ОБЩАЯ ГИПЕРТЕРМИЯ И ЛАК
advertisement
1 ОБЩАЯ ГИПЕРТЕРМИЯ И ЛАК-ТЕРАПИЯ В ЛЕЧЕНИИ ХИМИОРЕЗИСТЕНТНЫХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ У ДЕТЕЙ Р.С. Исмаил-заде1, Э.А. Жаврид2, О.В. Алейникова1, М.П. Потапнев3, М.В. Белевцев1, Е.П. Вашкевич1, В.П. Савицкий1 РНПЦ детской онкологии и гематологии»1, РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н.Александрова2 РНПЦ гематологии и трансфузиологии3, г. Минск Ключевые слова: химиорезистентные злокачественные опухоли у детей, ЛАК-терапия, общая гипертермия. Приведены ближайшие химиорезистентными результаты распространенными опухолями с использованием лечения 11 детей злокачественными солидными ЛАК-терапии и общей гипертермии. клетки были получены путем экстракорпоральной инкубуции с ЛАК- лимфоцитов периферической крови. У 4 больных имела место рабдомиосаркома 3 герминоклеточная опухоль, у 2- опухоль Аскина, у 1 - недифференцированная саркома печени, у 1 - почечно-клеточный рак. Аутологичные ЛАК-клетки (0,5– 1×109) реинфузировались больным дважды: к концу сеанса общей гипертермии (когда температура тела снижалась до +40,5°С) и на следующий день. Все дети удовлетворительно переносили процедуру общей гипертермии. Последующее наблюдение за больными (термохимиобиотерапии) показало, привело к что полной проведение или такого частичной лечения регрессии опухолевых очагов у 6 детей. WHOLE BODY HYPERTHERMIA AND LAK-THERAPY IN THE MANAGEMENT OF REFRACTORY MALIGNANT TUMOURS IN CHILDREN R.S. Ismail-zade, E.A. Zhavrid , O.V. Aleinikova, M.P. Potapnev, M.V. Belevcev, E.V. Vashkevich, V.P. Savitskiy Key words: refractory malignant tumours in children, LAK-therapy, whole body hyperthermia. 2 Early results of treatment of 6 children with chemorefractory, advanced malignant solid tumours with application LAK-therapy and whole body hyperthermia were presented. LAK-cells were obtained by extracorporal incubation of peripherial blood lymphocytes. Four of them were diagnosed rhabdomyosarcoma, three- germcell tumour, Askin’s tumour-2, undifferentiated sarcoma of liver-1 and renal cell carcinoma -1. Autologous LAK-cells (0,5–1×109) were infused twice; at the end of whole body hyperthermia procedure, when temperature decreased to 40-40,5 0C and the day after the WBH. LAK –therapy as well as whole body hyperthermia well tolerated. Complete and partial clinical response to thermochemobiotherapy was observed in 6 children. ВВЕДЕНИЕ Главная цель иммунотерапии ― изменение биологического взаимоотношения «опухоль – организм» в благоприятном для организма направлении [1]. Перенос лимфоцитов периферической крови, стимулированных в культуре in vitro ИЛ-2, впервые был предложен S.A. Rosenberg в 1980 г. Что касается детской онкологии, этот метод использовался в лечении онкогематологических заболеваний [2]. ЛАК – уникальный механизм противоопухолевой резистентности, а возможно, и иммунологического надзора против опухолей у человека и животных [3]. Они, так же как и ЕК-клетки, оказывают избирательное действие на трансформированные клетки, вызывая лизис опухолевых клеток-мишеней, и не влияют на нормальные клетки своего организма [4, 5]. ЕК-клетки – лимфоциты, экспрессирующие на своей поверхности маркеры CD16 и CD56. Они относятся к системе неспецифического иммунитета и в отличие от цитотоксических лимфоцитов не нуждаются в экспрессии МHC и наличии антигенов. Согласно сложившемуся мнению, ЕК-клетки основная субпопуляция лимфоцитов, экспрессирующая р75ß-цепь рецептора ИЛ-2 и селективно активизирующаяся и пролиферирующая под его воздействием с образованием ЛАК-клеток, способных эффективно лизировать не только ЕК-чувствительные, 3 но и ЕК-резистентные линии опухолевых клеток. Однако, наряду с изложенными представлениями, имеются данные о существовании в популяции ЛАК-клеток ЕК Т-клеток, экспрессирующих не только маркеры ЕК, но и Тклеточные дифференцировочные антигены (СD3, CD4, CD8) [6]. Морфологически ЛАК относятся к большим гранулярным лимфоцитам с хорошо выраженным ободком базофильной цитоплазмы. За последние годы среди эффекторов естественного противоопухолевого иммунитета наибольший практический интерес вызвали ЛАК-клетки, получаемые in vitro при инкубации лимфоидных клеток крови [7, 8]. В клинической онкологии химиорезистентность злокачественных клеток является основной причиной терапевтических неудач, в связи с чем продолжается интенсивный поиск новых терапевтических подходов для ее преодоления и повышения эффективности лечения больных с химиорезистентными и рецидивными формами злокачественных опухолей. Использование высокодозной химиотерапии с пересадкой костного мозга или стволовых клеток периферической крови существенно не улучшило результаты лечения [9, 10, 11, 12, 13]. Большие надежды возлагаются в этом плане на применение биотерапии, в том числе ЛАК-терапии, а также гипертермии или их комбинации [8, 14, 15, 16, 17, 18, 19 20]. На ЛАК-клетки возлагаются большие надежды как активного противоопухолевого биоагента: • ЛАК-клетки обладают более высокой киллерной активностью, чем мононуклеары крови в отношении к клеточной линии К-562 [4]. • Они оказывают избирательное действе на трансформированные клетки, вызывая лизис опухолевых клеток-мишеней, не влияют на нормальные клетки своего организма [4, 14, 15]. • ЛАК-терапия с ронколейкином была применена в комплексном лечении 8 больных раком яичника. Достигнутый эффект дает основание считать метод перспективным для лечения этого заболевания [16]. 4 • ЛАК-клетки способны лизировать даже линии опухолей яичника, экспрессирующее факторы лекарственной устойчивости, такие как P-gp и MDR [17]. • Показано, что ЛАК-клетки более интенсивно поступают в опухолевую ткань после введения цитостатиков. Поэтому комбинированное применение цитостатиков и ЛАК-клеток способно улучшать противоопухолевый эффект, что показано на примере рака почки и яичников [18, 19]. Весьма интересным и важным является in vivo движение и накопление ЛАК-клеток в различных тканях больного с распространенном опухолевым процессом: – J.E. Economou et al. изучили распределение опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов (ОИЛ) и МПК после инкубации с ИЛ-2 при адоптивной иммунотерапии у 9 больных. Лимфоциты обоих типов были маркированы с амфотропик ретровирусными векторами LNL6 и G1Na для дальнейшего прослеживания их в тканях (полученных после биопсии) больного с помощью ДНК ПЦР. Результаты клинического исследования показали, что перелитые лимфоциты остаются в тканях больного около 1 месяца и больше накапливаются в крови, мышце, коже нежели в опухоли [20]. – K.D. Griffith et al. использовали радиоизотопный метод при изучении распределения ОИЛ и МПК после адоптивной иммунотерапии одновременно с химиотерапией (циклофосфамид) у 18 больных. При этом в качестве радиометки был использован изотоп indium-111. Меченные лимфоциты больше накапливались в пораженных опухолью частях тела и ОИЛ сравнительно больше накапливаются чем ЛПК [21]. – B.A. Pockay et al. также использовали изотоп indium-111 для визуализации распределения ОИЛ у 31 больного с метастатической меланомой при адоптивной иммунотерапией. Установлено, что меченные лимфоциты локализовались в зоне поражения, и при этом введение циклофосфамид за 24– 36 часов до адоптивной иммунотерапии благоприятно влияет на накопление 5 меченных лимфоцитов в пораженных опухолью зонах, что в свою очередь влияет на степень регрессии опухолевых очагов [22]. R.D. Dillman et al. практически повторили работу B.A. Pockay et al. по различным злокачественным опухолям (ПКР, колоректальный рак и меланома). У всех 8 больных метастазы опухоли в различных областях тела (костях, головном мозге, периферических, медиастинальных, парааортальных и других лимфатических узлах, легких и печени) накапливали ОИЛ, что было доказано меченными изотопами indium-111. При этом уровень накопления ОИЛ не корелировал со степенью регрессии опухолевых очагов [23]. B. Fisher et al. провели клиническое исследование с целью изучения трафика ОИЛ после адоптивной иммунотерапии у 6 больных с метастатической меланомой. По истечении 2 часов после инфузии ОИЛ, меченных изотопом indium-111, отмечено их накопление в легких, печени и селезенке. В легочной ткани активность изотопа уменьшалась в течение 24 часов [24]. Влияние гипертермии на трансмембранный перенос и метаболизм опухолевых клеток может привести к преодолению лекарственной устойчивости и повышению иммуногенности опухоли [25]. Особый интерес представляют экспериментальные работы по использованию ЛАК-клеток в комбинации с гипертермией. E.D. Strauch et al. [26] в эксперименте на мышах показали высокую эффективность применения гипертермии с интраперитонеальным введением ЛАК-клеток при лечении висцеральных метастазов МСА-105 саркомы. J. Nakayama et al. [27] также изучили противоопухолевый эффект ЛАК-терапии в комбинации с гипертермией на клеточные линии меланомы (F1, F10 и B16). Предварительная гипертермическая обработка клеток при режиме 43 °С в течение 3 ч с последующим воздействием ЛАК-клетками приводила к 100 %-ной гибели опухолевых клеток. В другой работе J. Nakayama et al. [28] исследовали противоопухолевый эффект подобной комбинации при использовании Тклеточной линии лимфомы. Констатирована высокая эффективность такого 6 подхода. Сочетанное применение ЛАК-клеток и гипертермии может также усилить миграцию лимфоцитов в пораженную опухолью зону [29]. Накопленный практический опыт показал, что терапевтический эффект гипертермии зависит от температурного режима. ОГ (> 42 °С) является оптимальной для повреждения опухолевых очагов и усиления их иммуногенности. Однако ОГ в жестком температурном режиме одновременно может ингибировать иммунный ответ организма, в основном вследствие гибели лимфоцитов [30, 31]. В этом ракурсе весьма целесообразным является сочетанное использование ОГ и ЛАК-терапии. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Нами впервые в Республике Беларусь получены и использованы в комплексном лечении у 11 детей с далеко зашедшими злокачественными опухолями ЛАК-клетки из лимфоцитарной массы. Возраст детей составил от 8 до 17 лет. Все дети находились на лечении в ГУ «Республиканский научнопрактический центр детской онкологии и гематологии» [32, 33, 34, 35, 36]. Клиническая характеристика больных приведена в таблице 1. В нашей работе мы оценили возможность сочетания для повышения клинической эффективности использования ОГ и ЛАК-терапии у больных с химиорезистентными и далеко зашедшими онкологическими заболеваниями у детей. У 3 детей была злокачественная герминоклеточная опухоль (ЗГКО), IV стадия. У одного больного с ЗГКО средостения и правого гемиторакса имел место второй рецидив болезни с поражением левого легкого. Больному на предыдущих этапах лечения было проведено 12 блоков полихимиотерапии и блок высокодозной химиотерапии с пересадкой периферических стволовых клеток, а также две торакотомии с удалением опухоли. У двоих больных с ЗГКО было поражение яичка с множественными метастазами в парааортальных лимфатических узлах и обоих легких. 7 У одной больной был почечно-клеточный рак (ПКР) с метастазами в парааортальных лимфатических узлах и в средостении. После нефрэктомии и лимфаденэктомии было проведено 5 сеансов ОГ с введением доксорубицина и Интрона-А (по 3 млн ед/м2, ежедневно 3 дня до ОГ, перед сеансом ОГ и 3 дня после ОГ). Однако через 5 месяцев выявлено прогрессирование опухолевого процесса. Проведены еще 3 сеанса ОГ (42 °С – 3 часа) с введением 500 мг карбоплатина и Интрона-А с интервалом в 3 недели. Несмотря на это, была зафиксирована отрицательная динамика. У одного больного была рецидивная злокачественная мезенхимальная саркома правой доли печени. Лечение по поводу первичной опухоли проводилось согласно программе ММТ-95 (9 блоков химиотерапии по схеме IVA и резекция печени). Противорецидивная химиотерапия проводилась в условиях ОГ и ЛАК-терапии. У двух больных со вторым рецидивом примитивной нейроэктодермальной опухоли (ПНЭО) с метастазами в левом легком) на предыдущих этапах были проведены многократные курсы химиотерапии, 2 торокотомии с удалением опухоли и курсы лучевой терапии. У одного больного с распространенной эмбриональной рабдомиосаркомой (ЭРМС) мочевого пузыря (множественные метастазы в обоих легких), которому проводили 2 сеанса ОГ+ЛАК-терапия, до сеансов термохимиобиотерапии было проведено удаление первичного очага и 3 курса химиотерапии. У одного больного с местно-распространенной ЭРМС предстательной железы и шейки мочевого пузыря ОГ+ЛАК–терапия проводилась после 16 курсов химиотерапии и лучевой терапии по радикальной программе. У одного больного с распространенной ЭРМС мягких тканей подколенной ямки и множественными массивными метастазами в обоих легких термохимиобиотерапия проведена как salvage-терапия, так как на фоне проведения 3 блоков химиотерапии был отмечен рост метастазов. 8 У одного больного с распространенной эмбриональной ЭРМС левого яичка, семенного канатика с асцитом (IV стадия) ОГ+ЛАК-терапия проводилась после 3 курсов химиотерапии. Накануне сеанса ОГ (за 48–96 часов) больному проводили цитоферез на аппарате «Baxter» (США) с забором МПК в количестве 1–2×109 в конечном объеме 200 мл стабилизированной плазмы по ранее описанной методики. Сеансы ОГ проводились на установках «Эмона», «Яхта-5» и «Птичь» под общим комбинированным эндотрахеальным закисно-кислородным наркозом в сочетании с нейролептаналгезией по ранее описанной методике. Во время сеансов ОГ проводили химиотерапию в зависимости от типа злокачественной опухоли и ранее проведенного лечения. При этом использовали доксорубицин (40–50 мг/м2), карбоплатин (400 мг/м2), этопозид (100–150 мг/м2), ифосфамид (3 г/м2), топотекан (0,75–1,0 мг/м2), циклофосфамид (0,25–1,0 г/м2). Все химиопрепараты, за исключением циклофосфамида и ифосфамида, вводили во время сеанса ОГ по достижении температуры 40–41 ºС. Ифосфамид циклофосфамид вводили за 1 ч до начала сеанса ОГ ввиду особенностей фармакокинетики его активного метаболита. Аутологичные ЛАК- клетки в дозе 0,5–1,0 × 109 вводили внутривенно медленно в конце процедуры ОГ при снижении температуры тела до + 40 ºС в 250–500 мл физиологического раствора со скоростью 80–100 мл/м2/час вместе с ИЛ-2 в дозе 0,125 млн ед/м2 (рисунок 1). На следующий день после сеанса ОГ введение ЛАК-клеток повторяли (без ОГ). 9 Tаблица 1 – Краткая характеристика детей с химиорезистентными опухолями, подвергнутых системной термохимиобиотерапии Пол Возраст, лет Ж* Ж М М М 12 14 Гистологический тип Стадия ПКР, IV светлоклеточ ный тип ЗГКО, смешенный тип 11 ЗГКО, смешенный тип 12 ЗГКО, смешенный тип 8 Мезенхимальная саркома IV Распространенность Поражение левой почки + парааортальные л/узлы и средостение Предшествовавшая терапия 8 блоков химиотерапии в условиях ОГ+ Интрон-А 12 блоков Поражение правого легкого химиотерапии. ( II рецидив) Объем перееливаемых ЛАКклеток 1,0×109 Максим тем-ра ТºС 43,0 0,8×109 43,0 Карбоплатин СR 3 блока химиотерапии 0,5 ×109 43,2 IV Поражение правого яичка+ множественные мтс в парааортальных л/узлах и легких 3 блока химиотерапии 0,75 ×109 42,5 18 блоков химиотерапии и атипичная резекция доли 0,5 ×109 42,0 ( I рецидив) Карбоплатин Удаление опухоли (дважды) IV III Регресссия опухоли PR Поражение левого яичка+ множественные мтс в парааортальных л/узлах и легких Субтотальное поражение правой доли печени Химиопрепараты Ифосфамид Этопозид SD Карбоплатин Этопозид SD Карбоплатин MR Этопозид 10 Продолжение таблицы 1 М М М* М М М 11 10 7 14 16 ПНЭО ПНЭО ЭРМС ЭРМС ЭРМС ЭРМС Средостение справа + метастазы в левом легком 12 блоков химиотерапии. Удаление опухоли Заднее средостение справа второй рецидив опухоли + метастазы в левом легком 14 блоков химиотерапии + ОГ. Дважды 0,8×109 удаление опухоли и локальное лучевое лечение IV Мочевой пузырь + метастазы в легких Удаление первичной опухоли и 3 блока химиотерапии IV Подколенная ямка + метастазы в легких Ампутация конечности + 3 блока химиотерапии III Предстательная железа и шейка мочевого пузыря 14 блоков химиотерапии и 2 курса лучевой терапии IV Мошонка, придатки и семенной канатик правого яичка и вторичный асцит 4 блока химиотерапии III III *-проводилось 2 сеанса ЛАК-терапии в условиях ОГ 0,5 ×109 42,0 Карбоплатин Топотекан 42,0 Циклофос- Карбоплатин 0,75×10 42,5 Эпирубицин Карбоплатин 9 0,75 ×10 42,0 Эпирубицин Топотекан 9 0,75×10 42,0 Циклофосфамид Карбоплатин 2,9×10 СR фамид 9 9 PR 42,0 Эпирубицин PR NR MR PR 11 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Осложнений совместного применения ЛАК-терапии в условиях ОГ, также как и самого лимфофереза, мы не наблюдали. У каждого второго больного в конце инфузии ЛАК-клеток повышалась температура тела до 38 ºС, что обычно имеет место при введении ИЛ-2. Оценку клинического эффекта совместного применения ОГ и ЛАК-клеток проводили по критериям ВОЗ на основании как клинического, так и визуализирующих методов исследования. A Б А –полученная после цитофереза Б – полученная после 72-часовой инкубации c ИЛ-2 (ЛАК-клетки) Рисунок 1 – Лимфоцитарная масса Результаты анализа цитотоксической активности in vitro против эритромиелобластной клеточной линии К-562 убедительно демонстрировали достоверное увеличение цитотоксичности ЛАК-клеток в процессе их получения в течение 2–3 суток (рисунок 2). ЛАК-клетки также как лимфоциты оказались чувствительными к температурным воздействиям (рисунок 3). Все дети удовлетворительно переносили процедуру ОГ. На следующий день после сеанса они практически не нуждались в постельном режиме. Всем 12 больным проводилось только инфузионное лечение на 1–2 дня с целью поддержания водно-солевого баланса. А 90,0 Б 45,0 80,0 40,0 70,0 35,0 p<0,0001 60,0 25,0 50,0 20,0 40,0 p<0,05 2 15,0 20,0 1 1 10,0 1 5,0 30,0 2 p<0,002 2 30,0 0,0 10,0 10:1 20:1 40:1 0,0 1 2 контроль ИЛ-2 1 – МПК культивировали без ИЛ-2; 2 – МПК культивировали в присутствии ИЛ-2 (ЛАК-клетки) А) Индивидуальные данные для каждого пациента при соотношении эффекторов к мишеням 40:1 Б) Суммарные данные для всех пациентов при различных соотношениях эффекторов и мишеней Рисунок 2 – Влияние культивирования с ИЛ-2 (1000 ед/мл) на цитотоксическую активность МПК онкологических больных против опухолевых клеток линии К-562 Количество погибших мишеней, % 35,0 30,0 25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0 10:1 20:1 40:1 Соотношение эфектор:мишень 37 40 42 13 Рисунок 3 – Влияние температурного режима на цитотоксическую активность МПК онкологических больных (после инкубирования с ИЛ-2 (1000 ед/мл )) против опухолевых клеток линии К-562 Тяжелых осложнений, описанных в литературе, таких, как большие и глубокие ожоги, ДВС-синдром, нарушение функции сердца и почек и др., мы не наблюдали. У одного больного после сеанса ОГ был поверхностный ожог кожи задней поверхности бедра площадью 12 см2, который требовал лишь местного лечения. Непосредственные результаты ОГ и ЛАК-терапии оценены у всех детей, получавших неоадъювантное лечение на основании как клинического, так и визуализирующих методов исследования (УЗИ, КТ). Результаты представлены в таблице 1. Согласно полученным данным, объективный лечебный эффект (полная и частичная регрессия (CR+PR) достигнут у 6 из 11 детей. У четырех больных получена стабилизация процесса (SD) или минимальная регрессия (MR). Лишь у одного больного с большой массой остаточной опухоли было отмечено дальнейшее прогрессирование. Сроки наблюдения за больными невелики (3–30 месяцев), однако полученные предварительные данные весьма обнадеживают с учетом прогностической характеристики пролеченных больных. Однако до сих пор окончательно не известно необходимое количество таких процедур. Необходимо дальнейшее клиническое исследование для оптимизации лечебной стратегии с включением ОГ и биотерапии у этой категории больных. Мы проанализировали изменение субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови пациентов до и после проведения им ОГ с ЛАКтерапией. Основные результаты представлены в таблице 2. Из таблицы видно, что после лечения достоверно повышается относительное содержание Тлимфоцитов, причем в основном за счет Т-хелперной субпопуляции, а цитотоксические Т-лимфоциты несколько снижаются. Хотелось бы отметить достоверное снижение числа активированных Т-лимфоцитов (CD3+HLA-DR+). 14 Содержание естественных киллеров и естественных Т-киллеров практически не изменяется при проведении ОГ с ЛАК-терапией. Так же не меняется число Влимфоцитов. При анализе изменения абсолютного содержания Т-, В-, ЕК лимфоцитов так же достоверных изменений выявлено не было. Как свидетельствуют приведенные данные, ОГ с ЛАК-терапией пациентам с далеко зашедшими опухолями не оказывает значительного влияния на субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови. Таблица 2 – Изменение субпопуляционного состава лимфоцитов Показатель До ОГ+ЛАК-терапии Т-лимфоциты (CD3+), % В-лимфоциты (CD19+), % Активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+), % Т-хелперы (CD3+CD4+), % Цитотоксические Т-лимфоциты (CD3+CD8+), % Индекс CD4/CD8 ЕК (CD16+CD56+), % Естественные T- киллеры (CD3+CD16+CD56+), % Регуляторные Т-лимфоциты (CD4+CD25+), % Активированные (апоптотические) Т-лимфоциты (CD3+CD95+), % Абсолютное содержание Тлимфоцитов, 109/л Абсолютное содержание Влимфоцитов, 109/л Абсолютное содержание ЕК, 109/л 72±4,6 8,9±2,4 После ОГ+ЛАКтерапии 74,8±3,7 8,5±2,5 12,7±3,6 9,7±3,6 29,3±3,1 33,5±3,6 38,3±3,5 36,6±3,9 0,9±0,17 12,7±2,7 1,12±0,22 11,3±2,6 5,1±1,4 5,3±1,6 11,4±1,9 11,3±1,7 p 0,04 0,4 0,04 0,09 0,3 0,16 0,25 0,4 0,4 0,35 38,9±5,1 37,4±7,5 0,86±0,14 0,68±0,15 0,13±0,01 0,10±0,03 0,15±0,04 0,14±0,06 0,13 0,15 0,44 Инфузия аутологичных ЛАК-клеток в объеме 0,5–1,0 х 109 в конце сеанса ОГ и на следующий день позволяет поддержать на стабильном уроне абсолютное содержание Т- и В-лимфоцитов. Разработанная нами методика ОГ и ЛАК-терапия обеспечивает содержание ЕК на уровне нормальных значений на протяжении всего курса терапии, а так же сохранение на достаточно высоком уровне (около 1) иммунорегуляторного индекса (соотношение 15 CD4/CD8), что в итоге позволяет сохранить противоопухолевый потенциал иммунитета на фоне иммуносупрессивной терапии. Таким образом, одним из перспективных путей повышения эффективности лечения больных с химиорезистентными, далеко зашедшими и рецидивными формами злокачественных солидных опухолей может быть системная термохимиоиммунотерапия. ВЫВОДЫ • Оптимальным и безопасным способом получения лимфокин- активированных киллеров свыше 1×109 клеток является забор МПК с помощью цитофереза и экстракорпоральной инкубацией их с препаратом ИЛ-2. • Инфузия аутологичных ЛАК-клеток в объеме 0,5–1,0 × 109 в конце сеанса ОГ и на следующий день позволяет поддержать на стабильном уровне абсолютное содержание Т- и В-лимфоцитов. Разработанная нами методика ЛАК-терапии обеспечивает содержание ЕК на уровне нормальных значений на протяжении всего курса терапии, а так же сохранение на достаточно высоком уровне иммунорегуляторного индекса (соотношение CD4/CD8). • Согласно полученным предварительным данным, объективный лечебный эффект (CR+PR) после комбинированного применения ЛАК-терапии и системной термохимиотерапии достигнут у 6 из 11 детей. Список использованных источников 1. Препараты, методы и схемы иммунотерапии опухолей/ В.И. Новиков [et al.]// ─M.: Медицина, 2006. C. 150. 2. Опыт применения интерлейкина-2 и лимфоактивированных клеток-киллеров в терапии онкогематологическских заболеваний у детей /М. В. Киселевский [и др.] // Иммунология. ─ 2002. ─ № 1. ─ С. 56–59. 3. Rosenberg, S. A. Lymphokine-activated killer cells. A new approach immunotherapy of cancer / S. A. Rosenberg // J. Nat. Cancer Inst. – 1985. –Vol. 75. –P. 595–603. 4. Retaliation against tumor cells showing aberrant HLA expression using lymphokine activated killer-derived T cells / C. S. Falk [et al.] // Cancer Res. ─ 2002. ─Vol. 62. ─ P. 480–487. 5. Foss, F. M. Immunologic mechanisms of antitumor activity / F. M. Foss // Semin. Oncol. ─ 2002. ─ Vol. 29. ─ P. 5–9. 6. A new method for in vitro expansion of cytotoxic human CD3-CD56+ natural killer cells / S. Cariens [et al.] // Hum. Immunol. ─ 2001. ─ Vol. 62, № 4. ─ P. 1092–1098. 16 7. Lymphokine-activated killer cell phenomenon. Lysis of natural killer-resistant fresh solid tumor cells by interleukin-2 activated autologous human peripherial blood lymphocytes / E. A. Grimm [et al.] // J. Exp. Med. ─ 1982. ─ Vol. 27. ─ P. 1823–1841. 8. Kimura, H. Adjuvant chemo-immunotherapy after curative resection of stage II and III primary lung cancer / H. Kimura, Y. Yamaguchi // Lung Cancer. – 1996. –Vol. 14. – P. 301–314. 9. Lack of an effect of adjuvant chemotherapy on the elimination of single dormant tumor cells in bone marrow of high risk breast cancer patients / S. Braun [et al.] // J. Clin. Oncol. – 2000. – Vol. 18, № 1. – P. 80–86. 10. Ineffctiveness of doxorubicin in the treatment on solitary dormant mammary carcinoma cells or late-developing metastases / G. N. Naumov [et al.] // Breast Cancer Res. Treat. – 2003. – Vol. 82, № 3. – P. 199–206. 11. High dose chemotherapy followed by peripherial blood stem сell rescue for metastatic rhabdomysarcoma / D. O. Walterhause [et al.] // Med. Pediatr. Oncol. – 1999. – Vol. 32, № 2. – P. 88–92. 12. Do patients with metastatic and recurrent rhabdomyosarcoma benifit from high dose therapy with hematopoetic rescue / E. Koscielniak [et al.] // Bone Marrow Transplant. – 1997. – Vol. 19, № 3. – P. 221–231. 13. Hortobagy, G.N. What is the role of high-dose chemotherapy in the era of targeted therapies? / G.N. Hortobagy // J. Clin. Oncol. – 2004. – Vol. 22, № 12. – P. 2273–2282. 14. Freedman, R.S. Immunotherapy for peritonel ovarian carcinoma metastasis using ex in vivo expanded tumor-infiltrating lymphocytes / R.S. Freedman //Cancer Treat. Res. – 1996. – Vol. 82. – P.115–116 15. Hayes, R. Lymphokine activated killer cells from umbilical cord blood show higher antitumor effect against anaplastic astrocytoma cell line (U87) and medulloblastoma cell line (TE671) than lymphokine activated killer cells from peripherial blood / R. Hayes, E. Arbit, M.Odaimi // Crit. Rev. Oncol. Hematol. –2001. –Vol.39. –P.31– 42 16. Златник, Е.Ю. Изучение возможности применения ронколейкина для ЛАК-терапии рака яичников/ Е.Ю. Златник, Л.Ю. Голотина // Вопр. онкологии. –2005. – Т. 51. № 7. – С. 680 – 84. 17. P-glycoprotein-mediated multidrug resistance and lymphokine-activated killer cells susceptibility in ovarian carcinoma / B. Savas [et al.] // J. Clin. Immunol. – 1996. – Vol. 16, № 6. – P. 348–357 18. Тomita, Y. Adopttive immunotherapy of patients with metastatic renal cell cancer using lymphokine-activated killer cells, interleukin-2 and cyclophosphamide: long-term results / Y. Тomita // Int. J. Urol. – 1998. – Vol. 5, № 1. – P. 16–21. 19. Interleukin-2: hope in case of cisplatin-resistant tumors/ M.R. Bernsen [et al.] // Cancer Immunol. Immunother. – 1998. – Vol.46, № 1. – P. 141–147. 20. In vivo trafficking of adoptively transferred interleukin-2 expanded tumor–infiltrating lymphocytes and peripheral blood lymphocytes / J.E. Economou [et al.] // J. Clin. Invest. – 1996. – Vol. 97, № 2. – P. 515–526. 21. In vivo distribution of adoptively transferred indium-111-labeled tumor infiltrating lymphocytes and peripheral blood lymphocytes in patients with metastatic melanoma / K.D. Griffith [et al.] // J. Natl. Cancer Inst. – 1989. – Vol. 81, № 22. – P. 1709–1717. 22. Localization of indium-111-labeled tumor infiltrating lymphocytes to tumor in patients receiving adoptive immunotherapy. Augmentation with cyclophosphamide and correlation with response / B.A. Pockay [et al.] // Cancer. – 1994. – Vol. 73, № 6. – P. 1731–1737. 17 23. Tumor localization by tumor infiltrating lymphocytes labeled with indium-111 in patients with metastatic renal-cell carcinoma, melanoma and colorectal cancer / R.D. Dillman [et al.] // Cancer Biother. Radiopharm. – 1997. – Vol. 12, № 2. – P. 65–71. 24. Tumor localization of adoptively transferred indium-111-labeled tumor infiltrating lymphocytes in patients with metastatic melanoma / B. Fisher [et al.] // J. Clin. Oncol. – 1989. – Vol. 7, № 2. – P. 250–261. 25. Механизмы развития и пути преодоления химиорезистентности опухолей / О. К. Kурпешов [и др.] // Рос. онкол. журн. ─ 2003, ─№ 3. ─ C. 50–53. 26. Combined hyperthermia and immunotherapy treatment of multiple pulmonary metastases in mice / E. D. Strauch [et al.] // Surg. Oncol. ─1994. ─Vol. 3, № 1. ─ P. 45–52. 27. Responses of B16 melanoma cell lines, F1 and F10, to hyperthermia, lymphokine-activated killer cells and a combination of both in vitro / J. Nakayama [et al.] // Br. J. Dermatol. ─ 1992. ─Vol. 126, № 2. ─ P. 131–136. 28. Augmentation of in vitro cytolytic activity of LAK cells with heated ATL-derived cell lines / J. Nakayama [et al.] // J. Dermatol. ─1993. ─ Vol. 20, № 8. ─ P. 457–465. 29. Midis, G. P. Lymphocyte migration to tumors after hyperthermia and immunotherapy / G. P. Midis, D. F. Fabian, A. T. Lefor // Surg. Res. ─ 1992. ─ Vol. 52, № 5. ─ P. 530–536. 30. Yang, H. Effect of hyperthermia on natural killer cells: inhibithion of lytic function and microtubule organization / H. Yang, W. Lauzon, I. Lemaire // Int. J. Hyperthermia. – 1992. – Vol. 8, № 8. – P. 87–97. 31. Influence of elevated temperature on natural killer cell activity, lymphokine-activated killer cell activity and lectin-dependent cytotoxicity of human umblical cord blood and adult blood cells / R. N. Shen [et al.] // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. – 1994. – Vol. 29, № 1. – P. 821–826. 32. Первый опыт использования ЛАК-терапии с общей гипертермией в лечении химиорезистентных злокачественных опухолей у детей / Р. С. Исмаил-заде, М.П. Потапнев, Е.В. Вашкевич, Э.А. Жаврид, О.В. Алейникова, В.П. Савицкий, М.В. Белевцев, Я.И. Исайкина //Белорусский медицинский журнал. – 2005. – №2. – C. 115 – 117. 33. Терапия лимфокин-активированными киллерами в лечении химиорезистентных злокачественных опухолей у детей / Р.С. Исмаил-заде, Е. В. Вашкевич, М.П. Потапнев, Э.А. Жаврид, О.В. Алейникова, В.П. Савицкий // Актуальные вопросы онкологии и медицинской радиологии. Рецензируемый сборник научных работ. – Минск, 2006. – С. 456–465. 34. Ismail-zade, R.S. LAK-therapy with whole body hyperthermia in the management of refractory pediatric malignant tumor /R. S. Ismail-zade // Book of Abstracts 23rd Annual Meeting of the European Society for Hyperthermic Oncology. –Berlin-2006 –P.-20. 35. Ismail-zade, R.S. Combined LAK-therapy and whole body body hyperthermia in pediatric cancer treatment /R. S. Ismail-zade // Book of Abstracts 24 th Annual Meeting of the European Society for Hyperthermic Oncology. – Prague. – 2007. – P. 38. 36. Способ лечения резистентной злокачественной опухоли: пат. 10132 Респ. Респ. Беларусь / Р. С. Исмаил-заде, Э.А. Жаврид, М.П. Патапнев, Е.П. Вашкевич; заявитель НИИ онкологии и мед. рад. им. Н. Н. Александрова – № а20041243; заявл. 28.12.04; положительное решение о выдачи патента на изобретение от 28.08.07// Афіцыйны бюл. / Нац. цэнтр iнтелект. уласнасцi. ─ 2006, ─ № 3. –C. 9. Авторы: Р.С. Исмаил-заде, Э.А. Жаврид, 18 О.В. Алейникова, М.П. Потапнев, М.В. Белевцев, Е.П. Вашкевич, В.П. Савицкий
