного изотипа – моноклональных антител. 2 ТКП/ПР_1 3.19 иммортализация: Свойство клеток делиться бесконечно долго, при сохранении зависимости от адгезии клеток к твердой подложке и от факторов роста, а также контактного ингибирования. 3.20 инактивированный агент (inactivated agent): Вирус, бактерия или другой инфекционный организм, который обработан каким-либо способом, предотвращающим его способность развиваться и вызывать заболевание; например, аттенюированная вакцина. 3.21 инактивация: Уменьшение вирусной активности, вызванное химической или физической модификацией. 3.22 инвазивность (invasivity, invasiveness): Способность патогенных микроорганизмов проникать во внутреннюю среду хозяина и распространяться по его тканям. 3.23 индукционная среда (induction media): Среда, используемая для индукции, формирования определенного типа клеток, органа или определенной структуры; среда, вызывающая изменения или мутации в культивируемых клетках (тканях). 3.24 индикаторная линия, индикаторный вид (indicator strain, indicator species): Линии (виды) организмов, которые указывают на: загрязнение объектов внешней среды; уровень санитарного состояния объектов и санитарного состояния людей; присутствие в среде отдельных витаминов, аминокислот, гормонов, отдельных химических элементов и других веществ. 3.25 инокулят: Суспензия клеток, являющаяся исходной для наращивания клеточной культуры и используемая для первоначального посева на питательную среду. 3.26 инокуляция (inoculation), Посев микробиологический: введение в культуральную среду инокулята для начала культивирования клеток или тканей. 3.27 инфекционный (infectious): Способный выживать в организме хозяина, преодолевая неспецифичные защитные механизмы. 3.28 клеточная линия (cell line, cell strain): Группа клеток, поддерживаемая в культуре путем пассирования (пересевов) в размножающемся состоянии. 3.29 клеточная культура (cell culture): Клетки, выделенные из многоклеточных организмов и растущие in vitro. 3.30 клеточный субстрат: Клетки, используемые для производства продукта. 3.31 клиренс (clearance, Cl): Интегральный параметр элиминации из организма какоголибо вещества в процессе его химических превращений, перераспределения в организме и/или выделения из организма. 3.32 клеточная культура (cell culture): Популяция клеток определенного вида микроорганизмов, растений или животных, выращенная in vitro в питательной среде. 3.33 посевная клеточная культура: Популяция клеток определенного вида микроорганизмов, растений или животных, выращенная in vitro в питательной среде, используемая для дальнейшего выращивания в питательной среде. 3.34 минимальное время воздействия: Минимальный период времени, в течение которого длиться воздействие. 3.35 моноклональные антитела: антитела одного типа, синтезируемые одним клоном гибридных клеток – гибридомой. 3.36 необработанная масса клеток: Один или несколько сборов клеток и культуральной среды. Когда клетки труднодоступны, под необработанной массой следует понимать жидкость, собранную из ферментера. 3.37 обратная транскриптаза, ревертаза (reverse transcriptase) фермент РНК-зависимая ДНК-полимераза, с помощью которого осуществляется обратная транскрипция — синтез ДНК на матрице РНК; кодируется геномами некоторых РНК-содержащих вирусов и подвижных генетических элементов генома высших организмов. 3.38 патогенность (pathogenicity): Потенциальная способность микроорганизмов вызывать инфекционный процесс у макроорганизмов определенного вида. 3.39 преципитация (precipitation): Иммунологическая реакция осаждения комплексов антиген-антитело, обусловленная нерастворимостью этих комплексов в изотонических растворах; сыворотка после преципитации становится истощенной в отношении антител (или антигенов), перешедших в нерастворимое состояние. 3.40 процесс характеристики вирусного клиренса: Исследование вирусного клиренса, в котором неспецифические модельные вирусы используются для оценки способности производственного процесса удалять и (или) инактивировать вирусы. 3 ТКП/ПР_1 3.41 процесс оценочных испытаний вирусного клиренса: Исследование вирусного клиренса, в котором для определения способности производственного процесса удалять/инактивировать вирусы используются релевантные и (или) специфические модельные вирусы. 3.42 удаление вирусов: Физическое отделение вирусных частиц от продукта. 4 Обозначения и сокращения ВИЧ: Вирус иммунодефицита человека ГБК: Главный банк клеток ПЦР: Полимеразная цепная реакция РБК: Рабочий банк клеток GMP: Good manufacturing practice (надлежащая производственная практика) in vivo: В организме In vitro: Вне организма MAP: Mouse antibody production (продукция антител мышей) RAP: Rat antibody production (продукция антител крыс) HAP: Hamster antibody production (продукция антител хомяков) 5 Общие положения 5.1 Технический кодекс устанавливает требования для оценки риска вирусной контаминации и подходы для удаления вирусов из промежуточной продукции, что способствует безопасности биотехнологических лекарственных средств, полученных на основе линий клеток животных или человека. 5.2 Риск вирусной контаминации является общим признаком, который характерен для всех биотехнологических лекарственных средств. полученных на основе клеточных линий. Такая контаминация может иметь серьезные клинические последствия и может возникать от контаминации собственно клеточных линий или от непреднамеренного проникновения вирусов во время процесса производства. 5.3 Безопасность биотехнологического лекарственного средства может быть достигнута путем разработки и применения программы испытаний на наличие вирусов в используемой клеточной линии. а также оценки удаления или инактивации вирусов в ходе процесса производства. 5.4 Три принципиальных взаимодополняющих подхода должны быть использованы для контроля потенциальной вирусной контаминации биотехнологических лекарственных средств: a) отбор и испытание клеточных линий и других материалов, используемых в качестве сырья, включая компоненты сырья, на отсутствие нежелательных вирусов, которые могут быть инфекционными и (или) патогенными для человека; б) оценка способности процессов производства удалять инфекционные вирусы; в) испытанием промежуточной продукции на соответствующих стадиях производства на отсутствие контаминирующих инфекционных вирусов. 5.5 Поскольку все эти подходы имеют свои пределы количественного определения вирусов следует одновременно использовать несколько подходов. 6 Потенциальные источники вирусного загрязнения Загрязнение продукта вирусами может происходить вследствие изначального загрязнения клеточных линий-продуцентов либо в процессе производства продукта. 6.1 Вирусы, которые могут содержаться в ГКБ 6.1.1 Клетки могут быть инфицированы латентной формой вируса (например, вирусом герпеса) или эндогенной формой вируса, который может передаваться вертикальным путем от одного поколения к другому, вследствие встраивания вирусного генома в геном клетки. Геном таких вирусов может быть конституционно экспрессирован, либо вирус может долгое время находиться в стадии покоя и потом внезапно проявиться в своей инфекционной форме. 6.1.2 В ГКБ вирус может попасть несколькими способами: - выделением клеточной линии из инфицированного животного; - использованием вирусов во время получения клеточной линии; 4 ТКП/ПР_1 - использованием биологических компонентов и реактивов, таких как инфицированная сыворотка крови животного; - контаминацией во время поддержания клеточной линии. 6.2 Случайная вирусная инфекция в производственном процессе 6.2.1 Случайное инфицирование продукта может происходить несколькими путями (но не ограничивается приведенными далее): а) использованием загрязненных вирусом биологических компонентов в производстве (например, сыворотки); б) использованием вируса для индуцирования гена, кодирующего желаемый белок; в) использованием загрязнённых агентов, таких как хроматографическая колонка с моноклональными антителами при аффинной хроматографии; г) использованием загрязнённых вирусом вспомогательных веществ во время приготовления лекарственного средства; д) загрязнением клеточных линий или культуральной жидкости в процессе производства. 6.2.2 Мониторинг параметров клеточный среды может быть полезным для раннего обнаружения потенциального случайного вирусного загрязнения. 7 Испытание клеточной линии на вирусы Соответствующее испытание на присутствие вирусов является важной частью анализа качества клеточной линии при её использовании в производстве биотехнологического лекарственного средства. 7.1 Примерные вирусные испытания ГКБ, РКБ и посевной клеточной культуры для их выращивания in vitro В таблице А1 (приложение А) проиллюстрированы примеры тестов на вирусы, которые должны быть выполнены не менее одного раза для каждого из разных источников клеток — ГКБ, РКБ и клеток, выращенных в производстве. 7.2 Главный клеточный банк 7.2.1 В случае ГБК необходимо провести детальные испытания на присутствие эндогенных и экзогенных вирусов. 7.2.2 Для гетерогибридных клеточных линий, у которых один или более родителей получены из клеток человекообразных и низших приматов, необходимо провести испытания на вирусы человекообразных и низших приматов, так как существует угроза такой вирусной контаминации. 7.2.3 Для обнаружения возможной вирусной контаминации испытание на наличие на экзогенных вирусов должно включать инокуляционные испытания in vitro и in vivo и любые другие специфические испытания, такие как MAP. 7.3 Рабочий клеточный банк 7.3.1 Каждый РБК должен быть проверен на содержание вирусов путем прямого испытания его клеток, так и испытания посевной клеточной культуры, полученной из клеток РБК и используемой для выращивания in vitro. 7.3.2 В случае, когда испытания на наличие экзогенных вирусов проводят для ГБК, а клетки РБК используются для получения посевной клеточной культуры с целью выращивания in vitro с последующим их анализом на присутствие случайных вирусов, подобные испытания не нужно проводить на клетках РБК. 7.3.3 Для РБК обычно не требуются испытания на продукцию антител. 7.3.4 Так же могут быть приемлемыми альтернативные подходы, при которых все соответствующие испытания проводятся на РБК, а не на ГБК, 7.4 Посевная клеточная культура, используемая для выращивания in vitro 7.4.1 Время, необходимое для выращивания посевной клеточной культуры, используемой для выращивания in vitro, должно быть определено в ходе проведения опытного или производственного процесса. 5 ТКП/ПР_1 7.4.2 Обычно посевную клеточную культуру получают из РБК. Так же для их получения можно использовать и ГКБ. 7.4.3 При каждом получении необходимо проводить ее детальные испытания на присутствие эндогенных вирусов, которые могли быть не идентифицированы в ГБК и РБК. 7.4.4 Необходимо провести хотя бы однократно подходящие испытания (in vivo и in vitro) посевной клеточной культуры для надлежащего контроля за тем, что процесс производства не подвержен случайной вирусной контаминации. 7.4.5 Если вирусное загрязнение все таки установлено, то процесс производства должен быть тщательно проверен для обнаружения источника заражения, при необходимости следует пересмотреть процесс производства. 7.5 Рекомендуемые испытания для обнаружения и идентификации вирусов 7.5.1 Перечень методик, которые могут быть использованы для обнаружения эндогенных и случайных вирусов. представлен в таблице А2 (приложение А). Этот перечень должен рассматриваться как рекомендованный, а не как исчерпывающий или окончательный. 7.5.2 Вследствие того, что научный прогресс может изменить большинство ныне существующих методик, могут быть приемлемыми предложения альтернативных, улучшенных протоколов испытаний с надлежащей их валидацией. Производителю необходимо обсудить возможность применения новых методик испытаний с соответствующими инстанциями. 7.5.3 В зависимости от индивидуальных особенностей производственных процессов могут понадобиться иные методики. Протоколы испытаний должны подтверждать надлежащую чувствительность и специфичность методик согласно требованиям ТКП ХХХ Производство лекарственных средств. Валидация методик измерений, В случае, когда вид, из особи которого получены клетки для клеточных банков и производства, подвержен определенной вирусной инфекции, и высока вероятность присутствия этого вируса, необходимы специфические тесты и подходы. 7.5.4 Если клеточная линия получена из организма человекообразного примата или организма низшего примата, необходимы также испытания на наличие человеческие вирусов, таких как ВИЧ и гепатит. Для обнаружения этих и других вирусов следует использовать метолики испытаний с применением ПЦР. 7.6 Испытания на наличие ретровирусов 7.6.1 Следует разработать методики испытаний на ретровирусы для ГБК или посевной клеточной культуры. В их состав должны входить инфекционные испытания на культурах чувствительных клеток, а также электронная микроскопия. 7.6.2 В случае, если инфекционные испытания не дали положительный результат и никаких структур, похожих на вирусы, не было найдено при помощи электронной микроскопии, необходимо провести испытания на наличие обратной транскриптазы или другие соответствующие испытания для обнаружения ретровирусов, которые могут быть неинфекционными. 7.7 Испытания in vitro 7.7.1 Во время испытаний in vitro, испытываемые клетки инокулируют в суспензии разнообразных тестовых клеточных культур, способных идентифицировать широкий спектр вирусов человека и животных. Тестовые клеточные культуры выбирают с учетом особенностей испытываемых клеток, однако необходимо выбрать линии человекообразных и (или) низших приматов, чувствительных к вирусам человека. 7.7.2 Методики испытаний, а также условия отбора образца для испытаний необходимо подбирать с учетом некоторых факторов, например, типа предполагаемой вирусной инфекции, либо происхождения и условий использования испытываемых клеток. 7.7.3 Необходимо рассмотреть возможность наличия как вирусов, существующих в клетках, так и вирусов, находящихся в крови.. 7.8 Испытания in vivo 7.8.1 Для того, чтобы выявить вирусы, которые не могут размножаться в клеточных культурах, испытываемый объект вводится в организм тестового животного, таких как детеныши и 6 ТКП/ПР_1 взрослые особи мышей или оплодотворенные яйцеклетки, Можно использовать и других животных, в зависимости от природы и источника получения испытываемых клеток. 7.8.2 Состояние здоровья подопытных животных должно постоянно проверяться и причины любых отклонений от нормы безотлагательно выявляться и идентифицироваться. 7.9 Испытание продукцией антител 7.9.1 Видоспецифические вирусы, присутствующие в клеточных линиях грызунов, могут быть выявлены путем введения испытываемого образца в животное, заведомо свободное от вирусов. Далее, через определенный период времени, устанавливается уровень антител в крови подопытного животного либо активность ферментов. 7.9.2 Такие испытания называются, исходя из вида модельного организма: продукция антител мышей (mouse antibody production, MAP), продукция антител крыс (rat antibody production, RAP), продукция антител хомяков (hamster antibody production, HAP). 7.9.3 Вирусы, которые в настоящее время определяют таким способом, перечислены в таблице А3 (приложение А). 7.10 Приемлемость клеточных линий 7.10.1 Если для производстве лекарственного средства используются клеточные линии, содержащие эндогенные ретровирусы, другие вирусы или вирусные последовательности, то необходимо применять план действий, рекомендованный в разделе 9. 7.10.2 Приемлемость использования в производстве клеточных линий, содержащих иные, чем эндогенные ретровирусы, должна устанавливаться в индивидуальном порядке уполномоченными органами. 7.10.3 Необходимо принимать во внимание соотношение риск (польза), установленное исходя из информации о: - пользе продукта, его необходимости и предполагаемом клиническом использовании; - природе вирусной инфекции, ее способности поражать человеческий организм; - процессах очистки от вирусной инфекции во время производственного процесса (оценка вирусного клиренса); - объёме испытаний на наличие вирусов проведенных на очищенной массе клеток. 8 Испытания необработанной массы клеток 8.1 Репрезентативный образец необработанной массы: клеток, извлеченный из аппарата для культивирования, непосредственно перед дальнейшей ее переработкой в цикле производства. является тем уровнем, на котором с высокой вероятностью можно определить возможную вирусную контаминацию. 8.2 В некоторых случаях чувствительность методик испытаний на вирусную контаминацию может быть выше на начальном этапе переработки массы клеток (к примеру, необработанная масса может быть токсична для тестовых культур клеток, а частично переработанная – не токсична). 8.3 В некоторых случаях можно анализировать смесь как живых так и разрушенных клеток, вместе с культуральной жидкостью, после извлечения из аппарата для культивирования и до дальнейшей ее переработки. 8.4 Результаты исследований как минимум трех образцов необработанной массы клеток, полученной при опытно-промышленном или промышленном производстве, должны прилагаться к регистрационной документации на лекарственное средство. 8.5 Производителю следует разработать программу проведения испытаний на возможное присутствие случайных вирусов в ходе производства лекарственного средства. 8.6 Необходимые методики испытаний необработанной массы клеток, их количество и периодичность контроля устанавливаются с учетом: - природы клеточной линии, используемой в производстве, - результатов и объем испытаний во время квалификации клеточных линий; - способа культивирования; - источников сырья и иных использующихся в производстве материалов; - результатов испытаний вирусного клиренса. 7 ТКП/ПР_1 8.7 Для анализа необработанной массы клеток следует применять методики испытаний in vitro, с использованием одной или нескольких тестовых клеточных линий, испытания с применением ПЦР или другие подходящие методики. 8.8 Биомассу и культуральную жидкость, в которых обнаружены случайные вирусы, недопустимо применять для дальнейшего производства. 8.9 Если какое-нибудь случайное вирусное заражение было установлено на какой-то стадии производства, то производственный процесс следует тщательно проверить для обнаружения источника заражения и предпринять меры по его устранению. 9 Рациональный план действий для испытаний вирусного клиренса и испытаний на вирусы очищенной массы клеток 9.1 Производителю необходимо разработать детальный протокол исследований на наличие вирусов от стадии ГБК через различные стадии производства до конечной продукции, включая оценку и характеристику вирусного клиренса необработанной массы клеток. В протоколе важными пунктами являются характеристика и оценка вирусного клиренса, которые подтверждают, что конечная продукция полностью свободна от вирусной контаминации. 9.2 Во время выбора штаммов вирусов для испытаний клиренса необходимо следить за тем, чтобы: - во время производства из продукции удалялись наиболее вероятные, специфические для нее вирусы; - производственный процесс мог обеспечить удаление случайной, неспецифической для него вирусной инфекцией. 9.3 Для процесса оценки необходимо указать, какое количество вирусов может содержаться в необработанной массе клеток и какое количество должно быть выведено в процессе очистки для того, чтобы гарантировать безопасность продукции. 9.4 Для уверенности в эффективности процессов вирусной инактивации необходимо знать время, необходимое для их полной инактивации вирусов. 9.5 Во время клиренса известных вирусных загрязнений необходимы исчерпывающие временные инактивационные исследования, демонстрирующие соотношение времени и условий инактивации к степени очистки. 9.6 Когда оценивается степень очистки продукции во время производственного процесса от неспецифичных вирусов, следует обратить внимание на вирусы, не принятые во внимание во время планирования испытаний. 9.7 Испытание характеристик вирусного клиренса может быть дополнено результатами испытаний и исследований клеточных линий и необработанной массы клеток. Эти испытания должны быть выполнены, как описано в разделе 10. 9.8 В таблице А4 (приложение А) представлен пример плана действий по оценке и характеристики очистки от вирусов совместно с результатами испытаний на вирусы очищенной массы клеток, который основывается на результатах испытаний на вирусы клеточный линий и необработанной массы клеток. 9.9 Ниже рассмотрены разные варианты выполнения характеристики вирусного клиренса с использованием неспецифических модельных вирусов. Случаи A и Б наиболее обычны и часто встречаются в практике. Производственные системы, содержащие вирусы иные, нежели ретровирусы грызунов, обычно не используются. Однако если есть весомые причины использовать в производстве клеточные линии, подобные таковым в вариантах В, Г или Д, то окончательное решение принимается в индивидуальном порядке уполномоченными органами. Варианты В, Г, Д требуют в обязательном порядке разработки и применения на практике валидированных и высокоэффективных методов очистки и инактивации вирусов во время производственного процесса с учетом требований ТКП ХХХХ-ХХХХ Производство лекарственных средств. Контроль и критерии приемлемости для лекарственных средств и субстанций, полученных биотехнологическими способами и [3]. 9.9.1 Вариант А - в клетках и необработанной массе клеток не обнаружено вирусов вирусоподобных или ретровирусоподобных частиц. Следует выполнить испытания по очистке и инактивации вирусов с применением неспецифических модельных вирусов, как упомянуто выше. 8 ТКП/ПР_1 9.9.2 Вариант Б - обнаружены только ретровирусы грызунов или ретровирусоподобные частицы, для которых установлено, что они неопасны и непатогенны (например, частицы грызунов типов A и R). Оценка процесса вирусного клиренса должна быть проведена с применением специфичных модельных» вирусов, таких как вирус лейкемии мышей. Необходимо провести испытания на вирусы очищенной массы клеток с использованием подходящих методик с высокой специфичностью и чувствительностью. Для регистрации лекарственного средства должны быть приложены к досье результаты анализа как минимум трех проб, собранных во время опытно-промышленной или промышленной ферментации, Пример - леточные линии, такие как CHO, C127, BHK и клеточные линии мышиных гибридом часто используются для производства лекарств, и проблем с вирусной контаминацией при их использовании замечено не было. Для таких клеток, эндогенные частицы которых были хорошо охарактеризованы и клиренс был продемонстрирован, обычно нет необходимости анализа на присутствие неинфекционных частиц в очищенной массе клеток. Как и для случая А необходимы испытания с неспецифичными модельными вирусами. 9.9.3 Вариант В - в клетках или в необработанной массе клеток содержатся вирусы, иные нежели ретровирусы грызунов, для которых нет доказательств их инфекционной опасности для человека (см. приложение А сноску 2 таблицы А3, исключая вирусы грызунов (случай Б). Необходимо провести испытания удаления и инактивации с использованием идентифицированного вируса. При невозможности использования идентифицированного вируса необходимо использовать релевантные или специфические модельные вирусы для доказательства приемлемого уровня вирусного клиренса. К результатам этих испытаний должны прилагаться в обязательном порядке результаты временных испытаний удаления или инактивации с использованием идентифицированного вируса, либо при невозможности его использования, для релевантных или специфичных модельных вирусов. Для этого необходимы испытания очищенной массы клеток на вирусы с использованием подходящих методик с высокой специфичностью и эффективностью. Для регистрации лекарственного средства необходимо предоставить результаты испытаний как минимум трёх образцов очищенной массы клеток опытно-промышленной или промышленной ферментации. 9.9.4 Вариант Г - в клетках или в необработанной массе клеток обнаружен известный вирусный возбудитель заболевания человека, такой, как описанный в сноске 1 к таблице А3. Лекарственное средство может быть допущено к реализации только в исключительных случаях. Для оценки вирусной очистки и инактивации следует использовать высокоспецифичные методы анализа с высокой чувствительностью и тот же вирус, который был обнаружен. При невозможности использования того же вируса необходимо использовать релевантные и (или) специфические модельные вирусы. Во время процесса вирусной очистки обнаруженный вирус должен инактивироваться и удаляться. К результатам оценки процедуры вирусного клиренса необходимо прилагать кривую инактивации вируса от времени с указанием критических точек. Очищенная масса клеток должна быть проверена на присутствие обнаруженного вируса при помощи подходящих методик с высокой специфичностью и чувствительностью. В регистрационное досье на лекарственное средство необходимо внести результаты испытаний как минимум трех проб очищенной массы клеток, полученных в результате опытнопромышленной или промышленной ферментации. 9.9.5 Вариант Д - в клетках или неочищенной массе обнаружен вирус, который не может быть идентифицирован методиками, доступными на данный момент. Лекарственное средство обычно признают неприемлемым для использования, так как вирус может оказаться патогенным. 9 ТКП/ПР_1 В исключительных случаях, когда для использования такой клеточной линии в производстве есть обоснованные причины, этот вопрос может быть рассмотрен в соответствующих инстанциях. 10 Оценка и характеристика процедур вирусного клиренса 10.1Общие положения 10.1.1 При установлении безопасности биотехнологических лекарственных средств необходимо дать оценку и характеристику процедур инактивации и (или) удаления вирусов. Оценка эффективности вирусного клиренса дает уверенность в том, что неизвестные и неожиданные вредные вирусы будут удалены и обезврежены. Процесс испытания должен быть легко контролируемым и тщательно документироваться. 10.1.2 Испытания процесса очистки от вирусов должны включать: - оценку стадий производства, которые предположительно эффективны в отношении процесса вирусной очистки и удаления; - количественное установление уровня уменьшения содержания вирусных частиц. 10.1.3 Испытания могут быть проведены при помощи специального внесения некоторого числа вирусных частиц на начальных стадиях производства и (или) на других стадиях в различные среды и промежуточную продукцию, использующиеся в производстве, с целью демонстрации инактивации или удаления вирусов. 10.1.4 Если в процессе испытаний на некоторых стадиях производственного процесса показан адекватный уровень вирусного клиренса, то нет необходимости в оценке эффективности вирусной очистки всех стадий производства. 10.1.5 Производителю рекомендуется объяснить и доказать необходимость подходов, использованных для испытаний вирусного клиренса. 10.1.5 Снижение вирусной активности может быть достигнуто путем инактивации инфекционной способности вирусов или путем их удаления. Для каждой оцененной стадии производства следует установить механизм уменьшения содержания вирусов 10.1.6 Для оценки инактивационного типа вирусного клиренса, испытания должны быть спланированы таким образом, чтобы обеспечить отбор образцов промежуточной продукции в разное время и построение кривой зависимости степени инактивации вирусов от длительности процесса инактивации. 10.1.7 Испытания вирусного клиренса главным образом проводятся для демонстрации инактивации или удаления вирусов, присутствие которых в ГКБ известно или предполагается, и для обеспечения определенной степени уверенности в том, что вирусы, которые, возможно, не были обнаружены или были занесены в процессе производства, также будут инактивированны или удалены. Обычно удалить или инактивировать вирусы полностью до нулевого значения невозможно, однако возможно добиться почти полной их инактивации или удаления. 10.1.8 Одновременно с испытаниями вирусного клиренса для вирусов, присутствие которых в клеточных линиях, используемых в производстве, известно, необходимо проводить испытания на предмет клиренса и других вирусов. Для этого применяются вирусы с другими биохимическими и биофизическими свойствами, чем у ожидаемых вирусов. Такие испытания проводятся с целью показать устойчивость производства к непредвиденным обстоятельствам. Желательна демонстрация способности производственного процесса удалять или инактивировать вирусы (см. раздел 10.4). 10.2 Выбор вирусов для оценки и характеристики вирусного клиренса Для испытаний клиренса следует выбирать вирусы так, чтобы имитировать вирусы, которые могут контаминировать продукцию, и чтобы представить вирусы широкого спектра физико-химических свойств для оценки способности системы элиминировать вирусы в целом. Производитель должен подбирать вирусы в соответствии с целями испытаний и требованиями этого руководства. 10.2.1 Релевантные» и модельные вирусы Выбор вирусов, которые будут использованы в испытаниях вирусного клиренса — значимая часть в подготовке к этим испытаниям. Такие вирусы подразделяются на три категории: - релевантные вирусы; 10 ТКП/ПР_1 - специфичные модельные» вирусы; - неспецифичные модельные вирусы. 10.2.1.1 Релевантные вирусы используются в процессе оценки вирусного клиренса вирусов, идентичных либо тех же видов, как и вирусы, присутствие которых в клеточных штаммах либо любых других материалах и промежуточной продукции производства известно или предполагается. Желательно продемонстрировать процессы инакивации (удаления) таких вирусов. Если релевантный вирус недоступен или такой вирус невозможно применять в оценочных испытаниях (например, этот вирус невозможно культивировать in vitro до достаточно высокого титра), в качестве замены необходимо использовать спецефичные модельные вирусы. 10.2.1.2 Подходящий спецефичный модельный вирус должен быть близко родственным к известному или предполагаемому вирусу (тот же род или семейство), а также должен иметь подобные физические и химические свойства. Примеры 1 Клеточные линии, выделенные из грызунов, обычно содержат эндогенные ретровирусы или ретровирусоподобные частицы. Они могут быть инфекционными (частицы С-типа) или неинфекционными (цитоплазматические частицы А- и R-типа). Должна быть определена способность производственного процесса удалять и (или) инактивировать ретровирусы грызунов из продуктов, полученных от таких клеток. Это можно сделать с использованием вируса лейкемии мышей, который является специфическим модельным вирусом для клеток мышиного происхождения. 2 Если при производстве моноклональных антител используются человеческие клеточные линии, полученные иммортолизацией B-лимфоцитов при помощи вируса Эпштейна-Барра (EBV), то необходимо определить способность производства удалять (инактивировать) вирус герпеса. 3 Ложный вирус бешенства так же может быть использован как специфический модельный вирус. 10.2.1.3 Если целью исследований является характеристика способности производственного процесса удалять или (и) инактивировать вирусы в общем, характеризующие исследование вирусного клиренса должно быть выполнено при помощи неспецифичных «модельных» вирусов с различными свойствами. Этому исследованию может в некоторой степени содействовать информация, полученная при помощи релевантных и (или) модельных вирусов. В тестировании всех типов вирусов обычно нет необходимости. Предпочтение должно быть отдано вирусам, которые демонстрируют значительную устойчивость к физическим и/или химическим воздействиям. Результаты, полученные при помощи таких вирусов, обеспечивают полезную информацию о способности производственного процесса удалять и/или инактивировать вирусы в общем. Выбор штаммов вирусов и их количество зависит от качества и характеристики клеточных линий и производственного процесса. Примеры полезных модельных вирусов с различными спектрами физико-химических свойств и примеры вирусов, которые были использованы в изучении вирусного клиренса приведены в приложении Б и таблице Б1. 10.2.2 Информация для производителя 10.2.2.1 Если возможно, следует использовать вирусы, которые могут размножаться до высоких концентраций; 10.2.2.2 Для каждого вируса, использующегося в испытаниях, необходимо разработать высокочувствительную и специфическую методику определения, которая обладает высокой степенью достоверности на всех тестируемых стадиях производства; 10.2.2.3 Особое внимание необходимо уделить безопасности персонала во время проведения испытаний с использованием вирусов. 10.3 Разработка и проведения испытаний оценки и характеристики вирусного клиренса 10.3.1 Оборудование и персонал 10.3.1.1 Согласно требованиям GMP, установленным ТКП 030-ХХХХ Производство лекарственных средств. Надлежащая производственная практика (GMP), нельзя вносить какие-либо вирусы в производственное оборудование, поэтому, испытания вирусного клиренса необходимо проводить в отдельной лаборатории, оборудованной для работы с вирусами. 10.3.1.2 Испытания должны проводиться лабораторным персоналом вместе с производственным персоналом, для того, чтобы разработать и провести расширенные исследования. 11 ТКП/ПР_1 10.3.2 Масштабируемые производственные процессы 10.3.2.1 Масштабируемый процесс опытного или опытно-промышленного производства должен быть валидирован с учетом требований [3]. 10.3.2.2 Степень очистки промежуточной продукции от вирусов в масштабируемом процессе должна быть воспроизведена как можно более близко к таковой реального промышленного производстве. 10.3.2.3 Необходимо воспроизводить как можно близко к реальному промышленному производству такие параметры, как хроматографические процедуры, буферы, типы гелей, pH, температуры, концентрации белков, концентрации солей, концентрации конечной продукции и др. Все остальные процедуры и параметры масштабируемого процесса, для его качественного воспроизведения, необходимо подбирать и устанавливать как можно ближе к таковым в реальном производстве. 10.3.2.4 Любое отклонение параметров и режимов ведения процесса от реального промышленного производства должно быть обосновано с обращением особого внимания на влияние отклонения на процесс очистки. 10.3.3 Анализ пошагового удаления вирусов 10.3.3.1 Когда испытания вирусного клиренса выполнены, необходимо оценить вклад в очистку от вирусов отдельных стадий удаления вирусов. Стадии, которые предположительно влияют на вирусный клиренс, должны быть детально проанализированы в индивидуальном порядке на способность удалять (инактивировать) вирусы. 10.3.3.2 В материалах и промежуточной продукции, используемых на каждой испытываемой стадии очистки должны содержаться вирусы в количестве, достаточном для точной оценки эффективности этой стадии. Обычно это достигается дополнительным внесением вирусов на каждой испытываемой стадии, но в некоторых случаях возможно добавление большой концентрации суспензии вирусов в необработанную массу и определение их концентрации после отдельных стадий. 10.3.3.3 В случае удаления вирусов в ходе процедуры очистки рекомендуется, если это возможно, провести оценку удаления вирусов, внесённых теми или иными материалами, промежуточной продукцией и т. п. 10.3.3.4 Если используются вируцидные буферы на отдельных стадиях производственного процесса, то нужно провести параллельные измерения с меньшим количеством вируцидного буфера для более детальной и полной оценки. При этом должен быть точно установлена концентрация вирусов до и после каждой испытываемой стадии. 10.3.3.5 Для обеспечения достоверности и точности полученных данных количественные инфекционные испытания должны иметь приемлемую чувствительность и воспроизводимость, а также должны проводиться с достаточным числом повторных измерений. 10.3.3.6 Во всех инфекционных методиках для подтверждения высокой чувствительности должны применяться контрольные образцы соответствующих вирусов. При условии валидирования. возможно применение методик количественного определения вирусов, не связанных с инфицированием. 10.3.3.6 Должна быть проведена статистическая обработка данных отбора образцов при низкой концентрации вирусов (приложение В). 10.3.4 Сопоставление физического удаления вирусов с инактивацией вирусов 10.3.4.1 Уменьшение вирусной активности может быть получено путем удаления вирусов или путем их инактивации. Для каждой анализируемой стадии производства необходимо описать возможный механизм уменьшения вирусной активности с указанием, к какому типу механизм принадлежит – к инактивации или удалению. 10.3.4.2 Если в процессе испытаний установлено, что уровень вирусного клиренса, достигнутый в процессе производства небольшой, и если отсутствие вирусов — главный фактор безопасности продукции, необходимо внести в производственный процесс дополнительные стадии вирусной инактивации или вирусного удаления. 10.3.4.3 В некоторых случаях, когда на одной и той же стадии производства осуществляется удаление и инактивация вирусов, необходимо установить вклад в уменьшения вирусной активности каждого из этих процессов. 12 ТКП/ПР_1 Пример – Следует оценить вклад в уменьшения вирусной активности применяемого вируцидного буфера и хроматографической очистки. 10.3.5 Оценка инактивации 10.3.5.1 Для оценки инактивации вирусов в необработанный исходный материал или в промежуточную продукцию производства вносят вирус, затем рассчитывают показатель уменьшения вирусной активности. 10.3.5.2 Инактивация вирусов – не простая реакция первого порядка, а более сложная, с быстрой фазой 1 и медленной фазой 2. Поэтому испытания следует планировать таким образом, чтобы точки времени отбора образцов были пригодны для построения точной кривой процесса инактивации. Целесообразно провести исследования по инактивации, в которых одна точка кривой процесса инактивации находилась бы в промежутке от нулевого значения до минимального времени обработки. а другая – соответствовала бы минимальному времени обработки. 10.3.5.3 Дополнительная информация очень важна при разработке процесса инактивации с использованием релевантного вируса, который является патогенным для человека, поскольку в этом случае необходим эффективный процесс его инактивации. 10.3.5.4 При использовании неспецифических модельных вирусов и специфических модельных вирусов, используемых в качестве образцов сравнения для вирусных частиц, таких как CHO внутрицитоплазматические ретровирусоподобные частицы, воспроизводимый вирусный клиренс должен быть продемонстрирован не менее чем в двух независимых испытаниях; 10.3.5.5 Начальное содержание вирусов в промежуточной продукции должно быть количественно определено непосредственно после внесения. Если такой возможности нет, то расчёт количества вводимых вирусов можно провести, исходя из концентрации частиц в используемом вирусном препарате. 10.3.5.6 Если инактивационный процесс при построения инактивационной кривой протекает очень быстро, должен быть выполнены необходимые контролные испытания, чтобы показать, что вирусная активность действительно уменьшилась из-за инактивации вирусов. 10.3.6 Назначение и регенерация колонок 10.3.6.1 С течением времени и вследствие постоянного использования может изменяться качество хроматографических колонок и другого оборудования, использующихся в схеме очистки для удаления вирусов. Оценка вирусного клиренса после нескольких использований может содействовать получению подтверждения возможности повторного использованию таких колонок или другого оборудования для проведения процесса очистки от вирусов. 10.3.6.2 В ходе проведения испытаний процедуры очистки и регенерации оборудования необходимо удостовериться, что любой вирус, который, возможно, остался в производственном оборудовании, удалён или разрушен до его повторного использования. 10.3.7 Особые предосторожности 10.3.7.1 Во время подготовки растворов с высокой концентрацией частиц вируса следует избегать их агрегации, так как это влияет науменьшение вирусной активности — усиливает физическое удаление вирусов и ослабляет влияние инактивации, что может привести к отличиям условий проведения испытаний от таковых в реальнос промышленном производстве. 10.3.7.2 Следует принять во внимание минимальное количество вирусов, которое может быть достоверно проанализировано. 10.3.7.3 Во время испытаний необходимо выполнять параллельные контрольные определения для оценки потери вирусной активности из-за таких причин как растворение, концентрирование, фильтрация или хранение образцов до титрования; 10.3.7.4 Вирусы нужно вносить в промежуточную продукцию в малом объёме жидкости, чтобы не разбавить или изменить ее характеристики. Разбавленный образец не может считаться идентичным конечной продукции, полученной в реальном производстве; 10.3.7.5 На вирусный клиренс могут иметь существенное влияние небольшие изменения в буферах, средах или реагентах; 10.3.7.6 Инактивация вирусов зависит от времени, поэтому количество времени, которое промежуточная продукция с вирусом находится в определенном буферном растворе или в отдельной хроматографической колонке, должно соответствовать условиям реального производства; 13 ТКП/ПР_1 10.3.7.7 Буферы и промежуточная продукция должны быть независимо проверены на токсичность или на свойства, препятствующие процедурам, использующимся для определения концентрации вирусных частиц, так как эти компоненты могут негативно влиять на индикаторные клетки. Если растворы токсичны по отношению к индикаторным клеткам, должны быть предприняты дополнительные меры (например, растворение, доведение pH или диализ буфера, содержащего вирусы). В случае, если промежуточная продукция сама по себе проявляет антивирусную активность, возможно испытания вирусного клиренса следует проводить без промежуточной продукции, во время контрольного испытания, несмотря на то, что исключение промежуточной продукции или замена ее на подобный белок без антивирусной активности может иметь влияние на вирусную активность на некоторых стадиях производства. В программу испытаний вирусного клиренса необходимо включить испытания для демонстрации влияния процедур пробоподготовки (диализ, хранение) на инактивацию (удаление) вирусов; 10.3.7.8 Многие схемы очистки от вирусов используют буферы или колонки повторно. Влияние таких действий необходимо принимать во внимание во время анализа результатов. Эффективность вирусной инактивации (удаления) в ходе того или ного процесса может изменяться в зависимости от стадии производства, на которой он используется; 10.3.7.9 Факторы уменьшения вирусной активности могут быть неправильно оценены в тех случаях, когда производственные условия или буферы токсичны для клеток или вируцидны. Они должны быть рассмотрены в отдельном для каждого случае порядке. 10.4 Интерпретация исследований вирусного клиренса. Приемлемость 10.4.1 Объект испытаний вирусного клиренса — оценка и характеристика стадий процесса, которые могут быть эффективными в инактивации (удалении) вирусов. Так же целью исследований является количественная оценка общего уровня уменьшения вирусной активности в конце производственного процесса. В случае вирусной контаминации, указанной в 9.9 (варианты Б — Д), важно показать, что вирусы не только удаляются или инактивируются в процессе производства, но и то. что применяемый в производстве процесс очистки от вирусов обеспечивают необходимый уровень безопасности конечной продукции. 10.4.2 Необходимо сопоставить количество вирусов, которое было удалено в процессе производства, с количеством вирусов, которые могут присутствовать в необработанной массе клеток. Для выполнения этого сравнения важно установить количество вирусов в необработанной массе клеток. Это достигается при помощи испытаний ее на инфекционную активность или другими методами, например, электронной микроскопией. 10.4.3 Весь процесс очистки должен обеспечивать удаление большего количества вирусов, чем предполагаемое количество вирусов в эквивалентном количестве необработанной массы клеток. Для расчета показателей уменьшения вирусной активности необходимо использовать приложение Г, для расчета предполагаемого количества частиц на дозу – приложение Д. 10.4.4 Производитель должен учитывать, что механизмы вирусного клиренса могут быть различными для разных классов вирусов. Во время обсуждения информации об эффективности процедур вирусной инактивации (удаления) необходимо рассмотреть комбинации следующих факторов: 1) пригодность использованных контрольных вирусов; 2) план испытаний вирусного клиренса; 3) достигнутый уровень уменьшения вирусной активности; 4) зависимость уменьшения вирусной активности от времени процедуры инактивации; 5) потенциальное влияние колебаний параметров производства на вирусную инактивацию (удаление); 6) пределы чувствительности методик; 7) возможная селективность процедур инактивации (удаления) вирусов для определённых классов вирусов. 10.4.5 Эффективный вирусный клиренс может быть получен любым из следующих путей: - множественными инактивационными этапами; - множественными дополнительными этапами отделения; - комбинацией инактивационного этапа и этапа отделения 10.4.6 Так как методы отделения могут зависеть от чрезвычайно специфических физикохимических свойств вирусов, которые влияют на взаимодействие частиц с гелевой матрицей или 14 ТКП/ПР_1 свойств преципитации, Поэтому модельные вирусы могут отделяться иным образом нежели исследуемый вирус. В силу этих причин, необходимо определить и контролировать параметры производственного процесса, влияющие на отделение вирусов. 10.4.7 Варьирование результатов испытаний может появляться из-за изменений в свойствах поверхности клеток, таких как гликозилирование. Несмотря на это, эффективный вирусный клиренс должен быть достигнут путем комбинации повторяющихся этапов отделения вирусов, либо комбинации этапов инактивации и отделения вирусов. Поэтому производитель должен детально разработать процессы отделения, такие как хроматографические процедуры, фильтрация или экстракция, и проводить их в определенных подходящих и контролируемых условиях. 10.4.8 Эффективный этап удаления вирусов должен показать повторяемое уменьшение вирусной активности как минимум в двух независимых испытаниях. 10.4.9 Общий показатель уменьшения вирусной активности обычно выражается как сумма индивидуальных показателей. Тем не менее, редукция вирусного титра порядка 1 log10 или меньшая должна быть рассмотрена как незначительная, и ее следует игнорировать до тех пор, пока не будет обосновано обратное. 10.4.10 Необходимо внедрять дополнительные стадии инактивации (удаления0 вирусов, если сам по себе производственный процесс обеспечивает небольшое уменьшение вирусной активности и удаление вирусов является важным фактором безопасности конечной продукции. 10.4.11 Для болезнетворных вирусов производитель должен доказать приемлемость полученного уровняуменьшения вирусной активности. Результаты необходимо оценить с учетом требований 10.4. 10.5 Пределы методик испытаний вирусного клиренса 10.5.1 Испытания вирусного клиренса дают некоторую гарантию приемлемого уровня безопасности конечной продукции, но сами по себе они безопасность необеспечивают. Производителю следует обратить внимание на перечисленные ниже факторы при разработке и проведении испытаний вирусного клиренса, которые могут привести к неправильной оценке способности производственного процесса к вирусной редукции. 10.5.2 Вирусный препарат, использованный для испытаний процесса производства, возможно был получен из культуры ткани. Поведение вируса, полученного из такой культуры, может отличаться от поведения очищенного вируса, например, различия могут быть в чистоте или степени агрегации. 10.5.3 Инактивация вирусной активности часто происходит в два этапа: - быстрой начальная фаза; - медленная фаза. Вирусы, избежавшие первой фазы, могут быть более устойчивы во второй фазе. Пример - если устойчивая фракция принимает форму агрегатов вирусных частиц, то они (могут быть устойчивы к широкому спектру различных химических воздействий и нагреванию. 10.5.4 Способность всего процесса производства удалять вирусы выражается как сумма логарифмов значений уменьшения вирусной активности на каждом этапе. Суммирование показателей уменьшения вирусной активности множества различных этапов вирусного клиренса, особенно этапов с небольшими показателями уменьшения вирусной активности (1 log 10 и ниже), может привести к переоценке способности вирусного удаления. Кроме того, показатели уменьшения вирусной активности, полученные от повторяющихся или очень похожих этапов, не должны приниматься в расчет до тех пор, пока не будут проверены. 10.5.5 Выражение показателя уменьшения вирусной активности как логарифма уменьшения концентрации вирусных частиц подразумевает то, что остаток вирусной активности может быть значительно уменьшен, но никогда не достигнет нуля. К этому следует еще учесть предел обнаружения методик. Пример – уменьшения вирусной активности препарата, содержащиего 8 log10 инфекционных агентов на 3 3 3 см фактором 8 log 10 в итоге оставляет 0 log 10 на см , то есть 1 инфекционная частица на см . 10.5.6 Суммирование отдельных показателей уменьшения вирусной активности, полученных на отдельных стадиях инактивации (удаления) в течение производственного процесса, может привести к переоценке общего вирусного клиренса. 15 ТКП/ПР_1 10.6 Статистическая обработка результатов Испытания вирусного клиренса должны включать использования статистических методов анализа данных при обработки результатов. Для подтверждения полученного заключения результаты должны быть статистически достоверными. (См. Приложение В) 10.7 Повторения испытаний вирусного клиренса В случае значительных изменений производства или процесса очистки влияние этих изменений на вирусный клиренс, как прямой, так и непрямой, должен быть рассмотрен, и при необходимости, испытания должны быть повторены. 16 ТКП/ПР_1 Приложение А (рекомендуемое) Таблица А1 – Испытания на вирусы, которые должны быть однократно проведены на клетках разных уровней Методики испытаний Уровень клеток ГБК Испытания на ретровирусы и другие эндогенные вирусы Вирусная активность Электронная микроскопия2 Обратная транскриптаза3 Другие вирусоспецифичные испытания4 Испытания на неэндогенные или случайные вирусы Испытания In vitro5 Испытания In vivo6 Испытания продуцирования антител6 Иные вирусспецифические испытания7 РБК Посевная клеточная культура1 + + + + - + + + + + + + - + - + - - Примечания 1 См. 7.5 2 Может также определять другие агенты 3 Тест необходим при отрицательном тесте на ретровирусы 4 Проводится для клеточных линий, инфицированных такими агентами. 5 Для первого РКБ; для посевной клеточной культуры, полученных из этого РКБ; для последующих РКБ, полученных из первого РКБ одно из испытаний in vitro и in vivo может проводиться на клетках РКБ или на клетках посевной клеточной культуры. 6 Например, MAP, RAP, HAP — обычно применимы для линий клеток грызунов. 7 Например, испытания клеточных линий человка, приматов и других клеток, если приемлемо 17 ТКП/ПР_1 Таблица А2 - Примеры использования и ограничения методик, которые могут быть использованы для определения вирусов Методика испытания Объект тестирования Что определяет Что не определяет Продукция антител Лизат клеток и их культуральная жидкость Специфические вирусные антигены Антигены не инфекционные для животных Cкрининг вирусов in vivo - Характеристика клеточного банка Анализ продукции Широкий спектр Агенты, не способные вирусов, патогенных реплицироваться или для человека вызывать болезнь в испытываемых объектаъ Лизат клеток и их культуральная среда (для совместного культивирования интактные клетки должны быть в испытываемом объекте) - - Собранная необработанная масса или лизат клеток и их культуральная среда из производственного реактора - - Электронная микроскопия: - Вирусы и вирусоподобные частицы Количественное определения вместе с идентифицированием клеточный субстрат Живые клетки - - надосадочная жидкость клеточного субстрата Надосадочная жидкость клеточного субстрата - - Обратная транскриптаза Бесклеточная надосадочная жидкость Ретровирусы и экспрессированные обраьные транскриптазы ретровирусов Определяет только ферменты с оптимальной активностью при определенных условиях. Интерпретация может быть осложнена присутствием клеточных ферментов, Контроль с несколькими концентрированными образцами Ретровирусная активность Бесклеточная надосадочная жидкость Инфекционные ретровирусы Ретровирусы, неспособные к репликации 18 ТКП/ПР_1 Окончание таблицы А2 Методика испытания Объект тестирования Что определяет Что не определяет Совместное культивирование Живые клетки Инфекционные ретровирусы Ретровирусы, неспособные к репликации ретровирусная активность - - См. выше для испытаний на ретровирусную активность объекты при электронном микроскопировании - - См. выше для испытаний с применением электронной микроскопии* вещества, определяемые в испытаниях на наличие обратной транскриптазы - - См. выше для испытаний на наличие обратной транскриптазы ПЦР Клетки, культуральная жидкость или другие материалы Специфические вирусные последовательности Должна быть известна последовательность праймера. Не обнаруживает инфекционность вируса. Примечание - * Дополнительно тяжело отличить испытываемый объект от индикаторных клеток 19 ТКП/ПР_1 Таблица А3 - Вирусы, определенные при помощи теста продукции антител MAP HAP RAP Ectromelia Virus23 Lymphocytic Choriomeningitis Virus (LCM)1,3 Hantaan Virus1,3 Hantaan Virus 1,3 Pneumonia Virus of Mice (PVM)2,3 Kilham Rat Virus (KRV)2,3 K Virus 2 Reovirus Type 3 (Reo3)1,3 Lactic Dehydrogenase Virus (LDM)13 Sendai Virus1,3 Lymphocytic Chorio-meningitis Virus (LCM)1,3 SV5 Mouse Encephalomyelitis Virus (Theilers, GDVII)2 Pneumonia Virus of Mice (PVM)2,3 Rat Coronavirus (RCV)2 Minute Virus of Mice 2,3 Mouse Adenovirus (MAV)2,3 Reovirus Type 3 (Reo3)1,3 Mouse Cytomegalovirus (MCMV)2,3 Sendai Virus1,3 Mouse Encephalomyelitis Virus (Theilers, GDVII)2 Sialoacryoadenitis Virus (SDAV) 2 Toolan Virus (HI)2,3 Mouse Hepatitis Virus (MHV)2 Mouse Rotavirus (EDIM)2,3 Pneumonia Virus of Mice (PVM)2,3 Polyoma Virus 2 Reovirus Type 3 (Reo3)13 Sendai Virus1,3 Thymic Virus 2 Примечания 1 Вирусы с известной способностью инфицировать людей или приматов 2 Вирусы с недоказанной способностью инфицировать человека 3 Вирусы способные к репликации in vitro в клетках человека или приматов 20 ТКП/ПР_1 Таблица А4 - План процесса оценки вирусного клиренса и испытания промежуточной продукции на наличие вирусов 2 2 Вариант А Вариант Б Вариант В Вариант 2 Г Вариант Д - - + + (+) 3 Вирусо-подобные частицы - - - - (+) 3 Ретровирусо-подобные частицы - + - - (+) 3 Идентифицированные вирусы Не + применимо + + - Вирусы-патогены человека Не применимо 4 + неизвестно Статус 1 Присутствие вирусов 1 4 - Действия Характеристика вирусного клиренса с да использованием не специфичных «модельных» вирусов 5 да Оценка вирусного клиренса с использованием нет релевантных или специфических «модельных» вирусов да Тест на вирусы в очищенной массе 5 5 да 6 да 8 да да 6 да 8 да Не да применимо 5 да 7 6 да 8 да 7 8 Примечания 1 Результаты тестирования на вирусы клеточного субстрата и (или) необработанной массы клеток. Клеточные культуры, загрязнённые вирусами, обычно неприемлемы для производства. Эндогенные вирусы (ретровирусы, например) или вирусы, интегрированные в ГКБ, могут быть приемлемыми при наличии подходящих процедур клиренса. 2 Использование исходных материалов, загрязненных вирусами, как инфекционными и \ или патогенными для человека или нет, разрешается только в очень редких случаях при исключительных обстоятельствах 3 Вирусы были выявлены как прямыми, так и непрямыми методами 4 Скорее всего, не патогенные 5 Характеристика клиренса с использованием неспецифичных модельных вирусов должна быть проведена 6 Оценка вирусного клиренса с использованием «релевантных» или специфичных «модельных» вирусов должна быть проведена 7 Смотри текст вариант Д 8 Отсутствие вирусов в очищенной массе должно быть подтверждено с использованием подходящих методов с высокой специфичностью и чувствительностью. Для регистрации лекарственного средства должны быть представлены результаты испытаний как минимум трех образцов очищенной массы клеток, наработанной в промышленном или опытнопромышленной производстве. Тем не менее, обычно не требуется проведение тестов на присутствие неинфекционных частиц в очищенной массе для отдельных клеточных линий, таких как CHO, для которых эндогенные частицы были тщательно проанализированы и охарактеризованы и адекватный вирусный клиренс был продемонстрирован. 21 ТКП/ПР_1 Приложение Б (рекомендуемое) Выбор вирусов для испытаний вирусного клиренса Производитель вправе выбрать приведенные здесь или другие вирусы, особенно если это необходимо для индивидуальных особенностей его производства. Обычно производство должно быть оценено на вирусный клиренс при помощи как минимум трех вирусов с различными свойствами. 1. Примеры полезных модельных вирусов а) Неспецифические модельные вирусы с широким спектром физико-химических свойств: - SV40 (Polyomavirus maccacae 1), вирус полиомиелита человека 1 (Sabin), парвовирусы животных или другие небольших размеров вирусы без оболочки. - Вирус парагриппа (parainfluenza) или гриппа, Sindbis вирус или другой вирус среднего размера, с оболочкой и РНК в качестве генетического материала. - Вирус герпеса (HSV-1 или pseudorabies вирус), или другой ДНК-вирус среднего размера. Эти вирусы -- только примеры, и их применение не обязательно. б) Для клеточных субстратов, полученных из грызунов, обычно используют мышиный ретровирус как специфический модельный. 2. Примеры вирусов, которые были использованы в испытаниях вирусного клиренса. Несколько вирусов, использованных в испытаниях вирусного клиренса, перечислены в таблице Б-1. 22 ТКП/ПР_1 Таблица Б1 – Примеры вирусов, которые были использованы в испытаниях вирусного клиренса Вирус Vesicular Семейство Paramyxo Род Природный Гехозяин ном Энвазивность Размер (нм) Форма Vesiculovirus Лошади, РНК да крупнорога тый скот 70х150 Parainfluenza virus Paramyxo Paramyxovirus Различные РНК да 100-200+ Плеосфера низкая MuLV Retro Онковирусы тип C Мыши РНК да 80-110 Сфера низкая Sindbis virus Toga Alphavirus Человек РНК да 60-70 Сфера низкая BVDV Flavi Pestvirus Крупнорогатый скот РНК да 50-70 Плеосфера низкая Pseudorabies Herpes Свиньи ДНК да 120-200 Cфера средняя stomatitis virus Пуля Устойчивость * низкая virus Poliovirus Sabin Picorna Cardiovirus Мыши РНК нет 25-30 Икосаэдр средняя Encephalomyocar- Picorna Cardiovirus Мыши РНК нет 25-30 Икосаэдр средняя Type 1 ditis virus (EMC) Reovirus 3 Reo Orthoreovirus Различные ДНК нет 60-80 Сфера средняя SV40 Papova Polyomavirus Обезьяны ДНК нет 40-50 Икосаэдр очень высокая Parvoviruses Parvo Parvovirus Собаки, свиньи ДНК нет 18-24 Икосаэдр очень высокая (собачий, свиной) * Устойчивость к физико-химическим воздействиям, на основании исследованияй процесса очистки. Устойчивость относится к специфическим воздействиям. Актуальные результаты варьируют в зависимости от воздействия. Эти вирусы -- только примеры, и их использование не обязательно. 23 ТКП/ПР_1 Приложение В (обязательное) Статистическая обработка результатов тестов на вирусы При установлении концентрации вирусов возникают проблемы колебаний величин, общие для всех биологических тестовых систем. Необходимо выполнить расчёт точности подсчёта концентрации вирусов и основанных на нем показателей уменьшения вирусной активности и достоверности методик, для установления достоверности испытаний. Целью статистической оценки является установление того факта, что испытания были выполнены с допустимым уровнем вирусологической компетенции. 1. Методики анализа могут быть как квантальными (quantal — все или ничего (в биологии), имеется в виду испытания с двумя вариантами результатов: положительный и отрицательный) так и количественными. Квантальные методы включают испытания инфекционной способности на животных или тканях TCID (tissue-culture-infectious-dose), в которых проверяют, инфицировано животное или культура клеток или нет. Инфекционную активность потом устанавливают по пропорции инфицированных животных или культур. При количественном измерении инфекционная способность зависит от количества внесённого вируса. Количественные методы включают анализ чашек с зонами лизиса, где каждая зона лизиса соответствует одной инфекционной единице. Как квантальные, так и количественные методики подлежат статистической обработке. 2. В результате ошибок разведения, статистических эффектов, различий между аналитическими системами, которые неизвестны или тяжело контролируемы, возникают вариации в результатах анализов. Когда обрабатываются результаты нескольких отдельных тестов, эти вариации более заметны (межтестовые вариации), чем когда обработке подвергаются результаты одного теста (внутритестовые вариации). 3. Доверительный интервал измерения внутри одного теста не должен превышать +/- 0.5 log10 (среднего значения). Внутритестовые вариации могут быть оценены при помощи стандартных, описанных в учебниках, методов. Межтестовые вариации могут быть контролируемыми путём включения стандартного расчёта, доверительный интервал измерения относительно которого не должен превышать +/- 0.5 log10. Менее достоверные результаты анализов могут быть приемлемыми только с соответствующими доказательствами. 4. Для факторов редукции, рассчитанных при изучении клиренса «релевантных» и «специфичных» модельных вирусов, необходимо рассчитывать 95% лимит достоверности, везде, где это возможно. 95 % предел достоверности для фактора редукции (t) высчитывается по формуле: p S 2 a2 , (В.1) где +S—95%-ный лимит достоверности для испытаний на вирусы начального сырья, а –95%-ный лимит достоверности для испытаний на вирусы промежуточной продукции после стадии Возможность обнаружения низкой концентрации вирусов Естественно, что при низких концентрациях вирусов (то есть от 10 до 1000 инфекционных частиц на дм3) образец объемом несколько см3 может и не содержать вирусы. Вероятность того, что этот образец не содержит вирусы (p), рассчитывается так: V v n p , (В.2) V где V -- это весь объем тестируемого материала в дм3, v — объем образца в дм3 и n - абсолютное число инфекционных частиц, статистически распределённых в объеме V. 24 ТКП/ПР_1 Если V намного больше v , это уравнение может быть аппроксимировано распределением Пойзана p e cv , (В.3) где с — концентрация инфекционных частиц на дм3, или c ln p v , (В.4) Пример В качестве примера, тестируется образец объёмом 1 см3, вероятность р при вирусной концентрации от 10 до 1000 инфекционных частиц на дм3 составляет: с 10 100 1000 p 0,99 0,9 0,37 Здесь видно, что при концентрации 1000 вирусов на дм3 в образце, с вероятностью 37% можно утверждать, что в 1 см3 не будет вирусов. Если на вирусы тестируется небольшое число образцов, количество вирусов, которое может присутствовать во всем объёме, должно быть рассчитано, принимая во внимание эту величину(p) для получения правильных результатов. Лимит достоверности в 95% желателен, однако, в некоторых случаях, это невозможно из-за небольшого количество материала. 25 ТКП/ПР_1 Приложение Г (рекомендуемое) Расчёт факторов редукции в испытаниях для определения вирусного клиренса Показатель уменьшения вирусной активности индивидуального этапа очистки или инактивации определяется как log10 отношения количества вирусов в материале перед процессом очистки или инактивации и в материале, который уже готов к следующей стадии производства после этого процесса. Индивидуальный фактор редукции Ri рассчитывается согласно следующему уравнению: Ri v / 10 a / , (Г.1) // v // 10 a где исходный материал: объем v'; титр 10a'; количество вирусов: (v')(10a'), конечный материал: объем v"; титр 10a", количество вирусов: (v")(10a"), Эта формула принимает в расчёт как титры так и объёмы материала до и после очистительной стадии. Из-за неточности титрования некоторых вирусов, от которой никак не избавиться, для расчёта общего фактора редукции принимаются только индивидуальные факторы редукции большие, чем 1. Общий фактор редукции полного процесса очистки — это сумма логарифмов факторов редукции отдельный стадий. Это представляет логарифм соотношения количества вирусов вначале первой стадии процесса клиренса к количеству вирусов в конце последний стадии. Фактор редукции обычно выражается логарифмическим масштабированием, что означает что вирусная активность никогда не будет уменьшена до нуля, но может к нему быть приближена. 10 26 ТКП/ПР_1 Приложение Д (рекомендуемое) Подсчёт предполагаемых частиц на дозу Данное приложение применимо к вирусам, для которых может предположение о начальном количестве — таких как эндогенные ретровирусы. Расчёт предполагаемого количества частиц на дозу (N): N C V p , быть сделано (Д.1) где C - измеренная или предполагаемая концентрация вируса в собранной клеточной культуре, частиц вируса на см3; p - рассчитанный фактор вирусного клиренса; V - объем собранной культуры, необходимый для того, чтобы сделать дозу продукта, см3/доза . Пример: Предположения 6 3 C=10 частиц/см ; 15 p=> 10 ; V= 1 дм3 (103 см3) . Решение: 10 6 6 6 10 3 1015 10 Таким образом, ожидается менее чем одна частица на миллион доз. 27 ТКП/ПР_1 Библиография [1] ICH Q5A Guide, October 1997 (Руководство ICH Q5A, октябрь 1997) [2] Государственная фармакопея Республики Беларусь, Том 1 Общие методы контроля качества лекарственных средств. Минск: «МГПТК полиграфии», 2006 [3] CPMP/BWP/268/95 3AB8A Committee for Рroprietary Medicinal Products, London, February 1996 (Комитет по патентованным лекарственным средствам для человека, Лондон, февраль 1996) 28 Quality of biotechnological products: viral safety evaluation of biotechnology products derived from cell lines of human or animal origin (Качество биотехнологических лекарственных средств: оценка безопасности вирусного заражения биотехнологических лекарственных средств, полученных на основе клеточных линий человеческого и животного происхождения) Неофициальный перевод УП «ЛОТИОС» Перевод с английского языка (en) Note for guidance on virus validation studies: The design, contribution and interpretation of studies validating the inactivation and removal of viruses. (Примечание к руководству по валидационным исследованиям вирусов: Разработка, проведение и интерпретация исследований по валидации инактивации и удаления вирусов) Неофициальный перевод УП «ЛОТИОС» Перевод с английского языка (en) ТКП/ПР_1 Директор УП «ЛОТИОС» Гапанович В.Н. Научный руководитель разработки, заведующий отделом промышленной биотехнологии УП «ЛОТИОС» Научный руководитель разработки, зам. директора по научной работе УП «ЛОТИОС» Заместитель заведующего отделом промышленной биотехнологии УП «ЛОТИОС» Белявский К.М. Старший научный сотрудник отдела промышленной биотехнологии УП «ЛОТИОС» Семашко И.В. Научный сотрудник отдела промышленной биотехнологии УП «ЛОТИОС» Качанова Н.А. Научный сотрудник отдела промышленной биотехнологии УП «ЛОТИОС» Квятковская Н.В. Научный сотрудник отдела промышленной биотехнологии УП «ЛОТИОС» Костюк И.Н. Инженер отдела промышленной биотехнологии УП «ЛОТИОС» Худобченок Л.Г. Андреев С.В. Карпович Н.В. 29
