трансплантация эмбрионов - Haka
advertisement
ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЭМБРИОНОВ www.haka-alkiot.fi ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЭМБРИОНОВ...........2 ДОНОРЫ И РЕЦИПИЕНТЫ ЭМБРИОНОВ...................................................3 ПРИНЦИПЫ ВЫМЫВАНИЯ И ПЕРЕСАДКИ ЭМБРИОНОВ..........................4 ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЭМБРИОНОВ ПОЭТАПНО...........................6 ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЭМБРИОНОВ Введение Одна корова за свою жизнь может дать только несколько телят. Приблизительно половина телят бычки. От одного быка-производителя можно получить за всю жизнь несколько тысяч потомков. При использовании трансплантации эмбрионов от одной генетически ценной коровы можно получить большое количество телят. Трансплантация эмбрионов – хороший метод для генетического улучшения скота. Для вымывания и пересадки эмбрионов требуются специальные знания. Наилучшие результаты получают после длительного опыта. В Финляндии трансплантация эмбрионов является важной частью разведения молочных и мясных пород скота и фермеры охотно используют возмож- ность трансплантации. Эмбрионами можно торговаться на внутреннем рынке, а также экспортировать или импортировать их. Оплодотворенные яйцеклетки, т.е. эмбрионы, вымывают через семь дней после осеменения из матки высокоценной коровы, после чего пересаживают эмбрион в матку коровы-реципиента. Если эмбрион прикрепляется к стенке матки реципиента, то корова-реципиент рожает теленка выше её собственного генетического уровня. В этом справочнике находится короткая информация о вымывании и пересадке эмбрионов. Надеемся, что вы найдете здесь основные принципы и основы для практической работы. ДОНОРЫ И РЕЦИПИЕНТЫ ЭМБРИОНОВ Доноры Реципиенты Донорами являются коровы или телки высокого генетического уровня, от которых хотят получать большое количество телят. Реципиент, это корова или телка в матку которой пересаживают эмбрион. 1. Порода Донорами возможно использовать чистопородных коров или телок любых пород. 2. Возраст Донор готов для вымывании в возрасте первого осеменения. Телка должна быть нормально развита с нормальным половым циклом. Обычно телку вымывают первый раз в возрасте 14 месяцев. Корову можно вымывать после отела тогда, когда матка пришла к форму и нормальные половые циклы начились, но не ранее чем через два месяца после отела. 3. Здоровье и уход Доноры должны быть здоровыми и их половой цикл должен быть известным. Животным необходимо полноценное кормление и содержание. В кормлении и содержании животных стоит избегать больших и внезапных изменений в течение месяца до вымывания. 4. Племенное качество Целезообразно использовать в качестве доноров самых хороших племенных животных, от которых хотят получать много телят. Качество донора определяется на основании племенной ценности, молочной продукции и оценки экстерьера. 1. Порода Реципиентами можно использовать животных любых пород. Реципиент и донор могут быть разных пород. Однако надо обратить внимание на легкость отелов. Например, крупного теленка гольштинской породы может быть тяжело рожать маленькой айрширской телке. 2. Возраст Телкам можно пересаживать эмбрионы в возрасте первого осеменения, когда половой цикл уже нормальный. В первую охоту не рекомендуется пересадка эмбриона. Коровам можно пересаживать эмбрион после отела тогда, когда матка пришла к форму и нормальные половые циклы начились. На практике не ранее чем через два месяца после отела. 3. Здоровье и уход Реципиенты должны быть здоровы. При планировании трансплантации необходимо подумать возможно ли реципиента держать в стаде следующие девять месяцев. Например животные с недостатками в ногах не хорошие в качестве реципиентов потому, что ноги могут не выдерживать до отела и таким образом потеряется и мать и высокоценный теленок-трансплантант. Кормление реципиентов должно быть полноценным. 4. Племенное качество Реципиентами могут быть самые низкоценные коровы в стаде или телки от которых не хотят ремонтный молодняк. ПРИНЦИПЫ ВЫМЫВАНИЯ И ПЕРЕСАДКИ ЭМБРИОНОВ Что такой эмбрион? У новорожденного теленка в яичнике содержатся несколько сотен тысяч фолликулов, внутри которых находятся яйцеклетки. За жизнь у животного из этого числа фолликулов , немного заканчиваются зрелыми т.е. фолликулами Граафа. В нормальном случае созревает одна яйцекдетка, редко две т.е. рожаются двойня. Развитие и созревание яйцеклетки происходит внутри фолликула в яичнике до тех пор когда происходит разрыв фолликула – овульяция (рисунок 1). С точки зрения коровы важно, что она рожает только одного теленка за раз, в краинем случеем двух. Поэтому в яйчниках имеется система, которая предотвращает созревание и выбрасывание большого количества яйцеклеток одновременно. Рисунок 1. Фолликул сразу до овульяции и после овуляции в стадии желтого тела (осмотр донора и реципиента). После выcвобождения, яйцеклетка попадает в маточную трубу. Когда осеменяют корову, сперматозоиды проникают в матку, продвигаются по рогам матки. Происходит оплодотворение и из оплодатворенной яйцеклетки развивается эмбрион. Эмбрион – это развивающихся теленок - с длиной через сутки только 0,15 мм (рисунок 2). Начинается клеточное деление и дифференцировка. Первое деление на две клетки, потом на четыре клетки и.т.д. Затем через 5-6 дней после оплодотворения эмбрион попадает в матку. В возрасте одной недели эмбрион является шариком диаметра 0,15 мм и находится внутри оболочки в верхнем отделе рога матки. 1-й день после охоты 0,15 мм A 3-й день после охоты 0,15 мм B Фолликулы в состоянии покоя окружены слоями фолликулярных клеток 7-й день после охоты Зрелый фолликул содержащий внутри себя яйцеклетку. 0,15 мм C 18-й день после охоты Маленькие фолликулы, которые вырабатывают эстрогеновые гормоны 1 цм D 35-й день после охоты Желтое тело 1 цм E Рисунок 2. Через неделю после охоты эмбрион только 0,15 мм, но благодаря оболочке, хорошо виден под микроскопом (А-С). Затем эмбрион растет и через 35 дней после охоты его длина уже один центиметр (Е). Если бы эмбриону дали развиваться дальше в матке коровы, он разрушал бы оболочку и таким образом стало бы возможным его прикрепление к стенке матки. Извлечение эмбрионов проводят на 7-й день после искусственного осеменения, тогда эмбрионы уже в матке но ещё внутри оболочек. Оболочка защищает эмбрион и облегчает их поиск. Через 35 дней после охоты длина эмбриона уже один центиметр. Обычно эмбрион в возрасте двух недель прикрепляется к стенке матки. Суперовуляция и пересадка эмбриона Целью трансплантации эмбрионов является получение от донора большого количества телят. Для этого начинают гормональную обработку коров с целью выхода из яичника вместо одной яйцеклетки большое количество яйцеклеток. С помощью гормона ФСГ возможно созревание большого количества яйцеклеток одновременно. Это называется суперовуляцией. Гормон ФСГ т.е. фолликкулостимулирующий гормон называется также гормоном суперовуляций. Когда созревшие яйцевые клетки почти одновременно выбрасываются в яйцевод матки, где происходит оплодотворение, можно через неделю вымывать из матки коровы большое количество эмбрионов. Условием удачной трансплантации эмбрионов служит синхронность проявления половой охоты у доноров и реципиентов. Через неделю после осеменения организм коровы ещё не чувствует стельности. На месте фолликула в яиичнике образуется желтое тело которое выделяет в кровь гормон прогестерон. Пересаживать эмбрион реципиенту можно тогда, когда прошла одна неделя от полевой охоты реципиента. Таким образом реципиент оставляет эмбрион у себя и желтое тело в яичнике не рассасывается. В трансплантации эмбрионов важно соблюдать синхронность стадии цикла реципиента и стадии развития эмбриона. При пересадке свежеполученных эмбрионов можно эмбрион в возрасте одной недели пересаживать в течение 6-8 дней после половой охоты реципиента. Если используют замороженные эмбрионы то, срок от полевой охоты до пересадки должен быть ровно одна неделя. Нормально эмбрион всегда находится в роге матки на стороне где желтое тело. Желтое тело образуется на месте овулировавшего фолликула из фолликулярных клеток. Поэтому при пересадке также пересаживают эмбрион в рог матки, на стороне которого в яичнике имеется функционирующее желтое тело. Alkionsiirto vaiheittain Alkionsiirto vaiheittain Alkionsiirto vaiheittain Alkionsiirto Alkionsiirto vaiheittain Alkionsiirto vaiheittain ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЭМБРИОНОВ ПОЭТАПНО Охота у у Нупп е иUU L ыHвTETаELEнLUU мUH ВыUU 9 L в T о U с9 E9 HUU9HH L аTO чO E U вUU UKLK HLOLT HH 9 ELLUU HUK L O TTE9 H H KULHO K 99 U HHUUU O L LHOTEL KK U U H LO 9 K 1.1.Отбор Eläinten valinta Eläinten valinta животных 1.1.1.1.Eläinten valinta Eläinten valinta Eläinten valinta Eläintenvalinta valinta 1.1.Eläinten 1. Eläinten valinta Alkioidenhuuhtelu huuhtelu 4.4.Alkioiden 4.4.4.Alkioiden huuhtelu Alkioidenhuuhtelu huuhtelu Alkioiden 4. Вымывание эмбрионов Alkioidenhuuhtelu huuhtelu 4.4.4. Alkioiden Alkioiden huuhtelu 7. Alkionsiirto 7. Alkionsiirto 7.7.7.Alkionsiirto Alkionsiirto Alkionsiirto 7. Alkionsiirto 7. 7.Alkionsiirto 7.Пересадка Alkionsiirto эмбрионов 2. Hormonikäsittelyt 2.Обработка Hormonikäsittelyt 2. гормонами 2.2. Hormonikäsittelyt Hormonikäsittelyt 2. Hormonikäsittelyt Hormonikäsittelyt 2.2.Hormonikäsittelyt 2. Hormonikäsittelyt 5.Alkioiden Alkioiden etsiminen etsiminen 5. 5.5. Alkioiden etsiminen 5.Поиск Alkioiden Alkioiden etsiminen 5. эмбрионов Alkioidenetsiminen etsiminen 5.5.5. Alkioiden Alkioiden etsiminen 8.Tiineystarkastus 8.Tiineystarkastus 8.8. 8.Tiineystarkastus Tiineystarkastus Tiineystarkastus 8. 8.8.Tiineystarkastus 8.Tiineystarkastus Tiineystarkastus Проверка на стельность 3. Kiimantarkailu Kiimantarkailu jaja 3.3. Наблюдение за признаками 3. Kiimantarkailu jaja 3. Kiimantarkailu ja охоты и осеменении siemennykset siemennykset 3.Kiimantarkailu Kiimantarkailujaja siemennykset 3. siemennykset 3. Kiimantarkailu ja siemennykset siemennykset siemennykset 6.6.Tarvittaessa Tarvittaessapakastus pakastus 6.6. Tarvittaessa pakastus tai sukupuolilajittelu Tarvittaessa pakastus pakastus 6. По надобности замораtaiмере sukupuolilajittelu Tarvittaessa pakastus tai sukupuolilajittelu 6.6. Tarvittaessa живание или определение пола tai sukupuolilajittelu sukupuolilajittelu 6.Tarvittaessapakastus pakastus tai sukupuolilajittelu taitaisukupuolilajittelu sukupuolilajittelu 9. Poikiminen 9. Poikiminen 9.9. Poikiminen 9.Poikiminen Poikiminen 9. Poikiminen 9.9. Poikiminen Poikiminen 9. Отелы HAKA – Huippueläimet Pohjois-Savosta HAKA–––Huippueläimet HuippueläimetPohjois-Savosta Pohjois-Savosta HAKA Huippueläimet Pohjois-Savosta HAKA Löydä alkiot ja tutustu HAKA – Huippueläimet Pohjois-Savosta HAKA – Huippueläimet Pohjois-Savosta toimintaan vaivattomasti Löydä alkiot ja tutustu HAKA– –Huippueläimet HuippueläimetPohjois-Savosta Pohjois-SavostaLöydä HAKA Löydä alkiot tutustu alkiot Löydä alkiotjaja jatutustu tutustu Jalostuspalvelu Avelstjänst Jalostuspalvelu Avelstjänst Jalostuspalvelu Jalostuspalvelu Jalostuspalvelu Avelstjänst Avelstjänst Avelstjänst Jalostuspalvelu Jalostuspalvelu Jalostuspalvelu Avelstjänst Avelstjänst Avelstjänst netissä: www.haka-alkiot.fi toimintaan vaivattomasti toimintaan vaivattomasti toimintaan vaivattomasti Löydä alkiot tutustu toimintaan vaivattomasti netissä: www.haka-alkiot.fi Löydä alkiot jatutustu tutustu Löydä alkiot jaja netissä: www.haka-alkiot.fi netissä: www.haka-alkiot.fi toimintaan vaivattomasti netissä: www.haka-alkiot.fi toimintaanvaivattomasti vaivattomasti toimintaan netissä: www.haka-alkiot.fi Наблюдение за признаками полевой охоты Эффективность трансплантации эмбрионов во многом зависит от правильности выбора оптимального времени для пересадки и от синхронности полового цикла коровы-донора и реципиента. Поэтому наблюдение за признаками охоты играет важную роль. Каждый день проводят наблюдение за признаками охоты не менее 3-х раз. Тогда записывается дата, время, номера коров и стадии охоты у коров. Половой цикл от начала одной охоты до начала другой длится у коров в среднем 21 сутки (от 18 до 24 суток). У телок цикл несколько короче, в среднем 20 суток. Продолжительность активной половой охоты длится около одного дня. Тогда корова спокойно стоит при вспрыгивании других коров. Фаза предтечки длится около 3-х суток и фаза послетечки 2-3 дня. Период между послетечкой и следующей предтечкой является фазой развития желтого тела продолжительностью около 14 дней. Признаки половой охоты: 1. Готовность к спариванию Самым достоверным признаком активной охоты является фаза, когда корова стоит неподвижно, когда на нее влезает другая корова 2. Изменение в поведении животного Повышенная активность, снижение молокоотдачи, мычание, сильное беспокойство, поиск контакта, залезание на других коров 3. Выделение слизи Набухание половых органов и по­краснение слизистой оболочки влагалища. В начале цикла слизь густая и липкая иногда синесерая. В течение пары дней слизь становится более прозрачной и ее количество возрастает. В день овуляции слизь становится прозрачной и жидкой. Слизь эластичная, так что ее можно растянуть между двумя пальцами как паутину. После овуляции слизь снова становится густой и липкой и ее количество уменьшается. Вымывание и его подготовка Первым этапом в планировании программы вымываний является отбор доноров и реципиентов. Продолжительность программы трансплантации эмбрионов от начала до конца примерно один месяч (таблица 3). Половые циклы доноров и реципиентов должны быть известны. Программа начинается всегда через 9-12 суток после половой охоты донора. Охота может быть спонтанной или стимулированной простагландином или спиралью. Простагландин используют для синхронизации проявления половой охоты. Дату начала охоты передают ветеринарному врачу. Ветеринарный врач проводит осмотр животных до начала программы трансплантации. После начала охоты у донора реципиентам можно, если необходимо, поставить спирали. Таблица 3. Процесс трансплантации эмбрионов Дата 13.9. 16.9. 28.9. 29.9. 30.9. 1.10. 2.10. 8.10. 9.10. 16.10. Доноры Осмотр донора Инъекция простагландином Охота Обработка гормонами для вызывания суперовуляции начинается Обработка гормонами для вызывания суперовуляции 2 раза Обработка гормонами для вызывания суперовуляции 2 раза и инъекция простагландином Обработка гормонами для вызывания суперовуляции 2 раза Охота Осеменение 2 раза Исследование желтых тел Извлечение эмбрионов Инъекция простагландином Реципиенты Осмотр реципиента Инъекция простагландином Охота Инъекция простагландином Охота Пересадка эмбрионов Суперовуляция и синхронизация половых циклов Ветеринарный врач планирует программу пересадки эмбрионов и дает индивидуальные инструкции для каждой коровы. За один день перед гормональной обработкой ветеринарный врач исследует животных. Если в яичниках коровы функционирует желтое тело то процесс трансплантации начинается. Фолликулостимулирующий гормон вводят на протяжении 4 дней, дважды в сутки утром и вечером, в убывающих дозах с интервалом 12 часов. Реципиентов без спиралей обрабатывают простагландинам на второй день после начала стимулирования суперовуляцией у доноров. Донорам инъекцию простагландинам сделают вечером третьего дня. Это делается потому, что проявление половой охоты после инъекции быстрее у суперовулирующих доноров чем у реципиентов. Спирали реципиентов вынут тот же день, когда доноров обрабатывают простагландинами. Осеменении Доноры и реципиенты приходят в охоту на 6-й день после начала стимулирования суперовуляции. Коров-доноров искусственно осеменяют дважды с интервалом 9-15 часов. Это делается потому,что все яйцеклетки не созревают одновременно. При необходимости (длительная охота) осеменение повторяют ещё 3-й раз. Наблюдение за признаками охоты следует проводить в течение несколько дней. Проявление охоты у доноров и реципиентов происходит одновременно. Все признаки охоты аккуратно записывается. У реципиентов самым важным признаком является рефлекс неподвижности, т.е. корова стоит неподвижно, когда на нее влезает другая корова. Оптимальные результаты синхронности половой охоты получаются когда разница во времени не превышает 24 часов. Когда осеменения доноров и половые охоты у реципиентов позади, начинается перерыв на одну неделю. Тогда эмбрионы развываются в матке донора. Извлечение эмбрионов Эмбрионы извлекают через неделю после искусственного осеменения донора. Корову-донора фиксируют в станке. Для снятия моторики кишечника и расслабления матки используют эпидуральную анестезию, телкам иногда дают также успокоительное лекарство. Омывают водой наружные половые органы животного. Катетер аккуратно вводят во 10 влагалище и через шейку матки в тело, продвигают его в правый или левый рог до тех пор, пока конец катетера не упрется в изгиб рога. Выход из рога матки закрывают надувая воздухом баллончик. После этого в рог вводят промывную жидкость и вымывание повторяют несколько раз. Одновременно рог массируют, чтобы отделить все эмбрионы от стенок матки.. Жидкость с эмбрионами сливают в эмбриональный фильтр. После промывания одного рога матки, катетер переводят в другой рог и весь процесс повторяют. После извлечения эмбрионов ветеринарный врач начинает искать эмбрионы под микроскопом. Поиск и обработка эмбрионов продолжается много часов. Потом эмбрионы классифицируют по качеству и разделяют по категориям I, II, III и IV. Для транплантации свежеполученными эмбрионами можно использовать категории I, II и III, но для замораживании только эмбрионы категории I. Эмбрионы категории IV мертвые или дегенерировавшие, их нельзя использовать. Когда ветеринарный врач оценивает эмбрионы, осеменатор исследует реципиентов ректально. У них желтые тела должны быть хорошо выражены. Когда количество пригодных эмбрионов и реципиентов ясно, решается вопрос сколько эмбрионов будут замораживать. Эмбрионы замораживают в криозащитной среде в сосудах, заполненных жидким азотом. Замороженные эмбрионы могут храниться много лет. Процесс трансплантации эмбрионов заканчивается на том что ветеринарный врач через 37 дней инъекцирует донора простогландином, вызывающим снова половую охоту. Доноры могут быть осеменены уже в эту охоту, если признаки охоты явные и слизь прозрачная. Пересадка эмбрионов Метод пересадки эмбрионов реципиентам сходен с искусственным осеменением. Существует одна разница – в осеменении сперму вводят в шейку матки, а при транплантации катетер глубоко введен в рог матки. Пересадку производят через одну неделю после половой охоты и тогда шейка матки уже закрыта, В этот период матка наиболее восприимчива к инфекции, поэтому при пересадке строго соблюдается асептику. Пересадку эмбрионов производит ветеринарный врач или осеменатор по трансрлантации. При пересадке часто используют эпидуральную анестезию, телкам иногда также доют успокоительное лекарство. При пересадке можно использовать замороженные или свежеполученные эмбрионы. Свежеполученные эмбрионы пересаживают в день их извлечения из рогов матки донора и оценки по качеству. Свежеполученные эмбрионы нельзя хранить долго без криоконсервации. Далеко их транпортировать тоже невозможно. При пересадке свежеполученных эмбрионов реципиентам для синхронизация половых циклов используют простагландин или спираль. Пересадку замороженных эмбрионов можно проводить в спонтанную или стимулированную охоту. В Финляндии процент стельности реципиентов при использовании замороженных эмбрионов примерно 50 %. 11 Faba Breeding Фотографии Тиина Тахвонен а/я 40 01301 Вантаа Финляндия тел. +358 20 747 2020 факс +358 20 747 2001 faba@faba.fi www.faba.fi
