Антигены печени приматов АМА-М2, LKM-1, LC

Anti liver antigens AMA-M2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
1
_____________________________________________________________________________________________________
Регистрационное удостоверение ФС №2005/1125 от 18.08.2005 г.
Антигены печени приматов АМА-М2, LKM-1, LC-1, SLA/LP (IgG)
EUROASSAY
(Anti liver antigens АМА-М2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG))
Набор EUROASSAY для определения IgG-аутоантител к антигенам AMA-M2, LKM-1, LC-1, SLA/LP в
сыворотке или плазме крови человека методом иммуноблота.
Номер по каталогу: DА 1300-1003-3 G
Набор рассчитан на 30 определений (10 × 3)
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор Anti liver antigens АМА-М2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG) обеспечивает качественное
определение in vitro человеческих аутоантител класса IgG к четырем различным антигенам: М2
(пируватдегидрогеназный комплекс), LKM-1 (микросомы печени и почек; цитохром Р450 II D6), LC-1
(формиминотрансфераза-циклодеаминаза) и SLA/LP (растворимый печеночный антиген/печеночнопанкреатический антиген) в сыворотке и плазме крови.
ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
Увеличение трансаминаз с невыясненной причиной, подозрение на аутоиммунный гепатит, первичный
билиарный цирроз печени.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Тест Anti liver antigens АМА-М2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG) основан на методе
иммуноблотинга. Набор содержит слайды с блотовыми стрипами (2 стрипа на каждом слайде закреплены в
своих тестовых зонах). Стрипы содержат очищенные антигены и антитела к IgG человека, нанесенные в
виде параллельных полос. Блотовые стрипы инкубируют на первой стадии реакции с образцом
разведенной сыворотки или плазмы пациента. В случае, если образец положительный, специфические
антитела класса IgG (а также классов IgA и IgM) будут связываться с соответствующими полосами
антигенов. Для обнаружения связанных антител проводится вторая инкубация с использованием
ферментного конъюгата (антитела к IgG человека, меченные щелочной фосфатазой), который способен
вызывать развитие цветной реакции.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
Компонент
Количество
Обозначение
1.
Слайды с тестовыми стрипами, покрытыми антигенами
SLIDE
10 слайдов
Антигены: АМА-М2, LKM-1, LC-1 и SLA/LP
2.
Положительный контроль
POS CONTROL
1 × 0,2 мл
(IgG, человеческий), готов к использованию
3.
Отрицательный контроль
NEG CONTROL
1 × 0,2 мл
(IgG, человеческий), готов к использованию
4.
Ферментный конъюгат
CONJUGATE 10×
1 × 0,5 мл
Козьи антитела к IgG человека, конъюгированные с щелочной
фосфатазой; 10×концентрат
5.
Буфер для образцов
1 × 60 мл
SAMPLE BUFFER
Готов к использованию
6.
Промывочный буфер
2 × 100 мл
WASH BUFFER 10×
10×концентрат
7.
Раствор субстрата
SUBSTRATE
1 × 3,0 мл
Нитроголубой тетразолий/5-бром-4-хлориндолил-фосфат
(NBT/BCIP), готов к использованию
1 буклет
–
8.
Инструкция по применению набора
Серия
Температура хранения
Для in vitro диагностики
Невскрытый набор
использовать до
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti liver antigens AMA-M2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
2
_____________________________________________________________________________________________________
Для проведения теста необходимы Шаблон-подложка для проведения реакции и Кювета для промывки
EUROASSAY, которые не поставляются с данным набором. Эти приспособления можно заказать у фирмы
EUROIMMUN.
Хранение и стабильность набора: Набор следует хранить при температуре от +2 °С до +8 °С. Не
замораживать. Невскрытые компоненты набора сохраняют стабильность в течение всего указанного срока
годности набора.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Примечание: Температуру всех реагентов необходимо довести до комнатной (от +18 °С до +25 °С) в
течение 30 минут перед использованием. После первого использования реагенты сохраняют стабильность
в течение указанного срока годности, если они хранятся при температуре от +2 °С до +8 °С и защищены от
микробной контаминации. Прочие сведения о стабильности отдельных реагентов указаны ниже.
Слайды: Готовы к использованию. Во избежание конденсации влаги на слайдах, не вскрывайте пакет до
тех пор, пока он не нагреется до комнатной температуры. Не дотрагивайтесь руками до тестовых стрипов.
Вскрыв упаковку в первый раз, слайды необходимо немедленно использовать (проводить инкубацию). Не
используйте слайды, если герметичность упаковки нарушена.
Шаблон-подложка для проведения реакции: Проверьте работу шаблона-подложки: вся ли поверхность в
зоне проведения реакции гидрофильна и вся ли поверхность вокруг этой зоны гидрофобна. Промойте
обычным хозяйственным моющим раствором с детергентом. Если необходимо, протрите впитывающей
бумагой (например, бумажным полотенцем) и промойте большим количеством воды. Время от времени
дезинфицируйте, погружая шаблон на 1 час в дезинфицирующий раствор (например, в 3% раствор
Sekusept Extra, “Henkel”).
Положительный и отрицательный контроли: Готовы к использованию.
Ферментный конъюгат: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Отберите необходимое количество
жидкости из флакона с концентратом с помощью чистой пипетки и разведите 1:10 буфером для образцов.
Например, для проведения анализа на 1 слайде, разведите 30 мкл концентрата ферментного конъюгата в
270 мкл буфера для образцов. Разведенный раствор ферментного конъюгата следует использовать до
конца рабочего дня.
Буфер для образцов: Готов к использованию.
Промывочный буфер: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Необходимое количество
концентрата следует отобрать из бутыли чистой пипеткой и развести (1:10) дистиллированной водой.
Например, для постановки анализа на одном слайде, к 20 мл концентрата следует добавить 180 мл воды.
Готовый разведенный промывочный буфер следует использовать до конца рабочего дня.
Раствор субстрата: Готов к использованию. После отбора необходимого количества реагента из флакона
немедленно вновь закройте его, так как раствор чувствителен к свету.
Предостережение: Использованные контроли были проверены на наличие HBsAg и антител к ВИЧ-1 и
ВИЧ-2 методами иммуноферментного анализа и непрямой иммунофлуоресценции и при этом показали
отрицательный результат. Тем не менее, все используемые материалы следует считать потенциально
опасными и обращаться с ними, соблюдая необходимые меры предосторожности. Некоторые из реагентов
ядовиты (буфер, раствор субстрата). Избегайте контакта с кожей.
Удаление отходов: Образцы пациентов, контроли и слайды после инкубации следует рассматривать как
инфицированные отходы и обращаться с ними соответствующим образом. Остальные реагенты не нужно
собирать отдельно, если это не оговорено в действующих официальных инструкциях.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ОБРАЗЦОВ ПАЦИЕНТОВ
Материал образцов: Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин или цитрат) крови человека.
Стабильность: Образцы пациентов, предназначенные для исследования этим методом, можно хранить до
14 дней при температуре от +2 оС до +8 оС. Разведенные образцы необходимо использовать в течение
одного рабочего дня.
Разведение образцов: Образцы пациентов разводят 1:101 буфером для образцов. Например: разведите
10 мкл сыворотки в 1,0 мл универсального буфера и тщательно перемешайте на вортексе (пипетки для
этого не подходят).
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti liver antigens AMA-M2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
3
_____________________________________________________________________________________________________
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ: техника TITERPLANE
Техника TITERPLANE разработана фирмой EUROIMMUN с целью стандартизации иммунологических
анализов: образцы вначале наносят в виде капель на горизонтальную поверхность специального шаблонаподложки в зону проведения реакции. Затем на шаблон, в специальные углубления, помещают слайды,
повернутые иммуноблотовыми стрипами к реакционной зоне, поэтому все стрипы сразу приходят в
соприкосновение с каплями жидкости, и отдельные реакции начинаются одновременно. Расположение и
высота капель точно заданы геометрией всей системы. Все наносимые жидкости находятся в огороженном
пространстве, поэтому не нужна обычно используемая в таких случаях ”влажная камера”. Шаблон-подложку
можно использовать многократно и инкубировать, таким образом, любое количество образцов, размещая
их рядом или один за другим, в идентичных условиях.
Нанесение
Нанесите 50 мкл разведенного образца пациента в каждую зону проведения реакции шаблона-подложки.
Уберите пузырьки воздуха. Разместите таким образом до начала инкубации все образцы, участвующие в
данной постановке теста. Для удобства нанесения используйте многоканальную пипетку или шаблон.
Инкубация с образцом (1 стадия)
Начните все реакции одновременно, поместив слайды в соответствующие углубления шаблона-подложки.
Следите, чтобы каждый образец контактировал с блотовым стрипом на слайде и чтобы отдельные образцы
не соприкасались друг с другом. Инкубируйте при комнатной температуре (от +18 °С до +25 °С) в течение
30 минут на шейкере циркуляторного типа при скорости 300 об/мин.
Промывка
Ополосните слайды в течение 5 секунд под струей промывочного буфера (используйте стакан или колбу) и
вставьте их в стеклянную рамку промывочной кюветы. После размещения всех слайдов перенесите рамку в
кювету и промывайте в течение 15 минут.
Нанесение
Нанесите 50 мкл разведенного ферментного конъюгата (щелочная фосфатаза, конъюгированная с
антителами к IgG человека) в каждую зону проведения реакции чистого шаблона-подложки. Количество
нанесенных капель должно соответствовать количеству исследуемых образцов.
Инкубация с конъюгатом (2 стадия)
Извлеките слайды из промывочного буфера, протрите досуха только задний и нижний край и поместите
слайды в соответствующие углубления шаблона-подложки. Следите, чтобы каждая капля жидкости
контактировала с блотовым стрипом на слайде. Инкубируйте при комнатной температуре (от +18°С до
+25°С) в течение 30 минут на шейкере циркуляторного типа при скорости 300 об/мин.
Промывка
Повторите процедуру промывки, используя свежую порцию промывочного буфера и промывая в течение 15
минут.
Нанесение
Нанесите 50 мкл раствора субстрата в каждую зону проведения реакции чистого шаблона-подложки.
Количество нанесенных капель должно соответствовать количеству исследуемых образцов.
Инкубация с субстратом (3 стадия)
Извлеките слайды из промывочного буфера, протрите досуха только задний и нижний край и поместите
слайды в соответствующие углубления шаблона-подложки. Следите, чтобы каждая капля жидкости
контактировала с блотовым стрипом на слайде. Инкубируйте при комнатной температуре (от +18°С до
+25°С) в течение 10 минут на шейкере циркуляторного типа при скорости 300 об/мин.
Промывка
Ополосните слайды деионизированной или дистиллированной водой. Высушите на воздухе в течение 15
минут.
Визуальная оценка результатов реакции
Отметьте интенсивность окрашивания полос в тестовой зоне стрипов.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti liver antigens AMA-M2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
4
_____________________________________________________________________________________________________
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Антигены и их размещение на стрипах
М2
LKM-1
LC-1
SLA/LP
Контрольная полоса (антитела к IgG человека)
Интерпретируют интенсивность окрашивания полос на блотовых стрипах. Внимание: Перед оценкой
результатов мембрана должна быть полностью высушена. Положительный результат реакции на
контрольной полосе (в нижней части правого стрипа) свидетельствует о правильно проведенных
инкубациях. В случае положительного результата анализа (наличие антител к соответствующим антигенам)
в зоне расположения антигена появляется синее окрашивание. Интенсивность сигнала зависит от титра
антител в образце, с которым проводилась инкубация стрипа.
В зависимости от интенсивности сигнала, результаты можно разделить на отрицательные, промежуточные
и положительные.
Сигнал
Нет сигнала
Окраска полосы очень слабая
Окраска полосы от умеренной до интенсивной
Окраска полосы очень интенсивная, сравнимая с окраской контрольной полосы
Результат
Отрицательный
Промежуточный
Положительный
Сильно-положительный
ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА
Антигены: Показано, что антигенная система М2 представляет собой три биохимически связанных
мультиферментных комплекса внутренней мембраны митохондрий, катализирующих реакции
окислительного декарбоксилирования пирувата, 2-окси-глутарата и 2-оксикислот с разветвленной цепью.
Идентифицированы шесть белковых антигенов, относящихся к М2: антиген Е2 (74 кДа), антиген Protein Х
(55 кДа), альфа-субъединица Е1 (45 кДа) и бета-субъединица Е1 (36 кДа) пируватдегидрогеназного
комплекса; антиген Е2 (51 кДа) комплекса дегидрогеназы 2-оксикислот с разветвленной цепью и антиген Е2
(51 кДа) 2-оксиглутаратдегидрогеназного комплекса. Ферменты Е2 отвечают за перенос ацетильных групп к
коэнзиму А, функция белка Х, являющегося субъединицей пируватдегидрогеназного комплекса,
неизвестна.
Антиген LKM-1 локализован во фракции микросом печени и почек. Антигеном-мишенью является цитохром
Р450 II D6.
Соответствующая кДНК человека для антигена LC-1 была экспрессирована в клетках насекомых с
использованием вектора бакуловируса. В 1999 г специфический антиген-мишень для антител к LC-1 был
идентифицирован как фермент формиминотрансфераза-циклодеаминаза (Lapierre et al.). Антиген LC-1
расположен в цитозоле клеток печени.
Антиген SLA/LP расположен в цитозоле клеток печени. Соответствующая кДНК человека была
экспрессирована в E. coli. После идентификации SLA/LP на уровне ДНК было осуществлено клонирование
соответствующего антигена в 1998 г. (A.W. Lohse, Госпиталь университета в Майнце). SLA/LP, повидимому, является цитоплазматической молекулой с молекулярной массой 50 кДа, участвующей в
регуляции биосинтеза белка (белка, ассоциированного с супрессором кодона UGA тРНК). Ранее
высказывавшиеся предположения о том, что SLA представляет собой цитокератины печени 8 и 18 или
глутатион-S-трансферазу, очевидно, являются ошибочными.
Диапазон определения: Метод EUROASSAY является качественным, диапазон определения не дается.
Принято, что предельный титр антител наблюдается при разведении образца 1:101.
Перекрестные реакции: Качество используемых антигенных субстратов (антигенов и источников
антигенов) гарантирует высокую специфичность наборов EUROASSAY. Данный набор EUROASSAY
специфически определяет антитела класса IgG к AMA-M2, LKM-1, LC-1 и SLA/LP. Перекрестные реакции с
другими аутоантителами не обнаружены.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti liver antigens AMA-M2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
5
_____________________________________________________________________________________________________
Интерференция: Образцы с признаками гемолиза, липемические и иктерические образцы с
концентрациями гемоглобина вплоть до 5 мг/мл, триглицеридов – до 20 мг/мл и билирубина – до 0,4 мг/мл
не влияли на аналитические характеристики данного набора EUROASSAY.
Вариации результатов в разных опытах и в одном опыте: Вариации результатов в разных опытах
оценивали многократным повторным исследованием одних и тех же охарактеризованных образцов в
течение нескольких дней, вариации в одном опыте – многократным исследованием охарактеризованных
образцов в течение одного дня. В каждом случае интенсивность полос находилась в пределах
установленного диапазона. Таким образом, данный тест EUROASSAY показывает очень высокую
воспроизводимость в пределах одной постановки и между постановками.
Результаты исследования: С помощью тест-систем фирмы EUROIMMUN сыворотки 454 пациентов с
аутоиммунным гепатитом (AIH), полученные из четырех мировых центров, исследовали на аутоантитела к
SLA-LP. Было показано, что AIH с положительной реакцией на анти-SLA-LP распространен по всему миру в
процентном соотношении 5-19 %. Степень распространенности, по-видимому, ниже в Японии. На наличие
аутоантител к антигенам печени были проверены сыворотки 24 пациентов, страдающих AIH с
положительной реакцией на анти-LKM-1 (AIH типа II), сыворотки 26 пациентов с первичным билиарным
циррозом, сыворотки 109 человек контрольной группы с прочими заболеваниями печени и сыворотки 57
здоровых доноров крови. Специфичность анти-SLA/LP и анти-LC-1 к AIH составляла 100%, тогда как антиLKM-1 присутствовали как при AIH, так и при вирусных гепатитах.
Группа
пациентов
Происхождение сывороток
AIH
Проф. Lohse, университет в
Майнце
Бразильская панель сывороток
Японская панель сывороток
Американская панель
сывороток
Д-р Gruber, Университет в
Мюнхене, проф. Vergani,
колледж при Университете в
Лондоне, Великобритания
Д-р Gruber, Университет в
Мюнхене, Д-р философии
Wick, клиника в Гросхадерне
проф. Vergani, колледж при
Университете в Лондоне,
Великобритания
Д-р Stöcker, фирма
EUROIMMUN AG
Проф. Lohse, университет в
Майнце, Д-р Stöcker, фирма
EUROIMMUN AG
Проф. Lohse, университет в
Майнце
AIH
AIH
AIH
AIH (положит. по
анти-LKM-1)
Первичный
билиарный
цирроз
Аутоиммунный
склерозирующий
холангит
Гепатит В
Гепатит С
Токсическое
поражение
печени
Доноры крови
Медицинский университет в
Любеке
не опр. – не определяли
108
Положительные
по антиАМА-М2
не опр.
Положительные
по антиLKM-1
не опр.
Положительные
по антиLC-1
не опр.
Положительные
по антиSLA/LP
21 (19%)
154
43
149
не опр.
не опр.
не опр.
не опр.
не опр.
не опр.
не опр.
не опр.
не опр.
25 (16%)
2 (5%)
23 (15%)
24
0
24
(100%)
6 (25%)
0
26
24 (92%)
0
0
0
4
0
0
0
0
37
0
0
0
0
30
0
5 (17%)
0
0
38
1 (3%)
0
0
0
57
0
0
0
0
n (670)
Референтный интервал: Интервал нормальных значений был определен на 50 здоровых донорах крови.
Все доноры показали отрицательный результат при использовании данного метода EUROASSAY.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti liver antigens AMA-M2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
6
_____________________________________________________________________________________________________
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Аутоантитела, направленные против митохондрий
Антимитохондриальные аутоантитела (АМА) впервые были обнаружены в сыворотках пациентов с
первичным билиарным циррозом печени методом непрямой иммунофлуоресценции с использованием
тканевых срезов. Взяв в качестве антигенов различные субмитохондриальные фракции, можно показать,
что мишенями для АМА служат несколько вполне биохимически определенных субстанций, которые важны
при аутоиммунных заболеваниях. Соответственно, в настоящее время различают девять типов АМА (М1 М9) по локализации их антигенных мишеней во внешней или внутренней мембране митохондрий, по
чувствительности к трипсину и по электрофоретическим характеристикам. Они могут быть связаны с
различными заболеваниями:
Антитела
против
М1
М2
М3
М4
М5
М6
М7
М8
М9
Статус заболевания
сифилис (активная стадия)
системная красная волчанка
прогрессирующий системный склероз, синдром Шегрена,
синдром Шарпа, ревматоидный артрит
тромбоз, привычный выкидыш
первичный билиарный цирроз печени (высокие титры антител)
другие хронические заболевания печени
прогрессирующий системный склероз
синдром псевдоволчанки
(например, волчанки, индуцированной пиразолоном)
первичный билиарный цирроз печени
неспецифические коллагенозы
гепатит (индуцированный ипрониазидом)
острый миокардит
кардиомиопатии
первичный билиарный цирроз печени
первичный билиарный цирроз печени
-М2-негативные пациенты (ранняя стадия)
-М2-позитивные пациенты
хронический активный аутоиммунный гепатит
острый и хронический гепатит
Распространен
ие
100%
50%
5-15%
часто
96%
30%
7-25%
100%
до 55%
редко
100%
60%
30%
до 55%
82%
37-44%
10%
3%
Стандартной техникой, которую применяют для обнаружения аутоантител к митохондриям, является
метод непрямой иммунофлуоресценции, наиболее часто применяемыми субстратами являются
замороженные тканевые срезы печени крыс и мышей. При положительном результате такого теста на
срезах видна типичная гранулированная флуоресценция в районе почечных канальцев. Однако, антитела к
митохондриям могут быть связаны с самыми различными заболеваниями, например, с первичным
билиарным циррозом печени, сифилисом, миокардитом, системной красной волчанкой. Для
дифференциации различных типов антимитохондриальных антител необходимы моноспецифические виды
анализа, к которым относятся ИФА и техника EUROASSAY.
Высокие титры антител к М2 - характерная черта первичного билиарного цирроза печени, при этом
фермент Е2 и белок Х пируватдегидрогеназного комплекса являются основными антигенами. Но кроме
этого, антитела к М2 также можно обнаружить – в основном с низким титром – при других хронических
заболеваниях печени (30%) и при прогрессирующем системном склерозе (7-25%). У пациентов с
прогрессирующим системным склерозом, для которого продемонстрировано наличие антител к М2,
возможно клиническое перекрывание с первичным билиарным циррозом.
Определение аутоантител к растворимому антигену печени/печеночно-панкреатическому (SLA/LP)
является новым и важным компонентом в диагностике аутоиммунных заболеваний печени. Антитела к
SLA/LP можно считать при аутоиммунном гепатите ключевыми.
Аутоиммунные заболевания печени включают:
-
аутоиммунный гепатит (AIH),
первичный билиарный цирроз печени (РВС)
первичный склерозирующий холангит (PSC).
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti liver antigens AMA-M2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
7
_____________________________________________________________________________________________________
Аутоиммунному гепатиту подвержены в основном женщины; AIH ранее называли волчаночным гепатитом
(lupoid hepatitis), активным хроническим гепатитом ( = пост-гепатитный цирроз). Заболевание проявляется в
увеличении уровня билирубина, печеночных ферментов и иммуноглобулинов, через типичные
гистологические изменения (биопсия печени показывает некроз паренхимных клеток с инфильтрацией
лимфоцитов и плазматических клеток), а также наличием различных аутоантител.
Встречаемость AIH в Западной Европе составляет 1,9 случаев на 100 000 жителей в год. Нелеченный
аутоиммунный гепатит вскоре развивается в цирроз печени. Однако, если вовремя начать проводить
иммуносуппрессивную терапию и продолжать ее все время, пациент имеет нормальную
продолжительность жизни. Для дифференциальной диагностики с текущей инфекцией, вызванной
гепатовирусами, необходимо проводить исследование соответствующих серологических параметров.
Циркулирующие аутоантитела имеют большое значение для диагностики AIH. Они есть почти у всех
пациентов с этим заболеванием, однако, их роль в патогенезе стоит под вопросом. Нет также ясной
корреляции между активностью или прогнозом заболевания и титром антител. Кроме антител к SLA/LP с
AIH связаны также следующие антитела: янтиядерные антитела (ANA), антитела к nДНК, антитела к
гладкомышечной ткани (SMA, с F-актином в качестве главной антигенной мишени), антитела к микросомам
печени и почек (LKM-1, с цитохромом Р450 IID6 в качестве антигена-мишени), антитела к цитозольному
печеночному антигену 1 типа (LC-1, с формиминотрансферазой-циклодеаминазой в качестве антигенамишени) и антитела к гранулоцитам (pANCA). Аутоантитела к SLA/LP, которые в настоящее время можно
измерить с помощью ИФА фирмы EUROIMMUN, вероятно имеют наибольшую диагностическую точность
среди всех видов антител, вовлеченных в ответ при аутоиммунном гепатите. Анти-SLA/LP присутствуют при
AIH или одни, или вместе с другими аутоантителами. Хотя их распространенность составляет только около
30%, предсказанное значение равно почти 100%: каждый положительный результат поэтому дает
существенное доказательство аутоиммунного гепатита (предусматривается, что соответствующие
клинические симптомы имеются).
Исследование антител к SLA/LP до сих пор было возможно только в нескольких специализированных
лабораториях. Раньше предполагалось, что антиген SLA идентичен цитокератинам печени 8 и 18 или
ферменту глутатион-S-трансферазе. И только недавно было показано, что это, по-видимому, не так. Вновь
открытый антиген-мишень SLA/LP только теперь идентифицирован на уровне ДНК. Это, вероятно,
цитоплазматическая молекула, участвующая в регуляции биосинтеза белка (ассоциированного с тРНК
UGA-суппрессора). Большая диагностическая ценность аутоантител к SLA/LP теперь убедительно
доказана.
Аутоантитела к клеточному ядру (ANA) и к гладкомышечной ткани (SMA) часто бывают при AIH, но их
находят также у 10-20% пациентов с хроническим вирусным гепатитом и при других заболеваниях.
Аутоантитела к LKM-1, могут быть выявлены только примерно у 1% взрослых пациентов с AIH, однако,
чаще они встречаются у детей. Антитела к LKM-1 могут также быть найдены у 1-2% пациентов с
положительной серологией по гепатиту С. В отличие от всех других аутоантител, антитела к SLA/LP
высокоспецифичны к AIH и не были описаны при вирусном гепатите.
Некоторые авторы классифицируют аутоиммунный гепатит в соответствии с аутоиммунным статусом:
субтип I (ANA, SMA), субтип II (аутоантитела к LKM-1 и LC-1) и субтип III (антитела к SLA/LP). Данная
классификация, вероятно, не имеет ни клинического, ни терапевтического, ни прогностического значения.
Диагноз аутоиммунного гепатита (AIH) основан на клинической картине, результатах биохимических и
серологических тестов и гистологических доказательствах воспалительной реакции. Он требует
исключения иных причин хронического гепатита, таких как вирусы, алкоголь и лекарства, и разграничения
от других аутоиммунных заболеваний печени (первичного билиарного цирроза печени и первичного
склерозирующего холангита). Диагноз AIH наиболее вероятен при соблюдении четырех из пяти главных
критериев. Если имеются в наличии все 5 критериев, диагноз установлен. Диагноз подтвержден, если
пациенту помогает иммуносуппрессивное лечение.
Главные критерии при диагностике аутоиммунного гепатита:
1. Гистологическое доказательство гепатита
2. Обнаружение аутоантител (ANA, SMA, LKM, SLA/LP)
3. Гипергаммаглобулинемия
4. Отрицательная серология по вирусным гепатитам В и С
5. Обнаружение HLA–антигенов B8, DR3 или DR4
Серологическое выявление аутоантител к SLA/LP обеспечивает точное разграничение с вирусными
гепатитами у трети пациентов с AIH. Таким образом, аутоиммунная серология гепатита обогатилась
дополнительным параметром, значение которого может быть оценено выше значения антител к клеточному
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti liver antigens AMA-M2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
8
_____________________________________________________________________________________________________
ядру, ДНК, гладкомышечной ткани и к печеночным/печеночно-почечным микросомам (ANA, nDNA, ASMA,
LKM). Для гепатологических клиник возможность тестирования этих антител значит очень много:
последствия от некорректного лечения AIH интерфероном могут оказаться такими же фатальными, как
последствия применения иммуносуппрессивной терапии при вирусной инфекции.
Первичный билиарный цирроз (PBC) – это цирроз печени, имеющий форму негнойного, деструктивного
воспаления желчных протоков. Он встречается у женщин в 10 раз чаще, чем у мужчин. На переднем плане
клинической картины присутствует холестаз. В Европе каждый год это заболевание развивается у 13
человек из 100 000. Так как цирроз имеется не в каждом случае, и возникает не ранее, чем на поздней
стадии, это заболевание лучше всего описывать как «хронический негнойный, деструктивный
холангит». Патогномоничной является серологическая детекция аутоантител к фракции митохондрий М-2
(AMA M-2) и к ядерным пятнам (Nuclear Dots) (кислый белок SP100).
Распространенность первичного склерозирующего холангита (PSC) составляет 4 случая на каждые
100000 жителей в год. Клиническая картина также характеризуется холестазом. Диагностической исходной
точкой являются соответствующие диагностические данные, гистология и ERCP (эндоскопическая
ретроградная холангиопанкреатикография). В основном заболевают мужчины, и у половины пациентов
имеется сопутствующий язвенный колит (и наоборот превалирование PSC в случае язвенного колита
составляет 4%). Большинство пациентов с PSC имеют аутоантитела к гранулоцитам (pANCA). Иногда
pANCA могут также быть при AIH и PBC и их ценность для дифференциальной диагностики ограничена в
этом отношении. Однако, pANCA являются указанием на аутоиммунное заболевание печени и, возможно,
могут быть использованы как обозначение разграничения от инфекционных форм гепатита. Если даже
сообщалось о перекрывании (overlap) между PSC и AIH, антитела к SLA/LP не были найдены у этих
пациентов.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
Anti-liver antigens_IgG_EUROASSAY_DA__1300_1003_3G_rus.doc
17.09.2009 16:25
Оригинал DA_1300-3G_A_UK_C04.doc Version: 29.06.2009
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti liver antigens AMA-M2, LKM-1, LC-1, SLA/LP EUROASSAY (IgG), EUROIMMUN AG
9
_____________________________________________________________________________________________________
Техника TITERPLANE
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru