КАЗАКОВА Елена Степановна ЛИМФАТИЧЕСКИЕ УЗЛЫ И
advertisement
На правах рукописи КАЗАКОВА Елена Степановна ЛИМФАТИЧЕСКИЕ УЗЛЫ И ЛИМФА ПРИ НОРМАЛЬНОЙ ГЕМОДИНАМИКЕ, В РЕПЕРФУЗИОННОМ ПЕРИОДЕ АБДОМИНАЛЬНОЙ ИШЕМИИ И В УСЛОВИЯХ КОРРЕКЦИИ (анатомо-экспериментальное исследование) 14.00.02. - анатомия человека АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Новосибирск 2004 Работа выполнена в лаборатории общей патологии и физиологии лимфатической системы НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН (г. Новосибирск). Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Асташов Вадим Васильевич Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Верещагин Евгений Иванович Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Изранов Владимир Александрович кандидат медицинских наук Аристова Елена Серафимовна Ведущая организация: ГУ НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (г. Новосибирск) Защита состоится года в. часов на заседании диссертационного совета Д 208.062.05 при Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ (630091, Новосибирск, Красный проспект, 52). С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирской государственной медицинской академии (630091, Новосибирск, Красный проспект, 52) Автореферат разослан Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор А. В. Волков ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Одной из наиболее важных проблем современной медицины является ишемическая болезнь органов пищеварения, что обусловлено распространением данной патологии, увеличением числа больных среди лиц не только пожилого, но и среднего возраста, объективными трудностями диагностики и лечения, высокой летальностью при острых формах заболевания (Коломойская М.Б. с соавт., 1986; Григорьева Е.А., Григорьев А.К., 1996). Частота стенозирующих поражений висцеральных ветвей брюшной аорты по данным вскрытия составляет от 19% до 70%, а по данным ангиографии - от 4 до 53,5%. Операции при этой патологии составляют лишь 2% от числа всех операций на брюшной части аорты и ее ветвях (Rodriguez G.C. et al., 1997; Catalono О. et al, 1998; Игнашов A.M. с соавт., 2000). Реперфузия ишемизированных тканей в послеоперационном периоде сопровождается массивным притоком кальция, обусловливая коагуляционный некроз (Патрашев Д.В., Духанин А.С., 2000). R. Sturniolo et al. (1989), Г. И. Дрячук с соавт. (1998) в своих работах показали, что применение антагониста кальция иимодипина при острых нарушениях кровообращения оказывает благоприятное влияние на функциональные и биохимические изменения, повышая антиоксидантную защиту, снижая содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), уменьшая проницаемость клеточных мембран. Развитием методов дренажа интерстиция явилось создание биологически активных добавок к пище (БАД), соединяющих свойства лимфостимулятора и стимулятора внешнего дренажа, согласно методу «двуплечевого» дренажа интерстиция (Бородин Ю.И., 1999 - 2001). БАД к пище, разработанный в НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, содержит растительные биофлавоноиды и сорбционную основу растительного происхождения (пищевые волокна), что позволяет использовать их для коррекции нарушений лимфатической системы (Асташова Т.А., Савицкая И.В., 1999): Вопрос об использовании фитопрепаратов, содержащих растения с антиоксидантным, сорбционным и гастропротективиым действием (БАД к пище «Гармония Вита Г») для коррекции структуры тонкой кишки и лимфатических узлов в реперфузионном периоде абдоминальной ишемии нигде не освещался, хотя известно, что введение антиоксидантов резко уменьшает интенсивность процессов ПОЛ (Владимиров Ю.А. и др., 1991; Зенков Н.К. и др., 1993). Отсутствие научных данных об особенностях структурных преобразованиях в печеночных и брыжеечных лимфатических узлах, структуре тонкой кишки в реперфузионном периоде острой абдоминальной ишемии в условиях сочетанной фито- и фармакокоррекции явилось основанием для выполнения исследования и обусловливает актуальность работы с научной и практической точек зрения. Цель исследования. Выявить характерные особенности морфофункционалыюй организации разных звеньев лимфатического региона тонкой кишки, печеночных лимфатических узлов и лимфы крыс в физиологических условиях, в реперфузиоином периоде абдоминальной ишемии и в словиях фармако- и фитокоррекции. 3 Задачи исследования: 1. Изучить морфофункциональное состояние печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, тонкой кишки и центральной лимфы при введении антагониста кальция «Нимотоп» в условиях нормальной гемодинамики. 2. Выявить морфофункциональные особенности состояния печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, тонкой кишки и центральной лимфы в условиях реперфузии абдоминальной ишемии (3 часа); 3. Изучить характерные особенности структурно-функциональной организации печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, тонкой кишки и центральной лимфы в реперфузионном периоде абдоминальной ишемии в условиях фармакокоррекции препаратом «Нимотоп» (3 часа, 3,14 суток); 4. Исследовать особенности структурно-функциональной организации печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, тонкой кишки и центральной лимфы при моделировании ишемии-реперфузии органов брюшной полости в условиях последовательного использования фармако- («Нимотоп») и фитокоррекции (БАД к пище) «Гармония Вита Г» (14 суток); Научная новизна. В работе впервые дана характеристика особенностей структурной организации печеночных и брыжеечных лимфатических узлов и стенки тонкой кишки при введении антагониста кальция «Нимотоп» в нормальных условиях гемодинамики, получены данные о структурно-клеточной организации брыжеечных и печеночных лимфатических узлов при развитии экспериментальной ишемии-реперфузии органов пищеварения. Показано, что в условиях реперфузионного периода абдоминальной ишемии в лимфатических узлах происходят разнонаправленные структурные преобразования, которые зависят от их анатомического расположения и степени участия в лимфатическом дренаже. Впервые показано, что в/в введение блокатора кальциевых каналов «Нимотоп» в реперфузионном периоде абдоминальной ишемии оказывает влияние иа структуру лимфатических узлов и стенки тонкой кишки, снижая интенсивность процессов ПОЛ. Впервые проведено структурное исследование печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, стенки тонкой кишки, а также проанализировано содержание и распределение СЖК и а-токоферола при последовательном использовании блокатора кальциевых каналов «Нимотоп» и фитопрепарата (БАД к пище) «Гармония Вита Г» в реперфузионном периоде ишемии органов брюшной полости. Показано, что последовательная коррекция (фармако- и фитопрепаратом) обладает более выраженным восстанавливающим действием на морфофункциональное состояние исследуемых объектов при моделировании ишемии-реперфузии органов брюшной полости, чем монокоррекция фармакопрепаратом. Теоретическая и практическая значимость. Полученные данные о преобразованиях в печеночных лимфатических узлах, репюнетонкой кишки и особенностях содержания и распределения СЖК в лимфе и крови при введении блокатора кальциевых каналов «Нимотоп» в нормальных условиях жизнедеятельности организма и в периоде постишемической рециркуляции органов брюшной полости дополнят представление о механизмах 4 его действия. Сведения о структурно-функциональной организации лимфатических узлов, стенки тонкой кишки и центральной лимфы в реперфузионном периоде абдоминальной ишемии расширят представление о морфо- и патогенезе этого заболевания. Полученные данные о стимуляции дренажно-детоксикационной функции, В-зависимых иммунных реакций в лимфатических узлах и восстановлении распределения СЖК в лимфе и крови в периоде постишемической рециркуляции органов брюшной полости в условиях фармако- (блокатор кальциевых каналов «Нимотоп») и фитокоррекции (БАД к пище «Гармония Вита Г») являются аргументом для использования этих препаратов в качестве основных и вспомогательных средств в лечении острых нарушений абдоминального кровообращения. Использование фитопрепарата позволяет восстанавливать содержание и распределение СЖК и а-токоферола в центральной лимфе и периферической крови, что свидетельствует о повышении тканевой устойчивости к свободно-радикальному окислению, которую определяют биофлавоноиды, содержащиеся в лекарственных растениях. Положения, выносимые на защиту: 1. Введение антагониста кальция в нормальных условиях гемодинамики изменяет структурную организацию компонентов лимфатического региона тонкой кишки, лимфатических узлов печени, соотношение клеточных элементов в центральной лимфе. 2. В начале острого периода реперфузии (3 часа) абдоминальной ишемии в центральной лимфе активируются процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ), в регионарных лимфатических узлах печени и тонкой кишки развиваются одновременные структурные преобразования, выраженность которых зависит от их функциональной специализации. 3. Введение антагониста кальция при абдоминальной ишемии сохраняет жизнь экспериментальным животным в остром и подостром периоде реперфузии (3 часа, 3 и 14 суток), обеспечивает оптимальное функционирование регионарного лимфатического аппарата, активгаируя лимфопролиферативную функцию брыжеечных лимфатических узлов и транспортную - печеночных, уменьшает интенсивность процессов ПОЛ в центральной лимфе и лимфатических узлах. 4. Последовательное применение антагониста кальция и фитопрепарата (БАД к пище «Гармония Вита Г») в реперфузионном периоде абдоминальной ишемии обладает лимфокорригирующим действием, способствуя более эффективному восстановленшо структурной организации регионарного лимфатического узла печени и региона тонкой кишки, ослаблению токсиколимфии, в сравнении с монокоррекцией. Апробация результатов исследования. Основные результаты исследования доложены и обсуждены: на Научной конференции «Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии», Новосибирск, 2002; I съезде лимфологов России, Москва, 2003; Региональной научно-практической конференции «Роль санаторно-курортного лечения в процессах реабилитации населения сибирского региона», Новосибирск, 2003; Научной конференции с международным участием «Проблемы лимфолопш и интерстициалыюго массопереиоса», Новосибирск, 2004. 5 Публикации: По теме диссертации опубликовано 7 работ. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 258 страницах машинописного текста, содержит 63 рисунка, 20 таблиц, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 5 глав собственных исследований с подглавами, обсуждения, выводов, списка литературы, содержащего 377 отечественных и иностранных источников. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработай и проанализирован лично автором. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования. Для исследования в качестве экспериментальных животных были выбраны крысы-самцы линии Wistar с исходной массой тела 220-260 г. Работа выполнена на 160 животных. Их разделили на следующие группы: 1 - интактные животные; 2 - экспериментальная группа животных с введением блокатора кальциевых каналов (Бкк) «Ннмотоп» в нормальных условиях гемодинамики; 3- группа ложнооперированных животных со сроком послеоперациоиого периода 3 суток; 4- экспериментальная группа животных через 3 часа реперфузии абдоминальной ишемии; 5 -экспериментальная группа животных через 3 часа реперфузии абдоминальной ишемии с в/в введением Бкк «Нимотоп»; 6 - экспериментальная группа животных через 3 суток реперфузии абдоминальной ишемии с в/в введением Бкк «Нимотоп»; 7 - экспериментальная группа животных через 14 суток реперфузии абдоминальной ишемии с в/в введением Бкк «Нимотоп»; 8 - экспериментальная группа животных через 14 суток реперфузии абдоминальной ишемии с последовательным применением Бкк и фитопрепарата (БАД к пище «Гармония Вита Г»); Модель окклюзии непарных висцеральных ветвей брюшной аорты (SAO shock), предложенная Sturniolo R. et al. (1989), создавалась на наркотизированных животных (4 мг этамииал - натрия на 100 г веса) путем наложения сосудистого зажима сроком на 25 минут на чревный ствол, верхнюю и нижнюю брыжеечные артерии. «Нимотоп» в дозе 1 мл начинали вводить в/в через 20 минут после наложения зажима и продолжали введение в течение 15 мшгут. Для инфузии была выбрана левая боковая вена хвоста животного у его корня. Коррекция фитосорбционным комплексом проводилась в течение двух недель, начиная со вторых суток послеоперационного периода. В качестве объектов морфофункциональных исследований были выбраны брыжеечный и печеночный лимфатический узлы, образцы стенки тонкой кишки, центральная лимфа, периферическая кровь. Используя принцип морфометрии, в лимфатических узлах подсчитывали площадь всего среза и площади отдельных структур: капсулы, краевого синуса, первичных и вторичных лимфоидных узелков, коркового плата, паракортикальной зоны, мозговых тяжей и мозговых синусов. Рассчитывали корково-мозговой индекс лимфатических узлов, по которому ориентировались при определении типа лимфоузла (Ю. И. Бородин, 1967). При морфометрическом исследовании стенки тонкой кишки измеряли толщину слизистой и мышечной оболочки, подслизистой основы, высоту кишечных ворсинок, глубину крипт и суммарную толщину стенки тонкой кишки на парафиновых срезах органа с использованием окуляр-микрометра со 100 делениями при увеличении 144. Значения величии выражали в микрометрах. Индекс крипта/ворсинка вычисляли как отношение глубины крипты к высоте кишечной ворсинки. Количество митозов определяли как число клеток в крипте, находящееся па стадии мета- или анафазы митоза. Количество бокаловидных клеток в эпителиальной выстилке кишечных ворсинок рассчитывали на 100 цилиндрических каемчатых эпителиоцитов. Подсчет клеток проводили при увеличении светового микроскопа х6ОО. Выделeние структурных компонентов и дифференцировку клеточных форм в лимфатических узлах, и лимфе производили с учетом Международной гистологической номенклатуры (под ред. Ю. И. Афанасьева, 1987). На базе сертифицированной аналитической лаборатории Новосибирского института органической химии СО РАН методом высокоэффективной капиллярной газожидкостной хроматографии па хроматографе HP 5890A фирмы «Хьюлетт-Паккард» исследовалось накопление и распределение свободных жирных кислот (СЖК), а на жидкостном хроматографе «Милихром А-02» содержание а-токоферола, в пробах центральной лимфы, периферической крови, тонкой кишке и брыжеечных лимфатических узлах как критерия развития патологического процесса и антиоксидантной активности системы. Статистическая и математическая обработка данных проводилась с помощью методов вариационной статистики с применением метода дисперсионного анализа. Вероятность различий между группами данных считалась достоверной при значениях Р<0,05. Компьютерная обработка данных проводились в среде Windows (Microsoft Excel). РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Исследование структурно-функциональных преобразований печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, лимфы и стенки тонкой кишки в нормальных условиях гемодинамики через 3 часа введения блокатора кальциевых каналов «Нимотоп». Исследования печеночныx и брыжеечныx лимфатических узлов выявили, что их структурно-функциональная специализация соответствует компактному (к/м индекс - 2,28) и фрагментированному типу (к/м индекс- 0,63), соответственно, как у интактной группы. Транспорт лимфы не изменен. Показатели большинства структурных компонентов лимфатических узлов приближены к показателям интактной группы животных (лимфоидные узелки, паракортикальиая зона, мозговые синусы). Исследование цитоархитектоники струтурно-фунукцональных зон печеночных лимфатических узлов выявило увеличение числа незрелых форм клеток лимфоидного ряда (лимфобластов в герминативных центрах на 39,5% (интактные - 6,73±0,29%)) и зрелых - плазматического (зрелых плазматических клеток в мозговых тяжах на 61% (интактиые - 23,7±0,67%)), в мозговых синусах - на 35,7% (интактные- 31,6±0,95%)) при возрастании митотической активности клеток, усилении макрофагалыюй реакции. В брыжеечных лимфатических узлах увеличивается число незрелых форм клеток лимфоидиого ряда (лимфобластов в 7 герминативных центрах на 21,75% (интактные - 6,39±0,12%)), макрофагов в мозговом веществе. Митотическая активность клеток снижена. В центральной лимфе отмечается значительное увеличение количества больших и средних лимфоцитов, макрофагов в 5,5 раза (интактпые-0,5±0,1%), на 23% (инггактные-14,5±0,5%), и7,9раза(шггактные-0,75±0,12%)соответственно. Исследование структуры стенки тонкой кишки выявило увеличение толщины слизистой оболочки на 32,4% (шггактные- 649,5±12,5мкм) и мышечного слоя - на 22,6% (интактные - 148,8±5,6мкм), что, по нашему мнению, может быть связано как с расслаблением миофибрилл (Каркищенко Н.Н., 1995; Бобров Л. Л., Гайворонская В.В., 2000), так и с увеличением интерстициальных пространств мышечной ткани. Высота ворсинки уменьшается, индекс крипта/ворсинка увеличивается. Численность бокаловидных клеток увеличена. Просветы кровеносных и лимфатических сосудов не изменились. Равновесие между пролиферацией и гибелью клеток эпителия соответствуют аналогичным показателям шггактной группы животных. Исследование структурно-функциональных преобразований печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, лимфы и стенки тонкой кишки ложнооперированных животных (3 суток послеоперационного периода). Морфологические исследования печеночных и брыжеечных лимфатических узлов в данной группе выявили сохранение (как и у интактных животных) их структурпо-функциональных специализаций. Транспорт лимфы усилен (увеличиваются мозговые синусы). Относительные площади большинства структурных компонентов, как печеночных, так и брыжеечных лимфатических узлов не имеют отличий от показателей интактной группы. Во всех структурнофункциональных зонах через 3 суток послеоперационного периода выявлено увеличение числа незрелых и зрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов при снижении макрофагалыюй активности. В картине клеточного состава центральной лимфы отмечается увеличение только числа макрофагов. Исследование структуры стенки тонкой кишки выявило уменьшение толщины слизистой и увеличение- мышечной оболочек, по сравнению с группой шггактных животных. Высота ворсинок снижается. Численность бокаловидных клеток увеличивается. Уровень барьерно-защитной функции слизистой оболочки тонкой кишки и равновесие между пролиферацией и гибелью клеток эпителия соответствуют аналогичным показателям интактной группы животных. По-видимому, изменения в структуре лимфатических узлов и кишечной стенки, их цитоархитектоники обусловлены эндогенной интоксикацией, которая развивается на фоне проведения срединной лапаротомии с выделением непарных висцеральных ветвей брюшной аорты. Ей отводится ключевая роль в развитии и течении большинства патологических процессов (Дергачева Т.И. с соавт., 1996; Касымов А.Х. с соавт., 2002). Исследование структурно-функциональных преобразований печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, лимфы и стенки тонкой кишки через 3 часа реперфузионного периода абдоминальной ишемии. Исследования печеночных лимфатических узлов выявили изменение структурно-функциональной специализации с компактного типа (интакт8 пая группа, к/м индекс -1,6) на промежуточный (к/м индекс -1,2). Тимусзависимая зона уменьшается. Площадь вторичных лимфоидных узелков увеличивается за счет центров размножения. Значительно возрастают площади мозговых и краевого синусов, соответственно, на 80% (интактные 10,8±0,3%) и 76,6% (интактные - 2,52±0,2%). Общая площадь срезов лимфатических узлов и плотность клеточных элементов в паракортикалыюй зоне увеличивается. Анализ цитоархитектоники структурно-функциональных зон выявил увеличение числа незрелых форм клеток лимфоидного ряда (лимфобластов и средних лимфоцитов) в герминативных центрах, соответственно, на 26,5% и 40%, паракортикальной зоне и зрелых плазматических клеток в мозговых тяжах - на 45,6% и мозговых синусах - на 26,5%. Количество митозов снижено. Отмечается выраженная макрофагальиая реакция в герминативном центре, паракортикальной зоне и центральной лимфе, что, возможно, объясняется большим токсическим прессингом, обусловленным периодом реперфузии (Новиков В.Д. с соавт., 2002). Исследование брыжеечных лимфатических узлов показало сохранение структурно-функциональной специализации (к/м индекс - 0,66), как и у интактных животных. Транспорт лимфы при этом не изменяется, что, наряду с увеличением общей площади лимфатического узла и уменьшением плотности клеточных элементов может свидетельствовать о развитии отека и согласуется сданными Ю.И.Бородииа(2001). На данном сроке реперфузии (3 часа) показатели относительных площадей большинства структурно-функциональных зон (вторичные лимфоидные узелки, паракортикальная зона, мозговые тяжи) брыжеечных лимфатических узлов приближены к аналогичным показателям интактной группы животных. Исследование цитоархитектоники показало увеличение числа незрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов (плазмобластов в мозговых тяжах - в 2,5 раза (интактные - 5,12±0,1 %)) и макрофагов. Полученные нами данные об изменении клеточного состава брыжеечных лимфатических узлов при токсических поражениях тонкого кишечника согласуются с результатами, полученными Н.К. Гайнановой (1992) и Б. Н. Нурмухамбетовой (2000). Выявленное увеличение числа незрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов на фоне уменьшения общего количества зрелых, макрофагальная реакция соответственно находят свое отражение в картине клеточного состава центральной лимфы (увеличивается число больших лимфоцитов в 7,3 раза). Исследование структуры стенки тонкой кишки выявило отек слизистой оболочки и мышечного слоя, увеличение просвета кровеносных и лимфатических сосудов и интерстициальных пространств, связанное с отеком (Беляков Н.А., 1998). Отмечается увеличение глубины крипт, количества бокаловидных и митотически делящихся клеток. В собственной пластинке слизистой оболочки увеличивается количество макрофагов, нейтрофилов и дегенерирующих клеток. Равновесие между пролиферацией и гибелью клеток эпителия нарушено за счет массивной гибели эпителиальных клеток, о чем косвенно свидетельствует увеличение числа бокаловидных клеток и индекса крипта-ворсинка, что совпадает с данными R.D.Spesian, M.G.Oliver (1991), A.Allen et al. (1993). 9 Через 3 часа реперфузии различие между величиной пула свободных жирных кислот (СЖК) в центральной лимфе и периферической крови, по сравнению с интактной группой (10,9%) существенно уменьшается (до 3,3%), что может свидетельствовать о значительном возрастании сброса лимфы в кровеносное русло. Усилению эндотоксикоза и активации ПОЛ соответствует и увеличение пула СЖК и долевого вклада арахидоновой кислоты в крови, тонкой кишке и брыжеечном лимфатическом узле. Содержание а-токоферола в центральной лимфе уменьшается, по сравнению с интактной группой, в 3 раза, а в брыжеечном лимфатическом узле и тонкой кишке - увеличивается, что может свидетельствовать об активации антиоксидаитной защиты. Выбранная нами модель циркуляторного шока (SAO shock), предложенная R.Sturniolo et al. (1989), даже при ишемии сроком 25 минут вызывает 100% гибель экспериментальных животных через 5-6 часов реперфузии. Во всех экспериментальных группах с введением блокатора кальциевых каналов «Нимотоп», рассматриваемых ниже, гибели животных не отмечается. Исследование структурно-функциональных преобразований печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, лимфы и стенки тонкой кишки через 3 часа, 3 и 14 суток реперфузии абдоминальной ишемии при введении блокатора кальциевых каналов «Нимотоп». Через 3 часа реперфузии абдоминальной ишемии с в/в введением блокатора кальциевых каналов (Бкк) «Нимотоп» структурно-функциональная специализация печеночных лимфатических узлов изменяется с компактного типа (к/ м индекс-1,7) на промежуточный (к/м индекс-1,2). Как и в экспериментальной группе с реперфузией 3 часа без введения Бкк, площади мозговых и краевого синусов увеличены, соответственно, на 89%и 53,6% по сравнению с интактной группой. Относительная площадь тимуезависимой зоны уменьшается, а вторичных лимфоидных узелков и мозговых тяжей не изменяется. Во всех структурно-функциональных зонах возрастает число незрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов (лимфобластов в герминативных центрах на 86,1%, плазмобластов в мозговых тяжах - на 82,14% (интактные 5,6±0,27%)). Макрофагальная реакция выражена в большей степени, чем в группе с аналогичным сроком реперфузии без коррекции. Митотическая активность клеток снижена, по сравнению с интактной группой, но ее показатели выше, чем в аналогичный период реперфузии в группе без введения Бкк. В брыжеечных лимфатических узлах, по сравнению с интактной группой, отмечается изменение структурно-функциональной специализации с фрагментированного типа (к/м индекс - 0,83) на компактный (к/м индекс - 2,1). По сравнению с 3 часами реперфузии без введения Бкк «Нимотоп», в данной группе отмечаются структурные признаки активации клеточного и гуморального звеньев иммунитета: увеличение тимуезависимой зоны на 50,1% на фоне увеличения в ней плотности клеточных элементов, гиперплазия вторичных лимфоидных узелков на 49,9%. Отмечается уменьшение мозговых тяжей. В лимфатическом узле преобладает прямой путь транспорта лимфы. Характерной особенностью данной экспериментальной группы является увеличение количества зрелых форм клеток лимфоидного (малых лимфоцитов в герминативных 10 центрах на 68,9% (3 часа реперфузии без Бкк - 36,9±0,28%) и плазматического рядов по сравнению с аналогичным сроком реперфузии без введения Бкк. В герминативных центрах возрастает число лимфобластов на 22,7% (интактные - 6,4±0,12%). Во всех структурных компонентах отмечается макрофагальная реакция, что согласуется с данными R.Sturniolo et al. (1989), показавшими, что нимодипин («Нимотоп») является стимулятором активности фагоцитов. В клеточном составе центральной лимфы отражается изменение цитоархитектопики рассматриваемых лимфатических узлов: увеличивается число незрелых форм клеток (больших лимфоцитов в 9,4 раза), макрофагов - в 8,8 раза, что, вероятно, отражает миграцию клеточных элементов. Исследование структуры стенки тонкой кишки выявило уменьшение толщины слизистой, по сравнению с группой без введения Бкк и интактной группой животных. Снижается высота ворсинок на 47,5% (реперфузия 3 часа без Бкк - 604,7±11,5мкм) и глубина крипт на 69,6% (реперфузия 3 часа без Бкк-454,4±12,5мкм) по сравнению с группой без введения Бкк и интактных животных. Просветы кровеносных и лимфатических сосудов и интерстициальных пространств расширены, по сравнению с интактной группой, но в меньшей степени, чем в аналогичный период без введении Бкк. Отмечается увеличение числа митозов и бокаловидных клеток, что может свидетельствовать об активации регенеративных процессов в слизистой оболочке тонкой кишки. Через 3 суток реперфузии структурно-функциональная специализация печеночных лимфатических узлов соответствует фрагментированному типу (к/ м индекс - 0,62). По сравнению с 3 часами реперфузии транспорт лимфы усилился на 23,5% (реперфузия 3 часа с введением Бкк - 20,4±0,4%). Уменьшение площади паракортикальной зоны (в 2,7 раза) и вторичных лимфоидных узелков (на 11,8%) по сравнению с интактной группой и предыдущим сроком реперфузии может свидетельствовать об угнетении клеточного и гуморального звеньев иммунитета. По сравнению с предыдущим сроком реперфузии, отмечается увеличение количества малых лимфоцитов, которые по своим значениям приближаются к показателям интактной группы. Число незрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов сохраняется увеличенным. Митотическая активность клеток снижена. В брыжеечных лимфатических узлах структурно-функциональная специализация соответствует промежуточному типу (к\м индекс -1,3). Отмечается увеличение паракортикальной зоны на 28,6% по сравнению с интактной группой животных. Однако, по сравнению с периодом ранней постишемической рециркуляции (3 часа) тимусзависимая зона уменьшается на 17,1% (реперфузия 3 часа с введением Бкк-40,1 ±0,5%). Площадь вторичных лимфоидных узелков снижается, по сравнению с 3 часами реперфузии, достигая значений интактиой группы. Транспорт лимфы снижен. Во всех структурно-функциональных зонах возрастает количество незрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов (плазмобластов в мозговых тяжах - в 2,4 раза) на фоне уменьшения числа зрелых по сравнению с предыдущим сроком реперфузии. Макрофагальная реакция отмечается только в герминативных центрах вторичных лимфоидных узелков и мозговых тяжах. 11 В центральной лимфе отмечается уменьшение числа больших лимфоцитов на 47,3% и макрофагов на 26,6% по сравнению предыдущим сроком реперфузии. Исследование структуры стенки тонкой кишки выявило только увеличение толщины мышечного слоя на 59,1% по сравнению с интактной группой. Просветы кровеносных и лимфатических сосудов расширены, интерстициальные пространства мышечной ткани значительно увеличены, по сравнению с иитактной группой, но в меньшей степени, чем в предыдущий срок реперфузии с введением Бкк (3 часа). По сравнению с ранними сроками постишемической рециркуляции отмечается активация регенеративных процессов в слизистой оболочке, о чем свидетельствует увеличение числа бокаловидных клеток и митозов. В собственной пластинке слизистой оболочки отмечается увеличение числа нейтрофилов и ретикулярных клеток. Исследование распределения свободных жирных кислот (СЖК) и а-токоферола в пробах центральной лимфы, периферической крови, тонкой кишки выявило увеличение пула СЖК (максимально в тонкой кишке - на 16,8% (иитактные-48,8±0,08 % н а 1 г), возрастание доли ненасыщенных жирных кислот и, в частности, арахидоновой кислоты, по сравнению с предыдущим сроком реперфузии, что может свидетельствовать об активации процесса ПОЛ и антиоксидантной защиты. Через 14 суток реперфузии структурно-функциональная специализация печеночных лимфатических узлов соответствует фрагментированному (к/м индекс- 0,49) типу. Транспорт лимфы возрастает (мозговые синусы увеличены на 22,3% (реперфузия 3 суток с введением Бкк - 25,2± 1,4%)), площадь вторичных лимфоидных узелков снижается по сравнению с предыдущим сроком реперфузии (3 суток), а мозговых тяжей - остается выше показателей шггактной группы. Во всех структурно-функциональных зонах лимфатических узлов, по сравнению с предыдущим сроком реперфузии, отмечается увеличение числа зрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов. Структурно-функциональная специализация брыжеечных лимфатических узлов, как и у иитактной группы, соответствует фрагментированиому типу (к/ м индекс - 0,94). Для данной группы характерно приближение относительных площадей большинства структурных компонентов до показателей иитактной группы (вторичные лимфоидные узелки, мозговые тяжи, паракортикальная зона, мозговые и краевой сшгусы). Исследование цитоархитектоники брыжеечных лимфатических узлов показало увеличение количества незрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов. Следует отметить, что плазмоцитарная реакция (максимально увеличено число зрелых плазматических клеток в мозговых синусах - на 37,4%) в брыжеечных лимфатических узлах достаточно ярко выражена, что указывает на значительную активацию В-зависимых иммунологических реакций в организме (Долгова М.А., Надъярная Т.Н., 1990; Морозова Е.В., 1998). Митотическая активность клеток снижена. В центральной лимфе отмечается снижение числа больших лимфоцитов на 50,5%, средних лимфоцитов - на 23% по сравнению с предыдущим сроком реперфузии при возрастании числа малых лимфоцитов - на 8,9% (интактные 82,76±0,53%), отражая тенденцию к восстановлению ее клеточного состава. 12 Исследование структуры стенки тонкой кишки выявило отсутствие достоверных изменений морфометрических показателей, по сравнению с интактной группой. Отмечается увеличение глубины крипт, индекса крипта/ворсинка. Размеры кровеносных и лимфатических сосудов и интерстициальных пространств не имеют достоверных отличий от значений интактной группы. Увеличение числа бокаловидных клеток и митозов (их численность увеличивается и по сравнению с предыдущим сроком реперфузии), а также макрофагов и нейтрофилов, снижение численности дегенерирующих клеток до показателей иитактиой группы, может рассматриваться как активация пролиферативных процессов в слизистой оболочке тонкой кишки. Исследование распределения СЖК и а-токоферола во всех исследуемых биологических объектах выявило снижение пула СЖК и а-токоферола, доли ненасыщенных жирных кислот и, в частности - арахидоновой кислоты по сравнению с предыдущими сроками реперфузии, что свидетельствует об угасании процесса ПОЛ, снижении степени эндотоксикоза. Исследование структурно-функциональных преобразований печеночных и брыжеечных лимфатических узлов, лимфы и стенки тонкой кишки через 14 суток реперфузии абдоминальной ишемии с введением блокатора кальциевых каналов «Нимотоп» и коррекцией фитопрепаратом (БАД к пище) «Гармония Вита Г». Применение БАД к пище « Гармония Вита Г » в качестве корригирующего средства в реперфузионном периоде вызвано тем, что она имеет преимущественное воздействие на органы пищеварительной системы, оказывая протективное, спазмолитическое, аптиоксидантное, репаративное и микробиоценотическое действия, которые определяются входящими в ее состав компонентами фитосоставляющей и сорбционной. Через 14 суток постишемического периода в экспериментальной группе с введением Бкк «Нимотоп» и с коррекцией фитосорбционным комплексом «Гармония Вита Г» структурно-функциональная специализация печеночных лимфатических узлов соответствует промежуточному (к/м индекс -1,38) типу, в отличие от интактной группы животных (компактный тип). Размеры Тзависимой зоны увеличиваются по сравнению с аналогичным сроком реперфузии без коррекции на 98,8%, не имея достоверных отличий от значений интактной группы. Площадь мозговых синусов снижается, по сравнению с группой 14 суток реперфузии без коррекции, в 2 раза, оставаясь увеличенной по сравнению с интактной группой на 44,8%. Вторичные лимфоидные узелки уменьшаются, а мозговые тяжи - не изменяются. В герминативных центрах вторичных лимфоидных узелков, по сравнению с 14 сутками реперфузии без коррекции, отмечается снижение пролиферативных процессов при активации - бласттрансформации (увеличение числа малых лимфоцитов на 5,6%), а в мозговом веществе-активация процессов пролиферации (увеличение числа плазмобластов на 23%). Митотическая активность клеток при этом возрастает, а макрофагальная реакция-снижается. Через 14 суток реперфузии с коррекцией фитосорбционным комплексом «Гармония Вита Г» структурно-функциональная специализация брыжееч13 пых лимфатических узлов, как иу шпаклюй группы, соответствует фрагментировашюму типу (к/м индекс- 0,8). Для данной группы характерно приближение ол юсительных площадей большинства структурных компонентов к показателям интактной группы (вторичные лимфоидные узелки, корковое плато, мозговые тяжи, паракортикальная зона, мозговые синусы). Исследование цитоархитектоники структурно-функциональных зон, по сравнению с аналогичным сроком реперфузии без коррекции, показало уменьшение числа незрелых форм клеток и увеличение - зрелых (малых лимфоцитов - на 15,7%) в герминативных центрах вторичных лимфоидных узелков, а в мозговых тяжах - наоборот (увеличение количества незрелых плазматических клеток - на 64%). Увеличивается число митозов, уменьшается - макрофагов. В центральной лимфе отмечается увеличение числа больших и лимфоцитов и макрофагов, по сравнению с интактной группой животных. Численность средних лимфоцитов уменьшается на 16,9% по сравнению с группой без коррекции. Отмечается приближение морфометрических показателей структуры стенки тонкой кишки, индекса крипта/ворсинка к показателям интакл юй группы. Увеличение числа бокаловидных клеток и митозов может свидетельствовать об активации пролиферал юных процессов в слизистой оболочке тонкой кишки. Возможно,что все рассматриваемые выше изменения связаны с активным удалением токсинов и микроорганизмов из кишечника сорбентами за счет их высокой адсорбирующей способности (Рачковская Л.Н. и др., 1988; Беляков Н.А., 1991; Бгатова Н.П., 1999,2000) и фитосоставляющей, обладающей свойствами, обусловленными присутствием в ней биологически активных соединений, что приводит к улучшению гемолимфодинамики и совпадает с нашими данными (восстанавливаются размеры интерстициальных пространств, просветы кровеносных и лимфатических сосудов). Исследование распределения свободных жирных кислот в центральной лимфе, периферической крови, тонкой кишке и брыжеечном лимфатическом узле при применении БАД к пище «Гармония Вита Г» в условиях реперфузни абдоминальной ишемии показало, что пул СЖК, долевой вклад ненасыщенных жирных кислот в данной экспериментальной группе ниже, чем в группе без коррекции (14 суток реперфузии). Уменьшение пула СЖК и увеличение вклада не активирующих ПОЛ насыщенных СЖК отражает работу защитной системы, регулирующей обмен фосфолипидов мембран и влияющей па скорость окисления путем изменения долевых вкладов насыщенных и ненасыщенных СЖК. Соолюшение долевых вкладов насыщенных и ненасыщенных СЖК, в большей степени, чем в группе без коррекции, соответствует усилению роли насыщенных СЖК. Соотношение суммы СЖК и содержание токоферола в исследуемых биологических материалах приближается к норме. Отмечаемый рост концентрации а-токоферола в пробах брыжеечного лимфатического узла и тонкой кишки, по-видимому, связан с пероралыюй коррекцией фитопрепаратом «Гармония Вита Г», содержащим витамин Е. Таким образом, использованный нам и фитопрепарат (БАД к пище «Гармония Вита Г») является лимфокоррепфующим природным фактором, способствующим восстановлению структурно-функциональной организации лимфа14 тического региона тонкой кишки при ишемических и реперфузионных повреждениях, активируя репаративпые процессы в органах, повышая барьерно-защнтные свойства, предотвращая развитие и развертывание эндогенной интоксикации в организме в постишемическом периоде. Основное действие этих факторов, по-видимому, реализуется в компенсации и торможении II стадии интоксикации лимфотоксикоза (Буянов В. М., Алексеев А. А., 1990). Анализ результатов исследования позволяет заключить следующее: регаонарпые лимфатические узлы играют значительную роль в компенсации патологических изменений в организме в динамике реперфузионпого процесса абдоминальной ишемии; использование препарата «Нимотоп» обеспечивает сохранение жизнеспособности организма при острой абдоминальной ишемии и способности обеспечивать оптимальное функционирование регионарного лимфатического аппарата; последовательное применение антагониста кальция и фитопрепарата (БАД к пище «Гармония Вита Г») в динамике реперфузионного периода острой абдоминальной ишемии обеспечивает лимфокорригирующее действие в отношении репюнарного лимфатического узла печени и региона тонкой кишки. ВЫВОДЫ 1. В нормальных условиях гемодинамики выявлено, что применение антагониста кальция приводит к увеличению числа незрелых и зрелых форм плазматических клеток в печеночных и брыжеечных лимфатических узлах, уменьшению высоты ворсинок и увеличению ширины прелимфатических путей втонкой кишке, повышению количества незрелых лимфоидиых клеток и макрофагов в центральной лимфе. 2. Структурные преобразования в регионарных лимфатических узлах печени и тонкой кишки через 3 часа реперфузии абдоминальной ишемии направлены в сторону увеличения коркового вещества, числа незрелых клеток лимфоидного и плазматического рядов, макрофагов; в тонкой кишке выявлен тотальный отек, расширение прелимфатических путей, кровеносных и лимфатических капилляров. В лимфе, крови, тонкой кишке и брыжеечных лимфатических узлах характер накопления и распределения свободных жирных кислот (СЖК) свидетельствует об активации процессов перекисного окисления лишщов (ПОЛ) и развитии токсиколимфии. 3. Применение антагониста кальция при абдоминальной ишемии приводит к разнонаправленным изменениям в брыжеечных и печеночных лимфатических узлах в остром периоде реперфузии (3 часа, 3 суток) (корково-мозговое и клеточные соотношения), сужению прелимфатических путей, кровеносных и лимфатических капилляров в тонкой кишке, увеличению числа макрофагов и больших лимфоцитов в лимфе. Выявлено перераспределение СЖК в лимфе, крови, брыжеечных лимфатических узлах и тонкой кишке, что свидетельствует о развитии эндотоксикоза и активации процессов ПОЛ. 4. При введении антагониста кальция морфологические преобразования в регионарном лимфатическом узле печени в начале (3 часа) и середине (3 суток) острого периода реперфузии абдоминальной ишемии свидетельству15 ют об активации транспортной (мозговые и краевой синусы увеличены), барьерно-детоксикационной (увеличение числа плазмоцитов и макрофагов) и ослаблении лимфопролиферативной функций (площадь Т-зависимой зоны и лимфоидных узелков уменьшены) в лимфатических узлах. 5. В условиях введения антагониста кальция в брыжеечных лимфатических узлах в начале (3 часа) и середине (3 суток) острого периода реперфузии абдоминальной ишемии выявлены характерные особенности структурной организации, свидетельствующие об усилении их лимфопролиферативной функции (увеличение площади лимфоидных узелков, паракортекса, числа незрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов, макрофагов) и ослаблении транспортной функции (уменьшение площади мозговых сшгусов). 6. В условиях введения антагониста кальция в подостром периоде реперфузии (14 суток) абдоминальной ишемии, по сравнению с серединой острого периода (3 суток), выявлено восстановление структурно-функциональной организации брыжеечных лимфатических узлов на фоне отсутствия позитивных структурных преобразований в лимфатических узлах печени, анатомическое строение которых свидетельствует об усилении транспорта лимфы, ослаблении лимфопролиферативной функции (уменьшение площади Т-зависимой зоны, лимфоидных узелков), угасашш интенсивности процессов ПОЛ (снижение пула СЖК). 7. Последовательное применение антагониста кальция и фитопрепарата (биологически активная добавка к пище «Гармония Вита Г») в реперфузионном периоде абдоминальной ишемии (14 суток) оказывает выраженное лимфокорригирующее действие: в печеночных лимфатических узлах увеличена площадь коркового вещества, что указывает на активацию их барьерно-детоксикационной функции; в стенке тонкой кишки восстанавливается структурное соотношение слоев, ширина прелимфатических путей; в лимфе, крови, брыжеечном лимфатическом узле и тонкой кишке снижается интенсивность процессов ПОЛ (приближение величин пула СЖК к контрольным значениям). Внедрение результатов в практику Способ применения биологически активной добавки (БАД к пище) «Гармония Вита Г» в качестве вспомогательного средства внедрен в комплекс лечебно-реабилитационных мероприятий терапевтических отделений санатория «Россия» у пациентов, страдающих воспалительными заболеваниями органов пищеварения (659606, Алтайский край, г.Белокуриха, санаторий «Россия»); способ применения БАД к пище «Гармония Вита Г» в качестве вспомогательного средства внедрен в комплекс лечебно-реабилитационных мероприятий детского санатория «Белокуриха» МЗ РФ (659606, Алтайский край, г.Белокуриха, детский санаторий «Белокуриха») у детей, страдающих расстройствами функциональной активности органов пищеварения; метод последовательного применения антагониста кальция «Нимотоп» и фитопрепарата «Гармония Вита Г» при абдоминальной ишемии-реперфузии внедрен в практику научно-исследовательской работы лаборатории функциональной анатомии лимфатической системы ГУ НИИКиЭЛ СО РАМН г. Новосибирска (630117, г. Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 2). 16 Список печатных научных работ Казаковой Е.С., опубликованных по теме диссертации: 1. Печеночный лимфатический узел в ранние сроки ишемии-реперфузии непарных висцеральных ветвей брюшной аорты. // Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфолопш: Материалы научной конференции. - Новосибирск, 2002.- С. 174 - 176 (соавт. Асташов В.В., Казаков О.В.). 2. Брыжеечный лимфатический узел в остром периоде экспериментальной ишемии-реперфузии непарных висцеральных ветвей брюшной аорты. // Сердечно-сосудистые заболевания: Тез. докл. и сообщ. I съезда лимфологов России, Москва 22-23 мая 2003г, Бюллетень НЦССХ им. А.Н.Бакулева РАМН. -Т.4, № 5.С. 38 (соавт. Асташов В.В., Казаков О.В.). 3. Регионарные лимфатические узлы печени и тонкой кишки в условиях фитосорбционной коррекции экспериментальной ишемии-реперфузии непарных висцеральных ветвей брюшной аорты. // Роль санаторно-курортного лечения в процессах реабилитации населения сибирского региона: Материалы научнопрактической конференции.- Новосибирск, 2003.- С. 247-249 (соавт. Казаков О.В.) 4. Печеночный лимфатический узел в постокклюзиоипом периоде непарных висцеральных ветвей брюшной аорты и при фитосорбционной коррекции. // Проблемы лимфолопш и интерстициалыюго массопереиоса: Материалы научной конференции с международным участием - Новосибирск, 2004г.-С. 181-183. 5. Лимфатический регион тонкой кишки в условиях фитосорбционной коррекции при экспериментальной ишемии-реперфузии органов брюшной полости. // Проблемы лимфолопш и интерстициалыюго массопереноса: Материалы научной конференции с международным участием - Новосибирск, 2004г.- С. 183 -185 (соавт. Асташов В.В., Казаков О.В.). 6. Лимфатический регион тонкой кишки при применении блокатора кальциевых каналов «Нимотоп» в норме и при ишемии-реперфузии. // Проблемы лимфолопш и интерстициалыюго массопереноса: Материалы научной конференции с международным участием - Новосибирск, 2004г.- С. 185 - 188 (соавт. Асташов В.В., Казаков О.В.) 7. Роль лимфатической системы в регуляции окислительного гомеостаза в норме, при циркуляториых нарушениях и коррекции. // Проблемы лимфолопш и интерстициалыюго массопереиоса: Материалы научной конференции с международным участием -Новосибирск, 2004г.- С. 230-233 (соавт. Асташова ТА.). 17
