Динамика морфометрических показателей ядер эпителиоцитов

цесса и лечения ГЭРБ у пациентов пожилого и старческого возраста.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бордин Д. С., Машарова А. А. Эффективность маалокса
при длительной терапии гастроэзофагеальной рефлюксной болезни // РМЖ. – 2008. – Т. 16, № 5. – С. 349–352.
2. Бурков С. Г., Юренев Г. Л. Современные возможности
терапии гастроэзофагеальной рефлюксной болезни // Consilium
Provisorum. – 2005. – Т. 4, № 3. – С. 25–28.
3. Волкова Н. Н. Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь: современный взгляд на проблему // РМЖ. – 2009. – Т. 17, № 2. – С. 119–122.
4. Голубев Н. Н., Маев И. В., Мотузова Е. В. и соавт. Положительный опыт применения антацида «маалокс» у больных с впервые выявленной неэрозивной рефлюксной болезнью // РМЖ. –
2008. – Т. 10, № 2. – С. 50–55.
5. Ивашкин В. Т., Шептулин А. А. Алгоритм диагностики и лечения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни // РМЖ. – 2003. –
Т. 11, № 14. – С. 839–841.
6. Ивашкин В. Т., Шульпекова Ю. О. Гастроэзофагеальная
рефлюксная болезнь: клинические и фармакологические аспекты //
РМЖ. – 2002. – Т. 10, № 4. – С. 200–205.
7. Лазебник Л. Б., Васильев Ю. В., Мананников И. В. Изжога
как один из основных критериев ГЭРБ (результаты одного эпидемиологического исследования) // Эксп. клин. гастроэнтерол. –
2004. – № 1. – С. 164–165.
8. Маев И. В., Вьючнова Е. С., Щекина М. И. Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь – болезнь XXI века // Леч. врач. –
2004. – № 4. – С. 36–45.
9. Шептулин А. А. Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь // РМЖ. – 1998. – Т. 6, № 1. – С. 3–8.
10. Шептулин А. А. Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь // Consilium Medicum. – 2000. – Т. 2, № 7. – С. 410–415.
11. Bor S., Lazebnik L. B., Kutapcioglu G. et al. The prevalence of
gastroesophageal reflux in Moscow // J. Clin. Gastroenterol. – 2006. –
№ 40 (Suppl. 4). – P. 199.
12. Dent J., El-Serag H. B., Wallander M. A. et al. Epidemiology of
gastroesophageal reflux disease: а systematic review // Gut. – 2005. –
№ 54. – Р. 710–717.
13.
http://www.doctorate.ru/vozrastnye-izmenenia-v-organahpischevarenia.
14. Wienbeck M. Entzundliche еrkrankungen der speiserohre //
Gastroenterol. – 1992. – № 5. – P. 385–392.
Кубанский научный медицинский вестник № 6 (111) 2009
У 68 (62,4%) больных в ходе обследования мы констатировали наличие ГЭРБ на фоне ишемической болезни
сердца. В таких ситуациях приходилось решать вопрос о
возможности проведения диагностической ЭФГДС.
Наше исследование показало, что у 37 (33,9%)
наблюдаемых пациентов помимо тяжёлой сердечнососудистой патологии имелись и другие существенно
ограничивающие качество жизни заболевания/состояния. У таких пациентов обследование верхних отделов
ЖКТ приходилось выполнять с помощью рентгенологического исследования с барием. В ходе этого исследования удалось определить опухоль, язвы, стриктуры
пищевода у 1 (2,7%), 5 (13,5%), 7 (18,9%) больных соответственно. Однако заключение о наличии или отсутствии РЭ на его основании не являлось убедительным.
В числе 72 (66,1%) больных, состояние которых
позволяло выполнить ЭФГДС, эндоскопически негативную ГЭРБ обнаруживали у 20 (27,8%), РЭ –
у 52 (72,2%) больных, при этом частота РЭ 3–5-й
степени по классификации Savary-Miller составляла
⅔ случаев. Кроме того, у 23 (31,9%) больных мы
выявили осложнения ГЭРБ в виде аденокарциномы пищевода (1 (1,9%) случай), пищеводных кровотечений (3 (5,6%) случая), перфорации пищевода
(5 (9,3%) случаев), стриктур пищевода (10 (18,5%)
случаев), пептических язв (16 (29,6%) случаев), пищевода Баррета (19 (35,2%) случаев). Также удалось
установить, что частота осложнений ГЭРБ достоверно (р<0,05) увеличивалась при длительности существования симптомов заболевания более 15 лет.
В целом изложенные результаты инструментального обследования отражают преимущественно тяжёлое
и среднетяжёлое течение ГЭРБ у лиц пожилого и старческого возраста.
Итак, проведенные исследования показали, что образ жизни, сформированный годами, возрастные особенности, полиморбидность, полипрагмазия, в ряде
случаев невозможность проведения желаемых исследований в силу объективных причин, клинический полиморфизм, тяжесть течения, длительность существования заболевания формируют этиопатогенетические
и клинические особенности ГЭРБ у больных старших
возрастных групп. Учёт данных особенностей будет
способствовать оптимизации диагностического про-
Поступила 22.07.2009
Г. М. МОГИЛЬНАЯ, А. А. ЕВГЛЕВСКИЙ, В. И. ДУДЕЦКИЙ, Э. Г. ПЕЙЛИВАНЬЯН
Êàôåäðà ãèñòîëîãèè ñ ýìáðèîëîãèåé
Êóáàíñêîãî ãîñóäàðñòâåííîãî ìåäèöèíñêîãî óíèâåðñèòåòà,
Ðîññèÿ, 350063, ã. Êðàñíîäàð, óë. Ñåäèíà, 4. E-mail: evglandr@mail.ru
Методами компьютерной морфометрии изучено влияние мет-энкефалина на ядерный аппарат эпителиоцитов многослойного плоского эпителия слизистой оболочки лабораторных мышей. Полученные данные позволяют считать, что мет-энкефалин выступает в многослойном плоском эпителии как модулятор синтеза ДНК. При этом данный эффект реализуется в
зависимости от исходного уровня активности ядерного аппарата в синтезе ДНК и топографического расположения эпителиоцитов в пределах эпителиального пласта.
Ключевые слова: мет-энкефалин, модулятор синтеза ДНК, эпителиоциты.
УДК 616.329-018.73-092.9
dhm`lhj` lnptnleŠph)eqjhu onj`g`Šekei “dep
}ohŠekhn0hŠnb qkhghqŠni nankn)jh ohyebnd` l{xei
b rqknbh“u ophlememh“ leŠ-}mjet`khm`
133
G. M. MOGILNAYA, A. A. EVGLEVSKY, V. I. DUDETSKY, E. G. PEYLIVANIAN
DYNAMICS OF MORPHOMETRIC INDEXES EPITHELIOCITES NUCLEUS IN MICE ESOPHOGIAL
MUCOUS MEMBRANE WHILE USING MET-ENKEFALINE
Histology and embriology Department of the Kuban State Medical University,
Russia, 350063, Krasnodar, str. Sedin, 4 E-mail: evglandr@mail.ru
By the method of computer morphometre met-enkefaline influence on epitheliocites nucleus of polylayer flat epithelium of
esophagial mucous membrane in lab. mice was studied. The received fata allow us to consider that met-enkefaline in polylayer flat
epithelium acts as modulator of DNA synthesis. In this case the effect is realizing depending on initial level of nucleus apparatus
activity in DNA synthesis and on topographic place of epitheliocytes within the eimits of epithelial layer.
Кубанский научный медицинский вестник № 6 (111) 2009
Key words: met-enkefaline, modulator – synthesis DNA, epitheliocytes.
134
Как известно, опиоидные пептиды обладают полипотентной биосинтетической активностью и чрезвычайно сложны в своих взаимоотношениях с органами
желудочно-кишечного тракта. Наиболее изученным в
литературе представляется вопрос о влиянии нейропептидов на желудок, двенадцатиперстную кишку и
поджелудочную железу [2, 4, 5, 7, 9, 10]. Вместе с тем
пищевод в аспекте воздействия на него нейропептидов
изучен лишь на уровне влияния этих веществ на функции сфинктера пищевода [11]. В литературе появились
работы, свидетельствующие о влиянии опиоидов на
эпителий пищевода в аспекте регуляции темпа синтеза
ДНК [12].
Целью наших исследований является изучение
влияния нейропептида мет-энкефалина на ядра дифференцированных слоев многослойного плоского эпителия пищевода, отражающих динамику процесса формирования его защитной зоны.
l=2!,=/ , 2%"/
Материалом для исследования послужили срезы
пищевода лабораторных мышей, которым парентерально вводили мет-энкефалин в дозе 40 и 200 мкг/кг.
Материал получали через 1 час, 1-е, 3-и и 7-е сутки от
начала эксперимента. Проводка и заделка в парафин –
по обычной методике. Полученные срезы для избирательного выявления ДНК окрашивали реактивом Шиффа по Фельгену [3]. Проводили измерение диаметра
ядер, средней площади, занимаемой ядерным материалом, оптической плотности ядер эпителиоцитов, а
также общего уровня энтропии хроматина.
Для максимальной депуринизации ДНК при минимальной ее деполимеризации использовали 5N HCL
при 220 С в течение 45 минут. Это позволило получить
данные о содержании ДНК в расчете на 1 ядро [1, 6, 8].
Кариометрические исследования проведены для таких
дифференцированных слоев, как базальный, шиповатый и зернистый.
В оценке отдельных параметров ядер эпителиоцитов использовали метод компьютерной морфометрии. Изображения с большого увеличения микроскопа
захватывались ПЗС-матрицей и передавались в персональный компьютер, где оцифровывались и сохранялись в графическом файле формата РСХ при разрешении 640х480 пиксел в режиме «сepaя шкала» при
16 градациях этой шкалы. Полученные компьютерные
изображения подвергали анализу с помощью программы «M-SCAN», разработанной на кафедре гистологии
КГМУ. При этом использовали участок изображения
размером 400×400 пиксел, соответствующий 52%
всего изображения слизистой. Предварительный анализ малых участков изображения 5×5 и 10×10 пиксел
позволил установить градационную принадлежность
различных по плотности фракций хроматина ядер эпителиоцитов. При дальнейшем анализе изображения
градации отождествлялись с этими фракциями, имеющими различное содержание ДНК. Измерение ядер
эпителиоцитов проводили непосредственно в пикселах
путем расчета на основе начальных и конечных координат измеряемого диаметра. В качестве среднестатистических данных использовали два измерения диаметральной плоскости с расчетом средней величины.
Полученные данные подвергали обработке методами
вариационной статистики.
pƒ3$2=2/ , %K“3›"…,
Результаты исследования представлены в виде
графиков (рис. 1 и 2), анализ которых показывает,
что диаметр ядер эпителиоцитов базальной зоны у
контрольных животных составляет в среднем 25±3,6
пиксела, в шиповатом слое – 35±3,3, а в зернистом –
55±2,1 пиксела. В условиях применения мет-энкефалина в дозах 40 и 200 мкг/кг наблюдается постепенное увеличение диаметра ядер, характерное для
всех исследованных зон. Следует отметить, что при
применении мет-энкефалина в дозе 40 мкг /кг максимальное увеличение диаметра ядер эпителиоцитов
относительно контрольных значений зарегистрировано на 3-и сутки от начала эксперимента и составляет
для ядер базальной и шиповатой зон 20%, а для зернистой – 16% (P>0,05). При применении мет-энкефалина в дозе 200 мкг максимальный прирост диаметра
ядер регистрируется на 7-е сутки от начала эксперимента и соответственно составляет 56, 26 и 23%, при
этом для базальной и зернистой зон эпителиального
пласта увеличение диаметра ядер эпителиоцитов
является статистически значимым (Р<0,01).
Изучение уровня оптической плотности ядер эпителиоцитов слизистой оболочки пищевода контрольных
животных показало, что в клетках базальной зоны она
составляет в среднем 0,86±0,002 ед., в шиповатой –
0,68±0,001 ед., а в поверхностной – 0,45±0,001 ед.
В условиях применения мет-энкефалина в дозах 40 и
200 мкг/кг наблюдается постепенное увеличение оптической плотности ядер базальной зоны. В то же время
ядра клеток зернистого слоя характеризуются их прогрессивным уменьшением, тогда как ядра клеток шиповатого слоя снижают оптическую плотность незначи-
ДЯ (К)
ДЯ (С)
ДЯ (М)
К
1 час.
1 сут.
3 сут.
К
7 сут.
1 час.
3 сут.
7 сут.
Б
ОП (КЯ)
ОП (СЯ)
ОП (МЯ)
Энтропия
К
1 час.
1 сут.
3 сут.
7 сут.
В
Кубанский научный медицинский вестник № 6 (111) 2009
А
1 сут.
Рис. 1. Морфометрические показатели ядер эпителиоцитов
слизистой оболочки пищевода мышей
Примечание:
А – диаметр ядер, Б – хроматин, В – оптическая плотность
(доза мет-энкефалина – 40 мкг/кг, ДЯ – диаметр ядер, К – крупные, С – средние, М – мелкие,
ХВП – хроматин высокой плотности, ХУП – хроматин умеренной плотности,
ННП – хроматин низкой плотности, ОП – оптическая плотность,
КЯ – крупные ядра, СЯ – средние ядра, МЯ – мелкие ядра).
тельно. Все зарегистрированные изменения являются
статистически значимыми (p<0,001).
Измерение средней площади, занимаемой ядерным
материалом с различным содержанием ДНК, показало,
что в расчете на всю толщину эпителиального пласта у
контрольных животных площадь, занимаемая ядерным
материалом с высоким содержаним ДНК, составляет
24,9±0,03 усл. ед., с умеренным – 22,8±0,07 усл. ед.,
а с низким – 34,6±1,1 усл. ед. В условиях применения
мет-энкефалина в дозах 40 и 200 мкг/кг наблюдаются
постепенное увеличение площади, занимаемой ядерным материалом с высоким уровнем содержания ДНК,
и прогрессивное падение площади материала с низким
и умеренным его содержанием. Следует отметить, что
при использовании мет-энкефалина в дозе 200 мкг/кг
эти изменения носят более выраженный характер, чем
при дозе мет-энкефалина 40 мкг/кг. Так, в первом случае прирост площади ядерного материала с высоким
содержанием ДНК относительно контрольных значений достигает к 7-м суткам эксперимента 148%, а при
использовании мет-энкефалина в дозе 40 мкг/кг лишь
82%. Начиная с 1-х суток эксперимента регистрируемые изменения площади ядерного материала с разным
содержанием ДНК являются статистически значимыми
(P<0,001).
Исследование уровня информационной энтропии
хроматина показало, что его значения для ядер эпителия пищевода контрольных животных составляют в
среднем 1,54±0,06 усл. ед. При использовании мет-энкефалина как в дозе 40, так и в дозе 200 мкг/кг наблюдается постепенное увеличение уровня энтропии. Этот
прирост наблюдается вплоть до конца эксперимента.
135
ДЯ (К)
ДЯ (С)
ДЯ (М)
1 час.
Кубанский научный медицинский вестник № 6 (111) 2009
К
1 сут.
3 сут.
К
7 сут.
1 час.
А
1 сут.
3 сут.
7 сут.
Б
ОП (КЯ)
ОП (СЯ)
ОП (МЯ)
Энтропия
К
1 час.
1 сут.
3 сут.
7 сут.
В
Рис. 2. Морфометрические показатели ядер эпителиоцитов
слизистой оболочки пищевода мышей
Примечание:
136
А – диаметр ядер, Б – хроматин, В – оптическая плотность
(доза мет-энкефалина 200 мкг/кг, ДЯ – диаметр ядер, К – крупные, С – средние, М – мелкие,
ХВП – хроматин высокой плотности, ХУП – хроматин умеренной плотности,
ННП – хроматин низкой плотности, ОП – оптическая плотность,
КЯ – крупные ядра, СЯ – средние ядра, МЯ – мелкие ядра).
При использовании мет-энкефалина в дозе 200 мкг/кг
данные явления имеют более выраженный характер,
чем при дозе 40 мкг/кг. Расчет уровня информационной энтропии показал, что к 7-м суткам эксперимента
ее прирост достигает 143% относительно контрольных
значений, а при использовании мет-энкефалина в дозе
40 мкг/кг – лишь 92%. Начиная с 3-х суток эксперимента
регистрируемое изменение уровня информационной
энтропии является статистически значимым (P<0,001).
Таким образом, применение мет-энкефалина оказывает стимулирующий дозозависимый эффект на
ядерный аппарат многослойного плоского ороговевающего эпителия пищевода, что выражается в увеличении среднего диаметра ядер во всех изученных зонах
эпителиального пласта, росте оптической плотности
ядер эпителиоцитов базальной (камбиальной) зоны,
увеличении средней площади ядерного материала с
высоким содержанием ДНК и возрастании уровня информационной энтропии ядерного материала, свидетельствующем об увеличении его структурного разнообразия.
Все описанные изменения кариометрических параметров позволяют считать, что эпителий пищевода
проявляет дозозависимый эффект на мет-энкефалин,
причем в основном он реализуется ядрами с высокой
пролиферативной активностью, характеризующимися
повышенным содержанием ДНК, количество которых
увеличивается по сравнению с контролем более чем
в 2 раза. Этот показатель увеличивается и при изменении срока использования препарата. Так, пролонгирование влияния мет-энкефалина до 7 суток приводит к увеличению ядер с высоким содержанием ДНК
ЛИТЕРАТУРА
1. Котельников В. М. Исследование свойств хроматина клеток крови человека в норме и при патологии с использованием
реакции Фельгена // I Всесоюзный съезд гематологов и трансфузиологов. – М., 1979. – C. 123–124.
2. Курзанов А. Н. Опиоидные пептиды и пищеварительная
система // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. – 2005. – № 5, прил. 25. – С. 47–59.
3. Лилли Р. Патологическая техника и практическая гистохимия. – М., 1969. – 650 с.
4. Могильная Г. М. Роль энкефалинов в контроле морфофункционального статуса органов пищеварения / Г. М. Могильная,
А. Н. Курзанов // Наука Кубани. – 2003. – № 3. – С. 156–160.
5. Могильная Г. М. Пролиферативный эффект мет-энкефалина и тонкая кишка / Г. М. Могильная, В. И. Дудецкий, А. А. Евглевский, Э. Г. Пейливаньян // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. – 2007. – Т. 17, № 5, прил. 30. – С. 129.
6. Рух Ф. Определение содержания ДНК методом микрофлуориметрии // Введение в количественную цитохимию. – М., 1969. –
С. 229–239.
7. Смагин В. Г. Лиганды опиатных рецепторов / В. Г. Смагин,
В. А. Виноградов, С. А. Булгаков. – М., 1983. – 270 с.
8. Хруст Ю. Р. Основы количественной цитохимии: Учеб.-метод. пособие / Ю. Р. Хруст, Л. Л. Литинская, Т. А. Оглоблина, Г. А.
Соколова. – М.: изд. МГУ, 1978. – 14 с.
9. Gullo L. Stimulation of exocrine pancreatic secretion by metenkephalin / L. Gullo (et al.) // Gut (FVT). – 1986. – V. 27, № 12. –
P. 1479–1483.
10. Kurzanov A. N. Neuropeptides and factors of defensive barrier of
gastrointestinal tract / A. N. Kurzanov, G. M. Mogilnay // Digestion. Abstracts
of World Congresses of gastroenterology. – Vienna, 1998. – P. 236.
11. Uddman R. Peptidergic (enkephalin)innervation of the
mammalian esophagus / R. Uddman (et al.) // Gastroenterology. –
1980. – V. 78. – P. 732–737.
12. Zagon Ian S. Opioid growth factor is present in human and
mouse gasnrointestinal tract and inhibits DNA synthesis manner / Ian S.,
Zagon (et al.) // Am. J. Phisiol. – 1997. – V. 272. – P. 1094–1104.
Поступила 10.08.2009
А. В. МОРДЫК1, Н. С. БРЮХАНОВА2, В. В. АНТРОПОВА2
Špebnfm{e p`qqŠpniqŠb` r ank|m{u Šraepjrkegnl
h hu dhm`lhj`
b g`bhqhlnqŠh nŠ oepemnqhlnqŠh uhlhnŠep`ohh
Кубанский научный медицинский вестник № 6 (111) 2009
в 2 раза (24,3±0,03 – контроль и 62±2,2 при дозе
200 мкг/кг на 7-е сутки). Для дифференцированных
зон эпителиального пласта установлена зависимость
между диаметром ядер и их оптической плотностью:
мелким ядрам эпителиоцитов базального слоя присуща высокая оптическая плотность, а ядрам эпителиоцитов поверхностной зоны – низкая оптическая
плотность при их достаточно крупных размерах.
Итак, полученные данные позволяют присоединиться к мнению Zagon (1997), согласно которому эпителиоциты многослойного плоского эпителия имеют
рецепторы к нейропептидам, которые могут выступать
как модуляторы синтеза ДНК. При этом для мет-энкефалина этот эффект реализуется в зависимости от
дозы и срока воздействия препарата, исходного уровня
активности ядерного аппарата в аспекте синтеза ДНК
и, конечно, топографии эпителиоцитов в пределах многослойного эпителиального пласта.
1
Êàôåäðà ôòèçèàòðèè è ôòèçèîõèðóðãèè
ÃÎÓ ÂÏÎ «Îìñêàÿ ãîñóäàðñòâåííàÿ ìåäèöèíñêàÿ àêàäåìèÿ»,
Ðîññèÿ, 644043, ã. Îìñê, óë. Ëåíèíà, 12. E-mail: amordik@mail.ru, òåë. (3812) 653015;
2
ÃÓÇ ÎÎ êëèíè÷åñêèé ïðîòèâîòóáåðêóëåçíûé äèñïàíñåð ¹ 4,
Ðîññèÿ, 644055, ã. Îìñê, óë. Õèìèêîâ, 8à. E-mail: nadega@mail.ru, òåë. (3812) 655545
Ключевые слова: туберкулез, тревожные расстройства, химиотерапия, побочные реакции на противотуберкулезные препараты.
A. V. MORDYK1, N. S. BRJUHANOVA2, V. V. ANTROPOVA2
DISTURBING FRUSTRATION AT PATIENTS WITH THE TUBERCULOSIS
AND THEIR DYNAMICSDEPENDING ON BEARABLENESS OF CHEMOTHERAPY
УДК 616.24-002.5-085.281+615.015.26:615:281
Тревожные расстройства изучались у 72 больных туберкулезом, у 39 из которых проведение химиотерапии осложнилось
развитием побочных реакций на противотуберкулезные препараты. У всех обследованных до начала химиотерапии выявлены тревожные состояния, которые являлись ответной реакцией на впервые диагностированный туберкулез и вынужденную
длительную терапию в стационаре. Развитие побочных реакций на противотуберкулезные препараты приводило к более
выраженным нарушениям процессов психологической адаптации, сохранению и усугублению тревожных состояний. Полученные результаты определяют необходимость включения в состав комплексной терапии больных туберкулезом методов
медикаментозной и психотерапевтической коррекции тревожных расстройств.
1
Faculty of phthisiology and phthysiosurgery Omsk state medical academy,
Russia, 644043, Omsk, Lenina street, 12. E-mail: amordik@mail.ru, tel. (3812) 653015;
2
The Clinical antitubercular clinic № 4,
644055, Omsk, Chmikov street, 8а. E-mail: nadega@mail.ru, tel. (3812) 655545
137