Тема № 8 : Вирус бешенства. Вирус болезни Ауески. Семейство
advertisement
Тема № 8 : Вирус бешенства. Вирус болезни Ауески. Семейство рабдовирусов Общая характеристика семейства Впервые термин «рабдовирусы» был применен на Международном комитете по таксономии в 1971 г. для обозначения семейства вирусов, имеющих пуле- или бацилловидную форму, спиральный нуклеокапсид, окруженный оболочкой с поверхностными выступами (шипами). Семейство рабдовирусов - (Rhabdoviridae, от греч. rhabdos-стержень, палочка) объединяет около 60 вирусов с различными биологическими свойствами. В 1975 г. семейство было разделено на два рода: 1. Vesiculovirus - везикуловирусы (от лат. vesicular пузырек). 2. Lyssavirus - лиссавирусы (от греч. lyssa - бешенство). В состав рода Vesiculovirus входят вирусы везикулярного стоматита ВВС (штаммы Индиана, Кокал, Аргентина, Бразилия, Нью-Джерси, Чандипура, Исфаган, Пири). Род Lyssavirus включает вирусы, патогенные для животных и человека. Таблица Вирусы рода Lyssavirus Вирус Источник выделения Вирус бешенства В.Б. Человек, плотоядные, летучие (уличный, фиксированный мыши дикования, летучих мышей) Вирус Лагос Бат (ВЛБ) Летучие мыши Вирус Мокола Человек, землеройка Вирус Дювенхейдж Человек, летучие мыши Человек Вирус острого энцефаломиелита человека (ОЭМЧ) Бешеноподобный вирус Грызуны в Центральной Европе Вирус Котонкан Крупный рогатый скот, комары Вирус Ободьянг Комары Вирус Фландрас Комары Вирус Кламат Комары Структура, состав и физико-химические свойства Вирионы рабдовирусов состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии и липопротеидной мембраны или оболочки, на поверхности которого имеются характерные выступы длиной 5-10 нм и диаметром около 3 нм. Рабдовирусы позвоночных имеют характерную пулеобразную форму. Размеры вирионов составляют 130 х 380 х 60 х 75 нм, диаметр спирали нуклеокапсида равен 49 нм, длина спирали около 1мкм. Рабдовирусы содержат единую односпиральную линейную минус-РНК, состоящую из 1000 нуклеотидов. В вирионах рабдовирусов содержится 65-75% белка, 15-25% липидов, 3% углеводов и 1-2% РНК. Липиды и углеводы имеют клеточное происхождение и обнаружены в наружной оболочке вирионов, в которой образуют двойной центральный слой. В вирионах рабдовирусов содержится пять полипептидов - L, G, N, NS,M. Белки расположены снаружи и изнутри липидного биослоя. Наружный белковый слой представлен глипопротеидом G, который является типоспецифическим антигеном и индуцирует синтез вируснейтрализующих антител. Внутренний белок вирусной оболочки это негликолизированный мембранный матриксный белок (М). Белок М принимает участие в заключительной стадии морфогенеза вируса в зараженной клетке. М белок представляет собой своеобразную вторую структурную оболочку, т.е. «сердцевину» вириона. Нуклеокапсиды рабдовирусов представляют собой спиральные тяжи, состоящие из РНК и трех белков: L, N, NS. Белок N является основным белком нуклеокапсида: он тесно связан с вирионной РНК и защищает ее от действия РНК-азы. Высокомолекулярный белок L и низкомолекулярный NS, первоначально обнаруженный в инфицированных клетках, также связаны с нуклеокапсидом вирионов. Они являются компонентами транскриптазы и находятся в вирионе в незначительном количестве. Белки G, N, М присущи всем рабдовирусам, но их соотношение может служить одним из дифференциальных признаков между представителями рода везикуло- и лиссавирусов. В структуре ВВС они представлены в соотношении 1:2:3 (G: N: М), а у ВБ-2:2:3. Ферменты вирионов Все рабдовирусы животных содержат в структуре вириона зависимую РНК-полимеразу (транскриптазу), протеиназу, протеинкиназу. Многие из этих ферментов имеют клеточное происхождение. Антигенная вариабельность и родство Специфичность представителей внутри рода Lyssavirus обусловлена группоспецифическим белком G. В близком антигеном родстве с вирусами подгруппы бешенства находится вирус острого энцефаломиелита человека, вирус дикования и вирусы- изоляторы от грызунов Центральной Европы. При иммунизации вирусами Лагос Бат и Мокола животные не приобретали резистентности к вирусу бешенства, в то время как мыши, иммунизированные вирусом острого энцефаломиелита человека, были резистентны к вирусу бешенства. Репродукция В процессе репликации в системах in vitro и in vivo у ВВС и ВБ происходит формирование двух типов частиц: В - зрелые полные вирионы и Т - дефектные интерферирующие частицы. Т-частицы не обладают инфекционностью как в культуре клеток, так и при внутримозговом заражении экспериментальных животных, имеют размер 60-80 нм. При пассировании рабдовирусов в клеточных клетках с высокой множественностью заражения образуются дефектные интерферирующие частицы (ДИЧ), в которых содержится меньше генетической информации, чем в полном вирионе. ДИЧ размножается только в присутствии полного вируса и эффективно препятствует репродукции последнего. Интерференция между ДИЧ и полными вирионами происходит на стадии репликации вирусной ДНК. ДИЧ ВВС играют важную роль в становлении и поддержании персистентной инфекции. Бешенство (Rabies) - остро протекающая болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением центральной нервной системы. К бешенству восприимчивы все виды домашних и диких животных. Болеет и человек. 100% летальность. Бешенство животных регистрируют в большинстве стран мира, на всех континентах, кроме Австралии и Антарктиды, Японии. Структуру бешенства в мировом масштабе в зависимости от резервуаров и особенностей течения условно принято делить на несколько ареалов. Полярный ареал включает арктическую территорию СССР, Чукотку, Гренландию, Аляску, где в 60-90% случаев носители вируса бешенства (дикования) - песцы. Бытует мнение о непатогенности штаммов вируса дикования для животных других видов и человека. Однако известны случаи заболевания с летальным исходом людей, контактировавших с больными песцами. Западная, Центральная Европа, азиатская часть СССР, США, Мексика входят в зону, характеризующуюся моногостальными резервуарами (куницы, лисы, волки, грызуны). Южная и Центральная Америка рассматриваются как самостоятельный тип природной очаговости, где резервуарами являются летучие мыши. В Африканском ареале основным носителем вируса являются мангусты. История открытия Инфекционную природу бешенства установили в начале XIX века. В 1804 году Цинке выявил заразительность слюны. В 1879 году Гольтье экспериментально воспроизвел бешенство у кроликов. Эти данные послужили Пастеру предпосылкой в разработке метода вакцинации людей и животных против бешенства. В 1903 году Негри сообщил об обнаружении им при бешенстве особых включений в протоплазме клеток центральной нервной системы, получивших в дальнейшем название «тельца Негри». Характеристика вируса Возбудитель крупный РНК-содержащий, фильтрующийся нейротропный вирус, относящийся к семейству рабдовирусов. Пулевидной формы, длина 180 нм, толщина - 70-80 нм, спиральный тип укладки, имеет наружную оболочку с булавовидными выпячиваниями. Устойчивость Вирус неустойчив к высоким температурам - при 70°С погибает мгновенно. Низкие температуры консервируют вирус: в течение всей зимы сохраняется в мозге зарытых в землю трупов животных. Высушивание без вакуума инактивирует вирус через 10-14 дней. В гниющем материале вирус гибнет через 15 дней. Ультрафиолетовые лучи инактивируют вирус через 5-10 минут. Быстро инактивируется при воздействии 2-3% растворов щелочей, формалина, хлорамина, но относительно устойчив к ф е н о л у и й о д у . В и р у с б ы с т р о и н а к т и в и р у е т с я липидорастворителями и 0,1%-ным раствором трипсина, устойчив к рН=5,0-10,0 при температуре 4°С. Антигенная вариабельность и родство Вирус имеет 4 серотипа, что, обусловлено различием в составе мембранных белков. Предложена следующая классификация: 1. вирус первого серотипа; прототип этого вируса - штамм СVS и сходные с ним полевые и лабораторные штаммы, выделенные в различных частях света; 2. вирус второго серотипа; прототип его - штамм Lagos Bat, выделенный из костного мозга летучей мыши в Нигерии; 3. вирус третьего серотипа; прототип его - штамм Мокола, выделенный от землеройки и человека; 0$0<ц,лмг 4. вирус четвертого серотипа - штамм Obodhiang, выделен от лошадей, комаров и москитов в Нигерии и еще не классифицирован. При множестве вариантов рабического вируса все они в иммунобиологическом отношении родственны. Нуклеопротеидные а н т и г е н ы р а з л и ч н ы х в и р у с о в б е ш е н с т в а и м е ю т группоспецифическое родство с другими рабдовирусами. Спектр патогенности в естественных условиях Он очень широк. Эпизоотические штаммы вируса бешенства различают по вирулентности и другим свойствам. Описанные варианты разделяют на пять групп. 1. К первой группе относятся так называемые усиленные штаммы (или вирусы ремфорс), характеризующиеся высокой вирулентностью, коротким инкубационным периодом болезни (12 дня) и постоянным образованием телец Бабеша - Негри. 2. Во вторую группу входят следующие варианты: а) вирус, выделенный от собак (Улу-Фато). Подобные ему штаммы встречаются в различных районах Африки. Характерный признак - внезапное изменение поведения и развитие параличей; б) вирус, выделенный от больного крупного рогатого скота в Кадейросе. Клинически болезнь напоминала чуму, но затем развились параличи. Установлено, что этот вирус передается летучими мышами; в) вирус, выделенный от погибших людей во время эпидемии бешенства на острове Троица в 1929 г. Одновременно болели и крупный рогатый скот, лошади, мулы, ослы. Возбудитель передавался через укусы летучих мышей-вампиров. 3. К третьей группе вирусов отнесены штаммы, выделенные от песцов и собак при заболевании, именуемом дикованием, встречающемся в северных районах СССР и Канады. Симптомы дикования несколько отличаются от течения истинного бешенства. Почти никогда не болеет человек. 4. В четвертую группу включен вирус, выделенный в США в 1940 г. Личем и Джонсоном из мозга умершей девочки по имени Флури (штамм Флури, неадаптированный). Данный вирус вызывает у собак, кошек, морских свинок, мышей болезнь, проявляющуюся параличами. Болезнь очень сходна с заболеванием, вызываемым фиксированным вирусом. Кролики малочувствительны. Данный штамм не индуцирует образования телец Бабеша - Негри в мозгу больных животных. 5. В пятую группу объединены вирусы, выделенные от людей. Сюда отнесены вирус изолированный в 1929 г. Коричнером, вирус Кобояси и герпес-подобный вирус ДК. От диких грызунов выделено много полевых штаммов, подобных вирусу бешенства и родственных с ним в антигенном отношении. В 1967 г. в Суринаме (Южная Америка) из мозга павших телят, зараженных в естественных условиях, изолированы два полевых штамма бешенства (Д-292 и Д-298), подобных штамму фикс Пастера. Патогенные свойства Следует отметить, что если бешенство - в основном летальная инфекция, то при инфицировании вирусами Мокола, Лагос Бат, Ободъянг и Котонкан случаи гибели при экспериментальном заражении относительно редки. Вирусы Котонкан и Ободъянг патогенны только при интрацеребральном заражении мышей-сосунов и непатогенны для собак и обезьян при заражениях в мозг и внутримышечно. Для вируса острого энцефаломиелита человека в отличие от вируса бешенства характерна выраженная вирусемия. Данный вирус непатогенен для кроликов при заражении в переднюю камеру глаза и слабопатогенен при внутримышечном и подкожном заражениях. В то же время он в отличие от вируса бешенства обладает высокой патогенностью для КЭ. Вирус острого энцефаломиелита человека формировал включения в нейронах мозга животных и эктодермальных клетках ХАО зараженных КЭ, но они отличались по структуре от телец Бабеша — Негри: имели отчетливую однослойную оболочку, представляли собой РНК-содержащие плотные образования размером 2-4 мкм и выявлялись как в цитоплазме, так и в ядре клеток. Вирусы Лагос Бат и Мокола апатогенны для мышей при экстраневральном заражении и не вызывают у них образования телец Бабеша Негри. Однозначных представлений о рецепторах, обусловливающих проникновение вируса бешенства в ЦНС, не существует. Предполагается роль ацетилхолиновых рецепторов, холинэргических рецепторов мускаринового типа, а также проникновение через тройничные и протектальные нити. Авирулентные варианты теряют способность проникать в парасимпатические и протектальные нити, но сохраняют способность к пенетрации в волокна тройничного нерва. Спектр патогенности Спектр патогенности вируса бешенства тесно связан с его экологией, которая имеет свои особенности. Имеются две взаимозаменяющиеся формы эпизоотии бешенства: городская и лесная. При второй форме возбудитель циркулирует среди диких плотоядных по типу природно-очаговой инфекции. С 60-х годов бешенство диких плотоядных снова стало преобладающим. Основным резервуаром и источником инфекции оказались рыжие лисицы, тогда как остальные дикие животные играют второстепенную роль. Чрезмерному увеличению лисиц способствовало истребление их естественных врагов - волков, рысей, медведей, орлов и других хищников. Установлено, что средняя плотность популяции лисиц 5 голов и более на 250 га обеспечивает высокий уровень поддержания и распространения эпизоотии. Бешенство среди лисиц появляется прежде всего на территориях с массовым распространением грызунов — основного источника корма для них. Крупный рогатый скот заражается исключительно на пастбищах, входящих в ареалы зараженных лисиц. При лесном бешенстве большое количество лисиц (40-80%) переживает инфекцию за счет «нелетального» бешенства. Болезнь у них часто протекает хронически и латентно, обеспечивая персистенцию вируса в естественных условиях. Наоборот, бешенство собак в городских эпизоотиях, как правило, заканчивается их гибелью, поэтому механизм поддержания вируса иной, он сводится к коротким циклам репродукции в организме больной собаки и быстрой передачи восприимчивому организму. Локализация вируса Многочисленные исследования патогенеза бешенства на модели различных лабораторных животных позволили условно разделить острую рабическую инфекцию на три основных типа: I - экстраневральная фаза, без видимого размножения вируса в месте инокуляции; II - интраневральное, центростремительное распространение инфекции, III - диссеминация вируса по всему организму, сопровождаемая появлением симптомов болезни и, как правило, гибелью животного. Репродукция вируса может происходить и в мышечных тканях. При попадании в макроорганизм возбудитель размножается сначала в месте укуса в моноцитах и подкожной клетчатке, затем внедряется в нервную систему. Он не обнаруживается в печени, селезенке, почках и легких. В наиболее высоких титрах вирус накапливается в центральной нервной системе зараженных животных, особенно в аммоновых рогах и коре больших полушарий, в мозжечке и продолговатом мозге. Высокий титр возбудителя в слезных и слюнных железах. Вирусный антиген локализуется в цитоплазме нейронов, цитоплазматических включениях и в рибосомах, составляющих тельца Ниссля. Высказано предположение, что репликация вируса происходит в районе телец Ниссля, а включения формируются уже из цельных вирионов. Распространение вируса бешенства по нервным путям впервые было доказано Пастером и Ру. Вирус проникает в организм со слюной в местах укуса и непродолжительное время сохраняется у места внедрения (до 2 недель), а затем по центростремительным нервам продвигается к спинному и головному мозгу. Из мозга вирус по центробежным нервам попадает в слюнные железы, где репродуцируется в нервных узлах и после дегенерации нервных клеток выходит в протоки желез, инфицируя слюну. Из мозга вирус также нейрогенным путем попадает в слюну, роговицу глаз, надпочечники. Выделение вируса со слюной начинается за 10 дней до проявления клинических признаков, поэтому французский регламент предусматривает 15-дневный срок наблюдения за покусавшим животным. У бешеной лисицы накапливается в слюнных железах столько вируса, что можно заразить 67 млн лисиц. Доказано нахождение вируса во всех внутренних органах и крови, кроме сальника, селезенки, желчного пузыря. Из центральной нервной системы по нервным путям вирус попадает во внутренние органы, и затем в кровь. Таким образом, наблюдается стадия генерализации инфекционного процесса. Вирус бешенства удавалось выделить из молочной железы овец. Одновременно его обнаруживали в головном мозге и слюнных железах. Антигенная активность Животные, иммунизированные против бешенства, продуцируют вируснейтрализующие, комплементсвязывающие, преципитирующие, антигемагглютинирующие и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии комплемента) антитела. Препараты очищенного нуклеокапсида из клеток ВНК-21, зараженных штаммами Flury-HEP и ERA, индуцируют только комплементсвязывающие антитела. Иммунные антитела сыворотки крови в присутствии комплемента лизируют зараженные культуры клеток. Между титрами комплементсвязывающих и нейтрализующих антител никакой корреляции не обнаружено. Эти антитела появляются независимо друг от друга и индуцируются, по-видимому, разными антигенами. Накопление комплементсвязывающих антител характеризует ответ на вакцинацию, однако этому не обязательно сопутствует накопление нейтрализующих антител. Культивирование в лабораторных условиях Помимо интрацеребральных пассажей на кроликах и белых мышах вирус бешенства (штаммы Flury-HEP и Lep) успешно репродуцируется в культуре фибробластов КЭ. В этой культуре вирус индуцирует образование интерферона. Установлена способность его образовывать бляшки в клетках ВНК-21/13, взвешенных в агарозе. Вирус также образует бляшки в культуре CER, отличающиеся высокой чувствительностью к лиссавирусам. Показана возможность культивирования вируса бешенства в культурах клеток слюнной железы и почки собаки, жировой ткани летучей мыши, почек поросенка, кролика, сирийского хомяка, эмбрионов овцы, человека и японских перепелок. Вирус бешенства адаптирован и к перевиваемым линиям клеток (ВНК-21/13, эндотелия кролика, диплоидной линии клеток легких эмбриона человека - HDCS, известной под названием WJ-38). Показана возможность репродукции его в перевиваемых линиях клеток пойкилотермных позвоночных, в частности в клетках рыбы, змеи, черепахи и ящерицы. Наиболее перспективна перевиваемая линия клеток ВНК-21/13, использование которой позволяет накапливать данный вирус в больших количествах. В первых пассажах вирус размножается медленно. На выход его в клеточной культуре влияют: тип культуры, штамм вируса, количество вирусных частиц на клетку при заражении, температура инкубации, рН среды и присутствие в среде белка. Максимальный выход вируса получается при культивировании в условиях 32-7-35 °С и рН среды 7,6-8. При адаптации вируса бешенства добавление в питательную среду (при заражении культуры клеток) ДЕАЕ-декстрана или протаминсульфата (1 мг/мл) способствует ускорению адсорбции и проникновения вируса в клетки. При адаптации вируса к культурам клеток влияют такие факторы, как изменение температуры культивирования, множественность заражения клеток, рН питательной среды. Интенсивность размножения вируса в культуре клеток можно постоянно контролировать методом иммунофлюоресценции. К вирусу бешенства после предварительной адаптации восприимчивы и КЭ. Для культивирования штаммов уличного вируса бешенства обычно используют однодневные КЭ. Эпизоотологические данные К вирусу бешенства чувствительны все теплокровные. Наиболее восприимчивы дикие собаки (лисица, енотовидная собака, песец, волк, шакал), куньи, грызуны и кошки. Менее чувствительны собаки, рогатый скот, лошади, свиньи. Ещё ниже восприимчивость птиц. Восприимчивость животных не зависит от породы и пола, но молодые животные более чувствительны к вирусу, чем взрослые. Врожденная невосприимчивость установлена лишь у рыб, лягушек, змей, черепах и других холоднокровных. Однако следует отметить, что введенный вирус длительно сохраняется в их организме, не подвергаясь разрушению. Источники возбудителя бешенства - больные животные, выделяющие вирус со слюной и передающие его через укус. Слюна может стать заразной за 8-10 дней до появления признаков болезни. Возможно заражение при попадании слюны на слизистые оболочки или на поврежденную кожу. Небольшое количество вируса может выделяться с мочой и молоком больных животных. Но это происходит очень редко и не имеет эпизоотического значения. Поддерживают эпизоотии и распространяют болезнь далеко не все виды восприимчивых животных. Резервуаром вируса бешенства считают диких хищников и собак. С учётом характера резервуара возбудителя различают эпизоотии городского и природного типов. При эпизоотиях городского типа основные распространители болезни - бродячие собаки, а при эпизоотиях природного типа - дикие хищники. Локализация природных очагов болезни соответствует особенностям расселения лисиц, песцов, корсаков, енотовидных собак. Интенсивность эпизоотии зависит от плотности этих животных. С изменениями их численности связанны циклические подъёмы эпизоотии чаще всего повторяющиеся с интервалами 2-3 года. В эпизоотические цепи иногда включаются мелкие хищники (куницы, хорьки, ласки), грызуны, дикие травоядные и всеядные. Но они, как и сельскохозяйственные животные, не могут обеспечить самостоятельный цикл непрерывной передачи вируса при отсутствии бешенства собачьих и в случае заболевания становятся «тупиками инфекции». Клинические признаки Инкубационный период продолжается от нескольких дней до нескольких месяцев, но чаще 3-6 недель. У собак известно несколько форм бешенства. При буйной форме вначале изменяется поведение животного. Собака угнетена, непослушна или чрезмерно ласкова. Постепенно нарастает беспокойство и раздражительность, извращается аппетит, может возникнуть зуд в месте укуса. Затем затрудняется глотание, усиливается выделение слюны, лай становится хриплым, нарастает агрессивность. Вскоре начинаются признаки буйства. Характерно стремление убежать. За сутки бешеная собака может пробежать десятки километров, нападая на животных и людей. Постепенно развиваются параличи мышц, приводящие к полной потере голоса, отвисанию нижней челюсти, косоглазию. Развиваются параличи задних конечностей, затем мышц туловища и передних конечностей. Болезнь продолжается 8-11 дней, но нередко смерть наступает уже через 3-4 дня. При тихой (паралитической) форме, которая часто встречается при заражении собак от диких хищников, возбуждение выражено слабо или вообще отсутствует. Затрудняется глотание, отмечают слюнотечение, отвисание нижней челюсти. Быстро развиваются параличи мышц конечностей и туловища, и через 2-4 дня животное погибает. Очень редки атипичные формы бешенства, характеризующиеся истощением заболевших собак, признаками гастроэнтерита, поздним развитием паралича, отсутствием агрессивности. Признаки бешенства у кошек в принципе такие же, как у собак. Преобладает буйная форма с проявлением особой агрессивности к собакам и людям. Быстро прогрессируют параличи, смерть наступает через 2-5 дней. У крупного рогатого скота преобладает тихая форма бешенства, при которой почти отсутствуют признаки возбуждения. Животные отстают от стада, прекращается жвачка, затрудняется глотание, появляется слюнотечение, мычание становится слабым, хриплым, походка шаткой. Часто отмечают атонию преджелудков, запор. Вскоре развиваются параличи конечностей. При буйном бешенстве животное в момент припадка рвется с привязи, хрипло ревет, роет копытами землю, бросается на стены. Агрессивность особенно резко выражена по отношению к собакам и кошкам. У овец и коз при буйном бешенстве также отмечают агрессивность, слюнотечение, скрежетание зубами, признаки возбуждения. Быстро развиваются параличи и уже на 3-5 день животное погибает. У лошадей регистрируют как буйную, так и паралитическую форму бешенства. Последняя нередко бывает в случаях заражения от диких животных. У свиней бешенство в большинстве случаев протекает в буйной форме. Животные мечутся в станке, хрипло хрюкают, разбрасывают подстилку, становятся агрессивными. Появляется сильное слюнотечение. Быстро развиваются параличи, и наступает смерть. Паралитическую форму регистрируют реже. Для бешенства диких плотоядных характерны потеря страха перед людьми и агрессивность. Даже днем они забегают в населенные пункты, нападают на животных и людей. Гидрофобии у них, как и у животных других видов не бывает. К концу болезни парезы, а затем и параличи конечностей. Патологоанатомические изменения Патологоанатомические изменения при бешенстве неспецифичны. При осмотре трупов часто отмечают истощение, находят следы укусов. Шерсть головы и шеи обычно смочена слюной. При вскрытии устанавливают застойные полнокровие внутренних органов. Желудок обычно пуст, но у плотоядных могут быть инородные предметы. У жвачных животных в сетке и книжке находят сухие, плотные кормовые массы. Слизистые оболочки желудка и тонких кишок нередко катарально воспалены, местами с кровоизлияниями. Головной мозг и его оболочки отёчны, с мелкими кровоизлияниями. Лабораторная диагностика Лабораторная диагностика заключается в исследовании головного мозга животных с целью выявления вирусного антигена в РИФ, РДП, обнаружении телец Бабеша - Негри и биопробе на белых мышах. Лабораторные исследования материала на бешенство проводят вне всякой очереди; результаты немедленно сообщают врачу хозяйства и главном ветврачу района (города). В лабораторию для исследования направляют свежие трупы мелких животных целиком, от крупных животных - голову или головной мозг. В некоторых случаях допускается консервирование головного мозга в 3050%-ном растворе глицерина. Для серологических исследований пригоден только неконсервированный мозг. Патологический материал сопровождают документом (сопроводительная), который должен быть тщательно упакован в двойных полиэтиленовых мешках, в металлических контейнерах или в другой влагонепроницаемой таре. Мозг - в банку с притертой стеклянной или резиновой пробкой, залитой парафином. При взятии и упаковке материала обязательно соблюдение мер предосторожности: работа в перчатках, шести-слойная марлевая повязка, защитные очки, тщательно мыть руки с мылом. Порядок проведения исследований: из каждого отдела головного мозга левой и правой сторон (аммонова рога, мозжечка, коры полушарий и продолговатого мозга) готовят по 4 препарата -мазки-отпечатки для РИФ и обнаружения телец Бабеша - Негри, с мозговой тканью ставят РДП; при отрицательных результатах вышеуказанных методов ставят биопробу на мышах. Обнаружение специфических телец-включений. Мазки-отпечатки окрашивают по Селлерсу, Муромцеву или другими методами. После окрашивания препараты просматривают в световом микроскопе с иммерсионной системой. Положительным результатом считают наличие специфических телец Бабеша -Негри (при окраске по Селлерсу - четко очерченные овальные или продолговатые гранулярные образования розовокрасного цвета в протоплазме, при окраске по Муромцеву - светло-фиолетовые с темно-синими включениями тельца Бабеша - Негри, чаще они располагают вне нервных клеток). Наиболее характерная особенность телец Бабеша - Негри их внутренняя структура, которая позволяет абсолютно точно идентифицировать их. Внутри видны маленькие зернышки -базофильные зернистости темно-голубого и даже черного цвета величиной 0,2-0,5 мкм. Тельца Бабеша - Негри выявляют лишь в 65-85% случаев бешенства, поэтому отсутствие их не является отрицательным ответом, и материал исследуют в других тестах (экспресс-метод -РИФ, РДП). При отрицательных результатах экспресс-метода ставят биопробу на молодых мышатах (заражают интрацеребрально не менее 10 мышей на каждую пробу). За животными наблюдают в течение 30 дней. Результат учитывают путем исследования мозга павших мышей в РИФ, РДП и по обнаружению телец Бабеша-Негри. Иммунитет Механизм поствакцинального иммунитета окончательно не расшифрован. Имеют значение вируснейтрализующие антитела в крови, особенно в ликворе, устойчивость клеток мозга к вирусу. Диагноз Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений (они имеют меньшее значение) и главным образом результатов лабораторных исследований. Принимают во внимание характер эпизоотической ситуации в данной местности и в соседних районах, учитывают сезонность болезни и данные анамнеза, свидетельствующие о нападении или появлению подозрительных по заболеванию диких животных, собак. Из клинических признаков, как более важны непровоцируемая агрессивность (при буйной форме болезни), возникновение парезов и параличей. Дифференциальный диагноз Следует исключить болезнь Ауески, при которой больные животные не агрессивны, не бывает извращений аппетита и паралича нижней челюсти. У собак исключают нервную форму чумы, отличающуюся затяжным течением, высокой контагиозностью, возможностью выздоровления животных. Бешенство лошадей сходно по клиническим признакам с инфекционным энцефаломиелитом. Но для последнего характерны желтушность, отсутствие агрессивности. Подозрение на бешенство может возникнуть при отравлениях, коликах и других незаразных болезнях, вызывающих сильные боли и беспокойство животных, а также при наличии инородных тел в ротовой полости или глотке. Лечение Эффективных средств терапии пока нет. Заболевших животных немедленно убивают, так как их передержка связана с риском заражения людей. Биопрепараты Для специфической профилактики бешенства используют живые и инактивированные вакцины, которые можно применять даже сразу после заражения, учитывая большой инкубационный период. 1. Сухая антирабическая фенолвакцина. 2. Антирабическая АзВИ. 3. антирабическая этанолвакцина. 4. Антирабическая инактивированная сухая культуральная вакцина из штамма «Щелково-51» (выращенная в КК ВНК-21) для плотоядных. 5. Антирабическая инактивированная жидкая культуральная вакцина из штамма «Щелково-51» для крупного и мелкого рогатого скота. 6. Антирабическая инактивированная жидкая культуральная вакцина из штамма «Рабикан» для крупного и мелкого рогатого скота. 7. Вакцина антирабическая культуральная из штамма ТС80. 8. Антирабическая вакцина, предназначенная для оральной иммунизации диких хищников. 9. Флуоресцирующий антирабический глобулин. 10. Набор компонентов для диагностики бешенства. Профилактика и меры борьбы В каждом населенном пункте местная администрация определяет порядок содержания, регистрации и учёта собак и кошек, порядок отлова, содержания и использования бродячих и безнадзорных животных. Специалисты ветеринарной и санитарно-эпидемиологических служб контролируют соблюдение этого порядка. Во всех населенных пунктах все собаки независимо от их принадлежности должны быть зарегистрированы, а в необходимых случаях подлежат обязательной вакцинации против бешенства. В зонах стационарного неблагополучия по бешенству диких хищников проводят и плановую вакцинацию сельскохозяйственных животных (прежде всего крупного рогатого скота). При наличии хозяйственных возможностей регулярно проводят компании оральной иммунизации диких хищников. Сотрудники органов лесного хозяйства, охраны природы, охотничьего хозяйства, заповедников и заказников обязаны информировать ветеринарных специалистов о случаях подозрения на бешенство у диких животных, доставлять их трупы для исследования, регулировать численность диких хищников, проводить отстрел бродячих собак и кошек. При выявлении случаев бешенства главный ветеринарный инспектор района (города) совместно с Госанэпиднадзором проводят обследование эпизоотического очага и неблагополучного пункта, определяют границы угрожаемой зоны оформляют материалы по установке карантин. По условиям карантина в неблагополучных пунктах запрещается проведение выставок собак и кошек, выводок и натаски собак. Прекращается торговля домашними животными, запрещается вывоз собак и кошек за пределы неблагополучного пункта. Немедленно проводят подводный обход неблагополучного населенного пункта, чтобы выявить нуждающихся в прививках лиц, осмотреть, перерегистрировать и при необходимости вакцинировать животных, провести разъяснительную работу. Всех явно больных животных немедленно убивают. Умерщвляют и подозрительных по заболеванию животных, кроме собак, покусавших людей и животных. Этих собак и кошек изолируют и оставляют под наблюдением в течение 10 дней. Если за это время не появятся признаки бешенства, вируса в слюне в момент укуса не могло быть. Трупы умерщвленных и павших от бешенства животных сжигают или утилизируют. Допускается захоронение на скотомогильниках. За животными неблагополучных стад (гуртов, отар, табунов) устанавливают постоянное наблюдение. Их осматривают не реже 3 раза в день и подвергают вынужденной вакцинации. После вакцинации обязательна 60-дневная изоляция животных. Клинически здоровых животных, покусанных дикими хищниками или собаками, разрешается независимо от прививок против бешенства убивать на мясо. Убой производится в хозяйстве, мясо используется на общих основаниях. Молоко клинически здоровых животных неблагополучного стада используют в пищу людям или в корм животных после пастеризации или кипячения. Места, где находились больные и подозрительные по заболеванию бешенством, предметы ухода подвергают дезинфекции горячим 4% раствором едкого натра, 2% раствором формальдегида, раствором хлорной извести, содержащим 3% активного хлора, 1% раствором глутарового альдегида, 20% свежегашеной известью. Карантин снимают по истечении 2 мес. со дня последнего случая заболевания животных бешенством при условии выполнения противоэпизоотических и профилактических мероприятий. Особенности эпизоотологического процесса заболевания бешенством домашних и диких животных в Ставропольском Решающую роль в поддержании эпизоотии играют лишь определенные виды диких плотоядных. В Ставропольском крае это лисицы, корсаки, енотовидные собаки. Так, в 1977-1981 гг. в среднем в год выявлялось 107 заболеваний бешенства различных видов животных, в 1992-1996 гг. этот показатель снизился до 14 случаев в год. В 1977 г. установлено 38 больных животных, в 1978 г.- 223. Это максимальное количество. Затем наблюдалось постепенное снижение заболевания до 8 случаев в 1995 г. Из общего количества больных животных большая часть (53,5%) приходится на крупный рогатый скот, 15% - на диких животных, 10,3 - на овец и коз, 9 - на собак, 8,2 - на кошек, 2,1-на лошадей, 1,7 -на прочие виды животных, 0,3% -на свиней. Одним из наиболее неблагополучных по заболеванию бешенством регионов является северо-восток края - Апанасенковский, Ипатовский, Красногвардейский, Труновский, Изобильненский, Шпаковс кий, Грачевский районы, где ежегодно регистрируется от 1 до 4 случаев бешенства. Следующей зоной широкого распространения эпизоотии являются восточные районы - Нефтекумский, Советский, Степновский, Буденновский, Левокумский, Арзгирский, Туркменский, где регистрируется от 1 до 2 случаев заболевания бешенством. В остальных районах регистрируются спорадические случаи заболевания бешенством среди различных видов животных. Так, в 1978 г. была максимальная в крае вспышка заболевания бешенством (223 случая), из них 47, или 21%, приходится на лис. При анализе хода эпизоотии бешенства в крае просматриваются периодические подъемы интенсивности эпизоотического процесса. Эти подъемы с разной интенсивностью происходят через три-четыре года, что объясняется взаимоотношениями возбудителя и животного хозяина (вируса бешенства у лисицы). Бешенство ограничивает рост популяции лис, а регенерация поголовья не позволяет уничтожить этих животных как вид; болезнь соответственно сохраняется. Вспышки инфекции имеют сезонный характер, максимальное распространение «городского» бешенства отмечается весной и летом. При бешенстве диких животных: наименьшее число больных диких животных наблюдается в июле-августе, а наибольшее - почти всегда в марте, второй подъем - с октября по декабрь. Это объясняется жизненным ритмом лисиц. В период спаривания (январь-февраль) при борьбе самцов за самок неизбежны покусы, при которых и передается вирус. По истечении инкубационного периода (февраль-март) происходит вспышка инфекции. И осенью, когда лисята начинают осваивать зоны охоты, возникает борьба за жизненное пространство, происходят неизбежные пркусы, и к концу осени и началу зимы регистрируется вторая вспышка заболевания бешенством. Семейство ГЕРПЕСВИРУСОВ Общая характеристика семейства Семейство герпесвирусов включает 80 ДНК-содержащих вирусов, классифицированных на основе строения вириона. Эти вирусы инфицируют широкий круг хозяев: человека, обезьян, многие виды домашних животных, грызунов, птиц, пресмыкающихся, земноводных и рыб; сходные по морфологии возбудители обнаружены у моллюсков и грибов. Герпес-вирусная инфекция человека и животных вызывает различные поражения центральной нервной системы (энцефалит, миелит, энцефаломиелит), глаз (кератит, кератоконъюнктивит), слизистых оболочек (стоматит, афтозные язвы, поражение гениталий) и кожных покровов (экзема, везикулярные воспаления). Из патогенных для животных вирусов в состав семейства Herpesviridae входят вирусы болезни Ауески, ринотрахеита крупного рогатого скота, ринопневмонии лошадей, герпеса лошадей (LK-1 и 2), злокачественной катаральной горячки крупного рогатого скота, язвенного маммиллита, ринотрахеита кошек, герпесвируса собак, болезни Марека, инфекционного ларинготрахеита птиц, чумы уток, герпеса птиц и др. Герпесвирусы формируют характерные внутриядерные включения. Наиболее типичным представителем семейства Herpesviridae является вирус простого герпеса - Herpes Simplex. Большинство герпесвирусов длительное время персистируют в организме естественных хозяев, поддерживая хроническую или латентную инфекцию. Вирусы герпесвируса позвоночных можно разделить на три группы в зависимости от типа клеток, вовлекаемых в инфекционный процесс и персистенцию у естественных хозяев. 1. Вирусы первой группы формируют латентную инфекцию у взрослых хозяев и генерализованные заболевания у молодняка новорожденных (цитомегал овиру сы). 2. Вирусы второй группы (лимфоторопные) характеризуются слабыми транзиторными лимфопролиферативными явлениями у естественных хозяев и персистируют в лимфоцитах. В свою очередь вирусы этой группы подразделяются на вирусы с тропизмом к В-клеткам (вирус Эпштейна-Барр и обезьи вирусы) и вирусы с тропизмом к Т-клеткам. Культивирование Размножение герпесвирусов в культурах клеток сопровождается цитопатогенным эффектом, который характеризуется несколькими типами поражений, чаще образованием многоядерных гигантских клеток с внутренними включениями и вакуолизированной цитоплазмой. Обычно поражаются фибробласты и реже - эпителиальные клетки. Размножаются герпесвирусы в ядре. Персистенция и онкогенные свойства В последние годы получены доказательства персистенции вируса герпеса в неинфекционной форме в ганглиях тройничного нерва. Вирус выделен при совместном культивировании клеток ганглиев с чувствительными к вирусу клетками. Почти 12 вирусов герпеса связаны с раком у человека и животных (болезнь Марека у цыплят, аденокарцинома почки леопардовой лягушки Люкке, лимфомы и лейкозы у низших обезьян, кроликов, морских свинок, кошек). У человека описана лимфома Беркита, вызываемая вирусом Эпштейна-Барра, относящимся к группе герпеса. Все большее подтверждение получает предположение об этиологической роли вируса герпеса (тип 2) в возникновении карциномы шейки матки. Из культуры клеток почек белкообразных обезьян в 1974 г. выделен онкогенный герпесвирус Herpesvirus Saimiri (HVS), оказавшийся этиологическим агентом лимфом, индуцированных у обезьян. ВИРУС БОЛЕЗНИ АУЕСКИ Болезнь Ауески - Morbus Aujeszky - (ложное бешенство, псевдобешенство, инфекционный бульбарный паралич, бешеная чесотка) - остро протекающая болезнь сельскохозяйственных животных всех видов, пушных зверей и грызунов. Характеризуется в первой стадии явлениями септицемии, кратковременной лихорадкой, во второй - поражением нервной системы: менингоэнцефалцмиелитом, проявляющимся нервными расстройствами в виде возбуждения, судорог, депрессии, параличей, сильным зудом и расчесами у всех животных, кроме свиней, норок и соболей. У взрослых свиней поражаются преимущественно органы дыхания, что проявляется пневмонией. Болезнь встречается во всех европейских странах, Южной и Северной Америке, Африке, Азии в виде энзоотии и наносит большой экономический ущерб. История открытия Впервые болезнь описана и выделен вирус венгерским ученым А. Ауески в 1902 г. В России первое сообщение о болезни Ауески появилось в 1903 г. Характеристика вируса Возбудитель ДНК-содержащий, пантропный фильтрующийся вирус из семейства герпесвирусов. Размеры - до 150 нм, имеет суперкапсид. Не обладает гемагглютинирующей способностью. Существенной особенностью вирусов данной группы является их способность сохраняться в организме хозяина, не вызывая признаков болезни. Устойчивость Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, быстро инактивируется желчью, устойчив к широким колебаниям рН (5,09,0). Устойчив к прогреванию, сохраняя активность при 60°С 45-50 мин, при 80°С погибает через 3 минуты. Замораживание при минус 20°С способствует инактивации. Холод консервирует вирус, при 14°С он может быть активен в течение четырех лет. Прямые солнечные лучи обезвреживают вирус в течение 6 часов, рассеянные солнечные лучи за 12-48 часов, ультрафиолетовые лучи - за 1 минуту. В 40%-ном глицерине и глицерино-фосфатном буфере с нейтральным рН сохраняется 2-3 года, в насыщенном растворе NaCl - не менее 3 месяцев. В тканях высохших трупов павших грызунов вирус сохраняется до 6 месяцев, в гниющих трупах - до 1 месяца. В моче летом вирус сохраняет активность 3 недели, в зимнее время - 8-15 недель, в навозной жиже летом - в течение месяца, зимой - около 3 месяцев. При биотермическом обеззараживании навоза он инактивируется в течение 8-15 дней. Горячий 3%-ный раствор едкого натра, 20%-ная взвесь свежегашенной извести, 1%-ный раствор формальдегида убивают вирус за 5-20 минут, растворы креолина и карболовой кислоты слабоэффективны. Антигенная вариабельность и родство Антигенные варианты у вируса болезни Ауески не установлены. В культуре почечных клеток обезьян, свиней, куриных фибробластов обнаружены два варианта вируса: 1. крупнобляшечный вызывающий у восприимчивых животных характерную клинику болезни; 2. мелкобляшечный, непатогенный для естественновосприимчивых животных. Методом перекрестной иммунофлуоресценции установлено антигенное родство между вирусами болезни Ауески и простого герпеса. От свиней часто выделяют естественно-ослабленные полевые штаммы вируса болезни Ауески. Многократное пассирование вируса Ауески на кроликах не ослабляет его вирулентности. Пассирование на других животных, куриных эмбрионах и культуре клеток часто ведет к аттенуации вируса до степени вакцинного штамма. Антигенная активность Вирус продуцирует образование нейтрализующих, комплементсвязывающих и преципитирующих антител, которые можно обнаружить с помощью РН, РСК и РДП. Специфические КС-антитела появляются через 3 дня после заражения, титр их не снижается до 30 -40 дней. Вируснейтрализующие антитела появляются к 6-8-му дню и достигают максимума через 3-4 недели. Гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства не установлены. Культивирование Вирус болезни Ауески пассируется на кроликах, белых мышах (предварительно обработанных гидрокортизоном), в первичных культурах клеток куриного эмбриона, почек крупного рогатого скота, обезьян, ягнят, свиней, перевиваемых клетках Hela, КЭМ-Ла, L, ПЭС, СОЦ, Hep и др., вызывая образование некротических фокусовбляшек, число которых пропорционально титру вируса. В культуре куриных фибробластов вирус образует бляшки под агаровым покрытием через 48 ч после заражения. Установлена связь между ЦПД, морфологией бляшек и вирулентностью штамма. Штаммы, высоковирулентные для свиней и крупного рогатого скота, обладают способностью вызывать образование синцития в культуре клеток. Помимо культуры клеток, вирус удается культивировать в развивающихся куриных эмбрионах при инокуляции на хорионаллантоис, иногда после длительного периода адаптации альтернативными пассажами. Наблюдаются специфические фокусы поражения хорион-аллантоиса и генерализованная инфекция. Эмбрионы гибнут через 24-96 часов (в зависимости от степени адаптации). Эпизоотологические данные В естественных условиях болеют свиньи (поросята-сосуны), овцы, крупный рогатый скот, собаки, кошки, лисицы, песцы, норки, а также крысы и серые мыши. Непарнокопытные животные и приматы имеют высокую естественную резистентность и болеют крайне редко. Описаны отдельные случаи болезни человека. Птицы нечувствительны. Молодняк всех видов животных, особенно поросята, более восприимчив к вирусу, чем взрослые животные. Поэтому заболеваемость в стаде колеблется от нескольких до 100 процентов Источник возбудителя инфекции - больные животные, выделяющие вирус с истечениями из носа, глаз и влагалища, с мочой и молоком. У животных наиболее чувствительных видов (крупный рогатый скот, овцы, козы, собаки, кошки) болезнь протекает тяжело, почти всегда заканчивается летально, а поэтому среди них нет широкого носительства; эпизоотические вспышки не имеют тенденции к распространению и быстро обрываются. Свиньи и синантропные грызуны менее чувствительны к вирусу, среди них болезнь нередко заканчивается выздоровлением с длительным носительством вируса (у свиней 2,5 года и более). Поэтому грызуны и свиньи - носители вируса Ауески - являются не менее опасными источниками возбудителя, чем больные животные. Длительно персистируя в организме свиней, вирус поддерживает латентную инфекцию, и среди ранее неблагополучного невакцинированного поголовья вирусоносительство может достигать 93%, среди вакцинированных - до 24%. Факторами распространения болезни Ауески могут быть инфицированные корма, подстилка, помещения, территория лагерей, трупы, в особенности грызунов, мясо и т.д. Большое эпизоотологическое значение в распространении и сохранении возбудителя имеют крысы и мыши, среди которых болезнь может приобретать характер эпизоотии. Они являются основным резервуаром вируса болезни Ауески в природе. Оставаясь вирусоносителями в течение ряда месяцев, грызуны способствуют поддержанию эпизоотического процесса, который в их популяции может не прерываться годами и тем самым обусловливать стационарность эпизоотического очага в свиноводческих хозяйствах. Плотоядные животные и свиньи в основном заражаются алиментарно, поедая инфицированных грызунов и их трупы, корма, воду, загрязненные выделениями больных животных и вирусоносителей, а также инфицированные боенские отходы. Поросятасосуны заражаются главным образом от маток через молоко, а также внутриутробно. При совместном содержании больных животных со здоровыми заражение возможно через кожу и видимые слизистые оболочки. Жвачные животные довольно устойчивы к оральному заражению и чрезвычайно устойчивы к парентеральному введению самого минимального количества вируса. Поэтому у животных этого вида передача возбудителя в основном осуществляется кровососущими насекомыми. Распространению инфекции способствуют неблагоустроенные скотомогильники, убойные площадки, необеззараженные боенские отходы, общие кормушки, выгулы и общие выпасы животных разных видов, антисанитарные условия содержания животных, присутствие грызунов в животноводческих помещениях и в помещениях для хранения фуража. Заболевание овец обусловлено главным образом наличием больных свиней, содержащихся в смежном помещении, или присутствием в животноводческих помещениях больных грызунов. В свиноводческие хозяйства возбудитель болезни чаще проникает с вновь завозимыми свиньями-вирусоносителями, приобретенными в ранее неблагополучных хозяйствах, а также с концентрированными кормами, загрязненными трупами грызунов, павших от болезни Ауески, и с необезвреженными боенскими отходами. Возбудителя могут заносить в хозяйство и грызуны, мигрирующие из соседних неблагополучных пунктов в радиусе 6 - 8 км. В крупных хозяйствах болезнь обычно принимает характер эпизоотической вспышки, чему способствуют систематическое перемещение свинопоголовья и высокая контагиозность возбудителя. В мелких репродукторных хозяйствах распространение болезни может ограничиться поражением поросят 2-3 пометов и быстро прекратиться. В крупных откормочных и репродукторных хозяйствах с непрерывным поступлением животных и опоросами эпизоотическая вспышка приобретает затяжной характер, В результате происходит массовое заболевание животных. У поросят до 3 - 4 недельного возраста течение болезни, как правило, злокачественное и заканчивается смертью. Поросята старших возрастных групп тоже болеют тяжело, но большая часть из них не погибает. Подсвинки и взрослые свиньи переболевают легко, нередко в скрытой форме, которую можно выявить лишь серологическим исследованием. При тесном контакте с неблагополучным свинопоголовьем могут заболевать и животные других видов. В неблагополучных свиноводческих хозяйствах болезнь Ауески может приобрести стационарный характер, если своевременно не будут применены строгие оздоровительные меры. Стационарности эпизоотических очагов способствуют длительное вирусоносительство, систематический ввод в стадо восприимчивых ремонтных свиноматок и собственное воспроизводство поросят, непрерывно пополняющее восприимчивую часть свинопоголовья. В связи с этим эпизоотии болезни Ауески в свиноводческих хозяйствах могут повторяться в течение ряда лет. В популяциях грызунов болезнь Ауески обычно проявляется периодически повторяющимися длительными эпизоотиями. Нередко вспышкам болезни среди свиней предшествует массовая гибель мышей и крыс и связанные с этим случаи заболевания кошек и собак. Среди пушных зверей болезнь чаще всего проявляется кратковременными вспышками, связанными с использованием необезвреженных свиных боенских отходов. У рогатого скота и лошадей регистрируют лишь заболевание отдельных животных. Не имея строго выраженной сезонности, вспышки болезни Ауески все же чаще регистрируют в осенне-зимний период, что связано с интенсивной миграцией грызунов в этот период в животноводческие помещения, неполноценным кормлением, скученностью, размещением свиней в неудовлетворительных ветеринарно-санитарных условиях. Течение и симптомы Инкубационный период в большинстве случаев длится 1 - 8 дней, как исключение - 3 недели. Его продолжительность зависит от естественной устойчивости, вида и возраста животного, места проникновения и вирулентности вируса. У свиней, в отличие от других животных, болезнь протекает без зуда. Инкубационный период 5 - 1 0 дней. Клинические признаки у свиней, прежде всего, определяются возрастом животного. У взрослых животных болезнь, как правило, протекает доброкачественно, проявляясь в течение 1-3 дней незначительной лихорадкой, угнетением, потерей аппетита, иногда рвотой. Большая часть животных может переболеть в скрытой форме. В некоторых случаях взрослые свиньи болеют тяжело. Кроме описанных признаков, появляются истечения из носа, кашель, шаткая походка, движение по кругу, тяжелое дыхание, выделение слюны, параличи конечности, глотки и гортани; животные погибают в коматозном состоянии. Среди откармливаемых подсвинков нередко наблюдают признаки катарального бронхита и фибринозной пневмонии, если присоединяется секундарная инфекция вируса гриппа, сальмонелл, пастерелл и других микроорганизмом. У свиноматок нарушается лактация, появляются массовые аборты, мертворождения и мумификация плодов. Наиболее злокачественно болезнь протекает у поросят-сосунов и отъемышей. Течение болезни острое. Различают септическую, эпилептическую, оглумоподобную и смешанную форму болезни. У новорожденных поросят до 10-дневного возраста заболевание чаще всего проявляется признаками менингоэнцефалита. Больные поросята не могут перемещаться, сосать, издавать звуки; появляются судороги, слюнотечение и спазм глотки. Животное погибает через 4 - 12 ч, а иногда через сутки. Смерть может наступить внезапно во время клинических судорог. У поросят в возрасте от 10 дней до 4 мес. более часто отмечается смешанная форма болезни с признаками менингоэнцефалита и септицемии. Вначале у. заболевших животных повышается температура тела до 41°С и выше, появляются угнетение, слабость, сонливость, рвота и жажда. Затем развиваются признаки поражения ЦНС с преобладанием либо признаков возбуждения (эпилептическая форма), либо торможения (оглумоподобная форма). При эпилептической форме поросята в состоянии возбуждения неудержимо стремятся вперед, совершают манежные и другие движения. У больных животных появляются судороги шейных и жевательных мышц, скрежет зубами, прогибание позвоночника. Эпилептические припадки по мере развития болезни происходят все чаще и доводят животное до полного изнеможения. Первичная репродукция в носоглотке и гортани приводит к развитию ларингофарингита, проявляющегося истечениями из носа, ненормальным визгом или полной афонией. Нередко развиваются полная слепота и прогрессирующий паралич мышц тела. Как и у взрослых свиней, у поросят нередко встречается легочная форма, протекающая без поражения ЦНС. Быстро развивающиеся признаки септицемии, воспаления верхних дыхательных путей, отека и воспаления легких заканчиваются через 1-2 дня гибелью животного. Иногда у поросят развивается стертая форма болезни, характеризующаяся общей слабостью, сонливостью, анорексией, кашлем и более продолжительным течением — до 7 дней. Заболеваемость поросят может достигать 70-100%, летальность у двухнедельных поросят - 80-100%, у более старших животных - 4080%. В отличие от других видов животных у свиней всех возрастов зуд не возникает. У животных всех остальных видов вследствие сильно выраженного нейротропизма вируса основным клиническим признаком является поражение ЦНС, проявляющееся сильными возбуждением, судорогами, параличами. У крупного рогатого скота в начале болезни повышается температура тела до 42°С, прекращается жвачка, проявляется сильный зуд, чаще в области головы. Заболевшие животные вялые, непрерывно лижут, трут или грызут зудящие места. Затем нарастают признаки беспокойства и возбуждения, отмечается испуганный взгляд, животное мычит, стремится к движению, но агрессивности нет. Нередко наблюдают судорожные сокращения шейных и жевательных мышц, частые позывы к мочеиспусканию, слюнотечение, потливость и нервную дрожь. Расчесанные до крови зудящие места отекают. Животные сильно слабеют, ложатся и впадают в прострацию со смертельным исходом через 1 - 2 и реже через 3 - 4 дня после появления первых клинических признаков болезни. Иногда у животного зуд не развивается, болезнь проявляется усиленным отделением пота и слюны, атонией рубца, жаждой, приступами беспокойства, чередующимися с периодом оцепенения и сонливости. Смерть обычно наступает при явлениях нарастающей слабости. У овец и коз болезнь проявляется такими же клиническими признаками, что и у крупного рогатого скота, особенно ярко у них выражен зуд, общее возбуждение бывает редко. Животное погибает в течение 1-3 суток. В естественных условиях овцы и козы болеют редко. Это объясняется условиями их содержания и кормления. Инкубационный период продолжается 3 - 6 , редко 10 дней. Болезнь протекает остро, очень тяжело и почти всегда заканчивается смертью животного через 2 4 - 3 6 часов после появления первых клинических признаков. При появлении признаков болезни температура тела повышается до 40-41,8°. В последующем она становится нормальной, но иногда может кратковременно повышаться. В начале болезни овцы легко возбудимы, пугливы, но вскоре приступы возбуждения сменяются приступами угнетения. Овцы подолгу стоят, дыхание и сердцебиение учащенные, наблюдается мышечная дрожь, снижение аппетита. Через некоторое время аппетит исчезает, жвачка прекращается, отмечаются нарушение координации движения, шаткость походки, иногда манежные движения. Вскоре у животных начинается сильный зуд. Они расчесывают, а часто разгрызают зудящие места и вырывают шерсть. Кожа на месте расчесов становится красной и отечной. В результате сильного зуда и расчесов овцы быстро слабеют, больше лежат, не реагируя на окружающее. Комплекс клинических признаков при спонтанном заражении лошадей сводится к следующему. Вначале у заболевшей лошади обнаруживается повышенная температура тела, вялый аппетит. Лошадь берет в рот корм, жует его, но прежде чем проглотить, делает паузу, как бы задумывается. Иногда у больных вместе с повышением температуры вовсе теряется аппетит; при этом нередко появляется зуд в той или иной части головы, чаще всего в области губ или щек. Больная лошадь начинает тереться губами или щекой о кормушку; на зудящем месте вытирается шерсть, появляется отечность, распространяющаяся па окружающие ткани. Зуд не прекращается во время болезни. Одновременно с этим у больных появляются симптомы нервного возбуждения. Лошадь вздрагивает при шуме, принимает ненормальное положение. Она то подается назад, то лезет на стенку. Временами у больных наблюдаются дрожь, тетанические или клонические судороги, хриплое ржание, беспокойный взгляд. В некоторых случаях у больных наступает стойкая слепота. При летальном исходе симптомы заболевания развиваются очень быстро, и лошадь погибает в течение суток. В большинстве случаев у заразившихся болезнью Ауески лошадей отмечается при незначительном и кратковременном повышении температуры до 39-39,5° недомогание, выражающееся в общей вялости, беспокойстве, прогибании спины, поясницы, уменьшении аппетита. Все эти явления продолжаются 2-4 дня, и животное выздоравливает. При этом, так же как и при тяжело протекающей болезни, может неожиданно наступить стойкая слепота. Пушные звери, кошки, собаки в начале болезни становятся апатичными, отказываются от корма, затем появляются испуганный взгляд, беспокойство и сильный зуд. Лишь у норок, соболей почти никогда не бывает зуда (преобладает коматозное состояние). Животные издают болезненные звуки, у них резко повышается возбудимость. Признаки возбуждения у собак могут напоминать клиническую картину бешенства, но агрессивности нет. Патологоанатомические изменения У крупного и мелкого рогатого скота, собак, кошек и ряда других видов животных наиболее постоянными морфологическими признаками являются расчесы на коже в местах зуда, преимущественно в области головы, реже в других участках тела. В этих местах отсутствует шерстный покров, нередко повреждается эпидермис и даже имеются рваные раны. При сильных травмах развивается дерматит, иногда миозит с выраженным серозно-геморрагическим отеком, особенно подкожной клетчатки. Кожа при этом красного цвета, края ран припухшие. Подлежащие мягкие ткани набухшие, с кровоизлияниями. Иногда здесь находят мутноватую гноеподобную жидкость. В других органах изменения выражены слабо. Слизистая оболочка верхних дыхательных путей отечна и гиперемирована. Наблюдается гиперемия и отек легких, гиперемия и иногда кровоизлияния в слизистой оболочке сычуга, желудка. Желудок плотоядных во многих случаях переполнен кормом с наличием несъедобных (инородных) предметов. У собак обнаруживают геморрагические эрозии, сходные с таковыми при бешенстве. Не всегда отмечают катаральный или геморрагический энтерит, немногочисленные кровоизлияния под серозными оболочками, зернистую дистрофию паренхиматозных органов. В паренхиматозных органах отмечают застойные явления, под эпикардом - полосчатые кровоизлияния, мочевой пузырь растянут мочой и на его слизистой оболочке нередко кровоизлияния. Кровеносные сосуды мозговых оболочек расширены, мозг и оболочки отечны. У свиней патологоанатомические изменения варьируют в зависимости от возраста животных и стадии заболевания. Поскольку болезнь у свиней протекает, как правило, без зуда, то и повреждения кожи отсутствуют. У абортированных плодов и новорожденных поросят до двухнедельного возраста развивается острый септикотоксический процесс, часто с наличием множественных или единичных милиарных и субмилиарных серого, серо-желтоватого цвета, четко ограниченных некротических очажков в печени, селезенке, на слизистых оболочках гортани и глотки, особенно в миндалинах, реже в легких, почках, надпочечниках и лимфатических узлах. В легких гиперемия и постоянно отек, редко катаральная бронхопневмония. Нередко отмечают серозное воспаление перибронхиальных и брыжеечных лимфоузлов; катаральный или дифтероидный ларингофарингит с мелкоочаговыми некрозами, точечные кровоизлияния в слизистой оболочке верхних дыхательных путей, под плеврой, на эпикарде, в селезенке и особенно часто в почках, катаральный гастроэнтерит. У некоторых животных встречается конъюнктивит, сопровождающийся иногда отеком век. У павших поросят более старшего возраста (3- 4-недельных и до отъема) патологоанатомические изменения аналогичны описанным у новорожденных, за исключением милиарных некрозов, которые у них обычно отсутствуют или бывают очень редко. У подсвинков и взрослых свиней ярче выражены крупознодифтеритические и язвенно-некротические поражения слизистых оболочек гортани и глотки с миндалинами. В миндалинах поверхностно или более глубоко расположены мелкие очажки некроза, а иногда распространены некрозы и кратерообразные язвы с изъеденными краями, возникающие вследствие выпадения омертвевших масс. Часто проявляется острый серозный ринит, развивается значительный отек легких. Частая находка на вскрытии - различные пневмонии, вплоть до аспирационной, осложненной гангреной. В различной степени выраженный катаральный гастрит и энтерит довольно частое явление при болезни Ауески. Постоянным и достаточно характерным признаком болезни у свиней является поражение центральной нервной системы. В головном мозге обращает внимание кровенаполнение сосудов мозговых оболочек и вещества мозга, иногда с кровоизлияниями. Встречается незначительная отечность мозгового вещества. В мозговых желудочках содержание ликвора несколько увеличено. У поросят 2-х месячного возраста в 88-98% случаев оболочки головного и спинного мозга воспалены, головной мозг отечен, в его боковых желудочках - скопление серозной жидкости. Лабораторная диагностика 1.1 Лабораторная диагностика болезни Ауески животных заключается в: • обнаружении и идентификации вируса этой болезни в патологическом материале методами непрямой гемагглютинации(РНГА) или иммуноосмофореза; • выявлении специфических антител в сыворотке крови больных и переболевших животных в РНГА или в реакции нейтрализации (РН) на культуре клеток (ретроспективная диагностика); • постановке биологической пробы. 1.2. РНГА, реакцию иммуноосмофореза и РН применяют для исследования патологического материала и сывороток крови только от невакцинированных против болезни Ауески животных. 1.3. Лабораторный диагноз на болезнь Ауески ставят при получении положительного результата хотя бы по одному из методов исследования, указанных в п. 1.1. Окончательный диагноз на болезнь Ауески устанавливается на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных с учетом результатов лабораторного исследования. Для выделения возбудителя болезни Ауески используют головной мозг, кусочки легких, селезенки, печени, лимфатических узлов, миндалин, полученные при вскрытии погибших животных. При жизни больных свиней вирус можно выделить из носовых секретов, в которых он появляется на 4-6-й день болезни и сохраняется в течение 5-11 дней после выздоровления. От абортировавших животных берут плоды и плаценту. При сборе материалов для вирусологического исследования следует помнить о неравномерном распределении вируса в различных участках мозга. Консервирование, доставку и подготовку материала производят общепринятым способом. Метод электронной микроскопии позволяет обнаружить вирус болезни Ауески через сутки после экспериментального заражения; препараты-отпечатки готовят непосредственно на электронномикроскопические сеточки со слизистой глаза, носа, ротовой полости и из мочи. Обнаружение специфических телец-включений вспомогательный метод индикации вируса в препаратах из исследуемого материала. Обнаружение вирусного антигена с помощью серологических реакций. Реакцию иммунофлуоресценции используют для быстрой индикации вируса. При исследовании в РИФ отпечатков головного, спинного мозга, легких и селезенки больных животных антиген обнаруживают с 3-4-го дня после заражения. Приготовление препаратов и их окрашивание проводят по общепринятой методике. Реакция непрямой гемагглютинации - РИГА. С применением эритроцитарного иммуноглобулинового диагностикума антиген вируса болезни Ауески в РИГА можно выявить за 1-3 дня до появления клинических признаков болезни, в период болезни и после переболевания. Обнаружение вируса методом биопробы. Для этой цели используют кроликов, которых заражают внутримышечно суспензией из патматериала в дозе 1 мл. Через 2-3 суток после заражения кролики заболевают с признаками зуда, расчесов и параличей. Если кролики гибнут без указанных признаков, биопробу повторяют, используя патологический материал от погибших кроликов (головной мозг, легкие, печень). Кроме кроликов для выделения вируса используют первичные культуры клеток почек и щитовидной железы свиней, семенников телят, фибробластов куриных эмбрионов, перевиваемые линии РК15, ВНК-21. В вирусу высокочувствительны субкультуры пассажа клеток почки поросенка и крупного рогатого скота. При первичном выделении вируса первые признаки цитопатогенного действия появляются на 4-5-й день после инокуляции. В последующих пассажах сроки появления ЦПД сокращаются до 15-20 часов, причем оно становится более выраженным. Характер цитопатических изменений в различных культурах может быть неодинаковым, что обусловлено различным действием вируса на клетки эпителиального и фибробластического типа. В культуре клеток почки поросенка, эмбриона свиней или крольчонка цитопатогенное действие вируса выражается в образовании синцития. Титры вируса в период максимального развития ЦПД обычно достигают 10 ' - 10 ' ТЦД5о/млРетроспективная диагностика Диагноз на прошедшую инфекцию ставят обычно при помощи реакции нейтрализации в культуре клеток, определяя титры вируснейтрализующих антител к вирусу Ауески в сыворотках крови реконвалесцентов. Для более точной диагностики лучше исследовать парные сыворотки, взятые с интервалом в 3-4 недели. Титры антител у переболевших животных могут колебаться в широких пределах (1:32 - 1:256). Для обнаружения и титрования антител кроме РН применяют РНГА, РДП, ELISA-метод и другие реакции. Аллергическая проба Разработан кожный аллергический метод диагностики болезни Ауески. Он позволяет в короткий срок поставить диагноз непосредственно в хозяйствах. Метод основан на феномене гиперчувствительности замедленного типа у латентно больных животных. При введении убитого нагреванием антигена в нижнее веко, внутреннюю и дорсолатеральную часть грудной клетки, а у поросят - в медиальную поверхность бедра реакция наблюдается через 24-48 часов и выражается образованием отечной припухлости тестоватой консистенции, 2-4 см в диаметре, с покраснением в центре (место введения антигена). Чувствительность реакции достаточно высокая. Иммунитет После переболевания - пожизненный. Переболевшие животные приобретают напряженный иммунитет на многие годы. Сыворотки крови переболевших свиней содержат вируснейтрализующие антитела в титре 1:32 - 1:256 начиная с третьего месяца, которые иногда сохраняются до 4,5 года. Антитела иммунных свиноматок не проникают через плаценту в плод, поэтому у родившихся поросят антител против вируса болезни Ауески нет. У поросят, родившихся от иммунных свиноматок, в течение 24 часов после сосания молозива формируется колостральный иммунитет с наличием в сыворотке крови высокого титра нейтрализующих антител. Он обеспечивает пассивную защиту поросят до 5-7-недельного возраста. У поросят, имевших на момент прививок колостральные антитела, выработка активного иммунитета полностью подавляется. Активная иммунизация свиноматок за две недели до опороса способствует защите подсосных поросят от заражения болезнью Ауески. Диагноз Ставят на основании эпизоотологических, клинических признаков и патологоанатомического исследования. Важнейшим характерным симптомом болезни является зуд, сопровождаемый расчесами кожи. У свиней зуд не возникает. У поросят преобладают признаки энцефаломиелита, а у свиней гриппоподобное переболевание с признаками пневмонии. Необходимо учитывать случаи заболевания и падежа собак и кошек, массовую гибель грызунов. Дифференциальный диагноз Болезнь Ауески следует дифференцировать у свиней от болезни Тешена, чумы, бешенства, гриппа, сальмонеллеза, отечной болезни, листериоза, пастереллеза, стрептококкоза, гипогликемии, солевого отравления, аскаридоза, авитаминоза. У крупного и мелкого рогатого скота - от бешенства, листериоза, кормового отравления, ценуроза. У лошадей - от менингоэнцефалита, бешенства, отравления. У пушных зверей - от чумы и энцефаломиелита лисиц. У собак - от бешенства, чумы плотоядных. У кошек - от бешенства. Для дифференциации от бешенства проводят биопробу на мышатах и в РИФ, а также микроскопию для выявления телец БабешаНегри. Для исключения чумы, болезни Тешена биопробу ставят на кроликах; гриппа свиней - биопробу и исследуют выделенный вирус в РГА и РТГА; листериоз, сальмонеллез, отечную болезнь и другие бактериальные инфекции исключают бактериологическим исследованием, отравление - исходя из данных биопробы и результатов лабораторного химического анализа. Лечение Специфических и медикаментозных средств лечения больных животных нет. Впервые предложенная П. С. Соломкиным (1948) гипериммунная сыворотка и И. И. Лукашовым (1959) специфический гамма-глобулин слабо эффективны. В настоящее время с профилактической и лечебной целью (в начале заболевания) применяют гамма-глобулин лишь пушным зверям. Для профилактики развития секундарной бактериальной инфекции рекомендовано применять одновременно антибиотики и витаминные препараты. Биопрепараты 1. Вирусвакцина ВГНКИ сухая живая культуральная против болезни Ауески свиней, крупного рогатого скота и овец (вирусвакцина ВГНКИ произведена на основе штамма, модифицированного в течение более 300 пассажей в куриных эмбрионах и культуре их клеток). 2. Вакцина жидкая культуральная инактивированная УНИИЭВ против болезни Ауески свиней, овец и пушных зверей. 3. Вакцина инактивированная культуральная концентрированная против болезни Ауески свиней, овец и пушных зверей (у нас в 4. 5. 6. 7. стране применяют с 1980 г.). Вирусвакцина «Суибивак» сухая культуральн ая ассоциированная против болезни Ауески и чумы свиней. Вакцина инактивированная концентрированная против парвовирусной болезни, лептоспироза,болезни Ауески, хламидиоза свиней (ПЛАХ). Вирус-вакцина из штамма БУК-628 для свиней. Глобулин против болезни Ауески. Профилактика и меры борьбы Важным условием, обеспечивающим эффективность предупреждения болезни, является проведение повсеместного массового планового эпизоотологического контроля за домашними и дикими животными (в том числе и за популяциями грызунов.), особенно в свиноводческих хозяйствах. Выявляют вирусоносителей в свиноводческих хозяйствах путем биологических проб (кролики, свиньи) и серологического исследования животных. В благополучных хозяйствах животные не должны иметь вируснейтрализующих антител. Большое профилактическое значение имеют организация летнего лагерного содержания свиней, обеспечение их полноценными кормами, систематическая борьба с грызунами, бродячими собаками и кошками. Боенские и пищевые отходы можно скармливать свиньям и пушным зверям только после надежной проверки. Нельзя размещать репродукторные свиноводческие фермы в непосредственной близости с откормочными, использующими сборные пищевые отходы. При угрозе возникновения болезни следует проводить профилактическую вакцинацию свиней. При появлении болезни на неблагополучное хозяйство (ферму, бригаду, питомник) накладывают карантин. Запрещают ввод, вывод, перегруппировку свиней, прекращают случку, взвешивание, татуировку, пользование общими столовыми, проводят текущую дезинфекцию, дератизацию и другие мероприятия, способные приостановить дальнейшее распространение болезни. Поголовье животных неблагополучного хозяйства осматривают и выборочно термометрируют. Больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют и лечат глобулином, симптоматическими средствами и антибиотиками (для предупреждения развития вторичной инфекции). Клинически здоровых животных немедленно вакцинируют и одновременно санируют внешнюю среду. В местах изоляции животных санацию проводят ежедневно, а в помещениях со здоровыми животными - еженедельно. Навоз и подстилку обезвреживают биотермически, а навозную жижу - хлорной известью (12 кг/м). Мясо вынужденно убитых свиней обезвреживают проваркой. Шкуры снимать не следует, их опаливают или ошпаривают. Трупы сжигают или утилизируют. Карантин с хозяйства снимают через месяц (в звероводческих хозяйствах через 15 дней) после прекращения заболевания и удаления из него переболевших животных, проведения полного комплекса общих и специальных оздоровительных мероприятий. После снятия карантина вакцинацию молодняка, ревакцинацию взрослых свиней и вновь ввозимого поголовья проводят в течение года до полной замены ранее неблагополучного поголовья и уничтожения всех грызунов. Ввозить вакцинированное поголовье из оздоравливаемых хозяйств разрешается только в аналогичные хозяйства спустя год после снятия карантина. Свиноводческие хозяйства считают полностью оздоровленными от болезни Ауески, если в течение 6 мес. после прекращения вакцинации получен здоровый приплод. Биологический контроль целесообразно сочетать с 2 кратным серологическим исследованием с интервалом в 4 недели. В полностью оздоровленном хозяйстве невакцинированные животные не должны иметь вируснейтрализующих антител в титре 1:2 и выше.