Ведение Состояние мембраны - важный критерий оценки

Ведение
Состояние мембраны - важный критерий оценки функциональной активности клеток, так как через мембрану
осуществляется транспорт ионов, субстратов и кофакторов для всех видов обмена, и поэтому от их характеристик
напрямую зависит как метаболическая активность лимфоцита так и его участие в иммунных реакциях [4].
Известно, что биомембраны характеризуются гетерогенной организацией, в них присутствуют как белковые,
так и липидные молекулы. Входящие в липидный спектр мембраны молекулы определяют основные характеристики мембраны - текучесть, упругость, подвижность рецепторных молекул. Фосфолипиды для мембранных структур являются основным динамическим компонентом, поддерживающим оптимальное структурнофункциональное состояние путем сбалансированных реакций распада и синтеза, обмена между отдельными
субклеточными образованиями. Фосфолипидный состав биомембран в значительной степени подвержен
регуляторным влияниям организма. Например, при стрессорных воздействиях избыток катехоламинов вызывает
активацию перекисного окисления липидов, которое изменяет или повреждает липидный бислой [2,10]. Отмечены
определенные перестройки в мембранах лимфоцитов при вторичных иммунодефицитных состояниях. Для них
характерно увеличение в мембране доли холестерина, который снижает текучесть мембраны, и снижение
количества фосфолипидов. Значимое изменение липидного спектра лимфоцитов происходит при гнойной
хирургической инфекции, отмечено, что в период разгара заболевания в мембране увеличивается содержание
трудноокислясмых фракций липидов [1,5,8].
В последние годы усиливается интерес к роли глутатиона и связанных с ним ферментных систем, так как
предполагается, что глутатион регулирует концентрацию реакционноспособных интермедиантов (активные
формы кислорода) эндо- и экзогенного происхождения на безопасном для организма уровне [7,9].
Глутоксим является структурным аналогом естественного метаболита - окисленного глутатиона. Искусственная стабилизация дисульфидной связи окисленного глугатиона позволяет многократно усилить физиологические эффекты, присущие естественному модифицированному окисленному глутатиону. Работа клетки в новом
окислительно-восстановительном режиме и изменение динамики фосфорилирования ключевых блоков
сигнал-передающих систем и транскриптационных факторов, в первую очередь иммунокомпетентных клеток,
определяет иммуномодулирующий и системный цитопротекторный эффект препарата. Многими авторами
указываются на гепато- и нефропротекторное действие глугоксима.
Обладая высокой реактогенной способностью, озон активно вступает в реакции с различными биологическими объектами, в том числе со структурами клетки. В силу плотной упаковки липидов и белков в биомембранах
именно последние выступают в роли основной мишени биологического действия озона на клетку. По мере
нарастания дозы озона в плазматической мембране модифицируются силы межмолекулярного воздействия, это
проявляется изменением зарядового состояния поверхности. Растет гидрофильность, изменяется микровязкость
анулярного и бислойного липида. Происходят изменения физического и структурного состояния мембран,
связанные с окислительной деструкцией липидов и белков [3,6].
Настоящая работа посвящена анализу влияния глутоксима и озонированного физиологического раствора на
липидный спектр лимфоцитов у больных острым панкреатитом.
Материалы и методы
Обследованно 49 больных отечной формой острого панкреатита различной этиологии. Диагноз ставился на
основании жалоб, анамнеза, клинико-лабораторных данных, результатов осмотра и ультразвукового исследования.
Контрольную группу составили 20 больных, получавших традиционную терапию. На фоне традиционной терапии
20 больных получали озонотерапию, которую осуществляли введением в кубитальную вену 400 мл озонированного
физиологического раствора с концентрацией озона 6 мг/л один раз в сутки в течение 8 дней. Скорость инфузии - 40
капель в минуту. Озонирование раствора необходимо осуществлять непосредственно перед инфузией, так как озон
обладает высокой реактогенной способностью и поэтому быстро разлагается. На фоне традиционной терапии
глутоксим вводился 9 больным внутримышечно ежедневно по 10 мг в течение 5 дней. Традиционное лечение
включало антибактериальную и инфузионную терапию (коллоидные и кристалоидные растворы, белковые
препараты, растворы, корригирующие кислотно-щелочное состояние и электролитный баланс, гемотрансфузии),
цитостатики, ингибиторы протеаз, антикоагулянты.
На 1-3-и и 6-8-е сутки заболевания проводилась оценка липидного спектра лимфоцитов больных.
Для проведения тонкослойной хроматографии брали пробу, содержащую 2,0 *10" лимфоцитов. В дальнейшем экстракцию липидов из пробы проводили по методу Фолча с соавт. (1957).
После экстракции липидов в смеси хлороформ-метанола (2:1 по объему) и ее упаривания экстракт наносили
на силуфолевые пластины фирмы «Cavaler», которые заранее активировались при 110 "С в течение 1 часа.
Разгонка липидных фракций на пластинах осуществлялась при предварительно насыщенных в течение 2-2,5
часа парами хроматографической смеси (гексан, этиловый эфир, ледяная уксусная кислота в объемном соотношении компонентов 85:15:1).
После разгонки фракций пластины просушивали, опрыскивали 5% раствором фосфорномолибденовой кис-
лоты в 96% этаноле и прогревали до 110-120 °С в сухожаровом шкафу.
Следующим этапом анализа липидного спектра лимфоцитов крови была обработка силуфолевых пластин на
денситометре «Хромоскан-200». Сначала на приборе описывались пики, соответствующие по своим размерам
величине липидных фракций, а затем интегратором денситометра определялась доля каждого из пиков. В дальнейшем обработку денситограмм производили на ПЭВМ, на котором обсчитывался процент каждой фракции
липидов.
Результаты исследования и их обсуждение
При исследовании липидного спектра лимфоцитов больных острым панкреатитом выявлены существенные
различия в содержании фракций липидов в сравнении с показателями нормы.
На 1-3-е сутки поступления в стационар у больных ОП наблюдалось снижение в клетках содержания
фосфолипидов. Поскольку ФЛ, являясь динамическим компонентом клеточной мембраны, влияют на проницаемость последней для воды и различных молекул, на подвижность рецепторов, можно думать о снижении проницаемости мембран лимфоцитов у больных острым панкреатитом в разгар болезни и уменьшении интенсивности поступления в клетки и из них продуктов метаболизма.
Увеличивалось соотношения СЖК/ТАГ Отмеченное уменьшение количества в лимфоцитах ЭХ
сопровождалось возрастанием содержания в клетках ХОЛ.
Эти изменения подтверждались и достоверным увеличением соотношения ХОЛ/ФЛ, что свидетельствовало
о повышении микровязкости липидного бислоя мембран лимфоцитов.
Активация ПОЛ, процессов липолиза и накопление СЖК в лимфоцитах при остром панкреатите приводит к
увеличению потребности в ХОЛ, активно участвующего в защитных механизмах мембран клеток. Этот
механизм защиты приводит к тому, что повышается плотность мембраны, что отрицательно сказывается на
функциональных возможностях лимфоцитов (рисунок 1).
При сравнении результатов исследования липидного спектра лимфоцитов больных ОП с разными схемами
лечения установлено следующее. После 8 дней традиционной терапии (группа А) повышалась текучесть
липидного бислоя мембран лимфоцитов за счет снижения ХОЛ, уровень СЖК сохранялся высоким, что
свидетельствует о повышенной активности липолиза (и, вероятно, ПОЛ, так как эти процессы, как правило,
являются взаимостимулирующими).
У больных, получавших озонотерапию в течение 8 дней (группа В), происходили следующие изменения
липидного спектра по сравнению с больными группы А: показатель ХОЛ приближался к норме, повышалось содержание ФЛ и за счет этого понижался показатель ХОЛ/ФЛ. Снижение ТАГ в лимфоцитах больных группы В, по-видимому, можно объяснить тем, что, с одной стороны, субстратные потоки в липидном обмене преимущественно
направлены на синтез ФЛ и ХОЛ, увеличивающихся в лимфоцитах этих больных, а с другой стороны - повышенным
использованием ТАГ, характерным для напряженного функционирования лимфоцитов. Отношение СЖК/ТАГ,
определяющее направленность процессов в системе «липогенез - липолиз», было еще меньше, чем в группе А, и
достигало уровня контрольной группы. Это указывало на более выраженное ингибирование процессов липолиза.
Изменения липидного спектра лимфоцитов больных, получавших глутоксим (группа С), были подобны
отмечаемым в группе В, но были более выражены и свидетельствовали о том, что применение данного препарата у
больных ОП в еще большей степени способствовало нормализации липидного обмена лимфоцитов и восстановлению их функциональных способностей (рис.2).
Выводы
Таким образом, включение в схемы лечения больных острым панкреатитом озонированного физиологического
раствора и глутоксима позволило получить вполне удовлетворительные клинические результаты. Кроме того,
динамика показателей липидного спектра лимфоцитов больных острым панкреатитом, наблюдавшаяся после
лечения, подтверждала достоверность теоретических выводов о механизмах нарушений структурно-функциональных возможностей лимфоцитов при остром
панкреатите, а также возможность «нормализации» их с помощью озонотерапии или метаболического
иммунокорректора глутоксима.
Рис. 1. Объем липидных фракций (%) лимфоцитов больных острым пакреатитам на 1 -2-е сутки забапевания.
Рис. 2. Объем липидных фракций (%) лимфоцитов бапьных острым пакреатитам, в зависимости от применяемой
схемы лечения.