1 Как работает ДНК-тест Pink or Blue
advertisement
Как работает ДНК-тест Pink or Blue® (Розовое или Голубое) на определение пола ребенка Доц.Др.Кристина Морк, Анна Витебский М.А., М.С.Мишель Хоу & Доц.Др. Бо Преисинг Дата публикации : 16 октября 2008 г. Консумер Генетикс После того, как удостоверились в том, что беременны и чтобы установить с ребенком крепкие материнские узы, сделать жизнь еще прекраснее вместе с ним или с ней (мальчик или девочка) вы желаете узнать пол ребенка? Исследования, установившие физические и психологические аспекты материнской узы, показали переход клеток матери и ребенка из одного тела в другое для борьбы против болезней. После того, как станет известным новость о беременности многие будущие родители начинают думать о поле ребенка – девочка или мальчик. В данной работе мы предлагаем вашему вниманию тест на базе ДНК - Pink or Blue® (Розовое или Голубое) на определение пола ребенка и подробно расскажем о научном методе, применяемый для обеспечения степени точности более 95% (разработан на основе исследовании департамента совершенствования качества). Наша миссия – обеспечение информацией, которой можете воспользоваться для более раннего установления вами отношений с неродившимся ребенком. Pink or Blue® является продуктом прямого потребления, не нуждающийся в сертификации органа Клинико-лабораторного совершенствования изменении (Clinical Laboratory Improvements ActCLIA) либо утверждения Управления по надзору за пищевыми продуктами и лекарственными препаратами (FDA). FDA не тестирует, так как с медицинской точки не классифицирует и не продает в качестве прибора для медицинского анализа. Однако Консумер Генетикс работает над получением ISO 9001 (стандарт управления качеством), а также аккредитации CLIA. Компания верит в то, что качественная система обеспечивает более эффективное применение на практике. Pink or Blue® - уникальный ДНК-тест, определяющий пол плода в течение 10 недель после последнего менструального цикла либо 7 дней после оплодотворения яйцеклетки. Эта процедура является неразрушающей и не имеет какого-либо воздействия на здоровье плода либо матери. Компания Консумер Генетикс не предоставляет каких-либо медицинских анализов, рекомендации, курсы лечения либо не претендует на медицинскую теорию. Существующие медицинские процедуры как амниоцентез, пробы ворсинчатого хориона (CVS) и УЗИ на более поздних сроках беременности используются для определения пола плода. Однако данные процедуры проводятся только для анализов. Все клинические методы могут иметь некоторые рискованные последствия для ребенка. На таблице с правой стороны указаны промежутки времени, когда применимы данные тесты. Амниоцентез применим на ранних сроках, на 9 неделе беременности и имеет рискованные последствия как прекращение беременности и иные ослажнения беременности (инфекции, преждевременные роды, повреждение плода, плаценты, разрыв мембраны и тп). Тест проводится в течение 2-4 недель и степень точности около 99%. Тест CVS проводится между 8 11 неделями беременности и как правило применяется для женщин с высокой степенью генетичесих аномалии. Результат получается в течение 7-14 дней и данный тест имеет риск прекращения беременности. Последние исследования показывают, что при проведении CVS раньше 10 недель беременности может иметь рискованные последствия как деформация органов и серьезное уменьшение амниотической жидкости. Кроме того, вследствие отличия клеточной генетики ворсинчатого хориона и фетуса существует риск ошибки результата о беременности. Степень точности определения пола около 99%. 1 Первые триместра Вторые триместра Неделия после зачатия 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Таблица применяемости теста на определение пола Первый день последней менструации 1-я неделя Предположительная 2-я неделя дата зачатия 3-я неделя 4-я неделя Тест на 5-я неделя беременность 6-я неделя 7-я неделя 8-я неделя 9-я неделя Время проведения 10-я неделя ДНК-теста Pink or Blue 11-я неделя на поределение 12-я неделя пола CVS 13-я неделя 14-я неделя 15-я неделя 16-я неделя Амниоцентез 17-я неделя 18-я неделя 19-я неделя 20-я неделя УЗИ 21-я неделя 22-я неделя 23-я неделя Множество публикации указывают на возможность применения УЗИ для определения пола. Степень точности результата узи, проведенные от 13 до 17 недель колеблется между 80-95%, однако многие врачи не контролируют пол до проведения официальных УЗИ, которые как правило проводятся на втором либо третьем триместре. На данном этапе степень точности как правило около 97% в зависимости от используемой научной публикации и способностей специалиста УЗИ1. Иные тесты для определения пола плода используют моча, как при наркологическом тестировании либо тестировании на беременность и утверждают точность определения на 82%, однако данный метод не имеет научного обоснования 2 . Данные тесты можно проводить в домашних условиях, однако как правило клиенты получают неправильный результат. Как работает ДНК-тест Pink or Blue®? 1 MICHAILIDIS, GD et. al., ‘The use of three-dimensional ultrasound for fetal gender determination in the first trimester’, The British Journal of Radiology, 76 (2003), 448-451, 2003 2 Intelligender website, FAQ, http://www.intelligender.com/pages.php?pageid=6#3, Октябрь 2008 г. 2 На протяжении более десяти лет известно, что кровь беременной женщины содержит в малых количествах эмбриональные клетки ДНК 3 . ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота, носитель генетической информации, определяющий отличительные свойства каждого человека. ДНК находится внутри ядра клетки в спиралеобразных нитях, называемые хромосомами. Человек имеет 46 хромосома, из которых два Х и Y половые хромосомы (не забывайте, что ХY мужчина, ХХ женщина). В 1990-х годах для определения ДНК был внедрен ускоренный, серьезный, чувствительный и специфичный метод основанный на полимеразную цепную реакцию (PCR) и ускоренное развитие сегментов молекул ДНК. PCR обеспечивает исследователям из малого количества исходного материала специфичной ДНК серии произвести миллионы копии. ДНК хромосома Y необходим для зачатия мальчика, поэтому наш тест осуществляет поиск ДНК хромосома Y путем повышения данного сигнала (означает создание миллионных копии специфичного ДНК). Поиск в малых количествах ДНК Y сложно и для качественного результата осуществляется множество контролей. Традиционная методика для процесса определения в клинических условиях ДНК хромосома Y в крови матери опубликована в журнале Journal of Human Genetics, 2005 г. Галбиати и другие взяли кровь 1837 беременных женщин на разных периодах их беременности и эмбриональный ДНК выделили на ранней стадии беременности, на 5-й неделе. Это состояло из преждевременных родов, прерывания беременности и нормальных родов. Изолированный ДНК повысили с помощью PСR и проанализировали. Результаты теста подтверждались после рождения ребенка. Тест на определение пола оказался точным на 99%. Примечание : 99% точность в исследовательской работе Галбиати достигнута при контролируемых условиях и обьемным количеством пробы крови. Степень точности теста Pink or Blue® более 95% расчитана на основании нижеизложенных внутренних исследований. Тест Pink or Blue® является достаточно правильным при определении наличия в крови матери мужского ДНК. Однако имеются некоторые обстоятельства, служащие причиной присутствия мужского ДНК в крови матери как переливание крови, неоднакратная беременность либо трансплантация костного мозгаю Указанные факты хоть и редко влияют на результат теста. Тест Pink or Blue® НЕ РЕКОМЕНДУЕМ в случае присутствия в вашей одного либо более из нижеуказанных фактов : Выкидыш либо аборт в течение трех месяцев перед беременностью Трансплантация от мужчины костного мозга Переливание крови за последние 18 месяцев Прием лекарственных препаратов для лечения болезни по крови и/или назначено антикоагулирующее лечение. Предлагаемая нами патентованная технология для правильного определения пола плода использует естественный процесс движения ДНК от крови эмбриона к крови матери. Тест на определение пола опробован на более 6000 женщин на ранних периодах – до 7 недель беременности. Для выделения ДНК и затем повышения ДНК хромосома Y эмбриона процедура осуществляется путем очищения образца крови на генетической карте. В отличие от метода Галбиати отпадает необходимость извлечения крови и используем крови на 100-1000 раз меньше. Отсутствие ДНК хромосома Y свидетельство пола плода девочки, а присутствие ДНК хромосома Y мальчика. 3 PCR detection of cell-free circulating fetal DNA in maternal plasma and serum (Lo et al. Lancet 1997; 350:485-7), Earliest detection of fetal DNA: 5 weeks of gestation (Prenatal Diagnosis, 2003; 23:1042), Source of fetal DNA? Passive diffusion across placental barrier (van Wijk et al. Clinical Chemistry, 2000; 46:729-731) 3 Тест Pink or Blue® легко применим в домашних условиях. Состоит из спиртованного материала для чистки пальца, скальпелей (ножей) и генетической карты для забора капель крови. Карта и форма-подтверждение направляется в нашу лабораторию. Для достаточно точного определения пола ребенка необходима информация, заполненная в форму. Наша технология более чувствительна от существующих методов и поэтому правильно определяет всего лишь тремя каплями крови матери (достаточное количество капли, заполняемое один кру на генетической карте). Несмотря на то, что результат можно получить от малого количества крови, на случай предотвращения неверного результата просим заполнить все три круга на карте. Для гарантии качества и обеспечения надежности образей ДНК тестируем два раза. Если ребенок мальчик, то в образце будет присутствовать специфический мужской ДНК. Как определяем верность теста Для проверки верности теста разработали метод совершенствования качества, которого используем для улучшения процесса в целях достижения 99% точности теста. Для признания клиентами нашего результата возможен запрос независимого заключения, в этой связи после тестирования клиентам рекомендуем две клиники. Обе клиники находятся в г.Калифорния. теперь хотим рассказать лабораторное определение пола. Отбор образца Образцы состоят от крови матери, отобранная на генетическую карту. Генетическая карта надежно полимеризует кровь для отправки почтой. По поступлении в лабораторию бумага карты разрывается и проводится процедура очистки. Для данной работы использованы карты 31 клиента, поступившие в лабораторию в сентябре 2007 – марте 2008 г. образцы отобраны на оснований следующих критериев : 1) Кровь извлечена не ранее 7 недель, расчитанная по онлайн календарю беременности компании Консумер Генетикс, 2) определенный пол сообщен клиенту, 3) результат теста подтвержден УЗИ, амниоцентезом либо свидетельством о рождений (при исследованиях верим в то, что клиенты дают правильные сведения, однако не всегда так бывает). Основная процедура ДНК выделяется от генетической карты, затем всевозможные скопления клеток выделены от протеина и РНК. Очищенный ДНК готов для повышения методом PCR. При помощи метода PCR осуществляется поиск ДНК хромосома Y. При повышений PCR ДНК хромосома Y, образец представляет мальчика, а при отсутствии повышения образец представляет девочку. Что включает контроли? Контроль выделения и очищения ДНК включает контроль одной женской ДНК, очищенная параллельно партии образцов десяти клиентов. Контроль женского ДНК используется для определения сигнала заднего плана процесса повышения хромосома (не забывайте, что процесс направлен только на повышение мужского ДНК эмбриона, поэтому женский ДНК остается на заднем плане). 4 1. Выполните надрез на пальце при помощи скальпеля ДНК-теста Pink or Blue 2. На надрезанный палец нажимайте до появления капли крови. 3. Капните кровь на карточку. Затем направить образец в лабораторию для тестирования. Для индивидуальных проб образцы включают контроль на загрязнение; контроль результата выделения и очищения ДНК. Кроме того разработали несколько методов для подтверждения наличия развитого мужского ДНК. Наличие развитого ДНК загрязняет образец и затрудняет повышения мужского ДНК эмбриона. Мы исследуем определенные сегменты развитого хромосома Y, отличного от хромосома Y эмбриона. Их присутствие свидетельствует о загрязнений. Данные результаты 100%. Тест ингибирования использует в малом количестве развитый мужской ДНК, преднамеренно добавленный в образец. Вследствие целенаправленного размещения ДНК хромосома Y, контроль ингибирования должен показать его поышение. Если при этом повышение отсутствует, то означает наличие в реакции загрязнителей, препятствующие образование процессом большего ДНК. Анализ Аппарат PCR выдает цифры, обозначающие количество ДНК хромосома Y в образце ДНК. Затем анализируется соответствие данных параметров между умя пороговыми величинами (нижняя и верхняя величина). Для получения правильного результата достаточна зона между верхней и нижней величинами. Это очень важный момент. В случае недоказательного (недостаточного) результата и с условием наличия в достаточном количестве процедура проводится повторно. Изучение новых параметров пороговой величины как правило обеспечивает надежное определение пола. Если повторная процедура также не обеспечит достаточных данных, то запрошиваем у клиента новый образец. При повторном направлении образца, результат будет более точным так как по мере возростания срока беременности у женщины повышается количество эмбрионного ДНК (тем самым. Если плод мальчик, то будет прослеживаться четко). Недоказательные результаты невозможно охарактеризовать правильно. При повторном тестировании недоказательные результаты не учитываются. Верные и неверные результаты характеризуются при удовлетворении либо неудовлетворении результатов (мальчик или девочка) сведении исследования. Заключение После выделения образцов не прошедшие контроли при исследовании использованы образцы 31 клиента. Учитывался процесс только первичного очищения (прошедшие контроли индивидуального образца). Получили 4 недоказательных результата с недостаточностью 12,9%. Как правило выполняется два очищения и данная процедура состоит из процесса очищения были изъяты образцы с параметрами недоказательных результатов. Из 27 результата 26 5 оказались верными результатами, что означает степень точности 96,23%. Имелись 12 верно определенных мальчика и 14 верно определенных мальчика и один неверный положительный результат и отсутствие неверного отрицательного результата. Специфичность 92,3% и чувствительность 100%. НЕДОКАЗАННЫЙ ПРОМЕЖУТОК Девочка Мальчик Диспут Заключение содействует определению обстоятельств для минимизации факторов, влияющие на верность теста : Несоблюдение инструкции по применению : неправильная доставка комплекта, неправильное очищение рук и недостаточные гигиенические условия Загрязнение образца : контакт мужчин с комплектом либо содействие отбору образца Проведение теста ранее 7 недель беременности Переливание крови, выкидыш либо аборт Недостаточное количество образца крови Хранение образца в теплых местах. Заключение содействует определению неконтролируемых факторов, влияющие на верность теста : Естественный низкий ДНК эмбриона в ранних периодах беременности не обеспечит достаточный ДНК для определения пола Исчезнувшие близнецы : некоторые беременности начинаются более одним эмбрионом, однако в ранних периодах беременности один из эмбрионов исчезают. Во многих случаях женщины не попдзревают произошедшее. Если исчезнувший эмбрион «мальчик», а оставшийся девочка, то результат Pink or Blue® может быть неверным, однако при наших качественных контрольных прцедурах это случается очень редко. Предыдущая беременность на мальчика : в редких случаях, эмбрионные клетки могут сохраниться в организме еще несколько лет. Наша технология позволяет определить некоторые ДНК в форме загрязнения, однако надо отметить, что данные редкие случай могут воздействовать на результат теста. Трансплантация от мужчины-донора костного мозга, переливание крови, выкидыши либо аборты : наша технология позволяет определить некоторые в форме загрязнения ДНК переливание/трансплантацию костного мозга от мужчины-донора либо рождение мальчика при предыдущей беременности, однако надо отметить, что могут быть факторы, воздействовующие на результат теста. Резюме : Точность нашего метода, установленная на основе проверенного на образцах - 96,23%. Компания Консумер Генетикс продолжает работу по совершенствованию и улучшению точности теста Pink or Blue® на определение пола в ранних периодах беременности. Цель – обеспечить точность более 95%. Для улучшения теста предусматривается разработка еще более надежного метода на определение степени загрязнения и применение более эффективных контрольных методов для непрерывной работы катализатора и оборудования. 6
