Динамика содержания катионного белка и уровня оптической

ЛИТЕРАТУРА
1. Балаболкин М. И., Клебанова Е. М., Креминская В. М. Дифференциальная диагностика и лечение эндокринных заболеваний. – М.: МИА, 2008. – С. 752.
2. Бондарь Т. П., Козинец Г. И. Лабораторно-клиническая диагностика сахарного диабета и его осложнений. – М., 2003. – С. 88.
3. Захарьина Ю. Л. Метод определения активности глюкозо6-фосфатдегидрогеназы // Лабораторное дело. – 1967. – № 6. –
С. 327–330.
4. Зенков Н. К., Ланкин В. З., Меньщикова Е. Б. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспект. – М.:
Наука, 2001. – С. 340.
5. Каракшев А. В., Вячев Е. П. Микрометоды в клинической лаборатории. – София: Медицина и физкультура. – 1973. – С. 256.
6. Королюк М. А., Иванова Л. И., Монтарева В. Е. Метод определения каталазы // Лабораторное дело. – 1988. – № 1. – С. 16–19.
7. Моин В. М. Простой и специфичный метод определения
активности глутатионпероксидазы в эритроцитах // Лабораторное
дело. – 1986. – № 12. – С. 724–727.
8. Микашинович З. И., Олемпиева Е. В. Состояние антиоксидантного статуса крови при физиологическом и осложненном
течении беременности // Бюллетень сибирской медицины. –
2008. – Т. 7. № 2. – С. 101–105.
9. Музя Г. И., Куликов В. И., Пономарева И. В. и соавторы.
Окисление липопротеинов в крови женщин при патологическом течении беременности // Клиническая лабораторная диагностика. –
1999. – № 3. – С. 8–10.
10. Рагино Ю. Н., Дудкин М. И. Резистентность к окислению
гепарин-осажденных β-липопротеидов сыворотки крови при ишемической болезни сердца // Клиническая лабораторная диагностика. – 1998. – № 11. – С. 3–5.
11. Стальная И. Д., Гаришвили М. Г. Современные методы в
биохимии. – М.: Медицина, 1974. – С. 66–68.
12. Тица Н. У. Клиническая оценка лабораторных тестов. – М.:
Медицина, 1986. – С. 478.
13. Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в
педиатрии. – София, 1963. – С. 726–728.
14. Юсупова Л. Б. О повышении точности определения активности глутатионредуктазы эритроцитов // Лабораторное дело. –
1989. – № 4. – С. 19–21.
15. Ellman G. L. Tissue sulfhydryl groups // Arch. Biochem.
Biophys. – 1959. – vol. 82. – Р. 70–77.
16. Rossen P., Zink S., Tschope D. vascular damage due
to oxidative stress: a pathogenetic concept for diabetic macroand microangiopathy // Structural and functional Abnormalities
in Subclinical Diabetic Angiopathy. – Basel, 1992. – vol. 22. –
P. 23–31.
Поступила 08.01.2010
Г. М. МОГИЛЬНАЯ1, В. А. ПОРхАНОВ2, 3, А. А. ЕВГЛЕВСКИй1, Н. А. ШКОЛЯР1, 3
Кубанский научный медицинский вестник № 2 (116) 2010
В заключение можно сказать, что:
сахарный диабет 2-го типа характеризуется развитием окислительного стресса, более выраженным при
декомпенсированной форме,
рост окисленно-модифицированных форм ЛП у пациентов с СД 2-го типа в стадии декомпенсации обусловлен усилением их окислительной модификации как
за счет неферментативного гликозилирования апобелков, так и в результате повреждения их липидного
компонента активными формами кислорода,
изменение активности гл-6-ФДГ у пациентов с СД
2-го типа может служить биохимическим маркером
уровня компенсации гипергликемии и использоваться
в качестве критерия эффективности проводимого лечения,
рост коэффициента СОД/каталаза у пациентов с
СД 2-го типа в стадии декомпенсации можно считать
компенсаторно-приспособительной реакцией, направленной на стимуляцию эндотелийнезависимой вазодилатации.
ДИНАМИКА СОДЕРЖАНИЯ КАТИОННОГО БЕЛКА И УРОВНЯ
ОПТИЧЕСКОЙ АНИЗОТРОПИИ ХРОМАТИНА НЕЙТРОФИЛЬНЫХ
ГРАНУЛОЦИТОВ В УСЛОВИЯХ ИСКУССТВЕННОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ
Кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии Кубанского государственного
медицинского университета,
Россия, 350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4;
2
кафедра онкологии с курсом торакальной хирургии
ФПК и ППС Кубанского государственного медицинского университета,
Россия, 350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4;
3
краевая клиническая больница № 1 им. профессора С. В. Очаповского,
Россия, 350086, г. Краснодар, ул. 1 Мая, 167. Е-mail: nwe200477@mail.ru
1
Ключевые слова: нейтрофильные гранулоциты, искусственное кровообращение, катионный белок, анизотропия
хроматина.
УДК 616.12-005.78:615.211
Методами поляризационной микроскопии и цитохимии изучены топологические характеристики ядер НГ периферической
крови у 116 кардиохирургических больных в условиях искусственного кровообращения, а также содержание катионного белка в их цитоплазме. Показано, что в период первых 30 минут искусственного кровообращения наблюдается прогрессивное
снижение уровня анизотропии ядерного хроматина НГ, свидетельствующее об увеличении его биологической активности и
уменьшении содержания катионного белка НГ, что, видимо, связано с активным его расходованием в системе кровотока.
В период с 60-й минуты ИК и до конца исследования происходит постепенное уменьшение биологической активности хроматина НГ при достаточно высоком уровне расходования КБ.
73
G. M. MOGiLnAyA1, v. A. POrkhAnOv2, 3, A. A. EvGLEvSkiy1, n. A. ShkOLyAr1,3
DyNAmiCS of CATioNiC PRoTEiN CoNTENT AND THE LEvEL of oPTiCAL ANiSoTRoPy
of CHRomATiN of NEUTRoPHiLS gRANULAR LEUKoCyTES iN CoNDiTioNS
of CARDioPULmoNARy ByPASS
Chair of histology, cytology and embryology of Kuban state medical university,
Russia, 350063, Krasnodar, 4 Sedina str.;
2
chair of oncology with a course of thoracic surgery – faculty of advanced training and retraining
of specialists of Kuban state medical university,
Russia, 350063, Krasnodar, 4 Sedina str.;
3
regional clinical hospital № 1 named after professor S. V. Ochapovskiy,
Russia, 350086, Krasnodar, 1 Maya str., 167. E-mail: nwe200477@mail.ru
Кубанский научный медицинский вестник № 2 (116) 2010
1
Topological characteristics of HgL nucleuses of peripheral blood by 116 cardiac surgery patients in conditions of cardiopulmonary
bypass as well as cationic protein content in their cytoplasm were researched by the methods of polarization microscopy and
cytochemistry. it was found out that during the first 30 minutes of cardiopulmonary bypass there is a progressive level recession of
anisotropy of HgL nuclear chromatin which indicates enhancement of its bioactivity and reduction of HgL content which is obviously
connected with the active expenditure of HgL in the system of blood flow. During the period from the 60th minute and up till the end
of the research there is gradual reduction of bioactivity of HgL chromatin whilst a quite high level of CP expenditure.
Key words: neutrophils granular leukocytes, cardiopulmonary bypass, cationic protein, anisotropy of chromatin.
Важным достижением современной кардиохирургии является развитие методов искусственного кровообращения (ИК). В современной литературе имеется
достаточно большое количество работ, посвященных
вопросу взаимодействия клеток крови с контуром ИК
[9, 11, 14, 17]. Известно, что наиболее уязвимым звеном в период ИК являются форменные элементы крови, повреждение которых запускает каскад реакций,
приводящих к дисфункции многих систем организма
[3, 5, 12, 13, 14, 16]. У большинства пациентов функциональные резервы системы крови достаточны для
развития компенсаторных реакций после ИК, однако у
тяжело больных могут иметь место осложнения, инициируемые активированными нейтрофилами, поскольку выделяемые ими вещества, участвующие в килинге
бактерий и фагоцитарных реакциях, обладают и огромным повреждающим эффектом. В связи с этим вопрос
о функциональном статусе нейтрофильных гранулоцитов (НГ) периферической крови в условиях ИК остается
открытым. Известно, что одним из интегральных показателей биологической активности НГ является хроматин ядра [1, 2, 4, 8]. Изменения, затрагивающие ядра
НГ, могут быть выявлены на более ранних этапах патологического процесса, что представляется важным в
аспекте профилактики осложнений.
Целью настоящего исследования является оценка
функционального статуса ядерного хроматина, выявляемого по степени его анизотропии, а также изучение
уровня содержания катионного белка в нейтрофильных
гранулоцитах крови.
Материалы и методы
74
Изучены мазки венозной крови, полученные у 116
кардиохирургических больных Центра грудной хирургии краевой клинической больницы № 1, оперированных по поводу маммарокоронарного и аутовенозного
аортокоронарного шунтирования, и 10 здоровых лиц,
составивших группу контроля. Пациенты были разделены на две группы. В первой группе для вводного наркоза и поддержания общей анестезии через аппарат
ИВЛ использовали препарат «cеворан». Этот препа-
рат был включен и для поддержания общей анестезии
во время искусственного кровообращения. Во второй
группе пациентов для вводного наркоза и поддержания
общей анестезии использовали фентанил и пропофол
с обычной нормовентиляцией ИВЛ.
Забор мазков крови проводился: за одни сутки до
операции, через десять минут после премедикации,
через десять минут после интубации, через пять минут
после введения гепарина, через 5, 15, 30 и 60 минут
после начала ИК, на момент «стоп» ИК, через 5 минут
после введения протамина, через 2–З часа, а также на
1-е и 5-е сутки послеоперационного периода.
Мазки крови окрашивали на катионный белок раствором амидо черного 10 Б при рН 8,2 [7]. Биологическую активность хроматина НГ определяли по уровню
оптической анизотропии ДНК ядер НГ, окрашенных
толуидиновым синим при рН 5,0, обработанных после
солянокислого гидролиза солянокислым гидроксиламином для возникновения эффекта двулучепреломления, который выражен тем сильнее, чем более упорядоченной является структура ДНК в изучаемых ядрах
[1, 2, 4, 8] (рис. 1). Для оценки содержания катионного
белка и уровня анизотропии использовали полуколичественный метод Astaldi и verga и его модификацию,
адаптированную для изучения степени анизотропии
ядерного хроматина [2, 10]. Полученные данные обрабатывали на ЭВМ с помощью программы «micro Stat»
фирмы «Borland Corparations».
Результаты и их обсуждение
Анализ анизотропии ядерного хроматина нейтрофильных лейкоцитов крови у лиц контрольной группы
показал, что ее значения колеблются от 0,95 до 1,51,
составляя в среднем 1,23 ± 0,06 усл. ед. (рис. 2). Уровень содержания катионного белка у этих же лиц оказался равным в среднем 1,89 ± 0,09 усл. ед. (рис. 2).
У больных кардиологическими заболеваниями
за сутки до операции уровень анизотропии ядерного хроматина НГ составил 1,29 ± 0,08 усл. ед., лишь
незначительно (на 4,8%) превышая уровень анизотропии хроматина, у лиц контрольной группы. Данное
Б
Рис. 1. Нейтрофильные гранулоциты с высоким (А) и средним (Б)
уровнями анизотропии хроматина (окраска толуидиновым синим при рН 5,0)
различие не было статистически значимо (Р>0,05).
В это же время содержание катионного белка у кардиохирургических пациентов в среднем составило
1,56 ± 0,08 усл. ед., что было на 18% меньше уровня
значений, характерных для лиц контрольной группы
(Р<0,05) (рис. 2).
После премедикации показатель уровня анизотропии ядер НГ составил 1,18 ± 0,12 усл. ед. (Р>0,05), а
содержание КБ НГ – 1,42 ± 0,13 усл. ед. Это значение
на 25% было меньше уровня, характерного для здоровых лиц, при этом данное различие было статистически значимо (Р<0,001).
Кубанский научный медицинский вестник № 2 (116) 2010
А
А
Б
Рис. 2. Содержание катионного белка в цитоплазме нейтрофильных гранулоцитов (А)
и уровень анизотропии хроматина их ядер (Б) в разные сроки проведения искусственного
кровообращения (БС – без использования севорана, С – с использованием севорана)
75
Кубанский научный медицинский вестник № 2 (116) 2010
76
После интубации в первой группе пациентов уровень анизотропии ядерного хроматина НГ составил
1,09 ±0,1 усл. ед., что оказалось на 13,8% ниже значений, характерных для лиц контрольной группы. Во
второй группе уровень анизотропии ядерного хроматина НГ равнялся 1,19 ±0,11 усл. ед., что также было на
3,36% ниже контрольного уровня (P>0,05). Cодержание
КБ у лиц первой группы составило 1,46±0,06 усл. ед.,
что было на 22,75% ниже уровня значений, характерных для лиц контрольной группы. Аналогичные показатели для лиц второй группы также были на 27% ниже
контрольных значений. Выявленные различия являются статистически значимыми (Р<0,001 и Р<0,01 соответственно).
После введения гепарина в первой группе пациентов уровень анизотропии ядерного хроматина НГ
был снижен на 18,7% от уровня контроля и составил
1,0±0,11 усл. ед. Во второй группе аналогичный показатель также оказался на 10,6% меньше контрольных
значений и составил 1,1 ± 0,07 усл. ед. Содержание КБ
по отношению к контролю также снизилось на 25,4%
в первой и на 23,3% во второй группах пациентов
(рис. 2). Статистически значимых различий между
группами по уровню анизотропии ядерного хроматина
и уровню содержания катионного белка выявлено не
было (Р>0,05).
Начиная с 5-й минуты ИК отмечается значительное снижение анизотропии ядерного хроматина и
содержания катионного белка. При этом в первой
группе анизотропия ядерного хроматина на 30%, а во
второй группе – на 22,5% ниже исходного. Содержание КБ в первой группе на 23,7%, а во второй группе
на 16,67% ниже исходного (1,56 ± 0,08 – за одни сутки до операции).
К 15-й минуте ИК снижение анизотропии ядерного хроматина НГ в первой группе достигает 56,6%
(Р<0,001) и 30,23% (Р<0,001) во второй по отношению
к исходному. Содержание катионного белка в первой
группе на 39,1% и во второй группе на 17,95% ниже
контрольного. Различия между двумя сравниваемыми
группами по степени анизотропии ядерного хроматина
и уровню содержания катионного белка в этот период
статистически достоверны (Р<0,001).
Период 30–60-й минуты ИК характеризуется постепенным увеличением уровня анизотропии ядерного
хроматина после предшествующего снижения, он составил 0,8±0,07 усл. ед. (Р<0,001). Однако эти показатели для лиц первой группы на 37,98%, а для второй
группы – на 35,66% (Р<0,001) ниже значений, характерных для исходного уровня. При сравнении двух групп
пациентов оказалось, что у лиц, оперированных в отсутствие препарата «севоран», уровень анизотропии
ядерного хроматина НГ на 10% выше, чем у лиц, оперированных в условиях его использования (Р>0,05).
Уровень содержания КБ достигает максимума к 60-й
минуте и снижается на 44,23% (Р<0,001) для лиц первой группы, тогда как во второй группе уровень его
содержания максимальный на 30-й минуте. Различие
уровня содержания КБ между группами статистически
достоверно (Р<0,01).
На момент «стоп»-ИК уровень анизотропии ядерного хроматина в первой и во второй группах пациентов
продолжает постепенно нарастать, составляя 1,0 ± 0,1
и 1,01 ± 0,08 усл. ед. соответственно, но остается на
22,5% и 21,7% ниже исходного. По отношению к первой
группе различия нивелировались.
Уровень содержания КБ в этот же срок несколько
нарастает (1,03±0,06 усл. ед.), но в первой группе остается ниже исходного на 34% и на 33,5% ниже аналогичного значения у лиц, оперированных без использования севорана ( Р<0,001) (рис. 2).
Первые сутки после ИК сопровождаются снижением уровня анизотропии ядерного хроматина
до 49,61% у лиц первой группы, а во второй группе
снижение уровня ядерного хроматина НГ составило
36,43% ниже исходного значения (Р<0,001). Катионный белок в первой группе на 20% и во второй на
11% ниже исходного. При сравнении двух групп различия недостоверны.
К 5-м суткам после ИК уровень анизотропии ядерного хроматина у лиц первой группы несколько возрос,
но остался ниже исходного на 21,71%. У лиц второй
группы также на фоне некоторого роста анизотропии
он остается ниже исходного (на 8,53%). Катионный белок по уровню его содержания у лиц первой группы в
послеоперационный период практически не меняется, оставаясь ниже исходного на 20%. Для пациентов
второй группы это снижение было несколько меньшим
(10,9%) (рис. 2 А).
Полученные нами результаты говорят о том,
что в условиях проведения ИК наблюдается прогрессивное снижение уровня анизотропии ядерного хроматина, свидетельствующее об увеличении
его биологической активности, а также уменьшении содержания КБ НГ, что, по нашему мнению,
связано с активным его расходованием в системе
кровотока, инициированным условиями ИК. Эти
явления достигают максимума через 30 минут от
начала ИК, при этом при использовании препарата «севоран» они имеют более выраженный характер. Данный эффект регистрируется на всех сроках
наблюдения у лиц первой группы. В период с 60-й
минуты ИК происходит постепенное уменьшение
биологической активности хроматина НГ, тогда
как уровень расходования КБ, свидетельствующий
об активности микробицидной системы, остается
достаточно высоким.
ЛИТЕРАТУРА
1. Васильев Ю. М. Опухолевые клетки и их микроокружение //
Вопр. онкологии. – 1984. – Т. 25. – С. 96–103.
2. Евглевский А. А. Способ определения активности системы нейтрофильных лейкоцитов при язвенной болезни. Патент на
изобретение № 22569112. Зарегистрировано в Госреестре изобретений РФ 20 июля 2005 года.
3. Еременко A. A., Зюляева Т. П., Егоров В. М., Сидоренко Я. В.,
Фоминых В. М. Влияние мексидола на выраженность системного воспалительного ответа у больных при операциях реваскуляризации миокарда в условиях искусственного кровообращения //
Кардиология и сердечно-сосудистая хирургия. – Издательство
«Медиа Сфера, 2008. – № 1. – Том. 1. Раздел «Анестезиология и
кардиореанимация».
4. Могильная Г. М. Евглевский А. А. Пейливаньян Э. Г., Дудецкий В. И., Алифанова Г. Ф., Ковтуновская И. В. Топологические особенности хроматина нейтрофильных гранулоцитов крови и синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом //
Инновационные технологии в морфологии. – СПб, 2007. –
С. 112–114.
5. Морозов Ю. М., Чарная М. А.., Гладышева В. Г., Савостьянова Н. М. Влияние различных коллоидных растворов на функцию
почек у больных, оперированных в условиях искусственного кровообращения // Кардиология и сердечно-сосудистая хирургия. –
12. Mojcik C. F., Levy J. H. Aprotinin and the systemic inflammatory
response after cardiopulmonary bypass // The Annals of Thoracic
Surgery. – 2001. – vol. 71. – P. 745–754.
13. Levy J. H., Tanaka K. A. inflammatory response to
cardiopulmonary bypassThe Annals of Thoracic Surgery. – 2003. –
feb. № 75 (2). – P. 715–720.
14. Novitsky V. V., Chumakova S. P., Shypulin V. M., UrazovaO. I.,
Yevtushenko O. M., Perevozchikova T. V., Suslova T. Ye.,
Yemelyanova T. V. The interconnection between cytokines and
thefactors of bactericidal action of neutrophiles in patients operatedon
under the conditions of cardiopuimonary bypass // Annals of the
Russian Academy of medical Sciences. – 2006. – № 6. – P. 13.
15. Pearse A. G. E. Histochemistry, theoretical and applied, Ed.
ii-a, Ed. Эренпрейса Е. А. Little. Brown. – Boston, 1962. – Р. 962.
16. Pillai J. B., Suri R. M. Coronary Artery Surgery and Extracorporeal
Circulation: The Search for a New Standard // journal of Cardiothoracic
and vascular Anesthesia. – 2008. – № 22 (4). – Р. 594–610.
17. Teague T. K., Marrack P., Kappler J. W., Vella A. T. iL-6
rescues resting mouse T cells from apoptosis // j. immunol. – 1997. –
jun. vol. 15. № 158 (12). – P. 5791–5796.
Поступила 22.12.2009
В. Г. НИжНИК, М. А. БОНдАРЕНКО, А. Н. БОНдАРЕНКО, С. А. ТРИАНдАФИЛОВ
ЛЕЧЕНИЕ ПАРОДОНТИТА
ИММОБИЛИЗИРОВАННЫМИ РАСТИТЕЛЬНЫМИ СРЕДСТВАМИ
Кафедра стоматологии ФПК и ППС
Кубанского государственного медицинского университета,
Россия, 350063, г. Краснодар, ул. Кубанская набережная, 52/1, оф. 5. E-mail: bma_doc@mail.ru
При обследовании и лечении 134 пациентов с генерализованным пародонтитом средней степени тяжести было установлено, что применение пластин «ЦМ-1» и «ЦМ-2» повышает эффективность местного лечения заболеваний пародонта.
Происходит более быстрое достижение положительных результатов лечения и увеличивается длительность периода ремиссии.
Кубанский научный медицинский вестник № 2 (116) 2010
Издательство «Медиа Сфера», 2008. – № 1. – Том. 1. Раздел
«Анестезиология и кардиореанимация».
6. Пигаревский В. Е., Мазинг Ю. А. // Лаб. дело. – 1981. –
№ 10. – С. 579–582.
7. Славинский А. А., Никитина Г. В. Цитохимическое выявление катионных белков гранулоцитов крови амидо черным 10Б для
визуальной оценки и компьютерного анализа изображений // Клин.
лаб. диагн. – 1999. – № 2. – С. 35–37.
8. Фрейвальдс Т. И. Условия появления двойного лучепреломления ядерной ДНК // Функциональная морфология органов в
патологии. – Рига, 1980. – С. 79–80.
9. Aderka D., Le J., Vilcek J. Characterization of T-Cell Clones
Derived from Peripheral Blood Lymphocytes of a Patient With
Transfusion-Associated graft-versus-Host Disease: fas-mediated
Killing by CD4+ and CD8+ Cytotoxic T-Cell Clones and Tumor Necrosis
factor Production by CD4+ T-Cell Clones // Blood. – 1997. – vol. 89.
№ 4 (february 15). – P. 1440–1445.
10. Astaldi G. Verga L. // Acta haematol. (Basel). – 1957. –
vol. 173. – P. 129.
11. Kozik D. J., Tweddell J. S. Characterizing the inflammatory
response to cardiopulmonary bypass in children // The Annals of
Thoracic Surgery. – 2006. – vol. 81. – P. 2347–2354.
Ключевые слова: пародонтит, лечение, растительные средства.
v. G. niZhnik, M. A. BOndArEnkO, A. n. BOndArEnkO, S. A. TriAndAFiLOv
TREATmENT of PERioDoNTiTiS WiTH immoBiLiZED HERBAL REmEDiES
Dentistry department F. I. Q. and P. R. S. Kuban state medical university,
Russia, 350063, Krasnodar, Kubanskaya naberezhnaya, st. 52/1, of. 5. E-mail: bma_doc@mail.ru
Key words: periodontitis, treatment, herbal remedies.
Эффективное лечение заболеваний пародонта является одной из приоритетных задач современной стоматологии [2]. Важность этой проблемы обусловлена, с одной
стороны, широким распространением данной патологии
среди населения, а с другой стороны, недостаточно высокой эффективностью методов традиционной терапии [3].
Всё это определяет значительную актуальность
проблемы совершенствования методов диагностики,
лечения и профилактики воспалительных заболеваний
пародонта [4].
В комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта важную роль играет эффективная медикаментозная терапия, но клинический опыт
свидетельствует о быстрой инактивации большинства препаратов в условиях влажной, биологически
активной среды ротовой полости. Кроме того, участившиеся аллергические реакции организма на лекарственные препараты, полученные химическим
путём, побудили многих исследователей обратить
внимание на средства природного происхождения.
УДК 616. 314. 17 – 008.1 – 085 – 24
During the examination and treatment of 134 patients with generalized periodontitis moderate rate of severity the fact was found
that «ЦМ-1» and «ЦМ-2» plates application increased the effectiveness of periodontal diseases local treatment. The positive treatment
results were achieved faster and the duration of remission was longer.
77