НОВОСИБИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ АГРОНОМИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА БИОПРЕПАРАТОВ, ЭНТОМОФАГОВ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ Методические указания к выполнению лабораторно-практических занятий и курсовой работы Новосибирск 2012 УДК 632.937 ББК 44 я73 Б63 Кафедра энтомологии и биологической защиты растений Составители: Т. В. Шпатова, канд. с.-х. наук, доц.; М. В. Штерншис, д‑р биол. наук, проф. Рецензент д‑р с.-х. наук, Р. Р. Галеев Технологии производства биопрепаратов, энтомофагов и биологически активных веществ: методические указания к лабораторнопрактическим занятиям и выполнению курсовой работы/Новосиб. гос. агар. ун-т, агроном. фак.; сост.: Т. В. Шпатова, М. В. Штерншис –Новосибирск, 2012.– 42 c. Методические указания предназначены для студентов‑магистрантов 2‑го года агрономического факультета, обучающихся по направлению 110400.68 и 110200.68. Утверждены и рекомендованы к изданию научно – методическим советом агрономического факультета (протокол № 2 от 24.01. 2012 г.). © Новосибирский государственный аграрный университет, 2012 ВВЕДЕНИЕ Технологии производства биопрепаратов, энтомофагов и биологически активных веществ – прогрессивная и наукоемкая отрасль современной биотехнологии. Проблему защиты растений от вредных организмов на современном этапе развития человечества можно решить созданием и применением биологических средств защиты растений (биопрепаратов, энтомофагов и биологически активных веществ), используя методы микробиологии, биохимии и технической энтомологии. Основу биологических средств защиты растений от вредителей, болезней и сорняков составляют существующие в природе микроорганизмы и насекомые, а также вещества, выделяемые ими. Их применение не наносит ущерба окружающей среде. Многолетний опыт применения биологических средств защиты растений, полученных при помощи современных технологий производства, свидетельствует не только о высокой экологической безопасности этих средств, но и экономической эффективности, приближающейся, а иногда и превышающей соответствующие показатели при использовании химических пестицидов. Магистр сельского хозяйства обязан хорошо ориентироваться в многообразии биологических средств защиты растений и технологиях их получения. Знать методы получения и применения биопрепаратов для защиты растений, а также регуляторов роста растений, феромонов насекомых и их аналогов, энтомофагов. Уметь составлять технологические схемы получения биопрепаратов и массового производства энтомофагов, клещей и БАВ. Следует ясно представлять себе последствия принимаемого решения. Для осознанного выбора используемого средства биологической защиты растений необходимо четкое знание его основы и современных технологий производства. Масшта3 бы использования данных средств зависят от защищаемой культуры, видового состава вредителей, возбудителей болезней и сорняков, условий окружающей среды. Расширение сферы применения средств биологической защиты растений жизненно необходимо, что, безусловно, требует знания современных технологий их получения. Написание курсовой работы предполагает обучение магистрантов творческому подходу к обобщению накопленных знаний по этой дисциплине, квалифицированному сбору и обработке данных, представленных в отечественной и зарубежной литературе, Цель – формирование знаний и умений по производству биологических средств защиты растений с использованием методов микробиологии и технической энтомологии. По окончании прохождения курса дисциплины магистрант предоставляет курсовую работу. Занятие 1 ОСОБЕННОСТИ НАРАБОТКИ ВИРУСНЫХ ПРЕПАРАТОВ В биологической защите растений используются биопрепараты, производство которых осуществляется биотехнологическими методами в условиях крупных и мелкотоннажных производств. Так, препараты против вредителей сельскохозяйственных (овощных, плодовых, лесных) культур создаются на основе энтомопатогенов, являющихся элементами природного биоценоза. В зависимости от природы их разделяют на вирусные, микроспоридиальные, бактериальные, грибные и др. Основой вирусных энтомопатогенных препаратов (виринов) служат, как правило, бакуловирусы (сем. Baculoviride). По морфологии включений бакуловирусы делят на две подгруппы: А и В. Подгруппа А – возбудите4 ли ядерных полиэдрозов. Представляют собой полиэдры (многогранники), внутри которых расположены вирионы. Подгруппа В – возбудители гранулезов. Каждый вирион заключен в белковый матрикс, овальной формы который называется гранулой. Вирусные энтомопатогенные препараты пока производятся в малых количествах. Это связано с тем, что вирусы способны размножаться только на живых насекомых (сырьевые культуры) или в культуре клеток, а этот процесс очень трудоемок. Высокая специфичность вирусов обуславливает их действие только на одного вредителя, что отражается в названии вирусных препаратов. Вирусные препараты для защиты от болезней растений включают Пентафаг на основе бактериофагов и вирусные вакцины. Цель: Познакомиться с вирусами, являющимися основой биопрепаратов, закрепить теоретический материал. Основные термины: Бактериофаг – вирус, хозяином которого является бактерия. Белковый матрикс – объемное белковое образование, в которое погружены вирионы бакуловирусов. Биопестицид – это биопрепарат, средство подавления численности вредителей, фитопатогенов и сорняков, активным ингредиентом которого являются агенты биологической природы. Вирин – обозначение вирусных инсектицидных препаратов Вирион – вирусная частица Культивирование – выращивание микроорганизмов или отдельных клеток растений и животных. Учебные материалы и оборудование: учебные пособия «Биопрепараты в защите растений», «Биотехнология 5 в защите растений», «Сельскохозяйственная биотехнология» «Список пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации» за текущий год, «Патогены насекомых». План занятия: На основании учебных пособий, материалов лекции и «Списка разрешенных препаратов…» составить схемы получения вирусных препаратов, и представить в виде блок – схемы. 1.Представить блок – схему основных этапов получения вирусного энтомопатогенного препарата, а также привести подробное описание технологического процесса наработки выбранного препарата (индивидуальное задание для каждого магистранта). 2.Изучить особенности получения и производства бактериофагов на примере препарата Пентафаг. Представить этапы производства в виде блок – схемы. 3.Ответить на контрольные вопросы. 4.Самостоятельно подготовить по полученному индивидуальному заданию презентацию в программе Power Point (не более 10 слайдов) по особенностям производства конкретного препарата. 5.На следующем занятии выступить с сообщением по подготовленной презентации. ´ Контрольные вопросы: 1.Назовите биопрепараты на основе вируса полиэдроза и гранулеза. 2.Перечислите препараты, которые активно применяться в сельском хозяйстве на современном этапе. 3.Укажите особенности при наработке энтомопатогенных вирусных препаратов, а также проведите сравнение с получением бактериофагов, отметьте отличия в их производстве. 6 Занятие 2 ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ПОДАВЛЕНИЯ ВРЕДИТЕЛЕЙ И БОЛЕЗНЕЙ РАСТЕНИЙ Производство микробиологических препаратов осуществляется в рамках биотехнологического процесса. Активным началом в биотехнологических процессах является биологический агент. Самым традиционным биологическим агентом является микробная клетка. Особенности биопрепаратов на основе живых организмов связаны с природой организма – продуцента. Основой бактериальных энтомопатогенных препаратов является бактерия Bacillus thuringiensis, B. popillae, а препаратов для подавлении болезней растений – бактерии pода Pseudomonas и Bacillus subtilis,. Для получения бактериальных препаратов микроорганизмы культивируют на питательных средах (ПС) глубинным способом. Для осуществления процесса производства биологического препарата необходима технологическая карта. При проектировании технологических карт производства биологических агентов для защиты растений от вредных организмов требуется знание схемы производства и необходимого для этого оборудования, сырья, инструментов, а также техники безопасности. Биологические препараты, получаемые методами биотехнологии, должны отвечать определенным требованиям, т. е. быть стандартизованы. Стандартизацию и оценку качества биопрепаратов проводят по количеству действующего начала (споры, включения, клетки, метаболиты) в единице массы или объема и по биологической активности. Цель: ознакомиться с особенностями при производстве бактериальных биопрепаратов для защиты растений, а также изучить основные требования при составлении технологической карты производства биопрепарата. 7 Основные термины: Биолаборатория – подразделение, в составе которого имеются здания или помещения, различное оборудование, приборы, инструментарий для производства биопрепаратов. Биологическая активность препарата – ответная реакция тест-объекта на действие биопрепарата, выраженная в единицах активности. Биологический агент (агент биологической защиты)полезный организм, используемый в биологической защите растений от вредных видов, основа биопрепаратов. Параспоральные белковые включения – кристаллы эндотоксина, продуцируемые бактериальной клеткой одновременно с образованием спор. Препаративная форма – готовый препарат, в состав которого входят действующее начало, и вспомогательные вещества (наполнители, прилипатели, и пр.) Титр – количество жизнеспособных спор (клеток) в единице массы или объема (1 мл или 1 г) препарата, один из показателей качества биопрепарата. Технологическая карта производства биологических средств защиты растений – подробный регламент получения биопрепарата. Энтомопатоген – организм, вызывающий заболевания насекомых. Учебные материалы и оборудование: методические указания по производству биопрепаратов, учебные пособия «Биопрепараты в защите растений», «Биотехнология в защите растений», «Сельскохозяйственная биотехнология», «Биотехнология», «Патогены насекомых». технические условия (ТУ), государственные стандарты (ГОСТы), Микроскопы, камеры Горяева, пипетки, спирт, суспензия биопрепарата (бактериального). 8 План занятия: 1.На основании учебных пособий, материалов лекции и «Списка разрешенных препаратов…» составить схему получения бактериальных препаратов. 2.Представить блок – схему основных этапов получения бактериального препарата, а также привести подробное описание технологического процесса наработки выбранного препарата используемого против вредителей или болезней растений (индивидуальное задание для каждого магистранта). 3.Составить технологическую карту производства выбранного препарата по следующей схеме: – характеристика конечного продукта производства (указать особенности биопрепарата), которые отличают его от других средств. – технологическая схема производства. (перечислить стадии технологического процесса, представить блок-схему процесса производства биосредства). – сырье и материалы – оборудование и приборы – описание технологического процесса дать подробное описание стадий технологического процесса. – контроль качества продукта и стандартизация (назвать показатели и их значения, по которым оценивается качество производимого продукта: для биопрепаратов – титр, биологическая активность, указать методы оценки качества биологического средства). – техника безопасности, пожарная безопасность, производственная санитария Подсчитать титр бактериального препарата (лепидоцид или бактофит) путем подсчета выросших колоний после посева на ПС. 5.Подсчитать титр приготовленной суспензии (бактериального препарата) при помощи камеры Горяева. 9 6.Ответить на контрольные вопросы. 7.Самостоятельно подготовить по полученному индивидуальному заданию презентацию в программе Power Point (не более 5–7 слайдов) по особенностям производства конкретного препарата. 8.На следующем занятии выступить с сообщением по подготовленной презентации. Рис. 1. Схема технологического ­процесса п­ олучения бактериальных биопрепаратов ´ Контрольные вопросы: 1.Укажите особенности при получении бактериальных препаратов для защиты растений. 2.Дайте характеристику глубинному способу получения биопрепарата. 3.Приведите основные принципы, которые требуются для составления технологической карты производства биопрепарата. 4.Что такое стандартизация и какие показатели характеризуют качество биопрепаратов? 10 Занятие 3 ОСОБЕННОСТИ НАРАБОТКИ ГРИБНЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ Грибные энтомопатогенные препараты производиться на основе представителей отделов Zygomycota и Deuteromycota, а препараты для подавления болезней растений – на основе микроорганизмов – антагонистов возбудителей болезней растений (например, грибы рода Trichoderma) и микроорганизмов – гиперпаразитов фитопатогенов (например, грибы рода Ampelomyces). Препараты на основе грибов, применяемые для снижения численности сорняков называют микогербицидами. Так, для получения грибных препаратов микроорганизмы культивируют на питательных средах (ПС) поверхностным, глубинным и глубинно – поверхностным способом. Грибные препараты, должны отвечать определенным требованиям, т. е. быть стандартизованы. Стандартизацию и оценку качества биопрепаратов проводят по количеству действующего начала (споры, включения, клетки, метаболиты) в единице массы или объема и по биологической активности. Цель: ознакомиться с особенностями при производстве бактериальных биопрепаратов для защиты растений и составить схему получения биопрепарата. Основные термины: Антагонизм – форма взаимоотношений между организмами, при которой один вид подавляет жизнедеятельность другого или убивает. Гиперпаразитизм – один из видов паразитизма, характеризующейся паразитированием одного паразита (гиперпаразит)в другом. В этом случае гиперпаразит называется паразитом 2‑го порядка, а его хозяин – первого. Микозы – заболевания животных (насекомых, грызунов, клещей), вызываемые грибами. 11 Штамм – генетически однородная культура микроорганизма, наследственная однородность которой поддерживается отбором по специфическим признакам. Учебные материалы и оборудование: методические указания по производству биопрепаратов, учебные пособия «Биопрепараты в защите растений», «Биотехнология в защите растений», «Сельскохозяйственная биотехнология», «Биотехнология», «Патогены насекомых». Микроскопы, камеры Горяева, пипетки, спирт, суспензия биопрепарата (грибного). План занятия: 1.На основании учебных пособий, материалов лекции и «Списка разрешенных препаратов…» составить схему получения грибных препаратов. 2.Представить блок – схему основных этапов получения грибного препарата, а также привести подробное описание технологического процесса наработки выбранного препарата используемого против вредителей или болезней растений (индивидуальное задание для каждого магистранта). 3.Подсчитать титр грибного препарата (триходермин) путем подсчета выросших колоний после посева на ПС. 4.Подсчитать титр приготовленной суспензии (грибного препарата) при помощи камеры Горяева. 5.Освоить различные методики по посеву и культивированию энтомопатогенных грибов на примере Beaveria bassiana, Lecanicillium lecanii, Metarhizium anisopliae. Изучить особенности по получению чистых культур грибов – антагонистов фитопатогенов на примере гриба Trichoderma viride. 6.На основе учебных материалов законспектировать основные особенности получения микогербицидов. 7.Ответить на контрольные вопросы. 8.Самостоятельно подготовить по полученному ин12 дивидуальному заданию презентацию в программе Power Point (не более 5–7 слайдов) по особенностям производства конкретного препарата. 9.На следующем занятии выступить с сообщением по подготовленной презентации. ´Контрольные вопросы: 1.Назовите преимущества и недостатки метода определения титра биопрепаратов с помощью камеры Горяева. 2.Роль тест – объектов в стандартизации препаратов. 3.Назовите особенности каждого из способов производства грибных препаратов, укажите отличия. Занятие 4 ОСОБЕННОСТИ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ НЕМАТОД И МИКРОСПОРИДИЙ ДЛЯ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ Препараты на основе микроспоридий и энтомопатогенные нематод по особееностям получения близки к производству вирусных препаратов. Производяться на основе представителей нематод из семейства Steinermatidae, а препараты на основе микроспоридий – родов Variomorpha, Nosema и других. Так, для получения препаратов на основе микроспоридий их культивируют только на живых насекомых). Массовое производство препаратов на основе энтомопатогенных нематод в комплексе с патогенными бактериями осуществляется в настоящее время на личинках насекомых и питательных средах (ПС). Наиболее часто хозяином для производства нематод являются гусеницы пчелиной огневки. Препаративная форма, например пропитанная суспензией нематод поролоновая губка. Возможно, культивирование энтомопатогенных нематод совместно с их бактериаль13 ных симбионтом на жидких ПС, а также с использованием инертных носителей. Известно, что микроспоридии поражают более 200 видов насекомых и являются внутриклеточными облигатными паразитами. Вызывают длительные хронические заболевания, с частыми эпизооотиями, как мправило оканчивающимися гибелью насекомых. Однако, производство биопрепаратов на их основе практически не развито, так как микроспоридии могут развиваться только в живых организмах. Таким образом, из-за ряда ограничений связанных с биологией микроспоридий производство биопрепаратов на их основе достаточно трудоемко и дорого. Цель: ознакомиться с особенностями при производстве бактериальных биопрепаратов для защиты растений, а также освоить различные методы определения биологической активности и титра биопрепаратов. Основные термины: Микроспоридии – облигатные паразиты животных (в том числе насекомых) относящиеся к царству простейших. Нематоды – круглые черви, паразитирующие на других животных или ведущие сапрофитный образ жизни. Симбиоз – совместное существование двух или нескольких разных организмов, приносящих им взаимную выгоду. Учебные материалы и оборудование: методические указания по производству биопрепаратов, учебные пособия «Биопрепараты в защите растений», «Биотехнология в защите растений», «Сельскохозяйственная биотехнология», «Биотехнология», «Патогены насекомых». План занятия: 1.На основании учебных пособий, материалов лекции, материалов различных литературных источников составить схемы получения препаратов на основе энтомопатогенных нематод в зависимости от способа. 14 2.Представить блок – схему основных этапов производства препаратов на основе микроспоридий, а также привести описание основных этапов наработкимикроспоридий в зависимости от вида (индивидуальное задание для каждого магистранта). 3.Описать современные формы нематодно – бактериальных препаратов. 4.Законспектировать основные этапы получения препаратов на основе энтомопатогенных нематод на примере немабакт и энтонем – F. 5.Ответить на контрольные вопросы. 6.Самостоятельно подготовить по полученному индивидуальному заданию презентацию в программе Power Point (не более 5–7 слайдов) по особенностям производства конкретного препарата. 7.На следующем занятии выступить с сообщением по подготовленной презентации. ´Контрольные вопросы: 1.Каким методом целесообразно получать препараты на основе энтомопатогенных нематод и почему? 2.Назовите особенности каждого из способов производства препаратов на основе энтомопатогенных нематод, укажите отличия. 3.Укажите современные препаративные формы нематодно – бактериальных препаратов. 4.Назовите основные трудности при наработке микроспоридий. 15 Занятие 5 ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ УДОБРЕНИЙ Некоторые бактерии (азоспириллы, клубеньковые бактерии) способны в ассоциации с корнями фиксировать атмосферный азот. К этой группе микроорганизмов проявляется повышенный интерес, так как они перспективны для создания бактериальных удобрений. В плане защите растений применение бактериальных удобрений снижает поражение растений различными болезнями. Интродукция в почву (нитрагенизация) обеспечивает формирование активного симбиотического аппарата и существенно повышает урожай сельскохозяйственных культур. В последнее время для повышения эффективности бобово – ризобиального комплекса используют популяции микроорганизмов, состоящие из ризобий и ассоциативных азотфиксаторов. Наиболее широко освоены методы культивирования азотофиксирующих бактерий и получения биопрепаратов на их основе. Цель: ознакомление с технологией производства и получения бактериальных удобрений, зоогумуса и переработки отходов сельскохозяйственного производства. Основные термины: Ассоциативные азотфиксаторы – бактерии, обитающие в ризоплане небобовых растений. Инокуляция – процесс внесения посевной культуры в стерильную питательную среду. Контаминанты – объекты, являющиеся посторонними примесями. Ризобии – клубеньковые бактерии, живущие в симбиозе с бобовыми растениями 16 Учебные материалы и оборудование: учебные пособия «Биопрепараты в защите растений», «Биотехнология в защите растений», «Сельскохозяйственная биотехнология», «Биотехнология», «Биотехнология переработки органических отходов и экология». План занятия: 1.На основании учебных пособий, материалов лекции, материалов различных литературных источников составить схемы получения бактериальных удобрений в зависимости от способа. 2.Представить блок – схему основных этапов получения выбранного препарата, а также привести описание основных этапов наработки (индивидуальное задание для каждого магистранта). 3.Ответить на контрольные вопросы ´Контрольные вопросы: 1.Какова роль бактериальных удобрений в защите растений? 2.Назовите особенности каждого из способов производства бактериальных удобрений, укажите отличия. 3.Перечислите основные этапы технологии получения препаратов, на основе азотофиксирующих бактерий? Занятие 6 ПРОИЗВОДСТВО АНТИБИОТИКОВ, БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ НАСЕКОМЫХ И ИХ СИНТЕТИЧЕСКИХ АНАЛОГОВ ДЛЯ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ В защите растений от возбудителей болезней растений и вызываемых ими заболеваний также применяют препараты на основе антибиотиков. Их воздействие связано с подавлением как развития возбудителей болезней растений, а также способностью к нейтрализации токсинов и фермен17 тов, выделяемых ими. Антибиотики по своей природе являются биологически активными веществами и оказывают более сильное влияние, на растения повышая устойчивость к заболеваниям, стимулируя рост растений и способствуя повышению урожая. Антибиотики обладают высокой активностью по отношению к ним чувствительным организмам и выраженной избирательностью действия. Кроме того, антибиотики должны обладать способностью проникать в ткани растения и перемещаться по нему. К биологически активным веществам (БАВ) относят также БАВ насекомых, которые влияют на гормональную активность насекомых. Регуляторы роста и развития насекомых (РРР) делятся на три группы: аналоги ювенильных гормонов (ювеноиды), ингибиторы синтеза хитина, а также феромоны насекомых. Они способны вызывать у особей своего вида изменения в развитии и поведении. Их назначение для защиты растений разнообразно, например для обнаружения вредных видов, для надзора за вредителями, для сигнализации сроков проведения защитных мероприятий, для непосредственного и снижения численности фитофагов. Цель: ознакомиться с особенностями производства антибиотиков и биологически активных веществ насекомых, их синтетических аналогов и возможности использования в защите растений. Основные термины: Антибиотики – специфические продукты жизнедеятельности организмов, обладающие высокой физиологической активностью по отношению к определенным группам микроорганизмов и избирательно задерживают их рост или полностью подавляют развитие. Биологически активные вещества – продукты жизнедеятельности живых организмов разнообразной химической природы, обладающие в очень малых концентрациях активностью по отношению к другим организмам. 18 Ингибиторы синтеза хитина – соединения, блокирующие синтез хитина насекомых во время линек, обладающие также стерилизующим действием на имаго. РРР – регуляторы роста и развития насекомых (ювеноиды, ингибиторы синтеза хитина, феромоны) Ювенильный гормон – тип гормонов, присущий насекомым и другим животным на определенных фазах развития. Ювеноиды – синтетические вещества, обладающие характером действия ювенильного гормона. Учебные материалы и оборудование: методические указания по производству биопрепаратов, учебные пособия «Биопрепараты в защите растений», «Биотехнология в защите растений», «Сельскохозяйственная биотехнология», «Биотехнология», «Патогены насекомых». Чистые культуры фитопатогенных грибов, микроорганизмы – антагонисты возбудителей заболеваний, антибиотики. Микроскопы, чашки Петри, предметные и покровные стекла. План занятия: 1.Описать наиболее известные методы определения антагонистической и антибиотической активности штамма – продуцента на тест – объекте (фитопатогены) 2.Описать метод определения антибиотической активности препарата (метод лунок). 3.Провести закладку эксперимента с использованием антибиотика (например, фитобактериомицина, нистатина). Оценить полученные результаты по радиусу зоны ингибирования фитопатогена (Botrytis cinerea, Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum) 4.Изучить на основании учебных материалов, материалов лекций, вспомогательных источников как проводят идентификацию феромонов. 5.Описать основные методы получения их синтетических аналогов. 19 6.Законспектировать особенности производства ювеноидов, ингибиторов синтеза хитина. 7.Ответить на контрольные вопросы. 8.Самостоятельно подготовить по полученному индивидуальному заданию презентацию в программе Power Point (не более 5–7 слайдов) по особенностям производства конкретного выбранного регулятора роста и развития насекомого. 9.На следующем занятии выступить с сообщением по подготовленной презентации. ´Контрольные вопросы: 1.Какими методами проводят определение антибиотической и антагонистической активности антибиотиков? 2.Назовите основные свойства, которыми должны обладать антибиотики, применяемые в сельском хозяйстве. 3.Укажите, как делаться регуляторы роста и развития насекомых, отличия групп между собой. 4.Назовите основные методы, используемые при получении синтетических аналогов феромонов и других РРР. Занятие 7 ПОЛУЧЕНИЕ БИОПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ МИКРОБНЫХ ТОКСИНОВ, ПРИНЦИПЫ РАЗВЕДЕНИЯ НАСЕКОМЫХ И КЛЕЩЕЙ В защите растений от вредителей, возбудителей болезней растений и вызываемых ими заболеваний возможно применение препараты на основе природных микробных метаболитов. В основном, препараты на основе таких метаболитов получены при культивировании энтомопатогенных грибов, например рода Lecanicillium. При культивировании энтомопатогенных грибов токсины накапливаются в основном в мицелии гриба. Кроме того, для защиты растений 20 представляют интерес метаболиты, продуцируемые актиномицетами, например Streptomyces. Достоинства использования препаратов на их основе состоит в высокой активности, быстродействии малой вероятности возникновения устойчивости у целевых объектов. Срок хранения данных биопрепаратов выше, чем препаратов на основе пропагул. Однако, помимо получения биопрепаратов для подавления вредителей и болезней в защите растений важно производство энтомофагов и акарифагов для контроля численности вредителей. Насекомых часто используют как субстрат для наработки вирусов и микроспоридий, а также как тест – объекты для оценки качества полученных партий биопрепаратов. Техническая энтомология решает ряд наиболее важных задач, связанных с воспроизводствами культур насекомых с определенными человеком требованиями. Цель: ознакомиться с основами производства биопрепаратов на основе микробных токсинов, а также освоить принципы разведения насекомых и клещей в сфере защиты растений. Основные термины: Авермектины – продукты жизнедеятельности актиномицета, Streptomyces avermitilis, обладающие инсектицидной, акарицидной и нематицидно активностью. Акарифаг – организм, потребляющий в пищу клещей. Линия – потомство, полученное от одной пары особей путем длительного целенаправленного отбора и теснородственного разведения. Персистентность – устойчивость организмов к неблагоприятным абиотическим и биотическим факторам. Стартовая колония – выборка особей природной популяции для создания искусственной. Технобиоценоз – жизненная система искусственной популяции, упрощенная по пищевым связям, стабильная 21 по условиям существования и направленно контролируемая экспериментатором. Техническая энтомология- это создание и воспроизводство культур насекомых как искусственных популяцийс заранее заданными свойствами. Эпизоотии – массовые заболевания, приводящие к гибели животных (насекомых, клещей, грызунов). Энтомофаг – вид, потребляющий в пищу насекомых (хищник или паразит). Учебные материалы и оборудование: методические указания по производству биопрепаратов, учебные пособия «Биопрепараты в защите растений», «Биотехнология в защите растений», «Сельскохозяйственная биотехнология», «Биотехнология», «Патогены насекомых». План занятия: 1.Описать особенности получения препаратов на основе микробных токсинов, выделяемых энтомопатогенными грибами. 2.Составить блок-схему производства данных препаратов. 3.Изучить на основании учебных материалов, материалов лекций, вспомогательных источников направления технической энтомологии, представить в виде схемы. 4.Описать основные этапы культивирования насекомых и клещей. 5.Законспектировать особенности влияния абиотических и биотических факторов на насекомых при их разведении. Представить в виде блок – схемы с пояснениями. Подготовить сообщение в устной форме. 6.Представить принцип триотрофа при разведении насекомых и клещей в виде схеме. 7.Ответить на контрольные вопросы. 8.Самостоятельно подготовить по полученному индивидуальному заданию презентацию в программе Power 22 Point (не более 5–7 слайдов) по особенностям производства конкретного выбранного регулятора роста и развития насекомого. ´Контрольные вопросы: 1.Каковы особенности получения биопрепаратов на основе микробных токсинов? 2.Назовите основные свойства, которыми обладаю данные биопрепараты. 3.Укажите основные направления технической энтомологии. 4.Назовите этапы культивирования насекомых и клещей. 5.В чем состоит влияние абиотических и биотических факторов при их разведении? Перечислите основные абиотические и биотические факторы. 6.Назовите уровни культивирования искусственных популяций. 7.Принцип разведения энтомофагов. Занятие 8 СТАНДАРТИЗАЦИЯ И ТИПИЗАЦИЯ КУЛЬТУРЫ НАСЕКОМОГО. МАССОВОЕ РАЗВЕДЕНИЕ НАСЕКОМЫХ НА ПРИМЕРЕ ТРИХОГРАММЫ. Наиболее значимы в защите растений от вредителей искусственные популяции насекомых клещей. После комплектования стартовой колонии замыкают жизненный цикл вида в условиях лаборатории. Возникает лабораторная культура насекомых. Далее необходимо провести стандартизацию культуры, придать ей определенную стабильность в оптимальных условиях технобиоценоза. Основные показатели, такие как развитие насекомых, смертность, плодовитость в течение определенного времени стабилизируют. Для более успешного прохождения периода адаптации культуры 23 насекомых и ее стабилизации использую методы математического моделирования. В дальнейшем наступает период типизации культуры в зависимости от практического назначения. Для этого используют два пути – генетический с формированием стандартных генетических линий и экологический с созданием культур, стандартных по биологическим показателям. Биологические методы защиты растений от вредных насекомых требуют разработки способов накопления энтомофагов (на примере хищников). Рассмотрим практическое применение принципов технической энтомологии. Для подавления вредных насекомых в открытом и защищенном грунте используют выпуски искусственно разводимых энтомофагов. Конечной продукцией являются работающие культуры. Цель: ознакомление с основными типами культур насекомых, а также особенностями массового разведения насекомых. Основные термины: Культуры насекомых – искусственно созданная популяция, которая прошла в лаборатории не менее одного жизненного цикла. Стандартизация культуры насекомых – достижение насекомыми определенных, стабильно сохраняющихся биологических и этологических признаков в оптимальных условиях технобиоценоза. Типизированная культура – определение типа культуры насекомых или клещей в зависимости от практической цели. Технические условия – утвержденный документ, согласно которому производится средство защиты растений. Технологическая карта производства биологических средств защиты растений – подробный регламент получения биопрепарата или энтомо- и акарифага. 24 Учебные материалы и оборудование: методические указания по производству биопрепаратов, учебные пособия «Биопрепараты в защите растений», «Биотехнология в защите растений», «Сельскохозяйственная биотехнология», «Биотехнология», «Патогены насекомых», «Технологический регламент на производство галлицы афидимизы». План занятия: 1.Указать основные признаки, по которым проводиться стандартизация культур насекомых. 2.Составить блок-схему по данным признакам. Привести примеры в зависимости от того, кем является насекомое – хищником или паразитом. 3.Описать типы культур насекомых в зависимости от целевого назначения. 4.Изучить на основании учебных материалов, материалов лекций, вспомогательных источников основные признаки лабораторной (промышленной культуры) насекомого на примере галлицы – афидимизы. 5.Представить в виде блок – схемы с пояснениями. Подготовить сообщение в устной форме. 6.Познакомиться с технологией наработки энтомофагов на примере трихограммы в массовом масштабе (изучить схему разведения данного энтомофага). 7.Решить задачи по оптимизации условий разведения насекомых (карточки). þ Для сравнительной оценки искусственных питательных сред (ИПС) строят таблицы выживания, где указывают основные биологические показатели популяции, по которым рассчитывают обобщенный показатель – критерий качества (Y) по формуле: Y = α1 ∙ α2 ∙ П, где α1– отрождение личинок, %; α2 – количество самок, %; П – плодовитость (яиц/самку), шт. 25 Эти показатели учитывают также при стандартизации и контроле качества культур насекомых. 8. Ответить на контрольные вопросы. ´Контрольные вопросы: 1.Каковы основные признаки, по которым проводят стандартизацию культур насекомых? Приведите примеры в зависимости от того, кем является насекомое, хищник или паразит. 2.Назовите уровни культивирования искусственных популяций. 3.Какие типы культур насекомых вы знаете? Приведите примеры. 4.Назовите этапы культивирования насекомых и клещей. 5.Укажите основные признаки лабораторной культуры насекомого. Занятие 9 ОСОБЕННОСТИ МАССОВОГО РАЗВЕДЕНИЯ ХИЩНИКОВ При разведении хищников существую свои особенности, связанные с элементами технологического процесса: подбор растения для питания фитофага (на пример тли, яйца зерновой моли), подбор хозяина для наиболее успешного питания и размножения энтомофага (златоглазки, циклонеда, периллюс и др.). При практическом применении энтомофагов возникает ряд проблем: разработка способовмассового разведения, а также подбор методов длительного хранения, позволяющие накапливать живой материал для последующего использования по мере необходимости. Цель: ознакомление с особенностями массового разведения хищных насекомых. 26 Основные термины: Хищник – организм, который поедает другой организм (жертву), обычно убивает ее. Учебные материалы и оборудование: методические указания по производству биопрепаратов, учебные пособия «Биопрепараты в защите растений», «Биотехнология в защите растений», «Сельскохозяйственная биотехнология», «Биотехнология», «Патогены насекомых», «Руководства по разведению златоглазок (различные виды) и кокценеллид». План занятия: 1.Изучить на основании учебных материалов, материалов лекций, вспомогательных источников особенности при разведении хищников примере златоглазок (различные виды), циклонеда, периллюс и др. 2.Составить блок-схему разведения энтомофага в зависимости от полученного задания. Подготовить сообщение в устной форме. 3.Ответить на контрольные вопросы. 4.Самостоятельно подготовить по полученному индивидуальному заданию презентацию в программе Power Point (не более 5–7 слайдов) по особенностям производства конкретного выбранного энтомофага. ´Контрольные вопросы: 1.Каковы особенности при разведении хищников? Приведите примеры 2.Укажите основные этапы при разведении златоглазки обыкновенной. 3.Назовите отличия при производстве циклонеды, способы ее применения. 4.Хищник – периллюс, основы наработки и применения. 27 Занятие 10 МЕТОДИКИ МАССОВОГО ПРОИЗВОДСТВА КЛЕЩЕЙ И РАЗВЕДЕНИЯ ГЕРБИФАГОВ При разведении хищных клещей существую свои особенности, связанные с элементами технологического процесса: подбор растения для питания фитофага – клеща (например, паутинный клещ), подбор хозяина для наиболее успешного питания и размножения энтомофага (фитосейулюс, амблисейулюс и др.). Для многих видов разработаны регламенты их наработки и применения на различных культурах, выращиваемых в условиях закрытого грунта. К настоящему времени накоплены определенные знания по использованию гербифагов для успешного контроля численности сорных растений. Однако, их успешное разведение и применение связано со значительными материальными затратами и времени, что требует дальнейшего совершенствования технологии массового разведения. Цель: ознакомление с особенностями массового разведения хищных насекомых. Основные термины: Акарифаг – организм, питающийся клещами. Гербифаг – насекомое, клещ или другой оргинизм, питающийся конкретными видами сорняков. Учебные материалы и оборудование: методические указания по производству биопрепаратов, учебные пособия «Энтомофаги в защите растений», «Биотехнология в защите растений», «Сельскохозяйственная биотехнология», «Биотехнология», «Руководства по разведению фитосейулюса, амблисейулюса». План занятия: 1.Изучить на основании учебных материалов, материалов лекций, вспомогательных источников особенности при 28 разведении акарифагов на примере фитосейулюса, амблисейулюса. 2.Составить блок-схему разведения акарифага в зависимости от полученного задания. Подготовить сообщение в устной форме. 3.Определить особенности наработки гербифагов на примере мухи – фитомизы. Составить блок – схему. 4.Ответить на контрольные вопросы. 5.Самостоятельно подготовить по полученному индивидуальному заданию презентацию в программе Power Point (не более 5–7 слайдов) по особенностям производства конкретного выбранного энтомофага. ´Контрольные вопросы: 1.Каковы особенности при разведении акарифагов? Приведите примеры 2.Укажите основные этапы при разведении фитосейулюса, амблисейулюса. 3.Укажите особенности наработки гербифагов 29 КУРСОВАЯ РАБОТА В рамках курсовой работы представляется аналитический обзор литературы, кроме того, приводится технологическая карта производства биологического средства (биопрепарат, энтомофаг, гербифаг). В рамках курсовой работы и раскрывается тема работы с иллюстрациями и библиографическим списком. Структура курсовой работы Курсовая работа включает следующие разделы: – титульный лист; – реферат; – содержание; – введение; – аналитический обзор литературы; – основная часть работы; – заключение (выводы); – список литературы. Курсовая работа должен быть выполнена и сдана до экзамена по дисциплине технологии производства биопрепаратов, энтомофагов и биологически активных веществ. При оформлении работы необходимо руководствоваться правилами, изложенными в соответствующих методических указаниях. Объем курсовой работы – 25–30 страниц. 30 Форма титульного листа НОВОСИБИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ АГРОНОМИЧЕСКИЙФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА ЭНТОМОЛОГИИИ И БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ КУРСОВАЯ РАБОТА ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ КАРТА (получения, наработки, если выбран препарат) либо (разведения, если выбран энтомофаг) Выполнил: (Фамилия, И. О., группа) Преподаватель: (Фамилия, И. О.) Новосибирск 2012 31 Реферат Заглавием служит слово «Реферат», написанное на отдельной строке в середине. Реферат начинается с указания названия темы работы, затем приводятся сведения о количестве рисунков, таблиц, литературных источников (10– 20 наименований), приложений, представленных в работе, и на скольких страницах он изложен. В следующем абзаце перечисляются ключевые слова, которые характеризуют основное содержание работы, от 5 до 15 существительных (или словосочетаний с существительными) из текста. Затем приводятся конкретные сведения, раскрывающие содержание основной части работы (2–3 предложения). Оптимальный объем реферата – 0,5 страницы. Содержание Содержание представляет подробный план изложения выбранной темы и включает введение, нумерацию и наименование всех разделов, подразделов, заключение (выводы), библиографический список (использованной литературы) и приложения с указанием номеров страниц, с которых начинаются эти элементы работы. Нумерация глав начинается с аналитического обзора. Главы нумеруют арабскими цифрами. Номер подраздела состоит из номера главы и номера подраздела, разделенных точкой. Разделы «Введение», «Заключение» или «Выводы», «Библиографический список» не нумеруются. Введение Во введении раскрывается актуальность темы, обсуждается роль современных методов производства биопрепаратов, энтомофагов и БАВ в сельском хозяйстве и защите 32 растений, приводиться вредоносность объектов (основных не более 3–5, против которых применяется выбранное средство), формулируется цель работы. Объем раздела – 1–2 страницы. 1. Аналитический обзор литературы В аналитическом обзоре полно и систематизировано излагается состояние вопроса, которому посвящена работа. Обзор составляется на основании отечественной и зарубежной литературы. Подробно и систематизировано излагается состояние вопроса, которому посвящена работа: указать проблемы биотехнологии в защите растений, значение биотехнологии в защите растений; биологические, морфологические особенности агента биозащиты и способы получения других биологических средств для подавления основного вредного организма в зависимости от темы – биопрепаратов или энтомофагов (не менее 3); перечислить вредные организмы для защиты данным биологическим средством; эффективность биологического средства (энтомофага, биопрепарата, гербифага). Ссылки на использованные источники обязательны. Объем раздела 25 % от объема работы. 2. Технологическая карта получения (название соответствует выбранной теме) Эта часть курсового проекта состоит из разделов (подглав), включающих основные сведения по выбранной теме, обобщение и оценку данных, представленных в отечественной и зарубежной литературе, которые излагаются в текстовой форме и сопровождаются иллюстрациями, таблицами и рисунками. 33 2.1. Характеристика конечного продукта Конечный продукт должен соответствовать определенным требованиям согласно государственному ил отраслевому стандарту (ГОСТ, ОСТ) или техническим условиям (ТУ). Подробно описывают морфологические, биологические или другие показатели выбранного энтомо-, акарифага или биопрепарата, указывают для чего предназначено биологическое средство. Объем раздела –2 –3 страницы. 2.2. Технологическая схема производства В этом разделе перечисляют стадии (последовательность) технологического процесса. Помимо этапов, включающих наработку непосредственно биологического средства, сюда же относятся стадии обезвреживания отходов. Методы культивирования биологического агента включают блок – схему производства биологического средства. 2.3. Сырье и материалы В данном разделе указывают наименования сырья и материалов, необходимых для производства. Например, все составные части для приготовления искусственной питательной среды (ИПС), семена растений, маточная культура биоагента – это сырье, а к материалам относят фильтровальная бумага, марля и т. д. 2.4. Оборудование и приборы Приводят список и краткую характеристику необходимого оборудования, контрольно – измерительных и регулирующих приборов. К оборудованию относятся столы, ферментеры, автоклавы и прочее. В качестве приборов могут рассматриваться гигрографы, термометры, рН – метры, весы и др. 34 Указывают также количество и площадь производственных помещений, необходимых для размещения оборудования, приборов, работы персонала. 2.5. Описание технологического процесса В разделе подробно описывают все стадии работ по схеме, приведенной в разделе 2.2. Здесь же следует привести затраты времени на основные стадии технологического процесса, нормы расхода материалов и сырья. 2.6. Контроль качества продукта и стандартизация В этом разделе приводят показатели и их значения, по которым оценивается качество производимого продукта. Для биопрепаратов необходимо определение титра, биологической активности. Качество энтомо- и акарифагов оценивается по следующим показателям: количество и масса яиц, процент отрождения личинок, жизнеспособность, половой индекс и др. Первостепенное значение имеют процент заражения хозяев (для паразитов) или прожорливость (для хищников). Кроме того, следует описать методы оценки качества биологического средства. 2.7. Техника безопасности. При производстве биологических средств защиты растений работающие могут подвергаться воздействию комплекса вредных факторов. В данном разделе кратко приводят сведения по общим правилам пожарной безопасности, техника безопасности при работе с химикатами, ослуживанию электрооборудования, оказание первой доврачебной помощи при несчастных случаях. Кроме того, следует более подробно изложит правила работы с микроорганизмами или насекомыми и клещами, в зависимости от выбранной темы. 35 2.8. Технико-экономический расчет В этом разделе приводят сведения по себестоимости продукции (для производства энтомофагов ориентироваться на галлицу афидимизу, для производства биопрепаратов – на триходермин), ориентируясь на сведения, приведенные в литературных источниках. Заключение (Выводы) В заключении (выводах) в кратком виде приводят итоговые результаты выполненной работы, дают оценку эффективности и целесообразности использования производства биологического средства в защите от вредных организмов. В отличие от заключения, которое излагается сплошным текстом, выводы нумеруются по абзацам и пишутся в более лаконичной форме. В заключении (выводах) суть проведенных исследований (изученных материалов) должна быть понятна без чтения основного текста. Не допускается появление положений, не обсужденных в основной части. Рекомендуемый объем – 1–1,5 страницы. Библиографический список В список использованной литературы включают только те источники, которые были использованы при выполнении проекта и на которые есть ссылки в тексте. Список оформляют в соответствии с требованиями государственных стандартов. Ссылки в тексте на литературные источники приводят либо цифрами в квадратных скобках по мере их упоминания в тексте, либо указанием фамилии автора и года издания, заключенных в круглые скобки. Во втором случае список составляют в алфавитном порядке. Обязательно приведение 2–3 зарубежных источника, общее число ссылок не менее 20–25. 36 РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА 1. Загоскина Н. В. Биотехнология: Состояние и перспективы / Н. В. Загоскина, Л. В. Назаренко, Е. А. Калашникова, Е. А. Живухина. – М.: Оникс, 2009. – 496 с. 2. Сельскохозяйственная биотехнология/Под. ред. Шевелухи В. С. – М. – Высшая школа, 2008. – 710 с. 3. Сельскохозяйственная биотехнология/Под.ред. Шевелухи В. С. – М. – Высшая школа, 2003. – 469 с. 4. Бабенко А. С. Энтомофаги в защите растений: учеб. пособие/А. С. Бабенко, М. В. Штерншис, И. В. Андреева, О. Г. Томилова, В. А. Коробов. – Новосибирск, 2001. – 205 с. 5. Биологическая защита растений: учеб./М. В. Штерншис, Ф. С. Джалилов, И. В. Андреева, О. Г. Томилова. – М.: КолосС, 2004. – 264 с. 6. Биопрепараты в защите растений. учеб. пособие /М. В. Штерншис, Ф. С. Джалилов, И. В. Андреева, О. Г. Томилова. – Новосибирск, 2003. – 142 с. 7. Биотехнология в защите растений: учеб. пособие/М. В. Штерншис, О. Г. Томилова, И. В. Андреева. – Новосибирск, 2006. – 199 с. 8. Ермолаев Н. Е. Хищная галлица – афидимиза. Биология, разведение, применение. – СПБ, 2000. – 42 с. 9. Леднев Г. Р. Возбудители микозов насекомых: пособие по диагностике/Г. Р. Леднев, Б. А. Борисов, Г. В. Митина. – СПб., 2003. – 79 с. 10. Патогены насекомых: структурные и функциональные аспекты/под ред. В. В. Глупова. – М.: Круглый год, 2001. – 763 с. 11. Технологический регламент на производство галлицы афидимизы. – СПб, 2001. – 14 с. 12. Материалы всероссийских и международных конференций по биологической защите растений (ВНИИ биол. защиты растений, Краснодар, с 2000 по настоящее время. 37 13. Статьи из журнала «Защита и карантин растений» (с 2000 г. по настоящее время). 14. ТУ и ГОСТ по производству биологических средств. ПРИМЕРНЫЕ ТЕМЫ КУРСОВЫХ РАБОТ 1.Технологическая карта получения биопрепарата на основе Bacillus popillae 2.Технологическая карта получения Вирина-ГСШ 3.Технологическая карта наработки Хетомина 4.Технологическая карта получения веррукозина 5.Технологическая карта получения фитоспорина 6.Технологическая карта наработки фитопа 7.Технологическая карта получения фитолавина 8.Технологическая карта получения фитоверма 9.Технологическая карта получения метаризина 10.Технологическая карта получения вермикулена 11.Технологическая карта разведения эдовума 12.Технологическая карта разведения периллюса 13.Технологическая карта разведения подизуса 14.Технологическая карта разведения листоеда зигограммы 15.Технологическая карта разведения мухи-пестрокрылки 16.Технологическая карта разведения микромуса 38 СПИСОК ВОПРОСОВ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЭКЗАМЕНУ 1.Биотехнологические особенности процессов наработки биопрепаратов на основе полезных микро- и макроорганизмов для защиты растений. 2.Принципы технической энтомологии (разведение насекомых и клещей – энтомофагов и гербифагов). 3.Особенности и основные способы наработки вирусных энтомопатогенных препаратов. 4.Особенности наработки бактериофагов (на примере препарата пентафаг). 5.Схема наработки препаратов на основе Bacillus thuringiensis в ферментерах (глубинное культивирование). 6.Методика наработки бакпрепарата на основе облигатной бактерии Bacillus popilliae. 7.Культивирование бактерий-антагонистов для создания бактериальных препаратов для борьбы с болезнями растений: Pseudomonas fluorescens, P. aureofaciens, Bacillus subtilis. 8.Способы культивирования грибных энтомопатогенных препаратов. 9.Особенности технологий приготовления биопрепаратов на основе живых культур грибов‑антагонистов (на примере Trichoderma viride). 10.Особенности наработки биопрепаратов на основе гиперпаразитов (на примере Ampelomyces quisqualis). 11.Особенности наработки микогербицидов. 12.Современные технологии получения энтомопатогенных препаратов на основе нематодо-бактериального комплекса. 13.Особенности производства препаратов на основе энтомопатогенных микроспоридий. Примеры препаратов. 39 14.Биотехнология культивирования азотфиксирующих бактерий (р. Agrobacterium, Azospirillum, Flavobacterium и др.) и получения бактериальных удобрений на их основе. 15.Производство антибиотиков для защиты растений. 16.Промышленные способы получения ботанических пестицидов. 17.Ботанические пестициды (препараты, действующее вещество, растение-продуцент, объекты-мишени). 18.Идентификация феромонов и кайромонов насекомых, синтез их синтетических аналогов. Примеры. 19.Производство регуляторов роста, развития и размножения насекомых (РРРН) – ювеноидов, ингибиторов синтеза хитина (ИСХ). Примеры препаратов. 20.Способы получения биопрепаратов на основе микробных токсинов. Примеры препаратов. 21.Направления технической энтомологии. 22.Этапы культивирования насекомых и клещей. 23.Влияние абиотических и биотических факторов на насекомых при их разведении. 24.Принцип триотрофа при наработке акари- и энтомофагов. 25.Стандартизация и типизация культуры насекомого. 26.Схема разведения трихограммы 27.Схема разведения златоглазки обыкновенной. Критерии качества полученной культуры хищника. 28.Принципы составления технологических карт производства биологических средств защиты растений. 40 СОДЕРЖАНИЕ Введение....................................................................................3 Занятие 1. Особенности наработки вирусных препаратов....4 Занятие 2. Технологии производства бактериальных препаратов для подавления вредителей и болезней растений........7 Занятие 3. Особенности наработки грибных препаратов для защиты растений..............................................................11 Занятие 4. Особенности получения энтомопатогенных препаратов на основе нематод и микроспоридий для защиты растений...................................................................................13 Занятие 5. Технологии получения бактериальных удобрений................................................................................16 Занятие 6. Производство антибиотиков, биологически активных веществ насекомых и их синтетических аналогов для защиты растений..............................................................17 Занятие 7. Получение биопрепаратов на основе микробных токсинов, принципы разведения насекомых и клещей.......20 Занятие 8. Стандартизация и типизация культуры насекомого. Массовое разведение насекомых на примере трихограммы.....................................................................................23 Занятие 9. Особенности массового разведения хищников.................................................................................26 Занятие 10. Методики массового производства клещей и разведения гербифагов........................................................28 Курсовая работа.......................................................................30 Рекомендуемая литература.....................................................37 Примерные темы курсовых работ.........................................38 Список вопросов для подготовки к экзамену.......................39 41 Шпатова Татьяна Владимировна Штерншис Маргарита Владимировна ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА БИОПРЕПАРАТОВ, ЭНТОМОФАГОВ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ Методические указания для лабораторно-практических занятий и выполнению курсовой работы Публикуется в авторской редакции Компьютерная верстка Т. В. Шпатова Подписано в печать 02 марта 2012 г. Формат 60x84 1/16. Объем 2,5 уч.-изд. л., 1,3 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Заказ № 450 ______________________________________________ Отпечатано в издательстве Новосибирского государственного аграрного университета 630039, Новосибирск, ул. Добролюбова, 160, каб.106. Тел./факс (383) 267-09-10. E-mail: 2134539@mail.ru