Определение количества Т- и В-лимфоцитов в периферической

Определение количества Т- и В-лимфоцитов в периферической крови
Т- и В-лимфоциты идентифицируют на основании выявления характерных для каждого
типа клеток поверхностных структур - рецепторов или маркеров. Использование для
идентификации иммунокомпетентных клеток моноклональных антител (МКАТ) к
различным СD-антигенам в настоящее время является наиболее точным методом.
Принцип идентификации СD-антигенов заключается в следую-щем. Выделенные из
крови мононуклеары обрабатывают соответствующими МКАТ. После этого
визуализируют результаты реакции с помощью флуоресцентной или ферментной метки.
При использовании флуоресцентной метки с люминесцентной микроскопией клетки с
соответствующими СD-антигенами имеют светящиеся ободки. При визуализации
ферментной меткой (например, пероксидазой) в световом микроскопе определяется
цветная реакция взаимодействия СD-антигенов клеток и соответствующих меченых
антител. Присоединение МКАТ к определенным типам клеток можно фиксировать
также при помощи лим-фоцитотоксического теста. Последний основан на способности
МКАТ класса IgM и IgG и комплемента оказывать цитотоксическое воздействие на
соответствующую популяцию лимфоцитов, что выявляется с помощью красителя.
Универсальным методом исследования дифференцировочных антигенов лейкоцитов
является лазерная проточная цитометрия, которая позволяет на основе
иммунофлюоресценции определить численность различных популяций и субпопуляций
лимфоцитов, а также плотность рецепторов на клеточной мембране.
Наиболее широко используемым в клинике и в то же время достаточно информативным
и дешевым методом определения численности популяций лимфоцитов является метод
розеткообразования.
Для идентификации Т-лимфоцитов человека используется способность Т-клеточного
антигена (CD2) этих клеток взаимодействовать с эритроцитами барана и образовывать
так называемые розетки в реакции розеткообразования Е-РОК. Послед-няя
заключается в «прилипании» эритроцитов барана к поверхности Т-лимфоцитов
человека при их смешивании с образованием розеток, в центре которых находится
лимфоцит, а по периферии эритроциты. Аналогичным методом с помощью эритроцитов
мыши определяются В-лимфоциты.
1/2
Определение количества Т- и В-лимфоцитов в периферической крови
Как правило, определяют количество Т-общих лимфоцитов (общее количество
лимфоцитов с маркерами CD2) и количество Т-активных лимфоцитов. Субкласс
активных Т-лимфоцитов относится к менее зрелым клеткам, хорошо коррелирует с
Т-клеточной функцией, клиническим течением заболевания, то есть отражает
функциональную активность Т-клеточного звена иммунитета. Определяют данный
субкласс путем изменения условий постановки реакции определения Т-общих
лимфоцитов (соотношение между лимфоцитами и индикаторными частицами, время
инкубации). Число Т-лимфоцитов в периферической крови здорового человека
составляет 40-60%, или от 1200 до 1600 в 1 мкл крови. В норме величина соотношения
общих и активных Т-лимфоцитов составляет 0,57+0,03. Число В-лимфоцитов в
периферической крови в норме составляет 25-35%.
2/2