Молекулярная физиология иммунной системы

ФГБУ
ФГБУ «ГНЦ
«ГНЦ ИНСТИТУТ
ИНСТИТУТ ИММУНОЛОГИИ
ИММУНОЛОГИИ ФМБА
ФМБА РОССИИ»
РОССИИ»
Молекулярная физиология
иммунной системы
и точки ее прикладного
приложения
Р.М. Хаитов
Иммунитет
Элиминация живых тел и веществ, несущих
признаки генетической чужеродности (антигены)
Экзогенные
антигены
Микроорганизмы:
бактерии, грибы,
простейшие, вирусы
Эндогенные
антигены
Клетки,
модифицированные вирусами,
ксенобиотиками, старением,
опухолевые клетки и др.
1 Распознавание чужеродного антигена
2
Элиминация антигена из организма
3
Запоминание контакта организма
с антигеном
Органы и ткани иммунной системы
Центральные
Центральные органы
органы иммунной
иммунной системы
системы
КОСТНЫЙ МОЗГ
(В,М,Г)
ТТ
Т
ппррее Т
ТТ
ВВ
ТТ
ВВ
ТТ
ВВ
ТТ
ВВ
ТИМУС
(Т)
ВВ
Селезенка Лимфати- Лимфоид- Лимфоидческие
ная ткань ная ткань,
узлы
слизистых ассоциированная
с кожей
Периферические
Периферические органы
органы иммунной
иммунной системы
системы
Дифференцировка лимфоцитов
Кроветворная
стволовая
клетка
Миелоидные
Миелоидные
клетки
клетки
Лимфоидные
Лимфоидные
клетки
клетки
Эритроидные
Эритроидные
клетки
клетки
Общий
лимфоидный
предшественник
Про-В
NK-клетка
Про-Т
Формирование
Формирование рецепторов
рецепторов
В1
Пре-Т
ТCR-γδ +
Пре-В
ТCR- αδ +
mIgM+
mIgD+
B-клетка
CD4+
Т-хелпер
Незрелый
Незрелый
тимоцит
тимоцит
Селекция,
Селекция,
дифференцировка
дифференцировка
CD8+
Т-киллер
Структура рецепторов для распознавания антигена
на В-(BCR) и T-(TCR) лимфоцитах
BCR
TCR-CD3
mIgM
H
VH
H
Сμ1
L
VL
СL L
Сμ2
СD79
β
α
Сμ3
Сμ4
СD79
α
β
γ
ε
Vα
Vβ
Сα
Сβ
ε
δ
ζ
Распознавание комплекса
антигенного пептида с молекулами МНС I и II класса
рецептором и корецептором Т-лимфоцита
ТCR
Тh
Тh
α
ТCR
β
α
β
CD4
CD8
пептид
α
АПК:
АПК:
Тк
Тк
пептид
β
макрофаги,
МНС II
макрофаги,
дендритные
клетки,
дендритные клетки,
В-лимфоциты
В-лимфоциты
α
β
МНС
МНС I
Кл-мишень
Кл-мишень
Распределение Т- и В-лимфоцитов
в лимфатических узлах
Афферентный
Афферентный
лимфатический
лимфатический
сосуд
сосуд
Капсула
Капсула
Субкапсулярный
Субкапсулярный синус
синус
Зародышевый
Зародышевый
центр
центр
Первичный
Первичный
фолликул
фолликул
Вторичный
Вторичный
фолликул
фолликул
Паракортикальная
Паракортикальная
зона
зона
Мозговой
слой
Мозговой слой
Кортикальная
Кортикальная
зона
зона
Эфферентный
Эфферентный
лимфатический
лимфатический
сосуд
сосуд
Вена
Вена
Артерия
Артерия
Пути рециркуляции лимфоцитов
Селезенка
Кровь
Кровь
Кровь
Кровь
Сердце
Региональные
Региональные ЛУ
ЛУ
ЛУ
Кожа
ЛУ
Эндокринные
железы
ЛУ
Урогенитальный
тракт
ЛУ
Бронхолегочный
аппарат
Лимфа
Лимфа
Очаги
воспаления
Грудной
Грудной проток
проток
Лимфа
Лимфа
Лимфа
Лимфа
Пейеровы
бляшки
Брыжеечные
Брыжеечные лимфоузлы
лимфоузлы
Кишечник
Пейеровы
бляшки
Т-лимфобласты
Т-лимфобласты
плазматические
плазматические клетки
клетки
клетки
клетки памяти
памяти
Миграция Т- и В-лимфоцитов
в лимфатическом узле
Капсула
Капсула
Мозговой
Мозговой слой
слой
Корковый
Корковый слой
слой
(В-зона)
(В-зона)
Эфферентный
Эфферентный
лимфатический
лимфатический
сосуд
сосуд
Паракортикальный
Паракортикальный
слой
слой
(Т-зона)
(Т-зона)
Фолликул
Фолликул
Посткапиллярная
Посткапиллярная
венула
венула
- В лимфоциты
- Т лимфоциты
Субкапсулярный
Субкапсулярный
синус
синус
Миграция Т- и В-лимфоцитов в селезенке
Маргинальная
Маргинальная
зона
зона
Периартериолярная
Периартериолярная
муфта
муфта (Т-зона)
(Т-зона)
Зародышевый
Зародышевый
центр
центр
Красная
Красная
пульпа
пульпа
Лимфоцитарная
Лимфоцитарная
корона
корона (В-зона)
(В-зона)
Белая
Белая
пульпа
пульпа
Венозный
Венозный синус
синус
- В лимфоциты
- Т лимфоциты
Активация эндотелиальных клеток
Плоский
Плоский эндотелий
эндотелий
Высокий
Высокий (кубический)
(кубический) эндотелий
эндотелий
CD62P
CD34
CD34 CD62P
CD62E
CD62E
ICAM-2
ICAM-2
CD58
CD58
Активация
Активация
CD58
CD58
CD62L
CD62L
ICAM-1
ICAM-1
ИЛ-1,
ИЛ-1, ФНО
ФНОα
ИЛ-6, ИНФ
ИНФγγ
α,, ИЛ-6,
MadCAM
MadCAM
GlyCAM
GlyCAM ICAM-3
ICAM-3
ICAM-2
ICAM-2
Стадии миграции лейкоцитов (Л)
из сосудистого русла в ткань
1. Качение
(1-3 с)
2. Активация
(до 20 с)
Л
CD62L
CD62L
CD34
CD34
Л
Интегрины
Интегрины
Л
LFA-1
LFA-1
CD15
CD15
CD62E/P
Хемокины
CD62E/P Хемокины
4. Миграция
в ткань
(10 мин)
3. Прочная
адгезия
(2-5 мин)
ICAM-1
ICAM-1
Л
VLA-4
VLA-4
VCAM-1
VCAM-1
Э
Эн
нд
д оо тт ее л
ли
и аа л
л ьь н
ны
ы ее кк л
л ее тт кк и
и
Хемокины
Хемокины
Хоминг лимфоцитов
Распознавание
Миграция
Лимфоцит
Лимфоцит
CD62L
CD62L
CD15
CD15
CD34
CD34
CD62E
CD62E
LFA-1
LFA-1
CD44
CD44
Просвет
Просвет
сосуда
сосуда
ICAM-1
ICAM-1 Гиалуронат
Гиалуронат
Высокий
эндотелий
Ткань
Ткань
лимфатического
лимфатического
узла
узла
Хемокины
Хемокины
Улавливание
специфических клонов лимфоцитов
в региональном лимфатическом узле (ЛУ)
Афферентная
Афферентная лимфа
лимфа
Эфферентная
Эфферентная лимфа
лимфа
ЛУ
Темные
Темные кружки
кружки -- лимфоциты,
лимфоциты, способные
способные распознать
распознать антиген
антиген
Молекулярные
Молекулярные основы
основы межклеточной
межклеточной адгезии
адгезии
Рецепторы
Рецепторы
CD72
CD72
CD40
CD40
CD58
CD58
CD86
CD86
CD80
CD80
Антиген-представляющая
Антиген-представляющая клетка
клетка
HLA
HLA
I
CD15
CD15
(ICAM-1)
(ICAM-1)
CD54
CD54
(VCAM-1)
(VCAM-1)
CD105
CD105
II
Направление
сигнала
АП
αβ
CD8
γ ε
CD2
CD2
CD5
CD5
CD154
CD154
(CD40L)
(CD40L)
CD28
CD28
CTLA-4
CTLA-4
(CD152)
(CD152)
TK
lck
αβ
ε δ
СD4
ζζ
TK
fyn
TcR-CD3
TcR-CD3
T-лимфоцит
T-лимфоцит
TK
lck
CD49d/29
CD49d/29
(VLA-4)
(VLA-4)
CD11a/18
CD11a/18
CD62L
β11
CD62L
(LFA-1)
(L-селектин)
(L-селектин) (LFA-1)
β22
Интегрины
Интегрины
Взаимодействие Т-хелперов
и антиген-презентирующих клеток (АПК).
Роль костимулирующих молекул.
CD80/86
АПК
МНС II
CD28
ТCR
АГ
Костимуляция
Рецепция
Т-хелпер
CD4
Костимуляция
CD40
CD154
Стрелками отмечены основные направления сигнализации
Последствия взаимодействия Т-клеток и АПК
CD28
CD28 CD80/86
CD80/86
ТCR-CD3
CD4
Активация:
Активация:
экспрессия
экспрессия ИЛ-2Р
ИЛ-2Р
и
и секреция
секреция ИЛ-2
ИЛ-2
CD154
CD154
ИЛ-2Р
ИЛ-2Р
МНС II
АПК
CD40
CD40
ИЛ-2
ИЛ-2
Взаимодействие
Взаимодействие
ИЛ-2
ИЛ-2 и
и ИЛ-2Р
ИЛ-2Р
CD4+
Пролиферация
Пролиферация
Тh0
Тh
Дифференцировка
Дифференцировка
Тh1
Тh2
Ткл
памяти
Развитие, взаимодействие и функции Т-хелперов
типов Th1 и Th2
CD4+
Мф
22
--11
ЛЛ
ИИ
И
ИН
НФ
Фγγ
NK
--44
Л
Л
И
И
ThО
ТК
ИНФ
ИНФγγ (-)
(-)
ИЛ-2
ИЛ-2
Th1
Th2
ИЛ-4
ИЛ-4
ИЛ-10
ИЛ-10 (-)
(-)
ИЛ-2
ИЛ-3
ИНФ γ
ФНО α
ФНО β
ГМ-КСФ
ИЛ-4
ИЛ-5
ИЛ-6
ИЛ-9
ИЛ-10
ИЛ-13
ГМ-КСФ
Обеспечение
Обеспечение клеточных
клеточных форм
форм
иммунного
иммунного ответа
ответа
Обеспечение
Обеспечение гуморальных
гуморальных форм
форм
иммунного
иммунного ответа
ответа
Мф
Мф –– макрофаг;
макрофаг; NK
NK –– нормальный
нормальный (естественный)
(естественный) киллер;
киллер; ИНФ
ИНФ -- интерферон;
интерферон; ТК
ТК –– тучная
тучная клетка;
клетка;
ФНО
–
фактор
некроза
опухолей;
ГМ-КСФ
–
гранулоцитарно-макрофагальный
колониестимулирующий
ФНО – фактор некроза опухолей; ГМ-КСФ – гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор
фактор
Развитие гуморального (антительного)
иммунного ответа
АГ
АГ
Ig
Ig
МНС-II
МНС-II
TCR
TCR
В-лц
Тh2
CD80/86
CD80/86
В-лц
CD40
CD40
CD154
CD154
Тh2
0
ИЛ-4,
ИЛ-4, 55,,110
В-лц
В-лц
В-лц –
– В-лимфоцит
В-лимфоцит
CD154
CD154
CD28
CD28
Цитокины
Цитокины
Формирование и активация
цитотоксических Т-лимфоцитов
ЦТЛ
CD80
CD28
Активация
Активация
Кл-мишень МНС-I АГ TCR
CD8+ Т-лц
CD8
Пролиферация
Пролиферация
ЦТЛ
И
ИЛ
Л--2
2
CD25
CD25
ЦТЛ
--22
Л
Л
И
И
CD80/86
CD28
Th1
ЦТЛ
ЦТЛ –– цитотоксический
цитотоксический Т-лимфоцит;
Т-лимфоцит;
Кл
Кл -- клетка
клетка
ТCR
АГ
МНС II
CD4
CD154
CD40
АПК
Образование В- и Т-клеток памяти
В-клетка
(mIgM+)
Плазматическая
клетка
В-клетки
В-клетка памяти
(mIgG+)
антитела
антитела
Т-клетка
(СD45RA+ СD44+
СD62L+)
Эффекторная
Т-клетка
Т-клетки
Т-клетка памяти
(CD45R0+ CD44+
CD62L+)
Конъюгированный антиген (белок-динитрофторбензол)
NO
NO22
=
=
CH
CH22 NН
NН
Тир
Тир
Глу
Глу
Ала
Ала Ала
Ала Ала
Ала
= =
= =
= =
= =
= =
=
=
Лиз
Лиз
Лиз
Лиз
NO
NO22
Повторяющиеся
Повторяющиеся
единицы
единицы
Глу
Глу
Ала
Ала Ала
Ала Ала
Ала
Лиз
Лиз
Глу
Глу
Ала
Ала Ала
Ала Ала
Ала
Лиз
Лиз
Гал
Гал
...
КДО
КДО .... липид
липид А
А ...
АГФ
АГФ
Глю
АГФ
Глю Глю
Глю АГФ
NАГА
NАГА Гал
Гал
Лиз
Лиз
Тир
Тир
Глю
Глю Глю
Глю
NАГА
NАГА Гал
Гал
Лиз
Лиз
Тир
Тир
...
...
NO
NO22
NO
NO22
...
...
CH
CH22 NН
NН22 + FF
Гал
Гал
АГФ
АГФ
Глю
АГФ
Глю Глю
Глю АГФ
NАГА
NАГА Гал
Гал
Лиз
Лиз
Гал
Гал
АГФ
АГФ
АГФ
АГФ
АГФ
АГФ
«Костяк»
«Костяк»
а
О-специфическая
О-специфическая
боковая
боковая цепь
цепь
Основная
Основная структура
структура
б
Строение синтетического антигена (Т, Г)-А-Л (а) и специфической части
О-антигена бактерий кишечно-тифозной группы (б)
Лиз
Лиз -лизин,
-лизин, Ала
Ала -- аланин,
аланин, Тир
Тир -- тирозин,
тирозин, Глу
Глу -- глутаминовая
глутаминовая кислота,
кислота, КДО
КДО -- кеодезоксиоктионовая
кеодезоксиоктионовая
кислота,
кислота, АГФ
АГФ -- альдогентозофосфат,
альдогентозофосфат, Глю
Глю -- глюкоза,
глюкоза, Гал
Гал -- галактоза,
галактоза, NAГA
NAГA -- N-ацетилглюкозамин
N-ацетилглюкозамин
Система HLA
DPB1
LMP7
DPA1
DQB
1
TAP1 TAP2
DRB1
DQA1
* DRA
DRB3
B
C
A
LMP2
300
400
*
500
600
700
800
900
1000
2100
2200
3400
3500
Может
Может отсутствовать,
отсутствовать, либо
либо заменен
заменен на
на DRB5,
DRB5, DRB6
DRB6
Процессинг и экспрессия комплекса HLA/пептид
Клеточная
мембрана
Пептиды
Пептиды
Аппарат
Аппарат
Гольджи
Гольджи
Протеазы
Протеазы
DM
DM
Пептиды
Пептиды ТАР
Протеазы
Протеазы
АГ
Деградация
(экзогенного
(экзогенного
происхождения)
происхождения)
АГ
АГ
(эндогенного
(эндогенного LMP2,
LMP2, LMP7
LMP7
происхождения)
происхождения)
CLIP
Тирозин
-калретикулиновый
Тирозин-калретикулиновый
комплекс
комплекс
Класс I
β2 m
Рециркуляция
Рециркуляция
АВ
АВ
Инвариантная
Инвариантная цепь
цепь
класс
класс II
II
…
- СН2 - СН - СН2 - СН - СН2 - СНС=O
N
С=O
NН
(СН2)2
NН
O2N
NO2
NO2
СOOH
...
Количество ТНФ-специфических
ТНФ-специфических
Количество
АОК на
на селезенку
селезенку
АОК
Конъюгат гаптен-полиэлектролит
как сильный специфический иммуноген
80
80
75
75
х103
х103
80
Первичный
иммунный
ответ
75
70
70
70
15
15
15
10
10
10
55
5
Контроль
Контроль
Вторичный
иммунный
ответ
Контроль
Контроль
- IgM AOK к ТНФ
- IgG AOK к ТНФ
Синтетические полиэлектролиты иммуномодуляторы
(-CH2-CH-)n
(-СH2-CH-)n
COOH
Полиакриловая
кислота (ПАК)
(-СН2-CH-)n
Поли-4-винилпиридин (ПВП)
Поли-5-метил-2-винилпиридин
-CH2 CH2
+
- CH2 CH2
X
C2H5
(-CH2-CH-)n
+
СН3
+
Х-
С2Н5
Соль кватернизованного
поли-4-винилпиридина
X
C2H5
n
n-m
+
- CH2 CH2
X
CH2C6H5
Кватернизованные соли поликонидина
m
азациклмент
фер
Система
рецептор-циклаза
канал
ионный
птор
реце
АТФ-аза
Поиски системы клеточной мембраны,
которая может участвовать в реакции
на полиион
Система
ионного транспорта
фосфолипаза
ацетилко-А:
лизолецити
ацилтрансферн
аза
Система, регулирующая
текучесть липидного
матрикса
В результате были: открыты механизмы иммуностимулирующего действия полиэлектролитов,
состоящие в активации Т- и В-клеточной миграции,
клеточной кооперации, компенсации функции
Т-помощников, кластеризации мембранных белков,
сопровождающейся повышением проницаемости
клеточной мембраны для ионов Ca2++, Na++, K++ и
активацией Ca2++- и (Na++, K++)-АТФаз.
Модельные
искусственные антигены
Комплексы БСА
с производными поли-4-винилпиридина
+
С2Н5
+
Х-
С16Н33
-CH2-CH- -CH2-CH+
Х-
СН2
СООН
Антиген
Антиген 1
1
(полимер
(полимер связан
связан сс белком
белком
солевыми
и
гидрофобными
солевыми и гидрофобными
контактами)
контактами)
Антиген 2
(полимер
(полимер связан
связан сс белком
белком
ковалентно)
ковалентно)
Иммунный ответ
ответ (АОК)
(АОК)
Иммунный
-CH2-CH- -CH2-CH-
10000
10000
8000
8000
6000
6000
4000
4000
2000
2000
Альбумин
Альбумин Антиген
Антиген 11 Антиген
Антиген 22
Т-независимость иммунного ответа
на конъюгат АГ-ПЭ
АОК
АОК
(х10
(х1033))
140
140
120
120
100
100
80
80
БСА
БСА-ПЭ
БГГ
БГГ-ПЭ
60
60
40
40
20
20
44
33
22
11
nu/+
nu/+
nu/nu
nu/nu
nu/+
nu/+
nu/nu
nu/nu
...
...
C
H
N
O
...
он
ни
...
(Т,Г)-A-Л
полиа
-3))
АОК на
на селезенку
селезенку (х10
(х10-3
АОК
Фенотипическая коррекция
иммунного ответа при иммунизации
конъюгатом (Т,Г)-A-Л-полиэлектролит
120
100
80
60
40
20
CBA
C57BL
Конъюгированная
противосальмонеллезная вакцина
Полисахаридный
антиген
бактериального
тела
Антиген-полимерные
конъюгаты
Заражение
абсолютно
летальной дозой
14-30 дней
Иммунизация
Выживаемость %
Белковый
антиген жгутика
100
ПС-флагеллин-ПЭ
ПС-ПЭ
80
60
40
ПС
20
0,01 0,1 1,0 10 100
Конъюгированная
противогриппозная вакцина
14 дней
Иммунизация
12
100
80
60
40
20
Физ.
раствор
AОК (x10-3)
Заражение
абсолютно
летальной дозой
Выживаемость, %
Вирус гриппа
Конъюгаты
Нейраминидаза
антиген - полимер
Гемагглютинин
10
8
6
4
2
Физ.
раствор
Разработанный принцип создания конъюгированных
иммуногенов был использован для повышения иммуногенности консервативных антигенов и эпитопов вирусов,
отличающихся слабой иммуногенностью, в частности,
типоспецифических белков и додекапептидного
фрагмента легкой цепи гемагглютинина вируса гриппа.
Конъюгированная антиген-полимерная гриппозная вакцина
на основе консервативных типоспецифических белков
вируса А (Н1N1)
Нейраминидаза
Гемагглютинин М-белок
Конъюгаты
антиген-полиэлектролит
14 дней
Иммунизация
4000
3000
2000
1000
Выживаемость, %
Заражение
абсолютно летальной
дозой вируса А (H3N2)
М-специфический иммунный
ответ (ELISA-титр)
NP-белок
100
80
60
40
20
+
.. .
NH-GLY-LEU-PHE-GLY-ALA-ILE-ALA-GLY-PHE-ILE-GLU-GLY
Относительный титр легочного
вируса (A/Aichi)
- lg EID50
Относительная J aбсорбция 450 нм
......
Сополимер полиакриловой
полиакриловой кислоты
кислоты
Сополимер
C
O
6
12
11
10
9
8
5
4
7
6
3
5
4
3
2
2
1
1
I II
I II
I II
I II
Aнтителообразование против
конъюгированного антигена,
тестируемое твердофазным
иммуноферментным методом
с конъюгатом F/A-BSA (
)
и интактными вирусами
A/Aichi (
), A/Texas (
),
A/PR/8 (
).
I - иммунизация F/A пептидным
coполимерным комплексом
(2,5 γ F/A /мышь CBA)
II - иммунизация F/A - BSA
в физиологическом растворе
(2,5 γ F/A /мышь CBA)
Защита мышей от инфекционного
заражения (A/Aichi) через 21 день
после иммунизации.
- неиммунизированные
контрольные мыши
- F/A-BSA (2,5 γ F/A/мышь)
- F/A пептидный сополимерный комплекс (2,5 γ F/A/мышь)
- F/A пептидный сополимерный комплекс (10 γ F/A/мышь)
ПОЛИОКСИДОНИЙ
Первый оригинальный препарат нового класса
гетероцепных алифатических полиаминов
Сополимер N-окиси 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиэтил)-1,4этиленпиперазиний бромида
_
Br
N
О
N СН2 СН2
+
N
N СН2 СН2
CН2СООН
ММ 60000 - 100000D
n
Механизмы действия полиоксидония
на клетки иммунной системы человека
Полиоксидоний
Нейтрофилы
Моноциты
макрофаги
Активные
формы О2
NK-клетки
Цитотоксичность
Дендритные клетки
Костимуляторные
молекулы
Киллинг
внеклеточных
микробов
Экспрессия
HLA-DR
Презентация
АГ
Активация
Th1-клеток
ИЛ-12
Cинтез
интерферонаα
Антивирусная
защита
ГМ-КСФ
Провоспалит.
цитокины
ФНО, ИЛ-6, ИЛ-1
Активные
формы азота
Лейкопоэз
Антибактериальная
защита
Т- и В-клетки
Киллинг
внутриклеточных
микробов
Характеристика вакцины ГРИППОЛ
Доза
ГА (5+5+5) мкг
ПО
500 мкг
Снижение в 3 раза
прививочной дозы ГА
Высокая профилактическая
эффективность
А1 (Н1 N1)
А2 (Н3 N2)
В
Носитель иммуномодулятор
полиоксидоний
Состав
Антигены
вируса гриппа
Вакцина ГРИППОЛ - первый вакцинирующий препарат, сконструированный
на принципиально новой основе, не имеет аналогов в мировой практике
Свойства
Высокая степень
безопасности
Формирование
длительной
иммунной памяти
Снижение заболеваний
верхних дыхательных путей
ВИЧРЕПОЛ
Химерный
рекомбинантный белок
rec(24-41)
Poly-His
р24
gр41
N
Химическая
структура
ВИЧРЕПОЛа
Иммуномодулятор
ПОЛИОКСИДОНИЙ
N
CH22
…
CH22
Br -
+
+
N
N
CH22
CH22
CH22
O
CO
n
NH
rec (24-41)
C
N
O
H
m
Иммунный ответ, индуцируемый химерным рекомбинантным
белком rec(24-41) и его конъюгатом с полиоксидонием
Титр антител
антител вв ИФА
ИФА
Титр
Иммунизация
Иммунизация rec(24-41)
rec(24-41) и
и его
его конъюгатом
конъюгатом
сс полиоксидонием
полиоксидонием
(10
(10 мкг
мкг антигена
антигена на
на мышь,
мышь, вторичный
вторичный ответ)
ответ)
50000
50000
40000
40000
чистый антиген
rec(24-41)
30000
30000
конъюгат
rec(24-41)-ПО
ВИЧРЕПОЛ
ВИЧРЕПОЛ вызывает
вызывает образование
образование
антител,
антител, нейтрализующих
нейтрализующих ВИЧ-1
ВИЧ-1 in
in vitro
vitro
Иммунная
сыворотка
1:50
Клеточная
линия MT4
(300 000
кл/лунку)
ВИЧ-1 IIIB
10 TCID50
Инкубация
20000
20000
Определение белка р24 ВИЧ-1
10000
10000
00
Антиген
Антиген на
на твердой
твердой фазе
фазе -- rec(24-41)
rec(24-41)
Индекс нейтрализации – 55%
Пролиферация
Пролиферация клеток
клеток вв ответ
ответ на
на ВИЧРЕПОЛ
ВИЧРЕПОЛ
Спонтанная пролиферация
РБТЛ на rec(24-41)
Индекс пролиферации
Селезенка
1000±50 (cpm/106 кл)
10000±300 (cpm/106 кл)
10.0
Лимф. узлы
600±100 (cpm/106 кл)
5000±100 (cpm/106 кл)
8.3
Процесс дифференцировки Th1 и Th2-клеток
ДК – дендритные клетки
MФ – макрофаги
MН – мононуклеары
ТК – тучные клетки
ИНФγ
ФНОα
ИЛ-2
2
12
И
Л--1
ИЛ
Th1
Th1
CD80/86
CD28
MHC-II
MHC-II
TCR
TCR
-
стимуляция
стимуляция
ДК
ДК
МФ
МФ
МН
МН
44
IILL--
ТК
ИЛ-10
ИЛ-10
Антигенная
Антигенная
ИНФγ
ИНФγ
Th0
Th0
ИЛ-4
ИЛ-5
ИЛ-13
ИЛ-10
-
Th2
Th2
Стимуляция Th1-клеток с помощью
ПОЛИОКСИДОНИЯ (ПО)
Презентация антигена
(аллергена)
ИЛ
ИЛ-1
-12
2
Th0
Th0
CD80/86
ПО
MHC-II
MHC-II
ДК
ДК
МФ
МФ
МН
МН
ДК – дендритные клетки
MФ – макрофаги
MН – мононуклеары
CD28
ИНФγ
ИНФγ
Th1
ФНОα
ФНОα
TCR
TCR
ИЛ-2
ИЛ-2
Распознавание
комплекса MHC-II-пептид
и костимуляция
Количество CD4+IFNγ+ (Th1)-клеток
у больных туберкулезом
до и после введения ПОЛИОКСИДОНИЯ
%
%
25
25
**
**
20
20
15
15
10
10
*
5
5
Доноры
Доноры
Больные
Больные
Больные,
Больные,
леченные
леченные ПО
ПО
(через
(через 10
10 дней)
дней)
Больные,
Больные,
леченные
леченные ПО
ПО
(через
(через 11 мес.)
мес.)
* р<0,05 по сравнению с донорами
** р<0,05 по сравнению с больными (лечение без ПО)
Синтез интерферона-γ лимфоцитами (Th1)
больных туберкулезом
до и после введения ПОЛИОКСИДОНИЯ
пкг/мл
пкг/мл
1800
1800
1600
1600
*
*
1400
1400
1200
1200
1000
1000
* р<0,05
800
800
600
600
400
400
200
200
До
До
введения
введения
ПО
ПО
Через
Через 10
10 дней
дней
после
после
введения
введения ПО
ПО
Через
Через 11 мес.
мес.
После
После
введения
введения ПО
ПО
Основные этапы получения
аллерготропина
-- выделение
выделение нативной
нативной формы
формы аллергена
аллергена
-- создание
создание его
его аллергоидной
аллергоидной формы
формы сс помощью
помощью
химической
химической модификации
модификации
-- конъюгация
конъюгация аллергоида
аллергоида сс иммуномодулятором
иммуномодулятором
ПОЛИОКСИДОНИЕМ
ПОЛИОКСИДОНИЕМ
Аллергоид
Полиоксидоний
_
Br
N
О
N СН2 СН2
+
N
CН2 С
N СН2 СН2
О
NН
n
аллергоид
Уровни специфических IgG-«блок»-антител
у мышей CBAxC57Bl(F1), сенсибилизированных
нативными аллергенами пыльцы растений,
после гипосенсибилизации аллерготропинами
OD
OD
2,5
2,5
Ал
Ал Алд
Алд АТ
АТ
Гипосенсибилизация
ТИМПОЛ
Сенсибилизация
Ал
Сенсибилизация
Ал
0,5
0,5
Сенсибилизация
Ал
1
1
Гипосенсибилизация
1,5
1,5
БЕРПОЛ
ПОЛПОЛ
2
2
Гипосенсибилизация
Условные обозначения
препаратов из пыльцы:
Ал
Ал Алд
Алд АТ
АТ
полыни
березы
тимофеевки
Ал - аллерген
Алд - аллергоид
АТ - аллерготропин
Ал
Ал Алд
Алд АТ
АТ
р<0,01
р<0,01
14
14
Ал
Ал
10
10
2
2
Ал
тимофеевки
АТ
6
6
4
4
Условные обозначения
препаратов из пыльцы:
березы
полыни
АТ
На
На пике
пике После
После
сенсигипосенсенси- гипосенбилибили- сибилисибилизации
зации зации
зации
На
На пике
пике После
После
сенсисенси- гипосенгипосенбилибили- сибилисибилизации
зации зации
зации
АТ
ПОЛПОЛ
8
8
Ал
Ал
ТИМПОЛ
12
12
Ал
БЕРПОЛ
Количество элюата
элюата Эванса,
Эванса, мкг
мкг
Количество
Уровни гомоцитотропных (специфических IgЕ)-антител
у мышей до и после гипосенсибилизации аллергеном,
аллергоидом и аллерготропином
(реакция пассивной кожной анафилаксии по Ovary)
На
На пике
пике После
После
сенсисенси- гипосенгипосенбилибили- сибилисибилизации
зации зации
зации
Ал - аллерген
АТ - аллерготропин
25
25
Условные обозначения
препаратов из пыльцы:
березы
20
20
10
10
ТИМПОЛ
15
15
ПОЛПОЛ
полыни
БЕРПОЛ
Уровни высвобождения
высвобождения гистамина
гистамина
Уровни
из базофилов,
базофилов, %
%
из
Результаты сравнительного анализа активности пыльцевых
аллергенов, аллергоидов и аллерготропинов в реакции
аллергенспецифического высвобождения гистамина из
базофилов периферической крови больных поллинозом
тимофеевки
5
5
Аллергены
Аллергены
Аллергоиды
Аллергоиды
Аллерготропины
Аллерготропины
р<0,01
р<0,01
25
25
До АСИТ
После АСИТ
Условные обозначения
препаратов из пыльцы:
тимофеевки
20
20
березы
полыни
5
5
Реакция
Реакция на
на Ал
Ал
АСИТ
АСИТ Ал
Ал
ПОЛПОЛ
10
10
БЕРПОЛ
15
15
ТИМПОЛ
Интенсивность аллергической
аллергической реакции
реакции
Интенсивность
кожи кк специфическому
специфическому аллергену,
аллергену, мм
мм
кожи
Кожная чувствительность пациентов
к специфическому аллергену до и после АСИТ
АСИТ
АСИТ АТ
АТ
р<0,001
р<0,001
140
140
18
18
15
15
Тимпол
Тимпол
Placebo
Placebo
Количество
Количество
пыльцевых
пыльцевых зерен
зерен
злаковых
злаковых трав
трав
вв 11 м.
куб.
м. куб.
120
120
100
100
12
12
99
66
33
00
80
80
60
60
40
40
20
20
00
Количество пыльцевых
пыльцевых зерен
зерен вв 1
1м
м33
Количество
21
21
15
.0
19 5.
.0
23 5.
.0
27 5.
.0
31 5.
.0
04 5.
.0
08 6.
.0
12 6.
.0
16 6.
.0
20 6.
.0
24 6.
.0
28 6.
.0
02 6.
.0
06 7.
.0
10 7.
.0
14 7.
.0
18 7.
.0
22 7.
.0
26 7.
.0
30 7.
.0
7.
Интенсивность клинических
клинических симптомов,
симптомов,
Интенсивность
баллы
баллы
Графики интенсивности клинических симптомов поллиноза
и количества пыльцевых зерен злаковых трав в 1 м33
после 1 курса АСИТ ТИМПОЛОМ и Placebo