Ландарь Лариса Николаевна ВЛИЯНИЕ ДОПАМИНА НА
advertisement
1 На правах рукописи Ландарь Лариса Николаевна ВЛИЯНИЕ ДОПАМИНА НА ИОНОРЕГУЛИРУЮЩУЮ ФУНКЦИЮ ПОЧЕК В НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СЕРДЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ 14.03.06 – Фармакология, клиническая фармакология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Челябинск – 2015 2 Работа выполнена на кафедре фармакологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Оренбургский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Кузьмин Олег Борисович Официальные оппоненты: Дубищев Алексей Владимирович доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Минздрава России, кафедра фармакологии, заведующий Джиоев Инал Германович доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «СевероОсетинская государственная медицинская академия» Минздрава России, кафедра нормальной физиологии, профессор Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г.Барнаул. Защита диссертации состоится «__» ___________ 2015 года в _____ часов на заседании диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской федерации, по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации и на сайте www.chelsma.ru Автореферат разослан «__» ___________ 2015 года. Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук Ю.С.Шишкова 3 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования и степень ее разработанности Дофаминомиметик допамин, идентичный естественному медиатору дофамину, является лекарственным препаратом, который широко используется для лечения кардиогенного шока и острой сердечной недостаточности, включая острый кардиоренальный синдром, возникающий у лиц с острой декомпенсированной ХСН (Национальные рекомендации по диагностике и лечению ХСН // Журнал Сердечная недостаточность. 2009. Т. 10, № 2. С. 64-106). В этих условиях допамин оказывает благоприятное влияние на почки, способствуя не только восстановлению почечной гемодинамики, но и увеличению диуреза и выделению с мочой электролитов, что препятствует избыточной задержке жидкости и ухудшению клинического состояния больного. Благоприятное действие допамина на ионорегулирующую функцию почек связано с прямой стимуляцией D1-дофаминовых рецепторов, которые располагаются в гладкой мускулатуре почечных сосудов, гломерулярных артериолах, клетках проксимальных канальцев и других сегментов нефрона. При их возбуждении развивается выраженная диуретическая реакция, обусловленная, прежде всего, угнетением реабсорбции натрия в ПК, которое возникает в ответ на подавление активности апикального Na+/H+-ионообменника 3 типа (NHE3) и Na+, K+-АТФазы, локализованной в базолатеральных мембранах канальцевых клеток (Gildea J.J., Israel J.A., Johnson A.K. et al. Caveolin-1 and dopamine mediated internalization of Na-K ATP-ase in human renal proximal cell // Hypertension. 2009. Vol. 54, № 5. P. 1070-1076; Hu M.C., Di Sole F., Zhand J. et al. Chronic regulation of renal Na+/H+exchanger NHE3 by dopamine: translational, and posttranslational mechanisms //Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 2013. Vol. 304, № 9. P. F1169-F1180). Однако, несмотря на глубокую разработку современных представлений о дофаминергической регуляции функции почек, многие стороны действия допамина на почки изучены недостаточно или совсем не исследованы. Это касается возможного участия в механизме формирования сосудистого и канальцевого эффектов допамина РАС и других почечных нейрогуморальных систем, которые участвуют в регуляции транспорта ионов в проксимальном канальце и других сегментах нефрона. Их роль в механизме действия допамина на почки не исследована, хотя выяснение этого вопроса имеет существенное значение не только для уточнения фармакодинамики этого препарата, но и оценки характера его взаимодействия в почках с ингибиторами РАС с другими нейрогуморальными системами. Недостаточно исследованы также особенности фармакодинамического взаимодействия допамина в почках с фуросемидом и другими петлевыми диуретиками, которые применяются в комбинации с этим препаратом у больных с декомпенсированной ХСН для восстановления диуреза и устранения избыточной задержки жидкости в организме. В настоящей работе проведен фармакологический анализ роли простагландиновой (ПГ), калликреин-кининовой (ККС) и ренин-ангиотензиновой систем (РАС) в механизме формирования почечных эффектов допамина и изучены осо- 4 бенности его взаимодействия с диуретиком фуросемидом в почках крыс на модели сердечной недостаточности. Цель исследования Цель исследования – уточнение роли почечных нейрогуморальных систем в механизме действия допамина на ионорегулирующую функцию почек и оценка характера его фармакодинамического взаимодействия в почках с петлевыми диуретиками при экспериментальной сердечной недостаточности. Задачи исследования Для достижения поставленной цели решались следующие задачи: 1. Исследовать влияние дофаминомиметика допамина на ионорегулирующую функцию почек крыс. 2. Оценить влияние антагониста D-дофаминовых рецепторов галоперидола на реакцию почек крыс в ответ на допамин. 3. Изучить влияние специфических ингибиторов простагландиновой системы (диклофенак натрия), калликреин-кининовой системы (контрикал) и ренинангиотензиновой системы (эналаприл, лозартан, алискирен) на ионорегулирующую функцию почек крыс при действии допамина. 4. Исследовать фармакодинамическое взаимодействие допамина с петлевым диуретиком фуросемидом в почке крыс с экспериментальной сердечной недостаточностью, вызванной длительным воздействием на сердце избыточной физической нагрузки и больших доз адреномиметика фенилэфрина. Методология и методы исследования Для оценки роли почечных простагландиновой, калликреин-кининовой и ренин-ангиотензиновой систем в механизме действия допамина на ионорегулирующую функцию почек крыс и изучения характера его фармакодинамического взаимодействия в почках с фуросемидом у крыс с экспериментальной сердечной недостаточностью использованы различные методологические подходы. Клиренсовые опыты на наркотизированных крысах Эксперименты выполнены на 90 наркотизированных тиопенталом натрия (50 мг/кг, внутрибрюшинно) крысах-самцах массой 190-220 г (питомник «Столбовая», Московская область), находившихся на обычном рационе вивария. После наступления наркоза крысу фиксировали на спине и вскрывали брюшную полость. В мочевой пузырь и заднюю полую вену вводили катетеры для сбора мочи и введения 0,9% раствора NaCl, содержащего 0,25% инулина, со скоростью 50 мкл/мин, которую поддерживали на постоянном уровне в течение всего эксперимента. Одновременно из мочевого пузыря в мерные пипетки собирали 10минутные порции мочи. После стабилизации диуреза собирали две контрольные порции мочи, вводили допамин и исследовали функцию почек крыс в течение 8090 минут наблюдения. Перед инъекцией препарата, в середине и в конце эксперимента из хвостовой вены брали пробы крови в объеме 0,1 мл. В полученных пробах крови и мочи определяли концентрацию инулина антроновым методом и исследовали содержание натрия и калия методом пламенной фотометрии. Функция почек оценивалась по величине диуреза, клиренса инулина, характеризующего скорость клубочковой фильтрации, выделении натрия и калия с мо- 5 чой, экскретируемой фракции натрия и отношения (индекса) натрий/калий мочи, которые рассчитывались по стандартным формулам в пересчете на 100 г массы животного (Рябов С.И., Наточин Ю.В. Методы очищения в оценке функционального состояния почки (глава 2) // Функциональная нефрология. СПб.: Лань, 1997. С.45-76). Допамин (допмин) водился крысам однократно подкожно в дозе 1мг/кг, вызывающей выраженную диуретическую реакцию. Функция почек крыс изучалась также при комбинации допамина с антагонистом D-дофаминовых рецепторов галоперидолом, ингибитором калликреина контрикалом и ингибитором циклооксигеназы диклофенаком натрия, которые вводились внутримышечно соответственно в дозах 1 мг/кг, 6000 АТрЕ/кг и 3 мг/кг за 20 минут до введения допамина. Ингибитор АПФ эналаприл, антагонист АТ1-ангиотензиновых рецепторов лозартан и алискирен предварительно вводились животным однократно внутрь в течение 7 дней до постановки эксперимента в дозах соответственно 1мг/кг, 1мг/кг и 4 мг/кг, которые примерно соответствуют высшим суточным дозам для человека. Каждый опыт ставился на одном животном. После окончания опыта крысы подвергались эвтаназии с помощью передозировки наркоза. Всего выполнено 9 серий экспериментов (90 опытов). Опыты на крысах с моделью сердечной недостаточности В экспериментах использовались 22 крысы-самца массой 200-250 г, находившиеся на стандартном рационе вивария и имевшие свободный доступ к воде. Животные были разделены на две группы, в которых после первоначальной оценки действия допамина и фуросемида на функцию почек интактных крыс и 3дневного периода “washout” моделировалась сердечная недостаточность и вновь изучалась реакция почек на исследуемые препараты. Экспериментальную сердечную недостаточность у крыс моделировали по методике В.И. Инчиной и др. (2000) в модификации С.П. Саликовой и др. (2002). Для этого животным ежедневно в течение 10 дней вводили подкожно 0,1 мл 1% раствора адреномиметика фенилэфрина и затем подвергали их интенсивному плаванию до полного изнеможения. В результате у крыс формировалась ЭСН, которая подтверждалась клиническими (тахикардия, асцит, гепатомегалия) и морфологическими (микроскопия гистологических срезов миокарда и печени) данными (Инчина В.И., Столярова В.В., Гарькин Г.Г. и др. Состояние миокарда в модельной ситуации активации гипертензивных механизмов // Второй конгресс по патофизиологии. М. 2000. С.68; Саликова С.П., Пресняков С.В., Фарек Фуад Мухаммед. Структурный анализ миокарда крыс с экспериментальной сердечной недостаточностью при культивировании in vitro // Морфология. 2002. Т.121. № 2-3. С.128-129). Влияние лекарственных препаратов на функцию почек крыс изучалось на фоне 3% водной нагрузки с добавлением 0,6% хлорида натрия. С этой целью животные после солевой нагрузки и введения препаратов помещались в индивидуальные плексигласовые боксы для сбора мочи. Моча собиралась каждые 1,5 часа в течение 4,5 часов. В полученных образцах мочи с использованием коммерческих наборов CREATININE 60 (фирма «Кормей», Польша) определяли содержа- 6 ние креатинина на биохимическом анализаторе «Vitalit» (фирма «I.S.E.S.r.I.», Италия) и исследовали концентрацию натрия и калия на пламенном фотометре. Показатели диуреза, экскреции с мочой креатинина, натрия, калия и отношение натрий/калий мочи рассчитывали по общепринятым формулам. Допамин и фуросемид вводились однократно подкожно в дозах 1 мг/кг. По окончании опытов животных подвергали эвтаназии с помощью передозировки наркоза. Всего выполнено 6 серий экспериментов (60 опытов). Опыты на наркотизированных и бодрствующих крысах проведены в соответствии с требованиями приказов № 1179 МЗ СССР от 10.10. 1983 г., № 267 МЗ РФ от 19.06. 2003 г., регламента Европейской Конвенции (Страсбург, 1986) по содержанию, уходу за подопытными животными, выводу их из эксперимента и последующей утилизации. План исследования одобрен Локальным этическим комитетом ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения РФ (протокол № 68 от 26 сентября 2012 г.). Статистическая обработка данных проведена на персональном компьютере с использованием программы STATISTICA 5.0. Статистическую значимость различий количественных характеристик между выборками данных, полученных в экспериментах на наркотизированных крысах, оценивали с помощью критерия Вилкоксона для парных данных. Достоверность не связанных между собой данных, полученных в опытах на животных с экспериментальной ХСН, проверялась с помощью критерия Манна-Уитни. Статистически достоверными считались различия при р < 0,05. Степень достоверности, апробация результатов, личное участие автора Научные положения, выводы и рекомендации диссертации основаны на анализе достаточного объема фактических данных, избранном дизайне и использовании современных методов оценки ионорегулирующей функции почек, адекватных сформулированным в работе целям и задачам. В работе использовались сертифицированные отечественные и импортные лекарственные препараты, позволившие получить достоверные данные о механизме формирования их почечных эффектов. Статистическая оценка результатов исследования проведена с использованием современных компьютерных методик обработки и оценки исходных количественных показателей. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы в материалах Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Сибирский медико-биологический конгресс» (г. Барнаул, 2011) Всероссийских конференций молодых ученых и специалистов Оренбургской области (г. Оренбург, 2012, 2013 гг.), Всероссийской научно-практической конференции «Нанотехнологии в фармакологии и медицине» (г. Оренбург, 2012 г.). Результаты исследований представлены в материалах Российского национального конгресса кардиологов (г. Москва, 2011, 2012 г.), Московского международного форума кардиологов (г. Москва, 2013, 2014 гг.) и IV съезда фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (г. Казань, 2012 г.). Апробация работы состоялась на расширенном заседании кафедры фармакологии с участием сотрудников кафедры патологической физиологии, кафедры 7 патологической анатомии, кафедры биохимии, кафедры клинической лабораторной диагностики, кафедры управления и экономики фармации, фармтехнологии и фармакогнозии ГБОУ ВПО «ОрГМУ» Минздрава России. Автор непосредственно участвовал в выполнении диссертации на всех этапах работы. Основная идея, цель, задачи, дизайн исследования, его методология и общая концепция определялись совместно с научным руководителем д.м.н., профессором О.Б. Кузьминым. Анализ современной отечественной и зарубежной литературы, статистическая обработка первичных данных, их анализ, написание и оформление диссертации, представление результатов работы в виде научных публикаций и докладов на конференциях осуществлялись лично соискателем. Соавторы к.м.н. М.О. Пугаева и к.м.н. Н.В. Бучнева оказывали консультативную помощь при подготовке ряда публикаций. Положения, выносимые на защиту 1. Допамин увеличивает скорость клубочковой фильтрации и тормозит у крыс реабсорбцию натрия в почках, вызывая выраженную диуретическую реакцию с одновременным увеличением выделения натрия и калия с мочой. Реакция почек крыс на допамин устраняется антагонистом D-дофаминовых рецепторов галоперидолом. 2. Почечные простагландиновая и калликреин-кининовая системы не участвуют в механизме, опосредующем действие допамина на ионорегулирующую функцию почек крыс. 3. Почечная ренин-ангиотензиновая система препятствует ингибирующему действию допамина на реабсорбцию натрия в почках, ослабляя его диуретический, натрийуретический и калийуретический эффекты. 4. Допамин улучшает у крыс с экспериментальной сердечной недостаточностью, вызванной избыточной физической нагрузкой и введением больших доз адреномиметика фенилэфрина, ионорегулирующую функцию почек и значительно усиливает при добавлении к диуретику фуросемиду его диуретический эффект, способствуя дополнительному увеличению выделения натрия с мочой и повышению отношения натрий/калий мочи. Научная новизна Впервые в экспериментах с ингибитором ПГ-системы диклофенаком натрия и ингибитором ККС контрикалом показано, что эти нейрогуморальные системы не участвуют в механизме действия допамина на ионорегулирующую функцию почек крыс. Впервые в опытах с ингибиторами РАС эналаприлом, лозартаном и алискиреном установлено, что почечная ренин-ангиотензиновая система непосредственно включается в механизм действия допамина на ионорегулирующую функцию почек крыс, выполняя функцию модулятора, препятствующего при действии этого дофаминомиметика избыточной потере воды и электролитов с мочой. В экспериментах на крысах с ЭСН, вызванной избыточной физической нагрузкой и введением больших доз адреномиметика фенилэфрина, впервые выявлено, что допамин при добавлении к диуретику фуросемиду не только значительно усиливает его диуретическое действие, но и вызывает преимущественное по- 8 вышение потери натрия с мочой, способствуя существенному увеличению отношения натрий/калий мочи. Теоретическая и практическая значимость работы В экспериментах на крысах уточнена роль простагландиновой, калликреинкининовой и ренин-ангиотензиновой систем в механизме действия допамина на ионорегулирующую функцию почек и выяснены особенности его фармакодинамического взаимодействия в почках с ингибиторами АПФ, антагонистами АТ1ангиотензиновых рецепторов и прямыми ингибиторами ренина, которые широко применяются для лекарственной терапии ХСН. На крысах с экспериментальной сердечной недостаточностью уточнены также особенности совместного влияния на ионорегулирующую функцию почек допамина и диуретика фуросемида, комбинация которых широко применятся для устранения рефрактерности к диуретикам у лиц с острой декомпенсированной ХСН. Практическое значение результатов исследования определяется выяснением особенностей фармакодинамического взаимодействия в почках допамина с ингибиторами синтеза простагландинов, кининов, различными по механизму действия ингибиторами РАС и диуретиком фуросемидом, которые необходимо учитывать при совместном назначении этих препаратов в клинике. Внедрение результатов исследования в практику Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедре фармакологии и кафедре пропедевтики внутренний болезней ГБОУ ВПО «Оренбургский государственный медицинский университет» Минздрава России. Публикации Соискатель имеет 17 опубликованных работ, из них по теме диссертации опубликовано 13 научных работ общим объемом 3,4 печатных листа, в том числе 7 публикаций (3 статьи и 4 тезиса) в научных журналах, включенных в Перечень рецензируемых научных журналов и изданий, рекомендованных ВАК РФ для публикации основных научных результатов диссертации, 6 работ опубликовано в материалах всероссийских и международных конференций. Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 98 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка сокращений и списка литературы. Библиографический указатель включает 128 источников, из них 21 отечественных и 107 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 4 рисунками и 12 таблицами. 9 ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Влияние допамина и антагониста D-дофаминовых рецепторов галоперидола на ионорегулирующую функцию почек крыс В первоначальных экспериментах была проведена оценка влияния допамина на основные показатели ионорегулирующей функции почек наркотизированных крыс. Введение допамина таким животным вызывало выраженную диуретическую реакцию, которая развивалась в первые 10 минут после инъекции препарата, быстро нарастала и в большинстве опытов достигала максимума спустя 3040 минут после введения. К 80 минуте наблюдения средний уровень диуреза повышался с 1,88±0,07 до 4,18±0,18 мкл/мин/100 г, то-есть в 2,22 раза (р < 0,05). Клиренс инулина, отражающий величину СКФ, при этом также возрос, указывая на достоверное увеличение клубочковой фильтрации. Одновременно с увеличением мочеотделения наблюдалась характерная натрийуретическая реакция, которая сопровождалась достоверным увеличением выделения натрия с мочой в 2,15 раза. Экскретируемая фракция натрия возросла с 0,28±0,02 % до 0,48±0,03 % (р < 0,05). Это свидетельствует о существенном угнетении реабсорбции этого иона в почечных канальцах. Натрийуретической реакции, развивавшейся у крыс при введении допамина, сопутствовало также увеличение выделения с мочой ионов калия. Экскреция этого иона спустя 80 минут наблюдения достоверно возросла в 2,77 раза. Индекс натрий/калий мочи при этом существенно не изменился, хотя и имел тенденцию к некоторому снижению (таблица 1). Таблица 1 - Влияние допамина на показатели ионорегулирующей функции почек наркотизированных крыс (M±m, n = 10) Показатель Контроль Допамин Клиренс инулина, мкл/мин/100 г 207,3 ± 3,82 257,4 ± 3,69 * Диурез, мкл/мин/100 г 1,88 ± 0,07 4,18 ± 0,18 * 0,081 ± 0,003 0,174 ± 0,008 * Экскретируемая фракция натрия, % 0,28 ± 0,02 0,48 ± 0,03 * Выделение калия, мкмоль/мин/100 г 0,114 ± 0,016 0,316 ± 0,036 * 0,82 ± 0,08 0,61 ± 0,03 Выделение натрия, мкмоль/мин/100 г Отношение натрий/калий мочи Примечание: Контроль – значения показателей до введения допамина (1 мг/кг, подкожно). * р < 0,05 (критерий Вилкоксона). Результаты этих опытов подтвердили известные данные о том, что допамин вызывает у интактных и наркотизированных животных выраженную диуретиче- 10 скую и натрийуретическую реакцию, которая сопровождается увеличением потери калия с мочой. В механизме формирования этих эффектов допамина участвует незначительный прирост СКФ, но главную роль играет угнетение реабсорбции натрия в канальцах почек. Известно также, что диуретический и натрийуретический эффекты допамина в основном связаны с прямым возбуждением D1-дофаминовых рецепторов клеток ПК и ТВКПГ, которые опосредуют ингибирующее влияние препарата на реабсорбцию натрия в почках. Для уточнения роли этих рецепторов в механизме действия допамина на ионорегулирующую функцию почек мы исследовали реакцию почек крыс на допамин после предварительной блокады D-дофаминовых рецепторов почек с помощью галоперидола. С этой целью первоначально вводился крысам галоперидол, затем спустя 20 минут – допамин и изучался характер их фармакодинамического взаимодействия в почках. Предварительная инъекция галоперидола практически полностью устраняла диуретическую и натрийуретическую реакцию почек в ответ на дофаминомиметик допамин. К 80 минуте наблюдения после введения этого препарата средняя величина мочеотделения практически не изменилась по сравнению с контрольным уровнем, составляя соответственно 2,50 ± 0,09 и 2,38 ± 0,09 мкл/мин/100 г (р > 0,05). Допамин, действуя на фоне предварительной блокады D-дофаминовых рецепторов почечной ткани, терял также способность вызывать выраженную натрийуретическую реакцию с одновременным увеличением объема клубочковой фильтрации и экскретируемой фракции натрия. Устранению галоперидолом натрийуретического действия допамина сопутствовало также резкое ослабление калийуретического эффекта этого препарата, хотя полностью его калийуретический эффект при этом не устранялся. Индекс натрий/калий мочи при этом достоверно снизился в 1,46 раза. Результаты экспериментов с галоперидолом подтвердили представление о том, что реакция почек на допамин связана со специфической стимуляцией Dдофаминовых рецепторов гладкой мускулатуры почечных сосудов, клубочковых артериол, клеток проксимальных канальцев и других сегментов нефрона. Однако не исключено, что в механизм формирования эффектов, возникающих в почках при возбуждении D-дофаминовых рецепторов, могут вовлекаться также различные нейрогуморальные системы, которые участвуют в регуляции транспорта натрия и других ионов в различных отделах нефрона. Прежде всего, это касается почечной тканевой РАС, активность которой может существенно изменяться под влиянием допамина. Вполне возможно, что в механизм действия этого препарата на ионорегулирующую функцию почек могут включаться также ПГ и ККС почек, которые непосредственно контролируют транспорт натрия, воды и других ионов в проксимальных и дистальных отделах почечных канальцев. Для того чтобы получить представление о роли простагландиновой, калликреин-кининовой и ренин-ангиотензиновой систем в механизме действия дофаминомиметика допамина на ионорегулирующую функцию почек исследовано его взаимодействие в почках крыс со специфическими ингибиторами этих нейрогуморальных систем. 11 Взаимодействие допамина в почке крыс с ингибитором простагландиновой системы диклофенаком натрия Простагландиновая система почек участвует в регуляции гемодинамики и ионорегулирующей функции почек, ослабляя избыточное влияние симпатической нервной системы, ренин-ангиотензин-альдостероновой системы и почечной тканевой РАС на тонус сосудов и транспорт натрия и других электролитов в различных отделах нефрона. В то же время данные, полученные в экспериментах на крысах, свидетельствуют о том, что не только адренергические почечные нервы, но и циркулирующий в крови дофамин могут оказывать стимулирующее влияние на процессы образования и выделения почками простагландинов, включая ПГЕ2. Для выяснения возможного участия почечной ПГ-системы в механизме действия допамина на ионорегулирующую функцию почек мы изучили влияние специфического ингибитора циклооксигеназы диклофенака натрия, который подавляет синтез ПГЕ2 и других простагландинов в ткани почек и других органов, на формирование почечных эффектов этого препарата. С этой целью мы первоначально оценили влияние одного ингибитора циклооксигеназы на состояние ионорегулирующей функции почек, а затем исследовали характер его фармакодинамического взаимодействия в почках крыс с допамином. Диклофенак натрия вводился наркотизированным животным внутримышечно за 20 минут до инъекции дофаминомиметика в дозе 3 мг/кг, которая при назначении внутрь значительно угнетает синтез ПГЕ2 в ткани коркового слоя почек крыс (Tegeder I., Neupert W., Guhring H. Effects of selective and unselective cyclooxygenase inhibitors on prostanoid release from various rat organs // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2000. Vol. 292, №. 3. P. 1161- 1168). Введение крысам одного диклофенака натрия сопровождалось умеренным снижением мочеотделения и экскреции почками натрия, характерным для всех нестероидных противовоспалительных средств. Величина диуреза уменьшалась в первые 20 минут после инъекции ингибитора циклооксигеназы и достигала максимальных значений спустя 50 минут наблюдения. К этому времени диурез упал по сравнению с контрольным уровнем с 2,34 ± 0,20 до 1,86 ± 0,21 мкл/мин/100 г (р < 0,05). Одновременно отмечалось нарастающее снижение выделения почками натрия, также достигавшее максимальных значений спустя 50 минут после инъекции препарата. В этих условиях потеря натрия с мочой незначительно, но достоверно снизилась с 0,147 ± 0,019 до 0,123 ± 0,021 мкмоль/мин/100 г (р < 0,05). Поскольку величина экскретируемой фракции натрия, характеризующая реабсорбцию этого иона в почечных канальцах, при этом заметно не изменилась, основной причиной задержки натрия в организме под влиянием диклофенака натрия стало замедление СКФ, которая достоверно уменьшилась с 250,0 ± 8,67 до 219,4 ± 19,4 мкл/мин/100 г (р < 0,05). Выделение калия с мочой и индекс натрий/калий мочи при этом также существенно не изменились, что указывает на отсутствие влияния препарата на показатели калийуретической функции почек. 12 В последующих экспериментах было изучено влияние предварительного угнетения диклофенаком натрия синтеза почечных ПГ на реакцию почек крыс в ответ на допамин. В результате установлено, что введение допамина на фоне предварительной блокады синтеза почечных простагландинов вызывает у крыс практически такую же диуретическую реакцию, которая наблюдалась в контрольных опытах с одним дофаминомиметиком. Если в контрольных экспериментах с допамином величина диуреза возросла к 80 минуте наблюдения с 1,88±0,07 до 4,18±0,18 мкл/мин/100 г, то-есть в 2,22 раза (р < 0,05), то при совместном введении диклофенака натрия и допамина этот показатель также вырос с 1,88 ± 0,18 до 4,18 ± 0,32 (р < 0,05). Аналогичным образом изменялось и выделение натрия с мочой, которое к концу периода наблюдения достоверно выросло в 3,02 раза по сравнению с контрольным уровнем. Практически полностью сохранилась также способность допамина увеличивать СКФ и тормозить в почках реабсорбцию натрия. Экскреция калия с мочой спустя 80 минут после инъекции допамина на фоне действия диклофенака натрия достоверно увеличилась в 2,91 раза, а отношение натрий/калий мочи, как и в контрольных опытах, существенно не изменилось (таблица 2). Таблица 2 - Влияние диклофенака-натрия на показатели ионорегулирующей функции почек наркотизированных крыс при действии допамина (M±m, n = 10) Контроль Диклофенак-натрий + допамин Клиренс инулина, мкл/мин/100 г 197,5 ± 3,11 259,5 ± 6,67 * Диурез, мкл/мин/100 г 1,88 ± 0,18 4,18 ± 0,32 * 0,093 ± 0,004 0,281 ± 0,021 * Экскретируемая фракция натрия, % 0,33 ± 0,02 0,76 ± 0,08 * Выделение калия, мкмоль/мин/100 г 0,123 ± 0,008 0,358 ± 0,039 * 0,93 ± 0,08 0,88 ± 0,07 Показатель Выделение натрия, мкмоль/мин/100 г Отношение натрий/калий мочи Примечание: Контроль – значения показателей спустя 20 мин после инъекции диклофенака натрия до введения допамина. * р < 0,05 (критерий Вилкоксона). Следовательно, предварительное подавление активности почечной ПГсистемы ингибитором циклооксигеназы диклофенаком натрия не оказывает заметного влияния на реакцию почек крыс в ответ на допамин. В связи с этим имеются основания считать, что образующиеся в почках простагландины не включаются в механизм действия допамина на ионорегулирующую функцию почек крыс. 13 Взаимодействие допамина в почке крыс с ингибитором калликреин-кининовой системы контрикалом Роль тканевой ККС в контроле ионорегулирующей функции почек недостаточно ясна, хотя установлено, что образующиеся в почках кинины, возбуждая клеточные В2-кининовые рецепторы, могут оказывать прямое ингибирующее влияние на транспорт натрия в дистальных сегментах нефрона. Становится также все более очевидным, что почечная тканевая ККС является также одним из звеньев гуморального механизма, который обеспечивает быструю адаптацию почек к избыточному поступлению в организм ионов калия. Для выяснения роли почечной ККС в механизме действия допамина на ионорегулирующую функцию почек исследовано его взаимодействие в почках крыс с контрикалом, который является специфическим ингибитором калликреина и других сериновых протеаз и избирательно тормозит процесс превращения плазменного и тканевого кининогенов в брадикинин и другие кинины. С этой целью контрикал вводился крысам за 20 минут до инъекции допамина внутримышечно в дозе 6000 АТрЕ/кг, которая подавляет кининогеназную активность мочи крыс и содержание в ней иммунореактивного калликреина и кининов (Sato S., Kher V., Scicli A.G. The effect of aprotinin (a serine protease inhibitor) on renal function and rennin release // Hypertension. 1983. Vol. 5, №. 6. P. 893-899). Для более точной оценки взаимодействия допамина в почках с контрикалом первоначально изучили влияние одного ингибитора калликреина на функциональное состояние почек наркотизированных крыс. В результате оказалось, что введение животным этого препарата не оказывает значимого влияния на показатели ионорегулирующей функции почек в течение всего 80-минутного периода наблюдения. Это касается практически всех функциональных показателей, включая величину СКФ, объем мочеотделения, величину экскретируемой фракции натрия и потерю электролитов с мочой. Дальнейшие эксперименты показали, что предварительное введение контрикала не оказывает также заметного влияния и на формирование обычной реакции почек в ответ на допамин. На фоне действия ингибитора ККС допамин вызывал характерную диуретическую реакцию с увеличением СКФ и значительным приростом потери с мочой ионов натрия. Величина мочеотделения спустя 80 минут наблюдения достоверно возросла в 2,41 раза по сравнению с исходным уровнем, то-есть даже несколько больше, чем в контрольных экспериментах с одним допамином. Экскретируемая фракция натрия возросла в этих условиях с 0,42 ± 0,02% до 0,78 ± 0,08% (р < 0,05), что свидетельствует о полном сохранении ингибирующего действия препарата на реабсорбцию этого иона в почках. Потеря натрия с мочой под влиянием допамина, также как и в контрольных опытах, сопровождалась достоверным приростом калийуреза. Отношение натрий/калий мочи при этом снизилось, что указывает на преимущественное увеличение потери с мочой калия по сравнению с потерей натрия при совместном применении контрикала и допамина (таблица 3). 14 Результаты экспериментов с ингибитором синтеза кининов контрикалом предполагают, что почечная ККС также не участвует в механизме, реализующем действие допамина на ионорегулирующую функцию почек крыс. Таблица 3 - Влияние контрикала на показатели ионорегулирующей функции почек наркотизированных крыс при действии допамина (M±m, n=10) Показатель Контроль Контрикал +допамин Клиренс инулина, мкл/мин/100 г 210,4 ± 8,67 298,0 ± 15,8 * Диурез, мкл/мин/100 г 1,90 ± 0,07 4,58 ± 0,45 * Выделение натрия, мкмоль/мин/100 г 0,123 ± 0,008 0,311 ± 0,037 * Экскретируемая фракция натрия, % 0,42 ± 0,02 0,78 ± 0,08 * Выделение калия, мкмоль/мин/100 г 0,179 ± 0,027 0,306 ± 0,030 * 1,67 ± 0,15 0,87 ± 0,04 * Отношение натрий/калий мочи Примечание: Контроль – значения показателей спустя 20 мин после инъекции контрикала до введения допамина. * р < 0,05 (критерий Вилкоксона). Влияние ингибиторов ренин-ангиотензиновой системы эналаприла, лозартана и алискирена на реакцию почек крыс при действии допамина Согласно данным, полученным в экспериментальных исследованиях, допамин в зависимости от дозы может существенно изменять процесс секреции ренина ЮГА и, следовательно, активность циркулирующей ренин-ангиотензинальдостероновой системы и почечной тканевой РАС. При назначении малых, «почечных» доз этого препарата, возбуждающих преимущественно D1дофаминовые рецепторы клеток ЮГА, продуцирующих ренин, наблюдается не только характерная диуретическая реакция, но и увеличение их секреторной активности, ведущее к активации РАС. Следовало поэтому ожидать, что повышение активности почечной РАС, возникающее при действии допамина, может прямо вовлекаться в механизм действия этого препарата на ионорегулирующую функцию почек. Для выяснения этого вопроса было изучено взаимодействие допамина в почках крыс с ингибиторами РАС различного механизма действия. С этой целью использовались ингибитор АПФ эналаприл, антагонист АТ1-ангиотензиновых рецепторов лозартан и прямой ингибитор ренина алискирен, которые назначались животным внутрь соответственно в дозах 1, 1 и 4 мг/кг/сутки в течение 7 дней до постановки эксперимента. Действительно, уже первоначальные эксперименты с эналаприлом, который подавляет активность РАС и снижает уровень ангиотензина II в плазме крови и 15 почечной ткани, показали, что предварительное назначение этого препарата весьма существенно изменяет реакцию почек крыс на допамин (таблица 4). Если в контрольных экспериментах с одним допамином диурез к 80 минуте наблюдения увеличился в 2,22 раза, то при совместном применении эналаприла и дофаминомиметика величина этого показателя достоверно возросла в 3,46 раза. К этому времени потеря натрия с мочой с мочой увеличилась в 3,15 раза, в то время как прирост натрийуреза в контрольных опытах составил всего 2,15 раза. В этих условиях отмечен также сопоставимый с введением одного допамина прирост клиренса инулина, в то время как экскретируемая фракция натрия возросла с 0,29 ± 0,02% до 0,78 ± 0,08% (р < 0,05), что существенно превышает данные, полученные в контрольных опытах, и указывает на значительное угнетение реабсорбции натрия в почках. Одновременно наблюдалась и более выраженная калийуретическая реакция с увеличением потери калия с мочой, при которой величина калийуреза выросла почти в 5 раз по сравнению с исходным уровнем. Индекс натрий/калий мочи при этом достоверно снизился, что указывает на преимущественный прирост выделения с мочой калия по сравнению с натрием. Таблица 4 - Влияние эналаприла на показатели ионорегулирующей функции почек наркотизированных крыс при действии допамина (M±m, n=10) Показатель Контроль Эналаприл + допамин Клиренс инулина, мкл/мин/100 г 197,4 ± 4,11 246,6 ± 4,80 * Диурез, мкл/мин/100 г 1,96 ± 0,13 6,78 ± 0,40 * 0,079 ± 0,020 0,249 ± 0,013 * Экскретируемая фракция натрия, % 0,29 ± 0,02 0,78 ± 0,08 * Выделение калия, мкмоль/мин/100 г 0,111 ± 0,020 0,551 ± 0,050 * 0,91 ± 0,10 0,45 ± 0,03 * Выделение натрия, мкмоль/мин/100 г Отношение натрий/калий мочи Примечание: Контроль – значения показателей до введения допамина крысам, получавшим предварительно эналаприл в течение 7 дней (1 мг/кг/сутки, внутрь). * р < 0,05 (критерий Вилкоксона). Таким образом, предварительное угнетение эналаприлом активности почечной тканевой РАС не только не ослабляет, а, напротив, значительно усиливает ингибирующее влияние допамина на реабсорбцию натрия в почках крыс и существенно увеличивает выраженность эго диуретического, натрийуретического и калийуретического действия. Весьма похожие результаты были получены и в экспериментах с антагонистом АТ1-ангиотензиновых рецепторов лозартаном, который препятствует возбуждению в почках эффекторных тканевых рецепторов РАС, несмотря на повыше- 16 ние в крови активности ренина плазмы, концентрации циркулирующего ангиотензина II и его содержания в ткани почек. В заключительной серии экспериментов для подавления активности РАС использовался прямой ингибитор ренина алискирен, который специфически снижает активность ренина плазмы и образование активного ренина и ангиотензина II непосредственно в ткани почек. Результаты опытов представлены в таблице 5. Как и в предыдущих сериях экспериментов с эналаприлом и лозартаном, предварительное назначение крысам алискирена резко повышало чувствительность почек к допамину. Введение допамина на фоне подавления активности почечной РАС сопровождалось достоверным увеличением диуреза в 6,57 раза с одновременным приростом потери натрия с мочой в 7,18 раза. К этому времени отмечено дополнительное увеличение СКФ, однако экскретируемая фракция натрия возросла при этом с 0,38 ± 0,03% до 1,69 ± 0,12% (р < 0,05), что намного превышает прирост этого показателя в контрольных опытах с одним допамином и свидетельствует о значительно более выраженном угнетении реабсорбции этого иона в канальцах почек. Одновременно под влиянием допамина наблюдалась также более выраженная калийуретическая реакция с приростом калийуреза в 6,95 раза по сравнению с исходным уровнем. Отношение натрий/калий мочи при этом существенно не изменилось. Таблица 5 - Влияние алискирена на показатели ионорегулирующей функции почек наркотизированных крыс при действии допамина (M±m, n=10) Показатель Контроль Алискирен + допамин Клиренс инулина, мкл/мин/100 г 210,5 ± 3,22 345,4 ±9 ,02 * Диурез, мкл/мин/100 г 1,98 ± 0,07 13,0 ± 0,74 * 0,115 ± 0,012 0,826 ± 0,101 * Экскретируемая фракция натрия, % 0,38 ± 0,03 1,69 ± 0,12 * Выделение калия, мкмоль/мин/100 г 0,103 ± 0,012 0,716 ± 0,036 * 1,18 ± 0,09 1,25 ± 0,18 Выделение натрия, мкмоль/мин/100 г Отношение натрий/калий мочи Примечание: Контроль – значения показателей до введения крысам допамина, получавшим предварительно алискирен в течение 7 дней (4 мг/кг/сутки, внутрь). * р < 0,05 (критерий Вилкоксона). Следовательно, предварительное угнетение активности почечной тканевой РАС у наркотизированных крыс с помощью эналаприла, лозартана или алискирена значительно усиливает диуретический, натрийуретический и калийуретический эффекты допамина. В механизме формирования этих почечных эффектов 17 ведущее значение имеет потенцирование ингибиторами РАС прямого угнетающего действия этого препарата на процесс реабсорбции ионов натрия в почках. Взаимодействие допамина с петлевым диуретиком фуросемидом в почке крыс с экспериментальной сердечной недостаточностью Для уточнения характера фармакодинамического взаимодействия допамина и петлевых диуретиков в почках было исследовано влияние допамина и его комбинации с фуросемидом на показатели ионорегулирующей функции почек крыс с ЭСН, вызванной длительным комбинированным действием на сердце избыточной физической нагрузки и больших доз адреномиметика фенилэфрина. Введение допамина интактным крысам не оказывало заметного влияния на величину диуреза, но вызывало характерную натрийуретическую реакцию. Выделение натрия с мочой достоверно возросло с 37,4±6,60 до 62,6±6,95 мкмоль/4,5 ч/100 г (р < 0,05), то-есть в 1,67 раза, и было связано в основном с угнетением в почках реабсорбции этого иона, так как экскреция креатинина с мочой, отражающая величину СКФ, при этом существенно не изменилась. Допамин не оказывал также достоверного влияния на выделение почками калия, но почти в 2 раза увеличивал к концу наблюдения отношение натрий/калий мочи, что подтверждает известные данные о преимущественном действии этого препарата на транспорт натрия в канальцах почек (таблица 6). Предварительная оценка функционального состояния почек крыс с ЭСН показала, что у них формируется характерный для ХСН дефект реабсорбции натрия, который проявляется в замедлении его выведения из организма. Благодаря этому уровень экскреции натрия с мочой после 0,6% солевой нагрузки у таких животных упал с исходных 37,4±6,60 до 18,2±4,48 мкмоль/4,5 ч/100 г (р < 0,05), что составляет более 50% от уровня натрийуреза, отмеченного в контрольных опытах с интактным животными. Одновременно у крыс с ЭСН отмечалась достаточно выраженная антикалийуретическая реакция, которая сопровождалась снижением отношения натрий/калий мочи с 0,77±0,12 до 0,39±0,07 (р < 0,05). Дальнейшие эксперименты показали, что функциональный сдвиг, возникающий в почках крыс с ЭСН при действии допамина, принципиально не отличается от реакции почек интактных животных на этот препарат. Как и в контрольных опытах, не было отмечено достоверных изменений в величине диуреза и экскреции с мочой креатинина, свидетельствующее об отсутствии достаточно выраженных сдвигов в объеме клубочковой фильтрации. Выделение почками натрия в этих условиях достоверно выросло в 2,16 раза, но в абсолютном значении примерно соответствовало приросту экскреции этого иона почками, отмеченного в экспериментах на интактных крысах. Количество теряемого с мочой калия при этом практически не изменилось, в то время как отношение натрий калий мочи возросло с 0,39±0,07 до 1,05±0,09 (р < 0,05). Введение фуросемида животным с ЭСН вызывало реакцию почек, характерную для петлевых диуретиков. Под его влиянием развивалась диуретическая реакция, которая сопровождалась значительным приростом натрийуреза, выделе- 18 ния креатинина и резким увеличением отношения натрий/калий мочи. Уровень потери натрия с мочой возрос при этом с 18,2±4,48 до 130,5±14,8 мкмоль/4,5 ч/100г (р < 0,05), то-есть примерно в 7,17 раза по сравнению с данными контрольных экспериментов. Добавление допамина к фуросемиду существенно усиливало его диуретическое и натрийуретическое действие. Выделение почками натрия при совместном применении обоих препаратов возросло дополнительно еще в 1,46 раза по сравнению приростом натрийуреза, наблюдавшимся после введения одного фуросемида. Поскольку при этом не было отмечено достоверных изменений в экскреции креатинина, можно полагать, что прирост натрийуреза, возникший при добавлении допамина к диуретику, был обусловлен дополнительным угнетением реабсорбции натрия в почках. Потеря калия в этих условиях также возросла, но эти изменения в величине калийуреза не были достоверными. Отношение натрий/калий мочи при совместном введении допамина и фуросемида крысам с ЭСН повысилось с 2,92±0,25 до 3,93±0,36 (р < 0,05), что говорит о преимущественном приросте выделения почками натрия по сравнению с калием. Таблица 6 - Влияние допамина и его комбинации с фуросемидом на показатели ионорегулирующей функции почек крыс с моделью сердечной недостаточности (M±m) Показатель Диурез, мл/4,5 ч/100 г Экскреция Креатинина, мкмоль/4,5ч/100 г Экскреция натрия, мкмоль/4,5ч/100 г Экскреция калия, мкмоль/4,5ч/100 г Интактные крысы Контроль Допамин n = 10 n = 10 Крысы с моделью сердечной недостаточности Контроль Допамин Фуросемид Допамин + n = 10 n = 10 n = 10 фуросемид n = 10 1,81±0,17 1,95±0,19 1,32±0,18 1,51±0,20 2,11±0,14 * 2,92±0,27 ** 10,1±1,82 13,7±2,50 4,85±0,40 4,42±0,63 15,9±2,75 * 23,1±2,97 37,4±6,60 62,6±6,95 * 18,2±4,48 39,4±8,20 * 130,5±14,8 * 190,5±16,3 ** 66,2±13,7 43,2±8,35 37,6±7,71 38,2±9,95 45,9±3,57 51,3±5,96 Отношение 0,77±0,12 1,59±0,16 * 0,39±0,07 1,05±0,09 * 2,92±0,25 * 3,93±0,36 ** натрий/калий в моче Примечание: * - р < 0,05 по сравнению с контролем, ** - р < 0,05 по сравнению с результатами, полученными при введении крысам одного фуросемида (критерий Манна-Уитни); n – количество экспериментальных животных. Таким образом, введение допамина крысам с ЭСН, вызванной совместным воздействием на сердце избыточной физической нагрузки и больших доз адреномиметика фенилэфрина, не оказывает существенного влияния на величину диуре- 19 за и экскрецию почками калия, но вызывает выраженную натрийуретическую реакцию, которая сопровождается увеличением отношения натрий/калий мочи. Добавление допамина к фуросемиду усиливает диуретический, натрийуретический и, в меньшей степени, калийуретический эффекты этого диуретика у животных с моделью сердечной недостаточности, способствуя дополнительному приросту величины отношения натрий/калий мочи. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Первоначальные опыты с допамином подтвердили известные данные о том, что небольшие «почечные» дозы этого препарата вызывают у крыс характерную реакцию почек, которая проявляется в увеличении СКФ, диуреза и выделения с мочой ионов натрия и калия. Выяснилось также, что предварительное введение крысам антагониста D-дофаминовых рецепторов галоперидола практически полностью устраняет реакцию почек крыс на допамин, что соответствует данным, полученным ранее другими авторами (Costa M.A. Vascular and renal effects of dopamine during extracellular volume expansion: role of the nitric oxide pathway // Life Sci. 2006. Vol. 78, N.14. P. 1543-1549), и подтверждает представление о ведущей роли D1-дофаминорецепторов, локализованных в гладкой мускулатуре почечных сосудов и клетках почечных канальцев, в механизме дофаминергической регуляции функции почек. В формирование почечных эффектов допамина могут включаться нейрогуморальные системы почек, которые участвуют в регуляции транспорта натрия и других ионов в различных сегментах нефрона. Прежде всего, это касается циркулирующей и почечной тканевой РАС, которые обеспечивают поддержание в почках уровня реабсорбции натрия, необходимого для сохранения адекватного объема циркулирующей крови и системного артериального давления. Не исключено, что в механизм, реализующий действие допамина на ионорегулирующую функцию почек, могут вовлекаться почечные ПГ и ККС, которые не только обладают сосудорасширяющим действием, но и способны оказывать существенное влияние на процессы реабсорбции натрия и калия в дистальных отделах нефрона. Требуют также уточнения некоторые особенности фармакодинамического взаимодействия в почках допамина и петлевых диуретиков, комбинация которых используется у больных декомпенсированной ХСН для преодоления устойчивости к этим препаратам и восстановления нарушенной функции почек. Для выяснения этих вопросов был проведен фармакологический анализ роли почечных ПГ, ККС и РАС в механизме действия допамина в почке крысы. В экспериментах на крысах с ЭСН, вызванной длительным комбинированным воздействием на сердце избыточной физической нагрузки и больших доз адреномиметика фенилэфрина, были уточнены также особенности фармакодинамического взаимодействия допамина и диуретика фуросемида. В опытах с ингибитором биосинтеза ПГ диклофенаком натрия и ингибитором ККС контрикалом было установлено, что предварительное введение этих ингибиторов практически не влияет на реакцию почек крыс в ответ на допамин, что 20 прямо указывает на отсутствие участия этих систем в механизме формирования почечных эффектов этого препарата. Предварительное угнетение активности почечной тканевой РАС с помощью ингибитора АПФ эналаприла, антагониста АТ1-ангиотензиновых рецепторов лозартана или прямого ингибитора ренина алискирена, напротив, резко повышало ингибирующее влияние допамина на реабсорбцию натрия в почках крыс и весьма значительно усиливало его диуретический, натрийуретический и калийуретический эффекты. В связи с этим имеются основания считать, что почечная тканевая РАС прямо включается в механизм действия допамина на ионорегулирующую функцию почек, выполняя функцию модулятора, препятствующего избыточной потере воды и электролитов с мочой при введении этого препарата. Эксперименты на крысах с ЭСН показали, что функциональный сдвиг, возникающий в почках после введения допамина крысам с ЭСН, принципиально не отличается от реакции почек интактных животных на этот препарат. В обоих случаях наблюдалась диуретическая реакция, которая сопровождалась достоверным приростом выделения почками натрия. Однако животные с ЭСН оказались более чувствительными к действию допамина, чем интактные крысы. Экскреция натрия с мочой при действии допамина у крыс с моделью ХСН возросла в 2,16 раза, в то время как прирост выделения этого иона с мочой у интактных животных составил всего 1,67 раза. Поскольку дофаминомиметик в обеих группах крыс не оказывал существенного влияния на экскрецию почками креатинина, отражающую величину СКФ, имеются основания полагать, что его выраженный натрийуретический эффект связан с прямым угнетением реабсорбции натрия в почечных канальцах. У крыс с ЭСН допамин вызывал также прирост отношения натрий/калий мочи в 2,69 раза, что значительно превосходит аналогичный эффект, наблюдавшийся под влиянием этого препарата у интактных животных. Фуросемид и другие петлевые диуретики обладают мощным диуретическим, натрийуретическим и калийуретическим действием, в основе которого лежит прямое угнетение активности белка-переносчика, осуществляющего симпорт Na+-K+-2Cl¯ через апикальные мембраны клеток ТВКПГ (Gimenez L. Molecular mechanisms of furosemide-sensitive Na-K-2Cl cotransporters // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 2006. Vol. 15, N. 5. P. 517-523). Поскольку ингибирующий эффект допамина на транспорт натрия в нефроне локализован преимущественно в ПК, следовало ожидать, что этот препарат будет усиливать диуретический и другие эффекты петлевых диуретиков за счет увеличения доставки нереабсорбированного в этом отделе натрия к месту действия этих препаратов в ТВКПГ. Эксперименты на крысах с ЭСН подтвердили, что фуросемид вызывает выраженный диуретический эффект, который сопровождается резким увеличением потери натрия с мочой в 7,17 раза по сравнению с данными контрольных опытов. Добавление допамина к фуросемиду существенно усиливало его диуретическое и натрийуретическое действие. Выделение почками натрия при совместном назначении дофаминомиметика и петлевого диуретика возросло еще в 1,46 раза по сравнению с приростом натрийуреза, возникшим после введения одного фуросемида. Поскольку при этом не было отмечено достоверных сдвигов в экскреции 21 почками креатинина, следует полагать, что увеличение потери натрия с мочой, наблюдавшееся при применении допамина и фуросемида, было обусловлено дополнительным угнетением реабсорбции натрия в почечных канальцах. Потеря калия с мочой в этих условиях также возросла, но изменения в величине калийуреза не были достоверными. Отношение натрий/калий мочи при совместном назначении животным с ЭСН допамина и фуросемида, также как и в опытах с одним допамином, достоверно возросло, что указывает на преимущественный прирост выделения почками натрия по сравнению с калием. Таким образом, допамин у крыс с ЭСН, вызванной избыточной физической нагрузкой и большими дозами адреномиметика фенилэфрина, вызывает выраженную натрийуретическую реакцию, которая сопровождается приростом отношения натрий/калий мочи. Добавление препарата к фуросемиду усиливает диуретический, натрийуретический и, в меньшей степени, калийуретический эффекты этого диуретика у животных с моделью сердечной недостаточности, способствуя дополнительному увеличению отношения натрий/калий мочи. Дальнейшие перспективы разработки темы связаны с выяснением особенностей действия на ионорегулирующую функцию почек пероральных дофаминомиметиков, которые совместно с ингибиторами РАС могут быть использованы для повышения эффективности лечения отеков у больных ХСН. ВЫВОДЫ 1. Допамин вызывает у наркотизированных крыс умеренную диуретическую, натрийуретическую и калийуретическую реакцию, основной причиной которой является угнетение реабсорбции натрия в почках. Предварительное введение животным антагониста дофаминовых рецепторов галоперидола устраняет реакцию почек крыс на допамин. 2. Предварительное назначение наркотизированным крысам ингибитора синтеза простагландинов диклофенака натрия не оказывает существенного влияния на реакцию почек в ответ на допамин. 3. Предварительное введение наркотизированным крысам ингибитора калликреин-кининовой системы контрикала не препятствует формированию в почках эффектов, возникающих при действии допамина. 4. Предварительное назначение крысам ингибитора ангиотензин Iпревращающего фермента эналаприла, антагониста ангиотензиновых рецепторов лозартана или прямого ингибитора ренина алискирена, угнетающих активность ренин-ангиотензиновой системы, усиливает диуретическое, натрийуретическое и калийуретическое действие допамина. 5. Допамин у крыс с экспериментальной сердечной недостаточностью, вызванной избыточной физической нагрузкой и большими дозами адреномиметика фенилэфрина, вызывает выраженную натрийуретическую реакцию, которая сопровождается приростом отношения натрий/калий мочи. Совместное применение дофамина и фуросемида у животных с экспериментальной сердечной недостаточностью усиливает диуретический, натрийуретический и, в меньшей степени, ка- 22 лийуретический эффекты диуретика, способствуя дополнительному увеличению отношения натрий/калий мочи. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Экспериментальные данные об отсутствии влияния ингибитора циклооксигеназы диклофенака натрия, ингибитора калликреина контрикала на реакцию почек в ответ на допамин и потенцировании ингибитором ангиотензин I-превращающим ферментом эналаприлом, антагонистом АТ1-ангиотензиновых рецепторов лозартаном и прямым ингибитором ренина алискиреном диуретического действия допамина рекомендуется учитывать при их совместном назначении в клинике. Применение допамина в дозе 1-3 мкг/кг/минуту внутривенно, вызывающее у людей выраженную диуретическую реакцию, рекомендуется использовать для потенцирования диуретического действия фуросемида у больных хронической сердечной недостаточностью с отечным синдромом. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Ландарь, Л.Н. Взаимодействие допамина с петлевыми диуретиками в почке крыс с моделью сердечной недостаточности / Л.Н.Ландарь, О.Б.Кузьмин, М.О.Пугаева // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. Материалы Российского национального конгресса кардиологов 2011. – № 6 [Приложение 1]. – С. 175. 2. Ландарь, Л.Н. Влияние допамина на ионорегулирующую функцию почек крыс с моделью сердечной недостаточности // Сибирский медико-биологический конгресс: материалы I Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. – Барнаул: Изд-во ГБОУ ВПО «АГМУ», 2011. – С. 36-37. 3. Ландарь, Л.Н. Влияние допамина на диуретический и натрийуретический эффекты фуросемида у крыс с экспериментальной сердечной недостаточностью // Вестник Оренбургского государственного университета. – 2011. – № 16. – С. 292-294. 4. Ландарь, Л.Н. Роль простагландиновой и калликреин-кининовой систем в формировании почечных эффектов допамина // Нанотехнологии в фармакологии и медицине: материалы Всероссийской научно-практической конференции. Оренбург. – 2012. – С. 42-44. 5. Ландарь, Л.Н. Фармакодинамическое взаимодействие кардиотоника допамина с фуросемидом в почке крыс с экспериментальной сердечной недостаточностью // Инновации в современной фармакологии: материалы IV съезда фармакологов России. Москва: Фолиум. – 2012. – С. 114. 6. Ландарь, Л.Н. Взаимодействие негликозидного кардиотоника допамина с ингибиторами синтеза простагландинов и кининов в почке крысы // Дни молодежной науки: материалы I Всероссийской конференции с международным участием молодых ученых и студентов. – Оренбург: Изд-во ГОУ ВПО «ОрГМА», 2012. – С. 165. 23 7. Ландарь, Л.Н. Влияние ингибиторов синтеза простагландинов и кининов на формирование почечных эффектов кардиотоника допамина / Л.Н.Ландарь, О.Б.Кузьмин // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. Материалы Московского международного форума кардиологов 2012. – № 11. – С. 63. 8. Ландарь, Л.Н. О роли нейрогуморальных систем в действии допамина на ионорегулирующую функцию почек / Л.Н.Ландарь, О.Б.Кузьмин // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2013. – Т. 76. – № 6. – С. 18-21. 9. Ландарь, Л.Н. Влияние алискирена и эналаприла на формирование диуретического и натрийуретического эффекта кардиотоника допамина в почках/ Дни молодежной науки: материалы II Всероссийской конференции с международным участием молодых ученых и студентов. – Оренбург: Изд-во ГБОУ ВПО «ОрГМА», 2013. – С. 59. 10. Ландарь, Л.Н. Влияние ингибиторов синтеза простагландинов и кининов на формирование почечных эффектов допамина // Альманах молодой науки. – 2013. – Т. 1. – №1. – С. 6-9. 11. Ландарь, Л.Н. Взаимодействие ингибиторов простагландиновой и ренинангиотензиновой систем с допамином в почке крысы / Л.Н.Ландарь, О.Б.Кузьмин // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. Материалы Московского международного форума кардиологов 2013. – № 12. – С. 103-104. 12. Ландарь, Л.Н. Участие ренин-ангиотензиновой системы в механизме действия допамина на ионорегулирующую функцию почек крыс / Л.Н.Ландарь, О.Б.Кузьмин // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. Материалы Московского международного форума кардиологов и терапевтов 2014. – №13. – С. 21. 13. Ландарь, Л.Н. Влияние ингибиторов ренин-ангиотензиновой системы на эффекты дофамина в почке крысы / Л.Н.Ландарь, О.Б.Кузьмин, Н.В.Бучнева // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2014. – Т. 77. – № 7. – С. 16-19. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АПФ АТ-рецепторы ККС ПГ-система ПГЕ2 ПК РАС СКФ СНС ТВКПГ ХСН ЭСН ЮГА – ангиотензин I-превращающий фермент – ангиотензиновые рецепторы – калликреин-кининовая система – простагландиновая система – простагландин Е2 – проксимальный каналец – ренин-ангиотензиновая система – скорость клубочковой фильтрации – симпатическая нервная система – толстое восходящее колено петель Генле – хроническая сердечная недостаточность – экспериментальная сердечная недостаточность – юкстагломерулярный аппарат 24 На правах рукописи Ландарь Лариса Николаевна ВЛИЯНИЕ ДОПАМИНА НА ИОНОРЕГУЛИРУЮЩУЮ ФУНКЦИЮ ПОЧЕК В НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СЕРДЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ 14.03.06 – Фармакология, клиническая фармакология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Челябинск – 2015
