Влияние препарата Рефнот на иммунитет у онкологических

ШКОЛА КЛИНИЦИСТА
№ 20–21 (705–706) 27 июля 2015 г.
11
Влияние препарата Рефнот
на иммунитет
у онкологических больных
З.Г. КАДАГИДЗЕ,
заведующая централизованным клинико-лабораторным отделом, профессор,
заслуженный деятель науки РФ
Е.Г. СЛАВИНА,
ведущий научный сотрудник лаборатории
клинической иммунологии опухолей
НИИ клинической онкологии,
доктор медицинских наук
А.И. ЧЕРТКОВА,
старший научный сотрудник лаборатории
клинической иммунологии опухолей
НИИ клинической онкологии,
кандидат медицинских наук
М.Р. ЛИЧИНИЦЕР,
руководитель отделения химиотерапии и комбинированного лечения
злокачественных опухолей
НИИ клинической онкологии,
академик РАН, профессор
М.Е. АБРАМОВ,
старший научный сотрудник отделения
химиотерапии и комбинированного лечения
злокачественных опухолей
НИИ клинической онкологии,
кандидат медицинских наук
ФГБНУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» РАМН (Москва)
Гибридная молекула
Препарат Рефнот представляет собой
гибридную молекулу рекомбинантного
фактора некроза опухоли альфа (ФНО-α) и
тимозина a1. Он состоит из 185 аминокислотных остатков, из которых последние 28
на С-конце являются последовательностью
тимозина a1. ФНО-α был выделен в 1975
году из сыворотки мышей. ФНО-α способен
индуцировать апоптоз и некроз опухолевых
клеток. При определенных условиях ФНО-α
может вызывать повреждение кровеносных
сосудов в опухоли, что играет большую
роль в его противоопухолевом эффекте.
В условиях in vitro ФНО-α усиливает цитотоксическое и апоптотическое действие
химиопрепаратов в отношении клеток
злокачественных опухолей.
Этот цитокин синтезируется главным
образом иммунными клетками и оказывает
значительное влияние как на врожденный,
так и на адаптивный иммунитет. Он способен активировать Т-лимфоциты и дендритные клетки, что приводит к усилению
противоопухолевого адаптивного иммунного ответа. ФНО-α является основным
регулятором иммунного и воспалительного
ответа на опухоль, обладает выраженными цитотоксическим, цитостатическим и
иммуномодулирующим эффектами. Однако
при системном введении рекомбинантный
ФНО-α высокотоксичен для человека, что
не позволяет достигать необходимых терапевтических доз.
Таким образом, применение ФНО-α в
медицине оказалось ограниченным его
побочными эффектами и было временно
прекращено. Начался поиск новых гибридных молекул на его основе. Значимые клинические результаты были получены при
применении ФНО-α в монотерапии или в
комбинации с мелфаланом при изолированной регионарной перфузии у пациентов с
меланомой или саркомой конечностей. При
меланоме объективный ответ был достигнут более чем у 90% больных. Имеется
также сообщение о регрессе неоперабельных метастазов колоректального рака при
изолированной перфузии печени ФНО-α
совместно с мелфаланом.
Тимозин a1 — естественный лимфопоэтический фактор тимуса, эндогенный регу-
11
лятор врожденного и адаптивного иммунитета. Таким образом, Рефнот является
уникальным соединением — гибридной
молекулой двух биологически активных
агентов: цитокина ФНО-α и тимозина a1.
Рефнот в отличие от ФНО-α характеризуется
низкой системной токсичностью, однако
сохраняет противоопухолевую активность
данного цитокина.
Лечение Рефнотом и
химиотерапией
В работе представлены результаты исследования влияния Рефнота в сочетании с
химиотерапией на показатели иммунитета
у больных диссеминированной меланомой
кожи (ДМК) на разных этапах лечения. В
исследование были включены пациенты
с ДМК, ранее не получавшие лечения по
поводу диссеминации болезни (n=21).
Контролем служили доноры без признаков
онкологических заболеваний (n=25). Все
пациенты получали лечение по следующей
схеме: Рефнот вводили в дозе 100—400
тыс. МЕ в 1—5-й дни подкожно с двухдневными перерывами в течение 2—4 недель.
Начиная с 3-й или 5-й недели проводили
химиотерапию. Перерыв между курсами
составил 2 недели. Состояние иммунитета
определяли до начала лечения, после 2—4
недель терапии Рефнотом (до химиотерапии) и перед вторым курсом химиоиммунотерапии.
Иммунофенотипирование лимфоцитов
периферической крови проведено с помощью цитометрического анализа с использованием панели моноклональных антител
к поверхностным маркерам лимфоцитов.
Цитотоксическая активность естественных
киллеров (ЕК-клеток) определена с помощью полуавтоматического колориметрического МТТ-теста.
До лечения у 48% больных ДМК было
достоверно снижено количество CD3+-Тлимфоцитов по сравнению с контролем
(56 и 73%). В то же время у больных отмечено: значительное повышение исходного
количества CD3—CD16+CD56+ ЕК-клеток,
снижение количества CD8+-Т-лимфоцитов,
экспрессирующих коактивационный рецептор CD28; сдвиг соотношения CD8+CD28+/
CD8+CD28– (0,36 против 1,04 в контрольной
группе. После введения Рефнота сниженное
количество CD3+-клеток было отмечено у
33% больных. Перед вторым курсом лечения обследование было проведено 11 пациентам, и сниженное по сравнению с нормой
количество CD3+-Т-клеток выявлено лишь
у 1 (9,1%) больного.
После терапии Рефнотом у 4 из 10 пациентов со сниженным до лечения количеством
CD3+-Т-клеток отмечена нормализация
основных показателей иммунитета. Так,
процент CD3+-Т-клеток повысился до контрольного уровня, возросло и количество
CD3+CD4+ и сниженное до лечения число
CD3+CD8+-Т-лимфоцитов. Повышенный
у этих пациентов до лечения процент
CD3—CD16+CD56+ЕК-клеток после терапии
Рефнотом снизился до уровня контроля.
На фоне снижения количества ЕК-клеток
отмечена и тенденция к повышению их
цитотоксической активности.
У этих больных также повысилось сниженное по сравнению с контролем количество CD8+CD28+-Т-лимфоцитов и соответственно практически в 2 раза возросло
соотношение CD8+CD28+/CD8+CD28–. И
до и после терапии Рефнотом у данной
группы больных количество активированных Т-клеток (CD3+HLA-DR+) превышало
контрольные значения. У остальных 6 из
10 пациентов со сниженным до лечения
количеством CD3+- Т-лимфоцитов отмечено уменьшение основных показателей
Т-клеточного звена иммунитета (включая
CD8+CD28+-Т-клетки и величину соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28–), однако происходило дальнейшее возрастание количества CD3—CD16+CD56+-ЕК-клеток, которое
было повышено и до лечения. Повышение
количества ЕК-клеток на фоне снижения
числа CD3+-Т-клеток, по-видимому, носило
компенсаторный характер.
Также была выявлена достоверная и
сильная обратная корреляция между
количеством CD3+-Т-лимфоцитов и CD3—
CD16+CD56+-ЕК-клеток у всех пациентов,
включенных в исследование. У 11 пациентов
с исходно нормальным количеством CD3+-Тлимфоцитов было повышено по сравнению
с контролем количество ЕК-клеток как до
лечения, так и после терапии. В данной
группе терапия Рефнотом больных приводила к нормализации сниженного до
лечения по сравнению с контролем количества ЕК-клеток. И до и после введения
Рефнота отмечено сниженное по сравнению с контролем процентное содержание
CD8+CD28+-Т-клеток, однако статистически
значимого отличия величины соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28– от контроля
не наблюдалось.
Значимое влияние на
противоопухолевый
иммунитет
Результаты определения основных показателей иммунитета у 11 пациентов до
лечения, после терапии Рефнотом и перед
вторым курсом иммунохимиотерапии показали, что наблюдалась тенденция к нормализации некоторых показателей иммунореактивности пациентов: количества
CD3+, CD3+CD8+ и CD8+CD28+-Т-клеток.
Количество ЕК-клеток (CD3—CD16+CD56+)
перед вторым курсом химиоиммунотерапии снижалось после некоторого повышения практически до уровня контроля.
Отмечена и тенденция к росту цитотоксической активности этих клеток. Это может
указывать на повышение цитотоксического
потенциала естественных киллеров под
влиянием химиоиммунотерапии с включением Рефнота. Следует отметить, что перед
вторым курсом терапии нормализовалась
и величина соотношения CD8 +CD28+/
CD8+CD28–.
В проведенном ранее в нашей лаборатории исследовании влияния Рефнота
на основные показатели иммунитета у
пациентов с ДМК, диссеминированным
раком толстого кишечника и другими
злокачественными опухолями было продемонстрировано, что Рефнот повышает
количество CD3+, CD4+, CD8+-Т-клеток,
сниженное до лечения, а также повышает
цитотоксический потенциал ЕК-клеток.
Использование в настоящем исследовании для иммунофенотипирования лимфоцитов периферической крови пациентов
с ДМК, получавших Рефнот в сочетании
с химиотерапией, многопараметрового
цитометрического анализа позволило
более четко определить популяции лимфоцитов, на которые положительно влияет
препарат.
Продемонстрировано положительное
воздействие Рефнота, одного и в сочетании с химиотерапией, на субпопуляции лимфоцитов, играющих основную
роль в противоопухолевом иммунитете.
Отмечена тенденция к повышению у части
больных сниженного количества CD3+,
CD3 +CD4 +, CD3 +CD8 +-Т-лимфоцитов,
нормализация количества ЕК-клеток и
повышение их цитотоксической активности. Проводимое нами лечение вызывало повышение сниженного до терапии
количества CD8+CD28+-Т-клеток, экспрессирующих костимуляторный рецептор
CD28, и увеличивало величину соотношения CD8 +CD28 +/CD8 +CD28 –. CD28
является наиболее важным костимуляторным рецептором Т-лимфоцитов, передача сигнала с которого необходима для
эффективной активации Т-клеток через
Т-клеточный рецептор, их пролиферации и
продукции цитокинов. Снижение величины соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28–
при определенных патологических состояниях считается неблагоприятным прогностическим фактором.
У большинства онкологических больных,
особенно при значительном распространении заболевания, обнаруживаются нарушения иммунологической реактивности, и
иммунотерапия не всегда способна индуцировать эффективный противоопухолевый
ответ. Полученные нами результаты подтвердили способность Рефнота оказывать
положительное воздействие на основные
показатели противоопухолевого иммунитета у онкологических больных с поздними
стадиями заболевания.
на правах рекламы
09.07.2015 13:12:02