Àóòîàíòèòåëà êëàññà IgG ê ÿäåðíûì àíòèãåíàì

1
SLE Profile EUROASSAY, EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
Аутоантитела класса IgG к ядерным антигенам
(SLE- Profil EUROASSAY)
Набор EUROASSAY для определения аутоантител класса IgG к высокоочищенным ядерным антигенам в
сыворотке или плазме крови человека методом иммуноблотинга.
Номер по каталогу: DA 1590-1003-3 G
набор рассчитан на 30 определений (10 × 3)
DA 1590-1005- 3G
набор рассчитан на 50 определений (10 × 5)
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор SLE Profil EUROASSAY (IgG) обеспечивает качественное определение in vitro в сыворотке (плазме)
крови человека аутоантител класса IgG к 7 различным антигенам: nRNP, Sm, SS-A, SS-B, dsDNA,
гистонам и рибосомальному Р-белку.
ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ:
Смешанное заболевание соединительной ткани (MCTD, Sharp-синдром), диссеминированная красная
волчанка (SLE), синдром Шегрена.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Тест SLE Profil EUROASSAY (IgG) основан на методе иммуноблотинга. Набор содержит слайды с
блотовыми стрипами (2 стрипа на каждом слайде закреплены в своих тестовых зонах). Стрипы содержат
аффинно очищенные антигены, нанесенные в виде параллельных полос. Блотовые стрипы инкубируют на
первой стадии реакции с образцом разведенной сыворотки или плазмы пациента. В случае если образец
положительный, специфические антитела класса IgG (а также классов IgA и IgM) будут связываться с
соответствующими полосами антигенов. Для обнаружения связанных антител проводится вторая инкубация
с использованием ферментного конъюгата (антитела к IgG человека, меченные щелочной фосфатазой),
который способен вызывать развитие цветной реакции.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
Состав набора:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Компонент
Слайды с тестовыми стрипами, покрытыми антигенами
Антигены: nRNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, dsDNA, гистонам и
рибосомальному Р-белку
Положительный контроль
(IgG, человеческий), готов к использованию
Отрицательный контроль
(IgG, человеческий), готов к использованию
Ферментный конъюгат
Козьи антитела к IgG человека, конъюгированные с щелочной
фосфатазой; готов к использованию
Буфер для образцов
Готов к использованию
Промывочный буфер
10×концентрат
Раствор субстрата
Нитроголубой тетразолий/5-бром-4-хлориндолил-фосфат
(NBT/BCIP), готов к использованию
Инструкция по применению набора
Количество
10 слайдов
Обозначение
SLIDE
1 × 0,2 мл
POS CONTROL
1 × 0,2 мл
NEG CONTROL
1 × 0,5 мл
CONJUGATE 10×
1 × 60 мл
SAMPLE BUFFER
2 × 100 мл
WASH BUFFER 10×
1 × 4 мл
SUBSTRATE
1 буклет
–
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2006
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
2
SLE Profile EUROASSAY, EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
Серия
Температура хранения
Для in vitro диагностики
Невскрытый набор использовать до
Для проведения теста необходимы Шаблон-подложка для проведения реакции и Кювета для промывки
EUROASSAY, которые не поставляются с данным набором. Эти приспособления можно заказать у фирмы
EUROIMMUN.
Хранение и стабильность набора: Набор следует хранить при температуре от +2 °С до +8 °С. Не
замораживать. Невскрытые компоненты набора сохраняют стабильность в течение всего указанного срока
годности набора.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Примечание: Перед использованием все реагенты необходимо прогреть до комнатной температуры (от
+18 °С до +25 °С) в течение 30 минут. После первого использования реагенты сохраняют стабильность в
течение указанного срока годности, если они хранятся при температуре от +2 °С до +8 °С и защищены от
микробной контаминации. Прочие сведения о стабильности отдельных реагентов указаны ниже.
Слайды: Готовы к использованию. Во избежание конденсации влаги на слайдах, не вскрывайте пакет до
тех пор, пока он не прогреется до комнатной температуры. Не дотрагивайтесь руками до тестовых стрипов.
После вскрытия упаковки, слайды необходимо немедленно использовать (проводить инкубацию). Не
используйте слайды, если герметичность упаковки нарушена.
Шаблон-подложка для проведения реакции: Проверьте работу шаблона-подложки: вся ли поверхность в
зоне проведения реакции гидрофильна и вся ли поверхность вокруг этой зоны гидрофобна? Промойте
обычным хозяйственным моющим раствором с детергентом. Если необходимо, протрите впитывающей
бумагой (например, бумажным полотенцем) и промойте большим количеством воды. Время от времени
дезинфицируйте, погружая шаблон на 1 час в дезинфицирующий раствор (например, в 3% раствор
Sekusept Extra, “Henkel”).
Положительная и отрицательная контрольные сыворотки: Готовы к использованию.
Ферментный конъюгат: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Отберите необходимое количество
жидкости из флакона с концентратом с помощью чистой пипетки и разведите 1:10 буфером для образцов.
Например, для проведения анализа на 1 слайде, разведите 30 мкл концентрата ферментного конъюгата в
270 мкл буфера для образцов. Разведенный раствор ферментного конъюгата следует использовать до
конца рабочего дня.
Буфер для образцов: Готов к использованию.
Промывочный буфер: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Необходимое количество
концентрата следует отобрать из бутыли чистой пипеткой и растворить (1:10) дистиллированной водой.
Например, для каждой постановки анализа, к 20 мл концентрата следует добавить 180 мл воды. Готовый
разведенный промывочный буфер следует использовать до конца рабочего дня.
Раствор субстрата: Готов к использованию. После отбора необходимого количества реагента из флакона
немедленно вновь закройте его, так как раствор чувствителен к свету.
Предостережение: Использованная контрольная сыворотка была проверена на наличие HBsAg и антител к
ВИЧ-1 и ВИЧ-2 методами иммуноферментного анализа и непрямой иммунофлуоресценции и при этом
показала отрицательный результат. Тем не менее, все используемые материалы следует считать
потенциально опасными и обращаться с ними, соблюдая необходимые меры предосторожности. Некоторые
из реагентов ядовиты (буфер, раствор субстрата). Избегайте контакта с кожей.
Утилизация отходов: Образцы пациентов, контроли и слайды после инкубации следует рассматривать как
инфицированные отходы и обращаться с ними соответствующим образом. Остальные реагенты не нужно
собирать отдельно, если это не оговорено в действующих официальных инструкциях.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ОБРАЗЦОВ ПАЦИЕНТОВ
Материал образцов: Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин или цитрат) крови человека.
Стабильность: Образцы пациентов, предназначенные для исследования этим методом, можно хранить до
о
о
14 дней при температуре от +2 С до +8 С. Разведенные образцы необходимо использовать в течение
одного рабочего дня.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2006
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
3
SLE Profile EUROASSAY, EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
Разведение образцов: Образцы пациентов разводят 1:101 буфером для образцов. Например: разведите
10 мкл сыворотки в 1,0 мл буфера для образцов и тщательно перемешайте на вортексе (пипетки для этого
не подходят).
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ: техника TITERPLANE
Техника TITERPLANE разработана фирмой EUROIMMUN с целью стандартизации иммунологических
анализов: образцы вначале наносят в виде капель на горизонтальную поверхность специального шаблонаподложки в зону проведения реакции. Затем на шаблон, в специальные углубления, помещают слайды,
повернутые иммуноблотовыми стрипами к реакционной зоне, поэтому все стрипы сразу приходят в
соприкосновение с каплями жидкости и отдельные реакции начинаются одновременно. Расположение и
высота капель точно заданы геометрией всей системы. Все наносимые жидкости находятся в огороженном
пространстве, поэтому не нужна обычно используемая в таких случаях ”влажная камера”. Шаблон-подложку
можно использовать многократно и инкубировать, таким образом, любое количество образцов, размещая
их рядом или один за другим, в идентичных условиях.
Нанесение
Нанесите 50 мкл разведенного образца пациента в каждую реакционную зону шаблона-подложки. Уберите
пузырьки воздуха. Внесите таким образом до начала инкубации все образцы, участвующие в данной
постановке теста. Для удобства нанесения используйте многоканальную пипетку или шаблон.
Инкубация с образцом (1 стадия)
Начните все реакции одновременно, поместив слайды в соответствующие углубления шаблона-подложки.
Следите, чтобы каждый образец контактировал с блотовым стрипом на слайде и чтобы отдельные образцы
не соприкасались друг с другом. Инкубируйте при комнатной температуре (от +18 °С до +25 °С) в течение
30 минут на шейкере циркуляторного типа при скорости 300 об./мин.
Промывка
Промойте слайды под струей промывочного буфера (используйте стакан или колбу) и вставьте их в
стеклянную рамку промывочной кюветы. После размещения всех слайдов перенесите рамку в кювету и
промывайте в течение 15 минут.
Нанесение
Нанесите 50 мкл разведенного ферментного конъюгата (щелочная фосфатаза, конъюгированная с
антителами к IgG человека) в каждую зону проведения реакции (к тому времени очищенную) шаблонаподложки. Количество нанесенных капель должно соответствовать количеству исследуемых образцов.
Инкубация с конъюгатом (2 стадия)
Извлеките слайды из промывочного буфера, протрите досуха только задний и нижний край и поместите
слайды в соответствующие углубления шаблона-подложки. Следите, чтобы каждая капля жидкости
контактировала с блотовым стрипом на слайде. Инкубируйте при комнатной температуре (от +18 °С до
+25 °С) в течение 30 минут на шейкере циркуляторного типа при скорости 300 об./мин.
Промывка
Повторите процедуру промывки, используя свежую порцию промывочного буфера и промывая в течение 15
минут.
Нанесение
Нанесите 50 мкл раствора субстрата в каждую реакционную зону (к тому времени очищенную) шаблонаподложки. Количество нанесенных капель должно соответствовать количеству исследуемых образцов.
Инкубация с субстратом (3 стадия)
Извлеките слайды из промывочного буфера, протрите досуха только задний и нижний край и поместите
слайды в соответствующие углубления шаблона-подложки. Следите, чтобы каждая капля жидкости
контактировала с блотовым стрипом на слайде. Инкубируйте при комнатной температуре (от +18 °С до
+25 °С) в течение 10 минут на шейкере циркуляторного типа при скорости 300 об./мин.
Промывка
Ополосните слайды деионизированной или дистиллированной водой. Высушите на воздухе в течение 15
минут.
Визуальная оценка результатов реакции
Отметьте интенсивность окрашивания полос в тестовой зоне стрипов.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2006
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
4
SLE Profile EUROASSAY, EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Антигены и их размещение на стрипах:
nRNP/Sm
dsDNA
Sm
Гистоны
SS-A
Рибосомальный Р-белок
SS-B
Контрольная полоса (антитела к IgG человека)
Интерпретируют интенсивность окрашивания полос на блотовых стрипах. Внимание: Перед оценкой
результатов мембрана должна быть полностью высушена. Положительный результат реакции на
контрольной полосе (в нижней части правого стрипа) свидетельствует о правильно проведенных
инкубациях. В случае положительного результата анализа (наличие антител к соответствующим антигенам)
в зоне расположения антигена появляется синее окрашивание. Интенсивность сигнала зависит от титра
антител в образце, с которым проводилась инкубация стрипа.
В зависимости от интенсивности сигнала, результаты можно разделить на отрицательные, промежуточные
и положительные.
Сигнал
Результат
Нет сигнала
Отрицательный
Окраска полосы очень слабая
Промежуточный
Окраска полосы от умеренной до интенсивной
Положительный
Окраска полосы очень интенсивная, сравнимая с окраской контрольной полосы
Сильно-положительный
Параллельно с определением аутоантител к растворимым ядерным антигенам с помощью набора
EUROASSAY, всегда выполняли также непрямой иммунофлуоресцентный тест. С одной стороны, это
гарантировало защиту от ложноположительных результатов, с другой стороны – благодаря использованию
клеток Hep-2 EUROIMMUN и, в особенности, замороженных срезов ткани печени приматов,
иммунофлуоресцентный тест обеспечивал выявление более широкого спектра аутоантител к клеточному
ядру, так как в настоящее время не все ядерные антигены присутствуют в тесте EUROASSAY.
ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА
Калибрование: Реактивность каждого антигена стандартизовали с помощью референтной сыворотки
человека CDC-ANA с номерами лотов от #1 до #10 контрольного центра “Center for Disease Control”
(Атланта, США). Данные по реактивности сывороток CDC, полученные с помощью набора Anti-ENA
ProfilPlus EUROASSAY (IgG) фирмы EUROIMMUN, суммированы в нижеприведенной таблице:
CDC-1
CDC-2
/rim
/SS-B
nRNP/Sm
Пол.
Отр.
Sm
Пол.
SS-A
SS-B
Антиген
dsDNA
Гистоны
Рибосомальный
Р-белок
CDC-4
CDC-5
RNP
Sm
Пол.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
CDC-3
CDC-6
CDC-7
CDC-8
CDC-9
CDC-10
Scl-70
Jo-1
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
SS-A
Специфичность этой сыворотки была исследована контрольным центром “Center for Disease Control” по
результатам реакции иммунофлуоресценции (субстрат: клетки Hep-2 EUROIMMUN и срезы ткани печени
приматов), двойной иммунодиффузии или противоточного иммуноэлектрофореза (сыворотка не всегда
бывает моноспецифичной).
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2006
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
5
SLE Profile EUROASSAY, EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
Антигены: На иммуноблотовые стрипы были раздельно нанесены следующие антигены:
nRNP/Sm:
Нативный U1-nRNP, очищенный аффинной хроматографией из тимуса теленка и кролика.
Sm:
Нативный Sm, очищенный аффинной хроматографией из селезенки и тимуса быка.
SS-A:
Нативный SS-A, очищенный аффинной хроматографией из селезенки и тимуса быка.
SS-B:
Нативный SS-B, очищенный аффинной хроматографией из тимуса теленка и кролика.
dsDNA:
Высокоочищенная нативная двуспиральная ДНК, выделенная из малок лосося.
Гистоны:
Смесь отдельно очищенных гистонов разных типов из тимуса теленка.
Рибосомальный:
Р-белок
Нативный рибосомальный Р-белок, чищенный аффинной хроматографией
из тимуса теленка и кролика.
Диапазон определения: Метод EUROASSAY является качественным, диапазон определения не дается.
Принято, что предельный титр антител наблюдается при разведении образца 1:101.
Перекрестные реакции: Качество используемых антигенных субстратов
(антигенов и источников
антигенов) гарантирует высокую специфичность наборов EUROASSAY. Данный набор EUROASSAY
специфически определяет антитела класса IgG к nRNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, dsDNA, гистонов и
рибосомальному Р-белку. Перекрестных реакций с другими аутоантителами не обнаружено.
Интерференция: Не отмечено изменения аналитических характеристик при исследовании в данном
наборе гемолизированных, липемических или желтушных образцов с концентрациями гемоглобина вплоть
до 5 мг/мл, триглицеридов – до 20 мг/мл и билирубина – до 0,4 мг/мл.
Вариации результатов в разных опытах и в одном опыте: Вариации результатов в разных опытах
оценивали многократным повторным исследованием одних и тех же охарактеризованных образцов в
течение нескольких дней, вариации в одном опыте – многократным исследованием охарактеризованных
образцов в течение одного дня. В каждом случае интенсивность полос находилась в пределах
установленного диапазона. Таким образом, данный тест EUROASSAY показывает очень высокую
воспроизводимость в пределах одной постановки и между постановками.
Чувствительность и специфичность:
Чувствительность данного набора EUROASSAY для выявления антител против nRNP/SM, Sm, SS-A, SS-B
составляет 100%, против sdDNA – 85 %, гистонов и рибосомального Р-белка – 82 %, . Специфичность
данного набора EUROASSAY для выявления антител против антигенов nRNP/SM, Sm, SS-A, SS-B, dsDNA
составляет 100%, для выявления антител против гистонов – 97 % и против рибосомального Р-белка – 91 %.
В качестве референтных систем использовали тест EUROIMMUN Anti-ENA ProfilPlus ELISA и Anti-dsDNA
ELISA, Anti-Histone, Anti-ribosomal P-protein ELISA и тест IIFT (обнаружение антиядерных антител с
использованием клеток Hep-2 и срезов ткани печени приматов).
Референтный интервал:
Интервал нормальных значений был определен на 50 здоровых донорах крови. Все доноры показали
отрицательный результат при использовании методов EUROASSAY .
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Антигены:
Антигены nRNP и Sm принадлежат к группе малых рибонуклеопротеинов (snRNP, small nuclear
ribonucleoproteins), состоящих из низкомолекулярной РНК с высоким содержанием уридина (U-РНК или URNP) в комплексе с различными белками (с молекулярной массой 9–7- кДа). В этих растворимых ядерных
рибонуклеопротеиновых комплексах компонент РНК, в зависимости от его поведения при хроматографии,
имеет обозначения от U1 до U6. Белковый компонент содержит семь различных сердцевинных или
коровых (core) белков (В, В’, D, E, F, G), U1-nRNP содержит дополнительные специфические для ядерных
рибонуклеопротеинов белки (70 К, А, С). Антитела к U1-nRNP направлены против одного или нескольких из
этих белков. Напротив, антитела к антигену Sm могут взаимодействовать также с одним или с несколькими
коровыми белками. Частицы U-nRNP участвуют в разделении пре-мРНК – они отщепляют не кодируемые
последовательности мРНК (интроны) и вставляют кодируемые последовательности мРНК (экзоны),
создавая мРНК.
Нативный антиген SS-A – малый рибонуклеопротеин, состоящий из одной или нескольких (до пяти) молекул
РНК (Y1, Y2, Y3, Y4, Y5; от 80 до 112 оснований) и белка с молекулярной массой 60 кДа. С этим комплексом
бывает также связан белок Ro-52 с молекулярной массой 52 кДа. Y-РНК может иметь длину от 80 до 112
оснований. По-видимому, SS-A участвует в процессинге мРНК до молекул, активно участвующих в
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2006
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
6
SLE Profile EUROASSAY, EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
трансляции. Сыворотка, позитивная по этому антигену, содержит антитела к нативному SS-A (т. е.
содержащему белок 60 кДа) и вдобавок – может содержать антитела к белку Ro-52. Отдельно реакции
антител с Ro-52 невозможно оценить как SS-A-позитивные или специфичные для СКВ или синдрома
Шегрена.
Антиген SS-B представляет собой фосфопротеин с молекулярной массой 48 кДа. В клеточном ядре он
выполняет функцию белка-хелпера для РНК-полимеразы III.
Антитела к ДНК разделяются на два различных типа: антитела к нативной, двуспиральной ДНК (dsDNA) и
антитела к денатурированной, одноцепочечной ДНК (ssDNA). Антитела, реактивные по отношению к
двуспиральной ДНК, распознают основные эпитопы дезокси-рибозно-фосфатного скелета двойной спирали
и поэтому реагируют как с двухцепочечной, так и с одноцепочечной ДНК. С другой стороны, антитела,
реактивные по отношению к ssDNA, распознают полимеры с пуриновыми и пиримидиновыми основаниями,
которые не доступны в двухцепочечной молекуле.
Гистоны являются основными связанными с ДНК белками с молекулярной массой от 11,2 кДа до 21,5 кДа.
Они выполняют функцию стабилизации двойной спирали ДНК и могут также играть роль в механизмах
генной регуляции. Существует 5 различных типов гистонов: Н1, Н2А, Н2В, Н3 и Н4. Гистоны участвуют в
формировании высокоорганизованных структур нуклеосом. Их центральная часть состоит из Н3-Н3-Н4-Н4
тетрамеров, которые фланкированы на двух сторонах с помощью димеров Н2А-Н2А. Центральная частица
гистона окружена двумя изгибами ДНК (длиной 146 пар оснований). Нуклеосомы связаны друг с другом
связывающей ДНК, которая ассоциирована с гистоном Н1.
Антиген рибосомальных Р-белков состоит из 3 белков 60S-субъединицы рибосом. Эти белки называются
Р0 (молекулярная масса 38 кДа), Р1 (19 кДа) и Р2 (17 кДа). Основной антигенный эпитоп расположен с Сконца, содержащего во всех трех белках идентичную последовательность из 17 аминокислотных остатков.
Ассоциированные заболевания:
Высокие титры антител к U1-nRNP характерны для смешанного заболевания соединительных тканей
(MCTD) или для Шарп-синдрома (Scharp syndrome). Доля этих аутоантител составляет 95% - 100%. Титр
антител коррелирует с клинической активностью заболевания. Антитела к U1-nRNP находят также в 30% 40% случаев у пациентов с диссеминированной красной волчанкой (disseminated lupus erythematodes) и
почти всегда в комбинации с антителами к Sm.
Антитела к Sm имеют высокую специфичность к диссеминированной красной волчанке. Вместе с
антителами к двухцепочечной ДНК (dsDNA) они могут считаться патогномоничными признаками этого
заболевания, но встречаются только у 20% - 40% пациентов.
Антитела к SS-A связаны с различными аутоиммунными заболеваниями. Наиболее часто – у пациентов с
синдромом Шегрена (Sjörgen’s syndrome от 40% до 80% случаев), но также при диссеминированной
красной волчанке (от 30% до 40% случаев) и при первичном билиарном циррозе (20%) и иногда при
активном хроническом гепатите. Кроме этого, практически в 100% случаев красной волчанки у
новорожденных (neonatal lupus erythematodes) могут быть найдены антитела к антигену SS-A. Они
поступают через плацентарный барьер к плоду и являются причиной воспалительных реакций. У
новорожденных младенцев они могут также вызывать врожденную блокаду сердца (congenital heart block).
Антитела к SS-B находят почти исключительно у женщин (29:1) при синдроме Шегрена (от 40% до 80%
случаев), но также при диссеминированной красной волчанке (от 10% до 20%). При синдроме Шегрена в
основном встречается комбинация антител к SS-A и SS-B.
Антитела к dsDNA специфичны для системной красной волчанки. Наряду с антителами к Sm они
являются серологическим маркером этого заболевания с распространенностью от 60% до 90%.
Антитела к dsDNA обнаруживаются не только у пациентов с системной красной волчанкой (70-95 %), а
также при других аутоиммунных заболеваниях (лекарственной красной волчанке – 60 %, смешенном
заболевании соединительной ткани – 20-50 %, полимиозите/дерматимиозите, склеродемии – 14 %,
синдроме Шегрена – 13 %, ревматоидном артрите – 8 %).
Антитела к одному или нескольким типам гистонов или к комплексу H2A-H2B постоянно находят при
красной волчанке (с частотой 95%), вызванной лекарственными препаратами (прокаинамидом,
гидралазином и другими). Более того, антитела к гистонам находят у 30%-70% пациентов с
диссеминированной красной волчанкой и у 15%-50% пациентов с ревматоидным артритом.
Антитела к рибосомальным белкам Р
Распространенность составляет около 8-20%.
специфичны
для
системной
красной
волчанки.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2006
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
7
SLE Profile EUROASSAY, EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
SLE-Profil_EUROASSAY_IgG_DA1590-1003-3G_rus.doc
03.10.06 9:43
Оригинал DA_1590-3G_A_UK_C03.doc Version: 10.11.2003
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2006
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
8
SLE Profile EUROASSAY, EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
Техника TITERPLANE
слайд
шаблон-подложка
Нанести
образцы
по 50 мкл образца
разведенные
Инкубировать (1)
30 мин на циркуляторном
шейкере (300 об./мин)
Промыть,
ополаскивая 5 сек
и промывая 15 мин в кювете
промывочный буфер
Нанести
конъюгат
ферментный
по 50 мкл конъюгата
Инкубировать (2)
30 мин на циркуляторном
шейкере (300 об./мин)
Промыть,
ополаскивая 5 сек
и промывая 15 мин в кювете
промывочный буфер
Нанести
раствор субстрата
по 50 мкл субстрата
Инкубировать (3)
30 мин на циркуляторном
шейкере (300 об./мин)
Промыть,
ополоснуть дистиллированной
или деионизированной водой
высушить на воздухе
Оценить визуально
интенсивность
окрашивания
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2006
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru