(1+2) типа в сыворотке крови

Набор реагентов для иммуноферментного определения антител класса IgM
к вирусу простого герпеса (1+2) типа в сыворотке крови
(ИммуноФА-IgM-ВПГ(1+2))
Номер по каталогу ИФ-20-07
Набор ИммуноФА-IgM-ВПГ(1+2) предназначен для качественного
определения наличия IgM-антител к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов в
сыворотке крови человека методом иммуноферментного анализа на
стрипованных полистироловых планшетах.
Значение
ВПГ-инфекции
определяется
ее
распространенностью,
многообразием клинических проявлений, тяжестью течения при отсутствии
адекватного лечения. ВПГ 1 типа вызывает, в основном, орофациальный герпес,
ВПГ 2 типа – генитальный герпес. Герпесвирусная инфекция играет важную
роль в неонатологии, вызывая патологию плода в процессе беременности, и,
особенно часто, при прохождении плода через родовые пути (до 80% случаев).
При первичной инфекции IgM-антитела к ВПГ определяются уже в первую
неделю после инфицирования. Рецидивирующий герпес обычно наблюдается на
фоне иммуносупрессивных состояний, в том числе и у беременных. Причем, даже
наличие
IgG-антител
оказывает
слабое
защитное
действие.
При
рецидивирующем герпесе IgM-антитела часто не обнаруживаются. Быстрая и
достоверная диагностика ВПГ-инфекции необходима для оценки риска
повреждения плода у беременных, назначения адекватной химиотерапии.
При выявлении IgM антител к вирусу простого герпеса результаты ИФА
обязательно должны дополняться другими методами (например, реакцией
непрямой иммунофлуоресценции, ПЦР).
Набор комплектуется специальным блокирующим реагентом для
снижения влияния ревматоидного фактора, а также специфических IgG-антител
на реакцию, и повышения, таким образом, достоверности результатов.
Принцип метода – непрямой двухстадийный ИФА
Е
Е
Е
S
Е
Е
Е
P
Иммобилизованный
антиген
Анализируемый образец
Иммобилизованные
иммунокомплексы
Конъюгат
вторичных антител с
пероксидазой
Иммобилизованные
иммунокомплексы
с мечеными
антителами
Субстратная
реакция
СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА
1. Подготовка исследуемых образцов: по 5 мкл каждого образца смешать с 500
мкл приготовленного буферного блокирующего раствора (разведение 1+100),
тщательно перемешать пипетированием, выдержать 30 мин при (20-25 оС).
2. Внесение в лунки планшета: по 0,1 мл положительной, пороговой и
отрицательной контрольных и подготовленных образцов исследуемых сывороток и
инкубация (30 мин, +37оС).
3. Промывка лунок планшета.
4. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл конъюгата и инкубация (30 мин, +37оС).
5. Промывка лунок планшета.
6. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл субстратного раствора и инкубация (15
мин, +37оС).
7. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл стоп-реагента.
8. Измерение оптической плотности (450 нм), интерпретация результатов.
ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
Специфичность набора относительно набора SERION ELISA classic Herpes Simplex
Virus 1+2 IgM (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%.
Чувствительность набора относительно набора SERION ELISA classic Herpes
Simplex Virus 1+2 IgM (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%.
Подготовка исследуемых образцов: по 5 мкл каждого образца смешать с 500 мкл
приготовленного ББР (см. п. 7.2)
(разведение 1+100), тщательно перемешать
пипетированием. Выдержите в течение 30 мин при комнатной температуре (20-25оС) или
в течение ночи при температуре 2-8оС, тщательно перемешать пипетированием.
Оценку результатов анализа проводят при следующих условиях:
Значение ОПК+(ср) - не ниже 1,0. Рассчитывается как среднее из показателей
оптической плотности в двух лунках (ОПА1 + ОПВ1)/2.
Значение ОПК-(ср) - не выше 0,15. Рассчитывается как среднее из показателей
оптической плотности в двух лунках (ОПС1 + ОПD1)/2.
Значение ОП к пор(ср) - не ниже 0,2. Рассчитывается как среднее из показателей
оптической плотности в двух лунках (ОПЕ1 + ОПF1)/2.
При несоблюдении этих условий анализ необходимо выполнить заново.
Интерпретация результатов анализа. Результат анализа исследуемых образцов
следует считать:
положительным при ОП выше 1,1х ОПпор (исследуемый образец содержит IgM к
ВПГ-1),
отрицательным при ОП ниже 0,9х ОПпор (исследуемый образец не содержит IgM к
ВПГ-1).
Результаты при ОП в диапазоне 0,9хОПпор – 1,1хОПпор являются сомнительными, в
этом случае необходимо провести повторное исследование вновь полученных
сывороток. При повторении результата рекомендуется получить второй образец через
10-14 дней.
Длина волны измерения: 450 нм.
Субстрат: 3,3`,5,5`-тетраметилбензидин (ТМБ).
Условия инкубации (время, tоС) :
- 1-я инкубация 30 мин при +37оС;
- 2-я инкубация 30 мин при +37оС;
- инкубация с ТМБ 15 мин при +370С.
Время проведения анализа: 1 час 20 минут.
Объем пробы: 50 мкл.
Количество анализируемой сыворотки: 10 мкл (для анализа сыворотка разводится в
101 раз и анализируется 100 мкл разведенной сыворотки).
Количество анализов: набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контрольные
образцы.
Планшеты: стрипованные, разделяющиеся на отдельные лунки.
Срок годности набора: 12 месяцев.
Все реагенты набора представлены в жидком виде.