Оригинал диссертации (файл PDF)

б1'8г-зтбз~х
ОДЕССКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ
ГЛАЗНЫХ БОЖЗНЕЙ И ТКАНЕВОЙ ТЕРАПИИ
им. акад. В.П.ФИЛАТОВА
На правах рукописи
ЛОТОШ Тамара Дмитриевна
УДК 612.017.1-085.322-092.9
ГЭТаТ НАТРИЯ ИЗ ТОРФА КАК ФАКТОР ПОВЫШЕНИЯ
НЕСПЕЦИШИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА
03.00.13 - Физиология человека и животных
Диссертация
на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
•^/1Л^
^
Научные руководители:
доктор биологических наук,
профессор В.П.Соловьева;
доктор сельскохозяйственных
наук, профессор Л.А.Христева
Одесса - 1985
О Г Л А В Л Е Н И Е
стр.
В В Е Д Е Н И Е
4
ГЛАВА I. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ВОПРОСА И ЗАДАЧИ
ИССЛЕДОВАНИЯ
1.1. Неспецифическая сопротивляемость организма и
принципы ее изучения
12
1.2. Торф как источник биологически активных веще­
ств, его применение в медицине и ветеринарии .
20
1.3. Характеристика гуминовых кислот
25
1.4. Физиологическая активность и вопросы механизма
действия гуминовых кислот
33
1.5. Программа и материал исследования
45
ГЛАВА П. ВЛИЯНИЕ ГУМАТА НАТРИЯ НА НЕКОТОРЫЕ ФИЗИОЛОГИ­
ЧЕСКИЕ ФУНКЦИИ ЖИВОТНОГО ОРГАНИЗМА
2.1. Влияние гумата натрия на показатели крови и
сердечно-сосудистую систему
53
2.2. Гистоморфологические исследования после введе­
ния гумата натрия
,
59
2.3. Влияние гумата натрия на состояние некоторых
желез внутренней секреции
2.4. Влияние гумата натрия на воспроизводительную
функцию экспериментальных животных
61
63
2.5. Проверка апирогенности гумата натрия
66
2.6. Проверка аллергизирующих свойств гумата натрия
66
2.7. Определение острой токсичности
69
ГЛАВА Ш. ГУМАТ НАТРИЯ КАК ФАКТОР ПОВЫШЕНИЯ НЕСПЕЦИШЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА
72
3.1. Биологическая активность гумата натрия на фармакобиологических тестах
73
3.2. Влияние гумата натрия на некоторые показатели
неспецифической резистентности организма
80
Стр.
3.3. Влияние гумата натрия на организм при воспро­
изведении общего кислородного голодания
91
3.4. Влияние предварительного введения гумата нат­
рия на течение и исход токсической анемии ...
95
3.5. Влияние предварительного введения гумата нат­
рия на развитие серотониновой язвы желудка ..
100
3.6. Влияние гумата натрия на устойчивость орга­
низма при токсическом гепатите
106
З А К Л Ю Ч Е Н И Е
120
ВЫВОДЫ
137
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
139
В В Е Д Е Н И Е
А к т у а л ь н о с т ь
п р о б л е м ы . Решение ХХУ1
съезда КПСС включает вопросы более полного использования, при­
родных ресурсов на основе достижений науки и технического про­
гресса. Продовольственная программа СССР на период до 1990 г.
особое значение придает проблеме биологически активных веществ;
"Обеспечить разработку более совершенных методов и средств пре­
дупреждения и лечения болезней животных, эффективных биологиче­
ских и химико-терапевтических препаратов и технологии их произ­
водства". Изыскание естественных биологически активных соедине­
ний и разработка на их основе высокоэффективных препаратов, по­
вышающих адаптацию животных организмов к неблагоприятным усло­
виям среды, является актуальной фундаментальной проблемой.
Необходимость данных разработок объясняется особенностями
современной промышленной технологии получения продуктов живот­
новодства. Это связано с концентрацией животных на крупных фер­
мах, что требует изыскания новых средств для повышения неспеци­
фической сопротивляемости организма животных и активации их
адаптационных возможностей.
В настоящее время в целях повышения естественной резистентноiCTH и продуктивности сельскохозяйственных животных используются
ферменты, гормоны и другие препараты органического происхожде-.
ния. Широкое внедрение в практике медицины и ветеринарии полу­
чили препараты, приготовленные по методу академика В.П.'Филатова,
которые уже более полувека с успехом применяются для повышения
защитных и компенсаторных возможностей организма.
В.П.Филатов писал, что "биогенные стимуляторы обнаружены...
в лиманной грязи, иле пресных озер, в черноземе, в осенних ли-
стьях, в торфе и других материалах, содержащих остатки животных
и растительных организмов, т.е. везде, где живые организмы,при­
спосабливаясь или медленно умирая, накапливали биогенные стимуля­
торы" (В.П.Филатов, 1952).
Советский Союз располагает мощными источниками сырьевых ресзфсов, на основе которых могут быть получены биологически актив­
ные вещества. Наиболее доступным и практически неисчерпаемым сы­
рьем для этих целей является торф.
С давних времен торф получил широкое распространение в сель­
ском хозяйстве, в растениеводстве-в веде органического удобрения
почвы и в животноводстве - в веде торфяного питья и сухой под­
кормки как источник минеральных и органических веществ для стиму­
ляции роста.
В медицине торф применяется*в веде апликаций в бальнеологии.
Большую ценность для лечебной медицины представляет инъекционный
препарат - торфот, приготовленный по методу В.П.Филатова,
Особый интерес вызывают гуминовые вещества торфа, составляю­
щие 30-50% его массы. Перспективность и необходимость их глубо­
кого изучения, разработки и использования в различных областях
народного хозяйства (растениеводстве, животноводстве и медицине)
базируются на анализе литературных данных, сввдетельствующих о
высоком биологически активном потенциале действия веществ гуму­
совой природы.
Эффективность использования гуминовых веществ и механизм их
действия на растениях исчерпывающе представлен в фуццаментальных исследованиях школы профессора Л.А.Христевой в Советском
Союзе, а также ряда других стран. Растворимые формы гуминовых
кислот (соли одновалентных металлов) в малых концентрациях зна­
чительно стимулируют рост, развитие растений, повышают поступ­
ление питательных элементов в растения, активизируют белковый
и углеводный обмен и повьшают урожай сельскохозяйственных куль­
тур.
Действие веществ гумусовой природы на растения особенно за­
метно при отклонении внешних условий от нормы: при повышенной
температуре (Л.А.Христева, 1962), дефиците кислорода ( S.QuminskijZ.Giiminska , 1953), пониженной влажности (М.М.Кононова,
К.В.Дьяконов, I960), высокой дозе минеральных удобрений (Л.А.
Христева, 1947; Л.А.Христева, 1956; A.M.Галушка, А.Я.Безкровная,
1975; E.Chaminade
,1968; С.Гумински, 1968) несоответствии рН
среды биологическим особенностям растений ( S.Guminski
1953; V.Hernando , 1968; S.Guminski, M.Badurova , 1965; С.Гумин­
ски, З.Г.Гуминска, I97I); для снятия ингибирующего действия
пестицидов (А.Г.Азанов, Л.К.Ткаченко, Т.В.Филиппова, Т.А.Лукья­
нова, 1973; Л.А.Христева, А.Т.Азанов и др., 1973; Л.П.Сторчай
и др., 1977; Л.П.Сторчай, 1980; А.И.Горовая, Г.И.Бражниченко,
1973; А.И.Горовая, А.Ф.Кулик, И.А.Огинова, 1983 и др.).
Таким образом, вещества гумусовой природы повышают неспецифическуго сопротивляемость растений.
Имеются единичные ссылки в литературе по использованию солей
гзгминовых кислот в качестве стимулятора роста для повышения при­
весов молодняка крупного рогатого скота и птиц, увеличения яйце­
носкости несушек, а также для ускорения роста и выживаемости рыб.
Однако, в доступной нам литературе нет информации о влиянии
гуминовых веществ на различные физиологические процессы, повышаю­
щие резистентность животных организмов при неблагоприятных усло­
виях среды.
Отдельные компоненты внешней среды обитания организма часто
выступают в качестве отрицательных раздражителей (Г.Селье,19б1,
1972), что в значительной мере снижает продуктивность сельскохо­
зяйственных животных. К таким факторам в практике животноводст-
ва следует отнести отлов, перераспределение на животноводческих
фермах, транспортировку, инфекции, различного рода погрешности
содержания скота, не зависящие от обслуживающего персонала и др.
Оптимальный вариант повышения адаптационных возможностей жи­
вотного организма может быть реализован введением физиологичес­
ки активных средств неспецифического действия, так как ни трени­
ровка, ни закаливание не могут быть широко цриемлемы в практике
животноводства и ветеринарии. Именно задача разработки таких
средств с определенно заданными адаптогенными свойствами являет­
ся актуальной, перспективной и экономически выгодной.
Цель
и
задачи
и с с л е д о в а н и я . Целью
настоящего исследования явилось экспериментальное обоснование
возможности использования биологически активных соединений гуму­
совой природы (гумата натрия) для повышения неспецифической рези­
стентности, изучение влияния их на основные физиологические функ­
ции организма в норме и при воздействии неблагоприятных факторов
с выявлением некоторых сторон механизма действия.
Целевая установка работы включала решение следующих конкрет­
ных задач.
1. Определить влияние гумата натрия на сердечно-сосудистую си­
стему, на гистоморфологическое строение тканей жизненно
важных
органов и желез внутренней секреции. Изучить тератогенные,эмбриотоксические, аллергизирующие и анафилактогенные свойства, апирогенность препарата и
^R^Q»
2. Определить уровень физиологической активности гумата натрия
при воздействии на организм различных неблагоприятных факторов.
3. Изучить защитный эффект гумата натрия при нарушении гемопоэза, функции печени и трофических процессов слизистой оболочки
желудка.
8
4. Изучить некоторые стороны механизма физиологического дей­
ствия гумата натрия.
М а т е р и а л
и
методы
и с с л е д о в а н и я .
Объектом исследования служили экспериментальные животные (кроли­
ки, морские свинки, белые крысы, белые мыши, лягушки).
Гумат натрия вводился парентерально в виде 0,1% водного раст­
вора.
Для решения поставленных задач были использованы современные
физиологические, гистоморфологические, биохимические и цитохими­
ческие методы исследования.
Уровень физиологической активности гумата натрия определяли
реакцией организма экспериментальных животных при воздействии
различных неблагоприятных факторов. К ним относятся: гипоксия
(пребывание в барокамере и замкнутом пространстве), угнетение
тормозных процессов в центральной нервной системе введением ток­
сических доз стрихнина, проводимость сердечной мышцы, нарушен­
ная введением токсической дозы строфантина, степень угнетения
функциональных свойств изолированных мышц лягушки при введении
альтерирующего агента (хлористого калия).
Защитное действие гумата натрия оценивалось по показателям
функционального состояния организма при нарушении гемопоэза
(введение фенилгидразина), метаболической устойчивости печени
(введение четыреххлористого углерода, гексенала), трофики слизи­
стой оболочки желудка (введение серотонина).
Вопросы изучения механизма действия гумата натрия связаны с
определением влияния его на иммунологическую реактивность (фаго­
цитарная активность лейкоцитов, активность лизоцима), ферментные
системы (активность церулоплазмина; активность трансфераз- АЛТ и
ACT, тиоловые группы белков) и некоторые виды обмена (гликоген
в печени, общий белок и его фракции в крови и печени).
Данные экспериментальных исследований обработаны статистичес­
ки с применением микро-ЭШ "Электроника" БЗ-21.
Н а у ч н а я
ц е н н о с т ь
н о в и з н а
и
п р а к т и ч е с к а я
. Получены новые данные о нормализующем влиянии
комплекса биологически активных веществ торфа на различные физио­
логические функции организма. Дано экспериментальное обоснование
применению гумата натрия для повышения неспецифической резистент­
ности организма.
Доказан высокий антитоксический эффект гумата натрия при вве­
дении экспериментальным животным отравляющих доз стрихнина,стро­
фантина, фенилгидразина, серотонина, четыреххлористого углерода,
гексенала.
Установлено, что гумат натрия безвреден, не обладает аллергизирующими, анафилактогенными, тератогенными и эмбриотоксическими
свойствами, апирогенен.
Доказано, что механизм положительного предварительного воздей­
ствия гумата натрия связан со стимулирующим влиянием его на имму­
нологическую реактивность, антитоксическую функцию печени и нор­
мализацией сульфгидрильно-дисульфидного равновесия, показателей
белкового (общий белок в крови и гепатоцитах, количество карбо­
ксильных групп глютаминовой кислоты в гепатоцитах) и углеводно­
го (гликоген в гепатоцитах) обменов.
Результаты исследований являются предпосылкой для создания но­
вого комплекса биологически активных соединений торфа - гумата
натрия с целью активации и расширения адаптационных возможностей
организма.
Полученные данные включены в материалы для представления в Ве­
теринарный Фармакологический Совет МСХ СССР. Гумат натрия (гуми-
10
нат) з^вержден в качестве кормовой добавки для повышения про­
дуктивности и неспецифической резистентности молодняка крупно­
го рогатого скота (см.приложение).
Положения работы и ее выводы расширяют арсенал средств не­
специфического действия из природного сырья.
С т р у к т у р а
и
объем
написана на русском языке, изложена на
р а б о т ы . Диссертация
страницах машинописи,
состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов и приложения.
Иллюстрирована 19 таблицами, 12 макро- и микрофотографиями и
7
и
графиками. Список литературы содержит 282
57
отечественных
иностранных источника.
В н е д р е н и е
.По теме диссертации опубликовано 18 работ.
I работа принята к опубликованию. В том числе 4 публикации за
рубежом (ПНР, ЧССР, ГДР, Ирлацция).
А п р о б а ц и я
р а б о т ы . Основные результаты диссер­
тации докладывались и обсуждались на межзональной конференции
"Перспективы использования в сельском хозяйстве физиологически
активных веществ гумусовой природы" (Днепропетровск,1980г.); зо­
нальной научно-технической конференции "Химия гумусовых кислот,
их роль в природе и перспективы использования в народном хозяй­
стве" (Тюмень,I98I); Всесоюзном научно-техническом семинаре "Ком­
плексное использование торфа в народном хозяйстве"(Минск, I98I);
Совете молодых ученых НИИ глазных болезней и тканевой терапии
им.акад.В.П.'Шилатова( 1980); заседании Одесского отделения Общест­
ва физиологов(1981); Республиканской конференции "Применение тка­
невых препаратов в медицине и сельском хозяйстве", посвященной
50-летию метода тканевой терапии (Одесса,1983); УП съезде офталь­
мологов УССР (Одесса, 1984).
II
Работа выполнена в лаборатории фармакологии тканевых препа­
ратов (руководитель лаборатории доктор биологических наук, про­
фессор, Заслуженный деятель науки УССР В.П.Соловьева) Одесского
НИИ глазных болезней и тканевой терапии им. акад.В.П.Филатова
(директор института - Заслуженный деятель науки, академик МЖ
СССР, профессор Н.А.Пучковская).
На защиту выносятся следующие положения.
1. %нкциональное состояние сердечно-сосудистой системы, пока­
затели крови, микроструктура миокарда, печени, легких, надпочеч­
ников и щитовидной железы, данные по изучению тератогенных,эмбриотоксических, аллергизирующих, анафилактогенных, апирогенных
свойств свидетельствуют о положительных качествах изучаемого ком­
плекса биологически активных веществ торфа - гумата натрия и от­
сутствии побочного эффекта.
2. Высокий уровень физиологической активности гумата натрия
при воздействии различных неблагоприятных факторов на организм
экспериментальных животных.
3. Стимулирующее влияние предварительного введения гумата нат­
рия на гемопоэтическую систему при фенилгидразиновой анемии, по­
вышение метаболической устойчивости печени к повреждающему дейст­
вию четыреххлористого углерода, улучшение трофических процессов
слизистой оболочки желудка, нарушенных токсическим воздействием
серотонина.
4. Механизм антитоксического действия гумата натрия связан с
влиянием на белоксинтезирующую систему крови, иммунобиологичес­
кую реактивность, некоторые показатели обмена веществ (в крови
и гепатоцитах), антитоксическую функцию печени, свидетельствую­
щие о неспецифичности препарата и возможности его использования
как адаптогена.
12
Глава I. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ВОПРОСА И ЗАДАЧИ
ИССЛЕДОВАНИЯ
I.I. Неспецифическая сопротивляемость организма
и принципы ее изучения
Еще во П половине XIX столетия Клод Вернар сформулировал
положение, что наиболее характерной чертой живых организмов
является их способность сохранять постоянство внутренней среды
независимо от изменений окружающих условий. Позднее У.Кеннон
эту способность приспособительных реакций организма назвал гомеостазом. Такшл образом, гомеостаз - это свойство биологичес­
кой системы сохранять династическое постоянство своей внутренней
среды, что и отражает уровень неспецифической резистентности
организма. Поскольку гомеостаз может нарушаться различными фактораьш физической, химической и биологической природы, то и ре­
зистентность является категорией более общей, чем специфичес­
кий иммунитет (Н.В.Васильев, 1976).
Гомеостаз характерен для всех живых организмов, поэтому в
его основе лежат некоторые механизмы стереотипного характера,
определяющие неспецифическую сопротивляемость к внешним условитт. Это положение наиболее отчетливо и перспективно отражено
в учении Г.Селье о стрессе, как результате взаимодействия пов­
реждения и защиты.
Симптомокомплекс стресса назван "общим адаптационным синдро­
мом" (ОАС), который рассматривается как защитная неспецифичес­
кая реакция организма (Г.Селье, I96I). Этот синдром включает
последовательно стадии тревоги, резистентности и истощения. Мо­
билизация защитных сил организма в период стадии тревоги и опре­
деляет состояние повышенной сопротивляемости организма (стадию
резистентности).
Однако термин "стресс" не является универсальным и, в част­
ности, не применим к такюл патологическим процессам как инфек­
ция, авитаминозы, вирусные инфекции и др., поскольку в патоге­
незе их система гипофиз-надпочечники хотя и участвует, но не
определяет основных закономерностей развития болезни (А.Адо,
1974). При оценке же уровня резистентности по Г.Селье опреде­
ляется состояние желез внутренней секреции, количество эозинофиллов, лимфоцитов в крови, индекс креатинина в моче, реакция
на АКТГ и др.
Ведущим фактором повышения сопротивляемости организма к
экстремальньм условиям среды является перестройка клеточного
метаболизма, регуляторами которого, как известно, являются фер­
менты. Усиление ферментативного аппарата клетки закономерно мо­
билизует защитные силы организма.
М.А.Розин (1967), рассматривая вопрос о возможности усиления
адаптационного синдрома под влиянием лекарственных средств,
считает, что "действующим препарат может быть в том случае,
если под его влиянием индуцируется белковый синтез".
Известно, что одним из элементов, формирующих устойчивость
клеток, является их способность репарировать повреждения. В
обеспечении репарационного процесса существенная роль также при­
надлежит синтезу белка (Д.Н.Насонов, 1959). Факты, подкрепляю­
щие это предположение, получены на растительных и животных клет­
ках ( E.Mothes
, 1947; М.Ш.Мережинский, 1961; А.Г.Швецкий,
Л.М.Воробьева, 1978).
Белковый синтез, процесс, требующий большой затраты энергии
и притока пластических масс, определяет неспецифический xapai{тер адаптационного синдрома, что Р.Н.Ахмеров, Н.М.Кондрашова
(1976) связывают с неспецифическими биоэнергетическши процесса­
ми: "Биоэнергетика и есть то главное неспецифическое средство,
14
которое природа вложила во всякое живое существо".
Адаптация организма определяется тем, в какой мере живая си­
стема в изменившихся условиях как внутренней, так и внешней
среды способна сохранить гомеостаз (стационарное состояние) и
обеспечить его стабильность во времени.
Устойчивая адаптация, по мнению Меерсона Ш.З. (1973), разви­
вается последовательно. Первичным сигналом, активизирзгющим ге­
нетический аппарат клетки, является дефицит макроэргов и увели­
чение потенциала фосфорилирования. В дальнейшем формируются
структзфные изменения, обеспечивающие увеличение мощности си­
стем транспорта, утилизации кислорода и ресинтеза АТФ.
В определенной мере изучены основные факторы, играющие роль
в преодолении стрессовых нагрузок. К ним относятся метаболитные реакции митохондрий, активность сукцинатдегидрогеназы
(Н.М.Кондрашова, 1979), временное увеличение потребления кисло­
рода (Л.Проссер, Ш.Браун, 1967), причем, животные с более раз­
витой гликолитической системой имеют более высокие адаптацион­
ные способности (З.И.Барбашова, I960; А.Трифонова, 1958), уве­
личение выделения фенольных веществ в моче (10.А.Манятин,1972),
увеличение активности гиалуронидазы в крови (Б.Г.Колб, B.K.K}^та, Е.Ш.Конопля, I96I) и др.
Важнейшим параглетром гомеостаза, определяющим степень сопро­
тивляемости организма к условишя внешней среды, инфекционным и
различным повреждающим фактора]^,'!, являются мембраны и их основ­
ные структурные элементы - липопротеидные коьшлексы, по которым
происходит энергетический транспорт электронов.
Н.В.Лазарев (1958) высказал гипотезу о существовании в орга­
низме высших животных и человека когшлексных, неспецифических
защитных реакций, которые проявляются в очень разнообразных, но
содру51{ественных изменениях физиологических функций, а "полива-
15
лентность методов, повышающих сопротивляемость организма так
же, как разнообразные проявления этой резистентности (включая
инфекции и модели заболевания), не укла^дываются в понятие
"общего адаптационного синдрома Селье". Таким образом, в орга­
низме существуют центральные механизмы, регулирующие целый
комплекс защитных реакций, в которых признаки активации "систе­
мы Селье" являются частью возникающего более широкого синдро­
ма, названного Н.В.Лазаревым (1962, 1963) состоянием неспеци­
фически повьш1енной сопротивляемости - СНПС. Это состояние сле­
дует рассматривать как разновидность общего адаптационного син­
дрома, которая возникает при прерывистой адаптации к умеренным
раздражителшл, и обязательным признаком которой является повы­
шение резистентности не только к специфическому агенту, но и
к агентам другой природы (В.Я.Русин, 1978).
Сравнение общего адаптационного синдрома ОАС и СНПС показа­
ло, что при развитии СНПС отсутствует заметные изменения в желе­
зах внутренней секреции, что качественно отличает это состояние
от ОАС (Н.В.Лазарев, 1962).
Медицинская практика давно и широко пользуется неспецифичес к т ш средствами не только с лечебной целью, но и в качестве об­
щеукрепляющего фона, который обеспечивает наибольший эффект спе­
цифических средств (Г.Селье, 1961). Эти вещества были названы
адаптогенами (Н.В.Лазарев, 1961; М.А.Розин, 1966; И.И.Брехман,
1976), то есть вещества, повышающие способность организма адап­
тироваться к изменившимся условиям среды.
Наличие в организме механизмов, управляющих приспособительныьш реакцидаш, является физиологической основой неспецифических
профилактических факторов. Причем это не отдельные, частные ре­
акции, а обширные их комплексы, которые включают как тканевые,
так и гуморальные компоненты (Н.В.Лазарев, I960; П.Д.Горизон-
16
тов, 1973; Г.Н.Кассиль, 1975; З.В.Ермолаева, Г.Е.Вайсберг,197б;
Т.Г.Дичев, К.Е.Тарасов, 1976). Именно эти реакции и определяют
степень сопротивляемости к разнообразным повреждающим воздейст­
виям. К ним можно отнести утомление, гипоксию, охлаждение, пе­
регревание, действие токсических веществ и др.
Сопротивляемость организма к столь разнообразным неблагоприятньш фактораья связана не только с резистентностью на тка­
невом уровне, но и состоянием центральных нервных механизмов
регуляции приспособительных реакций (Н.В.Лазарев, I960; В.Н.Ива­
нова, I960; В.Я.Русин, С.С.Полтырев, 1976; В.Н.Костюченков,
В.S.Смычков, Н.Ш.Фаращук, 1982).
Таким образом, повьшение неспецифической сопротивляемости
организма сопроволодается отчетливо выраженными физиологическими
и биохимическими реакциями. Эти закономерности определяют воз­
можности объективно оценивать уровень активности новых профи­
лактических мероприятий для расширения адаптационных возможно­
стей организма.
На протяжении последних десятилетий профилактическая медици­
на и ветеринария приобретают все большее значение. Раньше внима­
ние исследователей, в первую очередь, было направлено на изыска­
ние методов и средств, которые могли специфически повышать со­
противляемость организма лишь по отношению к определенному пато­
генному агенту.
Несомненные успехи специфической терапии и профилактики инфек­
ционных заболеваний исключали другие пути и возможности воздей­
ствия на возникновение и течение инфекционного процесса. Тем
не менее, уменно
в области инфекционной патологии был выявлен
недостаток специфической профилактики.
Снижение эффективности антибиотикотерапии, увеличение хрони­
ческих форм воспаления явились основанием для поиска средств,
17
способных повысить реактивность организма. В связи с этим, воз­
растает интерес исследователей к неспецифическим лекарствен­
ным средствам. Значение этих средств усиливается известным по­
ложением, что только при повышении общей резистентности орга­
низма развивается и длительно сохраняется специфическая рези­
стентность.
При интенсификации животноводства и увеличении числа крупных
промьжленных колшлексов количество стрессовых факторов, воздей­
ствию которых подвергаются животные, возрастает.
Изучение факторов окружающей среды,отрицательно действующих
на здоровье животных, выявление наиболее опасных стрессов, кото­
рые снижают естественну[о резистентность, тшуно-биологическую
реактивность организма и способствуют заболеванию, определягот
разработку соответствующих профилактических мероприятий, что и
является одной из важных задач современной ветеринарно-зоотехнической науки.
Акад. А.А.Богомолец (I94I) отмечал, что инфекционные болезни
могут возникнуть только в результате нарушения нормальной реак­
тивности, ослабления защитных свойств организма, то есть сниже­
ния естественной резистентности.
Известно, что невосприимчивость организма (специфический имму­
нитет) лишь дополняет естественную резистентность. В основе мер
против заболеваний должна быть прежде всего их профилактика.
Укрепление здоровья животных, увеличение их продуктивности и
улучшение качества получаемой продукции невозможно без повыше­
ния их естественной устойчивости к воздействию неблагоприятных
факторов внешней среды.
Анализ фармакодинамики лекарственных веществ, наиболее полно
испытанных для целей повышения сопротивляемости организма - ди­
базол, витамины, элеутерококк, жень-шень и др. (И.И.Врехман,
18
Н.К.Фруентов, 1954; Е.Д.Корякина, 1967,), а также ммоголетний
практический опыт применения комплекса гормонов, малых доз анти­
биотиков, комплекса витаьшнов в ветеринарии и животноводстве,
свидетельствует о том, что эти препараты при повторных введе-ниях являются небезразличньщи для организма, так как обладают
побочным, нежелательным действием (Я.Б.Максимович, I97I).
К лекарственньм средствам, неспецифически повьшающим рези­
стентность организма, можно отнести препараты, приготовленные
по методу В.П.Филатова (экстракт алоэ, экстракт плаценты,взвесь
плаценты, пелоидодистиллат, ФиВС, торфот, биосед).
Метод тканевой терапии по В.П.Филатову заслуживает особого
внимания, так как обладает целым рядом преимуществ перед имею­
щимися для этой цели средствами.
Препараты этого метода практически не имеют побочных вредных
влияний на организм. Они приготовлены из натурального сырья,
не обладают кумулятивными и анафилактогенными свойствами, не вы­
зывают явления привыкания, аллергии, гистаминоподобного эффекта
и сенсибилизации к лекарственным препаратам, апирогенны, и не
снижают антитоксическую функцию печени (С.Р.Мучник, В.П.Соловье­
ва, Н.С.Шульгина, 1963; В.В.Скородинская, В.Н.Кефер, 1965 и др.).
Высокая эффективность лечебно-профилактического применения
тканевых препаратов, широкий диапазон их фармакодинамики обус­
ловлен, главнытл образом, особенностью и сложностью их химическо­
го состава (коьшлекс органических кислот, витаминов, ьшкроэлементов и др.), что и определяет их мощный потенциал повышения
неспецифической резистентности организма.
Тканевые препараты активируют физиологические процессы (осо­
бенно при снижении функции), нормализуют обмен веществ, повы­
шают регенераторные и иммунологические свойства, активируют ком­
пенсаторные механизьш, резистентность тканей к вредным воздейст-
19
ВИЯМ и общую сопротивляемость организма, вызывая состояние не­
специфически повышенной сопротивляемости организма по Н.В.Ла­
зареву (Н.А.Пучковская, 1975).
Многолетние клинические наблюдения и экспериментальные иссле­
дования ученых различных областей знаний (медицина, биология,
ветеринария, животноводство) позволили открыть ведущие механиз­
мы фармако-физиологических свойств тканевой терапии как метода
естественной активации функций организма. Установлено, что со­
противляемость организма инфекции при введении тканевых препа­
ратов не имеет специфической направленности к определенному виду
микробов, а основана на общебиологических и физиологических за­
кономерностях (Д.С.Щастный, 1962').
Известно, что тканевые препараты являются не только стимуля­
торами, но и адаптогенами. Они способствуют нормализации фермен­
тативной деятельности при патологии, оптимизируя функциональную
деятельность организма за счет повышения общей реактивности
организма, нормализации функции кроветворной системы, пищеваре­
ния, воспроизводительной функции и т.д.
По концепции В.П.Филатова биологически активные вещества об­
разуются всюду, где идет "борьба за жизнь". Одним из богатей­
ших источников таких веществ наряду с морской водой, лиманной
грязью является торф,
Уже в течение ряда десятилетий в лечебной медицине Советско­
го Союза и зарубежных стран широко используется инъекционный пре­
парат из торфа, разработанный Одесским НИИ глазных болезней и
тканевой терапии им. акад.В.П.Филатова. Торфот содержит комп­
лекс летучих биологически активньк веществ торфа и применяется
не только с лечебной целью, но и профилактически для повышения
неспецифической резистентности организма,
Исследования по использованию торфа в лечебной медицине и ве-
20
теринарии, как источника ценнейших биологически активных сое­
динений, являются актуальными и перспективными. Среди этих
соединений задача изучения комплекса гуминовых кислот торфа и
создание из него лекарственной формы имеет первостепенное зна­
чение.
1.2. Торф как источник биологически активных веществ,
его применение в медицине и ветеринарии
Торф является мощньм источником физиологически активных ве­
ществ, хотя они полностью не идентифицированы и малоизучены.
Природа их неоднозначна. Биологически активные вещества могли
содержаться в растениях - торфообразователях, или появиться в
ходе торфообразования биохиглическим путем. Установлено, что в
составе торфообразователей содерлштся много различных глюкозидов, алколоидов, сапонинов, дубильных веществ, эфирных масел и
других физиологически активных соединений (С.С.Драгунов, Л.Н.По­
пова, 1968). Учитывая, что в процессе торфообразования активное
участие принимают низшие грибы, актиномицеты и бактерии, то к
вышеперечисленным веществам следует добавить еще различные анти­
биотики, ферменты, витшшны и другие биологические соединения,
продуцируемые ьвдкроорганизмами (Г.В.Наумова, I98I).
Гуминовые кислоты, входящие в состав органического вещества
торфа, играют огромную роль в сохранении биологических веществ
Б залежи (А.Ш.Драгунова, С.С.Драгунов, 1962). Благодаря своему
химическоглу строению они вступают во взаиьгодействие с такими
биологически активными веществами как холин, парааминобензойная кислота, тиамин. Такие соединения как биотин, рибофлавин,
пантотеновая кислота, никотинамид - сорбируются гуминовой кисло­
той.
21
Торф, как источник биологически активных веществ, оказы­
вает благоприятное действие на живые организмы.
Терапия торфом эг.ширически получила значительное распростра­
нение еще в XIX веке. Регулярное же бальнеологическое исследо­
вание торфа в естественно-назд1ной и медицинской области нача­
лось только в начале XX века (Н.А.Якубов, 1948). Торф успешно
применяется в бальнеологии и в настоящее время. Его применение
улучшает различные нейрорегуляторные функции, увеличивает адап­
тационные свойства, стиь1улирует компенсаторные механизмы орга­
низма.
К.Е.Кветин (1963) считает, что качество торфяной ванны зави­
сит от содержания гуминовых кислот. Гуминовые кислоты представ­
ляют собой сильно набухшие гели и придают полутвердую пласти­
ческую консистенцию торфяной ванне, при этом используются их
сорбционние, бактериостатические и вяжущие свойства.
Одним из ведущих показаний применения торфяньк ванн являют­
ся ревматические заболевания, что основано на способности тор­
фа снижать активность гиалуронидазы. Торфяные ванны противодей­
ствуют патологическим изменениям соединительной ткани, сустав­
ных оболочек и суставной жидкости, обусловленных чаще всего по­
вышенной активностью гиалзфонидазы тканей (К.Е.Квентин, 1963;
В.В.Апостолгок, К.А.Апостолюк, 1966).
Органические коллоиды торфа, его бактерицидные свойства, спо­
собность адсорбировать микрофлору и различные вредные химичес­
кие соединения являются ва^шыми лечебными факторами в борьбе с
болезнетворными организмами, особенно при гнойных хронических
процессах.
В бальнеологических лечебницах Австрии, Венгрии, ГДР при бо­
лее чем 70 заболеваниях используют торфяные ванны, аппликации,
пасты и торфяную воду. Это, в основном, заболевания желудочно-
22
кишечного тракта, ревматизм, заболевания нервной системы, орга­
нов движения, кожные заболевания (Н.Я.Якубов, I94S; В.И.Чистя­
ков, Л.М.Кузнецова, 1976; С.Дамзе, А.Горнок, Я.Янковяк, А.Кар­
ский, 1963).
Широко использовались в медицине и адсорбционные свойства
торфа. Из торфа изготовлялся перевязочный материал (д-р Редон,
I9I7; Губарев, I9I7) и была попытка использовать его в качест­
ве сорбента при желудочно-кишечных заболеваниях (С.Е.Буркат,
1962).
В 1948 году Г.Л.Вайсман и Л.Д,Лейденская (1948) предложили
препарат из торфа "Торфален" в виде порошка. "Торфален" приме­
нялся при поносах, колитах, при острых кишечных растрействах,
однако, препарат не полз^ил широкого распространения в медицине.
Обнаружено пололштельное действие фракций, выделенных из тор­
фа, при лечении бронхиальной астмы, гипертонии, а также установ­
лено их защитное действие при ионизирующем облучении (H.Wrobel ,
C.Jasiak
, I97S; И.П.Межулис, 1966).
Препарат торфот (отгон торфа) единственный инъекционный пре­
парат из торфа, применяемый в медицине. В препарате сконцентри­
рованы биологически активные вещества, которые способны перего­
няться из торфа с водныгл паром. В состав торфота входят органи­
ческие кислоты - уксусная, пропионовая и масляная, содержание
которых составляет около 2% по отношению к общему количеству
кислот, а также высшие кислоты жирного ряда - лауриновая, миристиновая, миристолеиновая, пальмитиновая, пальмитоолеиновая,
стеариновая, олеиновая, линолевая, трипептагептадекановая. В
виде следов най,цены капроновая, каприновая и эйкозановая. Кро­
ме того, анализ показал, что в торфоте имеется значительное ко­
личество ароматических и оксикислот, не принадлежащих к ряду
насыщенных или непредельных алифатических. Хроматографией уста-
23
новлено наличие в торфоте также четырех первичных аминов
(О.С.Степанова и др., 1972).
Исследования В.П.Соловьевой и соавт. (1972,1973) показали
высокую биологическую активность торфота при испытании его на
антитоксических тестах, при введении отравляющих доз стрихнина
и строфантина. Торфот стимулирует также фагоцитарную актив­
ность лейкоцитов.
В условиях острого рентгеновского и острого гамма-облучения
профилактическое введение торфота приводит к продлению средней
продолжительности жизни и увеличению процента выживаемости
(Т.Пантев и др., 1978; Й.Николов и др., 1979).
Свойство торфота повышать резистентность организма связано,
главным образом, с влиянием его на ферментные системы, лейкопоэз и общую тлмунзгю реактивность (В.П.Соловьева, Л.С.Жолнерович, О.С.Степанова и др., 1973). Этот препарат обладает вы­
раженной способностью активировать регенераторные свойства орга­
низма, улучшать его обменные процессы и этим способствовать нор­
мализации нарушенных функций.
Впервые отгон торфа был применен в клинике глазных болезней
В.П.Филатовым и Т.П.Филипповой (I95I) в виде подкожных инъек­
ций. А.П.Кулеш (1956, 1977) применил отгон торфа при помутнении
роговицы. Об успешном применении торфота и более глубоком изз^чении сообщают в своих работах Н.А.Пучковская, Д.Г.Бушмич, В.М.Не­
помнящая, Я.С.Голацка (1968), Д.Г.Бушмич и Я.С.Голацка (1972),
В.В.Новрузова, С.Г.Усейнова (1973), Т.У.Горгиладзе и Я.С.Голац­
ка (1977), А.И.Кравченко (1977), Т.У.Горгиладзе (1983) и др.
Разработанные указанными авторами схеьш лечения поь^утнений рого­
вицы торфотом привели к значительноь/гу снижению числа больных
с Рубцовыми бельмами.
24
Торфот с успехом применяется при лечении заболеваний нервной
системы (Ю.Л.Курако, 1972, 1977; Ю.Л.Курако, В.Е.Волянский,
1972; Л.С.Маринова, 1977), в гинекологической практике (В.А.Шилейко, А.А.Зелинский, 1972, 1977; А.А.Зелинский, 1983), а также
для повышения неспецифической резистентности организма к различ­
ным неблагоприятным факторам (В.П.Буйко, Т.М.Якименко,1984;
М.И.Тараненко, 1984; P.M.Цок, Е.Д.Билык, 1977; Ю.Л.Курако, В.Е.
Волянский, 1983; В.П.Филатов, Т.П.Филиппова, 1953; Н.И.Шпак,
1983; А.А.Зелинский, 1983 и др.).
Препарат торфот, выпускаемый Одесским ПХШО им.бО-летия СССР,
экспортируется в 19 стран мира.
В Белорусском институте торфа был проведен отбор потенциаль­
но активных противоопухолевых препаратов, выделенных из торфа.
Особое внимание привлекла суммарная фракция, содержащая полиса­
хариды и гуминоподобные вещества, которая оказалась малотоксич­
ной по сравнению с противоопухолевым препаратом циклофосфаном.
Высокая активность вьщеленной суммарной фракции в эксперименте
дает возможность ее авторам рекомендовать полученный препарат
для дальнейших исследований (И.И.Лиштван, К.А.Глебова и др.,1981;
Г.В.Наумова, Л.В.Косоногова и др., 1983).
К настоящему времени накопилось достаточно данных, устанавли­
вающих присутствие в лечебньк торфах органических веществ, обла­
дающих весьма своеобразным биологическим действием на организм.
Одним из приемов, позволя[ощих перевести торф в биологически ак­
тивную форму, является окисление. Всесоюзный НИИ торфяной проглышленности (ЕНИИТП) разработал способ окисления торфа воздухом
под давлением при повышенных температурах в водной и водно-ще­
лочной средах. Препараты, приготовленные по этой технологии,
являются хорошей питательной средой для синтеза белковых дрожжей
и способны повышать продуктивность молодняка крупного рогатого
25
/
скота на 15-30^ при пероральном применении в дозе I г на 100 кг
живой массы (E.cB.IvIaHKOBa, 1980, 1983).
Э.КЕостер (Ирлавдия), изучая влияние экстрактов из торфа на
рост и метаболизм некоторых микроорганизмов, установил также и
повышение образования антибиотиков.
С. Толпа и
В.Чижевский (ПНР) изучают различные фракции
торфа как стимуляторы роста телят и как средства для лечения
раковых заболеваний.
Среди физиологически активных веществ торфа особый интерес
представляет ко^лплекс гуминовых кислот, составляющий 30-50^ мас­
сы торфа.
1.3. Характеристика гуминовых кислот
Гут.шновые кислоты определяют обычно как окрашенные вещества
от светло-желтого до темно-коричневого цвета, растворимые в ще­
лочах и вновь выпадающие в осадок из щелочного раствора при
подкислении его; именно растворимость в щелочах считается обя­
зательным, наиболее характерным свойством гуминовых кислот
(С.С.Драгунов, 1962).
И.М.Курбатов (1962), Д.С.Орлов (1970, 1974, 1983); И.Д.Комис­
саров, , Л.Ф.Логинов (I98I), собственно к гуминовым кислотам отно­
сят Л1Ш1Ь те темноокрашенные природные тела, которые характери­
зуются относительно высокой термодинаьшческой и биохимической
устойчивостью, незвисимостью свойств при сравнительно небольших
изменениях состава.
Гуглиновые вещества - самые распространенные вещества в приро­
де. Количество углерода, связанного в гуминовых даслотах почв,
торфа и углей, примерно в 4 раза превосходит количество углеро­
да, связанного в органическом веществе всех растений и животных
на всем земном шаре (С.С.Драгзшов, 1975).
26
Существзпот различные мнения в терминологии определения гуглиновых кислот. Еще прошлые исследования во главе с Мульдаром
различали в торфах более активную растворимую в щелочах часть
и индиферентный осадок, нерастворимый в щелочах- s.Oden (1922)
и С.А.Ваксман (1937) предложили метод выделения отдельных фрак­
ций органического вещества торфа, основанный на растворимости
их в различных растворителях: фульвокислоты (растворимые в во­
де), гиматомелановые (растворимые в спирте), гумусовые кислоты
(раствориьше в щелочах) и гу]\'гусовый остаток (не растворимьзй в
воде, спирте, щелочах).
Гуминовые кислоты могут быть также разделены на фракции, раз­
личающиеся по молекулярным массам (Д.С.Орлов, Е.И.Горшков,1965;
Л.Н.Попова, 1969; Д.С.Орлов и др.,I97I, w.Forsytli
, 1947;
С.С.Драгунов, Л.Н.Попова, 1969; В.А.Реутов, Р.Н.Кравченко,1973).
И.И.Лиштван (1976), детализируя терминологию на современном
этапе, заключает, что употребление почвоведами термина "гуму­
совые кислоты" объединяет такие соединения, как гуминовые, ги­
матомелановые и фульвокислоты. Имея в виду идентичность процес­
са их экстрагирования, этот класс соединений рационально назы­
вать гуминовыми кислотами.
Биохимическая природа гумусообразования была установлена с
полной определенностью П.А.Костычевым в I889-I890 гг. Еще А.Г.
Трусов (I9I7) предполагал, что в процессе окисления полифенолы,
входящие Б состав макромолекулы лигнина, частично дают хиноидные
группировки, что вызывает потеьлнение разлагаемого материала. Ра­
створяясь в щелочах и осшэдаясь кислотатж, эти вещества ведут
себя сходно с гуг.шновыми.
Объединяющим признаком рассматриваемых веществ, по С.С.Драгунову, является их образование при гумификации, т.е. в результа­
те процесса, при котором органическое вещество известной струк-
27
туры превращается в вещество другой структуры, приобретая спо­
собность лучше противостоять воздействию химических и биологи­
ческих агентов.
В своих капитальных трудах М.М.Кононова (I95I, 1963) разви­
вает идею о том, что гуглиновые кислоты образуются из продуктов
конденсации полифенолов и аминокислот. Процесс гумификации со­
стоит из двух категорий явлений: I) разложение сложных органи­
ческих соединений до более простых продуктов распада; 2) синтез
из этих продуктов распада высокомолекулярных гy^линoвыx веществ.
Близкую к точке зрения М.М.Кононовой на процессы образования
гуминовых кислот высказывает и w.Flaig
(1974,(1980).
Поверхностный аэрируемый слой торфяной залежи, названной И.М.
Курбатовьпл торфогенньм (1949, 1962), является основным слоем,
в котором накапливаются лигнокислоты - наиболее вероятные пред­
шественники главной массы торфяного гуглуса.
В дальнейшем они конденсирз^тся с белками и продуктагли их
неполного распада (И.М.Курбатов, Е.И.Двойнишникова, В.Ш.Курба­
това, 1959).
Профессор С.С.Драгунов, являющийся одним из ведущих специалис­
тов в области хтши
гумусовых кислот, подчеркивает, что гуьлино-
вые кислоты и в почвах и в торфах находятся в динамическом состоя­
нии синтеза и разрзш1ения за счет микробиологической деятельности.
Ашнокислоты, углеводы, ферменты и другие метаболиты, выделяемые
микроорганизмагли, могут быть химически связанными с гуминовыми
кислотатли. Это создает определенные трудности при изучении их
хикшческого состава. И всетаки, несмотря на это, рассматриваеглые
вещества имеют настолько много общего, что это позволяет выде­
лить их в определенный класс соединений (С.С.Драгунов, 1962).
Все вышеизложенное налладывает определенный отпечаток на от­
дельные показатели, характеризующие свойства гуглиновых кислот,
28
но, несмотря на это, все они, независимо от происхождения,
имеют "общий облик" (М.М.Кононова, 1963).
По строению молекулы гуминовые кислоты являготся гетерополикоцценсатагли, а с точки зрения содержания функциональных групп
они представляют собой оксикарбоновые кислоты (С.G.Драгунов,
1962).
В таблице I.3.I приводятся данные, характеризующие элемен­
тарный состав и функциональные группы торфяных гуминовых кис­
лот.
Таблица 1.3.I
Элементарный состав и количество функциональных групп
торфяных гуглиновых кислот (С.С.Драгунов, 1962)
Элемент или
функциональная
группа
:
:
на органическое вещество, %
•
от
•
до
0
51,76
63,11
0
29,50
41,00
Н
4,27
5,70
IT
1,08
3,72
S
-
1,92
В мг/экв. на I г органического вещества
оон^
соон
0,49
4,28
1,81
3,57
фенольные
4,13
6,18
гидроксилы
Наиболее спорньм является вопрос о молекулярных массах гуми­
новых кислот (Д.С.Орлов и др., 1983).
С.С.Драгунов и др. (1948) на основании своих работ и, учиты­
вая данные экcпepиIvIeнтaльнoгo анализа почвенных и торфяных кис-
29
лот, количество функциональных групп, величину средней молеку­
лярной массы и некоторые другие показатели, предложим вероят­
ную схему этих кислот. Она показывает, что центральное ядро
молекулы представлено циклическими структурами, а боковые цепи
имеют алифатический характер. Что касается азота, то, по С.С.
Драгунову, он может входить как в центральное ядро, так и нахо­
диться в боковых цепях в виде дериватов аглинокислот.
Структурные форглулы гуминовых кислот были предложены также
G.Felbeck
(1965), W.Plaig
(1967,1975), В.Е.Раковским
(1954, 1967), Н.Д.Комиссаровым и Л.Ш.Логиновьм (1967, 197]),
Д.С.Орловьм с соавт. (I97I).
Характерными особенностягли формулы Д.С.Орлова является то,
что 1.шнимальная молекулярная масса структзфной ячейки состав­
ляет около 1500 ед. при 4-х атомах азота. Гуг.адновая кислота мо­
жет иметь вытянутую форму, что позволяет легче представить воз­
можные пути ее проникновения в живую клетку.
При деструкции гуминовой кислоты кислотным гидролизом в гидролизате обнаружено от 10 до 15 аминокислот (С.С.Драгунов,1962;
Ш.Жоробекова, А.Бугубаев, 1969; Ш.Ж.Жоробекова, 1970; Е.С.Лукошко, Н.С.Яновская, 1975). При гидролизе от основной части мо­
лекулы отрываются также алифатические группировки в виде угле­
водов, .
Кроме того, в составе гу1\вдновой кислоты обнарузкен целый ряд
микроэлементов, связанных с молекулой гуминовой кислоты внутрикомплексными реакциями (Т.В.Дроздова, М.П.Емельянова, I960; М.М.
Кононова, I96I; Д.Ж.Бериня, 1975 и др.).
В литературе имеются указания, что гуминовые кислоты способны
выполнять электронно-акцепторные функции (С.С.Драгунов, Ю.Л.Шульман, Л.Н.Попова, 1968; W.Ziechmaim
Епишина, 1980).
,1976; Л.Ш.Бобырь, Л.А.
30
Итальянский исследователь v.Hernando
(1968) физиологи­
ческое действие гуминовых кислот объясняет наличием в их хими­
ческой природе двух начал. Первое - это хиноидные и полифенольные группы, входящие в состав молекулы гуминовых кислот, кото­
рые активизирз^т реакцию оксвдоредукции и перенос
Н2 и О2 и
второе - это наличие в молекуле гуминовой кислоты второй части,
образованной белками и другими химическиьш группами, по его
мнению, обладающими энзиматическими свойствами.
По мнению И.И.Лиштвана (1976) гуминовые кислоты, экстрагиро­
ванные из торфа с физико-химической точки зрения следует рас­
сматривать как "термодинамические, неравновесные, высокомоле­
кулярные системы типа полиэлектролитов".
Очень важным показателем, с точки зрения биологической актив­
ности, является растворимость гуглиновых кислот. Ддя растворения
гуминовой кислоты необходима нейтрализация не менее 39^ ее кар­
боксильных групп (С.С.Драгунов, 1975).
Б общем виде процесс извлечения гуминовых кислот из торфа
целесообразно рассматривать состоящим из двух стадий: I) расщеп­
ление связей гуминовых кислот с "материнских" веществом сырья
и примесями и 2) растворение гуминовых кислот. При техническом
осуществлении этой задачи возможна одностадийная технология.
В настоящее время наиболее часто применяются водные растворы
гидроокисей натрия и калия (Т.А.Кухаренко, I960) и лишь иногда
растворы карбонатов этих металлов (Ш.Н.Шарков,1971).
Но раствор едкого натра извлекает в 1,5-2,5 раза больше гуми­
новых кислот, чем раствор соды.
Известны многократные попытки применения органических раство­
рителей для выделения и углубленного изучения этой категории ве-
31
ществ (А.А.Шмук, 1923; Л.Ш.Драгунова, 1956; Т.А.Кухаренко,1960;
О.Б.Максимов, Т.В.Швец, 1968), но таким путем удавалось лишь
фракционировать гуминовые препараты.
Для удаления минеральных примесей из гуминовых препаратов
применяется обработка их растворами соляной кислоты (Комисса­
ров И.Д., Стрельцова И.Н., I97I).
Наибольший процент извлечения гуминовых кислот из сырья до­
стигается при температуре 100^ (И.Д.Комиссаров, О.И.Федченко,
И.И.Виленский, I97I).
Растворимость гуминовых кислот в щелочных реагентах обуслов­
лена образованием легкодиссоциируемых
солей. Константа диссо­
циации гутлиновых кислот чаще всего приводится на основании потенциометрического титрования и варьирует в пределах 3,1x10" 6,3x10"^ (С.С.Драгунов, 1975).
Весьма важной характеристикой гуминовых кислот является их
изоэлектрическая точка (ИЭТ), т.е. величина
рн
, при которой
с;у'ммарный заряд макромолекулы равен нулю. Удаление от ИЭТ ока­
зывает существенное влияние на характер ионизации. Степень иони­
зации может быть повышена превращением поликислоты в соль при
обработке щелочагли. При растворении гуминовых кислот в низко­
молекулярных жидкостях можно получить истинные растворы.
Ввиду больших размеров молекул диффузия их очень мала. Поэтому процесс растворения протекает длительно и в основном опреде­
ляется проникновением растворителя в сферические молекулы гуми­
новых кислот.
Принципиально важное значение имело обнаружение одного из
фзшдаментальных свойств у гуминовых кислот явлений электронного
параь^агнитного резонанса. Содерттние парамагнитных центров в гугшновых кислотах зависит от типа сырья и способа их получения.
Парамагнетизм гуг.шновых кислот связывают с наличием делока-
32
лизованных электоров в составе свободных радикалш семихинонного
типа (Д.С.Комиссаров, 1967; Т.А.Кухаренко, Л.Е.Екатеринина,1967;
Л.Ф.Логинов, I97I).
Установлено, что гуминовые кислоты, характеризующиеся повы­
шенной концентрацией П Щ (парамагнитных центров), содержащих
неспаренные электроны,одновременно отличаются высокой реакцион­
ной способностью, активно вступают в различные биохимические
процессы и приобретают способность стиглулировать рост и разви­
тие растений (И.Д.Комиссаров, 1970; С.А.Алиев, 1979).
Параглагнитные свойства гу^шновых кислот связаны со своеобразньт^ перераспределением электоронной плотности в молекулярных
j^
орбиталиях и это является одной из характерных особенностей гуминовых кислот.
ИК - спектроскопия - один из немногих методов, который может
дать богатую информацию не только о наборе важнейших ато^,шых
групп и типов связей, но и конкретном расположении отдельных
групп. Однако данные по ИК-спектрам гуминовых веществ противо­
речивы. Это обусловлено тем, что гумусовые вещества имеют ряд
особенностей, затрудняющих расшифровку их спектров. Они содер­
жат большой набор разнообразньк атомарных группировок, поглощаю­
щих близкие участки света. На характер света оказывают влияние
способ выделения и приготовления препаратов, зольные элементы,
а тагоке абсорбционная вода.
Р.А.Хмельницкий считает, что наиболее информативным в настоя­
щее время является метод пиролитической масс-спектрометрии, со­
четающий термическз^ деструкцию с масс-спектральным анализом.
Продукты термической деструкции гумусовых соединений представ­
ляют собой настолько сложную многокомпонентную смесь, что доста­
точно корректный анализ ее может осуществляться лишь на уровне
установления структурно-группевого состава. Анализ масс-спектров
33
показал, что общая структура гумусовых кислот характеризуется
системой кислород- и азот-содержащих ароматических (не более
3-х бензольных ядер) и гетероциклических соединений, связанных
мостикагли, которые состоят из ациклических и алициклических кис­
лород- и азот-содержащих фрагментов. Относительная масса этих
мостиковых структур выше ароматических когшонентов (Р.А.Хмель­
ницкий, I98I ; Р.А.Хмельницкий, И.М.Лукашенко, В.А.Черников,
Я.Я.Крымский, 1983; Р.А.Хмельницкий, А.Ю.Томащук, 1983; Я.А.Боме,
И.Д.Комиссаров, 1983; Г.Г.Гутиев, И.М.Лукашенко, Р.А.Хмельниц­
кий, 1983).
Д.С.Орловым с соавт. (1983) было предложено осуществлять иден­
тификацию и классификацию гуминовых кислот по совокупности ряда
признаков, включающих: элементный состав, наличие негидролизуемого азота, содержание бензолполикарбоновых кислот в продуктах
окисления щелочным перманганатом и специфические параметры элект­
ронных и инфракрасных спектров поглощения.
Таким образом, гуминовая кислота - это особая категория при­
родных высокомолекулярных, ^шогофункциональных соединений с вы­
соким уровнем сопряжения, имеющих определенные качественные раз­
личия в структуре и свойствах, но обладающие общими принципами
строения молекул (И.Д.Коглиссаров, I98I). Именно все эти особен­
ности структзфы и определяют разносторонние свойства и высокую
физиологическую активность веществ гуминовой природы.
1.4. Шизиологичеекая активность и вопросы механизма
действия гуминовых кислот
Многочисленные данные литературы свидетельствуют о высокой
биологической активности гуминовых кислот, которая впервые бы­
ла обнаружена на растениях и микроорганизмах. Активность гуми­
новых кислот зависит, прежде всего, от их растворимости, что в
34
свою очередь, связано с концентрацией растворителя и валентно­
стью катионов, с которыми они образуют соли. Наиболее активны,
с этой точки зрения, гуматы одновалентных металлов.
В настоящее время известно, что не только этот признак опре­
деляет физиологическзш активность гуминовых кислот. При извле­
чении гумусовых веществ щелочными растворагли из почв, торфов,
углей должен иметь место и процесс деструкции, который был выяв­
лен в эксперименте по фотохимической деструкции гуминовых кислот
(Н.П.Ильин, Г.И.Глебова, Д.С.Орлов, 1973). При этом в ходе при­
готовления гуминовых препаратов наблюдается активация гумусовых
веществ, которая включает изменение конфигурации их молекул.
Происходит высвобождение функциональных групп, частичный распад
наиболее высокомолекулярных фракций на составляющие фрагменты
с меньшей молекулярной массой, частичное окисление с накопле­
нием карбонильных (возможно, хинонных) групп и увеличение кон­
центрации парамагнитных центров. Это приводит к более высокой
физиологической активности получаемых препаратов по сравнению с
исходным веществом. О влиянии способа экстракции на уровень физио­
логической активности указано и в работе
V.Hernando
, B.O.Ortego
O.Fortum Garcia
,
(1976).
Установлено, что фракции гуминовых кислот, полученные разными
способами, отличаются между собой по ряду химических характери­
стик и уровню биологической активности (С.С.Драгунов, Л.И.Попо­
ва, 1968; В.А.Реутов, Р.Н.Кравченко, 1973; st.Tolpa
,1974).
Особенно наглядно проявление биологической эффективности гуми­
новых кислот выражено в ответных реакциях растительных организ­
мов, в первую очередь, при измененном уровне глинерального пита­
ния, что для растительных объектов следует рассматривать как
стрессовую ситуацию.
35
Отечественные з^еные начали заниматься этим вопросом еще в
конце 40-х начале 50-х годов (Л.А.Христева, 1947; Л.А.Христева, 1956). Было показано, что физиологически активные формы гуминовых кислот способствуют более полному использованию мине­
ральной пищи, и в особенности тогда, когда условия глинерального
питания отклонены от нормы. Эффективность гуминовых кислот была
особенно заметной на фоне избытка азота и при недостатке фосфо­
ра. Это подтвернздается и в более поздних работах (A.M.Галушка,
А.Я.Безкровная, 1975).
Представляют интерес в этом плане исследования E.Chaminade
(1968). Внесение гуминовых веществ при увеличении дозы фосфора
и особенно азота значительно повышает "потолок" их действия.
В этих опытах было также четко показано положительное влияние
гуминовых веществ на усвоение минеральных питательных элементов.
Защитная роль гумата натрия установлена С.Гуглинский (1968),
С.Гуминский, З.Гy^шнcкaя (I97I) при высоких концентрациях пита­
тельного раствора. Имеются работы, свидетельствующие о снятии
токсикоза у растений, вызванного засолением среды корневого пи­
тания ( V.Hernando
^ 1968) и в случае неблагоприятной для
растения реакции среды ( S.Guminski
^ 1953).
С.Гуминский (I97I) вполне обоснованно определяет закономер­
ность - чем более выра^сено отклонение реакции среды от оптималь­
ной для данного растения, тем заметнее эффект физиологического
действия гумата (имеется в виду отклонение, которое не приводит
к гибели растение).
Иод влиянием гумата натрия повьшается сопротивляемость расте­
ний к токсическому воздействию
M.Badurowa
де ( S.Guminski
Нансо^
( s.Gmninski
,
, 1965), при недостатке кислорода в корневой сре­
, Z.Guminska
, 1953; Л.А.Христева, 1962),
36
при некотором снижении влажности почвы (Л.А.Христева, 1968) и
относительной влажности воздуха (М.М.Кононова, К.В.Дьяконова,I960),
%зиологически активный гумат натрия повышает и жароустойчивость
растений (Л.А.Христева,1962),однако в тех случаях,когда температу­
ра среды была ниже уровня,нужного для ферментативных процессов,
гуматы не давали должного эффекта (В.Г.Котлюба, В.А.Реутов,1962),
Немаловажное значение имеют работы по изз^ениго роли физиоло­
гически активных веществ гумусовой природы для восстановления
растений, пораженных пестицидами. Так, было установлено, что сте­
пень ингибирзшщего действия определенных концентраций гранозана
(не превышающих сублетальных доз) снижается на порядок, если он
дается на фоне гумата натрия (А.Г.Азанов, Л.К.Ткаченко, Т.В.Шилиппова, Т.А.Лукьянова, 1973).
Л.А.Христева, А.Т.Азанов и др. (1973) показали снятие гуматом
натрия поражающего действия инсектофунгицидов в онтогенезе. Кон­
центрация ядов
(фталана и гексахлорана) в растениях значительно
снижается.
Аналогичный эффект получен и при добавлении гумата натрия в
раствор инсектофунгицидов для опрыскивания плодов яблонь, при
этом достоверно повышается урожай (Л.П.Сторчай и др.,1977;
Л.П.Сторчай, 1980).
На основании многолетних фзшдаментальных исследований Л.А.Хри­
стева (1973) делает принципиальный вывод, что физиологически
активные вещества гуминовой природы стимулируют сопротивляемость
растений не к каким-то определенным избирательным фактора^/! внеш­
ней среды, а повьш1агат их общую резистентность. Или другими сло­
вами - эти вещества вызывают состояние, неспецифически повьшенной общей сопротивляемости растительного организма.
Особый интерес представляют данные литературы по изучению влия­
ния комплекса гуминовых кислот торфа на организм теплокровньк и
37
хладокровньк животных, а также на простеШие и дрожжевые клетки.
Впервые, потенциальные возможности гуглиновых кислот торфа как
сттлуляторов резистентности животного организма были эксперимен­
тально выявлены в Одесском НИИ им. акад.В.П.Щялатова. Так, иссле­
дования В.А.Бибер, Н.С.Боголюбовой (1951,1952) показали, что гуivMHOBHe кислоты, выделенные из торфа, обладают высокой биологи­
ческой активностью. В опытах на растительных и животных объектах
установлена их способность стимулировать регенераторные процес­
сы.
Гумат натрия оказывает стимулирующее влияние на рост клеточ­
ных популяций фибробластов хомяков, на процессы разуножение дрож­
жевых клеток и накопления их биомассы (А.И.Горовая, Н.М.Гранов­
ский, и др., 1977; Л.Р.Пивоваров, И.И.Ярчук, 1968).
Н.М.Грановский с соавторами (1975) наблюдали защитное дейст­
вие предварительного введения гумата натрия в условиях лучевого
пора71сения на экспериментальных животных по показателям выживае­
мости и исходу болезни.
В эксперименте апробирована роль гумата натрия при отравлении
иона^ш ттшлых металлов, а также фтором ( H.Knauf
M.Kuhnert
» V.Fuchs »
, I98I). Гуматы натрия при токсикозах свинцом, оло­
вом, кадмием выступают в роли комплексообразователей с металлагли
и способствзпот выведению их из организма экспериментальных живот­
ных, образуя с металлами полимеризаты феноловых тел (E.Klocking ,
1980; B.Helbig
, R-Klocking
, I98I; W.Rochus
, I98I).
Доказано вирусовадерживающее действие гуминовых кислот, при­
чем, распространяется этот эффект и на патогенные микроорганиз­
мы, в частности, при герпетическом кератите в эксперименте на
кроликах ( P.Naslitsch
R.Breng
, I98I).
J E^Waldow
^G.Plotner
(I98I) изучали
обезболивающий эффект и противовоспалительный эффект гуматов и
38
установили идентичность их действия с ацетилсалициловой кисло­
той при определенном преимуществе их по влиянию на торможение
простоглацдинового Е-синтеза.
Гумат натрия изменяет интенсивность всасывательной функции
тонкого кишечника, что сопровождается увеличением всасывания
глицина и уменьшением всасывания глюкозы (Б.Л.Базелян с соавт.,
1983). Предварительное пероральное введение гумата натрия при
воспроизведенном ишюбилизационном стрессе стимулирует развитие
адаптивных реакций слизистой оболочки желудка и тонкого кишеч­
ника (А.В.Позднякова, 1983; В.П.Колотенко, Н.М.Грановский,1983).
В литературе имеется р щ сообщений об эффективном применении
гумата натрия в животноводстве и ветеринарии Советского Союза и
зарубежных стран.
По данным В.Г.Проворотовой, В.С.Толпыго, Г.А.Лебедевой(19б7),
гумат натрия, используеглый в малых дозах, улучшает рост тепло­
кровных животных, активизирует процессы обмена веществ, повышает
содержание жира и белка в мясе кроликов соответственно на 2,8
и 16,7^^ по сравнению с контролем. Аналогичные положительные ре- ,
зультаты эффективности применения гумата натрия получены В.А.Ма­
ковским (1983, 1983), Ковбасенко В.М., В.А.Маковским (1983).
Скармливание гумата натрия стельным коровам (В.Г.Муляк,С.В.Муляк, Ю.М.Семенец, 1983; Н.Ш.Маслов, В.Н.Майденко, Л.В.Котенко,
1983), а также при откорме крупного рогатого скота приводит к
улзгчшению показателей крови, жирности молока, полз^^ению более
жизнестойкого потомства (А.^^.Кузыяин, А.С.Чалый, А.В.Орлова,
Т.Д.Лотош, 1983; А.Ф.Кузьшн и др., 1983; А.Я.Козодуб, Т.Д.Лотош,
1983).
Японская фирма разработала кормовую добавку для сельскохозяй­
ственных животных и птиц - сацдифор, главным компонентом которо­
го является синтетическая гуминовая кислота (1979). Препарат по-
39
давляет развитие патогенной микрофлоры, повышает устойчивость
животных и птиц к болезням, особенно желудочно-кишечного трак­
та, и к стрессам.
Имеются сведения о положительном лечебном эффекта препарата
калюмин (содержит гуминовые кислоты бурого угля) при энтеритах
у телят ( M.Kuhnert, S.Golbs, V.Fuclis
I98I;
S.Golbs, M.Kuhnert
» I^^0; M.Kuhnert
, I98I), что авторы связывают с
коллоидными и сорбционными свойствами препарата. Применяли гумат
натрия также при диспепсии телят (И.Г.Белогрудов, В.И.Сокрут,
1983; В.Г.Муляк, С.В.Муляк, С.Ю.Семенец, 1983).
Гумат натрия из торфа проявил себя как адаптоген к неблаго­
приятным условиям среды и при выращивании рыб, ускоряя их рост
и выживаемость (В.П.Грановская, А.М.Чаплина, 1983; В.П.Гранов­
ская, В.И.Калашник, Н.А.Сидоров, 1983). Препарат способствует
повышению функциональной активности яйцеклетки, увеличению про­
цента оплодотворяемости икры, ускорению развития бластулы и сни­
жению тератогенности личинки карпа (И.А.Огинова, А.И.Горовая,
1983; А.Г.Минц, К.С.Христенко, 1983).
Использование комплекса гуминовых кислот торфа в лечебной ме­
дицине представлено единичными работами.
Инсциляция и подконьюнктивальное введение раствора гумата нат­
рия из торфа и бурого угля при травме глаза уменьшали свето­
боязнь, слезотечение, предотвращали образование грубых рубцов
роговицы и значительно улучшали остроту зрения, что авторы свя­
зывают с влиянием гуминовых веществ на защитные механизмы
( a?ang Guo Fan
, I98I).
Имеются клинические наблюдения по электрофоретическому введе­
нию в организм гуматов натрия из сапропелей при нарушении нерв­
ной проводимости. Гумат натрия из торфа был успешно применен в
виде аппликаций для лечения доброкачественных заболеваний шейки
40
матки (В.А.Шилейко, А.А.Зелинский, Г.Т.Хмыз, 1977).
Клинико-экспериментальные данные свидетельствуют о возможно­
сти применения гумата натрия в качестве противоопухолевых
средств. Гуматы, выделенные как из торфа, так и из бзфого угля,
тормозили рост
S _180 саркомы и рака печени на 32-44,1%
( 1* ^ 0,05) у гшшей. При исследовании влияния их на нуклеино­
вый обмен в клетках опухоли выявлено статистически достоверное
их действие на РНК и ДНК ( Fu Nai-Wu, Zhang Li-Sheng, Jin Zan-Eing,
I98I). При лечении рака пищевода установлено, что специально очи­
щенная гуглиновая кислота действует как ингибитор злокачественно­
го перерождения эпителия пищевода ( Xui Hons-Ji,Ghang Zhong-He,
Chen Hua-Min , I98I). К сожалению, в работе не дана характеристи­
ка применяемых лекарственных форм, способа их введения и схема
лечения.
,
Данные экспериментальных исследований и попытки лечебно-про­
филактического использования гумата натрия как адаптогена на
объектах растительного и животного происхождения свидетельствуют
о сложности их фармакодинаглики и механизма действия. Приводим
сведения о некоторых ведущих сторонах механизма действия физио­
логически активных гумусовых веществ.
Вопросы механизма действия ryi.iycoBHx веществ
Необходимо отметить, что данные литературы о влиянии гуминовых веществ торфа на животный организм и вопросы механизма их
действия ограничены. Более широко освещены эти вопросы на расти­
тельных объектах.
Многие исследователи связывают биологическую активность раст­
воримых фракций гуминовых веществ с влиянием их на окислительновосстановительные процессы. Основанием этому послужило наблюде­
ние значительного улучшения состояния опытных растений при добав­
ке гумата натрия к неаэрируемой среде i S.Gum'inski
, 1953;
41
Л.А.Христева, 1962). Этот эффект закономерен для всех гуминових
кислот, : независимо от происхождения и связан с химическими груп­
пировками (полифенолы, хиноны), которые являются общшда для всех
кислот, выполняющих роль переносчиков водорода и активаторов кис­
лорода, что и стабилизирует внутриклеточное дыхание (Л.А.Христе­
ва, I95I).
Доказательством правильности этого положения являются данные
об увеличении поглощения кислорода растительной тканью под влия­
нием гумата натрия, более высокая активность пероксидазы и умень­
шение активности каталазы. Тот же эффект с ферментами крови наблвдали Г.Ф.53щенко, Н.И.Пидтесаный (1983) при пероральном приме­
нении ryiviaTa натрия на молодняке крупного рогатого скота.
Подтверждение стимуляции дыхания под влиянием гуминовых ве­
ществ имеется во многих работах (В.А.Бибер, К.М.Магазинер,1951;
W.Flaig
E.Saalbach
1956* D.Steeling
G.Tollin 1962
и др.).
Л.А.Христевой (1962), а затем С.Гуминским (1968) было установ­
лено, что окисление гумата натрия перекисью водорода снш^ает его
физиологическую активность. Это свидетельствует о большей связи
эффекта с органической частью молекулы гyIvШнoвoй кислоты.
Наличие у гумусовых веществ донорно-акцепторных свойств пока­
зано также в работах Л.Ш.Бобырь, Л.А.Епишина (1980). Способность
выполнять эту роль в системе Ко-факторов живых клеток была подтверзвдена специальными опытами
in vitro
, где в качестве до­
нора электронов использовался восстановленный никотинамидадениндикуклеотид ( HA.D-H2
ный цитохром
С
) , а в качестве акцептора - окислен­
. Гуминовые кислоты способны служить как ак­
цепторами, так и донорами электронов в биологических системах.
Гуминовые кислоты оказывают стимулирующее влияние на состоя­
ние митохондрий и их способность к окислительно^лу фосфорилирова-
42
ниго (Л.А.Епипшна, 1975). Разобщение окислительного фосфорилирования под влиянием гуминовых кислот способствует накоплению в
клетках неорганического фосфора и тем самым активации гликолиза
и метаболизма ( w,Flaig
> 1973).
Для решения вопроса о проникновении гуминовых веществ в рас­
тения в разных странах были проведены многочисленные эксперимен­
ты ( P.Feiher
, D.Sauerberh , 1968; В.Шляйг, 1973; Л.А.Хри^^
стева, 1977), связанные с низкомолекулярными веществами, модели­
рующими фрагменты гумусовых веществ. Эти работы показали возмож­
ность их поступления и метаболизации в растениях после их гидро­
лиза или окислительного распада на более простые компоненты
( W.Flaig
, 1969; W.Flaig und Sochtig ,1973).
Наличие парамагнитных свойств у гуминовых кислот (И.Д.Комис­
саров, Б.Г.Проворотова, Л.Ф.Логинов, И.Н.Стрельцова, 1967;
G.a?ollin et al. , 1983; И.Д.Ко^яиссаров, А.А.Климова, I97I;
И.Д.Комиссаров, Л.Ф.Логинов, I97I; L.A.Christeva.S.Starostin,
1969) определяет один из путей проникновения гумусовых веществ
в растения и подтверждает роль свободных радикалов в их биоло­
гической активности (
S.Prat , 1964).
А.Д.^кин (1975) показал на меченной по
С гуминовой кисло­
те, что оптимальная молекулярная масса ее, поступающая в органеллы растений (митохоцдрии и хлоропласты) составляет 8000 Д. Боль­
шой интерес в этой связи представляют работы
A.S.Veser
, ко­
торый исследовал возможность метаболизма тотально меченной по
I 4 Q Г3ШИНОВОЙ кислоты у животных. Распределение их ме?кду органа­
ми и метаболитами крыс характеризовалось следз^щими сравнитель­
ными данными: экскременты - 60^; моча - 14^; выделение при дыха­
нии - 11%; печень - 6%; легкие - Ъ%; сердце - 0,8%; почки -0,6%;
другие органы - 2,5%. Обращает на себя внимание, что печень яв­
ляется основным органом,в котором метаболизиря)тся гуминовые ве-
43
щества.(А,З.У15зег, 1972).
'
Т4л
Пользуясь меченной
С гуминовой кислотой v.Eihhorn с соавт.
(I98I) подтверждает наибольший процент ее концентрации в печени,
селезенке и лимфоузлах преимущественно при внутривенном введении.
Установлено также ( A.S.Visser
^ 1972), что они способст­
вуют продвижению неорганических ионов в кишечную перепонку. Этот
эффект особенно характерен для таких ионов как
Zn
Mg , Fe
, Си,
. Механизм этого явления связан со способностью гуминовых
кислот образовывать кокшлексы с катионами, сорбируя их на поверх­
ности молекул.
Механизм действия гуминовых веществ при этом, безусловно, свя­
зан с влиянием на активность ферментов (цитохромоксидазы), что
определяется наличием в них хинонных грзшп как акцепторов водо­
рода.
Положительное влияние гумусовых веществ на активность фермен­
тов было установлено ранее на растительных объектах (В.Г.Котлюба, 1962; А.Д.Сумина, 1968), в частности на
гК^-амилазу (Л.А.Хри-
стева, 1977), рибонз^еазу и протеазу (Л.М.Степченко, Т.И.Скляр,
1976).
В механизме действия гуминовых кислот заложено влияние их на
термодинамическое состояние организма, связанное с влиянием не
только на окислительно-восстановительные процессы, но и ускоре­
нием синтеза белков. В норме и с помощью специфических ингибито­
ров доказано, что гуматы натрия модулируют в клетке дополнитель­
ное количество макроэргических соединений в форме АТФ, стимули­
руя при этом образование РНК и ДНК (А.И.Горовая, 1968; Р.Л.Дынкина, 1968; Л.А.Христева, В.А.Реутов, О.П.Голикова и др, 1969;
К.И.Солоха, 1973).
Эксперименты свидетельству[от о том, что физиологически актив­
ные гутлиновые вещества восстанавливают метаболизм нуклеиновых
44
кислот и белков, а также снимают ряд блоков важнейших физиологи­
ческих процессов, благодаря чему развитие организма нормализует­
ся (Л.А.Христева, 1977). Это определяет роль гуматов натрия как
неспецифических тригеров, ответственных за синтез белков-фермен­
тов и белков-констйтуентов. Приведенный механизм может быть реа­
лизован в условиях репрессии генома и относится к адаптивным
реакциям организма.
Дополнительные доказательства этих положений мы находим в мо­
дельных опытах с дифференцированными ингибиторами (Л.А.Христева,
1973; А.И.Горовая, П.И.Прохорова, 1975; Л.А.Христева, 1977;
А.И.Горовая, А.Н.Кулик, 1980), в которых показано, что под их
влиянием тормозятся такие ведущие процессы как синтез нуклеино­
вых кислот и белка, гштоз и цитокинез растений.
Физиологически активные гумусовые вещества способствуют и сни­
жению абберантности хромосом, которые возникают под влиянием
неблагоприятных факторов среды. И чем активнее восстанавливается
клеточное деление у поврежденных меристем, тем энергичнее идет
уменьшение количества хромосоглных нарушений. Следует отметить,
что снятие указанных повреждений под влиянием гумусовых веществ
сопровождается благоприятным их воздействием на общие процессы
роста.
Таким образом, механизм коглплексного действия физиологически
активных веществ гуминовой природы, несьлотря на все приведенные
факты, изучен недостаточно и связан, в основном, с влиянием на
некоторые стороны окислительно-восстановительных процессов, акти­
вацию ферментньк систем, синтеза белка и нуклеиновых кислот. Одна­
ко, эти сведения, в подавляющем большинстве, получены на расти­
тельных объектах.
Установленная закономерность отчетливо •выраженного защитного
влияния гумата натрия как адаптогена при воздействии неблагоприят-
45
ных факторов открывает перспективные возможности изучения этих
веществ в условиях эксперимента на животных.
Резюмируя данные литературы, можно сделать вывод, что биоло­
гическая активность веществ гуминовой природы обладает широким
спектром лечебно-профилактических возможностей и сложным меха­
низмом действия. Практическое использование этих соединений за­
труднено из-за отсутствия ставдартной, технологически обоснован­
ной лекарственной формы, методов контроля качества, идентифика­
ции препарата, оптимальной дозировки и соответствующих схем при­
менения. Вполне очевидна необходимость дальнейшего изучения и
разработки этих соединений для широкого внедрения в практику ме­
дицины, ветеринарии и животноводства.
1.5. Программа и материал исследования
Изучение гумата натрия,как средства для повышения неспецифи­
ческой резистентности организма,нами проводилось с учетом степе­
ни изученности, происхождения и химического строения препарата,
поливалентности его действия, возможности стаццартизации, ориги­
нальности, доступности технологии, а также экономически выгодно­
го источника сырья.
Полная физико-химическая характеристика, показатели контроля
идентификации и ставдартизации этого препарата приводятся в тех­
нических условиях, которые представлены нами в приложении.
Нами был проведен ряд исследований по изучению вариантов опти­
мального разведения и методов стерилизации гумата натрия при
контроле уровня биологической активности.
Наилучшая концентрация гумата натрия составляла 0,1^ водный
раствор с добавлением 9 г хлористого натрия на I л. Установлено,
что препарат ввдерживает стерилизацию в автоклаве ( t =120°С в
течение I часа) и предназначен для подкожных и внутримышечных
46
инъекций. Именно эта форма безбалластного гумата натрия была
использована в дальнейших экспериментальных исследованиях.
Комплексная программа исследований включала изучение влияния
гумата натрия на важнейшие физиологические функции в норме и
при воздействии различных неблагоприятных факторов.
Все опыты проводились на экспериментальных животных: кроли­
ках (породы Шиншилла), белых крысах (породы Вистар), беспород­
ных белых мышах, морских свинках и лягушках feana temporaria ) .
Всего было использовано 190 кроликов, 536 белых крыс, 520 бе­
лых мышей, 96 лягушек, 45 морских свинок (итого II87). Животные
опытных и контрольных групп были подобраны по принципу аналогов
и находились в одинаковых условиях содержания и кормления.
Изучалось влияние гумата натрия:
на гематологические показатели. У белых крыс и кроликов учи­
тывалось количество эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемогло­
бина, а также содержание сахара и протромбиневый иццекс;
на сердечно-сосудистую систему (показатели ЭКГ - на кроликах;
влияние на тонус изолированных сосудов уха кролика и хронотропную функцию сердца лягушки);
на гистоморфологическое строение жизненно важных органов и же­
лез внутренней секреции (у белых крыс исследовались печень, мио­
кард, легкие, щитовидная железа, надпочечники).
Проводилось изучение - эмбриотоксических и тератогенных свойств
гумата натрия (на белых крысах);
аллергизирующих свойств (на морских свинках и белых крысах);
апирогенности (на кроликах).
Определялось
^ДбО ^У^ата натрия (белые мыши).
Исходя из цели и задач исследования, следующим этапом програм­
мы было изучение уровня физиологической активности гумата натрия
при воздействии различных неблагоприятных факторов на фоне пред-
47
варительного его введения.
1. Влияние изучаемого комплекса на снижение уровня угнетения
тормозных процессов в центральной нервной системе токсической
дозой стрихнина у белых мышей (стрихнинный тест).
2. Влияние гумата натрия на проводимость сердечной мышцы ля­
гушки при отравлении токсической дозой строфантина (строфантинный тест) по показателю продолжительности работы сердца in situ.
3. Влияние гумата натрия на восстановление функциональных
свойств изолированной мышцы лягушки при воздействии 1% раствора
хлористого калия, как альтерирующего агента (парабиотический
тест).
4. Влияние гумата натрия на продолжительность жизни белых мы­
шей при гипоксии, вызванной пребыванием в барокамере и в замкну­
том пространстве.
Программа включала также исследования по определению влияния
гумата натрия на физиологические функции и биохимические показа­
тели организма при введении токсических веществ. В частности,
исследовалось воздействие гумата натрия на:
I) нарушение гемопоэза введением фенилгидразина кроликам, что
вызывает анемию гиперхромного типа. Регистрируемые показатели цроцент гибели экспериментальных животных, количество эритроци­
тов и содержание гемоглобина в крови;
Z) изучение метаболической устойчивости печени белых крыс при
введении четыреххлористого углерода по биохимическим и цитохими­
ческим показателям в крови и гепатоцитах. В крови определялись
количество общего белка, активность церулоплазмина и трансаминаз, а в гепатоцитах - количество общего белка, карбоксильных
групп глютаминовой кислоты, дисульфвдных групп йистина и сульфгидрильных групп цистеина, гликоген;
3) определение антитоксической функции печени у кроликов по
48
продолжительности гексеналового сна;
4) нарушение трофики слизистой оболочки желудка белых крыс
введением серотонина. О защитном эффекте ryi,iaTa натрия судили
по гистологическим, планиметрическим показателям и индексу
Паулса.
При изучении некоторых сторон механизма действия гумата нат­
рия были проведены исследования на морских свинках и кроликах
по определению влияния гумата натрия на показатели иммунобио­
логической реактивности организма (фагоцитарная активность лей­
коцитов, активность лизоцима в сыворотке крови) и некоторых ви­
дов обмена (количество общего белка и его фракций в сыворотке,
содержание общего белка, карбоксильных групп глутаминовой кисло­
ты, сульфгидрильно-дисульфццного равновесия и гликогена в гепатоцитах)_.
Частные методики исследований и характеристика изучаемых
групп будут изложены в соответствующих главах.
Результаты подвергались статистической обработке на Э К Ш
"Электроника БЗ-21" по общепринятым методам (И.А.0йвин,1960;
Л.И.^енцевич, 1979).
Для характеристики полученных данных вычислялись средние ве­
личины (М) и средние ошибки средних величин (+ m ) . Разница по­
лученных средних величин оценивалась с помощью параметрического
показателя
t . Критерием достоверности разницы считалась ве­
роятность (Р), равная или большая 95% (риск ошибки 5 и менее %,
в долях единицы 0,05 и меньше).
Показатель вероятности различий (Р) приводится в таблицах
только в случаях статистически значимых величин (Р < 0,05).
49
1,5.1. Технологические принципы получения гумата натрия
и его характеристика
Технология получения сухого концентрата гумата натрия была
разработана в Проблемной лаборатории гуминовых удобрений Днепро­
петровского сельскохозяйственного института (В.А.Реутов, Р.Н.
Кравченко и др., 1980; Р.А.Корбанюк и др., 1980).
Принцип получения препарата основан на способности гуминовых
кислот образовывать физиологически активные соли с ионами одно­
валентных металлов. Было установлено (Л.А.Христева, 1957), что
наибольшим стимулирующим эффектом обладает натриевая соль гуминовой кислоты.
Технологическая схема получения гумата натрия включает не­
сколько этапов. Перевод комплекса гуминовых кислот в раствори­
мое состояние осуществляется путем обработки торфа каустической
содой из расчета 10^
NaOH
на сухое вещество торфа при гидро­
модуле 20, Затем раствор гумата натрия отделяется центрифугиро­
ванием, гуминовые кислоты в нем осаждаются соляной кислотой, по­
лученный осадок путем вторичного центрифугирования отделяется
от надосадочной жвдкости, подсушивается при температуре б0-65°С
и отмывается до исчезновения пробы на ионы хлора (CI"*).
Полученная таким образом гуминовая кислота переводится в нат­
риевую соль путем добавления раствора едкого натрия до слабоще­
лочной реакции. После чего препарат высушивается при указанной
температуре и измельчается. Высушенная вытяжка получила назва­
ние безбалластного гумата натрия, который был использован нами
для создания лекарственной формы и глубокого изучения по экспе­
риментальному обоснованию практической реализации.
Безбалластный гумат натрия был получен из низинного осоковотростникового торфа Замглайского месторождения Черниговской об-
50
ласти,
Гуминовые кислоты этого комплекса имеют следующий элементный
состав и содержание кислых функциональных групп (табл.1.2).
Таблица 1.2
Элементный состав и количество функциональных групп .
в безбалластном гумате натрия (В.А.Реутов, В.П.Репка,
Р.Н.Кравченко, Е.М.Куксин, 1980)
Элемент или фзшкциональная : па органическое вегцество, в %
группа
;
от
:
ДО
•
•
63
48
41
29
4
7
3,8
I
S
0
1,9
Ф^гнкциональные группы в мг-экв/г органического вещества
С
О
Н
СООН
Шенольные гидроксилы
1,8
2,8
3,6
5,8
Представляем микроэлементный состав комплекса (в мг % ) :
Fe > 202, А1 - 27,3, Si - 18,5, Mn
Си - 1,5, Ni - 0,11, Or , V
_ 6,0, Т± _ 2,24,
, Mo , Zn , Со
_ следы.
Тяжелые металлы не обнаружены.
Инфракрасная спектроскопия дает богатую информацию не только
о наборе важнейших атомных компонентов и типах связей, но и кон­
кретном расположении отдельных групп.
Характерным признаком сохранения природы и свойств безбалласт­
ного гумата натрия, полученного вышеуказанным способом, является
параллелизм в интервалах поглощения при ИК-спектроскопии этого
соединения с гуминовой кислотой торфа (Р.А.Корбанюк с соавт.,
1980). Авторы наблюдали наиболее широкую и сильную полосу погло­
щения в интервале 3600-3000 см" (рис.1.1). Отчетливый максимум
51
т
поглощения был при 3400 см" . Для гумусовых веществ этот макси-
Рис. I.I. Инфракрасные спектры поглощения гзшата .
натрия (I) и гуминовой кислоты (2) из
Замглайского торфа (Р.А.Корбанюк с
соавт., 1980).
мум объясняется колебаниями спиртовых и фенольных гвдроксильных
групп, соединенных полимерными межмолекулярными водородными свя­
зями. В области 3000-2800 см"" у гуматов натрия и гуминовой кис­
лоты регистрировались две полосы поглощения с максимумами 2930
и 2860 см"" , которые обусловлены валентными колебаниями С-Н метильных и метиленовых групп. Отчетливые полосы поглощения в об­
ласти I730-I7I0 см" принадлежат карбонильным С-0 группам карбо­
ксилов. Третья интенсивная полоса поглощения наблюдается в обла­
сти 1630-1610 см" , вызванная ароматическими С=С связями, и
амидных групп полипептидов. Полосы поглощения I460-I370 см"-'- слабо выражены. Эта область связывается с наличием алифатических
т
группировок, в области 900-700 см" отмечается слабое поглощение
при 840 см" и 780 см" , что объясняется поглощением С-Н групп
52
ароматических колец, в которых замещено два и более атомов водо­
рода.
Из анализа данных ИК-спектроскопии следует, что гумусовые пре­
параты торфа гетерогенны по своему составу. Они содержат большое
количество периферических алифатических цепочек, пептидных и полисахаридных компонентов.
Доказательством высокой комплексообразугощей способности гумата натрия является содержание в нем всех известных аминокислот,
которое достигается Ь% на сухое органическое вещество. Аминокис­
лоты присутствуют в гумате натрия в форме прочно связанных соеди­
нений и для их извлечения необходим достаточно жесткий кислотный
гидролиз, при котором серосодержащие аминокислоты разрушаются.
Содержание углеводов в гумате натрия составляет 1,65^.
Для удобства практического применения в народном хозяйстве
безбалластного гумата натрия необходимы разработки оптимального
варианта формы, концентрации, методов ставдартизации, способа
введения и дозировки.
53
ГЛАВА
П
ВЖЯНИЕ ГШАТА Н А Т Ш Я НА НЕКОТОРЫЕ ШЗИОЛОГИЧЕСКЙЕ
ФУНКЦИИ ШВОТНОГО ОРГАНИЗМА
2.1. Влияние гумата натрия на показатели крови
и сердечно-сосудистую систему
В свете современных требований одним из обязательных иссле­
дований для новых препаратов и новых лекарственных форм являет­
ся изучение влияния их на ведущие показатели крови (количество
эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина, протромбиновый
ивдекс) и состояние сердечно-сосудистой систеш].
2.I.I. Влияние гумата натрия на некоторые показатели крови
экспериментальных животных
Исследование проведено на 2-х видах животных - белых крысах
и кроликах. Продолжительность опыта на белых крысах - б меся­
цев, в течение которых опытной группе животных ежедневно вводи­
ли по 0,3 мл 0,1^ раствора гумата натрия. Контрольные крысы в
том же количестве и в те же сроки получали физиологический раст­
вор. Определяли общее состояние, вес животных, количество эри­
троцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина на 30-й, бО-й и
I80-K дни введения.
Установлено, что на протяжении всего срока наблюдения отклоне­
ний от нормального физиологического состояния и веса животных
не выявлено. Уровень показателей крови при введении гумата нат­
рия сохраняется в пределах физиологических колебаний (табл.2.1).
Опыты на кроликах при 2-х месячном введении гумата натрия по
0,5 мл свидетельствзшт об аналогичном влиянии препарата на исследуеьлые показатели с определенной тенденцией к повышению количест-
Гематологические показатели белых крыс после введен
в течение шести месяцев ( п = 10)
Группы
животных
: Сроки
: введения
; препарата
Эритроциты
(хЮ^^ в л)
М ± Уп
Контроль
30-й день
Опыт
Контроль
90-й день
Опыт
Контроль
Опыт
180-й день
Гемоглобин
М ± т
7,2+0,4
123+5,6
6,4+0,3
118+3,4
5,9+0,9
II4+3,I
5,9+0,5
131+1,9
7,0+0,4
121+5,3
6,3-t-0,2
117+2,3
Гематологические показатели кроликов после введени
в течение двух месяцев
Группы
животньк
•.Дни наблю- :Эритроциты (хЮ^^ в л)
: дения
•
•
Р
•
•
:Гемоглоб
•
:
М ± т
«
•
Контроль
введение
физ.р-ра п = 1 0
Исх.фон
6,4+0,2
116+2,6
2 месяца
6,4+0,1
107+2,9
Опыт
введение
гумата натрия
*t=:IO
Исх.фон
6,3+0,3
113+2,4
2 месяца
8,0+0,5
<0 ,02
116+3,5
56
ва эритроцитов (табл.2.2).
Исследование курсового введения гумата натрия на протромбиновый индекс (метод Туголукова, М.Д.Лемперт,19бО) выявило изменения
этого показателя в пределах физиологической нормы (91,7-99,3^).
Полученные данные длительного введения исследуемого препарата
(хроническая токсичность) белым крысам и кроликам свидетельст­
вует об отсутствии какого-либо патологического влияния на гема­
тологические показатели.
2.1.2. Влияние гумата натрия на сердечно-сосудистую систему
Для выявления кардиотонических свойств 0,1^ раствора гумата
натрия было изучено его действие на сократительные свойства мио­
карда по методу Штраубе, влияние на сосуды изолированного уха кро­
лика по методу Писемского,а также показатели электрокардиограммы.
2,1.2.1. Опыты на изолированном сердце лягушки
Действие препарата изучалось в трех концентрациях: 0,1% раст­
вор гумата натрия и в разведении 1:10, 1:100. Работа сердца гра­
фически регистрировалась на ленте плетизмографа. Полученные дан­
ные представлены графически на рис.2.1.
Из рис.2.1. следует, что перфузия сердца 0,1% раствором гумата
натрия вызывает кратковременное обратимое снижение амплитуды и
частоты сердечных сокращений. После пропускания раствора Рингера
работа сердца восстанавливается до исходного уровня.
Проверка последующих разведений 0,1% раствора (1:10, 1:100)
гумата натрия, которые близки к разведению препарата в биологи­
ческих жидкостях организма, не вызывала каких-либо патологичес­
ких изменений в работе изолированного сердца лягушки.
57
Шк
nhi
У^млт.
I ' 'в» ' * * * ' * ' ' • ' • ' • '
ft
н€иушл
' 'if
9^0 9%H4m»t^
t^
iiB»!iiM«fiflillt
5b.
• '
f
'
г
'
•
^
•
' ^
'- ^
f-^
*
'
•
Рис.2.1. Плетизмографическад^^запись работы
изолированного сердца лягушки при
перфузии растворов гумата натрия.
2.1.2.2. Опыты на изолированных сосудах
Перфузия изолированного уха кролика осуществлялась в контроле
жидкостью Рйнгера-^окка при комнатной температуре. Давление жид­
кости составляло 70-80 см водяного столба. О состоянии сосудов
судили по количеству вытекающих капель в единиг^у времени (в мин).
Уменьшение их свидетельствует о сужении сосудов и, наоборот,рас­
ширение сосудов сопровождается увеличением количества капель.
Полученные результаты опыта представлены в табл.2.3.
Из табл.2.3 следует наличие тенденции к обратимому сужению
просвета изолированных сосудов при введении 0,1^ раствора гумата
натрия. Концентрация препарата 1:10, 1:100, 1:5000 не вызы#ает
статиешиаески достоверного влияния на просвет сосудов. Именно
эти разведения практически близки к концентрации его в крови ор­
ганизма животных и человека при курсовом введении.
58
Таблица 2.3
Влияние гзгмата натрия на изолированные сосуды уха
кролика (среднее количество капель из Ю повторностей)
Растворы
препарата
0,1^ р-р гумата
натрия
; Количество
:Количество :Последействие
:капель исход--:капель после: через
:ного фона
:введения
: 5 минут
:опытных
:•
•
:растворов
34,3
33,6
1:10
29,6
23,6
25,1
1:100
30,3
29,5
30,1
1:5000
26,0
25,0
25,0
33,1
2.1.2.3. Влияние курсового введения гумата натрия на ЭКГ кро­
ликов
Проверка влияния курсового введения 0,1^ раствора гумата нат­
рия на работу сердца была также проведена электрокардиографичес­
ки. Препарат ввводили ежедневно подкожно в дозе 0,5 мл в течение
30 дней. ЭКГ регистрировали до начала эксперимента (исходный
фон), через 15 и 30 дней инъекций и через 15 дней после оконча­
ния курса введения препарата. Запись электрокардиограммы в 3-х
отведениях проведена на аппарате ВЕКС-4,
При анализе данных ЭКГ (рис.2.2) установлено, что введение
исследуемого препарата кроликам в течение указанного срока не ока­
зывает каких-либо заметных изменений в состоянии сердечной мышцы.
Таким образом, полученные нами сведения о влиянии гумата нат­
рия на изолированное сердце, изолированные сосуды и электрокардио­
грамму свидетельствуют об отсутствии каких-либо побочных, неблаго­
приятных влияний препарата на сердечно-сосудистую систем/.
59
Иоходныя фов
Через IS даеа
I
Через ЗОдвеЯ
. Через 19 д Ш
повде
'
g§S2pS?r""" p f ^ ^ ^ l ^ ^
luB
IceK
Рис,2.2. Электрокардиограмма (г2-е отведение) кролика № 320
после курсового введения г-гумата •'• натрия,
2.2. Гистоморфологические исследования после введения
гумата натрия
При изучении биологического действия гумата натрия и проверки
его безвредности важная роль принадлежит гистоморфологическим
исследованиям жизненно валшых органов. Эти исследования явились
завершающим этапом проверки хронической токсичности на белых кры­
сах после 4 - б-месячного введения препарата.
Гистоморфологический анализ проводился после окраски тканей
сердца, печени, легких гематоксилин-эозином и по методу Ван-Гизон.
Макро- и микроскопическое изучение этих органов не выявило
каких-либо патоморфологических изменений в них.
Для иллюстрации приводим микрофотографии ткани сердца(рис.2.3),
60
печени (рис.2.4) и легких (рис.2.5).
,Рис.2.3. Опыт. Гистоморфлогическая структура миокарда без
видимых изменений.Окраска гематоксилин-эозином.
Увелич. X 90.
Рис.2.4. Опыт. Гистоморфологическая структзфа печени без
видимых изменений. Окраска гематоксилин-эозином.
Увелич. X 90.
61
Рис.2.5. Участок легкого без видимых изменений.
Основную массу составляют разрезы альвео­
лярных мешочков.
Окраска гематоксилин-эозином.
Увелич. X 90.
2.3. Влияние гумата натрия на состояние некоторых желез
внутренней секреции
С целью более тщательной проверки безвредности предлагаемого
препарата нами были предприняты исследования влияния его на такие
важные железы внутренней секреции,как поджелудочная железа (уро­
вень сахара в крови по методу Хагедорна), щитовидная железа и
надпочечники (гистоморфологическое строение) после ежедневного
введения препарата белым крысам в течение 4-х месяцев по 0,3 мл.
Исследования не выявили токсического воздействия гумата натрия
на функциональное состояние поджелудочной железы,о чем свидетель­
ствует сохранение уровня сахара в пределах физиологической нормы
(табл.2.4).
62
Таблица 2.4
Влияние гумата натрия на содержание сахара
крови белых крыс (мм/л)
Сроки введения : Группы животных
препарата
•
30 дней
Контроль
Опыт
90 дней
120 дней
:
М 1
tn
•
6,38+0,4
6,38 +0,3
Контроль
5,66+0,0
Опыт
6,22+0,0
Контроль
6,77+0,4
Опыт
6,33+0,3
Анализ гистоморфологической структуры щитовидной железы и
надпочечников после окраски гематоксилин-эозином (обзорной) и
по методу Ван-Гизон не выявил патологических изменений(рис.2.6,
2,7).
Ьц^л^ч^•»«^,.
ч
Рис.2.6. Опыт. Гистоморфологическая структура щито­
видной железы без видимых изменений.
Альвеолы выстланы секретирующим эпителием
и полости их заполнены коллоидной массой.
Окраска гематоксилин-эозином.
Увелич. X 90.
63
^^^^^J-t^^.J'f^tS^^''^^^- '•
Рис.2.7. Опыт. Гистоморфологическая структура над­
почечника без видимых изменений. Окраска
гематоксилин-эозином. Увелич. х 90,
2.4. Влияние гумата натрия на воспроизводительную функцию
экспериментальных животных
В свете современных данных изучение тератогенной и эбриотокиической активности физиологически активных веществ позволяет
снизить опасность использования при беременности тех из них, ко­
торые имеют побочное вредное влияние на развитие эмбрионов. Изу­
чение таких показателей является обязательным контролирующим по­
казателем безвредности препарата и служит одной из мер профилак­
тики эмбриопатий и развития врожденных пороков.
Тестирование тератогенной и эмбриотоксической активности гума­
та натрия проводилось на белых крысах.
Гумат натрия вводили в дозе 0,15 мл 0,1% раствора на 100 г мас­
сы на 4,8 и 13 дни беременности.Эта доза препарата превышает тера-
64
певтическуга в 50 pas. Животные контрольных групп полз^али фи­
зиологический раствор по той же схеме. Дни введения препарата
соответствуют периоду имплантации (4 день), постимплантации
(8 день) и органогенезу (13 день) и являются наиболее уязвимыми
При действии агентов, обладающих тератогенными свойствами
(А.П.Дыбан, I96I; Н.М.Смольникова, С.Н.Стрекалова, 1979; Н.А.Самошкина, 1964).
В течение эксперимента проводили наблюдение за поведением и
состоянием беременных самок, контролировали вес животных(Рис.2.8).
Забой животных производили на 21 день беременности.
I КОНТРОЛЬ
2 опыт
i
8
/5
дни ШЕМЕннасти
Рис.2.8. Контрольные показатели веса беременньк
животных.
У забитых самок вскрывали брюшную полость, извлекажи матку и
яичники. В яичниках подсчитывали количество желтых тел, в матке
- количество мест имплантации, число живых и мертвых плодов, а
таюке число резорбций. Эмбрионов взвешивали, измеряли краниокаудальный размер и исследовали микроскопически (микроскоп МБС-1).
О повреждающем действии судили по уровню эмбриональной смерт­
ности и наличию аномалий головного мозга, глаз, языка, конечно-
65
стей, хвоста и органов брюшной полости.
После макроскопического изучения о^ну часть плодов фиксирова­
ли в жидкости Буэна, другую - по методу Даусона для исследования
аномалий скелета.
Полученные данные позволили установить, что практически нет
различия мевду числом желтых тел, количеством живых и мертвых
плодов, числом резорбций и показателем экстенсивности действия
у контрольных и опытных животных (рис.2.9).
1
2
137 137
КОНТРОЛЬ
опыт
127 129
IX 137
А
и
9
8
-«HP-
Е
р
Е
127 129
116 119
124 128
и
в
н
н
о
с
8
138 116
т
и
9
137 146
129 139
«
8
КОЛ-ВО IEIтьа ТЕЛ
7
КОЛ-ВО юа,
число
ИКПЯАНТАШ
РЕЗОРБЦИИ
кол-во DWfUoriob
хивых
MEFiaa
**•
ЗКСТЕНСИВИОСТЬ АЕИСТВиЯ
%
эмеРнатаксичвскАя \
ТЕРАТОГЕННАЯ
1в.
в
/?
Рис.2.9. екстенсивность эмбриото^^иад^^^^й~1ГтераЯ
г-енного действия гумата
натрия (учет
результатов на 21 день беременности крыс
в абсолютных величинах).
^
66
Микроскопическое исследование эмбрионов не выявило аномалий
внутренних органов (по методу Вильсона) и скелета (по методу
Даусона) ни в одной из исследованных групп животных. По размеру
и весу плоды подопытной и контрольной групп не отличались друг
от друга.
На основании полученных данных можно заключить, что препарат
при парентеральном введении в дозе, превышающей терапевтическую
в 50 раз, не обладает эмбриотоксическим и тератогенным дейст­
вием. Об этом свидетельствует отсутствие различий в показателях
между контрольными и опытными животными в количестве желтых тел,
мест имплантаций, числе резорбций, количестве живых эмбрионов.
2.5. Проверка апирогенности гумата натрия
Испытание на апирогенность проводилось на б-ти здоровых кроли­
ках (рекомендации X Фармакопеи СССР, 1975), у которых в течение
3-х суток ежедневно утром до кормления ректально измеряли темпе­
ратуру тела. Исходная температура опытных кроликов колебалась в
пределах 38,6-40*^0.
В день опыта всем кроликам внутривенно вводили гумат натрия в
дозе 1,0 глл через 30 мин после измерения исходной температуры
тела. Контролировали температуру 3 раза с промежутками в I час.
Повышение температуры не наблюдалось, что свидетельствует об апи­
рогенности препарата.
2.6. Проверка аллергизирующих свойств гумата натрия
Определение аллергизирующих свойств гумата натрия проводилось
по классическим общепринятым тестам: "общая аллергическая" реак­
ция (анафилактический шок) и "местная" реакция (дегрануляция туч­
ных клеток).
67
2.6.1. Общая аллергическая реакция
В опыте было две группы морских свинок - контрольная и опыт­
ная - по 5 животных в кшкдой группе. Опытным свинкам подкожно
вводился гумат натрия в дозе 0,2 мл 3-кратно с промежутками 3 дня.
Контрольным животньм инъекцировалась нормальная лошадиная сыво­
ротка по той же схеме.
На 21 день контрольным и опытным лсивотным соответственно внутри­
венно вводилась разрешшэщая доза (1,0 г.ш) нормальной лошадиной сы­
воротки и гзшата натрия.
Все контрольные свинки погибли от острого анафилактического
шока. У животных подопытной группы явлений анафилактического шока
не наблюдалось.
2.6.2. "Местная" аллергическая реакция
Для изучения "местной" аллергической реакции гумата натрия был
использован метод реакции непрямой дегрануляции тучных клеток
(Л.И.Ишимова, I97I; Л.В.Лусс, I97I). Опыт проводился на белых
крысах и основан на следующем механизме: реагены сыворотки крови
(антитела класса* gE
шшуноглобулина
gE
) исследуемых жи­
вотных сенсибилизируют тучные клетки бельзх крыс. Под действием
антигена в результате связывания его с соответствующи^ти реагенами
происходит дегрануляция этих клеток.
Предварительно белые крысы сенсибилизировались однократным вве­
дением испытуемого препарата в терапевтической дозе. На 1б-е и
20-е сутки готовилась сыворотка крови этих крыс.
Для проверки влияния препарата на дегрануляцию тучных клеток
проводился забор перитониальногоэкссудата у интактных белых крыс
на 10-е и 20-е сутки.
С этой целью внутрибргошинно животному вводили 3,0 im раствора
гемоцелла в составе: хлористый натрий - 8,5 г, хлористый калий 380 мг, хлористый кальций - 700 мг, желатина - 700 мг на I л дис-
68
тиллированной воды. Затем вскрывали брюшную полость и производи­
ли забор перитониального Э1(Х!судата в пробирку с гепарином.
В полученной взвеси при микроскопии видны нормальные тучные
клетки овальной формы с четкигли контзфами. Для окраски клеток
предметные стекла предварительно обрабатывались 0 , ^ спиртовым
раствором основного красного.
"Местная" аллергическая реакция испытуемого препарата опреде­
лялась по дегрануляции тучных клеток при добавлении антигена и
сыворотки крови иммунизированных животных. При этом тучные клетки
приобретают иную форму: видны разрывы и выход гранул за ее преде­
лы, нарушается структура.
Производится подсчет 100 тучных клеток. Из них количество дегранулированных тучных клеток выражается в процентах. Согласно
методике, дегрануляция тучных клеток в пределах 20% не счищается
патологической.
Следуя^вышеизложенной методике, проверка влияния гумата натрия
на дегрануляциго тзд1ных клеток проводилась на 10 белых крысах.
Препарат вводился однократно под кожу в дозе 0,3 мл. На 10-е и
20-е сутки после иг-шунизации готовили сыворотку крови.
Проводилась последовательная проверка смеси из взвеси тучных
клеток, сыворотки крови и гумата натрия на 10-е и 20-е сутки у
всех десяти белых крыс. В результате анализа не выявлено патоло­
гической дегрануляции тучных клеток. Экспериментальная проверка
"общей" и "местной" анафилактической реакции при введении препа­
рата гутяата натрия свидетельствует об отсутствии его аллергезирующих свойств.
Результаты длительного введения гумата натрия различным живот­
ным при большом количестве контролирующих показателей свидетельст­
вуют о его безвредности.
69
Дяя оценки биологической активности и иззд?ения фармакодинамики нового лекарственного средства необходимо, прежде всего,
определение показателя LflgQj который характеризует острую ток­
сичность препарата.
2.7. Определение острой токсичности
Определение острой токсичности проводилось в двух вариантах.
Первый опыт - специальное экспериментальное исследование на бе­
лых мышах - выявление
ьД^д гумата натрия по методу Кербера
(Л.М.Беленький,1963). Белым мышам однократно вводились различные
дозы препарата (от 1,34 до 17,42 мг) на одно животное. Полученные
средние данные из 3-х серий опытов приведены в табл.2.5.
Таблица 2.5
Дозы
Определение
ЬД^д гумата натрия по методу Кербера
(в мг)
: 1,34
Выжило (кол-во)
животных
Погибло (кол-во)
животных
d
: 5,36
Zd
Zd
13,4 : 17,42
6
5
4
2
0
0
I
2
4
6
0,5
4,02
2,01
Z
: 9,38 :
1,5
4,02
6,03
3,0
4,02
12,06
5,0
4,02
20,1
= 2,01 + 6,03 + 12,06 + 20,1 = 40,2
Ь Д ю о = 17,42 мг,
где
Ь ДJoo ~ доза изучаемого вещества, которое вызвало учиты­
ваемый эффект у всей группы животных;
Z
- интервал между каждыми двумя смежными дозами;
d
- среднее арифметическое из числа животных, у которых
наблюдалась зачитываемая реакция под влиянием каждых двух смеж­
ных доз (погибшие животные);
70
^
- число животных в каждой группе.
L Д50 =
Ь Д^оо - - ^ ^ ^ ^ = 1^^.42 - ^
=17,.42-б,7=10,72мг
Ьfl^Q= 0,536 г/кг живого веса.
Таким образом, установлено, что
^ДбО ~
'-'J^^G
г/кг веса,
что соответствует введению 535,75 мл 0,1% раствора гумата натрия
на I кг веса животного.
Полученные результаты по
"^R^Q свидетельствуют о безвредности
испытуемого препарата (536,00 мг/кг массы;.
Второй опыт поставлен на трех видах лабораторных животных:
5-ти кроликах самцах, 5-ти морских свинках, Ю-ти белых мьшах.
Подопытным животным в течение 3-х дней подкожно вводилась утро­
енная терапевтическая доза 0,1% раствора гуь^ата натрия: кролика^л - 3 мл, морским свинкам (внутрибрюшинно) - 3 мл, белым гшшам - 1,5 мл.
В течение 10 дней проводилось наблюдение за поведением, состоя­
нием и выживаемостью животных. За этот период никаких патологичес­
ких отклонений в состоянии и поведении подопытных животных не об­
наружено .
Таким образом, иззгчение влияния гумата натрия на некоторые фи­
зиологические функции животного организма (сердечно-сосудистую,
эвдокринную, кроветворение, воспроизводительную) позволило вы­
явить не только особенности его действия, но и установить практи­
ческую безвредность. Это подтверждено гистоморфологическими иссле­
дованиями печени, миокарда, легких, щитовидной железы и надпочеч­
ников, отсутствием аллергезирующих, тератогенных и эмбриотоксических свойств при парентеральном введении препарата, а также его
апирогенностью.
Исходя из полученных нами результатов опыта и данных литерату-
71
ры о способности гумата натрия повышать неспецифическую резистент­
ность организма, дальнейшая разработка и изучение препарата для
практического применения представляется вполне логичной и актуаль­
ной.
Обширная программа этих исследований включает установление
уровня физиологической активности при воздействии неблагоприятных
факторов, оценку его защитного эффекта при нарушении гемопоэза,
метаболизма гепатоцитов и слизистой оболочки желудка, а также не­
которые вопросы механизма неспецифического действия.
72
ГЛАВА
Ш
ГУМАТ НАТРИЯ КА1{ Ш ^ Г О Р ПОВЫШЕНИЯ НЕСПЕЩШИЧЕСКОЙ
РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА
Данные обзора литературы о физиологической активности веществ
гуминовой природы свидетельствуют о том, что они повышают защит­
ные свойства организма, главным образом, за счет регуляции обмен­
ных процессов на клеточном уровне. Особое значение имеет положи­
тельное влияние гумата натрия на белоксинтезирующую систеглу. Из­
вестно, что таким свойством обладают адаптогены, способные повы­
шать неспецифическую резистентность организма (И.И.Брехман,
Н.КД^руентов, 1954; И.И.Брехман, О.И.Кириллов, 1966; Н.В.Васи­
льев, 1976 и др.).
Успешный 50-летний опыт применения тканевых препаратов по
В.П.с&илатову в качестве адаптогенов связан, главным образом, с
наличием в них антитоксических свойств, влиянием на ферментные
и ишлунологические системы (В.П.Соловьева, 1983).
Полученные наьш данные о прак:тической безвредности гумата нат­
рия, благоприятном влиянии его на физиологические фзшкции организ­
ма определяют основные задачи наших исследований по аналогии с
биостимуляторами по В.П.Филатову и другими препаратами неспеци­
фического действия. Эта программа включает изучение антитоксиче­
ских свойств гумата натрия, уровня биологической активности на
специальных фармако-биологических тестах, экспериментальную оцен­
ку лечебно-профилактического эффекта этого препарата и анализ не­
которых сторон механизма действия.
73
3.1. Биологическая активность гумата натрия на фармакобиологических тестах
Наиболее убедительными показателями биологической активности
неспецифических лекарственных средств является уровень их защит­
ного эффекта при введении отравляющих веществ.
В качестве отправляощих веществ мы использовали фармакологи­
ческие средства в токсических дозах, которые обладают вырал{енной
фармакодинамикой, достаточно изученными точкатли приложения дей­
ствия, что позволяет с определенной очевидностью судить о влия­
нии предварительного введения гумата натрия на организм при воз­
действии этих веществ, если это влияние вообще имеет место.
3.I.I. Антитоксические тесты
С т р и х н и н н ы й
т е с т - основан на способности био­
логически активных веществ повьшать сопротивляемость организма
к воздействию
отравляющих доз стрихнина. Стрихнин был избран
ввиду отчетливо выра^кенного закономерного проявления его токси­
ческих свойств (М.Б.Вургафт,1949; Т.Е.Орлова, 1963).
По современным представлениям стрихнин блокирует действие! хи­
мических веществ, играющих роль тормозящих факторов при передаче
возбуждения в постсинаптических нервных окончаниях спинного моз­
га, вызывая, таким образом, "возбуждающий" эффект ( T.M.Araki,
^*°» O.Oscazsson
, I96I;P.G.K:ostynk, T.Oshima
,1962). Этот
препарат в высоких концентрациям оказывает парабиотическое дейст­
вие на мембрану нервных и мьшечных волокон, что выражается в ста­
тистически достоверном уменьшении акшлитуды потенциала действия
и удлинении латентного периода (Т.А.Сафонова, В.Л.Журавлев,
В.И.Иванов, 1976). Б токсических дозах стрихнин вызывает иррадиа­
цию возбуждения по всем моторньш центрам нервной системы, что
приводит к судорожньм сокращениям скелетной ьт/скулатуры и может
74
быть с большой наглядностью использовано в эксперименте.
Опыт с предварительным введением гумата натрия на стрихнинном тесте проводился на белых гльшах в виде отдельных серий. Кри­
терием определения защитного эффекта гуглата натрия служил про­
цент выживаемости животных после введения отравляющей дозы стрих­
нина (0,01 мл 0,1^ раствора на I кг массы животного). Данная до­
за стрихнина вызывает 100^ гибель контрольных мышей. Каждая се­
рия опыта предназначалась для выявления оптимальной дозы и про­
должительности введения гзшата натрия.
Нами было установлено, что введение гумата натрия за 0,5 часа
и I час до отравления животных стрихнином не увеличивает продол­
жительность жизни и процент выживаемости их.
Следующая серия экспериментов была проведена на 3-х группах
белых мышей (по 50 животных в каждой), которым в течение Ю дней
предварительно подкожно вводили 0,1 и 0,3 мя 0,1^ раствора гума­
та натрия. При 100^ смертности контрольных животных после отрав­
ления стрихнином установлен высокий процент выживаемости опытных
мьшей. При предварительном введении 0,1 }ш гумата натрия он со­
ставляет 55%, а при дозе 0,3 мл этот показатель достигает 70%.
Выявленная нами оптимальная доза гумата натрия 0,3 мл была
проверена дополнительно в двух вариантах при изменении схемы вве­
дения препарата. При одно- и двукратном предварительном введении
гумата натрия в течение одной недели выживаемость опытных живот­
ных составляет соответственно 30 и 70%.
Полученные результаты опыта свидетельствуют о влиянии гумата
натрия на повышение неспецифической резистентности организма.
Установлена зависимость антитоксического действия препарата от
дозы и срока введения. Наиболее выраженный эффект наблюдается
при профилактическом введении 0,3 мл 0,1% раствора гумата натрия
ежедневно в течение 10 дней и 2-кратно в течение семи дней.
75
Антитоксический эффект гумата натрия может быть связан с влия­
нием его на защитные мexaниз:^лы, включающие опосредованное дейст­
вие его на центральную нервную стлсиещ через изменение хтшзма
крови.
С т р о ф а н т и н н ы й
тест
характеризует уровень
антитоксического действия биологически активных веществ при вве­
дении отравляющей дозы строфантина на продолжительность работы
сердца лягушки. Действие токсических доз строфантина проявляет­
ся в усилении систолических сокращений сердца, удлинении диасто­
лы, замедлении ритма сердца, понижении возбудимости, замедлении
атрио-вентрикулярной проводимости.
Опыты проводились на лягушках массой 30-40 г. Грудная клетка
животных вскрывалась для наблюдения за работой сердца лягушки
in situ
• Предварительно в течение 7 дней контрольной и двум
опытным группам лягушек '(по 10 штук в ка^кдой) вводили соответст­
венно физиологический раствор и гумат натрия в дозе 0,1 и 0,3мл.
Критерием для суждения о влиянии гумата натрия служила та раз­
ность в продолжительности работы сердца контрольных и опытных ля­
гушек, которая была отмечена после введения равноценных отрав­
ляющих доз раствора строфантина - 0,2 мл 0,5% раствора (В.П.Со­
ловьева, 1964).
Полученные данные эксперимента представлены в табл.3.5.
Из таблицы следует, что предварительное введение гумата нат­
рия лягушкам отчетливо снижает токсическое действие строфантина
и повышает стойкость сердечной шппцы, удлиняя работу сердца на*
43,7-48,7^ по сравнению с контролем.
Не выявлено на этом тесте достоверного различия эффекта дей­
ствия гумата натрия в зависимости от дозы.
Результаты эксперимента на антитоксических тестах с введением
отравляющих доз стрихнина и строфантина отчетливо свидетельст-
76
ByfOT об антитоксическом действии гумата натрия и его влиянии на
систеьш, повышающие резистентность организма. Полученные данные
характеризуют гумат натрия как фактор усиления адаптационных воз­
можно стей организма.
Таблица 3.5
Влияние гуглата натрия на продолжительность работы сердца
(мин) после введения отравляющей дозы строфантина
Группы опытов
Контрольная
Введение 0,1 ъш гумата
натрия
Введение 0,3 мл пшата
натрия
: м
i
^
:
и'
:
Р
16,0 -ь 0,86
23,0 + 1,00
18
^0,001
23,8 + 1,90
18
<0,001
3.2.2. Парабиотический тест
Тест разработан в лаборатории фармакологии Одесского НИИ
им. акад. В.П.Филатова, в течение многих лет используется в каче­
стве "рабочего" теста для характеристики биологической активности
неспецифических лекарственных средств (А.В.Ваничкин, 1963) и
основан на скорости выхода изолированной штшцы лягушки из состоя­
ния парабиоза под влиянием испытуемого препарата.
Теоретическим обоснованием теста является учение Н.Е.Введен­
ского о парабиозе, классические опыты которого проведены на нервомышечном препарате лягушки. Подвергая участок изолированного нер­
ва альтерации, т.е. изменяя его состояние посредством отравления
или повреждения он обнаружил, что лабильность такого участка рез­
ко понижается. Это значит, что восстановление исходных свойств
нервного волокна после окончания каждого потенциала действия про­
исходит в том участке медленнее, чем в нормальных волокнах. В
определенной стадии альтерации проведение ритмических импульсов
77
блокируется. Такое состояние понгокенной лабильности Н.Е.Введен­
ский назвал парабиозом.
Парабиоз - изменение обратимое. Можно предположить, что раст­
вор гз^глата натрия, обладая высокими антитоксическими свойствами,
способен снимать действие алтерирзшщего агента.
Опытным объектом являлись изолированные портняжные мышцы
( muskulus sartorius
) травяной лягушки (Капа temporana).
В качестве алтерирующего агента использовался 1% раствор хлорис­
того калия.
Возбудимость мышц проверялась з^ниверсальньм электротшульсатором УЭИ-1 с напряжением в первичном цепи 2,8 вольта.
Предварительно мьппцы помещались в чашку Петри с раствором
альтерирующего агента. Через различные промежутки времени опреде­
лялся характер изменения возбудимости. После наступления парабио­
за (когда мышцы не отвечают сокращением на раздражение) одна из
мышц погружалась в раствор с испытуемым веществом (опыт), другая
(контроль) - в раствор Рингера.
Периодически проверялось восстановление функциональньтх свойств
мышцы. Опыт проводился до восстановления возбудимости и проводи­
мости. Показателем служило появление сокращений мышц в ответ на
оптимальное раздражение. Установлено, что достоверно высокий
Зфовень биологической активности ( Р < 0,05) исследуемого веще­
ства характеризует повышение скорости выхода опытной глышцы из
состояния парабиоза не менее, чем на 30^ по сравнению с контроль­
ной, независимо от сезона года.
На этом тесте были проверены различные концентрации гумата
натрия (0,25, 0,1, 0,01, 0,001^) в весенне-летний и осенне-зим­
ний периоды. Результаты эксперимента представлены в табл.3.6.
Из полученных данных следует, что гумат натрия обладает высо­
кой биологической активностью. Об этом свидетельствуют отчетли-
78
Таблица З.б
Влияние различных концентраций гумата натрия на скорость
выхода изолированных мышц (в мин) из состояния парабиоза
Концент­ :УелоБИЯ
рация
опыта
гумата
натрия
М
± 1^
п
Весенне-летний сезон
Контроль
9,6 ^ 0,2
Опыт
6,1 + 0,3
Контроль
"^,0 ± 0,7
Опыт
4,3 + 0,5
Контроль
7,084- 1,01
Опыт
3,2 2 0,5
Контроль
6,1 3 0,3
Опыт
4,9 + 0,4
0,25
0,1
0,01
0,001
18
< 0,001
18
^0,001
18
< 0,001
18
< 0,001
18
< 0,001
18
< 0,01
18
< 0,001
Осенне-зимний сезон
0,25
0,1
Контроль
22,6-ь 2,5
Опыт
11,8+ 2,2
Контроль
22,6+ 2,5
Опыт
9,4 ч- 1,2
Контроль
27,4+ 3,2
Опыт
9,25+ 1,74
1Сонтроль
19,1+ 2,2
Опыт
15,0+ 2,7
0,01
0,001
18
79
вые статистически достоверные показатели ускорения выхода изо­
лированной 1ЛЫШЦЫ из состояния парабиоза под влиянием всех испы­
туемых концентраций гумата натрия. Необходимо отметить, что да­
же столь малая концентрация препарата как 0,001% сохраняет срав­
нительно высокую биологическую активность. Наибольший уровень
активности установлен при использовании концентрации 0,1 и 0,01%
растворов гумата натрия преимущественно в осенне-зимний сезон
(на 58,4% и 66,3% выае контроля).
Наши опыты выявили различия в абсолютных показателях скорости
выхода изолированных мышц из состояния парабиоза в зависимости от
времени года при сохранении статистически достоверного положи­
тельного эффекта действия гумата натрия.
Впервые полученные нами столь закономерные и отчетливые дан­
ные по ускорению выхода из парабиоза изолированных мышц под влия­
нием гумата натрия могут быть основанием для разработки биологи­
ческой стандартизации, гумата натрия и установления биологической
единицы (Б.Е.) его действия.
Результаты исследования на тестах с введением отравляющих ве­
ществ и на парабиотическом свидетельствуют об определенной выра­
женности антитоксических свойств гумата натрия и характеризуют
одну из функциональных сторон его действия.
Полученная нами одинаковая реакция организма на введение раз­
личных по широте и фармакологическоглу действию отравляющих ве­
ществ на фоне предварительных инъекций гумата натрия, предполо­
жительно свидетельствует об общности механизма повышения рези­
стентности организма, вызываемого гуматом натрия. Дяя доказатель­
ства этого положения необходимо дальнейшее накопление фактов в
этом отношении с использованием в эксперименте как других токси­
ческих веществ, так и различного рода неблагоприятных воздействий
с учетом значения дозы и сроков введения гумата натрия.
80
3.2. Влияние гумата натрия на некоторые показатели
неспецифической резистентности организма
Состояние неспецифически повышенной сопротивляемости как и
общий адаптационный синдром характеризуется повышением рези­
стентности организма к различным неблагоприятным факторам, вклю­
чая устойчивость организма и к целому ряду инфекций.
Повышение неспецифической резистентности организма сопровож­
дается активацией некоторых показателей иммунобиологической
реактивности (фагоцитоз, выработка антител, лизоцим) и влиянием
на белковый обмен (общий белок и его фракции).
Между фагоцитарной активностью лейкоцитов и резистентностью
организма существует строгий параллелизм. Усиление функции фаго­
цитоза как показателя повышения резистентности и защитной спо­
собности организма проявляется при воздействии различных специ­
фических и неспецифических факторов (А.Дцо, 1961). Установлено,
что под влиянием таких биологически активных веществ как вита­
мины, гормоны, микроэлементы, а также тканевые препараты по
В.П.Филатову, повышается фагоцитарная активность лейкоцитов.
Наиболее убедительная информация о фагоцитозе выявляется при
исследовании активности лейкоцитов, фагоцитарного числа и фаго­
цитарного индекса. Именно эти показатели и были проверены нами
на двух видах животных - морских свинках и кроликах, что позво­
ляет проанализировать влияние гумата натрия длительно, в хрони­
ческом эксперименте на одних и тех же животных.
Две серии опытов на морских свинках были предприняты для вы­
явления действия гумата натрия на фагоцитоз и определения опти­
мальной схемы введения препарата.
П е р в а я
серия
экспериментов проведена в весенне-
81
летний период на 20-ти морских свинках при ежедневном введении
под кожу 0,4 мл гумата натрия в течение 21 дня* В качестве конт­
роля служили интактные животные.
Фагицитарное число определялось систематически один раз в не­
делю на протяжении всего курса введения препарата и через 7 дней
после окончания его.
Результаты исследования, представленные на рис.3.10, свидетель­
ствуют об отчетливо выраженном повьшении фагоцитарного числа на
протяжении всего срока опыта. Наиболее высокого уровня этот по­
казатель достигает к концу первой недели инъекций, увеличиваясь
почти в 3 раза (4,08 усл.ед.при 1,37 исходных величин,? < 0,05).
Через неделю после курсового введения гумата натрия фагоци­
тарное число приближается к исходому уровню.
——
1^
контроль
опыт
21
н а О Л К) 3 е н и Я
Рис.3.10. Влияние курсового введения гумата натрия
на фагоцитарное число лейкоцитов морских
свинок (ежедневно).
82
Основная задача второй серии опытов осенне-зимнего сезона
(30 морских свинок) заключалась в определении оптимального кур­
са введения препарата в той же
дозе через день и 2 раза в не­
делю на протяжении 3-х недель.
Шагоцитарное число крови морских свинок определялось на 7, 14,
21 дни введения препарата и через две недели после окончания кур­
са. Данные опыта представлены в табл.3.7.
Таблица 3.7
Влияние гумата натрия на фагоцитарное число лейкоцитов
морских свинок
Группы
животных
Контроль
(интактные
животные)
Опыт
(введение
препарата
через день)
Опыт
(введение
препарата
2 раза
в неделю)
: Дни
: наблюдения
Исх.фон
7-й
14-й
21-й
Последействие
через 2 недели
\
м
£
т
•
:
Р
«
0,65+0,007
0,66+0,011
0,65+0,012
0,66+0,028
0,66+0,044
Исх.фон
7-й
14-й
21-й
Последействие
через 2 недели
0,65+0,01
2,59+0,024
1,73+0,017
1,6 +0,038
<^ 0,001
^0,001
<0,01
1,14+0,013
<0,01
Исх.фон
7-й
14-й
21-й
Последействие
через 2 недели
0,65+0,017
1,66+0,041
2,42+0,091
1,55+0,042
^0,001
< 0,001
1,08+0,038
<0,05
При анализе полученных результатов прежде всего следует отме­
тить высокий уровень фагоцитарной активности лейкоцитов на про­
тяжении всего срока введения препарата, независимо от кратности
83
инъекций. Более выраженный эффект выявлен к концу первой неде­
ли при введении препарата через день (I грзшпа животных) и на
14-й день - у животных П группы. Последействие препарата сохра­
няется в течение 2-х недель.
Результаты эксперимента свидетельствуют о возможном сокраще­
нии частоты введения препарата. Так, максимальное повышение фа­
гоцитарного числа получено при введении препарата через день и
достигает 298%,при введении препарата 2 раза в неделю увеличе­
ние этого показателя составляет 272%, а при ежедневном введении
- только 197%.
Установленная нами оптимальная схема введения препарата учте­
на в инструкции производственного применения гумата натрия в
условиях животноводческих комплексов.
Учитывая значение фагоцитоза как показателя иммунобиологичес­
кой активности мы повторили опыт с определением влияния гумата
натрия на фагоцитоз у кроликов. О действии препарата судили по
показателям фагоцитарного числа, процента фагоцитарной активно­
сти и фагоцитарного индекса (С.И.Плющенко, В.Т.Сидоров, 1979).
Параллельной задачей этого эксперимента было изучение таких
биохимических показателей сыворотки крови как автивность лизоцима, содержание общего белка и белковых фракций, необходимых
для раскрытия некоторых сторон механизма действия исследуемого
препарата.
Гумат натрия в дозе 0,5 мл вводился кроликагл через день на
протяжении 3-х недель при систематическом контроле исследуемых
показателей.
Установлено статистически достоверное закономерное повыше­
ние активности показателей фагоцитоза по мере увеличения коли­
чества инъекций (табл.3.8). Убедительность полученного эффекта
прдтверждается однотипным влиянием гумата натрия на все три по-
Влияние курсового введения гумата натрия на по
фагоцитоза крови кроликов
Дни
наблюдения
, Фагоцитарная активность?
;' М t т \% к исх. ;
: фону
:
к
Фагоцитарное числ
•
М t
уп
:% к и
: фону
100
Исходный фон
26,8+1,87
100
0,34+0,22
7-й день
33,3+1,98
Р < 0,05
124,3
0,56+0,046
Р < 0,001
164,
14-й день
36,0+1,43
Р < 0,001
134,3
0,61+0,048
Р < 0,001
179,
21-й день
37,7+1,32
Р < 0,001
140,7
0,66+0,033
Р < 0,001
194,
Последействие
(через 2 недели)
45,0+1,65
Р < 0,001
167,9
0,55+0,033
Р < 0,001
161,
85
казателя: фагоцитарную активность лейкоцитов, фагощтарное чис­
ло (среднее количество кокков на один подсчитанный нейтрофилл),
а также на уровень фагоцитарного индекса (число микрококков на
один активный нейтрофилл).
Фагоцитарная активность лейкоцитов.в 1-ю неделю увеличилась
на 24,3^ (Р < 0,05), во 2-га неделю - на 34,3% (Р < 0,001), а
к концу 3-й недели достигает 67,9% (Р < 0,001).
Через две недели после окончания курсового введения гумата
натрия сохраняется эффект активации фагоцитоза.
Полученные результаты по влиянию гумата натрия на фагоцитоз
открывают одну из сторон механизма защитного действия гумата нат­
рия.
Состояние естественной резистентности организма, как извест­
но, косвенно характеризуется изменением активности фермента лизоцима. Он участвует в лизисе микробных клеток и является состав­
ной частью системы, регулирующей проницаемость тканевых барье­
ров ( Velican A.Velicaa
, 1967). О.Б.Бухарин, Н.В.Васильев
(1974) полагают, что одним из источников сывороточного лизоцима
являются лейкоциты.
Активность лизоцима у кроликов определяли нефелометрическим
методом по В.Г.Дорофейчук (1968) на 7, 14 и 21 дни введения гума­
та натрия и через 2 недели после курса введения.
Установлено статистически достоверное нарастающее увеличение
этого показателя при курсовом введении препарата, которое дости­
гает к концу третьей недели 58,9% (Р <
0,001), что на 43,3%
выше исходной величины. Эффект последействия продолжался в тече­
ние 2-х недель (табл.3.9).
Совпадающие данные о повышении активности лизоцима и показате­
лей фагоцитоза под влиянием гзшата натрия характеризуют опреде­
ленную закономерность фармакодинамической направленности препа-
86
рата.
Таблица 3.9
Влияние гумата натрия на активность лизоцима (в %)
в сыворотке крови кроликов
Дни
наблюдения
:
м ±m
•
Р
%
:к исходному фону
:
100
Исходный фон
41,1+1,72
7-й день
51,8+1,01
<0,001
126,0
14-й день
58,2+1,25
<0,001
141,6
21-й день
58,9+1,44
<0,001
143,3
Последействие
через 2 недели
46,7+3,5
113,6
Одним из ведущих показателей резистентности являются белки
крови. Именно ускорение синтеза белка повышает пластические воз­
можности организма, что и является главным резистентогенным дей­
ствием. Усиление репараторного процесса в клетке, существенным
компонентом которого также является синтез белка, может способ­
ствовать повьлпению устойчивости клеток к разнообразным повреж­
дающим воздействиям. Количественный анализ общего белка и его
фракций в сыворотке крови имеет важное знамение не только для
определения неспецифически повышенной сопротивляемости организ­
ма, но и для диагностики ряда патологических состояний, сопро­
вождающихся синдромом гипер- и гипопротеинемии.
По М.А.Розину (1967) к лекарственным средства1.1, повышающим
неспецифическую резистентность организма^можно отнести те из
них, которые способны стимулировать белковый синтез.
Исходя из известных представлений о механизме действия гума­
та натрия на растительные организмы, мы предполагали, что гумат
натрия может оказать влияние на метаболические процессы, связан-
87
ные с обменом белков в крови.
Работшли Л.А.Христевой с сотр. (1969,1973,1977) установлено
положительное влияние веществ гуминовой природы из торфа на
белоксинтезирующую систему растений. Причем именно этот меха­
низм действия гзшата натрия является одним из ведущих в регу­
ляции жизненных функций организма.
В то же время известно, что в процессе старения (О.В.Коркушко, Е.Г.Калиновская, 1979) нарзппается синтез белка, а также про­
исходят сдвиги в содержании белковых фракций (альбулины,
о^2 i Jb
1л
о
(^i ,
- глобулины).
Эксперименты по исследованию крови на содержание общего бел­
ка и белковых фракций мы проводили до введения препарата (исход­
ный фон), на 10-й и 21-й дни инъекций гумата натрия.
Общий белок определяли в сыворотке по методу
S.Lowry (I95I).
Белковые фракции сыворотки крови - методом горизонтального элект­
рофореза на бумаге(В.Г.Колб, Б.С.Камышников,197б). Полученные
данные представлены в таблицах З Л О и 3.II.
Как видно из табл.3.10, введение препарата гумата натрия кро­
ликам вызывает статистически достоверное увеличение количества
общего белка сыворотки крови к 21-му дню инъекций на 18% по от­
ношению к исходному фону. Установлено, что это увеличение проис­
ходит за счет фракции альбуминов. Достоверных изменений глобули­
не вой фракции не наблюдалось.
Увеличение альбуминовой фракции на 2А% свидетельствует о стимулирзпощем и защитном действии гумата натрия. Это базируется на
функциональной способности альбумина поддерживать осмотическое
давление сыворотки крови и предотвращать нарушение протеосинтетической способности печени (В.Г.Колб, В.С.Камышников, 1976;
В.А.Садыхов, 1975).
Содержание общего белка и белковых фракций (в г/л)
после введения гумата натрия
Группы
животных
Контроль
'. Гло
: Дни
•: Общий белок ', Альбумины
: ^ к
•
%к ;
:• наблюдения
\ М ± т :исх. : М ± м : исх. : М
:фону
фону
1
•
1
1
•
•
исх.фон
73,2+3,5 100
45,5+3,4
100
28,1
Ю-й
73,0+2,8
99
46,0+2,9
102
27,0
21-й
74,7+4,0
102
44,3+3,3
98,3
30,4
исх.фон
75,9+1,8 100
47,0+1,0
100
28,9
10-й
82,6+3,5 108,8 48,8+2,0
103
33,8
Опыт
,
21-й
89,9+2,0 118,4 58,6+1,0 124,6
Р < 0,001
Р<:0,01
Р
31,2
Содеркание глобулинов (в г/л) в сыворотке крови кролик
после введения гз^лата натрия
Дни
:
Белковые фракции глобулинов
Группы :
наблюдения: о^, -глобулины
: с^з. -ГЛОб.'У'ЛИНЫ : ^ -гл
животных :
. ./0 к
•
'.% к ;
• М ± т.
:исх. : и ± т
:исх.
:
М
t
т
»
•
:фону :
:($ону :
т
1
Контроль
Опыт
•
исх.фон
7,3+0,5
100
6,2+0,7
100
6,9+0,7
10-й
8,0+0,4
109
5,1+0,3
82
6,0+0,4
21-й
9,0+1,3
124
6,2+0,4
100
5,7+0,6
исх.фон
7,1+0,4
100
5,3+0,5
100
6,6+0,6
10-й
7,5+0,6
102
7,1+0,6
133
7,8+0,9
122
6,7+0,5
Р < 0,02
21-й
8,2+0,6
112
6,5+0,6
90
В процессе опыта установлены незначительные сдвиги в пока­
зателях фракций глобулинов крови (табл.3.II) с определенной
тенденцией наростания ci{^fi-
и
^ -глобулинов (данные стати­
стически не достоверны).
Для определения соотношения фракций альбуминов к глобулинам
был рассчитан коэффициент А/Г, который в сыворотке крови опыт­
ных животных был значительно выше контроля.
Полученные нами данные выявили определенную закономерность
в повьппении количества общего белка за счет альбуминовой фрак­
ции, чем и можно объяснить увеличение коэффициента А/Г у опытных
животных.
Как известно^ содержание белков в сыворотке крови животных
может колебаться в зависимости от возра,ста, физиологического со­
стояния, уровня кормления, условий содержания и т.д. Показатели
белкового состава сыворотки крови характеризуют потенциальные
возможности организма животных к усилению таких функций, как
рост, развитие, резистентность.
При изучении уровня содержания общего белка в сыворотке крови
экспериментальных животных было отмечено его повышение под влия­
нием гумата натрия. Аналогичные результаты были ползд1ены при вве­
дении препаратов неспецифического действия, в частности, ткане­
вых препаратов (Б.М.Королев, 1963; Б.Я.Передера, 1972; С.В.Сапож:ков , 1972; В.Б.Дорошков, 1966; Е.С.Шулюмова, 1963; С.И.Сева­
стьянов, А.И.Исмагулов, 1972; В.А.Лебедев, 1972; Д.М.Жидков,1977
и др.).
Вьшеизложенное дает возможность сделать заключение, что парен­
теральное введение гумата натрия приводит к положительному дейст­
вию на валшейшие показатели юлмунобиологической активности орга­
низма - фагоцитоз и активность лизоцима, а также содержание обще­
го белка и белковых фракций. Все это свидетельствует о фармако-
91
динамических свойствах гумата натрия как препарата,повышающего
общую неспецифическую резистентность организма.
Таким образом, результаты проверки биологической активности
гумата натрия на антитоксических, парабиотическом, фагоцитарном
тестах и данные биохимических исследований сыворотки крови характеризз^т этот препарат как адаптоген. Аналогичность характе­
ра действия .гумата натрия и тканевых препаратов по В.П.Филатову
как средств неспецифически повышающих резистентность организма,
побудило нас дать экспериментальную оценку защитному эффекту
препарата и определило дальнейшую программу наших исследований.
Учитывая отчетливо выраженные антитоксические свойства гумата
натрия, нарушения метаболизма в некоторых органах, были связаны
прежде всего с введением токсических веществ.
Поскольку гумат натрия является активатором оксидативного
обмена нами также были проведены исследования при воспроизведе­
нии кислородного голодания.
3.3. Влияние гумата натрия на организм при воспроизведении
общего кислородного голодания
Способность реагировать на изменения парциального давления
кислорода в окружающей среде свойственна большинству аэробов
(начиная с одноклеточных). В процессе эволюции увеличивалась
чувствительность организмов к недостатку кислорода и одновремен­
но совершенствовались механизмы, ответственные за поддержание
кислородного гомеостаза. В результате этого у млекопитающих име­
ется сложная система компенсаторных реакций, благодаря которым
обеспечивается поддержание стационарного уровня кислорода в ка­
пиллярах, необходимого для наиболее эффективного снабжения им
92
тканей и клеток. На системном уровне это условие выполняется за
счет трех основных факторов: изменение скорости кровотока, депо­
нирование кислорода в эритроцитах, изменение свойств кривой дис­
социации оксигемоглобина, что отражает способность гемоглобина
насыщаться кислородом в легких и отдавать его тканям. Указанные
процессы осуществляются за счет усиления функции органов внешне­
го дыхания, кровообращения, выброса форменных элементов крови
и т.д.
Эти реакции являются важнейшими приспособительныьли механизма­
ми при недостатке кислорода (Л.Д.Лукьянова, Б.С.Балмуханов,
А.Г.Уголев, 1982; К.П.Иванов, Ю.Л.Кисляков, 1979; В.А.Березов­
ский, 1975).
Целесообразность изучения профилактической эффективности гумата натрия при различных видах кислородного голодания базируется
на данных о его влиянии на системы, предупреждающие развитие кис­
лородного голодания растительного и животного организма (G*G.Дра­
гунов, 1980; Л.А.Христева, 1977; Л.А.Христева, 1957; М.А.Демина,
Л.Н.Вульф, 1977).
Исходя из вышеизложенного, вполне целесообразно изучить значе­
ние предварительного введения гумата натрия при моделировании
некоторых видов кислородного голодания.
По происхождению различают две разновидности кислородного го­
лодания: от пониженного парциального напряжения кислорода выды­
хаемого воздзгха и в результате патологических процессов в самом
организме (И.Р.Петров,1952). Первый тип кислородного голодания,
наиболее распространенный, встречается в условиях пребывания в
разрязкенной атмосфере.
Воспроизводится этот вид кислородного голодания в эксперимен­
те при пребывании животных в барокамере и в замкнутом простран­
стве. Мы провели опыты по изучению влияния гумата натрия на про-
93
должительность жизни животных в барокамере в 2-х сериях опытов.
Первая серия экспериментов посвящена изучению роли предвари­
тельного введения гумата натрия на состояние животных в барока­
мере. Основным критерием оценки эффективности препарата был по­
казатель продолжительности жизни белых мышей.
Опыты поставлены на 120 белых мышах по 30 в каждой группе.
Опытным животным предварительно в течение 3-х и 10-ти дней
вводили подкожно по 0,1 мл гумата натрия. Затравка животных про­
водилась в барокамере при давлении 350 мм рт.ст.
Таблица 3.12
Влияние предварительного введения гумата натрия на продолжи­
тельность жизни (в мин.) белых мышей в барокамере
Контроль
Опыт
:
М ± т
:
Р
:
:
Введение гумата натрия в течение 3-х дней
4,2 j; 0,4
4,6 + О»б
Контроль
Опыт
Введение гумата натрия в течение Ю дней
3,8 + 0,35
9,2 + 1,3
^0,001
Группы
животных
Представленные в табл.3.12 данные свидетельствуют о положи­
тельном влиянии гумата натрия на организм экспериментальных жи­
вотных .
Отчетливый эффект отмечается на 10-й день введения препарата,
когда продолжительность жизни белых глышей при давлении 350 ммрт.ст.
увеличилась почти в 2,5 раза по сравнению с контролем (контроль­
ные ^лыши погибли в среднем через 3,8 мин., а подопытные - через
9,2 мин, Р < 0,001).
3-дневное введение препарата не вызывает статистически досто-
94
верного положительного эффекта.
Во второй серии опытов общее кислородное голодание воспроиз­
водилось пребыванием животных в замкнутом пространстве по ранее
1лногократно апробированному методу с целенаправленным изучением
влияния различных доз гумата натрия на резистентность к гипоксии.
Опыты были поставлены на 150 белых мышах, которые были распре­
делены на 5 групп. 1{аждой группе опытных животных предварительно
в течение 10 дней вводили гумат натрия в дозе 0,05; 0,1; 0,3;
0,5 мл соответственно каждой группе. Результаты эксперимента пред­
ставлены в табл.3.13.
Таблица 3.13
Влияние предварительного введения различных доз 0,15ь раствора
гумата натрия на продол}кительность жизни (в глин.) белых
т,1ышей в згишнучои
Группы животных
:
М
пространстве
± т
:
Р •
Контроль
18,5 + 0,8
Опыт (0,05 мл)
20,3 + 2,0
Опыт (0,1 мл)
42,1 3 2,7
<0,001
Опыт (0,3 мл)
22,6 + 1>^
<0,05
Опыт (0,5 мл)
20,5 + 4,5
Как следует из таблицы 3.13, предварительное введение 0,1%
раствора гу^дата натрия удлиняет срок жизни животных при пребыва­
нии их в загякнутом пространстве.
Отчетливо установлена зависимость ползгченного эффекта от дозы
препарата. Наибольшая продолжительность жизни животных при этом
виде гипоксии наблюдалась после предварительного введения им
0,1 глл гумата натрия (более чем в 2 раза по сравнению с контро­
лем, Р < 0,001). Дозы 0,05 и 0,5 практически не удлинили срок
95
изни животных при затравке их в замкнутом пространстве.
Для иллюстрации полученных данных приводим рисунок 3.II.
%
гзо
гго
гп
гаа
по
по
ISO
ISO
120
т
т
5М
Зазы
- контроль-
5?
препарата
опыт
р~
6
ЙГ5
мл.
——
Рис.3.11. Влияние различных доз гумата натрия
на продолжительность жизни белых мышей
в замкнутом пространстве.
Результаты опыта с пребыванием животных в замкнутом пространтве после предварительного 10-дневного введения гумата натрия
лизки по характеру эффекта тем данным, которые были получены
ри затравке животных в барокамере.
Таким образом, полученные данные при воспроизведении кислородого голодания свидетельствуют о расширении приспособительных
озможностей организма животных после введения гумата натрия.
3.4. Влияние предварительного введения гумата натрия
на.течение и исход токсической анемии
Данные Н.В.Лазарева (1954) об общности механизма действия разичных лекарственных веществ, вызывающих состояние неспецифичеси повышенной сопротивляемости организма (СНПС) и результаты наих опытов позволили предположить проявление защитного эффекта
96
гумата натрия при введении токсических веществ, применяемых для
воспроизведения заболеваний у животных. Это предположение бази­
руется на аналогичности антитоксических свойств гумата натрия и
тканевых препаратов по В.П.Филатову.
Экспериментально-клинические наблюдения свидетельствуют о бла­
гоприятном влиянии тканевых препаратов на гемопоэз здорового
организма (С.PI.Севастьянов, М.М.Шахматов, 1972; С.В.Сапожков,
1972; А.Ф.Кузьмин, Ю.Г.Розугл, С.С.Черняк, 1972; wVEschbach
,
1955). Эти препараты нормализуют также функциональные и биохими­
ческие показатели крови при патологических состояниях (g.С.Чер­
няк, 1955; j.Mori
, 1958; Е.В.Ильинский, 1964; K.Hyrata ,
1969; А.с^.Щербина, А.Ф.Коротаева, 1970).
Существуют различные способы воспроизведения малокровия у ла­
бораторных животных: при нарушении нервной регуляции кроветворе­
ния, интоксикации, поражении кроветворного аппарата и др.
(В.С.Лаврова, 1952; К.И.Полковникова, В.А.Сорокина, 1952).
Нами было изучено влияние предварительного введения гумата
натрия на течение и исход токсической анемии. Выбор этого вида
анемии базируется на результатах экспериментальных исследований,
которые установили высокий антитоксический потенциал гуглата нат­
рия при отравлении организма стрихнином, строфантином, гексеналом (Т.Д.Лотош, Е.П.Сотникова, В.Н.Соколова, О.М.Запорожченко, I98I).
Модель анемии воспроизводилась внутривенным введением экспериментальньм животным 2-4-динитрофенилгидразина ( Oz-HnM-NHp)
по Я.Я.Соколовской,^1948), когда уже через 3 часа после введения
фенилгидразина появляются патологические структуры в эритроци­
тах. Фенилгидразин относится к группе кровяных адов, вызывающих
анемическое состояние гиперхромного типа (Н.В.Лазарев,1954).
97
В качестве объективных критериев, позволяющих исследовать ди[амику восстановительной функции крови, мы исследовали количестю эритроцитов, содержание гемоглобина и выживаемость животных.
Эксперименты приведены в 2-х сериях.
Первая серия опытов посвящена изучению влияния предварительюго введения гумата натрия кроликам при отравлении животных ток;ическими дозами фенилгидразина (0,015 г/кг). В качестве критеш я эффекта был использован показатель выживаемости животных.
Предварительно до затравки опытным кроликам подкожно вводили
),1^ раствор гумата натрия в дозе 0,5 мл в течение 3-х недель.
?-ми контрольным животным в той же дозе иньекцировался физиоло­
гический раствор.
Последующая затравка животных токсической дозой фенилгидразина вызывала 100^ гибель контрольных животных в первые 9 дней
эпыта (на 5,7,9 день), в то время как в группе с предваритель­
ным введением гумата натрия гибель животных наступала в более
поздние сроки '(на 7,9,16 день) и выживаемость составляла 60%.
Дяя иллюсттэации приводим рисунок 3.12.
1-
контроль
с и - ВыжиЬаемасть
2 - Опыт
^
-
смертность
/г
i,I
р
*в
/ S
1
н а о Л ю О е н и я
Рис.3.12. Влияние гумата натрия на выживаемость
кроликов при отравлении фенилгидразином.
98
Для выявления лечебно-профилактического действия ryi<iaTa нат­
рия была поставлена вторая серия опытов на 40 кроликах с пред­
варительным введением препарата в дозе 0,5 мл в течение 3-х не­
дель. С^енилгидразин вводился в дозе 0,01 г/кг. О состоянии функ­
ций эритропоэтической системьт судили по изменению количества
эритроцитов и содержанию гемоглобина в периферической крови.
Анализ ползгченных результатов позволяет заключить, что иссле­
дуемый препарат оказывает положительное влияние на течение и
исход фенилгцдразиновой анемии (рис.3.13).
Установлено, что предварительное введение гумата натрия кроли­
кам статистически достоверно повышает уровень гемоглобина и
эритроцитов крови.
Затравка животных фенилгидразином вызывает различную степень
снижения содержания гемоглобина и количества эритроцитов у кро­
ликов опытной и контрольной групп.
У животных опытной группы снижение числа эритроцитов достига­
ть
ло лишь 2,5x10 в литре при концентрации 61 г/л гемоглобина, в
то время как у контрольной группы уровень эритроцитов снижался
до IjQxIO-^*^ в литре при содержании гемоглобина 51 г/л.
Положительное влияние препарата проявилось и в ускорении вос­
становления этих показателей: к 23 дню у опытной группы и лишь к
30-35 дню - у контрольных животных.
Таким образом, предварительное введение веществ гумусовой при­
роды кроликам оказало благоприятное влияние на течение и исход
фенилгидразиновой aнe^лии, что регистрировалось по показателям ко­
личества эритроцитов и содеркания гемоглобина, а также по выжи­
ваемости животных контрольной и опытной групп (соответственно 60
и 80% к концу срока наблюдения).
100
3.5. Влияние предварительного введения гумата натрия
на развитие серотониновой язвы желудка
Язвенная болезнь является одной из наиболее распространенных
форм заболевания.
При экспериментальных поврелодениях желудка, вызываемых как
неирогенными воздеиствитш, так и введением токсических агентов,
нарушается энергетический обмен в ткани стенки желудка (И.С.За­
водская, Е.В.Морева, Э.А.Мигас и др.,1982; А.Т.Татевосян, Т.Л.
Вирабян, 1982). С.В.Аничков (1977) с сотрудниками полагают, что
причиной язвообразования различной этиологии является дефицит
энергетических ресурсов в ткани стенки желудка.
При нанесении чрезвычайного раздрагкения, как и при введении
различных токсических веществ, нарушается синтез белка в клетках
слизистой оболочки желудка. Замедление ресинтеза белка в клетке
приводит к отставанию пластических процессов и к нарушению вос­
становления основных жизненных структур, что, в частности, про­
является нарушением глитотической активации в клетках эпителия
слизистой оболочки. При этом нарушаются ранние стадии деления,
вследствие чего замедляется вступление клеток в цикл деления.
Иными словами, в клеточной популяции нарушается так называемое
генетическое равновесие, которое в норме обеспечивает структзфную целостность тканей.
В основе воспроизведения модели серотониновой язвы желудка
лежит активация фермента 5-окситриптофандекарбоксилазы и после­
дующее увеличение синтеза серотонина, в результате чего нару­
шаются трофические процессы в слизистой оболочке желудочно-ки­
шечного тракта и образуются язвы.
Серотониновую язву желудка ъш вызывали у белых крыс по методу
Комлош и Петец (1966): животным, голодавшим в течение суток, под-
lOI
кожно вводили серотонин из расчета 30 мг/кг массы. Через 24 часа
инъекции повторяли в дозе 20 мг/кг. Спустя 3 часа крыс забивали
путем декапитации, изв,л;екали желудок и вскрывали его по большой
кривизне.
Профилактическое действие препарата оценивали по количеству
крыс с язвами и степени изъязвления (среднее количество язв на
крысу).
В качестве интегрального показателя, указывающего на противо­
язвенную активность препарата использовали ицдекс Паулса:
Степень изъязвления х % крыс с язвами
100
Опыты по воспроизведению серотониновой язвы желудка у бельк
крыс проведены в виде 2-х серий на 98 животных.
При анализе результатов опыта не включены животные контроль­
ной группы, погибшие непосредственно после введения серотонина:
в I серии - 3 из 15 животных; во П серии - 12 из 26.
С целью более тщательной проверки значения гумата натрия на
степень развития серотониновой язвы в эксперимент были включены
3 контрольные группы, которые отражали влияние препарата без вве­
дения серотонина (I гр. - 8 животных), воспроизведение модели за­
болевания (2 группа) и контроль условий содержания и кормления
(3 группа - 8 животных).
Задача 1-ой серии опытов заключалась в изучении влияния пред­
варительного 10-дневного введения гумата натрия в дозе 0,5 мл
на развитие язвы желудка, вызванной серотонином. Результаты
исследования приводим в табл.3.14.
Из данных табл.3.14 следует, что предварительное введение гу­
мата натрия предотвратило развитие серотониновой язвы у одной
крысы из 15-ти (при наличии язв у всех контрольных животных).
Степень изъязвления (среднее количество язв на крысу) у подопыт-
102
ных животных составляла 1,7, а у контрольных - 1,8.
Таблица 3.14
Влия1ше гумата натрия на развитие серотониновой язвы
желудка белых крыс (1-я серия опытов)
Р
4^?[rpiJ^TY
животных
Контрольная
Опытная
:Число : Число крыс
: Степень : Иццекс
:крыс в: с язваш
:изъязвления: Паулса
;^РУ""^: абс. ; ъ1о '.
:
12
12
100
1,8
1,8
15
14
93,3
1,7
1,6
Показатель индекса Паулса у животных с предварительным введе­
нием препарата на 0,2 меньше по сравнению с контрольной группой.
Результаты 1-й серии опытов при 10-дневном предварительном
введении гутлата натрия животным практически не выявили защитной
реакции препарата^ при этом виде патологии.
Вторая серия опытов проводилась на 40 животных по той же схе­
ме, но с более длительным сроком предварительного введения гума­
та натрия (три недели). Результаты эксперимента представляем в
табл.3.15.
Таблица 3.15
Влияние 0,1^ р-ра гумата натрия на развитие серотони­
новой язвы желудка у крыс (2-я серия опытов)
Группы
животных
Контрольная
Опытная
:Степеь
: Индекс
•.Число : Число крыс
:изъязвления: Пауоса
:крыс в : с язвами
:группе : абс. : %
:
:
•
•
9
64,3
1,7
1,09
14
0,46
10
38,5
1,2
26
Из данных П серии опыта следует, что предварительное введение
гумата натрия предотвращает развитие серотониновых язв у 16 крыс
103
из 26 (5!?,6^). Степень изъязвления (среднее количество язв на
крысу) у подопытных животных составляла только - 1,2, в то вре­
мя, как у контрольных крыс (без препарата) - 1,7. Наиболее отчет­
ливое различие между подопытной и контрольной группами животных
проявилось на итоговом показателе - Ицдексе Паулса: 1,09 в конт­
рольной грзшпе и только 0,46 - у животных с введением гумата нат­
рия.
Две дополнительные группы крыс, характеризующие реакцию желу­
дочно-кишечного тракта только на введение гумата натрия, а такк^е
на условия содержания и кормления не выявили каких-либо отклоне­
ний от нормы.
Дяя демонстрации ползгченного эффекта представляем макрофото­
графии слизистых желудка белых крыс интактных (контроль на со­
держание), с воспроизведением серотониновой язвы без введения гу­
мата натрия и опытных (профилактическое введение гумата натрия
при моделировании язвы желудка) (Рис.3.14, 3.15, 3.16).
С целью выявления глубины поражения слизистой желудка у опыт­
ных групп животных были проведены патогистологические исследова­
ния.
У всех животных с воспроизведением язвы желудка без введения
гумата натрия был обнаружен дефект эпителия слизистой оболочки
желудка (рис.3.17), Для подавляющего большинства опытных живот­
ных с введением гумата натрия характерна картина воспалительно­
го процесса без нарушения целостности эпителия (рис.3.18).
Из результатов опыта (серия П) по воспроизведению серотонино­
вой язвы желудка на фоне предварительного введения белым крысам
гумата натрия следует, что испытуемый препарат значительно снилсает степень серотониновой интоксикации. Об этом свидетельствуют,
главным образом, такие объективные показатели развития язвы,как
ивдекс Паулса, макро- и ьшкрофотографии слизистой желудка у под-
104
опытных и контрольных животных,
Рис.3.14. Интактная крыса (контроль на содержание).
Нормальная гистоструктура слизистой
оболочки желудка.
Рис.3.15. Контроль. Воспроизведена модель серотониновок
язвы без введения гумата натрия. Глубокий де­
фект слизистой оболочки. Язва желудка.
105
Рис.3.16. Опыт. Введение серотонина на фоне гумата натрия.
Незнанительное воспал ение слизистой оболочки.
Язвы желудка нет.
Рис.3.17. Контроль на введение серотонина. Глубокий
дефект эпителия слизистой оболочки желудка
крысы. Окраска гематоксилин-зозином.
Увеличение х 90.
106
Рис.3.18. Опыт. Введение серотонина на фоне гумата
натрия. Слизистая оболочка желудка без
существенных изменений. Язвы нет.
Увеличение х 90.
Установлено также, что достоверное профилактическое (защит­
ное) действие гумата натрия наблюдалось только при сравнитель­
но длительном введении этого препарата не менее 3-х недель.
Полученные. нами данные в дальнейшем могут служить основанием
для разработки показаний применения гумата натрия с лечебно-про­
филактической целью в гастро-энтерологической црактике ветерина­
рии и медицины.
3.6. Влияние гумата натрия на устойчивость организма
при токсическом гепатите
Полученные нами данные экспериментов свидетельствуют о том,
что гумат натрия повьшает сопротивляемость организма к введению
целого ряда различных токсических веществ.
107
В последние годы токсический гепатит наряду с инфекционными
nopajKeHHfliviH печени составляет значительный удельный вес среди
болезней органов пищеварения.
Из химических веществ, вызывающих токсические гепатиты, наи­
более распространенными являются галоидозамещенные углеводороды
-
хлороформ, четыреххлористый углерод, дихлорэтан, тетрахлор-
этан и другие.
М.С.Hall (1922) впервые предложил четыреххлористый углерод в
качестве глистогонного средства для изгнания ангилостом. До на­
стоящего времени четыреххлористый углерод является эффективным
антигелыжнтиком в борьбе с различными гельминтозами сельскохо­
зяйственных животных. Однако, Г.А.Белкин, А.М.Шлецер (1934) при
лечении инвазпрованных гельминтами свиней обнаружили некротичес­
кие и дистрофические изменения в печени. Аналогичные данные были
получены на овцах (Н.М.Колесников, С.М.Туаев, I94I; Д.И.Панасюк,
Н.П.Цветаева, 1953). Эти изменения локализуются в центре пече­
ночных долек и выражаются в виде периваскулярного отека, крово­
излияний, пролиферации ретикуло-эндотелиальных клеток.
И.В.Иванов (1965) установил, что при внутриглышечном введении
четыреххлористого углерода в печени у крупного рогатого скота
возникают резкие морфологические изменения, характерные для гепа­
тита.
B.M.Phelps
, С.Н.Ни (1924), E.Friedman
,L.Eales
(1962)
обнаружили поражение печени с некрозом центральных частей долек
в результате отравления четыреххлористым углеродом (прием внутрь,
чистка одежды в невентилируемом помещении и др.). Изучена клини­
ческая картина острого токсического гепатита (А.Л.Мясников,1956;
И.Мадьяр, 1962; Е.М.Тареев, 1965; З.Н.Бондарь, 1956).
Б настоящее время считают, что токсический гепатит, вызывае­
мый четыреххлористьт'г углеродом, является классической моделью
108
для изучения лечебно-профилактического действия лекарственньк
веществ, а также степени морфологических и функциональных пора­
жений печени (Н.В.Лазарев, 1954; А.Фишер, I96I; А.Н.Эпштейн,
1962 и др.). Это лучшее средство для воспроизведения печеночной
патологии в экспериментальных условиях (Л.С.Рубецкой, Р.Н.Короткина, 1962; В.К.Верин, 1964).
Гистологические изменения в печени животных при хроническом
воздействии четыреххлористого углерода характеризуются появле­
нием мутного набухания, мелко- и крупнокапельного ожирения
(Л.Н.Судорейкина, 1957), в то время, как гликоген начинает исче­
зать ( H.P.Himsworth,
, H.P.Basse
, I960; А.Шишер, I96I).
Кроме того, нарушается кровообращение и лимфообращение в печени.
K.E,Ress , J.F.SmiTH
, 1963; Ю.С.Ротенберг, Н.А.Сер-
биновская (1972) установили с помощью электронной микроскопии,
что уже через час после введения малых доз четыреххлористого
углерода (0,25 мл/100 г массы) эндоплазматическая сеть исчезает,
наблюдается оттечность митохондрий и наличие в них жировых ка­
пель .
Учитывая объективность показателей поражения печени, ряд авто­
ров проверили на этой модели влияние гумата натрия. Так, Н.М.Гра­
новский с соавт. (1980) установили устойчивость гепатоцитов к
повреждающелг/ действию четыреххлористого углерода при пероральном
введении гумата натрия, что они связывают с усилением межклеточ­
ного взаимодействия и влиянием на мембранные структуры клеток пе­
чени (опыты с определением сорбции витального красителя - ней­
трального красного). В.П.Колотенко, Ю.П.Черненко, А.Я.Шарипкина
(1983) обнаружили, что гумат натрия вызывает переход метаболизма
клеток печени в состояние функционального напржения. Предваритель­
ное введение гумата натрия в условиях затравки крыс четыреххлорис-
109
тым углеродом приводит к снижению объема деструктивных процес­
сов в цитоплазме клеток печени. Защитное действие гумата нат­
рия авторы связывают с нормализацией структурно-функциональной
организации мембранных систем клеток.
При нарушении структуры гепатоциты не в состоянии синтезиро­
вать белки в достаточном количестве и таким образом оказывают
влияние на метаболизм. В основе экспериментального токсическо­
го гепатита лежат обменные сдвиги и только морфологическая кар­
тина не может в достаточной мере вскрыть патогенность этого за­
болевания.
Мы использовали модель токсического гепатита для оценки ле­
чебно-профилактического действия гумата натрия. Печень как ба­
рьер, преладе всего, реагирует на острое отравление, которое
сопровождается нарзппением синтеза белка и изменением активности
ферментов.
Эффективность гумата натрия оценивалась в этих условиях как
показателями функционального состояния печени, так и гистохими­
ческими исследованияьш гепатоцитов.
Токсический гепатит вызывали у белых крыс. Две грзшпы живот­
ных отражали условия содержания (I группа) и тяжесть воспроизве­
денного заболевания (П группа). Две другие контролировали влия­
ние гумата натрия на исследуемые показатели у интактных животных
(1У группа) и при отравлении четыреххлористым углеродом (Ш груп­
па) .
Согласно методике опыта (разработана в Днепропетровском НИИ
гастроэнтерологии) затравку животных проводили пероральным введе­
нием через зонд 50^ раствора четыреххлористого углерода в перси­
ковом масле в дозе 0,5 мл на 100 г массы животного в течение 2-х
дней. В день опыта, через день после воспроизведения отравления
четыреххлористым углеродом, белых крыс забивали декапитацией и
но
проводили биохимические и гистохиглические исследования.
3.6.1. Биохимические показатели крови экспериментальных
животных
Общий белок в сыворотке белых крыс определяли методом o.H.bowry
(I95I), активность церулоплазмина - по Г.О.Бабенко (1968), ак­
тивность аминотрансфераз (аланиламинотрансферазы - АЛТ и аспаратагшнотрансферазы - ACT) - по Райтман и Френкель (1957), в
модификации В.Г.Колб, В.С.Камьшшикова (1976). Полученные данные
приводим в таблице 3.16.
Отравление животных четыреххлористым углеродом, вызывая деге­
неративные изменения в печени, приводит к снижению общего белка
на 27,2^ (Р < 0,01), активности церулоплазмина - на 66,4%
(Р
< 0,001) и резкому, статистически достоверному повышению
активности М Т и ACT на 45,3 и 160,9^^ (Р
< 0,001). Результаты
опыта характеризуют глубину поражения печени
ссь^,
и вполне
согласуются с данными других авторов при этой патологии (В.Г.Колб,
В.С.Камьшников, 1982); Л.Л.Шимкевич, Ю.Е.Михайлов, 1973; О.Ю.Удрис, 1973; Н.М.Солнцева, В. С . Мищенко, 1973; К.В.Сенсова,
А.Т.Анна-Гельднева, 1973 и др.).
Столь глубокие дегенеративные изменения сопровождаются гибелью
части печеночных клеток (вымываются трансаминазы и повышается их
уровень в крови), нарушением общего белкового синтеза (И.И.Канюк,
Е.С.Гуренко, Л.И.Юсупова, 1973; Р.К.Кузнецова, В.П.Мажинская,
1973; В.А.Кулеба, В.Н.Колмаков, 1973).
Для определения значения предварительного введения гумата нат­
рия при этой патологии была проведена на специальной группе интактных животных проверка влияния препарата на эти показатели
(1У группа). Установлено, что введение гумата натрия белым кры­
сам вызывает увеличение на 21,4% (Р < 0,001) общего белка в сы­
воротке крови с тенденцией повышения активности церулоплазмина
Влияние гуглата натрия на некоторые биохимические пок
крови белых крыс в условиях токсического гепати
Группы
животных
^-^
Интактные
животные (I)
: Церулоплазмин
: (в усл.ед.)
Общий белок
(г/л)
42,0+3,1
:контр.: '' -^
. /о л
М t т.
15,0+4,2
29,2+0,75
100
Опыт
30,6+3,6
(введение СС1и)
ТП)
^
Р < 0,01
72,8
9,83+3,3
33,6
(вве^^ние гумата 35,0+3,6
натрия+СС14)
Р <^ 0,01
83,3
Р < 0,001
Опыт
(введение гумата 51,()+4,2 121,4 32,1+1,2
"^(fyf
Р < 0,001
АлТ
:контр.
100
31,0+1,18
Аминотр
:
;
21,8+2,6 1
Р < 0,001
106,1
12,5+2,6
Р < 0,01
109,9 14,1+2,3
112
на 9,9^ (Р < 0,2). Уровень М Т и ACT остается без изменений.
Наибольший интерес представляют данные группы животных с
воспроизведением токсического гепатита на фоне предварительного
введения гумата натрия. Препарат уменьшает степень поражения пе­
чени при токсическом воздействии CGI^, о чем свидетельствует
предотвращение резкого снижения уровня общего белка по сравнению
с группой отравленных животных без введения препарата (на 27,2^
и на 16,7%).
Защитное действие гумата натрия убедительно проявилось и на
показателе активности церулоплазьшна. Отравление животных CGI^
приводит к резкому снижению активности этого фермента на 66,4%
(Р < 0,001), предварительное же введение гумата натрия сохра­
няет этот уровень с некоторой тецденцией к повышению (на 6,1%,
Р < 0,5).
Благоприятное действие гумата натрия характеризуют и показа­
тели активности аминотрансфераз: ACT в группе затравленных живот­
ных на фоне предварительного введения гумата натрия увеличивается
только на 87% (Р < 0,01), а без введения гумата натрия - на 160^.
Уровень АЛТ даже снижается на 20% (Р < 0,01) в опытной группе с
введением гумата натрия при увеличении этого показателя на 45,3%
(р< 0,001) у животных без предварительного введения препарата.
Таким образом, сравнительные данные биохимических показателей
в группах затравленных животных с предварительным введением гума­
та натрия и без него свидетельствзгют об отчетливо выраженном бла­
гоприятном влиянии исследуемого препарата при этой патологии.
3.6.2. Гистохимические исследования гепатоцитов
Некоторые стороны механизма действия гумата натрия изучены
гистохилшческими методагли с использованием фотометрии. Определя­
лись суммарные белки (основные и кислые) (В.Г.Елисеева с соавт.
из
1967), карбоксильные (реакцией
R.J.Barrnett , A.M^elignian,
1958), сульфгидрильные и дисульфидные (R.J.Barrnett , A.M.Seligman ^ 1952; Л.М.Герштейн, 1966) функциональные группы белков,
а также гликоген (ПМК-реакцией) в цитоплазме гепатоцитов*^. Пе­
чень фиксировали в охлажденной смеси Бродского, соблюдая усло­
вия одновременной обработки контрольного и опытного материала.
Из ткани, залитой в парафин, изготовляли срезы толщиной 7-10 мкм,
стандартизация достигалась путем монтирования их на одном блоке.
Количественная оценка гистохимических реакций проводилась на
цитофотометре MI1I-5. В каждом наблюдении фотометрировали в сред­
нем 50 клеток (при 3-5-кратном их измерении).
Для определения содержания изучаешь ингредиентов на одну клет­
ку, величину средней оптической плотности умножали на средний
объем цитоплазкш гепатоцитов и выражали в условных единицах. Пос­
ледний находили по разности между объемом всей клетки и объемом
ддра. Расчеты производили по формуле эллипсовда вращения
= -^-D-d
; ии
о-
v =
(соответственно большой и малый диаметры
клеток), измеряя на препаратах с помощью винтового окуляр-микро­
метра M0B-I-I5 X.
После острой затравки животных четыреххлористым углеродом по­
ражение печени сопровождается резко выраженным нарушением метабо­
лизма. Об этом свидетельствует почти наполовину сниженное количе­
ство сульфгидрильных групп и гликогена (Р -^ 0,001) (табл.3.17).
Более, чем на 30% (Р < 0,001) у^леньшилось содержание СООН-групп
глутаглиновой кислоты. Дисульфиды цистина увеличились на 33,1%.
^' Данный раздел работы по гистохимическому анализу выполнен со­
вместно с патогистологом, кандидатом медицинских наук Сотниковой Еленой Петровной, которой мы выражаем искреннюю благо­
дарность за оказаннзж) помощь.
114
Полученные показатели указывают на значительное снижение защит­
ной функции гепатоцитов при введении четыреххлористого углерода.
Таблица 3.17
Цитохимические показатели гепатоцитов после затравки
животных четыреххлористым углеродом
Содержание,уел.ед:Процент: р
ОДтохимические: Шжтроль ;К-во
:обсле• v
. •^
показатели ; о п ы т
:дованных
Гконтро-:
±tn
м
:клеток
:лю
:
150
118,5
5,36
Общий белок
контроль
185
109,2
6,48
92,2
опыт
СООН-гр.
глутаминовой
кислоты
Сульфгидрильные гр.
цистеина
контроль
опыт
170
200
47,1
32,2
2,70
2,54
68,4 <0,001
контроль
опыт
180
210
55,6
29,1
3,18
2,70
52,3 <0,001
Дисульфидные гр.
цистина
контроль
опыт
185
215
32,0
42,6
2,64
3,18
133,1 <0,001
Гликоген
контроль
опыт
190
230
180,4
86,2
9,80
6,35
47,8 <0,001
Введение гумата натрия животным приводит к увеличению общего
белка (на 18%, Р < 0,01), гликогена (на 22%, Р < 0,001), сохране­
нию сульфгидрильно-дисульфидного равновесия с некоторой тенден­
цией к увеличению количества сульфгидрильных групп (на 34,1%,
Р < 0,001) в цитоплазме гепатоцитов (таблица 3.18).
Известно, что при нормальном уровне окислительно-восстанови­
тельных процессов в клетках печени сульфгидрильные группы преоб­
ладают над дисульфидными.
Нами выявлено также зкономерное повышение глготаминовой кисло­
ты (при количественном определении карбоксильных групп), в гепатоцитах после курсового введения гумата натрия (на 41,6%,Р<0,001),
115
которая играет одну из ведущих ролей в азотистом обмене.
Таблица 3.18
Цитохимические показатели гепатоцитов животных под влиянием
гумата натрия
•
:Содержание, усл.ед .;Процент
Цитохимические :Контроль; К-во
•Р
обследо­
-: к
: ванных
показатели :опыт
Гконтроклеток •
•
•
«
5,60 :лю
170
136,1
Общий белок
контроль
•
4
•
1
опыт
•
•
СООН-гр.
глутаминовой
кислоты
контроль
опыт
190
180
210
161,0
8,45
118,3
<0,02
54,8
77,6
2,40
3,70
141,6
<0,001
Сульфгид­
рильные гр.
цистеина
контроль
опыт
185
210
42,5
57,0
2,70
3,10
134,1
<0,001
Дисульфидные гр.
цистина
контроль
опыт
185
220
25,6
29,2
1,60
114,1
^0,05
Гликоген
контроль
опыт
200
220
160,7
196,3
7,64
9,20
122,1
<0,001
Данные, полученные при введении гумата натрия, характеризуют
его как потенциальное антитоксическое профилактическое средство,
так как при его введении в гепатоцитах наблюдается повышение гли­
когена,
SH - групп цистеина, глютаминовой кислоты. Это положе­
ние наиболее отчетливо подтверждает анализ эксперимента при вос­
произведении токсического гепатита на фоне предварительного вве­
дения гумата натрия (табл.3.19).
Гумат натрия удерживает столь важные показатели как гликоген,
сульфгидрильные группы цистеина от резкого снижения, которое наб­
людается при отравлении животных четыреххлористым углеродом. При
этом установлено сохранение содержания глутаминовой кислоты на
уровне интактных животных. Аналогичный положительный характер
116
действия гумата натрия проявился и на показателе дисульфидов.
В отличие от резкого возрастания их при остром гепатите ( на
33,1^, Р< 0,001) наблюдается даже некоторая тенденция к сниже­
нию дисульфидов на 5 , ^ (рис.3.19).
Таблица 3.19
Цитохтлические показатели гепатоцитов при отравлении четыреххлористым углеродом на фоне предварительного введения гумата
натрия
i Содержание,усл.ед.: Про цент: Р
Цитахимические!Контроль:К-во
•
« обследо­
5к8нтропоказатели
; опыт :ванных :
± т : лю
м
:
.
•клеток ::
•
контроль
опыт
180
190
121,2
128,8
4,98
6,44
106,2
СООН-гр.
глутаминовой
кислоты
контроль
опыт
170
200
50,6
59,3
3,35
4,78
117,2
<0,02
Сульфгидрильные
группы
цистеина
контроль
опыт
185
210
47,3
38,8
3,40
3,60
82,0
^0,05
Дисульфид­
ные гр.
цистина
контроль
опыт
160
180
27,5
25,9
2,62
3,70
94,2
<0,5
Гликоген
контроль
опыт
190
210
175,4
136,9
10,30
9,40
78,0
<0,001
Общий бело
Таким образом, гистохимические показатели позволили установить,
что предварительное введение животным гумата натрия повышает ме­
таболическую устойчивость печени к повреждающему воздействию четыреххлористого углерода. Об этом свидетельствует, прежде всего,
сохранение сульфгидрильно-дисульфидного равновесия, предотвраще­
ние резкого снижения содержания гликогена, глютаминовой кислоты
и общего белка.
117
I
I - вбедемие CCti,
УТЛ - ^Вменив CCtif
Hcf qiOHQ 9умата
натрия
•/.
10
iso\
m
fiO
fOO
HO
90
О
V7\
rz3.
во
70
60
50
UO
I
I
II: I
I
§
Го
Рис.3.19. Цитохимические показатели гепатоцитов после
затравки четыреххлористым углеродом на фоне
предварительного введения гумата натрия.
(100^ - показатели гепатоцитов интактных
животньж).
Гумат натрия при профилактическом введении повьшает сопротив­
ляемость организма к введению четыреххлористого углерода. О защит­
ной роли препарата свидетельствует сохранение на сравнительно внсоком уровне активности церулоплазмина, предотвращение резкого
повышения активности аланинаминотрансферазы и аспаратаминотрансферазы сыворотки крови и данные гистохимических показателей.
Однотипно направленное положительное влияние гумата натрия
при остром гепатите, которое установлено при биохимических и гис-
118
тохимических исследованиях подтверждает достоверность адапта­
ционных свойств изучаемого препарата.
Установленные нами сдвиги в содержании функциональных групп
тиоловых соединений, а также сохранение концентрации гликогена
под влиянием гумата натрия при экспериментальном гепатите,опре­
деляют, в известной степени, состояни,е повышения антитоксичес­
ких свойств печени.
Из всех функций печени наибольший интерес при токсикохимических повреждениях представляет ее антитоксическая, обезвреживаю­
щая функция.
3.7. Влияние гумата натрия на антитоксическую
функцию печени
Исходя из актуальности проблемы поиска биологически активных
веществ мало или совершенно нетоксических для повышения сопротив­
ляемости организма к воздействию различных неблагоприятных факто­
ров и полученные нами данные о благоприятном влиянии гумата нат­
рия при воздействии токсических веществ №i считали целесообраз­
ным выявить влияние этого препарата на антитоксическую функцию
печени. Известно, что снижение токсичности отравляющих веществ
связано с функциональными свойствами печени и этот уровень можно
установить по тесту длительности гексеналового сна на фоне пред­
варительного парентерального введения гумата натрия (биологичес­
кая проба по Н.В.Лазареву, 1954).
После курсового введения кроликам гумата натрия (по 0,5 мл в
течение 3-х недель через день) проводили внутривенные инъекции
гексенала (35 мг на I кг массы). Контрольным животным предвари­
тельно по той же схеме вводили физраствор.
Установлено отчетливое повышение антитоксической функции пече­
ни под влиянием гумата натрия. Об этом свидетельствует сокращение
119
в 1,5 раза продолжительности гексеналового сна по сравнению с
контрольными животными (19,9 мин. - у опытньтх кроликов с введе­
нием гумата натрия и 33,4 мин. - у контрольных, Р < 0,001).
Данные биопробы о повышении антитоксической функции печени
под влиянием гумата натрия объясняют одну из сторон механизма
защитных свойств препарата при воздействии различных неблаго­
приятных факторов.
Результаты эксперимента отчетливо установили, что гумат натрия
является мощным фактором повышения неспецифической резистентности
организма.
Об этом свидетельствуют данные с привлечением классических
фармако-биологических методик (тесты) и при моделировании забо­
леваний (фенилгидразиновая анемия, серотониновая язва желудка,
токсический гепатит, кислородное голодание).
Открытые нами некоторые новые стороны механизма действия гума­
та натрия подтверждают широкий спектр его фармакодинамики и при­
надлежность к группе адаптогенов.
120
З А К Л Ю Ч Е Н И Е
Одной из фундаментальных проблем современной медицины, ветери­
нарии и животноводства является разработка биологически активных
соединений из натурального сырья, как средств повьлпения неспецифической резистентности организма. Значение этих средств усили­
вается известным положением, что только на прочной основе общей
сопротивляемости организма длительно сохраняется и специфический
иммунитет.
Основную цель наших исследований составляет экспериментальное
обоснование возможности использования биологически активного гумата натрия из торфа для повышения неспецифической резистентно­
сти, изучение влияния его на некоторые физиологические функции
организма в норме и при воздействии различных неблагоприятных
факторов,
Перспективность выполнения этой задачи базируется на широком
внедрении гумата натрия в растениеводстве, высоком потенциале
его биологической активности, доступности и простоте технологии
извлечения его из торфа, наличии обширной сырьевой базы и, воз­
можно, высоким экономическим эффектом, позволяющим получить два
препарата (торфот и гумат натрия) с различным набором биологиче­
ски активных соединений из одного и того же сырья (Л.А.Христева,
Р.Н.Кравченко, Т.Д.Лотош, В.А.Реутов, 1983),
Первым этапом работы явилось определение оптимально удобной
формы введения животным биологически активных гуминовых веществ
для постановки последующих экспериментов.
Результаты всех опытов подвергнуты статистической обработке.
Совместно с Проблемной лабораторией гуминовых удобрений Днеп­
ропетровского сельскохозяйственного института нами разработана
121
оптимальная технология приготовления гумата натрия и утверждены
Технические условия (ТУ-46-29-870-31) на препарат (см.в приложе­
нии) .
Для установления возможности применения гумата натрия в каче­
стве средства, повышающего неспецифическую резистентность орга­
низма, необходимо определить влияние его на физиологические функ­
ции организма здоровых животных.
Выявление уровня физиологической активности гумата натрия про­
водилось при воздействии различных неблагоприятных факторов.
Для экспериментального обоснования применения исследуемого
комплекса изучался защитный эффект гумата натрия при нар^ушении
гемопоэза, функции печени, трофических процессов слизистой обо­
лочки желудка.
Наши исследования по влиянию препарата на иммунологическую
реактивность, ферментные системы и антитоксическую функцию пече­
ни характеризовали некоторые новые стороны механизма действия гу­
мата натрия.
При решении поставленных в работе задач* были использованы спе­
циальные методы исследования с привлечением физиологических, био­
химических, гистологических, гистохимических методик.
При контроле уровня физиологической активности нами определе­
на оптимальная концентрация гумата натрия - 0,1% раствор, кото­
рый применялся в наших дальнейших исследованиях.
При изучении влияния гумата натрия на физиологические функции
организма были проведены многочисленные исследования на различ­
ных видах лабораторных животных (белые мыши, белые крысы, кроли­
ки, морские свинки, лягушки) со сроком наблюдения до б месяцев.
Морфологический состав крови (количество эритроцитов, лейко­
цитов и содержание гемоглобина) сохранялся на уровне физиологи­
ческой нормы с некоторой тецценцией к увеличению количества эри­
троцитов и гемоглобина.
122
Оценка влияния гумата натрия на сердечно-сосудистую систему
проводилась по выраженности его действия на тонус изолированных
сосудов уха кролика (по Писемскому) и сократительную способность
изолированного сердца лягушки (по Штраубе). Завершающим этапом
этих исследований были данные электрокардиограммы на кроликах при
длительном введении препарата.
Гумат натрия по первым двум показателям исследовался в различ­
ных концентрациях (0,1% раствор, в разведении 1:10, 1:100,
1:1000). Эффект снижения аглплитуды и частоты сердечных сокраще­
ний, а также сужение изолированных сосудов под влиянием гумата
натрия в концентрации 0,1% снимается контрольным раствором. Сле­
довательно, процесс этот обратимый. Проверка последующих разведе­
ний гумата натрия не вызвала подобного эффекта. Изменений на ЭКГ
кролика не обнаружены.
Нашими исследованиями установлено, что гумат натрия, применяе­
мый в данной концентрации, не оказывает побочного влияния на сер­
дечно-сосудистую систему. Сосудосуживающий эффект практически
снимается в организме разведением в крови животных при курсовом
введении. Подобным действием на тонус сосудов обладает и другой
препарат из торфа - торфот (В.П.Соловьева, Б.Н.Соколова, I97I).
При гистоморфологических исследованиях не выявлено повреждаю­
щего влияния препарата на ткани таких жизненно важных органов,
как сердце, печень, легкие, почки, надпочечники и щитоввдная желе­
за при длительном его введении. Препарат при парентеральном введе­
нии, в дозах многократно превышающих терапевтическую, не вызывает
тератогенного и эмбриотоксического действия. Гумат натрия не обла­
дает аллергизирующими свойствами (при проверке общей и местной
аллергических реакций), не вызывает повышения температуры (апирогенен).
123
При определении острой токсичности гумата натрия был установ­
лен уровень
L»flgQ,равный 0,536 г на кг массы, что свидетельст­
вует о практической безвредности препарата.
Полученные нами данные об отсутствии побочного действия гума­
та натрия и его безвредность послужили основанием для дальнейше­
го более глубокого изучения.
Базируясь на опыте разработок препаратов неспецифического дей­
ствия из натурального сырья, по аналогии с тканевыми препаратами
по В.П.Филатову, проведена оценка физиологической активности гу­
мата натрия при воздействии различных неблагоприятных факторов
(введение строфантина, стрихнина в токсической дозе, гипоксия).
'При нарушении проводимости сердечной мышцы лягушки токсичес­
кой дозой строфантина предварительное введение гумата натрия в те­
чение 10 дней продлевает работу сердца опытных животных на 48,7%
(Р, < 0,01) по сравнению с контрольной группой. Установлена зако­
номерность зависимости эффекта действия от дозы препарата.
Особый интерс представляют данные, полученные на белых ьшшах
при введении токсической дозы стрихнина, который вызывает резкое
угнетение тормозных процессов цнс и приводит к 100% гибели конт­
рольных животных в дозе 0,01 мл на I кг массы. Предварительное
введение 0,1 мл гумата натрия в течение 10 дней сохраняет жизнь
55% опытных животных после затравки их стрихнином. Еще более вы­
раженный защитный эффект гумата натрия установлен при введении
препарата в дозе 0,3 мл: выживаемость животных при отравлении
стрихнином достигала 70%.
Таким образом, гумат натрия при введении отравляющих доз стро­
фантина и стрихнина улучшает проводимость сердечной мышцы и сни­
жает уровень угнетения тормозных процессов в цнс. Эти данные сви­
детельствуют о наличии антитоксических свойств гумата натрия.
124
При этом выявлено, что степень антитоксического действия зависит
от дозы гумата натрия и сроков предварительного введения его.
Оптимальный срок предварительного введения - Ю дней в дозе 0,3мл.
Результаты исследования влияния гумата натрия на восстановле­
ние функциональных свойств изолированной мышцы лягушки при воз­
действии 1% раствора хлористого калия (альтерирующий агент) под­
тверждает высокий антитоксический эффект препарата. Парабиотическое действие хлористого калия на изолированную мышцу под влия­
нием гумата натрия снимается в 2 раза быстрее, чем в контрольном
растворе Рингера, что свидетельствует о его высокой физиологичес­
кой активности. Установлено, что столь малая концентрация как
0,001^ раствора препарата сохраняет статистически достоверный
уровень активности.
Отчетливо выраженное уменьшение срока восстановления сократи­
тельной способности изолированной мышцы после парабиоза под влия­
нием гумата натрия позволило нам рекомевдовать этот тест как ме­
тод биологической стандартизации препарата в условиях производст­
ва. За единицу биологической активности препарата принимается
ускорение выхода изолированной мышцы из состояния парабиоза не ме­
нее чем на 30% по сравнению с контролем. Зтот показатель впервые
введен в Технические условия (ТУ) на препарат гумата натрия и
утвержден Шармсоветом МСХ СССР.
Полученные нами данные о высоком уровне антитоксического дей­
ствия препарата при введении отравляющих веществ свидетельствуют
о широком спектре его биологического действия.
Известно, что любое влияние неблагоприятного фактора на орга­
низм сопровождается определенным видом кислородного голодания.
Вот почему изучение роли гумата натрия при одной из разновидно­
стей общего кислородного голодания (от понижения парциального на­
пряжения кислорода вдыхаемого воздуха) является целесообразным и
125
практически необходимым. Кислородное голодание у белых мышей вос­
производили изменением давления в барокамере и при пребывании их
в замкнутом пространстве (Н.В.Лазарев, 1954).
Результаты эксперимента свидетельствуют о положительном влия­
нии гумата натрия при этой разновидности общего кислородного голо­
дания. Следует отметить аналогичность и взаимоподтверждаемость
эффекта гумата натрия, полученного при использовании 2-х показа­
телей - пребывания животных в барокамере и в замкнутом простран­
стве: продолжительность жизни белых мышей при Ю-дневном курсе
предварительного введения гумата натрия увеличилась в 2-2,5 раза
по сравнению с контрольными животными.
Подробно изученный механизм адаптации к гипоксии дает некото­
рую возможность объяснить положительное значение предварительно­
го введения гумата натрия при затравке животных в барокамере и в
замкнутом пространстве активацией приспособительных реакщй, на­
правленных на удержание постоянства парциального давления кисло­
рода в крови, усилением процессов энергетического обмена и повы­
шением общей резистентности тканей. Это предположение базируется
на данных литературы, свидетельствующих о том, что введение гума­
та натрия оказывает влияние на обменные процессы в тканях. Гумат
натрия понижает активность каталазы и повышает одновременно актив­
ность пероксидазы крови (Г.^.Ященко, Н.И.Пидтесаный, 1983). Отме­
чается тецценция к снижению активности щелочной фосфатазы (А.Ф.
Кузьмин, А.С.Чалый, А.В.Орлова, Т.Д.Лотош, 1983). Гумат натрия,
в силу своей химической природы, обладает донорно-акцепторными
свойствами и способствует активации окислительно-восстановитель­
ных процессов в клетках растений (Л.А.Христева, 1957), оказывая
положительное влияние на термодинамическое состояние организма
(Л.А.Христева, В.А.Реутов, А.Н.Старостин, 1968; А.Н.Старостин,
1968; Л.А.Христева, 1977).
126
Повышение устойчивости экспериментальных животных к гипоксии
очевидно аналогично механизму действия других физиологически ак­
тивных веществ и может быть связано также с воздействием их на
анаэробное дыхание (В.П.Соловьева, 1972), Это положение подтверж­
дается полученными нами гистохимическими исследованиями гепатоцитов, свидетельствующими о достоверном увеличении содержания сульфгидрильных и дисульфидных групп в цитоплазме гепатоцитов, с преоб­
ладанием увеличения sH -групп под влиянием гумата натрия (на
34,1% - SH -группы и лишь на 14,1% - s-S
-группы) (табл.3.18),
Обнаруженные изменения могут быть расценены как отражение воз­
растания функциональной активности гепатоцитов под влиянием гума­
та натрия. Стимуляция гуматом натрия анаэробных процессов может
играть положительную роль, так как известно, что гликолиз обеспе­
чивает клетки энергией в неблагоприятных и несвойственных для них
гипоксических условиях, а повышение функциональной активности тка­
ни всегда сопровождается усилением гликолиза.
Вполне понятно, что стиь/гуляция всех этих систем приводит к уси­
лению энергетического обмена, активации различных биохимических
процессов и повышению резистентности организма при кислородном
голодании и при воздействии других неблагоприятных факторов.
Согласно задачам исследований, были поставлены опыты изучения
влияния гумата натрия при нарушении гемопоэза, функции печени и
трофических процессов слизистой оболочки желудка.
Результаты наших экспериментов установили высокий уровень физио­
логической активности гуглата натрия, что позволяет предположить
защитный эффект его при токсическом воздействии фенйлгвдразина
(нарушение гемопоэза), четыреххлористого углерода (нарушение функ­
ции печени), серотонина (нарушение трофических процессов слизис­
той оболочки желудка).
127
В результате экспериментов было установлено, что гумат натрия
облегчает течение патологического процесса. Об этом свидетельст­
вуют результаты оценки степени восстановления некоторых функцио­
нальных свойств организма, выживаемость животных, характер и сте­
пень выраженности изменений в соответствующих органах и тканях.
При нарушении гемопоэза у кроликов введением фенилгидразина,
который вызывает анемию гиперхроглного типа (Я.Я.Соколовская, 1948),
защитная роль предварительного введения гумата натрия наиболее от­
четливо установлена по показателю выживаемости животных (I серия).
В опытной группе погибло 40^ животных только к 30-му дню после
воспроизведения анемии, при 100^ гибели контрольных животных уже
на 7-й день опыта (рис.3.12).
Этот эффект подтверждается и во второй серии опытов при введе­
нии более щадящей дозы фенилгидразина. Показатели крови (количест­
во эритроцитов и содержание гемоглобина) удерживается на сравни­
тельно высоком уровне по сравнению с контролем, что облегчает те­
чение и исход токсической анемии.
При изучении защитного влияния предварительного введения гумата
натрия на трофические процессы слизистой оболочки желудка экспе­
риментальных животных мы руководствовались данными клиницистов о
подавлении энергетического обмена в слизистой оболочке желудка
при этом заболевании (А.Т.Татевосян, Т.Л.Бирабян, 1982; И.С.Заводская и др., 1982). Известно, что действие гумата натрия на биосин­
тез нуклеиновых кислот связано с увеличением энергетических возмож­
ностей клеток (Л.А.Христева, 1977; А.И.Горовая, Н.М.Грановский,
Л.В.Кравцова, Т.Б.Беньковская, 1977; Л.Ш.Бобырь, Л.А.Епишина,1980).
Можно предположить, что применение веществ, стимулирующих энерге­
тический обмен и синтез нуклеиновых кислот предотвратят развитие
язвенного процесса в слизистой оболочке желудка.
128
Серотониновуго язву желудка вызывали у белых крыс по методу
Комлош и Петец (1966). Этот метод основан на нарушении энергети­
ческого обмена в тканях стенки желудка, активации фермента 5-окситриптофандекарбоксилазы с последующим увеличением синтеза серотонина, что приводит к нарушению трофических процессов и образо­
ванию язв.
Предварительное введение гумата натрия предотвращает развитие
серотониновых язв в 61,5^, уменьшает степень изъязвления слизис­
той желудка (1,2 у подопытных животных и 1,7 - у контрольных жи­
вотных без введения препарата), что соответственно снижает индекс
Паулса до 0,46 у подопытных крыс (при 1,09 у контрольных).
Установнено, что выраженное защитное действие гумата натрия
наблюдалось только после длительного его применения (в течение 3-х
недель). На фоне 10-дневного предварительного введения гумата нат­
рия отмечалась лишь тецценция к облегчению течения эксперименталь­
ных язв.
Таким образом, гумат натрия, повышая резистентность организма
к воздействию серотонина, отчетливо снижает степень интоксикации,
оказывая достоверный профилактический эффект, который можно объяс­
нить повышением энергетического обмена, активацией клеточного ды­
хания и подавлением синтеза серотонина в тканях стенки желудка
экспериментальных животных.
Полученные нами данные согласуются с результатами исследований
В.П.Колотенко, Н.М.Грановского (1983). Авторы вызывали иммобилизационный стресс, который приводил к язвенному процессу в стенках
желудка. При предварительном пероральном применении гумата натрия
предупреждается развитие язвенно-некротических поражений слизисстой оболочки желудка. Гумусовые соединения проявляют противояз­
венный эффект, воздействуя на клеточную поверхность и межклеточ­
ные контакты,эпителиоцитов желудка. А.Н.Макаренко, Н.А.Доманшева
129
(1983) считают, что в механизме действия гумата натрия при этом
виде патологии ведущую роль играет повышение реактивных свойств
Щ С за счет улз^чшения обменных процессов в адренэргических и
холинэргических нейронах и повышение функциональной активности
симпатического и парасимпатического отделов ЦНС.
Поскольку ранее было выявлено, что гзшат натрия обладает высо­
ким потенциалом антитоксического действия, логично было исследо­
вать его влияние на патологические процессы, которые сопровож­
даются повреждением ткани печени. Именно печень является барье­
ром при различных токсических воздействиях. Известно, что больша часть гумата натрия метаболизируется в этом органе (A.S»Visser,
1972).
Нами были проведены исследования по выявлению предварительного
введения гумата натрия на биохимические показатели крови и гисто­
химическое состояние гепатоцитов при нарушении функции печени у
белых крыс введением четыреххлористого углерода. Полученные ре­
зультаты свидетельствуют о ярко выралсенном защитном эффекте изу­
чаемого препарата при этом виде патологии.
Ранними признаками, констатирующими нарушение функционального
состояния печени у животных с токсическим гепатитом без введения
гумата натрия является снижение содержания общего белка(на 27,2^),
активности церулоплазмина (на 66,4^) и, особенно, резкое возра­
стание активности ферментов переаминирования (МТ-на 45,3^, ACT
- на 160,9^) в крови. Предварительное введение исследуемого пре­
парата экспериментальным животным способствует сохранению содер­
жания общего белка, активности церулоплазмина, что сопровождает­
ся снижением уровня активности аланинаминотрансферазы (на 65,3^)
и аспаратаминотрансферазы (на 73,2^) (по сравнению с животными
без введения препарата).
Избранные нами гистохимические.показатели для характеристики
130
состояния гепатоцитов - количество общего белка (основные и кис­
лые фракции), карбоксильные группы глготаминовой кислоты, сульфгодрильные, дисульфидные группы, а также кгликоген - отражаяэт
основные метаболические процессы, происходящие в клетках печени.
Отравление животных четыреххлористым углеродом приводит к отчет­
ливо выраженным изменениям этих показателей в сторону угнетения
обмена веществ. При введении гумата натрия проявление токсическо­
го действия СС1^ менее выражено. Так, у животных без введения пре­
парата (контроль) наблюдалось резкое увеличение дисульфвдных (на
33,1^, Р < 0,001) и уменьшение сульфгидрильных групп (на 47,7^,
Р < 0,001), в то время как в опыте (затравка животных с предва­
рительным введением гумата натрия) количество дисульфидных групп
сохранеется на уровне показателей интактных животных (Р < 0,5),
Не менее характерны и показатели гликогена. Его содержание снизи­
лось у контрольных животных на 52,2^ (Р < 0,001), а у опытных
лишь на 22,0^ (Р < 0,001). Количество карбоксильных групп в опы­
те возрастает на 17,2% (Р < 0,02), при уменьшении этого показате­
ля в контроле на 31,6% (Р < 0,001).
Полученные нами результаты опыта суммарно могут быть расценены
как отражение возрастания функциональной активности гепатоцитов
под влиянием гумата натрия и подтверждают мнение ряда авторов
(С.Н.Низкодубова, Г.М.Нечай, В.Г.Черных, Ю.М.Рогозин, 1983; А.Я.
Шарипкина, В.П.Колотенко, 1983; В.Ф.Ушаков, В.П.Колотенко, М.И.Щапочка, 1983; В.П.Колотенко, Ю.П.Черненко, А.Я.Шарипкина, 1983) о
защитном гепатотропном действии гумата натрия как при отравлении
четыреххлористым углеродом, так и при иммобилизационном стрессе.
Защитное действие гумата натрия эти авторы связывают со стабили­
зирующим влиянием его на мембраны клеток. Кроме того, переводя
гепатоциты в состояние функционального напряжения, гумат натрия
способствз^ет развитию процессов внутриклеточной регенерации.
131
Резюмируя данные, полученные в результате острых, подострых
и хронических опытов, нами впервые установлено, что гумат натрия
при профилактическом введении повышает резистентность организма
в условиях кислородного голодания (пребывание в барокамере и в
замкнутом пространстве), при введении фармакологических веществ
в отравляющих дозах (стрихнин, строфантин) и облегчает течение и
исход экспериментально вызванных заболеваний (фенилгидразиновая
анемия, серотониновая язва желудка, токсический гепатит).
Результаты этих экспериментов свидетельствуют о многопрофиль­
ном влиянии гумата натрия на различные системы организма и по ме­
ханизму действия характеризуют его как адаптоген. Определенность
этого вывода связана с защитным эффектом гумата натрия при воз­
действии на организм неблагоприятных факторов.
Для более полной характеристики гумата натрия следовало про­
анализировать, оказывает ли мобилизующее влияние гумат натрия на
системы неспецифической резистентности в условиях здорового орга­
низма.
Механизм действия неспецифических стимулирующих препаратов
связан, главным образом, с влиянием их на иммунобиологическую ре­
активность, белоксинтезирующую систему крови и антитоксическую
функцию печени. Именно эти стороны механизма действия гумата нат­
рия как средства, повышающего реактивные свойства организма, нами
были изучены.
Наиболее убедительными аргументами, характеризующими препарат
как адаптоген, являются данные об изменении некоторых биохимичес­
ких показателей крови под влиянием гумата натрия.
Результаты опытов на кроликах и белых крысах установили досто­
верное повышение содержания общего белка крови (на 1Ь% и 21,4%,
соответственно, Р <
0,001), главным образом, за счет альбумино­
вой фракции. Этот эффект проявляется уже на 10 день введением пре-
132
парата и удерживается на протяжении 3-недельного курса. При гис­
тохимических исследованиях содержания общего белка в гепатоцитах
животных под влиянием гумата натрия также установлено аналогич­
ное увеличение этого показателя на 18,3% (Р < 0,02),
Важным этапом в изучении механизма действия гумата натрия были
исследования его влияния на содержание в цитоплазме гепатоцитов
экспериментальных животных гликогена, карбоксильных групп глютаминовой кислоты, сульфгидрильных и дисульфвдных групп цистина и
цистеина. Увеличение количества гликогена (на 22,1%, Р < 0,001),
карбоксильных групп глютаминовой кислоты (на 41,6%, Р < 0,001),
а также сохранение сульфгидрильно-дисульфидного равновесия с пре­
имущественным увеличением сульфгидрильных групп, свидетельствует
о возрастании функциональной активности гепатоцитов. Известно,
что высокое содержание гликогена и
SH-групп характерно для кле­
ток, усиленно синтезирующих белок (В.Я.Бродский, 1966; G.Babr ,
G.Moberser
, 1958; W.Muller
, G^Moberger
Отчетливо проявляется воздействие на
, G.Bahx
,1958).
SH-группы лекарственных
препаратов, ядов, ионизирующего облучения, изменение ионного со­
става клеточной среды и т.д. (Г.Бар, 1969; c.Ressler
, 1958;
H.Carlin
^ O.Hechter
^ 1962; W»O.Brawn
^ 1964; Т»А.Ооппоп et аД^. 1965; Н.Mastsuura
et al.
, 1965; G.Wied
,1966).
Впервые обнаруженные нами эффекты увеличения количества сульф­
гидрильных групп в гепатоцитах под влиянием гумата натрия (в конт­
роле) и предупреждение от резкого падения количества этих групп
при токсическом гепатите, что является следствием активации ана­
эробного дыхания в клетках, имеет большое значение для понимания
механизма действия исследуемого препарата. Таким образом, гумат
натрия, усиливая анаэробное дыхание, в силу своей поливалентной
структуры, создает барьер для действия токсинов.
133
УниверсаяБНыми показателями клеточных и гуморального факторов
защиты являются показатели фагоцитоза и активность лизоцима кро­
ви.
Исследование показателей фагоцитарной активности лейкоцитов
было проведено нами на двух видах животных - кроликах и морских
свинках. Получены однонаправленные статистически достоверные ре­
зультаты повышения уровня фагоцитарной активности лейкоцитов.
Наиболее выраженная активация в 3-4 раза по сравнению с исходным
фоном установлена на 7-14 дни введения препарата морским свинкам.
При определении влияния гумата натрия на показатели иммунобиоло­
гической реактивности организма на кроликах, мы получили положи­
тельный; эффект при подсчете фагоцитарной активности, фагоцитар­
ного числа и фагоцитарного ицдекса (повышение этих показателей
в 1,3-2 раза).
Нами установлено достоверное повышение фагоцитарной активно­
сти лейкоцитов и при введении препарата 1-2 раза в неделю, что
послужило основанием для внедрения этой схемы введения гумата нат­
рия в практику животноводства. Производственные испытания гумата
натрия в Белградском районе Белградской области свидетельствуют
о положительном влиянии этого курса при введении препарата круп­
ному рогатому скоту на привесы (на 1Щ выше, чем в контроле), что
сопровождается положительным влиянием на биохимические и морфоло­
гические показатели крови (А.Я.Козодуб, Т.Д.Лотош, 1983).
Известно, что изменение активности фермента лизоцшт характе­
ризует в определенной мере выраженность неспецифической реакции
на неблагоприятные воздействия (О.Б.Бухарин, Н.В.Васильев, 1974;
С.И.Плященко, В.Т.Сидоров, 1979). Наши исследования свидетельст­
вуют о том, что гумат натрия повышает активность этого фермента на
7(26,0^), 14 (41,6%) и 21 (43,3%) дни введения препарата. Это яв­
ляется дополнительным доказательством способности гумата'натрия
134
активировать гуморальные факторы защиты организма.
Наиболее ярким и отчетливо выраженным действием гумата натрия,
выявленным нами в данной работе, является его антитоксическое
действие. Непосредственная проверка эффективности препарата в
этом аспекте проводится на тесте по определению длительности гек­
сеналового наркоза. Проверка гумата натрия на этом тесте подтвер­
ждает его высокое антитоксическое свойство (препарат укорачивает
длительность гексеналового наркоза в 1,5 раза по сравнению с груп­
пой кроликов без предварительного введения) и свидетельствует о
повышении антитоксической функции печени под действием препарата.
Анализ полученных данных о безвредности,физиологической актив­
ности, защитном эффекте при нарушении физиологических функций
и механизме действия позволяет признать преимущество гумата нат­
рия и закономерно включить его в арсенал неспецифических лекарст­
венных средств, повышающих сопротивляемость организма к воздейст­
вию -различных неблагоприятных факторов.
Препарат гумат натрия из торфа характеризует высокий уровень
антитоксических свойств, доступность технологии полз^чения с орга­
низацией безотходного производства, оригинальность методов стан­
дартизации и идентификации для проверки его качества с привлече­
нием биологического теста. Сырьевая база для производства препа­
рата имеет ГОСТ и практическую неисчерпаемость.
Положительное решение вопроса об использовании физиологически
активных веществ гумусовой природы в народном хозяйстве вносит
вклад и в другую государственно важную проблему - комплексного
использования торфа при щадящей эксплуатации залежей торфа без
нарушения экосистемы.
Исходя из физиологического спектра действия гумата натрия как
средства, вызывающего состояние не специфически повьштенной сопро­
тивляемости организма, представляется наиболее эффективным исполь-
135
зование его при контакте с токсическими веществами, в условиях
кислородного голодания, при язвенной болезни, анемии, гепатите
и цри воздействии других неблагоприяткшх факторов.
Препарат может быть использован для ускорения регенераторных
процессов различных тканей животного организма, оптимизации физио­
логической эффективности специфических лекарственных средств.
Результаты настоящих исследований включены в материалы для
представления препарата гумат натрия (гуминат) в Ветеринарный
Фармакологический Совет МСХ СССР, утвержденные 10 июня 1980 г.
(протокол F^ 5 ) . Согласно этому решению были проведены научно-иссле­
довательские работы по испытанию гумината на сельскохозяйственных
животных в Одесском сельскохозяйственном и Харьковском зооветери­
нарном институтах с привлечением фармако-физиологических, биохими­
ческих методик и показателей ветсанэкспертизы. Представленные от­
четы и акты испытаний подтверждают положительное влияние гумата
натрия на привесы, резистентность животных и качество' продукции
молодняка крупного рогатого скота (Приложение).
В настоящее время по решению Президиума Ветеринарного фармако­
логического совета при Главном Управлении ветеринарии МСХ СССР
разрешено широкое производственное контролируемое внедрение гуми­
ната для стимуляции мясной цродуктивности крупного рогатого скота
в Украинской ССР, Молдавской ССР, Брянской и Омской областях (про­
токол 1г 5 от 21 сентября 1982 г.). (Приложение).
Главное управление по производству комбикормов и кормовых доба­
вок МСХ СССР утвердило Временные технические условия (ТУ-46-29-870-81) на препарат гуминат (гумат натрия). Впервые наши рекомен­
дации по биологической стацдартизации гумата натрия включены в
утвержденные ТУ и могут быть использованы для оценки биологической
активности других препаратов неспецифического действия.
136
Наши исследования физиологической безвредности гумата натрия
по программе требований Фармакологического Комитета МЗ СССР на
экспериментальных животных учтены также Государственной комиссией
по химическим средствам защиты растений при регистрации гумусово­
го препарата как биорегулятора в растениеводстве (приказ 88 от
7.02Л984 г.).
Организация промышленного выпуска гумата натрия будет способ­
ствовать реализации его в различных областях народного хозяйства.
Учитывая высокую биологическую активность препарата, широкий
спектр действия, антитоксические свойства, а также безвредность,
доступность получения и применения, высокую экономическую эффек­
тивность можно считать, что препарат гумат натрия перспективен
для использования в профилактической медицине, ветеринарии и жи­
вотноводстве.
137
ВЫВОДЫ
1. Парентеральное введение гумата натрия из торфа оказывает
нормализующее влияние на физиологические функции и стимулирует
защитные силы организма.
2. Установлена безвредность гумата натрия по показателям мор­
фологического состава крови, состоянию сердечно-сосудистой систе­
мы, гистоморфологическому строению миокарда, печени, легких, щи­
товидной железы и надпочечников.
Гумат натрия апирогенен, не обладает тератогенными, эмбриотоксическими, анафилактогенными и аллергизирующими свойствами.
3. Выявлен высокий уровень физиологической активности гумата
натрия. Препарат способствует сохранению нормальной проводимости
сердечной мышцы при отравлении строфантином, уменьшает токсичес­
кое воздействие стрихнина на тормозные процессы в дне, удлиняет
продолжительность жизни животных при кислородном голодании, уско­
ряет восстановление функциональных свойств изолированной мышцы
лягушки в условиях парабиоза более чем на 30^.
4. Предварительное введение гуглата натрия благоприятно влияет
на кроветворение при нарушении его фенилгидразином, повышает ме­
таболическую устойчивость печени к повреждающему действию четыреххлористого углерода, задерживает развитие язвы желудка при
введении серотонина.
5. Гумат натрия как адаптоген характеризуется широким спектром
физиологического действия и обладает высоким потенциалом антиток­
сического эффекта.
6. Механизм действия гумата натрия связан с влиянием его на
системы, повьшающие общую резистентность организма и антитоксичес­
кую функцию печени, Физиологические, биохимические и гистохимичес-
138
кие исследования установили при введении гумата натрия повышение
активности фагоцитоза, лизоцима, увеличение количества ббщего
белка в сыворотке крови, гликогена, глютаминовой кислоты, сульфгидрильных групп цистеина в гепатоцитах и нормализующее влияние
на активность аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы,
церулоплазмина в сыворотке крови и дисульфидные группы цистина
в гепатоцитах.
7. Обоснован метод биологической стандартизации гумата натрия
- парабиотический тест - позволяющий оценить качество препарата
при контроле его физиологической активности,
8. По спектру биологической активности и физиологическим свой­
ствам экспериментально обосновано применение гумата натрия в
практике ветеринарии и животноводства для повышения резистентно­
сти сельскохозяйственных животных.
139
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Адо А.Д. Патофизиология фагоцитов. М., Медицина, I96I,
295 с.
2. Адо А.Д. "Стресс", реактивность и вопросы теории медицины.
-Матер. Плен. Всесоюзн. научно-мед. общ. патофизиологов. Ереван,
1974, с.41-44.
3. Азанов А.Г., Ткаченко Л.К., Шилиппова Т.В., Лукьянова Т.А.
Эффект снятия физиологически активными веществами гумусовой при­
роды ингибирующего действия инсектофунгицидов на растения.- В
кн. Гум.удоб. Теор. и практ. их прим., 1973, т.1У, с. 73-80.
4. Аничков С.В. и др. Изменения тканево{^о энергетического
обмена при развитии экспериментальных язв желудка.- Пат. физ.
и экспер. тер., 1977, № 4, с.25,
5. Апостолюк В.В., Апостолюк К.А. Тернопольская торфяная
грязь и ее практическое применение в лечебной практике. Вопросы
курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1966, нр I,
C.8I-82.
6. Ахмеров Р.Н., Кондрашова М.Н. Метаболические реакции мито­
хондрий при стрессовых воздействиях на организм.- В кн. Био­
энергетика при лучевом поражении живых организмов. Л., 1973,
с.5-6.
7. Бабенко Г.О. Визначення м1кроэлемент1в I металоферментТв
у кл1ничних лаборатор1ях. К., Здоровья, 1968, с.103-107.
8. Базелян В.А., Бочарова Н.Э., Бацко В.В. Влияние гумата
натрия на всасывание углеводов и акшнокислот в тонком кишеч­
нике белых к р ы с - В кн. Тканевая терапия, 1983, т,1, с.27-28.
9. Барбашова З.И. Акклиматизация к гипоксии и ее физиологи­
ческие механизмы. Изд.Акад.Наук СССР, Л., I960, с.179.
140
10. Бар Г. Введение в цитохимию сульфгидрильных групп. В кн.
Введение в количественную цитохимию (пер. с анг.). М., Мир,1969,
с.387.
11. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармаколо­
гического эффекта. Л., Медицина, 1963, с.43-45.
12. Белкин Г.А., Шлецер А.А. Паталого-анатомические изменения
у свиней при лечении их CCI^. - Сов. ветеринария, 1934, № б,
с.56-58.
13. Белогрудов И.Г., Сокрут В.И. Влияние гумата натрия на об­
щее состояние организма телят, их рост и устойчивость к желудоч­
но-кишечным заболеваниям. - В кн.: Гуминовые удобрения. Теория
и практика их применения. Днепропетровск, 1983, с.120-123.
14. Березовский В.А. Напряжение кислорода в тканях животных
и человека. К., Наукова думка, 1975, с.260.
15. Бериня Д.Ж. Соединения меди с гумусовыми кислотами и их
устойчивость.-В кн.: Микроэлементы в комплексе минерального пи­
тания растений. Рига, 1975, с.151-165.
16. Бибер В,А., Боголюбова Н.С. О биологической активности
почвенных и торфяных гуминовых кислот. - Докл. АН СССР, I95I,
т.76, № 2, с.313-316.
17. Бибер В.А,, Боголюбова Н.С. Гуминовая кислота лиманной
грязи и ее биологическая активность. - Докл. АН СССР, 1952, т.82,
№ 6, с.939-943.
18. Бибер В.А., Магазинер К.М. О влиянии гуминовых и фульвовых кислот на дыхание изолированных растительных тканей. - Докл.
АН СССР, I95I, т.76, № 4, с.609-612.
19. Бобырь Л.Ф., Епишина Л.А. О связи между окислительно-вос­
становительным состоянием гуминовых веществ и их биологической
активностью.- В кн. Гзшиновые удобрения. Теория и практика их при-
141
менения. Днепропетровск, 1980, т.УП, с.41-63,
20. Богомолец А.А. Избранные труды в 3-х томах, 1956, т.1,
284 с.
21. Боме Я.А., 1й)миссаров И, Д. Использование пиролиз-хромато­
графии для идентификации гуглусовых кислот. - В кн.: Теория дей­
ствия физиологически активных веществ. Днепропетровск, 1983,
Т.8, с.14-17.
22. Бондарь З.А. Лабораторно-функциональная диагностика пече­
ни. - В кн.: Многотоглное руководит во по внутренним болезням.
М., 1965, 1^ 5, C.6I-I02.
23. Брехман И.И. Человек и биологически активные вещества.
Л., Изд. Наука, 1976, 112 с.
24. Брехман И.И., Кириллов О.И. Защитное действие элез^ерококка при реакции напряжения (стресс).- в сб. Элеутерококк и др.
адаптогены из дальневосточных растений. Владивосток, 1966,
с.9-12.
25. Брехман И.И., Шруентов Н.К. О влиянии жень-шеня на реак­
тивность организма. - Фармакология и токсикология, 1954, в.17,
т.4, с.27-30.
26. Бродский В.Я. Введение в количественнз^ цитохимию.
М., Мир, 1969, 439 с.
27. Буйко В.П., Якименко Т.М. К вопросу дифференцированного
использования тканевых препаратов торфота и биоседа у грудных
детей, часто болеющих острыми заболеваниями органов дыхания. Тезисы УП съезда офтальмологов УССР, Одесса, 1984, с.109-110.
28. Буркат С Е . Химическое изучение торфа как источника новых
продуктов технического и медицинского значения. - Автореф.дисс...
142
докт.техн.наук, Винница, 1962.
29. Бухарин О.В., Васильев Н.В. Лизоцим и его роль в биоло­
гии и медицине. Томск, 1974, 208 с.
30. Бушмич Д.Г., Голацкая Я.С. Лечебное действие субконъюктивальных инъекций торфота. ~ Офтальмологический журнал, 1972,
№ 2, с.103-107.
31. Вайсман Г.Л., Лендзенская Л.Д. О применении торфов Украи­
ны для медицинских целей. - Врачебное дело, 1948, № II, c.IOII.
32. Ваксман С.А.
Гумус. Происхождение, химический состав
и значение его в природе. 1937, 107 с.
33. Ваничкин А.И. Влияние тканевых препаратов на парабиотическое состояние портняжной мышцы лягушки. - Матер, науч. конф.,
посвящ. 30-летию метода тканевой терапии по В.П. Филатову.
К., 1963, с.30-31.
34. Васильев Н.В. К определению понятий "неспецифической
резистентности" и "неспецифический иммунитет". - В кн.: Факторы
естественного иммунитета при различных физиологических и пато­
логических состояниях. Сб. науч. работ П Всероссийского симпо­
зиума в Челябинске. Омск, 1976, т.4, с.76-77.
35. Верин В.К. Гистологические и гистохимические изменения
печени при экспериментальном циррозе. - Тезисы докл. науч. сес­
сии, посвящ. проблемам цирроза печени и гипертензии. М., 1964,
с.21-23.
36. Вургафт М.Б. Влияние автоклавированного экстракта
консервированных листьев алоэ на чувствительность к стрих­
нину.- Уч.записки УЭИГБ, 1949, IX, с.252-259.
143
37. Галушка A.M., Безкровная А.Я. Влияние гуминовой кислоты
на радиационный эффект у томатов в зависимости от соотношения
азота и фосфора в начальный период развития.-В кн.:Гум.удоб.теор.
и пр. их применения. Днепропетровск, 1975, т.5, с.115-119.
38. Герштейн Л.М. Гистохимическое влияние некоторых белковых
веществ и протеолитических ферментов в нейронах различных образо­
ваний кожного и двигательного анализаторов. 1966,8,№ 5, с.139.
39. Горгиладзе Т.У. Показания и результаты местного применения
торфота при заболеваниях и помутнениях роговицы.-В кн.: Тканевая
терапия. Одесса, 1983, т.1, с.86-87.
40. Горгиладзе Т.У., Голацкая Я.С. Лечебное действие торфота
при поверхностных и свежих помутнениях роговой оболочки.-В сб.
научн.трудов: Тканевая терапия по Филатову.Одесса,1977, с.87.
41. Горизонтов П.Д. Переоценка некоторых положений концепции
стресса. Клинич.медиц.,1973, № 10, с.3-7.
42. Горовая А.И.-Влияние физиологически активных форм гуминовых кислот на специфическую деятельность меристематических кле­
ток и рост проростков кукурузы. Сб.: Гуминовые удобрения. Теория
и практика их применения. К., 1968, т.Ш, с.130-135.
43. Горовая А.И,, Бражниченко Г.И. Влияние физиологически
активных веществ и некоторых дифференцированных ингибиторов на
анатомическое строение проростков маиса.-В кн.: Гум.удоб. Теория
и практика их применения. Урожай, К.,1968, т.З, с.124-130.
44. Горовая В.И., Грановский Н.М., Кравцова Л.В., Беленьковская Т.В. Влияние физиологически активных веществ гумусовой при­
роды на функциональную активность растительных, животных и микроб­
ных клетов.-В кн.: Тканевая терапия по В.П.Филатову. Одесса,
1977, с.31-32.
45. Горовая А.И., Кулик А.Ф. Клеточные механизмы природной и
модифицированной физиологически активными веществами сопротивляе­
мости сельскохозяйственных растеник к повреждающему действию пести-
144
цидов.-В кн.: Гум.удоб. Теория и практика их применения. 1980,
Днепропетровск, т.УП, с.74-105.
46. Горовая А.И., Кулик А.Ш., Огинова И.А. Цитологический
эффект физиологически активных гуматов натрия в эксперименталь­
ных условиях.-В кн.: Тканевая терапия,Одесса,1983,т.I, с.76.
47. Горовая А.И., Прохорова П.И. Влияние физиологически актив­
ных гуминовых'веществ на функциональную активность меристематических и половых клеток и реализацию ее в онтогенезе и урожае облу­
ченных сельскохозяйственных растений.-В кн.: Гум.удоб. Теория и
практика их применения. Днепропетровск, 1975, т.5, с.75-83.
48. Грановский Н.М., Залевский B.C., Реутов В.А., Скляр Т.И.
Влияние физиологически активных веществ торфа на выживаемость крыс
при облучении их рентгеновскими лучами.-В кн.: Гуминовые удобре­
ния. Теория и практика их применения. Днепропетровск,1975, т.5,
с.235-236.
49. Грановский Н.М., Колотенко В.П., Шарипкина А.Я., Поздняко­
ва А.В. Влияние гумата натрия на устойчивость печени к повреждаю­
щему действию тетрахлорметана.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория
и практика их применения. Днепропетровск,1980, т.УП, с.159-164.
50. Грановская В.П., Калашник В.И., Сидоров Н.А. Влияние гума­
та натрия на темп роста карпа, выращиваемого в садках на теплых
водах Приднепровской ГРЭС.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и
практика их применения. Днепропетровск, 1983, с.112-114.
51. Грановская В.П., Чаплина A.M. О влиянии гумата натрия на
рост и выживаемость гуппи.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и
практика их применения. Днепропетровск,1983, с.109-112.
52. Губарев. Сб.статей о применении торфяного мха в медицине
и санитарии. Петроград, I9I7, 76 с.
53. Гуминский С. Современные точки зрения на механизм физиоло­
гических эффектов, вызываемых в растительных организмах гумусовы-
145
ми соединениями,- Почвоведение, 1968, J!^ 9, с.62-68.
54. Гуминский С , Гуглинска 3. Доклад на симпозиуме 1У комиссии
МТО в Риге (I97I), М., 1973.
55. Гутиев Г.Г., Лукашенко И.М,, Хмельницкий Р.А. Исследование
органического вещества чернозема типичного методом пиролитической
масс-спектрометрии.- В кн.: Теория действия физиологически актив­
ных веществ. Днепропетровск, 1983, т.УШ, с.27-30.
56. Дамзе С , Горняк А., Янковяк Я., Карский А. Торф в медици­
не. -Международный конгресс по торфу. Л., 1963, с,38.
57. Дёмина М.А., Вульф Л.И. Опыт применения физиологически
активных веществ в птицеводстве.-В кн.: Гуьлиновые удобрения. Тео­
рия и практика их применения. Днепропетровск,1977,т.У1,с.119-125,
58. Дичев Т.Г., Тарасов К.Е. Проблема адаптации и здоровье
человека. М., Медицина, 1976, 184 с.
59. Дорофейчук В.Г. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом.-Лабораторное дело, 1968, Ji^ I, с.28-30.
60. Дорошков В.Б. Влияние тканевых препаратов на изменение кро­
ви свиней.-В кн.: Применение тканевых препаратов в животноводстве
и ветеринарии. К., 1966, с,103-109.
61. Драгунов С,С. Химическая природа гуминовых кислот.-В сб.:
Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропет­
ровск, 1962, т.П, C.II-I2,
62. Драгунов С.С. Химическая природа гуминовых кислот.-В кн.:
Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропет­
ровск, 1975, т.5, с.3-37.
63. Драгунов С.С. Хикшческая характеристика гуминовых кислот
и их физиологическая активность.-В кн.: Гуминовые удобрения.Тео­
рия и практика их применения. Днепропетровск,1980,т.УП,с.5-21.
64. Драгунова A.Q. Отношение гуминовых кислот к щелочам и не­
которым другим растворителям.-Автореф.-дисс. ... канд.хим.наук,
146
М., 1956, 34 с.
65. Драгунова А.Ф., Драгунов С.С. Взаимодействие гуминовых кис­
лот с метаболитами растений и микроорганизмов.-В кн.: Гуминовые
удобрения. Теория и практика их применения.К.,1962,т.П,с.57-63.
66. Драгунов С . С , Желховцева И.Н., Стрелкова В.Н. Сравнитель­
ное исследование почвенных и торфяных гуминовых кислот.-Почвове­
дение, 1948, № 7, с.409.
67. Драгунов С . С , Попова Л.Н. Физиологически активные вещест­
ва торфов.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их при­
менения. К., 1968, т.З, с.239-245.
68. Драгунов С . С , Попова Л.Н. Фракционный состав гуминовых
кислот.- Почвоведение, 1969, № 5, с.33-40.
69. Драгунов С . С , Шульман Ю.А., Попова Л.Н. Электропровод­
ность и комплексообразование гуминовых кислот. Химия твердого
топлива. 1968, № I, с.55-61.
70. Дыбан А.П. Некоторые актуальные задачи экспериментальной
тератологии.-Вестник АМН СССР, 1967, № I, с.18.
71. Дынкина Р.Л. Сравнительное действие некоторых дифференци­
рованных ингибиторов и физиологически активных веществ на рост
проростков мака и кукурузы.-В кн.: Гуминовые удобрения.Теория и
практика их применения.К., Урожай, 1968, т.Ш, с.152-154.
72. Елисеева В.Г., Субботин М.Я., Афанасьев Ю.И. Основы гисто­
логии и гистологической техники. М., Медицина, 1967, 234 с.
73. Епишина Л.А. Изменение интенсивности дыхания у некоторых
сельскохозяйственных растений под влиянием физиологически актив­
ных препаратов гумуса при облучении.-В кн.: Гуминовые удобрения.
Теория и практика их применения.1975, т.У, с.101-104.
74. Ермолаева З.В., Вайсберг Г.Е. Стимуляция неспецифической
резистентности организма и бактериальные полисахариды.М.,1976,183с.
75. Жидков Д.М. Действие тканевых препаратов на некоторые мор-
147
фологические и биохимические показатели крови новорожденных телят.
-В кн.: Тканевая терапия по Филатову. Одесса, 1977, с.70-72.
76. Жоробекова Ш.Ж. %зико-химические исследования гуминовых
кислот торфа I^apa-Cas., Шрунзе, 1970. Киргизский Гос. университет,
с.34-41.
77. Жоробекова Ш.Ж., Бугубаев А. Аминокислотный состав гумино­
вых кислот торфа Кара-Саз.-Аспирантский сб.КГУ,1969,с.79-87.
78. Заводская И.О., Морева Е.В., Мигас Э.А., Бульон В.В., Бианки Л.В. Влияние нейтронных средств на энергетические процессы в
ткани желудка при экспериментальных язвах и при язвенных болезнях.
-Тезисы доклада У Всесоюз. съезда фармакологов "Шизиологически
активные вещества". Ереван, 1982, с.114.
79. Зелинский А.А. О профилактическом направлении применения
тканевых препаратов в гинекологической практике.-В кн.: Тканевая
терапия. Материалы конф., посвящ. 50-летию метода. Одесса. 1983,
т.2, с.47-48.
80. Иванов И.В. Патоморфологические изменения у крупного рога­
того скота при временном введении GCI^.- Труды Московской ветери­
нарной академии. М., 1965, 48, с.181-188.
81. Иванов К.П., Кисляков Ю.Я. -Энергетические потребности и
кислородное обеспечение головного мозга. Наука,1979,
,212о.
82. Ильин Н.П., Глебова Г.И., Орлов Д.С. Фотолиз и деформация
молекул гумусовых веществ при изменении освещенности, влажности
и температуры.-В кн.: Гуьшновые удобрения. Теория и практика их
применения. Днепропетровск. 1973, т.У1, с.28-39.
83. Ильинский Е.В. Опыт применения тканевой терапии в ветери­
нарной гинекологии.-В кн.: Применение тканевых препаратов в живот­
новодстве и ветеринарии. К., 1964, с.83-84.
84. Л.М.Ишимова. Тучные клетки соединительной ткани и базофиллы
в диагностике аллергии немедленного типа.-В сб.: Проблемы иммуно-
148
логической реактивности и аллергии. М., Медицина, I97I, с.146-159.
85. 1{анюк И.И., Гуренко E.G., Юсупова Л.И. Диагностическая
ценность исследования ферментов, активируемых металлами при ане­
мических осложнениях после протезирования клапанов сердца.-В сб.:
Шерменты в лабораторной диагностике. (Материалы I Всесогаз.съезда
врачей-лаборантов). М., 1973, т.1, с.90-91.
86. Кассиль Г.Н. Постоянство'внутренней среды и проблема стрес­
са.- ХП съезд Всесоюз.физиологического общества им.И.П.Павлова
(Тбилиси). Л., 1975, T.I, с.142-143.
87. Квентин К.Е. Результаты и цели бальнеологического исследо­
вания торфа.- Международный конгресс по торфу. Л., 1963.
88. Ковбасенко В.М., Маковский В.А. Влияние гумата натрия на
убойный выход и качество мяса кроликов. - В кн.: Тканевая терапия.
Одесса, 1983, т.2, с.182-184.
89. Козодуб А.Я., Лотош Т.Д. Опыт применения гумата натрия при
откорме крупного рогатого скота.- В кн.: Тканевая терапия. Одес­
са, 1983, т.2, с.137-139.
90. Колб В.Г., Камышников B.C. Справочник по клинической химии.
Минск, 1982, 420 с.
91. Колб В.Г., Камьлпников B.C.- Клиническая биохимия. Минск,
Изд.Беларусь, 1976, с.311.
92. Колб В.Г., Кухта В.К., Конопля Е.^. К вопросу о фермента­
тивной регуляции тканевой проницаемости в патологии.- Тезисы док­
ладов Белорусской конф. 25-27 декабря I96I, "Проблема компенсатор­
ных приспособлений". Минск, 196I,с.210-21I.
93. Колесников Н.М., Туаев С.М. Действие CCI^ на животных.Мед.паразитология и паразитарные болезни. 1941,10,с.5-6,с.584-585.
94. Колотенко В.П., Грановский Н.М. Адаптивные эффекты торфобиолита у экспериментальных животных.-В кн.: Гуминовые удобрения.Тео­
рия и практика их применения.Днепропетровск. 1983,т.1Х,с.130-131.
149
95. Колотенко В.П., Черненко Ю.П., Шарипкина А.Я. Ультраструк­
турные аспекты действия гумата натрия на печень.- В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск.
1983, т.IX, с.165-168.
96. Коглиссаров И.Д., Логинов Л.Ф. -Молекулярная структура и
реакционоспособность гуминовых кислот.-Тезисы науч.докл. I Меж­
вузовской конф. Биохимия и плодородие почв.М.,Изд.МГУ,1967,с.44-48.
97. Костюченков В.Н., Смьщков В.Ф., Фарахцук Н.§. Влияние фарма­
кологических средств на развитие стрессовой реакции.-Физиологичес­
ки активные вещества в медицине.-Тезисы докл.У Всесоюз.съезда фар­
макологов. Ереван, 1982, с.154-155.
98. Коглиссаров И.Д., Логинов Л.Ш. Электронный парамагнитный
резонанс в гуминовых кислотах.-В кн.: Гуминовые препараты. Труды
Тюменского СХИ. Тюмень, I97I, т.Х1У, с.99-115.
99. Комиссаров И.Д., Логинов Л.^. К вопросу о молекулярной мас­
се гуминовых кислот.-в кн.: Гуминовые препараты. Труды Тюменского
СХИ. Тюмень, I97I, с.131-142.
100. Комиссаров И.Д., Логинов Л.с&.-Химическая природа и молеку­
лярное строение гуминовых кислот.-В кн.: Химия гуминовых кислот,
юс роль в природе и перспективы использования в народном хозяйст­
ве. (Тезисы докл.научно-тех.конф.). Тюмень, I98I, с.4-5.
101. Комиссаров И.Д., Климова А.А.Влияние гуминовых кислот на
биокаталитические процессы. Гуминовые препараты.-Труды Тюменского
СХИ. Тюмень, I97I, т.Х1У, с.225-242.
102. Комиссаров И.Д., Проворотова В.Т., Стрельцова И.Н., Логи­
нов Л.^. Биологическая активность гуминовых соединений, содержа­
щих свободные стабильные радикалы.- Тезисы П научной конференции
Тюменского СХИ. Тюмень, 1967, с.28-35.
103. Комиссаров И.Д., Стрельцова И.Н. Изменение химического со­
става гуминовых препаратов в процессе очистки.-В кн.: Гуминовые
150
препараты. Тюмень, I97I, т.ХХУ, с.63-69.
104. Комиссаров И.Д., Виленский И.Л., Федченко О.И. Извлечение
ryivMHOBbK веществ из органических пород.-В кн.: Гуминовые препа­
раты. Тюмень, I97I, Т.Х1У, с.30-33.
105. Комлош, Петец ~ Фармакологическая и клинфармакологичес­
кая оценка препарата галидор. Венгрия. Будапешт, 1966.
106. Коццрашова Н.Н. Реакция живых систем и состояние энерге­
тического обмена. Пущине, 1979, с.3-9.
107. Кононова М.М. Проблема почвенного гумуса и современные за­
дачи его изучения. Изд. Ш СССР. М., I95I.
108. Кононова М.М. Органическое вещество почвы. Его природа,
свойства и методы изучения. М,, Изд.АН СССР, 1963, 314 с.
109. Кононова М.М., Дьяконов К.В. Органическое вещество почвы
и вопросы питания растений.-Почвоведение, I960, i 3, c.I-II.
Н О . Корбанюк Р.А., Кравченко Р.П., Сумина А.Д., Реутов В.А.
Сравнительная характеристика физилогически активных препаратов
гуьлусовой природы методом инфракрасной спектроскопии.-В кн.: Гуми­
новые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск,
1980, Т.Л1, с.22-23.
111. Коркушко О.В., Калиновская Е.Г., Молотков В.И. Преждевре­
менное старение человека. К., Здоров'я, 1979, 254 с.
112. Королев Б.М. К фармакодинамике биостимулятора. Материалы
докл. Всесоюз.науч.конф., посвящ.90-летию Казанского ветеринарно­
го института. Казань, 1967, с.336-337.
И З . Корякина Е.Д. Теплоустойчивость мышц лягушек при действии
дибазола, при стрессе и их сочетании.-В кн.: Производные бензимидазола и клеточная резистентность. М.-Л., 1967, с.56-63.
114. Котлюба В.Г. Влияние гуминовой кислоты на биохимические
процессы сосны и некоторых других растений на начальных этапах
их роста.-В кн.:Гуминовые удобрения.Теория и практика их примене-
151
ния. к., 1962, т.П, с.137-148.
115. Котлюба В.Г., Реутов В.А. Влияние гуминовой кислоты на
поступление фосфора в растения в зависимости от температуры внеш­
ней среды.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их при­
менения. К., 1962, т.П, с.149-152.
116. Кравченко А.И. Эффективность торфота при лечении пораже­
ний роговой оболочки и стекловидного тела.-В кн.: Тканевая тера­
пия по В.П.Филатову. Одесса, 1977, с.88.
117. Кулеба В.А., Колмаков В.Н. Исследование системы церулоплазмин-медь в сыворотке крови у больных с заболеваниями печени,
желчных путей.-В кн.; Ферменты в лабораторной диагностике. (Мате­
риалы I Всесоюз.Съезда врачей-лаборантов).М.,1973,т.I,с.IIO-III.
118. Кулеш А.П. Отгон торфа в офтальмологии.-Ш съезд юбилей­
ной науч.конф., посвящ.75-летию В.П.Филатова. 1956.
119. Кулеш А.П. Торфот в офтальмологии.-В кн.: Тканевая тера­
пия по В.П.Шилатову. 1977, с.85-87.
120. Кузнецова Р.К., Мажинская В.П. Изменение активности церулоплазмина при гриппе.-В кн.: Ферменты в лабораторной диагности­
ке. (Материалы I Всесоюз.съезда врачей-лаборантов). М., 1973,
T.I, с.108-109.
121. Кузььшн А.Ф., Розум Ю.Г., Черняк С.С. К вопросу изменения
морфологических показателей крови у лабораторных и сельскохозяй­
ственных животных, обработанных тканевыми препаратами.-В кн.:
Профилактика и лечение заболеваний сельскохозяйственных животных.
Одесса, 1972, с.589-591.
122. Кузьмин А.Ш., Чалый А . С , Орлова А.В. и др. Влияние гумата натрия на мясные качества, некоторые морфологические и химичес­
кие показатели органов и тканей молодняка крупного рогатого скота.
-В кн.: Тканевая терапия. Одесса, 1983, т.П, с.145-147.
123. Кузьмин А.'^., Чалый А . С , Орлова А.В., Лотош Т.Д. Исполь-
152
зование гумата натрия в качестве стимулятора продуктивности мо­
лодняка крупного рогатого скота.-В кн.: Тканевая терапия. Одес­
са, 1983, т.П, с.144-145.
124. Курако Ю.Л. Биогенные стимуляторы в комплексной терапии
некоторых заболеваний нервной систеглы.-В кн.: Профилактика и ле­
чение заболеваний сельскохозяйственных животных.Одесса,1972,
с.586-589.
125. Курако Ю.Л. Тканевая терапия церебрального атеросклероза.
- В кн.: Сб.науч.трудов - Тканевая терапия по В.П.Филатову. Одес­
са, 1977, с.105.
126. Курако Ю.Л., Волянский В.Е. Дифференциальная тканевая те­
рапия посттравматических церебральных арахноидитев.-В кн.: Профи­
лактика и лечение сельскохозяйственных животных. Одесса, 1972,
с.500-509.
127. Курако Ю.Л., Волянский В.Е. Адаптогенные свойства ткане­
вых препаратов и их применение в практике морской медицины.-В кн.:
Тканевая терапия. Одесса, 1983, т.П, с.40-42.
128. Курбатов И.М. Происхождение и состав органического вещест­
ва торфа.-Труды юбилейной сессии, посвящ. 100-летию со дня рожде­
ния В.В.Докучаева. Изд. АН СССР. М., 1949, с.24-35.
129. Курбатов И.М. Природа и механизм образования гуминовой
кислоты.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их примене­
ния. К., 1962, т.2, с.33-43.
130. Курбатов И.М., Двойнишникова Е.И., Курбатова В.Ш. К вопро­
су о природе гумуса почв и торфов.-Труды БСХА, Минск, 1959, в.1,
т.ХХХП, с.58-71.
131. Кухаренко Т.А. Химия и генезис ископаемых углей. Ростехиздат. М., I960, 289 с.
132. Кухаренко Т.А., Екатеринина Л.И. Метод определения хиноидных групп в гуминовь]х кислотах.-Почвоведение, 1967,Г» 7,с.95-101.
153
133. Лаврова B.C. Об особенностях течения гемолитической ане­
мии на фоне спинномозговой анестезии.-Труды П Павловской конф.
Томского мед.института. Томск, 1952, с.63-66.
134. Лазарев Н.В. Воспроизведение заболеваний у животных для
экспериментально-терапевтических исследований. Медгиз. Л., отд.
1954, 391 с.
135. Лазарев Н.В. Лекарство и резистентность организма к небла­
гоприятным воздействиям среды.- Тезисы докл.конф.по пробл. приспо­
собит. реакций и методам повышения сопротивляемости организма к
неблагоприятным воздействиям. Л., 1958, с.50-52.
136. Лазарев Н.В. Специфические и неспецифические методы повы­
шения сопротивляемости организма по отношению к инфекциям. (Вопро­
сы фармакологического воздействия на иш^унобиологические процес­
сы) .-Материалы конф.по вопросшл неспец. проф. инфекций и методшл
повышения сопротивляемости организма в процессе лечения. Челя­
бинск, I960, с.59-63.
137. Лазарев Н.В. Проблема адаптации в современной медицине.В сб.: Материалы конф.по проблеме адаптации, тренировки и др. спо­
собам повышения устойчивости организма. Донецк, I960, с.68-70.
138. Лазарев Н.В. Актуальные вопросы изучения действия адаптогенов, в том числе препаратов элеутерококка колючего.-В кн.: Сим­
позиум по элеутерококку и жень-шеню. Владивосток,1962, с.7-10.
139. Лазареве Н.В. Сопоставление неспецифических защитных реак­
ций, влияющих на генерализацию инфекций и метаетазпрование опухо­
лей.-Вопросы онкологии. Л,, 1962, т,8, W II, с.20-28.
140. Лазарев Н.В. Дцаптогены и рак.-В кн.: Материалы конф.по
опосредованному воздействию на опухолевый процесс,Л.,1963,с.52-55.
141. Лебедев В.А. Влияние тканевого препарата на резистентность
больных и здоровых животных.-В кн.: Профилактика и лечение заболе­
ваний сельскохозяйственных животных. 1972, с.93-95.
154
142. Лемперт М.Д. Биохимические методы исследований. Кишинев,
I960, 170 с.
143. Лиштван И.И. Физико-химическая механика гуминовых ве­
ществ. Минск, 1976, 262 с.
144. Лиштван И.И., Глебов К.А., Наумова Г.В., Сорокина Н.§.,
Косоногова Л,В., Косяк Д.Н. - О противоопухолевых свойствах пре­
паратов, выделенных из торфа.-Докл. АН БССР, I98I, т.25, № 9,
с.815-817.
145. Лотош Т.Д., Сотникова Е.П., Соколова Б.Н., Запорожченко
О.М. Повышение резистентности организма под влиянием комплекса
гуминовых кислот к воздействию токсических веществ.-Тезисы докл.
научно-тех.конф. Химия гумусовых кислот. Тюмень,I98I, с.80.
146. Лукошко Е.С., Яновская Н.С. Исследование азотистой части
гуминовых "кислот торфа. - Состояние и перспективы комплексного
использования торфа. Минск, 1975, с.14-16.
147. Лукьянова Л.Д., Балмуханов Б.С, Уголев А.Т. Кислородзависимые процессы в клетке и ее функциональное состояние.М.,1982,300с.
148. Макаренко А.Н., Доманшева Н.А. Влияние гумата натрия на
уровень нейромедиаторов в крови крыс.-В кн.: Гуминовые удобрения.
Теория и практика их применения. Днепропетровск,1983,т.IX,с.161165.
149. Маковский В.А. Рост, развитие и физиологические функции
самок и самцов кроликов под влиянием гзшата натрия.-В кн.: Ткане­
вая терапия. Одесса. 1983, т.П, с.180-181.
150. Маковский В.А. Воспроизводительные функции крольчих при
скармливании рационов, обогащенных rjnwaTOM натрия.-В кн.: Профи­
лактика незаразных болезней и лечение больных сельскохозяйствен­
ных животных в комплексах и специализированных хозяйствах. Одес­
са, 1983, с.47-49.
155
151. Максимов О.Б., Швец Т.В. Методы фракционирования гзплиновых кислот. Разделение органическими растворителями.-Химия твер­
дого топлива..1968, № 5, с.44-51.
152. Максимович Я.Б. Прописывание, несовместимость и побочные
действия лекарственных средств. Изд."Здоров»я",К.,1972, 114с.
153. Мадьяр И. Заболевания печени и желчных путей. Будапешт,
Венгрия, 1962, т.1, 458 с.
154. Маняшин Ю.А. О характере "неспецифических изменений" в
организме белых крыс, подвергавшихся воздействию неблагоприятных
факторов различной природы,- Гигиена труда и профзаболеваний
(Науч.труды Иркутского Гос.мед.института).Иркутск,1972, вып.115,
с.72-75.
155. Маринова Л.С. Тканевая терапия при заболевании перифери­
ческой нервной системы.-В кн.: Тканевая терапия,Одесса, 1977,
С.109-Ш.
156. Маслов Н.В., Майденко В.Н., Котенко Л.В. Эффективность
использования гумата натрия в скотоводстве.-В кн.: Гуминовые удоб­
рения. Теория и практика их применения. Днепропетровск, 1983,
с.11-20.
157. Маякова Е.§. Некоторые вопросы химической переработки тор­
фа.-Тезисы докл.респуб.научн.-тех.совещ."Проблемы переработки
твердых горючих ископаемых", Минск, Наука и техника,1980,с.72-73.
158. Маякова E.i. Синтез биологически активного препарата БСТ
из торфа и его применение.-В кн.: Теория действия физиологически
активных веществ. Днепропетровск,1983,т.8,с.87-89.
159. Меерсон §.3. Общий механизм адаптации и профилактики.
М., Медицина, 1973, 360 с.
160. Межулис И.П.-В труд.ИЭМ АН Латв.ССР, 1966, У1, с.36.
161. Мережинский М.Ф. Обеспечение с участием витаминов и гормо­
нов явлений функциональной компенсации и биологической адаптации.
156
-Тезисы докл.на Белорус.конф.25-27 декабря 1961,"Проблемы компен­
саторных приспособлений". Минск, 1961, с.41-43.
162. Минц А.Г., Христенко K.G. Перспективы использования ве­
ществ гуминовой природы в прудовом рыбоводстве.-В кн.: Гуминовые
удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск,1983,
с.105-109.
163. Муляк В.Г., Муляк С.В., Семенец Ю.М. Влияние гумата нат­
рия на оплодотворяемость, послеродовый период у коров и на внут­
риутробное развитие плода.-В кн.: Тканевая терапия.Одесса,1983,
т.П, с.77-78.
164. Муляк В.Г., Муляк С В . , Семенец Ю.М. Терапевтическая эффек.
тивность гумата натрия при диспепсии телят.-В кн.: Тканевая тера­
пия. Одесса, 1983, т.П, с.85-86.
165. Мучник С Р . , Соловьева В.П., Шульгина Н . С К вопросу анафилактогенных свойств автоклавированных взвесей тканей.-Материалы
научн.конф.к ЗО-летию тканевой терапии.Одесса,1963,с.39-40.
166. Мясников А.Я.-Болезни печени и желчных путей.М.,1956,с.27.
167. Насосов Д.Н.-Местная реакция протоплазмы и распространяю­
щееся возбуждение. М.-Л., 1959, 434 с.
168. Наумова Г.В.-Возможные направления использования торфа в
медицинских целях.-Комплексное использование торфа в народном хо­
зяйстве (Тезисы докл.Всесоюз.научн.-тех.семинара).Минск, I98I,
20-21 октября, с.10.
169. Наумова Г.В., Косоногова Л.В., Кособокова Р.В., Райцина
Г.И., Косяк Д.Н. 'Шизиологически активные вещества из торфа и воз­
можности их использования.-В кн.: Тканевая терапия.Одесса,1983,
T.I, с.23-24.
170. Низкодубова С.В., Нечай Г.М., Черных В.Г., Рогозин Ю.М.
Влияние аппликации торфа на состояние калликреинкининовой систе­
мы, морфологические и физиологические показатели в эксперименте.-
157
В кн.: Тканевая терапия. Одесса,1983, т.1, с.68-69.
171. Новрузова В.Б., Усейнова С.Г. Тканевая терапия (торфот)
при лечении тяжелых поражений роговицы.-В кн.: Go.трудов Азербар^жанского НИИ офтальмологии. Баку, 1973,т.7, с.155-157.
172. Огинова И.А., Горовая А.И. Влияние физиологически актив­
ных румусовых веществ на функциональное состояние и оплодотворяе­
мо сть икры и развитие личинки карпа.-В кн.: Гуминовые удобрения.
Теория и практика их применения. Днепропетровск. 1983, т.IX,
C.II5-II7.
(173. Орлов Д.С, Элементарный состав и степень окисленности гу­
мусовых кислот.-Научн.докл.высшей школы.Биол.науки,1970,т.I,с.1-88.
474. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв.М.,Изд.МГУ,1974,333 с.
175. Орлов Д.С. Теоретические и прикладные проблемы химии гу­
мусовых веществ.-В кн.: Итоги науки и техники (почвоведение и агро­
химия) .М., 1978, т.2, с.55-132.
176. Орлов Д.е., Аммосова Я.М., Глебова Г.И., Горшкова Е.И. и
др. Молекулярные веса, размеры и конфигурация частиц гумусовых
кислот.-Почвоведение. I97I, № II, с.43-57.
•177. Орлов Д.е., Аммосова Я.М., Глебова Г.И. Развитие исследо­
ваний в области химии гумусовых кислот.-В кн.: Теория действия
физиологически активных веществ. Днепропетровск.1983,т.УШ,с.3-II.
178. Орлов Д.С., Горшкова Е.И. Научные доклады высшей школы.
-Биологические науки.М.,1965,№ I, с.42-98.
179. Орлова Т.Е. Действие токсических доз стрихнина на фоне
подготовки животных тканевыми препаратами.-Материалы конф., поев.
30-летию метода тканевой терапии по В.П.Филатову.К.,1963,с.75-76.
180. Ойвин И.А. Статистическая обработка результатов экспери­
ментальных исследований.-Патологическая физиология и эксперимен­
тальная терапия. I960, с.76-85.
158
181. Панасюк Д.И., Цветаева Н.П. Действие четыреххлористого
углерода на организм овец.-Труды Всесоюз.института гельминтоло­
гии. М., 1953, 5, с.124-145.
182. Передера Б.Я. Влияние гемостимулятора и других тканевых
препаратов на рост и привесы свиней.-В кн.: Профилактика и лече­
ние заболеваний сельскохозяйственных животных.Одесса,1972,
с.458-459.
183. Петров И.Р. Роль центральной нервной системы, аденогипо­
физа и коры надпочечников при кислородной недостаточности. Л.,
Медицина, 1967, 211 с.
184. Пивоваров Л.Р., Ярчук И.И. Ответные реакции дрожжей на
гумусовые вещества.-В кн.: Гуминовые удобрения.Теория и практика
их применения. К., Урожай. 1968, т.З, с.147-151.
185. Плященко СИ., Сидоров В.Т. Естественная резистентность
организма животных. Л., Колос. 1979, 182 с.
186. Позднякова А.В. Профилактическое действие гумата натрия
при стрессе.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их
применения. Днепропетровск, 1983, т.IX, с.149-151.
187. Полковникова К.И., Сорокина В.А. Влияние судорожного при­
ступа на развитие экспериментальной гемолитической анемии.-Труды
2-й Павловской конф. Томского мед.института.Томск,1952,с.57-60.
188. Попова Л.Н. Исследование химического состава фракций тор­
фяных гуминовых кислот.-Автореф.дисс.канд.хим.наук, Калинин,1969,
24 с.
189. Проворотова В.Г., Толпыго B.C., Лебедева Г.А. Влияние гу­
мата натрия на яйценоскость и некоторые морфо-физиологические и
биохимические показатели кур.-Труды ТСХИ.Тюмень,т.У.1,1967,с.96-97,
190. Проссер Л., Браун i. Сравнительная физиология.М., Мир,
1967, 766 с.
159
191. Пучковская Н.А. Тканевая терапия.К.,Здоровье,1975,207с.
192. Пучковская Н.А.,Бушмич Д.Г., Непомнящая В.М., Голацка Я.С.
Использование торфота при лечении помутнений роговицы вследствие
различной этиологии.-Ш Европейский конгресс офтальмологов. Тезисы
Амстердам. 1968, с.39.
193. Раковский Б.В., Егорова О.И. К вопросу об изучении гуму­
совых кислот из сажистых углей.-Химия твердого топлива. 1934,т.У,
вып.1, с.56-71.
194. Раковский В.Е. Биогеохимические основы генезиса топлива.
-Известия АН БССР, 1954, вып.6, с.35-51.
195. Раковский В.Е., Голуб К.С. Исследование химического составе,
фракций торфа различной плотности.-Труды Калининского политехниче­
ского института. Химия и химическая технология. М.,1967,вып.Ш(ХУ1),
с.226-227.
196. Редон. Торф в качестве перевязочного материала.-В кн.: Сбор­
ник статей о применении торфяного мха в медицине и санитарии.
Петербург, I9I7, с.24-26.
197. Реутов В.А., Кравченко Р.Н. ^фракционирование гуминовых ве­
ществ торфа и физико-химическая характеристика фракций и физиоло­
гическая активность.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика
их применения. Днепропетровск, 1973, т.1У, с.50-57.
198. Реутов В.А., Репка В.П., Кравченко Р.Н., Куксин Е.М. Тех­
нология заводского производства физиологически активного безбал­
ластного препарата гуматов натрия.-В кн.: Гзшиновые удобрения.
Теория и практика их применения.Днепропетровск.1980,т.УП,с.165-177.
199. Розин М.А. Состояние неспецифически повьшенной сопротив­
ляемости при действии некоторых фармакологических средств.-В кн.:
Неспецифическая лекарственная профилактика и терапия рака. Л.,
1966, с.21-56.
160
200. Розин М.А. Клетка и неспецифическая сопротивляемость
организма. Л., 1967, 231 с.
201. Ротенберг Ю . С , Сербиновская Н.А. Изменение некоторых по­
казателей окислительного фосфорилирования митохондрий печени бе­
лых крыс, затравленных четыреххлористым углеродом.-В кн.: Совре­
менные проблемы биохимии дыхания и клетки. Иваново,1972,с.II3-II5.
202. Рубецкой Л . С , Короткина Л.И. Экспериментальнью исследова­
ния обратимости цирротических изменений в печени.-В кн.: Исследо­
вание обратимости острых и хронических изменений внутренних орга­
нов. М., 1962, с.123-149.
203. Русин В.Я. Общий адаптационный синдром Селье и состояние
неспецифически повьшенной сопротивляемости Н.В.Лазарева.-В кн.:
Стресс и адаптация (Тезисы Всесоюз.симпозиума).Кишинев,1978,
с.249-250.
204. Русин В.Я., Полтырев С.С. Сопротивляемость организма к
неблагоприятным воздействиям при нарушении функции некоторых же­
лез внутренней секреции.-В кн.: Адаптация человека и животных в
норме и патологии. Ярославль, 1976, с.3-13.
205. Садыхов В.А. К вопросу изз^^ения неспецифической реактивно­
сти организма у работающих на производстве сульфанола.-Материалы
Ш съезда гигиенистов и сан.врачей. Баку, 1975, с.313-314.
206. Самошкина Н.А. К вопросу повреждаемости зародышей крыс
после воздействия внешних агентов в предимплантационный период
развития.-Доклады АН СССР,1964,154, № 2, с.484-486.
207. Саццифор. Кормовая добавка для сельскохозяйственных живот­
ных и птиц.-Информационное сообщение ВАСХНИЛ, № 295/3266.
208. Сапожков С В . К изучению иммунобиологической реактивности
животного организма под влиянием биостимуляторев.-В кн.: Профилак­
тика и лечение заболеваний сельскохозяйственных животных. Одесса,
1972, с.165-168.
161
209. Сафонова Т.А., Журавлев В.Л., Иванов В.И. Изменение
электрической активности мышечных волокон в нервно-мышечном препа­
рате лягушки при развитии стрихнинного блока.-Вестник Ленинград­
ского университета, 1976, № 9, с.92-99.
210. Севастьянов С.И., Исмагулов А.И. Зависимость и изменение
биохимических показателей крови у здоровых и больных диспепсией
телят от обработки их матерей в период беременности тканевыми био­
стимуляторами. -В кн.: Профилактика и лечение заболеваний сельско­
хозяйственных животных. Одесса, 1972, с.24-26.
211. Севастьянов С.И,, Шахматов М.М. К вопросу о механизме дей­
ствия тканевых биостимуляторов на организм животных.-В кн.: Профи­
лактика и лечение заболеваний сельскохозяйственных животных. Одес­
са, 1972, с.22-24.
212. Селье Г. Неспецифическая резистентность.-Патологическая
физиология и экспериментальная терапия. 1961, т.5,№ 4, с.3-16.
213. Селье Г. На уровне целого организма.М.,Наука,1972, 187с.
214. Сенсова К.В., Анна-Гельдиева А.Г. К вопросу об изменениях
активности аминотрансфераз при заболеваниях органов пищеварения.В кн.: Ферменты в лабораторной диагностике (Материалы I Всесоюзн.
съезда врачей-лаборантов). М., 1973, т.2, с.26-27.
215. Скородинская В.В., Кефер В.Н. Материалы к изучению анти­
токсической функции печени при тканевой терапии.-Материалы науч.
конф., посвящ. 90-летию В.П.Филатова. К., 1965, с.56.
216. Смольникова Н.М., Стрекалова С.Н. Результаты изучения
эмбриотоксического и тератогенного действия нонаклозина,-Фармако­
логия и токсикология. 1979, № 3, с.302-303.
217. Соколовская Я.Я. Влияние фенилгидразина на гемопоэз у экс­
периментальных животных. Архив патологии,1948, 4, № 9.
218. Солнцева Н.М., Мищенко B.C. Значение определения активно­
сти ферментов в клинике неотложной терапии.-В кн.: Ферменты в ла-
162
бораторной диагностике (Материалы I Всесоюзн.съезда врачей-лабо­
рантов) . М., 1973, т.2, с.35-36.
219. Соловьева В.П. Влияние тканевых препаратов по В.П.Филато­
ву на повьшение защитных свойств организма.-Автореф.дисс...докт.
биол.наук. Одесса, 1972, 31 с.
220. Соловьева В.П. О тестах для определения биологической ак­
тивности тканевых препаратов.-Тезисы докладов научно-произв.конф.
по применению тканевых препаратов в животноводстве. Одесса,1964,
с.28-29.
221. Соловьева В.П. Современные разработки проблемы тканевой
терапии по В.П.Филатову.-В кн.: Тканевая терапия.Одесса, 1983,т.I,
с.6-8.
222. Соловьева В.П., Аряев Н.Л. Торфот (научно-клинические дан­
ные). СССР. М., Внешнеторгиздат. 1979, 14 с.
223. Соловьева В.П., Жолнерович Л . С , Степанова О.С., Прудник
Н.З. Химическая и фармакологическая характеристика лечебного пре­
парата из торфа-торфота.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и прак­
тика их применения. Днепропетровск.1973,т.1У, с.162-164.
224. Соловьева В.П., Сотникова Е.П., Соколова В.Н. Фармаколо­
гическая характеристика тканевых препаратов по В.П.Филатову.-В кн:
Профилактика и лечение заболеваний сельскохозяйственных животных.
Одесса, 1972, с.168.
225. Солоха К.И. Действие физиологически активных веществ на
развивающиеся растения и их семена.-В кн.: Гзшиновые удобрения.
Теория и практика их применения.Днепропетровск.1973,т.1У,с.103-105.
226. Степанова О . С , Галатина А.И., Прудник Н.З., Жолнерович
Л.С. Химическая характеристика препаратов торфот и пелоидодистиллат.-В кн.: Профилактика и лечение заболеваний сельскохозяйствен­
ных животных. Одесса, 1972, с.125.
163
227. Степченко Л.М., Скляр Т.И. Влияние гумата натрия на актив­
ность некоторых гидролаз в прорастающем зерне ячменя.-В кн.: Гзшиновые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск.
1976, Т.У1, C.87-9I.
228. Старостин А.С. К вопросу о термодинамических процессах в
растениях и влияние на них некоторых физиологически активных ве­
ществ.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их примене­
ния. К., 1968, т.Ш, с.42-46.
229. Сторчай Л.П. Влияние совместной обработки физиологически
активными веществами гумусовой природы и фосфорорганическими инсек­
тицидами на некоторые физиологические процессы у яблони.- В кн.:
Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропет­
ровск. 1980, т.УП, с.125-139.
230. Сторчай Л.П., Краснорепова В.В., Рафес Г.А., Величенко С.И.
Влияние внекорневой подкормки на разложение рогора в растении в
связи с физиологическим состоянием яблони.-В кн.: Гуминовые удоб­
рения. Теория и практика их применения. Днепропетровск, 1977,т.У1,
с.54-66.
231. Судорейкина Л.Н. Гистамин печени и белковые фракции сыворот­
ки крови в процессе развития экспериментального цирроза печени.В сб.: К вопросу о патогенезе цирроза печени.М.,1957,с.9-15.
232. Сумина А.Д. Взаимосвязь между составом органической части
некоторых почв Украины и эффективностью гуминовых удобрений.- В
кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. К.,
1968, т.Ш, с.98-104.
233. Тараненко М.И. Опыт 25-летнего применения тканевых препа­
ратов В.П.Филатрва в комплексном лечении больных туберкулезом лег­
ких.-Тезисы УП съезда офтальмологов УССР.Одесса,1984,с.95-96.
234. Тареев К.М. Токсико-аллергические гепатиты.-Вестник АМН
СССР. 1965, № 5, с.3-8.
164
235. Татевосян А.Т., Вирабян Т.Л. Роль катехоламинов в меха­
низмах лечебного действия нейротропных противоязвенных средств.Физиологически активные вещества в медицине (Тезисы докладов У
Всесоюзн.съезда фармакологов).Ереван, 1982, с.282.
236. Трифонова А.С. Повышение общей жизнестойкости при адапта­
ции к действию повреждающих агентов.-Жзфнал общей биологии.1958,
19, № 3, с.187-201.
237. Толпа С , Чижевский В. Применение торфяной фракции как сти­
мулятора при кормлении телят.-В кн.: Международный конгресс по тор­
фу. Л., 1963, с.10.
238. Трусов А.Г. Материалы к изучению почвенного гумуса.-Процес­
сы образования гуминовой кислоты. Петроград.1917,ч.1 (по И.М.Кур­
батову, 1962).
239. Удрис О.Ю. Активность некоторых ферментов и другие показа­
тели функционального состояния печени при хронических лимфопролиферативных заболеваниях.-В кн.: Ферменты в лабораторной диагности­
ке (Материалы I Всесоюзн.съезда врачей-лаборантов).М.,1973, т.2,
с.57-59.
240. Ушаков В.'Ш., Колотенко В.П., Шапочка М.И. Мембранотропное
действие гумата натрия.-В кн.: Теория действия физиологически ак­
тивных веществ. Днепропетровск. 1983, т.УШ, с.171-172.
241. Фармакопея X СССР, М., 1968, с.953-954.
242. Шилатов В.П. Тканевая терапия.Одесса,1952, 218 с.
243. Филатов В.П., Филиппова Т.П. Препарат отгон торфа в клини­
ке глазных болезней.-Офтальмологический журнал.1961,№2,с.54-58.
244. Филатов В.П., Филиппова Т.П., Кулеш А.П. Лечебное дейст­
вие отгона торфа.-В кн.: Тканевая терапия.К.,1953,с.II7-I20.
245. Фишер А. Физиология и экспериментальная патология печени.
Будапешт. I96I, 215 с.
165
246. Фляйг В. Сообщение в кн.: Международный симпозиум 1У ко­
миссии МТО. М., 1973, с.28-31.
247. Фокин А.Д. Роль гумусовых соединений в минеральном пита­
нии растений.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их
применения. Днепропетровск. 1975,т.У, с.38-56.
248. Шранцевич Л.И. Обработка результатов биологических экспе­
риментов на микро-ЗВМ "Электроника" B3-2I. К., Наукова думка,
1979, 57 с.
249. Христева Л.А. Влияние гуминовых кислот на рост растений
при различном соотношении питательных веществ в начале развития.
-Доклады ВАСХНИЛ. 1947, № Ю , с.25-34.
250. Христева Л.А. Роль гуминовой кислоты в питании растений и
гуминовые удобрения.-Труды почвенного института им.Докучаева. М,,
I95I, ХХХУШ, с.34-41.
251. Христева~Л.А., Известия АН СССР. Серия биологическая.
1956, № 10, с.44-48.
252. Христева Л.А. Стимулирующее влияние гуминовой кислоты на
рост высших растений и природа этого явления.-В кн.: Гуминовые
удобрения. Теория и практика их применения. Харьков. 1957, т.1,
с.75-94.
253. Христева Л.А. Физиологическая функция гуминовой кислоты.
-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения.
Харьков, 1957, т.1, с.95-108.
254. Христева Л.А. Еще о функции гуминовых кислот в обмене ве­
ществ у высших растений.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и прак­
тика их применения. К., 1962, т.П, с.123-129.
255. Христева Л.А. О природе влияния гуминовых кислот на спо­
собность растений переносить избыточные нормы азота и высокие тем­
пературы. -В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их приме­
нения. К., 1962, т.П, C.I3I-I36.
166
256. Христева Л.А. О природе действия физиологически активных
форм гуминовых кислот и других стимуляторов роста растений.-В кн.:
Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения.К., 1968,т.Ш,
с.13-27.
257. Христева Л.А. Действие физиологически активных гуминовых
кислот на растения при неблагоприятных внешних условиях.-В кн.:
Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропет­
ровск. 1973, Т.1У, с.5-23.
258. Христева Л.А. К природе действия физиологически активных
веществ на растения в экстремальных условиях.-В кн.: Гуминовые
удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск. 1977,
Т.У1, с.3-15,
259. Христева Л.А., Азанов А.Г., Ткаченко Л.К., Смирнов А.Н.,
Цупров С.А. Влияние органического вещества почвы и удобрений на
снятие поражений у растений, вызванных пестицидами.-В кн.: Гумино­
вые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск.
1973, Т.1У, с.58-72.
260. Христева Л.А., Кравченко Р.К., Лотош Т.Д., Реутов В.А.
Комплексное использование торфа для совместного получения некото­
рых физиологически активных веществ.-В кн.: Тканевая терапия.
Одесса, 1983, т.2, с.210.
261. Христева Л.А., Реутов В.А., Голикова О.П., Козырь Д.Г.,
Горовая А.И. Влияние физиологически активных форм гуминовой кисло­
ты на синтез нуклеиновых кислот в растении.-В кн.:Стимуляторы рос­
та организмов. Вильнюс. 1969, с.146-158.
262. Христева Л.А., Реутов Б.А., Старостин А.Н. Влияние гумино­
вых кислот на биоэлектрический потенциал у растений.-В кн.: Гуми­
новые удобрения. Теория и практика их применения. К., 1968, т.Ш,
с.28-31.
167
263. Хмельницкий P.А., Лукашенко И.Н., Черников В.А., Крым­
ский Я.Я. Использование гидролитической маес-спектрометрии для
исследования гумусовых кислот.-В кн.: Теория действия физиологи­
чески активных веществ. Днепропетровск. 1983, т.УШ, с.11-13.
264. Хмельницкий Р.А. Современные методы исследования агроно­
мических объектов. М., Высшая школа. I98I, 251 с.
265. Хмельницкий Р.А., Томащук А.Ю. Изучение гиматомелановых
кислот методом пиролитической масс-спектрометрии.- В кн.: Ткане­
вая терапия. Одесса, 1983, т.2, с.198-200.
266. Цок P.M., Билык Е.Д. Лечебная эффективность местного при­
менения тканевой терапии при некоторых глазных заболеваниях.-В кн.:
Тканевая терапия по В.П.'Филатову. Одесса, 1977, с.77.
267. Черняк С.С. Влияние тканевой терапии на регенерацию крови
у кроликов при экспериментально вызванных анемиях.- Ученые записки
УЭИГБ. 1955, т.З, с.23-31.
268. Чистяков В.И., Кузнецова Л.М. Реферат отчета Советской де­
легации о работе международного симпозитума "Торф в медицине".
Комиссия У1 МТО. (ЕНР). М., 1976, с.1-36.
269. Шарков Ш.Н., Гуматы натрия, полученные из местных лигнитных углей как водорастворимая ореховая протрава. Год. НИИКН (Бол­
гария), т.4, 1965-1966 (по Комиссарову И.Д., I97I).
270. Шарипкина А.Я., Колотенко В.П. Профилактическое действие
гумата натрия при интоксикации организма крыс четыреххлористым
углеродом.-В кн.: Гуминовые удобрения. Теория и практика их приме­
нения. Днепропетровск. 1983, т.IX, с.131-134.
271. Швецкий А.Г., Воробьева Л.М. О влиянии неспецифических био­
генных стимуляторов пентоксила и мумие на некоторые обменные про­
цессы. -Вопросы мед.химии.1978, I, с.102-108.
272. Шилейко В.А., Зелинский А.А., Хмыз Г.Т. Некоторые итоги клинико-лабораторных исследований по использованию тканевой терапии в
168
(
гинекологической практике.- В кн.: Тканевая терапия по В.П.Фила­
тову. Одесса, 1977, с.123-124.
273. Шилейко В.А., Зелинский А.А., Хмыз Т.Г., Кюрдогло В.И.
Применение новых биогенных стимуляторов в комплексном лечении вос­
палительных заболеваний половых органов.-В кн.: Профилактика и ле­
чение заболеваний сельскохозяйственных животных.Одесса, 1972,
с.220-222.
274. Шимкевич Л.Л., Михайлов Ю.Е. Сопоставление данных биохи­
мии, гистохимии и морфологии при остром токсическом поражении пе­
чени.-В кн.: Ферменты в лабораторной диагностике (Материалы I съез­
да врачей-лаборантов). М., 1973, т.2, с.76-78.
275. Шпак И.И. 50-летний опыт применения тканевой терапии в
офтальмологии.-В кн.: Тканевая терапия.Одесса,1983,т.1,с.84-8б.
276. Шмук А.А. К химии органического вещества почвы.-Труды Ку­
банского СХИ. 1923, T.I (по Комиссарову И.Д. I97I).
277. Шулюмова E.G. Влияние тканевых препаратов акад.В.П.Филато­
ва на физиологическую и иммунобиологическзто реактивность организ­
ма и опыты применения их в животноводстве.-Материалы межвуз.конф.
по проблеме влияния биостимуляторов на организм животных и их при­
менение в с/х практике Ереван. 1963, с.77-79.
278. Щастный Д.С. Влияние предварительного введения тканевых
препаратов на проницаемость кожной ткани для гнойных микробов.Вопросы офтальмологии и тканевой терапии.К.,1962,с.268-275.
279. Щербина А.Ф., Коротаева Л.Ф. Влияние тканевых препаратов
на течение лучевого поражения у животных различного возраста.В кн.: Механизм и регулирование жизнедеятельности организма в ус­
ловиях патологии (Материалы Всесоюзн.конф.патофизиологов). Баку,
1970, с.94-97.
280. Эпштейн Л.А. Нарушение сложности работы систем, как ран­
нее проявление поражения печени.-Сб.трудов кафедры биохимии. Ду-
169
шанбе. 1962, с.13-23.
281. Якубов Н.Н. Торф и его лечебное применение. М.,1948,178с.
282. Ященко Г.§., Пидтесанный Н.И. Изменение некоторых показа­
телей ферментной активности крови под влиянием гумата натрия.В кн.: Тканевая терапия. Одесса, 1983, т.П, с.74-75.
283. Aralci Т., Ito М., Oscarsson 0. Anion permeability of sy­
naptic and nonsynaptic
motoneuron тетЪгапе. - J. Physiol., 1961,
vol. 159, p. ^10-435.
284. Bahr G-.I*., Moherger G,
Histochemical methods for the de­
monstration of sulfhydryl groups in normal tissues and malignant
txjmors. - "Acta Pathol. Microbiol. Scand.", 1958, 42, p. log­
ics.
285. Barmett R.I., Seligman A.M. Histochemical demonstration
of proteinhound sulfhydryl groups. - "Science", 1952, 116, p.
323.
286. Barmett R.J., Seligman A.M.
Histochemical demonstra­
tion of protein-bound alphaacilamido carboxyl groups. - J. Biophys. Biochem. cytol., 1958,- 4, 2, p. I69-I77.
287. Breng R., Waldov/ R., Plotner. Hemmung der Prostaglai^dinsynthese durch wasserlosliche Huminstoffe in vitro. - Symposium
der Kommission VI. COorf in der Medizin, Bad Elster, DDR, I98I,
s. 97-105.
288. Brown W.O.
Irradiation of purified myoglobins. I. Ef­
fect on physiochemical preperties. - "Arch. Biochem. and Biophys.", 1964, 107, 2, 239-245.
289. Oarlin H., Hechter 0. The disulfide-sulfhydryl interchenge
as a mechanism of insulin action. - "J. Biol. Ohem.", 1962, 237,
4, 1371-1372.
290. Ohaminade R. Semaine d'etude. "Matiere organique et fer-
170
tilite du sol". Pontifica Acad. Ssient., 1968, p.
291. Ohristentwa L.A., Starostin
"lH,
A., Dinkina R., Gorovaja A.,
Ulitina V. Plant stimulation Procadings of th.e International sym­
posium on Plant Stimulation, Sofia, 1969» P» 63-80.
292. Connor T.A., Double J.A., Bison L.A., Jeney A., Jr.
Reduction of toxicity of "radiomimetic" alkylating agents in ra­
te Ъу thiol pertreatment. IV. Protection against Bone marrow da­
mage. - "Biochem. Pharmacol.", 1965, 1^ m, 4, 569-577.
293» Esclibach. W. Waschs tumshemmung des walker-OaЪei Ratten
und Ihrlictiselien mausedseites-cadurch placenta-extract. - Med.,
Klinic, 1955, S. 36.
29^. Feiher F., ЗапегЪеск D. - Loc. ceit (5), 2^1-250, 1962.
295. Felbeck G.fD. Structural hypotheses of soil humic acids.
- Soil. Sci. Sol. Amer. P r o c , 1965i N 1, 29.
296. Flaig W. Chemical composition and physical properties
of humic acids. - Studies about humus. Transactions Intern. Sym­
posium 2. "Humus et Planta", Prague, 1967, p. 21-3^.
297. Flaig W. Semaine d'etude "Matiere organique et fertilite du sol", "Pontificat Acad. Scient., 1969.
298. Flaig W. Bericht ifber eine arheitstagung in Braunshweig
"Biochemical and medical reseach on peat". Biochemische und medizinische Forshund and Torf, Braunschweig, 197^, p. '^-8.
299. Flaig W. Die hein biologischen АЪЪаи von Ligninen entstehenden Phenole und ihne Umv/andlungen. Ein Beitrag zur Erfassung
von stoffwechselaktiven suhstanzen im Corf. "Z. angew. Bader-u.
Klimaheil", 1980, 27, Я 3, 223-229.
300. Flaig V/., Beutelspacher H. and Rietz E. Reprint from Soil
Components Volume I Organic Components Springer-Verlag. Heidel­
berg-Berlin, 1975, p. 1-211.
171
301, Flaig V/, and Soditig-Vortras anlablicti der Jahrestagung
deutsctien Gesellschaft fur Moor - und Torfkunde Bad. Wuraach., 11
okt., 1973, S. 12-25.
302. Forsyth. W. Studies on the more suloble complexes of soil
organic watter. - J. Biochem., v. 41, К 2, 194?.
303» 0, Portum Garcia, Hernando, B.C.
Ortego. Xnteimacional
Symposium on Soil Organic Matter Studies. - Braunschweig, PEG,
1976.
304. Friedman E,, Eales L, Carbon tetrachlori de poisoning. S. Atric. Med. J., 1962, 36, 51, 1067-1071.
305. Fu ITai-Wu, Zhang Li-Sheng, Jin
Lan-Eing, Zheng Ping, Xue
Hung-Ji. Die antineoplastischen Wirlomgen und die pharmakologischen.
Untersuchungen von Huminsauren. Symposium der Kommission VI. - Torf
in der Medizin, Bad. Elster, DDE, 1981, S. 225-232.
306. Golhs Si^, Kuhnert M. Huminsauren -Anwendung in therapie,
Pro- und Metaphylaxe in der Veterinar medizin. Symposium der Kommis­
sion VI "Torf in der Medizin" Bad Elster, DDE, I98I, S. 59-74-..
307. Guminski S., Guminska Z. "Acta societatis botanicorum polonie", vol. XXII, Ur. 4, 1953308. Guminski S., Badurowa M. - "Acta societatis hotanicurum poloniae", vol. XXXIV, Hr. 1, 1965.
309. Hall M.G. Carbon tetrachloride as an autihelmintic. - Am. J,
Trop. Med., 1922, 2, p. 373-379.
310. Helbig B., Kloching E. Darstellung und charakterisierung
von Huminsaure-Modellsubstanzen. Simposium der Kommission VI Torf
in der Medizin, Bad Elster, DDE, 1981, S. 130-142.
311. Hernando V. lire'-a'-povt du volume. Semaine d'etude "Matiere organique et fertilite du sol", Pontifica Academiae Scient.,
1968, p. 8O5.
172
312. Hyrata. Effect of placenta plasm on experimental dmsordar
due to uran hitrate in rabbits. - G. Kurume. Med. ass., 1958, 11.
313» Klocking E. Giftung und Eutgiftung von Schivermetallen
durch. Huminsauren. - Archiv. езсрег. veterinarmedizin. Leipzig, 34(1980), Mai, IT 3, S. 389-393.
31A-. Knaiif H., Fuclis Y,, Kuhnert M. Chemisclie Isolierung von
Huminsauren aus ITaturstoffen unter Berucksichtigung toxich. wirkender ITebenprodxxkte. Torf in der Medizin. Symposium der Kommission
VI, Bad Elster, I98I, DDR.
315» Kostynk P.Q., Osbima 11, S^irther Study of Anion permeabili­
ty of inhibitory post-synaptic membrane of cat motoneuronss. - J.
Physiol., 1962, vol. 164, p. 150-156.
316. Yon M. Kuhnert, Golbs S. und Fuchs V. Zur Anwendung von
Huminsauren in Therapie ипй. Metaphylaxe bei Enteritis des kalbes.
Monatshefte fur Veterinar-medizin. Zeitschrift der wissenschaftlen
gesellschaft fur veterinar-medizin der DDR, IT 4, 1980, 144-146.
3^7» Lowry O.H., Rocebrongh IT.J», Fawr L.A., Randall R.J. Pro­
tein measurement with the I'olin phenol reagent. - J. Biol. Ohem.,
1951, V. 193, S. 265-375.
318. Mastsuura Ж., Muroshima K. Radiolysis of cysteine and
complex molecules with SH linbage. Ill; The effect of
-irra­
diation on the decomposition on the decomposition of S-S linkage
in chymotrypsinogen. Scient. Papers Coll. Gen. Educ. Univer., Фо­
кус, 1^65.
319. Mori J. Experimental study of the extract placenta. - Hirosaki med. j., 1969, 21.
320. Mothes K. tJber das
altern der Blatter und die Moglichkeit
ihner Wiederverjungung. lTatur\7issenschaften, 1947, 15, S. 337-351.
173
321. Muller W., Moberger G., Bedir G.P. Occurence and d i s t r i b u ­
t i o n of s u l f h y d i y l groups i n b r a i n tumors. - " H a t u r w i s s . " , 1958,
322. Николов Ив,, Пантев Г. Противолъчиви възможности на някои
биогенни стимулатори в условията на остро и хронично облъчване, Рентгенология и радиология /ШЪ/,
1979, 18, I , о. 1-7.
323» Пантев Г., Петкова С , Николов Ив. Влияние на биогенния
отимулатор торфот върху прекивяемоста и левкопоезата на кратковре­
менно и хронично облъчени мишки. - Съвременна медицина /WE/,191Ъ,
29,
7, с. 33-38.
324-. Phelps В.М,, Ни G.H. Carbon tetrachloride poisoning reports
of 2 total cases and series of animal experiments. - Gama, 1924,
82, 1254-1236.
325. Prat S. The effect of Humus Substances on Regeneration of
Plants. Studies about Humus. Symposium Humus and Plant? Praga,
1962, 19-47.
326. Ress K.R., Smith G. Ihe presence of mitochondria enzymes
in fat in the liver in carbon tetrachloride poisoning. Cambridge,
1963, 19-47.
327. Ressler 0. Inactivations of oxytocin suggesting peptide
denaturation. - "Science", 1958, 128, 1281-1282.
328. Rochus V/. Der Einflub von Torf-H\iniinsauren auf die Aiifhahme
und verteilung ven Blei und Cadmium in Organismus der Ratte. Sympo­
sium der Kommission VI Irofinder medizin. Bad-Elster, DDR, I98I,
S. 5-6.
329. Steelihk D}, Tollin G. Stable free radicals in soil humic
^cid. - Biochimia et biophisica acta, 1962, 59» 11, p» 25-34.
330. Sven Oden. Die Huminsauren Dresden-Leipzig, 1922.
331. Sang Guo-Fan. Die Wirloing der Huminsaure in der Behandlung
von Augenlcrankheiten. Symposium der Kommission VI lorf in der Me-
174
dizin, Bad Elster, DDR, 1981, S. 256-268.
332. Tolpa St. International peat Simposium. Gdansk, 197'4-.
^ЪЪ* Velioan a. Yelican. Rev. roumaine med. interne, 1967,
V. 4, H 3, pp. 209-211.
33^. Visser S.A. Physiological action of humic acids on living
cells. "21ie proceedings of the 4-th International peat congress,
Helsinky, 25-30 June", Finland, 1972, 2-23.
'^y?o Iffliipple G-., Isliller L., RoЪscheit-RoЪЪins F. Raiding of
ЪосЗу tissue protein to form plasma protein and hemoglobin; what
I
1
is premortal rise of urinary nitrogen? - J. Езф. Med., 1947, 85,
277-286.
336. Wied G-.L. Introduction to quantitative cytochemistry.
Academic Press, Hew-York and London, 1966.
th
337. Wrobel H., Jasiak C. Proceedings of the 5
Internatio­
nal Peat Congress. Poznan, 1976, vol. 1, p. 430-436.
338. Xue Hong-Ji, Ohang Lhong-He, Chen Hua-Min, Bao De-Jiang,
Ding Hua. Die therepeutische Untersuchung von Huminsaurenwirkung
auf die Pracancerose des mensclichen Oesophagus, Sjnnposium der
kommission VI "Torf in der Medizin", Bad Elster, DDR, 1981, S. 233237.
339. Ziechmann ?/. Ihe Structure of humic substances and their
formation Ъу e-donor-acceptor-relation. International symposium
on soil organic Matter studies. Brimswiek, PRG, 1976, 213-218.
ПРИЛОЖЕНИЕ
Копи я
4-^Ъ
ШШСТЕГСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР
•Главное управлекие ветеринарии
•4К
•. ВЕТЕРИНАРНЫЙ ФАВШЮЛОКгаЕСЮЙ СОВЕТ
Москва, 123022, Звенигородское шоссе 5
3 июля 1980 г.
PeiHDopy Днепроетровского
сельскохозяйственного института
тов. КОЛБАСИБУ А.А.
320638, Днепоопетровск~27,
Ворошилова, ^5
-ВЫПИСКА
из протокола \1 5 заседания Президиума Ветешшарного фармакологи*^'
ческого совета при ГЛавном управлении ветеринарии М С А СССР
10 июня 1980 года
1.8. Слушали: сообщерше кандидата ветеринарных наук А,Д. Басинао
о материалах на препарат, гуминат, рекомендуемый Днепропетровскигл
сельскохозяйствершы?л институтом для стимуляц1ш роста молодняка с.х.'
животных.
Постановили:
I'. Просить Г7В пЮХ СССР разрешить проведение производственняго
испыташш гумпката в качестве стимулятора роста молодняка крупного
рогатого скота и пору^шть его Одесспому сельскохозяйственному инсти­
туту и Всесоюзному научно-исследовательскому институту незаразных
болезней животных.
2; Поручить Днепропетровскому сельскохозяйственному институту:
- подготовить методику производствершого испытания гумината в ка­
честве стимулятора роста молодняка крупного рогатого скота и предста­
вить ое на рассмотрение 'в Еетфармкомитет не позднее I августа 1980 г.;
- подготош^ть и представить на рассмотрение в отдел госконтроля
КГН1-и4 ветпрепаратов техш-неские условия на производство гумината;ъ
- после утвервдения методаксп произБОдствершого испытания гумината
Главкыгл управлением ветеринарш! МСХ СССР обеспечить институты-испыта­
тели необходимы1''Л количеством препарата.
Председатель .Бэтеринарного"'' ;
фармакологического сов^ета ,,•../. •
профессор
;>.••••
Л
хО^;^!/ ^:г^/^^
•
!
-. Д.Д.Полоз
••
i
и.
•
'
,
-
S5&/7..v'/^^-/
Л\ и ii и с Т L Р с Т F, о
СЕЛЬСКОГО
ХОЗЯЙСТВА
СССР
ГЛАВНОЕ УПРАВЛЕНИЕ ВЕТЕРИНАРИИ
ВЕТЕРИНАРНЫЙ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЙ СОВЕТ.,
.•х-кмп. .гЗОЗ:, 31ч':.н:;.[|.-,;;г|.:.-с o^.-.j , i Ь Г и К Ч ! '-.•чг',,--,,- '.»
Л2
29/8
т-
пг„ „
• -IS' . ноября
82 '
Дит)ектб'03'^1а^4г:О-и^:олсдиБ(йелъс• кого института Глазных болезней
и:л. акаде^жка В. П.Филатова
акаде'/JiKy А1Ш СССР.^Пучковской Н.А
В Ы П И С К А
из протокола !Ь 5 заседания прези'тиума Ветеринарного Х'Э.р:'Лакологического совета при Главно:,! управлении ветеринарии МСХСССР
21 сентября 1982 г.5.3. СЛУЕА.ПИ: кандидата ветеринарных наук Н.П.ьргрюкову о результа­
тах производственного испытания гумината натрия.рекомендованного
Днепропетровским СХИ и Одесским КШ! глазных болезней им.Филатова
в качестве котэмозой добавки для повышения мясной пподуктизкости
,, . к V
^-^ гг. f *
молодняка крупного рогатого скота .
'
ПОСТАНОВИЛИ:!. Просить Главное управление ветеринарии и Глазное
управление по производству комбикор:/:оБ и кормовых добавок 'v'CX СССР
разрешить проведение широкого производстзенкого испытания гум1ината
натрия 3 качестве кормовой добавки для повышения сменой продуктив­
ности молодняка крупного рогатого скота в Украинской,МолдавЕКОЙ
ССР,Брянской и Омской областях;
2. Поручить Днепропетровскому С}П1,0десско?/ту НИИ глазных болез­
ней им. академика ВоП.Филатова:
- разработать и представить в Ветоармсовет проект временного
наставления по применению гу:.:!:натг натрия в качестве кормовой добш
ки с целью ПО"БЫ:111НЙЯГП^НОТГ продукгтвности молодняка крупного ро­
гатого скота ^ в порядке широкого произзодствекного-опыта до_1^018^
- организовать наработку опытной партии гумината натрия для про­
ведения широкого производственного опыта; -;
- по окончании опыта обобшкть полученные результаты и представлю
их на рассмотрение в Вет^армсовет;
Ученый секретарь Совета,
доктор ветеринарных наук
Ji-K у]
А.С.Селиванова
4.
1,.''с!/
СОВХОЗ " I ТРАЗНЯ"
с , 14.ЛЬН14ЦА
1-1РШАБСК0Г0 РА^^ОНА
АКТ
г. My к г че в 2
3о tt" апреля 1982
II
Уш, ?1">лепсдпт'сзЕ1ьл:есм, гтредседптель сог^соз?'
MOD гит а И.М.
,^^„^„„„^^_л ^.^^^ Симканич З.В.
, ветер:
-к-ПС-ль Я. к
сельдшер ^^-Ч
_, директор МукгчеБСкого
С9зх0.;5~тех'гглкз/мг ЕЕРМНЕЦИ.З., згм.дт-тректорг по учебкой
работе СКСРШ И.И. TI козтдидгт ветеринарных кзук М'7Ь7К Б.Г.
состйвили НеСтояЕ^ЕТй скт О ггроизБОдстввнком тчспктг.нии гуыингтзнатрия для п.ирэитер£льного введения.
В результоте исследовги!/; в течение 19Ь0-1982 гг.
устз.нОБлено его пололсительное влияние при лечеити диспепсии
телят и повышении оплодотворяеь^ости коров.
11рилол-;ение к акту дод-'^ется.
Счт-ттгем, что r^n-nn-irT нг-трия будет хорошг^ы средством
при леченти! телят от дттспепсии и по-высит оплодотьоряе^^ость
короз.
"Акт составлен в пяти зкзомпяяегх.
ветерингрны:!
/ ГЬедседзтбль;-. йог:<:Оза
i Ветвсгч/совхЬзг,
' • *
•
*
1 . -
•
•
.(Jili^ua^^
•Ф
З.К.Скралъ
р
етфельдшер
Директор,-, .^'^чевского
с 015хот?г-^ёхш!кум?
Заместитель дт-!^екторз
по учебное] работе
Пт)еподг.Е5,тель
кЬ.ндидг.т ветнгук
И.М.Марп^та
3. В.Симкакич
К.З.
Берикец
РоМ. Скорик
^
/У
•
В.Г. Муляк
кол^^оз гирького
'
/
А
К
"31 "мяртя
Т
1'532
г. МукгчеЕС
;,'ы, rr.menonnKCcTEuiTiecH, гтредсед'тель колхоза
. ^
Зизич А.Ф.
_, ветериксршй врвч Шваб Й.В.
,
Еетерин"р"г1Н]1 фельдшер
Сешшец Ю.;{.
, дт-гректор
иукочеЕСкого совхозг-техкикуьхл ISP'IrlEIT И.Б., зг^м.дтгректорс _по учебно;! рсботе CKtPKii K.Ii. и к"н,дид|!.т ккук вотерикзрыых
клуъ: "yjLTi-L Е.Г. СОСТ^ЕИЛП КГСТОЯЩПЙ а.кт о произЕОдствекном
испытзкии гужкг.тс-нгтрхя для пг.рэктер?лы-:ого введекпя.
Б результате исследог-гт"';'! ъ течение 19В0~19У2гг. лгстгновлено его полО/кктель:-ше влтягше при лечен-ии диспепст-ж
телят и повышении оплодотворяемссти коров.
Приложение к 9.кту дод^-^ется.
Считсегд, ^iTO г^п.гинг-т нг.трия будет xoponnif/i средством
при лечении телят от диспепсии и повысит оплодотворяе^ость
корог.
Акт сосТ("5~-лс11.:В.,..г1лти экзе'.'-птляргх.
Пюедседоте^ь /колхоСг".-. 'г '/'пп
\
БетЕтэзч колхазГ'^:^-"
:•;':
^
.г^^^"-
-'^•'-• Зизич.
И.В,и'ЛБа15;д.
ЮЛиСенйнец."
ветфельдшер '<•/,..
г/Дт-гректор ..lyK.'^ueBCKOro
/, а(0гх0зг:~техни.ку!лг.
Ч;Ч-.о,-г.^-^..--^
*' 3^'!леститель дттпектора
'
.,^,^
ПС •ушбно!! TDs"6oTe ^ ^--^^ДГ;;^^^^-^^-^.;::^^^^^'^^"^^^
^-:Преподг.Бгтель
,^ , '• г,
кйпдид£Т-'ветн?у'к
JyXU./:^^^
,
•
.
,
;
,
•
'
*
(
И.В.. Беринец
Н.И. Ско^ик
\
Б.Г. Муляк
Г\
(3
nponsBosc-TEDUZ^on проБсрГли гаг.опчсппого научного
ЕССледоБап::я z s n aHiiTuc^-Konc^^PjKvopcixoii работы .
ше'ловаЕпе пгучь'о-'~сс.ледоза'тел1-.окого учрогдепзж'
ыс'гитут, опьглШая.станция, Кь, о-хдс^^лаиосшторня,группа, Лектор/
йненозашгв закоичсшюй 1У1Р ILTIH OK?, псо:с.злсншх па прокзЕОДствевнуЕ
030 ргу
/t-fui'/zct/tc^if^A-^i .•^^гс<^^:/./-е/г-^г1^..
торы законченных РЖР или Ш1^^^''аУс/Ши''?/и'!^^.-/^<^ш ^.V/tf/Cy.;g^^/^/^/^>.
\
} .
_
^
_
.
^
j;
7-——Р
Г~
коЕченные^ Ш'ГР iimi ОКг рекойеищоваш к пр:>:1зводстБекной проверке
шеннем Учслого ^^ъ^'2ъ.^/ШсМ'ле/и/[^'^е/.^Г^го
% Uyi:^/r'Ui^-^rt':c/frUt-~
/инстщтаТхтаЕЦПк или д р . / .
~^^^^
о^гокол i2__
от "_
" _
^
;
/Гчзд7'"'числ'о, месяц/
5С0Ечепные 1йР п ОКР'постаЕлеш'га пройзг-одстБСПную проверку при7наимеловани(^ вншТ^и-^^япГЙ! ЪрГаИдзацлг!: ш подч^неЕнос/ги
,ре;вдё1йШ /органкз аци1'Г7*
—
—~
-~"''"-~~'
-—
7ГО:ЙТ~^^СЗГУ71Т5оялТ
юизБОДстве Енал проверка Ш105огд1лаоъ^;^^^^,^,^г;<^2!^ / ^ ^ i ^ ', '^^^f^-^^^'^-?аЖГсГЛо1ПШк'ё^*'^Пзя
ьТо'Т'^д'омс'ГБеина;!
[О'Д^^ГкНеЫЮи'гЬ,'^ pCiJa.Oxi, 4 ) 0 J i U U T b , jwpai-l, pL/Oitj'-O.aiiKc//iX
rj '^^UnnWHi
М.%0»»-'^^^>^^^<^»1^^Ы«1|<^<'.1 WIIIMH^I'Tliln^ HIlll^HIW
^=
'^
—
зстственнне- за, провсдотйтс ПРОИЗБОДСТЗСЕНОЁ
• • «|*1Ч||»||| • • • •
• »w%>H»««MhiiAl*i*r^,i^iti(HO^iytriiM«wiM«ifi^ Д.>||«»| • ' ' • ^ ' ^ • • • ^ l l i i i i n » * » ' ' * jggivy
ПРОБернкМ^ф\''/ih4/:U^'Z/-^<:^
I IT — f i i i i i r r r n n i r i i i « a ' - i >in»iii«»i T^r^.i-tf. —>.ni II I
- I-I jj_. , _ j . i i r i - -
• -|
T
ч ••
mil
i
_i .
. 1
ц
[ia^^IUIИя, иия, отчество,•згчрсг.дcine, лсзяистзс, ДОЛЕНССТЬ/
ювпя'проведения пропззодотгзппой проверкя O/c-d'-ru-i /^Д^^;^^-.-г&4У
пс^чв^енно-клпь/атпчсские, •агротсхетсскпс, хозяйственко-экономк-
|'
зкие условия, соотвитствие усх^анивлскши треоованпян/^
\_ >_,
^^^Г'
ьеи производственной проверки^^/У/^г^/^.:^/г^^->^^^-^--<г^^^^^ ^ ^ ^-^с'-^г^ •
.
- , .
г
^^i^
г
^
. / г а , м, , ц, т, м"^, голов,
;
ркборов, количество цашин, аппаратов к т . п . /
I
жй проведения производствепноП проверки //^-^Ж^г'^Ь" У^ак0^-^Я ~f9//t\
^д, иесяц начала и окончания в каадоп отдельное случае/ . •
-
.!•
годнка производственной про во ркп^'' Ж'€/:г^.г^{'ё/£гг- ^Ш/г/^^/сеРус-о^ш/м
храткая характеристика принятого пстода/
••
.
•'
• V'
,-/|/^
^<r/
-
• (
г
,
>
•
•
.
•
•
•
~
3
~
'
.
'
'
•
.
-
•
• , . ^ .
'
'
:
•
'
'
•
•
•
*
•
•
•
•
.
.
•
i каким контрш1©и проБодалссь сравпскнс закоЕчсншх ШР и ОКВ
•
•
•
•
,
'
•
•
:
.
'
•
•
.
>
, ' • 'ч.
Результаты учета, характеризующие эффективность проверяецых К11Р нЗКР по сравнению с контролем:
. •
а/ осповпке хозяйстзешше далнкс по итогач проверки
7^6ш^"ние урожа'я, произБОДИтслькости труда,
качества/jp^yicbiii, снйлёние ^'рудозаТр2Т7
. сео е сто-L\\С СТК
И Т . и ./"""^
^^"^
(£ЫсМ^/^^^л ^e^ifi>/-/^/^^
•,/;
. .
-,.,
, -'
,,••
^.--^.^y.^e^fr^o j^z#-^//-^//^'^
6/ обо снова ЕпЬ'й расчетами экономический эффект •;^-;-
V;
f
/на основ11шГкакой~нетодикн велся расчет, эффект'хГ
'•^о1[1Х'^ГШ{й]Ш'цу'~0'оъииа проведеннои.проверки/. • , ~
*-
Что рекомендуется для внедрения в произзодс'^БО_
•
)
/PA
.•:4V.;.'-.:; II Ч Ц ^ Л ^ а н
р : Л . , v . . . , . . _ , , . , ^ „ . . . .:,.,•.•.. J . / , ; , : . • . . - ~ ^ - /
___
^ ^
<^-^сг-/(^^С/7сб ///&>////-"//-/V/.777'--^y7y/Yii-r''7:/ici' ^'сйУ/с1У^бУс/7(;гл-/^ С''/<:г/^г^/с7
•
а / от вышсстояцоГх oprainiGcmin'" "•
-
• "" '' '
'':
'''_•
/фанглкя. ПИЯ, o-T4C;c^iS0, долишсть, подпись/
б/ от паучгюго учрсгдс11::я./оргаЕнзащ1и/'^ ' "
м.»
п ч о и м н и а д о п ш — ^ . и Mil» * нам «••••1П.Я—пит Hill '"—1>——Шмм»г i i
i m a • , „ U P II м ^ а ^ р ^ — H B H I ^ W ^ — W I — ^ M
'
• • H—^iWi—i——HI'
! • ! •
/ ф а н 11ЛИЯ , ГГйЯ , 01^1 С С Т2 О , Д о н и Ш сТ Ь , п о ДПЕс Ь /
nficch. ^7^а<угг/с//ууу,с 777fc/y Л€е/:'^£е&7'Г
(ЩштттМ^^Л
в / от 1грокзБОГХ~::а /хозяйства/ /са^'-ШК сл^/.
7^c^f-^C!f^ii7<-^S7' Л"^^'7. '9^tU-^i'/^^7f/^^-'-7y
M-JUZ-IJCTTQ..
^^:/'.
•
''^7!7f^i77ec.c6i;j777uca-:^^d/7'-^,97.
-^./^ii^-^
A777^^i77^':t7177^'^'^'^^^^^-^^^''^'^^
• ^'J^(Л":^-'7^*c^
',dh77C(:7ii^f J7i{, -'
£iX
/:
)••'•
* -
'•"
—T-
»
\
'
,
/
^..<
•"•''^•:'У':^-
.
—
«
—
*
-
—
.
—
/
-
—
•
Печать
где проБОД';:лаоь !тр?изгодст7СРл:г11
аРозст:^а
•
•'••"-
"
•
л ;с т
^ ^1
произподсткСгиюЛ прозерки окопо?'!:-^*1Ссг.ого.научного
иоолодозйяи-?- ;'.л:! опмтп^^-^слнструг.торсг.эй работа
/^могювште и
•iiiiiH
•JIIIIUBTIIIIB
1И1 i i M i 11 - !•
. •\лш--\\\ .1.11 iiiifi
iji I
ингг ГТ
II ••
I I I
I
I
•
II
.
III
I -1
I I I • I n I III I I 1-111
I
I ti I --ГI nmr
II
\-mm—гтг^
гора sa::ofr-rcuciu>: ИЛ? \\КА о:\?ч^5^^^^г^'^-^^^-^5^^'^<!''*^'^'^'^
^ккнлня,имя,отчестDd,AJ/.:rau(^'ь»:iiituiHC,учсаая степень/
рачешиз НИ? ИЛИ ОЛ? ракоиеядозани J» произнодствсииоП npoBcpjtc
<Ott4cmiuo lUi? ii.iLi Ол1^ п6с:аБ::йии аа пр;)цззодстзоянуй прз^зерку np:i- .
JOM
'<^^
"^^l^Z-^Oc^^iy
l/'^p^lS''-^^^^^'^^^^
^'^.^rZ^^/^^^y^.^L'i^y'^^
^мззодстзснпап прэасргп про во д;:.:; ао ъ -g^ .<£^^ifx.oj'^ .-^ '^^^•"^'^-^^-^-'^^а.У .Г^
•1адчлноннооть,рииои, оояаст!), праи, peony;)лшса/
.
-
/П
?
,ii.c^iOpTj-<ttji
V-tTf^
-^v.v ^
KIIMII4I |irm*H|—<i—llHnii|irf^lrt|i<H»r'T—1111ГГГВ' iini.i»n » m.ii u < ггп;/» i .LIIT Ц
•- N
-4
•,
" iii' rnirri'
> ^
^ .
~' " ' I ^ T - M-
п т ir
••-••- т ,
1—rmi-TTnrirTin-- if n—
a, ^i•^ц, T, M-\ РздоБ
iTii • iMl | M W * « W l » i III *л 'I
5.--CC_
i^i^rt^iwuiin*!)
>-
•
/^л^гл.с^>^,_^^
/Г/^'^/'г .
J'-
•*<•»»—•»» ш»т\
MiH»
««ЙИЯМЦИмаЯ*».
1 -Т-т
S.
T
rr'rr f
/ ; • • • •
ia!K-5 i;0irr;50":0M a.>a;3^.-vii.:0Cb й^'••Xl^ll.li^ :-:г.:л-1ЧГл^г-Х i!,0' 11 -Si--:
; »^
iiiM«nT|iiini i » i i i i i H > y > i i i » i m w l M i i n H i n w
'•'
ini
''^:;i^^^t^^'
r i i i i II Ш Ш Ч И И И III I <i m i l
•'*^^^ ^c^^
ijH'
III 11,1-;
.^
^V^-T*;ev.-^^
*.Z c-^^ "^^ ^(
>^ jj<!<<^
^v'
I
*•'
Mi'iiii Mil Ill I r i i I I .iMiiiiiii fill n I'm .ij—IMM и щ «m n •^^•H^iaiMi^ii M i i 4 •• I ИНГ ^>i i щ^шЛйшт
-r'
.••.i.iii..n.i^
-,- vMi'j--J
» > j / . . M . ^ , ^
^ш^тттшлшщшт
'^<-<> /^-^O '•Z—с ^--<-
_^
'
'
tJi«l"iB<H)i>»'i^rt»»^ia«HJifni4.|Wii|f:ii»r»»M
Дч.ч»я» »iy
^
^-^^ Z...c^.<^<:'u'^^
уль7ат11 у ч е т а , >:spa:tTc;ptU5ya:i:is oKe'»'i^''^-^cici:'b. прозсряепик гШР и
ПО opat3HCfD!0 с 1:о!г:;'}олс-л;
• •
а/-00H.>Biii:c хозяПстзс^1ш:е дц:1;1:^о г:;) итогам прозерки
|/
/
'
noDi^LCUKC ур0л:а;19 п;.о;1зсод1;то;:ь:;ос7я т р у д а ,
i^x^t^'^^^^^CA-'ic-ce, '^с<иг^'<р<л ^^.Z^^'--'"^^ /-^-^е./<i//^ с^,>^ ,^сг c^.d^
'• ••••^•-i^=jecT-:ia ;1;1}од/ки;51!;» си;;;^П1;:зо т р у д о з а т р а т ,
^»«»»MNH«iWW<K3—•«•< Ml » » ^ т » г Ч «HUH^ W * Mii^^—»m»'»*nUir>pii^»M1»W>fcP«»<i1ii« r « » i ' аМ •i<W^lHW«HHi'*J«^*..WHfc».4»ai*»i»<f*»WM»—T4" II Mil W i l l i
"^ I W * > ' y ^ i i N iti»i»>»M*iiH,»^w^»wirt**i«*.«H>fcf^lli>^H»»>*i»)«jr»^HiVjltW""'WbHiMi.»'WW"**'"''-^^
SG^iCC'i'Oi'r-COQ'y;! « T»fU/
WllWiU'tiftil—IIWW^—^М»<КМи«<»Ч*1Ц>—W»
liirwi*! »i»IWiii^i i|i»wWi^O—»
«iffMMW -<**»
/
-</
MHai,W-»-HnWi»iWM',l4^yiylC-'*-«->Wi«i»Ji»JiTilil*—*«r IV>
trmi II n
^ * Г " Г Ч ] Ц < iHrrw^—ii-|lini-f r r i 1 у •^•г-М^!
Ш11 n 1|(ПГ||-|^—r<f 1-КГ t г— —^'-^
—— r i T i ••
•} ^" • • i - i - T T
"I" I r Т Г У — - — ^ ! ! — " f f l l T "
111 и
/ я а 0Cu0:i:;i2jUi i o . w a ;;oT;);;;:ivii :;й..а;£ p:vc4C?, о } : с н ? a руС)Лл>с
к liifats^qy^^jxnjit^^ijw*'^ <^»'W4» «,»t*
i*;^
Ч - ' Д " » '""iW Д ;
u 4 . ' <i^^4^^\Л
i . ^ . ' a и С : . . . . ч * H . Ь > V-
«f^^iv^ W ^ ' b ^ i ' W » . /
»r<*VKiiii^*XiwiJ»WM
Что pmtoneH.f\ye?uii дл;1 ^знйдреи:^^ и про1^5:/^лстБэ
im
,
*><"iT*'-
.•..••I»
.<»
I J ••-•"!*Л л
--
/Ос.
»
- ' , f, • - , ' • , I - - 1 / -
,••,•., I - • . -
-!
•.l~,.-.^-
-^,• • - , • ;
-•if
i:^?/-''
«",
-г-^г: -
Ч >»^ii.«»w4—И**
HI» ив*».!— nHiTiNimlaiin , n» ^ H » I M » » J H » « » I » ^ « I I I
ма^чи»^n«v*..««ИР1Г«
ii«1ii>Tfc.«tfift|ltfiO)B><MBJ»»i
/r^f
rf
'^-Ti-^
Г Ч iiiiiiw I iiiifMiiii f # i r i n n ч и п M I i H i t t u r t - a i - »ii<iw<i i umaiinaii и» «i
nM>W4W;»i>i*T;ini»ifc4»
'•>
r v • : ->
rf w j f c /
МЙНЖЗТЕКЗТБО CEIlICKOrO ХОШЙСТЗА CGCP
/
//-f
ЛНЕПРОПЕТРСВОЕИЙ СЕЛЬОКОХОЗЯЛСТВЕНШЙ SHCTIUT
Группа 93 i
Зарегш^рщрова т
СОГЛАСОВАНО; ; .
Началь
Зам. Начальника '.1 •;
Главного^ управления
^авног©
)ГО
УП^^|^^:йО^31р0ИЗБОДС5|-
BSJT ери на рии ^ЩдГ "'"'
"Штаалавин
ву жоибикор1ГО^^^ кормовых
«I ^1у,,г^-„,У1;ра,*^з?шанюк-JI ^ /Я^1|
•r-fesi:^
ПРЕПЛРАТ «ГШЙЕ4Т"
ТЕХНШБОЕЙЕ ИЗЛОВШ
Вв&д^пгя В1шр;вые на onHTHja партшг) в кожтт^т1^Ю_ si*
СРОК вввЕенЕЯ б ^.С?-^", „ (? ^" , ., I ^ I f .
СОГЛ^О(ВАНО:
ч На^'альник ISоюзглавзоо^RiHadnn^" мех СССР
[^^fA.n.XpanoB
^V,x^?Sfft4.«ft«rtVrn
/Гектор Днвпронвт|8)Вбко: то еелыжогозявотвенво»
-ГО йнотитута
Ума'(й^с1^ д .1К0Л бао ЙН
корневых
Белков
.I9j^r.
Пронолжение на ол. отр.
к Истринская теп. Зек. 3234—Щ.
Продолжение титульного листа
технических условий ТУ
Директор ВС ее ODSHQPQ рооудар^.
ственного йаучно-'.крнтрольнора
иноти^^та^ в^тпрепараз:|йЗ, MGX СССР
^^оидзе
и^Г^
&^£**^
19 0 \ Г .
.
Научный руководитель Дроблен­
ной научно-исоледовательокой
лаборатории по гуминовш удоб­
рениям ДнепропетровоЕого сель­
скохозяйственного института
^"V^^WAS^^V
Д,АЛрвстева
Заведующая лабораторией фарма­
кологии Одесского НИИ главных
болезней и тканевой терапии
mi* З.ПеФилатова
JS. C«>.<»egtfg<w ВаП^одовьева
Младший научный сотрудник
Проблемной научно-исследова­
тельской лаборатории по Тума­
новым удобрениям Днепропет­
ровского селвскохоэяйственного^-^[^ютйтута
"г ^лЦ-^
«
р,Н;кравченк@
\Ш111^Шшл^М^^
.•ill.-
-< ^'./'—
^mJiJaii
у (7
Младший научный сотрудник
лаборатории фараакологин
Одесского НИК глазных болез­
ней и тканевой терапии
им. ВЛ15_Филатова
JU^f-i^f^
т . д . дотош
1980 г»
Ученый се^фетарь Днепропетровскоп4 Шй гастроэнтершюгии
-T^^iA
Н.М.ГРДНОВСКИН
ТЖ"" i^k.^<C Г981 г.
Настоящие технические условия распространяются ка
препарат Туминат"в
Препарат "Гуминат" представляет собой натриевые
соли гумусовых кислот торфа в вйде порошка темно^-коричне"
вого цвета.
Препарат является неспецифичюким средством для
стимуляции привесов при откорле крупного рогатого скота
и птиц, а также для повышения общей рвзистентноатп орга-»
низыа.
Гуминат предназначается для приема внутрь в виде
порошка,
Препарат безвреден джя.приема внутрь Й аналогов
не имееТб
I . ТЕХНЙЧВЗЕ1СЕ .тавовА
I.Ie Препарат "Гуминат'^ дожжен соответстзовате
требованиям настоящих техничеокйк условий.к ияготавл^^вается^ по технологическому регламенту с еой^юдешшм дей­
ствующих санитарных правЕж и норв,?;. згтЕерядекннх в уста­
новленном порядке»
1в2. Сырье и вспомогательные матеряалНв
• Для производства сухого "Гряината" необходЕМО использовать следующее сырье к вспомогательные материалы: торф низинный осоковый^ тростниковый или ОСОКОБО-»
тростниковый со степенью разложения выше ZQ% PI ЗОЛЬноотью не более 3Q% i е,1кий натр (тешйчеохкй) по
ГОСТ 22бЗ«-71о
j
|
р
|
|
|
|
I
1.3 elo По своюл органолептйчеоким, фнзкко'-жэмйчес!
КИМ и биологическим вокаэатегям Тр^йнат" cij-хсй даджвй
соответство-
ТУ 4S
1
\\гы. Лист.
пай
Пров.
!!. контр.
УТВ.
№ докум.
Подп.
Кравченко )
Хрестев 1
1
7
1
Дата
Лист.
—__
PyfiKHST
Технические узловкя
|
1 Лист [
Листов
01 1 1 3 1 16
л 0 X п
1|
i
Ь
i
Шалова
\
ЕСТЬ TpedoDaKJOTJ, урсгзанпым в чаблмце^
Таблица,
ЛЪМ
3 :
lifNI
Наименование показателей
пп:
<»»•
£»!!• л Ц ^
«Ш1«
Б^
: Характерийтига
t
и норма
eXiLM touM
«-«а
t^c»
тхв
t-ii»
iS^
: Методь; ш т ? -
в
4аш «&.• dtfr rfiAB > а ^
I . Внешний вид й цвет
Однорадний мелко­
дисперсный порсь
шок темнэ-'Кор1ч« Ш хи 4 . 2 . н а с ­
неворо цвета
тоящих ТУ
^. СодерЕзиио вжагй, ^
7"* 12
По и» 4<.3е наО"»
тоящих TJ •
3 . Содержание золы, %, не более
30
2 гу^/усоьых кислот не менеэ
70
^. Рас творимое 1'Ь S ДЙОТИЖМ-»
Полностью раство»
повэнной зоне
рикши ПРИ темпе­
Й0 Но 4в4« Has»»
тоящих l \ F e
По Пе 4«5« йаз«*
тоящих I f
ратуре 30-70 С
о, Гра?гу:го5.;етркческая харак«Т8РЕ!стг!ка: остаток пи си­
те 0,5 мм,' %, не более
б» рН ОЛ^норо tjacTBopa
По П, ^о6* ЕШ«
поящих Т^'
1 0 На «г л о нао»
тоящих Tf
7p3™S5i,5
7« Порог коагуляции О.ОЗ^ного
раствор, 1«г»экзД
8, Безвредность на лабератор-»
ных животных (белых мышаж)
в тес'^-дозе, мг/кг
9. Биологическая активное та
0,1^ного раствора на
тесте по уекорению выхо­
да из состояния парабйом,,
% к контролю
По Пв 4в8в l a o ^-оящйх TF
20-35
1Ф
П© й« ^.«00 нг
ТОЯЩЙХ TJ
Не менее 30
По п« 4elOe наеТОЯЩЙХ ТУ
«с»
«2» «С» «D»
С8И
«RS»
•
4КШ>
4 № » #ЙГ* I
•
1
i
.
!<м. !Лнст.
Л"? док ум.
Разояб.
дрявченко
Лров.
i. коитр.
>-тв.
Подп.
ТУ 46
,
7
Дата
Лист.
/.рйСТ-31 а
Гум14нат
Технические условия
п1 1
Лист
4
f »гтг|[ 1—laTiiiim^Mii виозяпжААГ d»*:*»a!>w-*3»*i»]w>HiM4»iSi*e»«effiT?T»*«»>*tiMi4Wa^
16
1
в
11 С X й
'lli^JiO:iii
Листов
11
Pr.SfB<f, fra:ffn»r*»i»vswsfTr*V4
•^\>iij
^V•i-<n^'~-t,!Sti'№^3Tan'<y
1Ло Упаковка»
1.ЧЛ,
Туминат" сухой дня применения Б Еивотповодстве ц
других отраслях сельского хозяйства должен расфасовываться по
I кг в мешки из полиэтиленовой пленки по ГССТ 103-34-73, которуэ затег^ запаивают.и упаковывают в четырех-пятиолоиньш мешкк
по ГОСТ 2227-65 весом по 20 кг. Для ветеринарии и розничной
продажи - по 100 г в мешки по ГОСТ 1035^-73„ которые еатем за­
паивают и упаковывают в четырех-пятяслойные меши по ГОСТ 222765 весом по 20 кг. Допускается отклонение в массе едкнкцы рас­
фасовки t o,IJ?,
1.3. Иаркировва*
1.5«I. На каждую единицу расфасовки наносят этикетку Q
обозначениями:
Навменованиа предпрйятЕш-нзготовитеяя;
наименованяе препарата;
номера партЕи;
массы нетто;
дато Езготовяения;
срока ш условий хранения;
обОБначений иастоящнз: TJ*.
1»5,2, В каждую единицу фасовки вкх^аднзаит йао^арлекЕия по
пр;ш:внеийю препарата.
1«.5.3« На каждое шрпое место наносится трапояортпая r-spsEpoBsa в соответствии о требовакияг^дя ГШТ VflS2'^n
со о.с=^дуг;}-
щймп рзквЕЗитамн:
наЕиенование првдпрЕятия«-ппготозпта1?";
на1шенованЕ0 препарз^га;
Номера партия;
маосн HGTTo;
даты илготсвленпя;
;^.->м.
1
1
Лист 1
J
№ лочум.
Подл.
™,|
\ Дата!
llhir.T
кпг№^
ишгаиваивир
t
\
spoKs vi рг:овнк Хранения;
обооиа^езнй пастояцих-ТУ;
Еоличеотао еднн1Щ упаковок»
2 „ ТРЕБОЗАНШ
БЕЗОМ-СНОаТШ.
2о1в' *Ту1!Инат" еухой не токепчеы л,1я •" '.:, :;. :. теплокров­
ных ШаВОТННХ Е pGKOMGHgyeiiHS HOpiaSo
2 «2 в Не 7^опуокаетйя пнлеввделение прк фаоовке^ усреднекнн
ш яроомоэре тогоБого кродз-^ста, .•более б м г Л г ,
3«
ПРАВЕЕ
ЗЛ*/Туминат"
:,."":
" ПРРЩ{1Ш»
сдают н 11рикш1ают парткши. Еа}2дая партия
Ж\ "^ Ы быть принята ОГК пред11рйятЕяь!14-п8Ротовнтелями, Партеей
считают определенное колпеотво однородного по орраножеп§?ЕЧ8°>
скгШр фкзико-гсшйчески?,! и бнологпчеокнм показателям препарата
выработанного на одном предприятии^ расфасованного ш упакован­
ного Б однородную тарур предназначенного к единовременной отг­
рузке и офор!.аенного однш документом о качестве«
3.2.
В документе е качестве должно быть:
нашенованне предприятнн-пзротовитсшя;
найменоваНПЗ препарата;
Hcsiep партии;
•масоа нетто партнн;
дата изготовления препарата;
номер док5^^?ента о качестве;
дата выдачи доку1!ента о качестве;
количество LfocT партии;
данные анализа препарата (по показателям/, з'казан»
нъш в таблице) к нормн по показателя!! качеотва,
предусмотренным наотоящшк TFt
номер трашпортного доку|1!ентав
'
3 . 3 . Для контрольной проверки качества сухого "Гуиината"
от каждой единицы транспортной тары отбирают по одной упаковке»
но не менее Ю упаковок от всей партии,
3.4. Масса средней пробы должна быть в количестве I кг,
3 . 5 . Отбор выборки производят после проверки состояния та™
ры V уотановления однородности партии. В случае смешения партий
продукцию рассортировывают на однородные партии. Осматривает ЕЗЮ
партию и отмечают недостатки в состоянии тарн« Выборку отбирают
от препарата, упакованного только в исправную гару.
3 . 6 . При неудовлетворительных результатах испытаний
XQTS
бы по одному из -показателей проводят по нзпу повторные испыта­
ния удвоенного количества выборок^ взятых от той но партЕп ТУ"»
мината" сухого.
Результаты повторных испытаний
ЯЕЛЯЮТСЯ
оЕог-:атэльнк\!н в
распространяются на вою партию^
4 . МЕТОЛУ КОПЫТАНЙЙ.
4 e l . Методы отбора проб.
4 . 1 . 1 . Выборку составляют из единиц упакожсир отобранных
из разных мест партии. Затем от каздой отобранной едкшщы упа­
ковки отбирают по одной единице фасовки*
4 . 1 . 2 . Разовую пробу отбирают от Karisofi одишщн шасовкп
выборки при помощи щупав вместимостью не более Ю р^ когругшемого по вертикальной оси на всю глубину тарного места,
4 . 1 . 3 . Общую пробуе составленную шш разовых проб^ тщаталь-»
но перемешивают и делят пополам^ помещают в две чистые ^сухно
банки с притертыми пробками. Одну банку передают в лабораторию
для анализа качества препарата, другую хранят на случай повтор1л ж т
1.
Лист
NS докум.
JjjO^JL.
Дата!
яяиишд' 1^ ."ni"!! vm
VW"'il4IBVTOW.-ll-."«»iMllw(WiUi nuo,
д^идиамаавим! |'*д.1№«аг1»ж*уааяьл.дд-^
HSFO анализг в течение гарангкГпюго срока хранешя npenspasSe
|
MEoes общей пробы долкш ооотавлять
i
ОКШЕО
100 Го
ii^lJu Общ'де пробНв каправлееные в лаборат-оряю 1Ш1 на хра~
f
нзние Б отдел техккческог© коыт-рожя опечатывают н онабжаюг доку­
1,
ментом установленной форш о з'^азанибм;
• шшленованЕе Eipeiiapa^a;
sasH nsro5D3.isHri£ npeuapasa;
ш е е р isapTsn;
Ш'ш отбора партии;
эбщего кожттч!ъв. едгшиц упаковЕн;
fjssoH EOTW оартЕЕ;
SosnsHesT'E Е подцшп жпШс стобравшего пробуй
©бо^наченшз наетощп?! If о '
4в2* 0пр81еж81Ш8 вкбШЕбго Бпда м цве^а сухого "Гунниата''
проводят органо^епткчеоки s MOLfesH* отбора равовой пробы*
4еЭ« Опрежелениз содержания влагпв
4е3.1, Оборудованпвг, штериаж ш раактивк» Длл выполнения
испытания должны пршекять следующее оборудование в реакгавш
оушЕяьннй атф;
весы аналптршеокие о разаовесанп;
териометр ^ехническкй стеклянный ртутный ко
Г(Х2Т 2823-73 на 150 4l;
Тигельные ЩЙПЦН;
эксикаторы по ГОат 6371-73;
бюксы стеклянные по ГОСТ 7148-70 шжш металические
диаметром ^S-SO ми, высотой 40-50 гш;
кальций хлористый по r'iXJT 4161-77, прокаленный ЕЛИ ^
кислоту серную по rCCJT 4204-65, плотностью 1,84г/см.
4,3в2в Подготовка к испытании,
Сушильный шкаф должен быть снабжен терлорегулятором и про»
Еерен Tepi!OL«eTpoM ке рене одного раза в месяц s осответетаиа е
• 1 —
АА.
Лист
Ni-
J^OKyM.
Подп,
1Л1й:1
•
Лист
6
I
• • • • * &
' " » ^ " -
1
инструкцией пользования прибором.
Эксикатор в нижней части должен быть заполнен сух®1 хлорис­
тым кальцием или концентрированной серной кислотой. Пришлифован- |
ные края эксикатора смазывает вакуумной смазкой или вазелином*
4.3.3о Проведение испытания.
3-5 г препарата, взвешенного о погрешностью не более 0г0002г
помещают в предварительно высушенный до постоянной массы б т о о
температурой 100-105% на 4-6 часов, после чего бшс закрывают
крышкой, охлагдаст в эксикаторе и взвешивают.
Последующие взвешивания производят через каждый чао высуши­
вания навески при той же температуре. Высушивание проводят до
постоянной массы. Постоянная, масса считается достигнутой^ воли
разница между двумя последующими взвешиваниями не будет превы»
шать 0,0005 р .
4 . 3 . 4 . Обработка результатов.
Содержание влаги (X) в процентах вычисляют по формуле:
(MQ-MJ)
•
ЮО
I
%
где М. - маооа бюкоа о навеской до высушивания, г;р
о
М-р - масоа бюкоа с навеокой после высушивания, г;
и^ - масса навески» г .
Вычисление производят с точностью доО^О!^» За конечный
результат испытания принимают среднее арифметическое результат
тов двух параллельных опредевёний.
4 . 4 . Определение зольности.*
4 . 4 . 1 . Оборудование; ' весы аналитические;
муфельная печь;
тигли для сжигания по ГОСТ 9147"73;
эксикатор по ГШТ 6371-73;
тигельные щипцы.
Лист
П^..» I
М5
f-nj
4«4.2. Проведбше шпетатгй,
6 предварительно прокаленный в муфельной вечп фарфоровый тшрель берут навеску препарата в Киличества 2-5 г , взвешенного о
ЕогрзЕшоотью до 0*0002, шмецаш? в муфельную печь ж прокаливают
при тшпературе щз«500°0 жо тёмнокрасного 1йления. Окончив прткадивание и охладив тигель в вковкаторе» определяют втз золи
зввешйванйем тигля е его содержшш! на аналитических весах. Пу­
тем повторного непродолжительного прокаливания тигля & золой ,
оглагдения его в эксикаторе н взвешивания убеждается в том^ что
достигнут постоянннй вес волы,
4.4.3* Обработка результатов,
Содершание волн в процентам вшиелявэт по форяуле:
0 » ЮО VI00
Ж
М • (100 « у )
где Н «• навеска ^ я оътвшш.,
б - в ^ ^олн;.
у - ^ гигроскопической влаги в шследуемом материале;
100 в числителе <- для вы|£[жения в процентах.
Для перерасчета на абсолютно сухое вещество результат умно»
тпп
Содержание гумусовых кислот расчитывают по разжается на -^^^ ,
^
jj[^y^j ности между количеством сухих веществ и золой.
4.3. Раотвориыость в диоткглированной воде.
Навеску препарата 0,1 г растворяют в 100 г дистиллированной
воды, подогретой до 50-"70х1- При постоянном помешивании навеска
полностью растворяется.
4.6.
Гранулометрический ооставв
4 . 6 . 1 . Пробу препарата в количестве 100 г просеивают через
сито размером ячеек O^S мм. Остаток на сите соответствует грану­
лометрической характеристике в $ .
1
;«.'
Лист
NE локум.
Пс!-;;.
|л»ст
1
|lO'
1 Дата
Пш*»
Q«>0O__ I ПП*чп
•rabwww *«г«г«И1лдаида*'я»тг?;/;-в1'(л;г-»«иж.«'9-»,дач5»7'Л:.'!юая^^
эл.т^г-кятойжя'Ж^тг/.-ТЖ!:;
ivBOJ^jK wcns"rt:ffi*.'r".-a-*W"iK"if'Ыг'-.'^ч-ч^Л'л
^ь7о Опрзделзние рН»
4о7*1с Оборудование:
потенциометр (рН-метр, ммливольтглзтро
pIblSI);
стаканы хт^ические по ГОСТ 10394-'7'г номкнадькол
зглвстимхтью эО-100 глл;
стеклянные палочки;
весы аналитйчеокиов
о
4«7.2. Проведение иопытанияв
Навеску "Гумината" (0^1 г) растворить в 100 ш. горЕчей дно-
i
|
тиллированной водн и охладптьс Тщательно оидыткй д^оталлйроЕ^ан-
j
It
ной водой электрод погружают в стакан о нрйгововленЕШ! раатворог;.- |
Устанавливают температурную кошенсацнШр затом нажго^авд кшпку
j
рН и отсчитывают значение рН по по-доженкю. отрелЕН МЕЕЛПЗольйнеi'-
j
i
pa» Если второй отсчет рН на отличается .ой.;iiepBOFQ
.^тиме^ чем I
на ОД» то берут среднее ЕШ двук показаний Ерибора«
4 «8 о Опредеженпе порога к©агулщпй<,
I
4«8«1в Оборудование и реактивц?
стеклянные пробирки по ГШТ ЮЗ^^-ТЗ;
барнй хлорштнй по ГСОТ 4108-72.
)
j
I
\
•
t
4.0.2. Проведение иопнтаниГь
i
Для проведения анализа готовят Ое02^!Шй раа'гвор 'Гу::!*.:?^Г'2а"
j
(при 10%°ной злажнооти 22 ох» препарата
JBCTBOPESV? Б
lOO }лж д-цс-
ткллихюванной воды)» Раствор }шжвп би^ь прозрачный dea
|
щптг^ов!
по^лутненйЯф
I
В качества коарулкрую-щст;?© вещее!DE?> mwj&b2'jm OpI Ш }im'^-' I
вор хлористого бария (12^2 г ВгС!^ • 211.0 раатвзряйз в I л ди^- I
тиллкрованной БОДЫ)<»
i
Определение ведется «зледующшл o6pa3oi^vo В с ерик? иробкрок
(10 шт.) вносят по 2.5 Ш1 водного ттг'^-вощ BcCIo " 2'Е,0 '^oQ >/ог»
рзстзщей концентрации ( сш« табл»)»
t
1 1
•^?м.
ш
Лист!
"^"г г;ч-.^..
\ Гг.".
. -
-
tJcTat
^111—1ТМ1 •••iiu^*n.iiTrri™»——HTi'r4TT"fiTTimtf*^TrM7Hir*^^'Tin—m—ifHHHM-nif^iiirjimrT.H-itiHiiiii.iir-1ГТПЫ'1Т'птт'"""г'I nil м г т г ' ^ т ' * ^ ! - i i —
_
S
т'ит I T T I ' W T - H H • i • и ч •
•• m
••• • •
••
^ .
_ ._.
^. .
, !TO4-VS'-'-»"*l«^
"^
f
('
f
0.25
0 ,50
D,75
т ,00
I Л5
т .50
.1 ,75
a,00
г .00
о
d ,25
H.50
8с ,
ICn
л.»*
*!««
ЛЛЫ
4t--*M
***•
«Ж»
^'•чк»
*.>w
(»«и
ftV»
•Oi!'-* *''.:•»
2Л:Ь
2.0П
^^
S
Х.75
i'
1.50 ,
1.25
LCD
0Л5
0,50
0,25
5
5
5
5
5
•[
I I
!
s j
I I
к
i
*iv4-
dli«)
«aif
^••f
•
i
i it!
^1
s,
?
E
,n-»
*•'"»
*.'.-"
-Сч*"
В^.каплугэ.нй пробирок прцлпваю!^? но 5 ил
-iWii»
«ЙЬ-»^
«-"-П'
*ИЯ
<:^Т!.
^la
О.ОСЛ^-НОРО
^te
•••-*
rf'-i
iTS*
рао^Еора
|
^Тумпката", ЛрэбгшЕи зэЕрнваа? !ipo6isL'n и хорг^п^ БогрйХПБаРг^
GayctJH '^1йи oTus^um те пробяркп, где качЕ^гооь попу^канпе раегизра, Опреде.шьзт нагшекькее колк'^егтво електролк^а^ иеобюдуй^ео
i
^ля 1Соагу.^1яции одного лптрз гриппов ш: ш-ш-ло^^ йоргж Еоагу^^яцнк
расчктьшаат по следусшеы фарирю:
О " F * 1000
порог == --—
у.
где С - концеяттеция злег^трслкта;
7 - н&гаяекьший оо''ьвн влектиолитае, пошедший на коагуляцию
5 L?,5 аоля;
у^ -- обье?/ золя 5 вйятого ^кп аналкозе
Лля более точного^опредслйния порога коагуляций проБог.ст
Б^орую оерги: рез^зЕлзнхл рэотьсрз. хлорксторв бврип. таким обраэо!.?.,
чтобы йх концоптраиргя нехог.ялась
MO^ISJ ДБ^ПЛЯ
значениями! ЕощеЕ'?-
рнцийг где 3 прелыдупе^ опктз началась Еойгуляцкя R Г'ДО ока ещз
^
не кастуш1л;£,;,
j
.
\
L_^|
.
12 I
I /
чтаняяди
Р. !
Опрвделанио "оетрой" токсичнооти.
I
Для проварки на безвредность пяти белым мншам массой
18-20 г вводят перорально с помощью иглы-зонда 0,5 мл. I^HOTO
раствора (изотонического) Тумината". Наблюдение за дивотштЬ
ми продолжают в тзчение пяти суток. Препарат считают безвред­
ным, если все мыши остаются живыми и клинически здоровыми.
При гибели иышей проверку повторяют на удвоенном их количес^
тве. При гибели хотя бы одно1{ мыши в повторном опыте <-> пр@^
парат бракуют.
4.10* Биологическая активность
Методика определения биологической активноотн "Г]?мншта'^
по ускорению выхода изолированной мышцы лягушки из соотоянш
парабиоза.
Л . 1 0 • ! . Проведение испытаний
Для опыта используют парные портняжнне
шек ((^апо
'LemkoiGiiCLy'),
ММЕЩЙ
5-7 .лягу­
ко торне помещают в Х^ннй растЕор
хлористого калия до наступления состояния парабиоза (мышцы
не отвечают сокращением на раздражение электрои!^пул1ЬСЕтором
УЭИ-1 - 2,8 в ) . В этом состоянии одну
HS МЫШЦ
помещают в
ОД^ный раствор Тумината" (опыт), а другую « в изотоничео-'
кий раствор (контроль). Определяют время восотаноБлення оократительной функции у опытных и контрольных ш!Щ«
Показателем биологической активности препарта яЕшяетоя
|Гскоренив выхода из парабиоза изолированной мншци после пре­
бывания в jsoTBope "Гумината" не менее^ чем на 30^ по зравнению с контролем.
5. ТРАНЗПОРТЙРОЗАШЕ й'ХРАНЕШ®
5 . 1 . Препарат транспортируют любш видом транспорта в
предохранением от воздействия атмосферных осадков.
'гз'
Лист I
N2 JCKVM.
Поля.
Дата
Л1ШР jmji.jL,tBumjb""<iKiiawi'P*
!
*
\
5о2в Хранить прзпарат следуе!' в оухом поуещении osseJbHo от ядохшйкато! щт теипеш'илт окрунающвй средне
б. JKI3MIM по ПРШЕНЕНИВе
;
I
б Л . ^Г'^ишт^ сухой 1гр1шзвяетсй в соотвотствии с ме«
тодикой оркмененЕЯ руьшпатае утвермдешой Г1В MGX в jcs^aeo»
Еденном порядке.
7о ГАРАНИЯ ИЗГОТОВИТЕЛЯ.
7Л<» изготовитель гарантирует еоответотвие сухого
•Тумината" требованияь! настоящих ТТ при соблюдении условий
транспортирования к хранепня, уотановленшх техническкли
7«2. Гарантяйкнй срок хранения уотанавливаетея 3 года
со д[ш изготоБсЕвнйя препарата«
|Лж:т
Лист
N£ zo*<vM.
14
•да«1Лк*л',-Я!3«)«л?»в!1»«ялм^лче*кллгклзя»влтяавчашва^^
.«•.> ^.ш!-!!—«им iicMiaamaHiiiuatM^jf-aRiaaHgHHiBi
ПЕРЕЧЕНЬ
НТД
на которыеi сделаны ссылки в настоящих технических
условиях.
Обозначения rCXJT
Наименование
I. гест
г, гост
3. гост
IZll
4. гост
4108 - 72
термометр техн.с текл. ртут­
ный
барий хлористый
5. гост
4161 - 77
кальций хлористый
6. гост^
4204..-.__66
кислота серная
7 . гост
6371 - 73 -
эксикатор
8 . ГОСТ
7148 - 70
бюксы стеклянные
9. ГОСТ
9147 - 73
тигли для сжигания
10. ГОСТ
10354 - 73
полиэтиленовая пленка
I I . ГОСТ
10394 - 74
стаканы хшические
12. ГОСТ
10 515 - 75
стеклянные пробирки
13. ГОСТ '
I4I92 - 77
транспортная маркировка
- 65
^263 - 71
2823 - 73
бумажные мешки
натрий еакий
i
Лист
Изд.
Лист
N5 докум.
Поап.
Дата
и
H^iCT
(
реп^страции ыз§<иеиеи1ш
1
1
Ноиера листов (страниц)
11зы.
изменен­
ных
заменен­
ных
анн'.т'>о-
новых
Всего
листов,
страниц
• М»
документа
Входящие №
сопроводитель­
ного документа
и дата
Подп.
Дата
-
'
•
-
•
-
•= j
->
'
•
i
'
1
ii
ч
•
Лист
Изм,
Лист
N3 до кум.
16
Подл.
Дата