78 определение содержания цитокинов в смывах из полости

•
P
Препарати та технології
•
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЦИТОКИНОВ
В СМЫВАХ ИЗ ПОЛОСТИ НОСА У ДЕТЕЙ-АЛЛЕРГИКОВ
ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ Bacillus clausii:
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
по материалам: Pediatr. Allergy Immunol. — 2004. — V. 15.
Напечатано в Великобритании, 2004)
№ 8 (54)/2008
РР
78
Гиоргио Ципранди (Giorgio Ciprandi)*,
Мария Анджела Тоска (Maria Angela Tosca)*,
Манлио Миланезе (Manlio Milanese)*,
Джакомо Калиго (Giacomo Caligo)*
и Витторио Рикка (Vittorio Ricca)**
—
P. 148—151.
еспираторные инфекции у
вано, смогло снизить частоту
детей возникают очень чавозникновения
респираторсто. Как уже было проденых инфекций и их тяжесть у
монстрировано ранее, Bacillus
детей, посещающих детские
/*Отделение аллергических и ЛОР болезней, Отдел заболеваний головы
clausii обладает иммуномодошкольные учреждения [1].
и шеи, госпиталь Сан-Марино, Генуя, Италия,
дулирующими свойствами и
Пробиотики представляют со**Ospedale Koelliker, Турин, Италия/
безопасен в применении. Цель
бой микроорганизмы, оказыванастоящего исследования соющие положительное влияние
стояла в выяснении того, мона здоровье «хозяина». Взаищим действием и влиять на профиль
жет ли применение B. clausii
модействие между пробиотиком
цитокинов, выявляемых в полости
у детей-аллергиков с рецидивируюи организмом «хозяина» является доноса у детей-аллергиков, страдающих
щими респираторными заболеваниястаточно сложным и разноплановым.
рецидивирующими
респираторными
ми модулировать профиль цитокинов.
Происходит
стимуляция
иммунной
инфекциями.
Десять детей (средний возраст 4,4
системы путем активизации иммунногода), посещающих детго ответа, опосредованного
ский сад, были включены
Т-хелперами 1-го типа (Th1)
в исследование по окони Т-регулирующими клеткаРеспираторные инфекции у детей
чании учебного года (т.е.
ми (Tr1), а также снижения
возникают очень часто. Как уже было
летом). Препарат, соактивности Т-хелперов 2-го
держащий споры Bacillus
типа (Th2) [2]. У детей, страпродемонстрировано ранее, Bacillus clausii
clausii (Enterogermina®, 2
аллергией, отмечаобладает иммуномодулирующими свойствами дающих
миллиарда спор в каждом
ется поляризация иммуннои безопасен в применении. Цель настоящего
флаконе), применялся в
го ответа в сторону Th2, для
дозе 2 флакона в сутки
исследования состояла в выяснении того, может которой характерны высокие
на протяжении 4 недель.
уровни IL-4 и низкие уровни
ли применение B. clausii у детей-аллергиков
Определенный набор циIFN-γ [3]. Поэтому пробиос рецидивирующими респираторными
токинов, в том числе интики вполне могут считаться
терлейкинов (IL)-1, IL-3,
важным терапевтическим дозаболеваниями модулировать профиль
IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, ILстижением в деле профилакцитокинов
12, интерферона (IFN)- γ,
тики инфекций и атопии.
трансформирующего факВ этом отношении Bacillus
тора роста (TGF)-β и факclausii — это безопасный и
тора некроза опухоли (TNF)-α, опречасто назначаемый пробиотик. В опуделялся методом иммуноферментного
бликованном недавно обзоре были
анализа в смывной жидкости из полопредставлены данные некоторых иссти носа до и после лечения. Лечение
следований, указывающие на его роль
с использованием Bacillus clausii приРеспираторные инфекции у детей
в профилактике инфекций желудочновело к существенному снижению уроввозникают очень часто, а их периокишечного тракта у детей и модулироней IL-4 (p<0,01) и существенному
дическое рецидивирование создает
вании иммунного ответа [4].
увеличению уровней IFN-c (p<0,05),
определенные сложности для врачейПоэтому наша цель состояла в
IL-12 (p<0,001), TGF-β (p<0,05), а
педиатров, преимущественно в плане
изучении потенциального влияния
также уровней IL-10 (p<0,05). Сущедиагностики, выбора стратегии лечеB. clausii на профиль цитокинов, в
ственного влияния на другие цитокиния и профилактики. Поскольку протом числе IL-1, IL-3, IL-4, IL-6, IL-8,
ны не отмечено. В заключение отмефилактика снижает потребность в леIL-10, IL-12, IFN- γ, TGF-β и TNF-α у
тим, что в данном исследовании было
чении, профилактическое применение
детей-аллергиков, страдающих реципродемонстрировано, что B. clausii
молока, содержащего пробиотики,
дивирующими респираторными инможет обладать иммуномодулируюкак недавно было продемонстрирофекциями.
Введение
•
Материалы и методы
исследования
Субъекты исследования
Оценка проводилась среди десяти
детей, посещающих детское учреждение. У каждого пациента проводился
тщательный сбор клинического анамнеза, а также физикальное и аллергологическое обследование. Демографические данные представлены в
таблице.
Дизайн
исследования
•
P
Таблица
Основные характеристики испытуемых
Испытуемые
Пол
Возраст
Аллергическое заболевание
Сенсибилизация
Тяжесть
астмы
Тип РИ
Частота
возникновения
1
Ж
4
A
HDM
1
ВДП
7
2
М
3
A, Р
HDM
1
ВДП
6
3
М
5
A
HDM
1
ВДП
7
4
М
5
A, Р
HDM
1
ВДП
6
5
Ж
4
A, Р
HDM
1
ВДП
7
6
М
4
A, Р
HDM
1
ВДП, НДП
(2)
8
7
М
4
A
HDM
1
ВДП
8
8
Ж
5
A, Р
HDM
1
ВДП, НДП
7
9
Ж
5
A
HDM
1
ВДП
8
10
М
6
A, Р
HDM
1
ВДП
7
Примечание: A — астма; Р — ринит; HDM — клещи домашней пыли; тяжесть астмы определялась по классификациии GINA (Глобальная инициатива по лечению астмы); тип РИ,
тип респираторной инфекции: ВДП, инфекции верхних дыхательных путей (ринофарингит,
синусит, тонзиллит, аденоидит, средний отит); НДП, инфекции нижних дыхательных путей
(трахеобронхит и пневмония); частота возникновения за последний год.
после приема B. clausii. В любом случае
исследование было слепым для исследователя, проводившего определение
содержания цитокинов.
Все дети перорально получали препарат, содержащий споры B. clausii
(Enterogermina®;
Sanofi-Synthelabo
OTC, Милан, Италия) (2 миллиарда спор
в каждом флаконе), в дозе 2 флакона
в сутки на протяжении 4 недель. Исследование проводилось по окончании
учебного гола, т.е. летом, поскольку в
этот период частота возникновения респираторных инфекций в нашей зоне
является очень низкой.
Взятие смывов из полости носа проводилось у всех испытуемых до и непосредственно после применения B. clausii.
Исследование
было
одобрено
Экспертным советом медицинского
учреждения. От родителей было получено устное информированное со№ 8 (54)/2008
Для оценки профиля цитокинов в исследование была включена группа из 10
детей с диагностированной аллергией, у
которых периодически возникали рецидивы респираторных инфекций. Диагноз аллергии ставился на основании
клинического анамнеза, физикального
обследования, а также кожной пробы
накалыванием (прик-теста) с обычным
набором аллергенов, описанной в различных источниках [5]. Рецидивирование респираторных инфекций определялось произвольным образом как 6
случаев инфекции в год. В исследование не включались дети, на протяжении
предшествующих 4 недель принимавшие антигистамины, а также кортикостероиды для назального, ингаляционного и перорального применения.
Группа плацебо не была предусмотрена, так как основная цель исследования состояла в оценке иммунопатологических явлений, возникающих
Препарати та технології
79
Рис. 1. Уровни цитокинов до и после лечения B. clausii.
Baseline = исходный; After treatment = после лечения
Рис. 2. Уровни цитокинов до и после лечения B. clausii.
Baseline = исходный; After treatment = после лечения
•
P
Препарати та технології
•
Помимо этого, отсутствуют какиеходные показатели — 0,76±0,43 СО и
гласие на участие их детей в исслелибо данные о том, что в ходе исслесредние показатели после лечения —
довании.
дования проводилось изучение вегета1,36±0,81 СО). Под действием B. сlausii
Смывы из носа
существенно возросли уровни TGF-β
Взятие смывов из полости носа
ции спор B. сlausii, поэтому ее прямой
(p<0,05; средние исходные показатепроводилось с использованием 5 мл
иммуномодулирующий эффект не моли — 0,9±0,34 СО и средние показафизиологического раствора хлорида
жет считаться достоверно установлентели после лечения — 1,33±0,51 СО),
натрия в соответствии со стандартной
ным. Наоборот, нами исследовались
а также уровни IL-10 (p<0,05; средние
методикой, описанной во многих исэффекты B. clausii на уровне органовисходные показатели — 1,45±0,75 СО
точниках [5]. Во время проведения мамишеней, таких как верхние дыхаи средние показатели после лечения —
нипуляции голова пациента была оттельные пути, у детей-аллергиков,
2,05±0,72 СО).
клонена назад, при этом мягкое небо
анамнез которых отягощен рецидиСоотношение Th2:Th1 (IL-4/IFN- γ)
закрывало вход в глотку. Полученная
вирующими респираторными инфекжидкость была сопоставимой у всех
существенно сократилось с 2,92±1,71
циями. Концепция о рециркуляции
субъектов исследования; ее собирали
до лечения до 1,44±0,57 после лечеиммунокомпетентных
клеток
поддля определения уровней содержания
ния (p=0,018).
тверждает полученные данные, поцитокинов и хранили при
скольку B. clausii приметемпературе -20°C.
нялся перорально.
Оценка содержания
В любом случае, полуВ любом случае, полученные нами результаты
цитокинов
ченные нами результаты
указывают на возможные механизмы,
Содержание
цитокиуказывают на возможные
нов измерялось методом
механизмы, с помощью кос помощью которых B. сlausii оказывает
ELISA (твердофазного имторых B. сlausii оказывает
модулирующее действие на функционирование модулирующее действие на
муноферментного анализа) (R&D Systems, США).
функционирование иммуниммунной системы
При проведении аналиной системы.
за использовали количеОднако для подтвержственную методику иммудения этой гипотезы обязаноферментного сэндвич-анализа. Эта
B. clausii не оказывал существеннотельно необходимо проведение дополметодика широко описана в различго влияния на другие изучаемые цитонительных исследований с длительным
ных публикациях [5].
кины (IL-1, IL-3, IL-6 и IL-8) (данные не
применением препарата в больших
Статистический анализ
представлены).
группах детей.
Был проведен статистический анализ полученных данных с использованием многовариационного дисперсного
анализа (M-ANOVA) и апостериорного
1.
HATAKKA K, SAVILAHTI E, PONKA A, et al. Effect of long term consumption of probiotic milk
сравнения с помощью теста Дункана.
on infections in children attending day care centers: double blind, randomised trial // BMJ. —
Соотношение Th2/Th1 рассчитыва2001. — 322. Р. 1—5.
лось с помощью t-теста. Результаты,
2.
ELSON CO, CONG Y. Understanding Immune-Microbial homeostasis in intestine // Immunol
для которых значения p были меньше
Res. — 2002. — 26. — Р. 87—94.
3.
MURCH SH. Toll of allergy reduced by probiotics // Lancet. — 2001. — 357. — Р. 1057—9.
0,05, считались статистически досто4.
CIPRANDI G, TOSCA MA. Probiotics in paediatric allergy: evidence and prospectives for
верными.
№ 8 (54)/2008
Литература
80
5.
Результаты и их
обсуждение
У детей, принимавших назначенный препарат, содержащий споры
B. сlausii, какие-либо побочные явления не наблюдались. Ниже приведен
профиль цитокинов до и после лечения
B. clausii.
После лечения уровни IL-4 значительно снизились (p<0,001; средние
исходные показатели — 4,49±1,45
стандартного отклонения (СО) и средние показатели после лечения —
3,52±0,9 СО). При приеме Bacillus
clausii значительно повысились уровни
IFN-γ (p<0,05; средние исходные показатели — 1,81±0,79 СО и средние показатели после лечения — 2,65±0,69
СО) и IL-12 (p<0,001; средние ис-
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
Bacillus clausiі // Ital. J. Paed. Allergy Immunol. — 2002. — 2. — Р. 49—57.
RICCIO AM, TOSCA MA, COSENTINO C, et al. Cytokine pattern in allergic and non-allergic
chronic rhinosinusitis in asthmatic children // Clin Exp Allergy. — 2002. — 32. — Р. 422—6.
KALLIOMAKI M, KIRJAVAINEN P, EEROLA E, et al. Dis tinct patterns of neonatal gut microflora
in infants in whom atopy was and was not developing. J Clin Allergy Immunol. — 2001. —
107. — Р. 129—34.
MURCH SH. The immunologic basis for intestinal food allergy // Curr. Opin. Gastroenterol. —
2000. — 16. — Р. 552—7.
LEVINGS MK, BACCHETTA R, SCHULZ U, RONCAROLO MG. The role of Il10 and TGF-b in the
differentiation and effector function of T regulatory cells // Int. Arch. Allergy Immunol. —
2002. — 129. — Р. 263—76.
NOVELLI A, ULIVELLI A, REALI EF, et al. Bacillus subtilis spores as a natural pro-host oral
agent. Preliminary data in children // Chemioterapia. — 1984. — 3. — Р. 152—5.
GALLI E, CORGIOLO M, FIORE L, et al. Valutazione di alcuni parametri immunologici in
bambini con otite ricorrente trattati con spore di B subtilis // Clin Ter. — 1984. — 109. —
Р. 329—34.
FIORINI G, CIMMINIELLO C, CHIANESE R, et al. B. Subtilis selectively stimulates the
synthesis of membrane bound and secreted IgA // Chemioterapia. — 1985. — 4. — Р. 310—2.
GRASSO G, MIGLIACCIO P, TANGANELLI C, et al. Restorative effect of B. subtilis spores on
interferon production in aged mice // Pharm Aging Proc. — 1994. — 717. — Р. 198—208.
CARUSO A, FLAMMINIO G, FOLGHERA S, et al. Expression of activation markers on
peripheral-blood lymphocytes following oral administration of B. subtilis spores // Int. J.
Immunopharmacol. — 1993. — 15. — Р. 87—92.
KAUR IP, CHOPRA K, SAINI A. Probiotics: potential pharmaceutical applications // Eur. J.
Pharm Sci. — 2002. — 15. — Р. 1—9.
Di LEO V, YANG P, BERIN MC, PERDUE MH. Factors regulating the effect of IL-4 on intestinal
epithelial barrier function // Int. Arch. Allergy Immunol. — 2002. — 129. — Р. 219—27.