крови. Содержание лейкоцитов в плазме в 1-й груп

Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 2
ТЕЗИСЫ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЙ КОНФЕРЕНЦИИ
«ХОЛОДОВАЯ ЦЕПЬ В СЛУЖБЕ КРОВИ», 18 АПРЕЛЯ 2012 Г., МОСКВА,
Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России
Уважаемые читатели!
В рамках ежегодно проводимого кафедрой гематологии и трансфузиологии (зав. — акад. РАН и РАМН А. И. Воробьев)
Российской медицинской академии последипломного образования декадника "Новое в гематологии, трансфузиологии и лучевой терапии" состоится конференция, посвященная одной из злободневных проблем службы крови страны
— работе различных звеньев "холодовой цепочки" в производственной трансфузиологии.
Необходимость обсуждения этих вопросов назрела давно. В последние годы, особенно при реализации программы
модернизации службы крови по программе "Здоровье", в практику ее работы вошли новые технологии охлаждения
донорской крови в процессе получения, разделения на компоненты и краткосрочного или длительного хранения. Произошли изменения и в нормативной документации, регламентирующей вопросы криоконсервации и хранения криоконсервированных продуктов фракционирования плазмы, а также контроля соблюдения температурного режима.
Публикуемые ниже наиболее интересные выступления участников конференции показывают, что в различных региональных подразделениях службы крови вопросам работы "холодовой цепочки" уделяется достаточно внимания.
Новые технологии и оборудование позволяют иметь резерв компонентов и препаратов крови, клиническая эффективность которых не уступает продуктам крови краткосрочного хранения.
Конференция позволит обсудить вопросы производства отечественного холодильного оборудования, не уступающего по своим параметрам зарубежным образцам, грамотно сформулировать техническое задание на проектирование подобного оборудования.
Можно с уверенностью утверждать, что подобные конференции, на которых обсуждаются актуальные вопросы определенной сферы деятельности службы крови, станут действенным стимулом дальнейшего совершенствования производственной трансфузиологии в целях полноценного обеспечения клинических учреждений компонентами и препаратами крови и повышения безопасности их применения.
Зам. главного редактора журнала "Гематология и трансфузиология"
член-корр. РАМН В.М. Городецкий
Влияние температурного режима
лейкофильтрации консервированной донорской
крови на качество получаемых из нее
компонентов
А.В. Данилова, А.В. Чечеткин, В.И Ващенко,
А.Д. Касьянов, Т.Б. Титулова
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург
Материалы и методы. Исследованы лабораторные показатели 38 образцов обедненных лейкоцитами плазмы и эритроцитной взвеси, полученных
из лейкофильтрованной консервированной крови.
Фильтрацию осуществляли с помощью системы полимерных контейнеров для заготовки и разделения
крови со встроенным лейкофильтром Leukotrap WB
("Pall"). В 1-й группе исследовали образцы гемокомпонентов, полученных из крови, фильтрованной при
температуре 4 ± 2°С, во 2-й группе образцов — при
температуре 22 ± 2°С.
Собственные материалы. Содержание лейкоцитов в эритроцитной взвеси из 1-й группы образцов
составило 0,318 ± 0,043 ∙ 106 в дозе, во 2-й группе
образцов — 0,344 ± 0,059 ∙ 106. Статистически значимых различий в содержании гемоглобина, тромбоцитов, свободного гемоглобина, проценте гемолиза, гематокрите между показателями эритроцитной
взвеси в 1-й и 2-й группах не выявили. В плазме,
полученной из консервированной крови, фильтрованной при температуре 4°С, содержание свободного гемоглобина было меньше в 1,4 раза, балластных
эритроцитов — в 3,4 раза по сравнению с компонентом, приготовленным из фильтрованной при 22° С
крови. Содержание лейкоцитов в плазме в 1-й группе образцов составило 1,02 ± 0,23 ∙ 105 в дозе компонента (200—250 мл), во 2-й — 0,73 ± 0,12 ∙ 105.
Вывод. Температурный режим лейкофильтрации
консервированной крови не оказывает существенного влияния на качество эритроцитной взвеси, но
фильтрация крови при температуре 4 ± 2°С приводит
к снижению концентрации свободного гемоглобина
и содержания балластных эритроцитов в полученной из нее плазме по сравнению с фильтрацией при
температуре 22 ± 2°С.
Применение пектина пижмы обыкновенной
для криоконсервирования лейкоцитов при
температуре -20°С
О.О. Зайцева, А.Н. Худяков, Д.С. Лаптев, Т.В. Полежаева
Учреждение РАН Институт физиологии Коми НЦ Уральского
отделения РАН, лаборатория криофизиологии крови, Сыктывкар
Целью данной работы явилось изучение влияния
пектина танацетана в составе криозащитного раствора на функциональные свойства нативных и отогретых после холодового анабиоза (-20°С) лейкоцитов.
Материалы и методы. В отделе молекулярной
иммунологии и биотехнологии Института физиологии Коми НЦ УрО РАН был выделен из пижмы
обыкновенной пектин танацетан, по химической
природе состоящий на 64% из галактуроновой кислоты с небольшим содержанием галактозы, арабинозы и рамнозы. Концентрат лейкоцитов смешивали
1:1 с криозащитным раствором, включающим в себя
глицерин в нетоксичной концентрации, танацетан и
39
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 2
трилон В. Смесь выдерживали 20 мин при комнатной температуре, а затем охлаждали по нелинейной
программе в электроморозильнике в течение 15 мин
в 4-литровой спиртовой (96%) ванне, охлажденной
до температуры -20°С. Замороженный биообъект
переносили в воздушную камеру электроморозильника, имеющего температуру -20°С и хранили в течение суток. Отогревали образцы до температуры 2
± 4°С в 20-литровой водяной ванне при температуре
38°С при интенсивном покачивании контейнера.
До замораживания и в первые минуты после отогрева определяли общее количество лейкоцитов, количество гранулоцитов, их жизнеспособность по витальному красителю (с раствором эозина 1%) и фагоцитарную активность нейтрофилов в пробе с латексом.
Результаты. Выявлено, что после одних суток
при температуре -20°С сохраняется 86,6 ± 10% лейкоцитов, из которых 86,8 ± 6,5% имеют неповрежденную плазматическую мембрану. Среди разных
популяций лейкоцитов наиболее подвержены холодовому стресс-фактору гранулоциты, количество
которых после отогрева составляет 60,4 ± 5,9%. Из
них 67,2 ± 8,5% (в процентах к исходному содержанию) нейтрофилов сохраняют способность к фагоцитозу. При оценке последнего показателя показано,
что добавление раствора, содержащего танацетан,
к нативным клеткам повышает (p < 0,001) уровень
фагоцитарной активности с 55,2 ± 5 до 72 ± 5,6%,
т. е. данный пектин оказывает на нейтрофилы иммуномодулирующее действие.
Выводы. Установлено, что раствор, содержащий
танацетан, не только способствует усилению основной функции нейтрофилов до замораживания, но и
сохраняет физиологическую активность клеток на
достаточно высоком уровне после суточного анабиоза при -20°С, т.е. обладает криозащитным свойством. Возможно, что выявленные свойства пектина
пижмы обыкновенной могут найти применение в
различных областях биологии и медицины.
Эффективность переливания эритроцитной
массы в зависимости от температуры
и длительности консервации
В.В. Журавлев, М. Х. Азимова, В.М. Городецкий
ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития
России, Москва
Заместительные переливания донорской эритроцитной массы являются основным методом терапии
анемического синдрома у больных гемобластозами.
Переливаемые эритроциты отличаются различными
сроками хранения при разных температурах. Наиболее часто переливают эритроциты, хранившиеся до
21 сут при температуре 4—6°С. Однако в выходные
и праздничные дни существенно возрастает потребность в переливании криоконсервированных эритроцитов, хранимых при температуре ниже 80°С до
300 и более суток.
Цель работы — сравнение эффективности переливания эритроцитов, отличающихся различными
сроками хранения и при разной температуре у больных гемобластозами с глубокой анемией.
40
Материалы и методы. Сформированы две однородные группы больных гемобластозами (по 14 человек), у которых содержание гемоглобина было ниже
70 г/л, имелась тромбоцитопения ниже 50 ∙ 109/л, агранулоцитоз — число гранулоцитов ниже 500 ∙ 109/л.
В 1-й группе в период с 01.01.12 по 09.01.12 переливали криоконсервированные эритроциты со сроком хранения до 100 сут (12 трансфузий — 17 доз), от 101 до
200 сут (2 трансфузии — 5 доз), от 201 до 300 дней
(12 трансфузий — 19 доз). Больные 2-й группы получали трансфузии эритроцитной массы со сроком хранения не более 21 сут, хранившейся при температуре
4—6°С. Критериями эффективности считали прирост
концентрации гемоглобина, длительность периода
поддержания достигнутой концентрации гемоглобина и кратность последующих переливаний.
Результаты. С 01.01 по 09.01.12 были перелиты
41 доза криоконсервированных эритроцитов и 24 дозы консервированных на CPDA эритроцитов коротких (до 21 сут) сроков хранения.
В 1-й группе больных после переливания криоконсервированных эритроцитов со сроком хранения
до 100 сут прирост концентрации гемоглобина составил с 61,75 до 75,75 г/л, от 101 до 200 сут — с
56,5 до 63,5 г/л, от 201 до 300 сут и более — с 62,6
до 71,8 г/л. Реакции на переливание криоконсервированных эритроцитов у больных не наблюдалось.
Содержание гемоглобина выше 70 г/л сохранялось в
течение 1-х суток у 1 больного, 2-х суток — у 6, 3-х
суток — у 3, 5-х суток — у 4 больных.
Во 2-й группе прирост содержания гемоглобина после переливания краткосрочно хранимых эритроцитов
в среднем составил с 67,05 до 81,2 г/л. Уровень выше
70 г/л у 10 пациентов из 14 сохранялся от 4 до 6 сут.
Обсуждение. Полученные результаты показывают, что в выходные и праздничные дни при заместительной терапии анемии переливаниями эритроцитов
криоконсервированные эритроциты используют почти в 2 раза чаще, чем краткосрочно хранимые. Однако
эффективность переливания криоконсервированных
эритроцитов ниже, чем краткосрочно хранимых. Особенно невысока эффективность криоконсервированных эритроцитов, хранимых более 101 сут — прирост гемоглобина был самым низким — 7—8,6 г/л.
Переливание краткосрочно хранимых эритроцитов
стабильно сопровождалось приростом концентрации
гемоглобина на 14,15 г/л. Соответственно длительность периода поддержания увеличенного содержания гемоглобина была выше во 2-й группе при меньшей кратности последующих переливаний.
Вывод. Переливание криоконсервированных
эритроцитов в терапии глубокого анемического синдрома у больных гемобластозами в силу меньшей
эффективности может рассматриваться как средство
неотложной терапии при отсутствии краткосрочно
хранимых эритроцитов и невозможности их экстренного получения у доноров, что наиболее часто
наблюдается в выходные и праздничные дни. Длительность хранения криоконсервированных эритроцитов более 100 сут отрицательно сказывается на их
эффективности.
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 2
Опыт использования системы
централизованного мониторинга температуры
хранения компонентов крови
Е.С. Иосипенко, С.В. Король, Ю.Е. Пыльцева, В.В. Слащев
Государственное коммунальное казенное предприятие
Областной центр крови, Костанай, Республика Казахстан
С июня 2011 г. в Костанайском областном центре
крови функционирует система централизованного
компьютерного мониторинга температуры хранения
в аппаратах карантинизируемой плазмы.
Внедрение компьютерных систем мониторинга
согласуется с нормативными актами Республики Казахстан по хранению крови и ее компонентов, и обязательно для медицинских организаций, осуществляющих заготовку, переработку и хранение компонентов крови. В частности, ими предусмотрено
хранение информации на электронных носителях,
возможность регистрации с помощью автоматических записывающих устройств.
Соединение компьютерного интерфейса RS485
морозильников с компьютером осуществляли посредством коммуникационного модуля DCU
(«Dometic»). При этом использовали прямое подключение данного модуля к аппарату, последовательное
подключение нескольких аппаратов к одному DCU
через компьютерные интерфейсы RS485 морозильников, а также подключение аппаратов добавочными
сенсорами PT1000, дополнительно устанавливаемыми в каждом морозильнике.
Для анализа температуры использовали систему
DMN («Dometic»), позволяющую непрерывно регистрировать температурный режим хранения внутри
морозильников. С помощью этой программы идут
постоянная запись и протоколирование основных
событий, которые происходят при хранении карантинизированной плазмы. Таким образом, осуществляется непрерывный мониторинг температуры
внутри морозильников, что дает возможность проведения анализа условий хранения крови за любой
прошедший период.
Электронное хранение записей по температурным
условиям позволяет внедрить в Центре крови безбумажный документооборот при регистрации температуры и в перспективе исключить введение бумажных
журналов для мониторинга температуры, уменьшая
таким образом роль человеческого фактора.
Прямое подключение коммуникационного модуля по принципу "один модуль DCU — один морозильник" обеспечивает самый надежный результат
и бесперебойную работу всей системы. При этом
имеется возможность автоматической документации и сигнализации тревожных событий (изменение
температуры в камере морозильника выше или ниже
установленных пределов, отключение электропитания, доступ персонала в камеру морозильника и пр.).
Использование компьютерных технологий мониторинга температуры обеспечило удобство контроля
температурного режима (на экране компьютера вместо термометра в морозильной камере), снижение
влияния человеческого фактора, автоматизацию тех-
нологического процесса и позволило приступить к
внедрению безбумажного документооборота и компьютерного анализа условий хранения крови, свежезамороженной плазмы.
Сохранность лейкоцитов в аутологичных
лейкоконцентратах после
их криоконсервирования и оттаивания
Н.В. Исаева, Г.А. Зайцева, С.В. Утемов, А.А. Костяев,
Н.Л. Ежова, Ф.С. Шерстнев
ФГБУН Кировский НИИ гематологии
и переливания крови ФМБА России
Материалы и методы. Объектом исследования
служили 50 образцов лейкоконцентратов, которые
были получены из мобилизованной крови больных
с онкогематологическими заболеваниями. Для криоконсервирования применяли 10% раствор диметилсульфоксида (ДМСО). Хранение осуществляли
в среде жидкого азота (-196°С), оттаивание — непосредственно перед клиническим использованием.
Подсчет числа гемопоэтических стволовых клеток
(ГСК) проводили методом проточной цитометрии согласно протоколу ISHAGE при двухпараметрическом
иммунологическом связывании с антителами CD45/
CD34 и одновременным тестом на жизнеспособность
с витальным красителем 7-аминоактиномицином
D (7-ААD). Как известно, 7-AAD интеркалируется
между цитозиновыми и гуаниновыми основаниями
ДНК, при этом образуется прочный комплекс ДНК-7AAD, а число 7-ААD+-лейкоцитов характеризует содержание клеток с проницаемой мембраной. Протокол подсчета ГСК, формируя числовое значение ГСК
в образце, исключает из анализа нежизнеспособные
лейкоциты. Представляло интерес рассмотреть содержание 7-ААD+-лейкоцитов в качестве самостоятельного параметра сохранности лейкоцитов.
Результаты. Содержание 7-ААD+-лейкоцитов в
лейкоконцентратах перед замораживанием практически не отличалось от такового в образцах крови, из
которых их получали методом аппаратного лейкоцитафереза: 0,39 (0,21; 0,58)% против 0,31 (0,15; 0,86)%;
p > 0,05. Содержание 7-ААD+-лейкоцитов в лейкоконцентратах после оттаивания варьировало от 0,5
до 38%, составив в среднем 5 (2; 8,1) %, и было
существенно выше, чем измеренное перед криоконсервированием биосреды (p < 0,001). Жизнеспособность на уровне 99,5—95% регистрировали
в 52% образцов, 94,9—90% — в 28%, 89,9% и ниже — в 20%. Регион 7-ААD+-событий был в меньшей степени представлен лимфоцитоподобными
элементами, а в наибольшей содержал гранулоциты.
Не обнаружено взаимосвязи между содержанием
7-ААD+-лейкоцитов и временем хранения лейкоконцентратов. Полученные результаты соответствовали
данным, определенным при суправитальном окрашивании образцов по Шреку.
Вывод. На жизнеспособность лейкоцитов не
влияет процедура аппаратного лейкоцитафереза и
время хранения лейкоконцентратов в замороженном состоянии. В процессе криоконсервирования с
ДМСО, хранения и оттаивания в лейкоконцентра41
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 2
тах возрастает число лейкоцитов с поврежденной
мембраной, менее стабильным является пул гранулоцитов, что должно учитываться при подготовке
лейкоконцентратов для трансплантации аутологичных ГСК у больных с онкогематологическими заболеваниями.
Условия транспортировки донорской крови
выездной бригадой службы переливания крови
А.В. Курамшин, М.Э. Хапман, Е.В. Брыляева, И.М. Ламзин
ГУЗ Ульяновская областная станция переливания крови
Цель работы — анализ условий транспортировки
заготовленной в выездных условиях цельной крови.
Материалы и методы. Выездная бригада Ульяновской областной станции переливания крови
(УО СПК), являясь структурным подразделением отделения заготовки крови и ее компонентов, осуществляет заготовку цельной крови в выездных условиях на базах заводских здравпунктов и Центральных
районных больниц Ульяновской области с последующей транспортировкой заготовленной цельной
крови в стационар СПК, где осуществляется ее обработка (фракционирование, лабораторное обследование и хранение).
В 2011 г. проведено 104 дня донора в выездных
условиях. Осуществлено 6316 донаций и заготовлено 2831,46 л цельной крови. Время работы в выездных условиях лимитировано и не может превышать
3,5 ч. Данное ограничение обусловлено значительными временныʹми затратами на переезды бригады
от мест проведения заготовки донорской крови до
стационара УО СПК, где осуществляется фракционирование заготовленной донорской крови на компоненты и замораживание полученной плазмы. Заготовленную консервированную кровь необходимо
разделить на компоненты в течение 4—6 ч после ее
эксфузии (в соответствии с действующей Инструкцией). Для соблюдения данного положения цельную
кровь, заготовленную от 40—50 доноров в течение
1,5—2 ч работы в выездных условиях, мы транспортируем на СПК в условиях пассивной термоизоляции. При большом количестве доноров (более 50
человек) заготовленную кровь отправляли на СПК в
несколько этапов.
Собственные результаты. Транспортировку заготовленной цельной донорской крови в специальных термоизолирующих контейнерах (пассивная
термоизоляция) осуществляли следующим образом.
В контейнер помещали до 50 гемаконов объемом
450 мл, которые размещали в 2 слоя. Охлаждающие
элементы размещали поверх каждого слоя гемаконов. Непосредственный контакт между гемаконами
с кровью и охлаждающими элементами не допускали. Среднее время транспортировки составляло
1,5—2,5 ч (расстояние транспортировки до 150 км).
За данное время цельная кровь охлаждается до температуры 26°С (± 4°С) при температуре воздуха внутри транспортного средства от 3°С до 36°С.
Вывод. Использование пассивных термоконтейнеров для транспортировки цельной крови по42
зволяет после ее фракционирования получать СЗП,
соответствующую требованиям, предъявляемым
"Техническим регламентом о требованиях безопасности крови", но ограничивает время транспортировки и не позволяет заготавливать кровь в
районах области, находящихся на удалении более
150 км от СПК. Для более полного использования
донорского потенциала и осуществления транспортировки цельной крови в соответствии с требованиями нормативных документов в работе выездных бригад СПК необходимо использование активных термоконтейнеров, позволяющих охлаждать и
транспортировать заготовленную цельную кровь
в соответствии с этими требованиями. Необходимо совершенствование нормативной документации, регламентирующей условия транспортировки
цельной консервированной донорской крови выездными бригадами СПК.
Сроки переработки донорской крови
на компоненты — необходимость пересмотра
И.К. Никитин, М.Ж. Алексанян, В.М. Городецкий
ФГБУ Гематологический научный центр
Минздравсоцразвития РФ, Москва
Инструкцией Минздравсоцразвития России "Заготовка и консервирование донорской крови" от
29.05.95 предусмотрено, что переработка донорской
крови должна осуществляться не позднее чем через
6 ч после заготовки. В условиях, когда радиус обслуживания областных СПК составляет до 300 км, практически нереально осуществить выезд в отдаленный
район, обеспечить заготовку крови, доставку и ее
переработку в течение 6 ч.
В странах Совета Европы сроки хранения цельной крови до момента разделения ее на компоненты
неоднократно пересматривали. Долгое время интервал от момента взятия крови до начала фракционирования ограничивался в начале 4 ч, затем 6—8 ч.
Известно, что в странах Европы бóльшую часть
крови (от 60 до 90%) заготавливают на выезде, и в
связи с этим требуется время на доставку и обследование крови. Именно поэтому временныʹе рамки
начала фракционирования крови были увеличены.
С 1978 г. появилось понятие «overnight», т.е. хранение заготовленной крови до следующего утра с последующей переработкой. Кровь при этом сразу же
после взятия у донора охлаждали до температуры
20—24°С, для чего использовали специальные металлические контейнеры, содержащие охлаждающий раствор.
Тогда же начались активные исследования по
оценке качества компонентов крови при фракционировании цельной крови через 8—24 ч после ее заготовки. Сравнение сохранности фактора VIII в плазме,
выделенной из крови, хранившейся при температуре
20—24°С, и в плазме, хранившейся при температуре
4°С, показало, что его активность при хранении при
комнатной температуре падала меньше, чем таковая
в плазме, выделенной из крови, хранившейся при
температуре 4°С.
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 2
Эти исследования явились основой для пересмотра требований к срокам хранения цельной
консервированной крови от момента заготовки
до начала фракционирования. В "Руководстве по
приготовлению, использованию и оценке качества
компонентов крови", одобренным Советом Европы (5-е изд., 1995 г.), записано "Плазма без видимой потери фактора VIII должна быть выделена из
цельной крови как можно быстрее после взятия,
предпочтительно в течение 6 ч, но не позднее 8 ч.
С разрешения национальных органов здравоохранения плазма может быть выделена из цельной
крови, которая немедленно после взятия быстро
охлаждается до 20—24°С с использованием специального оборудования и хранится максимально
20 ч". В 16-м издании Руководства, впервые изданном на русском языке (2011 г.), этот период был
расширен до 24 ч. В настоящее время во всех странах Европейского Союза переработка крови, за
редким исключением, осуществляется в течение
16—18 ч.
Имеем ли мы возможность перейти на сроки переработки крови, предусмотренные Руководством
Совета Европы?
Российская Федерация является полноценным
членом Совета Европы и она может применять
вышеназванное Руководство Совета Европы в
учреждениях службы крови. Федеральный закон
от 22.12.02 № 184-ФЗ "О техническом регулировании" предусматривает, что "если международным договором в сфере технического регулирования установлены иные правила, чем те, которые
предусмотрены настоящим Федеральным законом,
применяются правила международного договора"
(гл. 1, п. 4).
Действующим Техническим регламентом «О требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств,
используемых в трансфузионно-инфузионной терапии», утвержденным постановлением Правительства РФ от 26.01.10 № 29, сроки переработки крови
на компоненты не определены. Вместе с тем установлено, что «условия транспортировки должны
гарантировать, что в конце максимального периода
транспортировки эритроцитсодержащих компонентов крови, равного 24 ч, температура внутри транспортного контейнера не должна превышать +10°С, а
также, что «хранение и транспортировку донорской
крови и ее компонентов необходимо осуществлять
при условиях контроля температуры внутри оборудования, в котором хранятся (транспортируются)
донорская кровь и ее компоненты. Температура хранения донорской крови регистрируется не реже 2 раз
в сутки».
В настоящее время в РФ зарегистрированы термоконтейнеры, позволяющие хранить заготовленную донорскую кровь при температуре 20—24°С
до 24 ч.
Таким образом, у нас есть все условия для расширения временнóго интервала от заготовки крови
до ее переработки в соответствии с требованиями
Совета Европы. Необходимо, чтобы Министерство
здравоохранения отменило действие Инструкции,
утвержденной более 15 лет назад.
Применение системы мониторинга "Dometic
Monitoring Network" для регистрации
температурного режима холодильного
оборудования на станции переливания крови
А.М. Орлов, М.В. Козлова, И.Е. Зыкова, В.В. Слащев
ГБУЗ Свердловской области Станция переливания крови № 2
«САНГВИС», Екатеринбург
В 2011 г. на станции переливания крови (СПК)
№ 2 "САНГВИС" (Екатеринбург) по программе
ФМБА проведено оснащение современным холодильным и морозильным медицинским оборудованием. Большинство оборудования оснащено компьютерным интерфейсом для контроля параметров
работы аппаратов. Применение компьютерных технологий позволило приступить к внедрению компьютерного мониторинга температуры.
На новом оборудовании успешно протестирована компьютерная система мониторинга температуры
"Dometic Monitoring Network".
Данная система позволила непрерывно регистрировать температурный режим, предоставляя
данные как в числовом, так и в графическом варианте.
Также программа ведет непрерывную запись в
память обо всех важнейших событиях, таких как
открытие и закрытие двери, продолжительность
открытия, превышение заданной температуры, возможные кратковременные отключения питания.
Программа имеет функцию ретроспективного
анализа, что позволяет просмотреть записи о температурном режиме и важнейших событиях за любой
предыдущий промежуток времени.
Отчеты о температурном режиме можно формировать как в электронном, так и в бумажном варианте. Это позволяет заменить ежедневное ведение
стандартных бумажных журналов мониторинга, тем
самым сокращая вероятность ошибок за счет человеческого фактора.
Аппаратно-программный комплекс мониторинга
температуры является связующим звеном и может
быть использован как с оборудованием Dometic, так
и с оборудованием других производителей. Применение данной системы является безопасным с точки зрения защиты информации, так как система не
предусматривает передачу персональных данных
доноров и пациентов. Использование коммуникационного модуля DCU соответствует ст. 41 требований
Технического регламента по безопасности крови.
Также с его помощью возможно накопление архива
электронных данных, которые должны храниться
до 30 лет. Кроме того, данная система позволяет организовать единый пульт компьютерного контроля,
объединяющий сразу несколько холодильных установок, что соответствует существующему ГОСТ Р
53420—2009 "Кровь донорская и ее компоненты" и
рекомендациям ВОЗ.
43
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 2
Создание запасов криоконсервированных
гемокомпонентов
Необходимой составляющей высокотехнологичной медицинской помощи больным онкогематологическими заболеваниями является гемокомпонентная
терапия. Эти больные представляют группу высокого риска развития иммунологически обусловленных
посттрансфузионных реакций и осложнений. Нами
установлено, что антиэритроцитарные антитела выявлены у 3,8% пациентов, в том числе к тем антигенам,
обязательный скрининг которых не предусмотрен
действующими инструкциями по применению гемокомпонентов. Еще более часто у больных присутствуют анти-HLA-антитела, которые обнаружены у 32,5%
больных (у 33,3% мужчин и 31,6% женщин). Этот вид
аллосенсибилизации служит одной из причин возникновения фебрильных негемолитических реакций и
рефрактерности к трансфузиям тромбоцитов и затрудняет подбор совместимых компонентов крови больным онкогематологическими заболеваниями. Дополнительные сложности по неотложному обеспечению
больных тромбоцитным концентратом (ТК) возникли
после постановления Правительства РФ от 31.12.10
№1230, согласно которому исследование образцов донорской крови на маркеры гемотрансмиссивных инфекций должно быть выполнено не ранее чем через
18 ч после взятия крови. Учитывая эти обстоятельства,
становится очевидной необходимость создания запасов гемокомпонентов, которые могут быть незамедлительно выданы в клинику, что возможно при наличии в
учреждении банка долгосрочного хранения крови и ее
компонентов. Такой банк функционирует у нас в течение многих лет. Благодаря поставке в 2010 г. современного криогенного оборудования удалось создать запас
эритроцитов всех групп крови АВ0, типированных
по антигенам системы-резус, и тромбоконцентратов.
В банке накапливаются эритроциты с редкими фенотипами, такими как ССDЕе, СсDEE, ccDEE, и создается запас ТК, типированных по HLA- и НРА-антигенам.
Клинический опыт подтвердил эффективность применения криоконсервированных ТК для профилактики и
купирования геморрагического синдрома у больных.
Перспективным является создание больших запасов
крови и ее компонентов в банках долгосрочного хранения, а также аутокрови лиц, чьи профессии сопряжены с повышенным риском травматизма.
эритроцитов в службе крови Российской Федерации
в 2007—2010 гг. Материалами для мониторинга служили сведения статистических отчетов (форма №
39) и пояснительных записок учреждений службы
крови всех субъектов Российской Федерации.
Собственные материалы. Установлено, что
объем замороженных эритроцитов в службе крови
России за период с 2007 по 2010 г. снизился на 34%
(с 86 165 доз до 56 683 доз). В 2010 г. криоконсервирование эритроцитов в наибольшей степени было
внедрено в производственную деятельность учреждений службы крови Сибирского и Центрального
федеральных округов РФ. В минимальном объеме
были заморожены эритроциты в учреждениях службы крови Северо-Кавказского федерального округа.
Криоконсервирование эритроцитов осуществляли при широком диапазоне температур (от -38 до
-196°С) с применением отечественного и зарубежного оборудования и расходных материалов. Основными факторами, вызвавшими снижение объема
производства криоконсервированных эритроцитов
в службе крови России, явились: устаревшая нормативная база (последняя инструкция по криоконсервированию клеток крови была утверждена в 1995 г.);
высокая стоимость оборудования и расходных материалов; отсутствие отечественного промышленного
производства криоконсервирующих, отмывающих и
ресуспендирующих растворов; проблемы обучения
и допуска инженерно-технического персонала к работе с криогенным оборудованием. Однако внедрение криоконсервирования эритроцитов в трансфузиологическую практику является перспективным,
так как позволяет создать запас трансфузионных
средств редких групп крови, шире внедрить аутогемотрансфузии, повысить оперативность обеспечения плановых и ургентных хирургических операций эритроцитными компонентами при различных
заболеваниях и травмах, внедрить карантинизацию
эритроцитов, хранить стандартные эритроциты для
иммуногематологических исследований, а также резервировать эритроциты на случай чрезвычайных
ситуаций.
Вывод. В течение 2007—2010 гг. в службе крови
России наблюдалось уменьшение объемов производства замороженной эритроцитной взвеси. Вместе с
тем модернизация службы крови, проводимая в рамках программы развития службы крови, позволит
внести положительные тенденции в развитие криоконсервирования эритроцитов на станциях (центрах
крови) и отделениях переливания крови в субъектах
Российской Федерации
Состояние и проблемы криоконсервирования
эритроцитов в службе крови
Российской Федерации
Сохранность антител к вирусу клещевого
энцефалита в плазме крови доноров при
длительном хранении
Е.А. Селиванов, А.В. Чечеткин, М.Ш. Григорьян,
А.Б. Макеев
Е.В. Хлыбова, Е.С. Савельева, А.В. Дробкова
Российский НИИ гематологии и трансфузиологии ФМБА России,
Санкт-Петербург
ФГБУН Кировский НИИ гематологии и переливания крови
ФМБА России
Материалы и методы. Исследовали динамику
показателей производства криоконсервированных
На основании данных о стабильности антител
к вирусу клещевого энцефалита (КЭ) в плазме при
В.А. Пятков, Г.А. Зайцева, Е.В. Бутина, А.А. Костяев,
Ф.С. Шерстнев
ФГБУН Кировский НИИ гематологии и переливания крови
ФМБА России
44
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 2
температуре не выше -20˚С ранее были сформулированы требования к хранению сырья для производства иммуноглобулина против КЭ: не более 1 года
при указанной температуре. С изменением условий
хранения и введением карантинизации плазмы эта
норма устарела и подлежит пересмотру.
Цель работы — изучение содержания специфических антител в образцах плазмы, хранившейся до 4
лет при температуре не выше -35°С.
Материалы и методы. Заготовку плазмы крови
доноров, иммунизированных вакциной КЭ, осуществляли прерывистым плазмаферезом и с использованием аппарата для донорского плазмафереза PCS 2
("Heamonetics", США). Плазму подвергали быстрому
замораживанию в шоковом замораживателе NZKR
48/80 ("Frigera", Чехия) или аппарате для температурной обработки крови MBF 21 ("Dometic S.A.R.L.",
Люксембург) при температуре -70°С в течение 1 ч
20 мин. Замороженную плазму перемещали в морозильный ларь D-LT ("Derby A/S — Gram A/S", Германия), где выдерживали при температуре не выше
-35°С до получения результатов тестов, предусмотренных спецификацией на «Плазму для фракционирования», и результатов выявления целевых антител.
Далее плазму транспортировали в камеру низкотемпературную сборную теплоизоляционную ISO-160
("Teledor", Германия). Температура хранения плазмы
не превышала -35°С. Содержание антител к вирусу
КЭ определяли с использованием набора реагентов
"Диагностикум клещевого энцефалита сухой для
РТГА, РСК, РРГ" производства ФГУП НПО "Микроген", шаг титрования 1,2. Результаты титрования образцов после длительного хранения сопоставляли с
исходными значениями титров, полученными на момент плазмодачи. Для каждого образца рассчитывали
коэффициент падения титра (К) — отношение наблюдаемого результата к исходному и определяли среднее
значение К для выборок по срокам хранения.
Результаты значений титров целевых антител в
образцах плазмы варьировали от 1:5 до 1:320. Коэффициент падения титров в образцах, хранившихся от
2 до 3 лет включительно, составил в среднем 0,92, до
4 лет — 0,88. Хранение плазмы при температуре не
выше -20°С приводило к более выраженному снижению специфической активности: через 1 год хранения К составлял в среднем 0,8.
Таким образом, плазму, предназначенную для
производства иммуноглобулина человека против
клещевого энцефалита, допустимо хранить до 3 лет
при температуре не выше -35°С. Полученные результаты могут войти в состав регистрационного досье
на указанный препарат.
Влияние температурного режима
центрифугирования крови на качество плазмы,
полученной методом плазмафереза
А.Н. Чугриев, Т.А. Терещук, А.В. Загородний
Житомирский областной центр крови, Украина
Температурный режим центрифугирования эксфузированной крови влияет на температуру эритро-
цитов и плазмы после центрифугирования. Температура эритроцитов после центрифугирования не
должна быть низкой, чтобы не вызвать холодовых
реакций у доноров при реинфузии, вместе с тем не
должна быть и высокой температура плазмы, чтобы
не снизилось ее качество по параметру остаточных
клеток.
Цель исследования — изучение влияния температурного режима роторной камеры центрифуг на
качество плазмы, полученной методом плазмафереза.
Исследовано по 163 дозы крови, эритроцитов и плазмы. Кровь заготавливали в полимерные
контейнеры для плазмафереза типа 2×500/2×300
("RAVIMED", Польша). Центрифугирование крови
проводили в центрифугах JOUAN CR 4.12 (Франция) в следующих режимах: "1" (2000 g, 20 мин,
10°С) — 67 доз, "2" (3000 g, 15 мин, 20°С) — 31
доза, "3" (3000 g, 15 мин, 5°С) — 65 доз. Измерение температуры крови до центрифугирования и ее
компонентов после центрифугирования проводили
электронным термометром Checktemp 1 (Венгрия).
Качество плазмы по параметру "остаточные клетки"
определяли методом подсчета клеток в камерах Фукса—Розенталя (эритроциты, лейкоциты) и Горяева
(тромбоциты).
Средняя температура крови до центрифугирования была в пределах 29,1 ± 2,5°С. При температуре роторной камеры центрифуг от 5 до 10°С
средняя температура эритроцитов и плазмы после
центрифугирования была в пределах 18 ± 3,7°С,
при температуре роторной камеры центрифуг
20°С — 23 ± 1,6°С.
Количество остаточных эритроцитов и лейкоцитов во всех исследованных дозах плазмы не
превышало нормативный показатель (не более
6,0 ∙ 10 9/л и не более 1,0 ∙ 10 9/л соответственно), однако в 16 случаях при режиме "2" количество остаточных тромбоцитов плазмы превысило верхнюю допустимую границу (не более 50
∙ 10 9/л).
Изменение температурного режима роторной
камеры от 5 до 20°С при центрифугировании крови не оказало влияния на качество плазмы по параметрам «количество остаточных эритроцитов и
лейкоцитов».
Температурный режим роторной камеры 20°С
при центрифугировании крови в 51,6% случаев приводил к ухудшению качества плазмы по параметру
«количество остаточных тромбоцитов».
Температурные режимы центрифугирования
крови при проведении плазмафереза должны
быть определены путем измерения температуры
компонентов крови после центрифугирования и
исследования параметров качества полученной
плазмы.
Средняя температура крови после центрифугирования должна быть в пределах 20 ± 2°С для достижения установленного качества заготовленной плазмы
и избежания холодовых реакций у доноров при реинфузии эритроцитов.
45
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 2
Криоконсервирование донорских тромбоцитных
концентратов
Ф.С. Шерстнёв, С.В. Утемов, А.А. Костяев, К.А. Ветошкин,
Д.А. Карпов
ФГБУН Кировский НИИ гематологии и переливания крови
ФМБА России
Биологическая полноценность донорских тромбоцитных концентратов (ТК) в течение длительного времени весьма ограничена и может быть
обеспечена лишь методом замораживания. Криоконсервирование ТК позволяет решать проблему
возросшей потребности в данной трансфузионной
среде в гематологических стационарах. В Кировском НИИ гематологии и переливания крови создан банк долгосрочного хранения клеток крови
доноров. Наличие криобанка позволяет оказывать
своевременную трансфузиологическую помощь
онкогематологическим больным (особенно в ургентных ситуациях).
Материалы и методы. Донорские ТК получали
аппаратным методом. Проводили количественную
и качественную оценку заготовленных ТК (индуцированная агрегация тромбоцитов, реакция на
гипотонический шок — РГШ). Смешивание ТК с
криопротектором «Тромбокриодмац» проводили в
асептических условиях согласно утвержденной инструкции. Криоконсервирование проводили по методике А.А. Костяева (2002). Хранение осуществляли
в электроморозильниках при температуре -80°С.
Собственные материалы. После криоконсервирования сохранялось 89,7 ± 2,5% (n = 28) тромбоцитов от их исходного количества, способность к индуцированной агрегации — 61,1—78% от исходных
значений, РГШ (на 10-й минуте) — 88,6—94,1%.
Трансфузии декриоконсервированных ТК реципиентам проявили достаточную гемостатическую
эффективность, которую оценивали по динамике
геморрагического синдрома (ГС) и скорректированному приросту тромбоцитов (СПТ). Достигнуто снижение доли реципиентов, у которых выявляли значимый ГС (2—4 балла по шкале ВОЗ) с 44,5 до 7,6%.
СПТ через 1 ч после трансфузий составил 6,54 ± 1,42
∙ 109/л (n = 28).
Вывод. Криоконсервированные при -80°С ТК
являются полноценной трансфузионной средой,
обеспечивающей адекватный посттрансфузионный
прирост у реципиентов.
Криоконсервация эритроцитов как метод
сохранения эритроцитов редких
и востребованных групп
М.Э. Хапман, Е.В. Брыляева, А.В. Курамшин, И.М. Ламзин
Материалы и методы. Для криоконсервации
использовали автоматическую систему обработки клеток АСР 215, которая может выполнять следующие процедуры: глицеролизацию собранной
эритроцитной массы к замораживанию: деглицеролизацию, при которой удаляется глицерин и
внеклеточные компоненты из замороженных эритроцитных продуктов и позволяет получить взвесь
эритроцитов в добавочном растворе (отмывание
порции эритроцитов, хранящихся в обычно используемых растворах антикоагулянта и добавочных
растворов, для удаления плазмы и внеклеточных
компонентов).
Оборудование имеет закрытую систему для
уменьшения риска бактериальной контаминации.
Использование стерильного соединения трубок при
подсоединении мешка с эритроцитами к расходной
системе, позволяет увеличить время хранения после
деглицеролизации и отмывки.
Автоматическая глицеролизация, деглицеролизация и отмывка эритроцитов существенно снижает
риск человеческой ошибки, переливание осуществляется с меньшим риском реакций у пациентов,
также оператор может непрерывно контролировать
процесс. После каждой процедуры принтер, который присоединен к аппарату, распечатывает отчет.
В нем указывается количество отмываний, сколько
мл растворов пошло на процедуру, график содержания свободного гемиглобина.
Показания к назначению размороженных эритроцитов аналогичны таковым при назначении нативной
эритровзвеси или нативных отмытых эритроцитов.
Условия для хранения, транспортировки, переливания размороженных и отмытых эритроцитов такие
же, как и у обыкновенных отмытых эритроцитов.
Нами заморожено более 150 доз эритроцитов,
около 45 доз было разморожено и выдано в лечебную сеть. Каждая доза размороженной эритроцитной взвеси для лечебной сети подвергается тщательному анализу: определяется свободный гемоглобин, надосадочный гематокрит, гемоглобин;
если требуется индивидуальный подбор для больного, ставится проба на совместимость. Только после лабораторных исследований, подтверждающих
качество размороженной эритроцитной взвеси, она
направляется в ЛПУ.
Оценка свойств эритроцитов,
криоконсервированных в полимерных
контейнерах при сверхнизкой температуре
А.В. Чечеткин, Ш.М. Багаутдинов, В.Н. Вильянинов,
Е.Е. Халайчев
ГУЗ Ульяновская областная станция переливания крови
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург
С ноября 2008 г. на Ульяновской областной станции переливания крови внедрен метод криоконсервации клеток крови и проводится формирование
банка карантинизированных эритроцитов, эритроцитов редких групп, а также запаса криоконсервированных эритроцитов на случай возникновения чрезвычайных ситуаций.
Материалы и методы. Исследовали морфофунциональные показатели образцов эритроцитов, криоконсервированных в полимерных криоконтейнерах (Hemofreeze DF-700-3, «Fresenius
HemoCare», Германия) с использованием криофилактического раствора ЦНИИГПК115-М. Хранение криоконтейнеров с эритроцитами осуществля-
46
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 2
ли в криохранилищах MVE 1520 НЕ + FD («Chart»,
США) в парах жидкого азота (-190 ± 0,3°С) в течение 3,1 ± 0,2 мес.
Результаты. Установлено, что гематокрит, содержание эритроцитов и гемоглобина в исследуемых образцах существенных различий по сравнению с аналогичными показателями в контрольной
группе образцов (криоконсервированные в металлических криоконтейнерах эритроциты) не имели.
При использовании полимерных криоконтейнеров концентрация свободного гемоглобина была в
4 раза ниже, степень гемолиза — в 3,4 раза ниже по
сравнению с образцами контрольной группы. Сохранность клеток после смешивания эритроцитов
с консервантом, замораживания, отогрева и отмывания при использовании полимерных контейнеров
DF-700 составила 92,1 ± 2,1% и была выше по сравнению с аналогичным показателем (87,5 ± 2,0%)
контрольной группы образцов. Содержание АТФ в
эритроцитах, криоконсервированных с использованием DF-700, было больше на 22% по сравнению
с таковыми в контрольной группе. По отношению
к исходному содержанию АТФ в эритроцитах, замороженных в DF-700, сохранялось 93,1 ± 1,2%.
Значения показателя P50 в контрольных и исследуемых образцах размороженной эритроцитной
взвеси существенно не различались. При этом они
соответствовали 88,5—93,2% от его уровня в свежеприготовленной (1 сут с момента заготовки) эритроцитной взвеси. В исследуемых образцах отмечено увеличенное количество высоко- и среднестойких клеточных форм по сравнению с контрольными
образцами (на 18,7%). Реологические свойства декриоконсервированной эритроцитной взвеси сохранялись лучше в образцах, замороженных в полимерных контейнерах: индекс деформируемости
эритроцитов был выше на 33,3%, а коэффициент
вязкости — меньше на 10% по сравнению с показателями контрольных образцов.
Вывод. Криоконсервированные в полимерных
контейнерах эритроциты после размораживания обладают высокими реологическими характеристиками, сохраняют газотранспортную функцию и морфологическую полноценность.
УВАЖАЕМЫЕ КОЛЛЕГИ!
Московское общество гемафереза совместно с Департаментом здравоохранения Москвы
и Министерством здравоохранения Московской области
27-28 СЕНТЯБРЯ 2012 ГОДА
проводят 20-ю юбилейную конференцию
Основные темы конференции:
•
Теория и практика гемафереза
•
Селективные и полуселективные методы лечения
•
Сорбционные технологии
•
Кровесберегающие технологии
•
Заготовка и использование донорских компонентов крови
•
Физико-химическая гемокоррекция
Конференция состоится в Конгресс-центре г. Дубна по адресу:
Московская область, г. Дубна
Проезд: метро Алтуфьево, автобус с надписью 20-я конференция МОГ.
Контактные телефоны для справок и переговоров:(495) 783-30-89
8-800-555-03-45 (звонок по России бесплатный)
E-mail: market@trackpore.ru
Заявки на участие в Конференции принимаются на сайте: agora.guru.ru/trackpore
Заявки на гостиницу подавать до 1 сентября. Проживание, питание докладчиков и участников
конференции за счет принимающей стороны.
Во время конференции состоится выставка медицинского оборудования и медицинской литературы.
Планируется издание сборника научных трудов 20-й конференции МОГ.
47