Микроорганизмы – индикаторы загрязнения морей Воловик Е. В
advertisement
Микроорганизмы – индикаторы загрязнения морей Воловик Е. В. Дальневосточный федеральный университет Владивосток, Россия Microorganisms – indicators of pollution of the seas Volovik E. V. Far Eastern Federal University Vladivostok, Russia 1 оглавление 1. Введение................................................................................... ...............3 2. Проблема загрязнения морей.................................................................4 2.1 Химическое загрязнение..................................................................4 2.2 Биологическое загрязнение..............................................................7 2.3 Физическое загрязнение...................................................................9 3. Микроорганизмы как индикаторы загрязнения морей......................11 3.1 Техногенное загрязнение................................................................15 3.2 Коммунально-бытовое загрязнение...............................................20 3.3 Биогенное загрязнение....................................................................23 4. Заключение.............................................................................................29 5. Список литературы................................................................................31 2 Введение Результатом возрастающей антропогенной нагрузки на гидросферу являются значительные экологические изменения, происходящие в первую очередь в прибрежных акваториях. Загрязнение водной среды выражается в изменении природных процессов и вызывает отрицательные биологические последствия для водных организмов. Индикаторами этих изменений могут служить микроорганизмы, обладающие высокой экологической пластичностью в силу уникальных физиолого-биохимических и генетических особенностей. Биологические методы микробной индикации занимают все более важное место в решении проблемы загрязнения природных вод. Эти методы дают возможность выявлять и контролировать появление загрязняющих веществ в воде гораздо раньше, чем происходят необратимые токсические эффекты у гидробионтов. Методы микробной индикации основаны на способности микроорганизмов использовать в качестве единственного источника углерода специфические органические соединения, а также выживать и размножаться в среде, содержащей высокие концентрации загрязняющих токсических веществ. Цель работы - на основе литературных данных определить возможности использования индикаторных микроорганизмов для оценки степени и характера загрязнения морей. Задачи: 1. Дать характеристику типов и источников загрязнения морей. 2. Определить эколого-физиологические группы микроорганизмовиндикаторов загрязнения морей. 3 ГЛАВА 1. Проблема загрязнения морей Мировой океан, как принято называть совокупность всех морей и океанов нашей планеты, занимает свыше 70% ее поверхности, в результате чего оказывает огромное влияние на все происходящие на Земле процессы. Поэтому, усиливающегося с каждым годом проблема загрязнения Мирового океана, является одной из главных проблем, стоящих сегодня перед человечеством. Загрязнение - привнесение в окружающую среду или возникновение в ней новых, не характерных для нее, вредных химических, физических, биологических агентов. Загрязнение может возникать в результате естественных причин (природное загрязнение: загрязнение вод в результате извержения вулканов, водной и ветровой эрозии, абразии (разрушения) берегов, засоление пресных вод солеными и т.д.) или под влиянием деятельности человека (антропогенное загрязнение), связанное с поступлением загрязняющих веществ в гидросферу в результате деятельности человека В настоящее время наиболее распространено химическое и биологическое загрязнения, в меньшей степени физическое (радиоактивное, механическое и тепловое). Химическое загрязнение - загрязнение вод неорганическими и органическими веществами. Из органических загрязнителей наиболее распространены: нефть и нефтепродукты, СПАВ, фенолы, пестициды и др.; из неорганических: кислоты, щелочи, тяжелые металлы (ртуть, свинец, кадмий, мышьяк и др.). Химическое загрязнение наиболее распространенное, стойкое и далеко распространяющееся загрязнение гидросферы. При осаждении на дно водоемов или при фильтрации в грунтовые воды вредные химические вещества сорбируются частицами пород, окисляются и восстанавливаются, 4 выпадают в осадок и т.д. Однако, как правило, полного самоочищения загрязненных вод не происходит. Существует несколько основных источников поступления тяжелых металлов в окружающую среду, создающих водное загрязнение: промышленная переработка руд и металлов; использование металлов и их соединений, таких как соли хрома при дублении, медьсодержащих соединений в сельском хозяйстве и тетраэтилсвинец - в качестве антидетонационного соединения в бензине; просачивание растворов тяжелых металлов из бытовых стоков и со свалок твердых отходов; и попадание тяжелых металлов из выделений человека и животных, особенно цинка. Металлы, попавшие в воздух с автомобильными выбросами, при сжигании топлива и эмиссии в результате промышленных процессов, могут осесть на землю и вымываться в поверхностные воды. Помимо тяжелых металлов, к наиболее распространенным загрязняющим веществам относятся нефть и нефтепродукты. Наибольшие потери нефти связаны с ее транспортировкой из районов добычи. Аварийные ситуации, слив за борт танкерами промывочных и балластных вод, - все это обуславливает присутствие постоянных полей загрязнения на трассах морских путей. Большие массы нефти поступают в моря по рекам, с бытовыми и ливневыми стоками. Попадая в морскую среду, нефть сначала растекается в виде пленки, образуя слои различной мощности. Нефтяная пленка изменяет состав спектра и интенсивность проникновения в воду света. Пестициды – составляют группу искусственно созданных веществ, используемых для борьбы с вредителями и болезнями растений. Пестициды делятся на следующие группы: инсектициды - для борьбы с вредными насекомыми, фунгициды и бактерициды - для борьбы с бактериальными болезнями растений, гербициды - против сорных растений. Промышленное производство пестицидов сопровождается появлением большого количества побочных продуктов, загрязняющих сточные воды. В 5 водной среде чаще других встречаются представители инсектицидов, фунгицидов и гербицидов. Синтетические поверхностно-активные вещества (СПАВ) – относятся к обширной группе веществ, понижающих поверхностное натяжение воды. Они входят в состав синтетических моющих средств (СМС), широко применяемых в быту и промышленности. Вместе со сточными водами СПАВ попадают в материковые воды и морскую среду. Присутствие СПАВ в сточных водах промышленности связано с использованием их в таких процессах, как разделение продуктов химических технологий, получение полимеров, улучшение условий бурения нефтяных и газовых скважин, борьба с коррозией оборудования. В сельском хозяйстве СПАВ применяется в составе пестицидов. Химические загрязнители могут вызывать острые отравления, хронические болезни, а также оказывать канцерогенное и мутагенное действие. Например, тяжелые металлы способны накапливаться в растительных и животных тканях, оказывая токсическое действие. Кроме тяжелых металлов, особо опасными загрязнителями являются хлордиоксины, которые образуются из хлорпроизводных ароматических углеводородов, используемых при производстве гербицидов. Источниками загрязнения окружающей среды целлюлозно-бумажной диоксинами являются промышленности, и побочные отходы продукты металлургической промышленности, выхлопные газы двигателей внутреннего сгорания. Эти вещества очень токсичны для человека и животных даже при низких концентрациях и вызывают поражение печени, почек, иммунной системы. В приоритетных списках загрязняющих природные воды веществ на одном из первых мест стоят фенолы, что объясняется их высокой токсичностью и большим объемом мирового производства (Никитин, Новиков, 1980). Основными источниками загрязнения фенолами морских прибрежных вод являются предприятия целлюлозно-бумажной, деревообрабатывающей и нефтеперерабатывающей промышленности. Кроме 6 того, фенолы могут отражать загрязнение вод хлорорганическими пестицидами, а также иметь фекальную природу. Биологическое загрязнение — загрязнение вод патогенными микроорганизмами бактериями, вирусами, простейшими, грибами, мелкими водорослями и др. Биологический фактор загрязнения можно определить как совокупность биологических компонентов, воздействие которых на человека и окружающую среду связано с их способностью размножаться в естественных или искусственных условиях, продуцировать биологически активные вещества, а при их попадании или продуктов их жизнедеятельности в окружающую среду оказывать неблагоприятные воздействия на окружающую среду, людей, животных, растения. Биологические факторы загрязнения (чаще всего микробные) можно классифицировать следующим образом: живые микроорганизмы с природным геномом, не обладающие токсичностью, сапрофиты, живые микроорганизмы с природным геномом, обладающие инфекционной активностью, патогенные и условно-патогенные, вырабатывающие токсины, живые микроорганизмы, получаемые методами генной инженерии (генетически модифицированные микроорганизмы, содержащие чужие гены или новые комбинации генов - ГММО), инфекционные и другие вирусы, токсины биологического происхождения, инактивированные клетки микроорганизмов (вакцины, пыль термически инактивированной биомассы микроорганизмов кормового и пищевого назначения), продукты метаболизма микроорганизмов, органеллы и органические соединения клетки - продукты ее фракционирования. Биотехнологические крупнотоннажные производства являются источником эмиссии биоаэрозолей, содержащих клетки непатогенных микроорганизмов, а также продукты их метаболизма. Основные источники биоаэрозолей, содержащих живые клетки микроорганизмов, - стадии ферментации и сепарации, а инактивированных клеток - стадия сушки. При 7 массированном выбросе микробная биомасса, попадая в почву или в водоем, изменяет распределение потоков энергии и вещества в трофических цепях питания и влияет на структуру и функцию биоценозов, снижает активность самоочищения и, следовательно, влияет на глобальную функцию биоты. При этом возможно провоцирование активного развития определенных организмов, в том числе микроорганизмов санитарно-показательных групп. Хозяйственно-бытовые стоки также приводят к биологическому загрязнению воды, что может вызвать кишечно-желудочные заболевания (холера, тиф) и заболевания печени (гепатит). Особенно опасны сточные воды и пунктов санитарной обработки белья и спецодежды, стоки от больниц, бытовые стоки, которые, попав в воду, могут вызывать различные глистные заболевания (аскаридоз, ехинокоз т.д.) Органические загрязнения часто приводят к непредсказуемым процессам - связывание кислорода в воде, гибели живых организмов и фитопланктона. Излишки фосфора и азота в воде приводят к ее цветению и нарушению биологического равновесия в водоемах. Сточные воды, содержащие суспензии органического происхождения или растворенное органическое вещество, пагубно влияют на состояние водоемов. Осаждаясь, суспензии покрывают дно и задерживают развитие или полностью прекращают жизнедеятельность данных микроорганизмов, участвующих в процессе самоочищения вод. Наличие суспензий затрудняют также проникновение света на глубину, и замедляет процессы фотосинтеза. Вселение в новую окружающую среду несвойственных данной акватории организмов является одной из самых больших угроз океанам в мире. Биологическая инвазия является одной из серьезных экологических проблем – привнесенные виды потенциально способны вызывать крупные экологические изменения в среде (Carlton, 1990; Mills et al., 1993). Одним из путей попадания чужеродных морских организмов в акватории портов является транспортировка их с балластными водами. Среди водных организмов в изобилии находятся бактерии и вирусы. Благодаря достаточно 8 высокой численности, репродуктивной способности и широкому диапазону устойчивости к физическим факторам среды эти микроорганизмы активно заселяют прибрежные экосистемы (Wommack, Colwell, 2000). Присутствие санитарно-показательных микроорганизмов в морской воде представляет реальную опасность для здоровья населения, так как многие из них могут проявлять патогенные свойства. В результате спуска хозяйственно-бытовых и канализационных сточных вод прибрежные воды подвергаются фекальному загрязнению. Это означает, что в экосистему поступают несвойственные ей микроорганизмы, в том числе и патогенные. Фекальное загрязнение неблагоприятно сказывается на разведении объектов марикультуры или прибрежном промысле моллюсков. При нарушении естественного микробиального пейзажа возрастает проблема появления в прибрежных водах микроорганизмов, патогенных для человека или гидробионтов. Они обуславливают существование ряда заболеваний человека, которые чаще всего связаны с обсеменением галофильными вибрионами рыб и беспозвоночных. Физическое загрязнение создается сбросом тепла или радиоактивных веществ. Тепловое загрязнение связано главным образом с тем, что используемая для охлаждения на тепловых и атомных электростанциях вода сбрасывается в тот же водоем. Вклад в тепловое загрязнение вносят также некоторые промышленные предприятия. При значительном тепловом загрязнении рыба задыхается и погибает, так как ее потребность в кислороде растет, а растворимость кислорода уменьшается. Количество кислорода в воде уменьшается еще и потому, что при тепловом загрязнении происходит бурное развитие одноклеточных водорослей: вода «зацветает» с последующим гниением отмирающей растительной массы. Кроме того, тепловое загрязнение существенно повышает ядовитость многих химических загрязнителей, в частности тяжелых металлов. 9 Радиоактивное загрязнение — загрязнение вод радионуклидами. Оно опасно даже при очень малых концентрациях радиоактивных веществ, особенно «долгоживущих» и подвижных в воде радиоактивных элементов (стронций—90, уран, радий—226, цезий и др.). Радионуклиды попадают в поверхностные водоемы при сбрасывании радиоактивных отходов, захоронении их на дне и др., в подземные воды — в результате просачивания вглубь земли вместе с атмосферными водами или в результате взаимодействия подземных вод с радиоактивными горными породами. Механическое загрязнение — загрязнение вод механическими примесями, относительно инертными в физико-химическом отношении бытовыми и производственными отходами (строительный и бытовой мусор, упаковочные материалы, пластмассы, твердые частицы - песок, ил, шлак и др.) Велика степень загрязнения вод Мирового океана бытовыми предметами массового потребления (пластиковые бутылки, консервные банки, банки из-под пива и т. п.). Антропогенный фактор значительно влияет на развитие природных экосистем. Любое загрязнение, которое попадает в природную среду, изменяет ее структуру и внешний вид. Скопления отходов из пластмасс образуют в Мировом океане под воздействием течений особые мусорные пятна. На данный момент известны, пять больших скоплений мусорных пятен — по два в Тихом и Атлантическом океанах, и одно — в Индийском океане. Данные мусорные круговороты в основном состоят из пластиковых отходов, образующихся в результате сбросов из густонаселённых прибрежных зон континентов. Пластиковый мусор опасен ещё и тем, что морские животные, зачастую, могут не разглядеть прозрачные частицы, плавающие по поверхности, и токсичные отходы попадают им в желудок, часто становясь причиной летальных исходов. Каждое вещество природного происхождения, или антропогенного, имеет свой период полураспада - время за которое оно распадается и делает 10 свой химический и механический вклад в систему. Климатические факторы вымывают, выдувают химические и механические компоненты из природной системы, образуя круговорот веществ и обеспечивая этим самоочищение системы от загрязнения, возобновляя ее работу. Самый большой период полураспада у пластика и полиэтиленовых пакетов, в зависимости от условий их полураспад составляет от 100 до 1000 лет. Пластик является токсическим опасным веществом для морских и наземных обитателей, в том числе и для человека. Загрязнения пластиковым мусором негативно влияют на микробные сообществ морей, нарушая естественные круговороты веществ и процессы ремедиации среды. Всё это усугубляется тем, что патогенные и несвойственные данной среде микроорганизмы могут распространяться на многие тысячи километров от своего первоначального источника за счет образования биопленок на океаническом пластике. ГЛАВА 2. Микроорганизмы как индикаторы загрязнения морей Микробные популяции могут рассматриваться как индикаторы физико-химических и биологических процессов, а группы микроорганизмов, откликающиеся на загрязнение изменением своих физиологических свойств и численности, называют индикаторными. Благодаря малым размерам бактерии имеют большую относительную поверхность контакта с водной средой и способны скорее реагировать на ее загрязнение, чем более высокоорганизованные организмы. Высокие скорости роста и размножения бактерий дают возможность в короткий срок проследить за действием любого экологического фактора на протяжении десятков и даже сотен поколений. В отличие от водных растений и животных микроорганизмы используют в качестве индикаторов не так давно, хотя еще В.И. Виноградский показал, что бактерии быстро реагируют на изменение окружающих условий. В разложении (деструкции) того или иного субстрата принимают участие разные виды микроорганизмов, входящих в состав сообщества, 11 объединенных только этой функцией и составляющих понятие экологотрофической индикаторной группы. Биологическая целесообразность появления индикаторных видов определяется их особым назначением: они заполняют «бреши» в биоценозах, образовавшиеся в результате негативного антропогенного воздействия и помогают их восстановлению, участвуя, таким образом, в сохранении устойчивости водных экосистем. Исключительно важную роль в этом играют водные автохтонные микроорганизмы. Микроорганизмы, благодаря физиологическим и генетическим особенностям, быстро реагируют на изменение качества среды и действие стрессовых факторов (Израэль, Цыбань, 1992). На уровне организмов адаптация реализуется за счет включения одного или нескольких механизмов индивидуальной резистентности. Микроорганизмы – наиболее пластичный и реактивный компонент водных биоценозов. Они способны утилизировать все имеющиеся в природе органические вещества. Причем необходимые для этого ферменты являются индуцибельными, т.е. синтезируются в их клетках по мере необходимости (присутствие соответствующего субстрата в среде). Благодаря этому микроорганизмы быстро реагируют на появление в среде новых химических соединений природного либо антропогенного происхождения. В зависимости от загрязнения водной среды выделяют бактерии – индикаторы биологического, фекального и техногенного загрязнения (рис.1). 12 Органическое загрязнение общая численность микроорганизмов (ОМЧ) Аллохтонная микрофлора Автохтонная микрофлора Индикаторные группы микроорганизмов при загрязнении: техногенное коммунально-бытовое биогенное санитарно-показательные (энтеробактерии,E.coli, энтерококки) нефтеокисляющие, фенолокисляющие, металлустойчивые Протеолитики, амилолитики, липолитики, сульфатредуцирующие, сине-зеленые водоросли Рисунок 1. Схема микробиологического исследования воды из природных источников Численность бактерий органического загрязнения может служить водных экосистем, надежным а индикатором методы микробной индикации являются удобным инструментом для мониторинговых работ и позволяют оперативно прибрежных водах. охарактеризовать экологическую Микробиологические показатели ситуацию в позволяют охарактеризовать качество природных вод: уровень их трофности, состояние загрязнения и биодеграционный потенциал воды в отношении органических загрязняющих веществ. Конкурентная активация сапрофитной микрофлоры приводит к быстрому разложению органических веществ, уменьшению численности бактерий различных видов, особенно фекального происхождения. Способность к самоочищению обусловлена присутствием в воде постоянных 13 видов микроорганизмов, входящих в конкретный биоценоз. Однако количественные и качественные соотношения в биоценозах нестойки и изменяются под действием различных факторов, т.е. меняются по сапробности. Термин «сапробность» (греч. sapros — гнилой) обозначает комплекс особенностей водоёма, в том числе состав и количество микроорганизмов в воде, содержащей органические и неорганические вещества в определённых концентрациях. Процессы самоочищения воды в водоёмах происходят последовательно и непрерывно, с постепенной сменой биоценозов. Различают полисапробные, мезосапробные и олигосапробные зоны. 1. Полисапробные зоны (зоны сильного загрязнения). Содержат большое количество легко разлагающихся органических веществ и почти полностью лишены кислорода. Микробный биоценоз подобных зон особенно обилен, но видовой состав ограничен анаэробными бактериями, грибами, актиномицетами. Количество бактерий (ОМЧ) в 1 мл воды в полисапробной зоне достигает миллиона и более. 2. Мезосапробные зоны (зоны умеренного загрязнения). Характеризуются доминированием окислительных и нитрификационных процессов. Качественный состав разнообразен. В основном это нитрифицирующие, облигатно аэробные бактерии, также виды Clostridium, Pseudomonas, Mycobacterium, Flavobacterium, Streptomyces, Candida и др. Общее количество микроорганизмов сотни тысяч в 1 мл. 3. Олигосапробные зоны (зоны чистой воды). окончившимся процессом самоочищения, Характеризуются небольшим содержанием органических соединений и окончанием процесса минерализации. Вода отличается высокой степенью чистоты. Количество бактерий от 10 до 1000 в 1 мл воды. Патогенные микроорганизмы, попадающие в водоёмы, достаточно обильны в полисапробных зонах, постепенно отмирают в мезосапробных и практически не обнаруживаются в олигосапробных зонах. 14 Характер микрофлоры водоемов определяет особенности конкретной водной среды. Микрофлору водоемов образуют 2 группы: автохтонные (или водные) и аллохтонные (попадающую извне при загрязнении различных источников) микроорганизмы. Автохтонная микрофлора – совокупность микроорганизмов, постоянно живущих и размножающихся в воде. Как правило, микробный состав воды напоминает микрофлору почвы, с которой та соприкасается. То есть большинство водных микроорганизмов также является распространенными обитателями почв. В состав специфической водной микрофлоры входят Micrococcus candican, M. roseus, Sarcina lutea, Bacterium aquatilis communis, Pseudomonas fluorescens, различные виды Proteus и Leptospira. Среди анаэробов в незагрязненных водоемах более или менее часто выделяют Bacillus cereus, B. mycoides, Chromobacterium violaceum, виды Clostridium. Количественные соотношения микроорганизмов в открытых водоемах варьируют в широких пределах, что зависит от вида водоема, степени его загрязнения, смены метеорологических условий, сезона и т.д. Микроорганизмы воды играют значительную роль в круговороте веществ, расщепляя органические отходы, клетчатку и обеспечивая питательными веществами другие организмы, живущие в воде. Аллохтонная микрофлора. Воды поверхностных водоёмов открыты для всех видов контаминации. Со сточными, ливневыми, талыми водами в водоёмы попадают многие виды микроорганизмов, резко изменяющих микробный биоценоз и санитарный режим. Основной путь микробного загрязнения – попадание неочищенных городских отходов и сточных вод. Техногенное загрязнение Нефтеокисляющие микроорганизмы. Частично появление нефтеуглеводородов (НУ) связано с природными процессами, но их концентрация увеличивается во многих береговых экосистемах, как прямое следствие деятельности человека. Микробные сообщества могут 15 трансформировать НУ в промежуточные метаболиты или минерализовать в диоксид углерода и воду. Уровень и протяженность деградации зависит от физико-химических свойств индивидуальных составляющих НУ и их взаимодействия с живыми и неживыми компонентами береговой экосистемы. Нефтеокисляющая микрофлора разнообразна, представлена как бактериями, самой многочисленной по генофонду группой, так и грибами, и отличается по активности в разложении нефти и ее углеводородов. Среди нефтеокисляющих бактерий с высокой активностью можно выделить грамположительные коринеформные бактерии (Mycobacterium, Nocardia, Corynebacterium, Arthrobacter и др.), представителей рода Pseudomonas, Acinetobacter, Alcaligenes. Что касается нефтеокисляющих дрожжей, приуроченных, главным образом, к поверхностным слоям вод, то большинство их относится к родам Candida, Rhotorula и Trichosporon, реже активны представители родов Debaryomyces, Endomyces, Pichia, Torulopsis. Дрожжи окисляют в основном парафиновую фракцию нефти. В морских и пресноводных экосистемах встречаются практически одинаковые представители, разлагающие углеводороды нефти. Среди мицелиальных грибов наиболее активно окисляют нефть представители родов Penicillium, Aspergillus, Fusarium, Mucor и Cladosporium. Окисление ароматических углеводородов не является свойством рода или вида микроорганизмов, это штаммовый признак. Так, на фоне общего угнетающего действия токсиканта появляются штаммы, способные его расщеплять, которые, вероятно, являются естественными мутантами. Если парафины – субстрат, легко окисляемый нормальными микроорганизмами биоценоза, то ароматические углеводороды окисляются, скорее всего, мутантами, а вовлечение их в круговорот является сложным и болезненным для микробиоценоза процессом. Высокая численность фенолокисляющих бактерий может быть связана с деятельностью расположенных на берегу промышленных и портовых комплексов, которые оказывают непосредственное влияние на загрязнение 16 вод фенолами. В урбанизированных районах прибрежная морская среда почти повсеместно загрязнена разнообразными соединениями фенольной природы, такими как моно- и дифенилы, бифенилы, а также их галогенпроизводными, в том числе пестицидами. Одним из главных источников фенольного загрязнения прибрежной зоны моря зачастую являются лесоперерабатывающие предприятия – фанерные, целлюлозно-бумажные, где основными компонентами сточных вод являются фенол, пирагаллол, ксиленолы, крезолы и т.д. Фенолы в значительном количестве содержатся в каменноугольной смоле и образуются при распаде нефтепродуктов. Фенолы широко используются в промышленности для получения смол, полиамидов, поверхностно-активных веществ, антиоксидантов. В связи с резко возрастающим влиянием бытовых стоков на качество прибрежной среды особое негативное влияние имеют фекальные стеролы. Эти соединения даже в незначительных концентрациях могут вызывать сильные токсические эффекты или гибель морских организмов. Большое скопление водных растений также является источником естественного метаболитного фенола, поступающего в среду. Уровень чувствительности разных организмов к фенольным соединениям неодинаков. Даже близкородственные особи могут очень отличаться по своей реакции на один и тот же токсикант. Особенно чувствительны к фенольному загрязнению нейстонные организмы, к которым относятся многие популяции морских организмов на ранних стадиях онтогенеза, а также обильное микробное население, играющее важную роль в трансформации органических соединений. Известно, что морская среда самоочищается от фенольного загрязнения. Наиболее активными и часто единственными деструкторами фенола являются микроорганизмы, которые одновременно могут служить индикаторами присутствия данного поллютанта в море. Состав фенолустойчивых бактериальных сообществ морской воды и донных 17 осадков близок к составу микрофлоры активных илов очистных сооружений, адаптированной к продукту дегродации фенола – пирокатехину. Попадание фенола в водную среду ведет к быстрому формированию в местах сбросов высокоустойчивого бактериального сообщества в воде и донных осадках. В работах Л.М. Кондратьевой и Е.А. Каретниковой (2000) показано, что численность фенолрезистентных бактерий является индикатором загрязнения водных экосистем фенольными соединениями различного происхождения, однако не может служить критерием самоочищающей способности водных экосистем. Методы микробной индикации дают возможность выявить и контролировать появление фенолов в морской среде гораздо раньше, чем происходят необратимые токсические эффекты у гидробионтов. В качестве микроорганизмов-индикаторов фенолсодержащих вод используются грибы Aspergillus, Penicillium . Критерии оценки нефтяного и фенольного загрязнения на основании микробных показателей. Для микробиологических показателей не существует предельно допустимых концентраций, как в химических экологических методах. Но, для того, чтобы дать оценку полученному результату, необходимо сравнивать данные, полученные для исследуемого района, с данными контрольного район а (заранее выбранный фоновый, чистый район для сравнительного исследования). Как правило, если нет источника поступления нефти в среду, нет и микроорганизмов, расщепляющих этот субстрат. Наличие фенол- и углеводородокисляющих бактерий в количествах, превышающих 102-103 клеток/мл, указывает на ту или иную степень загрязнения этими веществами. Металлоустойчивые микроорганизмы Настоящими рекордсменами по извлечению металлов из окружающей среды являются микроорганизмы – бактерии, плесени, микроскопические водоросли, обитающие в почве, пресноводных водоемах и морской воде. 18 Плесневые грибы аспергиллы содержат до 0,3% меди – в 30 000 раз больше, чем в окружающей среде. Многие микроорганизмы в больших количествах накапливают уран: пресноводная микроводоросль хлорелла – до 0,4% сухой массы, актиномицеты – до 4,5%, денитрифицирующие бактерии - 14%, а специально отобранные культуры дрожжей или псевдомонад – до 50%. Тяжелые металлы даже в ничтожных концентрациях ядовиты. Проникая в живые клетки, они нарушают их жизнедеятельность, но свое токсическое действие тяжелые металлы проявляют только в виде ионов. Если же их тем или иным способом перевести в связанную форму, то они лишаются токсических свойств. Установлено, что недиссоциированные соли и ионы, образующие комплексы, обычно менее токсичны, чем свободные ионы в тех же концентрациях. Таким образом, металл, отложенный в клеточной стенке в кристаллическом виде или в виде плохо растворимых соединений, оказывается безвредным для микроба. Тяжелые металлы играют двоякую роль в процессах жизнедеятельности организмов. Mg, Cu, Ni, Zn – важные микроэлементы. Cd, Pb, Sn, Ag, Hg – токсичны. При высокой концентрации все металлы вредны для организма, так как они способны: 1. Изменять конформацию и структуру нуклеиновых кислот, белка, 2. Ингибировать активность ферментов; 3. Влиять на осмотический баланс клетки; 4. Влиять на энергетический баланс клетки. Известны два пути поступления тяжелых металлов в клетку микроорганизма: неспецифический транспорт по градиенту концентрации и специфический транспорт белка с АТФ. У микроорганизмов существуют специальные механизмы для предотвращения токсического воздействия металлов: 1. Активное выведение или выброс металла из клетки. 2. Снижение поступления металла за счет изменения проницаемости клеточной мембраны. Нарушение синтеза белка порина. 19 3. Внутриклеточное связывание токсичных металлов, их детоксикация. 4. Внутриклеточная изоляция металлов за счет капсулы. Для выделения металлоустойчивых микроорганизмов определяют спектр металлов необходимых для эксперимента : Cd, Pb и Ni маркеры техногенного воздействия; Cu и Zn – комплексного антропогенного действия; Fe – терригенного влияния; Co и Cs – как маркеры возможного радиоактивного ингибирующих загрязнения. рост В качестве чувствительных селективных форм бактерий, добавок, используются растворимые соли металлов – хлориды Cu, Cd, Co, Cs, Ni, Zn, Fe и нитрат Pb. Уровень индивидуальной устойчивости бактериальных штаммов к ионам тяжелых металлов оценивают на основе определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) соли каждого металла. МИК определяют как наименьшую концентрацию токсиканта в среде, которая при определенных условиях полностью ингибирует рост бактерий ( Lambert, Pearson, 2000) Коммунально-бытовое загрязнение Санитарно-показательные микроорганизмы микроорганизмы, которые постоянно обитают (СПМ) – такие в организме человека (животных) и постоянно выделяются во внешнюю среду. Санитарно-показательные микроорганизмы • бактерии группы кишечных палочек (БГКП); • энтерококки; • протей; • сульфитредуцирующие клостридии; Бактерии группы кишечной палочки – БГКП Наиболее важными показателями фекального загрязнения во всем мире признаются бактерии группы кишечной палочки (БГКП). Под этим общим понятием объединяют бактерии семейства Enterobacteriaceae, родов Citrobacter, Enterobacter, Serratia, Klebsiella. Следует отметить, что понятие БГКП – утилитарное (санитарно-бактериологическое и экологическое), но не 20 таксономическое. К категории БГКП относят грамотрицательные, не образующие спор и не обладающие оксидазной активностью палочки, ферментирующие лактозу и глюкозу до кислоты и газа при температуре 370С в течение 24 ч. Эти бактерии выделяются в окружающую среду только с испражнениями человека и теплокровных животных. По способности расщеплять лактозу при температуре 370С БГКП делят на лактозоотрицателъные и лактозоположительные кишечные палочки (ЛКП), или колиформные. Из группы ЛКП выделяются фекальные кишечные палочки (ФКП), способные ферментировать лактозу при температуре 44,5 0C . К ним относится Е. coli, не растущая на цитратной среде. Эти бактерии являются показателями свежего фекального загрязнения. Е. coli Род Escherichia, включающий типовой вид хронического Е. coli, показатель фекального загрязнения. Для идентификации используют биохимические тесты, учитывая способность к ферментации лактозы при температуре 44,50C и отсутствие роста на цитратсодержащих средах. Представителей рода, находящихся в воде, трактуют как термотолерантные колиформные бактерии, в лечебных грязях – как фекальные колиформные бактерии. На среде Эндо образуют, как правило, колонии с металлическим блеском (рис. 11). ЛКП термотолерантные колиформные бактерии ЛКП входят в группу колиформных организмов, обладают всеми признаками бактерий семейства Enterobacteriaceae , но они способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при температуре 44 0C в течение 24 ч. и оказывают существенное влияние на качество воды. Они содержат также род Escherichia (E.сoli), Klebsiella, Enterobacter и Citrobacter. Общее количество термотолерантных колиформ обычно прямо пропорционально концентрации E.сoli, но полное обнаружение E.сoli слишком сложный и рутинный процесс. Таким образом, термотолерантные бактерии являются хорошим индикатором загрязнения воды. 21 Энтерококки К показателям фекального загрязнения относят, помимо БГКП, энтерококки (разновидность S.faecalis), клостридии (С. perfringens), бактерии Рода Proteus и колифаги. Поскольку энтерококки выживают во внешней среде относительно недолго, их обнаружение, как и обнаружение Е. coli, служит показателем свежего фекального загрязнения. В настоящее время энтерококкометрия узаконена в международном стандарте на воду, как показатель свежего фекального загрязнения. При обнаружении в воде энтерококков становится атипичных главным кишечных палочек показателем свежего присутствие фекального загрязнения. В открытых водоёмах определяют соотношение ФКП/ФЭ, где ФКП – фекальная кишечная палочка, а ФЭ – фекальные энтерококки. При значении ФКП/ФЭ = 5-10 подозревают сброс в водоём нехлорированных сточных вод. Если показатель находится в пределах 0,1-1, хлорирование сточных вод достаточное, так как ФЭ в 4 раза устойчивее к хлору, чем кишечная палочка. Протей В настоящее время показано, что бактерии рода Proteus встречаются в 98% случаев в выделениях кишечника человека и животных, из них в 82% случаев – P. mirabilis. Обнаружение протея в воде и продуктах указывает на загрязнение объектов разлагающимися субстратами и свидетельствует о крайнем санитарном неблагополучии. Протеометрия воды официально признана в США. Клостридии Clostridium perfringens длительно сохраняется во внешней среде за счёт спорообразования, поэтому не свидетельствует о свежем фекальном загрязнении; С. perfringens может служить косвенным показателем наличия в воде энтеровирусов. Для прорастания спор клостридий необходим температурный шок (прогревание при температуре +750С в течение 15-20 мин). 22 Определение титра этого СПМ рекомендовано при текущем санитарном надзоре за состоянием территории. Тесты на обнаружение сульфитредуцирующих клостридий в воде предусматривают стандарты России, США и других стран. Биогенное загрязнение Основная масса организмов Мирового океана сосредоточена у берегов, преимущественно в зоне морских побережий – прибрежное «сгущение жизни», по В.И. Вернадскому. В водной среде содержится большое количество мелких частиц органического вещества – детрита (от лат. detritus – истертый), образованного из отмирающих растений и животных. Массы этих частиц оседают на бактериях и благодаря выделяющемуся в результате бактериального разложения газу постоянно находятся в толще воды во взвешенном состоянии. Известно, что из сбрасываемых загрязняющих веществ наибольший суммарный ущерб биоресурсам наносят соединения, не обладающие специфическими токсическими свойствами, – органические вещества, неорганические биогенные компоненты (соединения фосфора и азота) и жиры (Христофорова, Саломай, 2006). На минерализацию органических веществ, особенно жиров, требуется большое количество кислорода. Обилие биогенных элементов вызывает эвтрофикацию и также потребление кислорода на разложение отмирающего фитопланктона. С использованием синтетических моющих средств, а также с применением эмульгаторов и пестицидов связано поступление полифосфатов в среду. Полифосфаты легко разлагаются и их концентрации в воде быстро снижаются. Появление органических фосфатов в природных водах обусловлено процессами жизнедеятельности и посмертного распада водных организмов, а также хозяйственно-бытовыми стоками и стоками от животноводческих ферм. Избыточное поступление фосфатов в прибрежные воды сопровождается «цветением» планктонных водорослей, в том числе сине-зеленых, на разложение которых расходуется растворенный кислород. 23 Кроме того, прижизненные и посмертные выделения сине-зеленых водорослей загрязняют воду токсичными веществами, что угнетающе действует на экосистемы, вызывает гибель многих гидробионтов и, в конце концов, пагубно влияет на здоровье человека. Обычно максимальные концентрации органических и минеральных веществ в водоемах наблюдаются ранней весной, что связано с поверхностным смывом с суши и поступлением их из донных отложений. С повышением температуры воды и развитием продукционных процессов наблюдается увеличение концентраций органического вещества. Известно, что чрезвычайно важную роль в начальных этапах расщепления органических субстратов, в круговороте биогенных элементов играют микроорганизмы, выделяющие в среду гидролитические ферменты (Заварзин, Колотилова, 2001). В средах, загрязненных органическими веществами, возрастает количество микрофлоры, утилизирующей соответствующие субстраты, и численность этих микроорганизмов может быть показателем степени органического загрязнения среды (Исследования экосистем, 1992). Высокая численность индикаторных бактерий, выявляется в речных стоках, особенно в местах их впадения в морскую среду, где часто наблюдаются максимальные концентрации органических веществ (Ковалева, 2003). Присутствие высокой численности индикаторной микрофлоры в природных водах свидетельствует о наличии легкоразлагающихся органических веществ, таких как липиды, белки и углеводы. Биохимическая концентрирующейся активность в области липолитической поверхностной микрофлоры, пленки, способствует освобождению поверхностных вод от жирных веществ и нормализует газо- и теплообмен между водной поверхностью и атмосферой. Наибольшая частота встречаемости и максимум численности липолитической микрофлоры в воде приурочен в основном к приустьевым и прибрежным участкам и заливам, где наблюдается максимальное загрязнение. По мере продвижения от 24 прибрежных и приустьевых участков к открытой акватории численность липолитических бактерий снижается на два - три порядка (Цыбань, Теплинская, 1974; 1982). Амилолитические бактерии являются индикаторами присутствия в водной среде полисахаридов. Способность к расщеплению крахмала при помощи амилолитических экзоферментов распространена у многих микроорганизмов очень широко. Многие почвенные грибы – активные продуценты амилазы. Среди бактерий к активным продуцентам амилаз относят некоторые бациллы (Bacillus macerans, B. subtilis), псевдомонады и различные виды стрептомицетов (Динамика экосистем..., 2000). Микроорганизмы протеолитики являются индикаторами присутствия в водной среде веществ белковой природы: казеина, желатина, коллагена и т.д. Способностью расщеплять пептиды и белки обладают ряд микроорганизмов: Протеолитические бактерии (бактероиды, протей, эшерихии, клостридии и др.) используют в качестве питательного субстрата белок и продукты его гидролиза, вызывая гнилостные процессы, конечными метаболитами которых являются аммиак, ароматические аминокислоты, эндогенные канцерогены, сульфиды и др. Микроорганизмы, обладающие высокой гидролитической активностью в отношении разрушения органических веществ природного и антропогенного характера, играют важную роль в самоочищении среды (Цыбань, Панов, гидролитической Баринова, активностью 1990; при Кондратьева, биогенном 1996). Высокой загрязнении обладают цианобактерии. Наиболее активными продуцентами гидролаз в морской среде являются бактерии родов Vibrio, Bacillus, Pseudomonas–Alteromonas (Иванова, Михайлов, 1992). Бактерии, ассоциированные с морскими прикрепленными организмами: губками Spirastrella sp., Phyllospongia sp., Ircinia sp., Aaptos sp., Azorica sp. and Axinella sp. и кораллами Lobophytum sp. синтезируют высокоактивные протеазы, амилазы и карбоксиметилцеллюлазы. Они могут 25 являться источниками получения этих ферментов. Широкий спектр активности гидролаз обнаружен у бактерий р. Pseudoalteromonas и отмечена разница в уровне активности и наборе экзоферментов у штаммов различной видовой принадлежности, а также изолированных из различных мест обитания (Ivanova et al., 2003). Липазы Липазы – ферменты, которые оказывают действие на сложноэфирную связь и катализируют гидролиз жиров на глицерин и жирные кислоты (Основы биохимии, 1986). Липазы микроорганизмов обычно относят к индуцибельным ферментам, т. к. их биосинтез в значительной степени возрастает при внесении в состав питательной среды различных масел или продуктов гидролиза (Свириденко и др., 1978, цит. по Давранов, Табак, 1990). Наиболее активными продуцентами липаз среди микроорганизмов, изолированных из морской воды и морских животных, по данным Е. П. Ивановой и В. В. Михайлова являются бактерии группы Pseudomonas – Alteromonas (Иванова, Михайлов, 1992). Протеиназы К основным физиолого-биохимическим свойствам микроорганизмов принадлежит протеолитическая активность, связанная с наличием протеаз. Эти ферменты согласно классификации называются пептидгидролазами. Протеазы катализируют расщепление пептидной связи –СО–NH–. Они разделяют на пептидазы, расщепляющие пептиды и дипептиды, и протеиназы, гидролизующие непосредственно белок, а также полипептиды (Фершт, 1980). В результате гидролиза белков с помощью протеиназ (пептидилгидролаз) образуются полипептиды и свободные аминокислоты. Характер распада белковой молекулы на пептиды и аминокислоты зависит от природы субстрата и внешних условий (рН, температуры и др.). При исследовании активности протеиназ у микроорганизмов чаще всего в 26 качестве белковых субстратов используют желатин, гемоглобин, казеин, сывороточный альбумин (Кочетов, 1989). Способность синтезировать высокоактивные внеклеточные протеиназы известна для многих актиномицетов. Протеолитический комплекс актиномицетов является источником ферментов, функционирующих в широкой области pH и характеризующихся широким спектром действия. Например, штамм Streptomyces sp. при определенных условиях синтезирует активные внеклеточные протеазы. Этот ферментный комплекс катализирует гидролиз пептидных связей желатина, казеина, фибрина, фибриногена, коллагена (Рубан, 1986). Амилазы Амилазы – ферменты, действующие на гликозидные связи и гидролизующие крахмал, декстрины, гликоген, амилопектин и др. сложные углеводы (Рубан, 1986). Способность к расщеплению крахмала при помощи амилолитических экзоферментов распространена у микроорганизмов очень широко. Многие почвенные грибы – активные продуценты амилазы. К активным продуцентам амилаз относятся некоторые палочки – псевдомонады, а также различные виды стрептомицетов. Амилолитические бактерии часто выделяют с поверхности морских водорослей, из растительных выбросов и донных осадков. Повышенное содержание активных амилолитиков обнаружено в морских выбросах в условиях специфического биологического загрязнения (Иванова, Михайлов, 1992). В литературе описан ряд амилолитических ферментов, продуцируемых различными представителями р. Bacillus. Все они существенно различаются по специфичности действия и физико-химическим свойствам. Например, амилазы B. subtilis C-1, B. subtilis 37 и B. stearothermophilus характеризуются отимумом действия при слабокислых значениях pH среды – около 6,0. Амилазы алкалофильных штаммов Bacillus sp. имеют оптимум действия в щелочной области при pH =9,5 - 10 (Колтукова и др., 1990). 27 Из литературы известно, что обширной группой продуцентов амилолитических ферментов среди бактерий, изолируемых из морской среды, являются вибрионы, до 40 % выделенных штаммов способны к гидролизу крахмала (Иванова, Михайлов, 1992). 28 Заключение Микроорганизмы, благодаря физиологическим и генетическим особенностям, быстро реагируют на изменение качества среды и действие стрессовых факторов. В связи с этим, они могут быть использованы для оценки степени и характера загрязнения морской среды. К индикаторам биологического загрязнения относят микроорганизмы, выделяющие в среду гидролитические ферменты, расщепляющие легкоразлагающиеся органические соединения – молоко (протеолитические), крахмал (амилолитические), растительные масла или жиры (липолитические). В условиях высокого органического загрязнения, при недостатке кислорода, хорошо размножаются фотоорганоавтотрофы, которые для метаболических процессов в качестве источника энергии используют свет, а для процессов анаболизма используют углерод углекислого газа. Высокая численность сульфатредуцирующих бактерий указывает на присутствие высоких концентраций сероводорода в среде и дефицит кислорода. В этих условиях активно размножаются фотосинтетики – синезеленые водоросли, вызывая «цветение» водоемов. Индикаторами фекального загрязнения являются бактерии группы кишечной палочки контаминирования (БГКП), численность морской среды которых отражает данной группой степень бактерий и свидетельствует о фекальном загрязнении природных вод. В эту группу входят микроорганизмы таких родов как: Епtеrоbасtеr, Escherichia, Proteus, Citrobacter, Klebsiella и др. С помощью отдельных индикаторных групп микроорганизмов можно судить не только об уровне антропогенного загрязнения фекального происхождения, но и о его давности (Медицинская микробиология, 2002 ). К индикаторам техногенного загрязнения относят гетеротрофные бактерии устойчивые к высоким концентрациям нефтеуглеводородов, фенолов, тяжелых металлов, свидетельствующие о значительном загрязнении вод поллютантами (Гусев, Коронелли, 1985). Изучение отклика 29 на присутствие в среде тяжелых металлов позволяет получить информацию об их токсическом эффекте, установить механизмы адаптации и резистентности бактерий (Gadd, 1990). 30 Список литературы 1. Безвербная И. П., Металлоустойчивые Бузолева Л. гетеротрофные С., Христофорова бактерии в Н. К. прибрежных акваториях Приморья // Биология моря. – 2005. – Т. 31, № 2. – С. 89–93. 2. Бузолева, Л.С., Летягина, А.В., Звягинцев, А.Ю., Кашин, И.А. Исследование микроорганизмов, поступающих в порт Владивостока с балластными водами судов // Российский Журнал Биологических Инвазий. – 2012. - №1. – С. 19-27. 3. Гусев М. В., Коронелли Т. В., Сенцова О. Ю. Использование микроорганизмов в качестве биоиндикаторов с целью изучения экологических последствий загрязнения вод // Экологические последствия загрязнения океана. – Л.: Гидрометеоиздат, 1985. – С. 113– 125. 4. Давранов К. Д. Влияние источников углерода на синтез липазы микромицетом Oospora lactis / К. Д. Давранов, М. Я. Табак // Прикладная биохимия и микробиология. – 1990. – Т. 26, № 3. – С. 403– 407. 5. Димитриева Г.Ю., Безвербная И.П. Микробная индикация - эффективный инструмент для мониторинга загрязнения прибрежных морских вод тяжелыми металлами // Океанология.– 2002.– Т. 42, № 3.– С. 408-415. 6. Динамика экосистем Берингова и Чукотского морей / Под. ред. Ю. А. Израэль, А. В. Цыбань, Дж. Гребмайер и др. – М. : Наука, 2000. – 357 с. 7. Дроздовская, О. А. Поиск микроорганизмов – индикаторов и деструкторов фенолов в прибрежных водах дальневосточных морей : автореф. дис. … канд. биол. наук : 03.00.16 / О.А. Репина. – Владивосток, 2000. 31 8. Заварзин Г. А. , Колотилова Н. Н. Введение в природоведческую микробиологию. – М. : Книжный дом «Университет», 2001. – 256 с. 9. Иванова Е. П., Михайлов В. В. Микроорганизмы – ассоцианты мидии Crenomytilus grayanus и их гидролитическая активность // Микробиология. – 1992. – Т. 61, вып. 3. – С. 514–519. 10. Исследование экосистем Берингова и Чукотского морей / Под ред. Ю. А. Израэля, А. В. Цыбань. – СПб. : Гидрометеоиздат, 1992. – Вып. 3. – С. 93–220. 11. Калитина, Е. Г. Влияние органического загрязнения на структуру и состояние микробных сообществ поверхностных вод бухты Золотой Рог : дис. … канд. биол. наук : 03.00.16 / Е.Г. Калитина. – Владивосток, 2006. – 181 с. 12. Ковалева Н. В. Изменение численности бактериопланктона северозападной части Черного моря в зависимости от гидролого- гидрохимических факторов // Микробиологический журнал. – 2003. – Т. 65, № 5. – С. 3–8. 13. Колесников, С. И. Экология: учеб. Пособие / С.И. Колесников. — М. : Издательско-торговая корпорация «Дашков и К0»; Ростов н/Д: НаукаПресс, 2007. — 384 с. 14. Колтукова Н. В., Бондарчук А. А., Коваленко Э. А. Некоторые физикохимические свойства амилолитического комплекса Bacillus mesentericus // Прикладная биохимия и микробиология. – 1990. – Т. 26, № 1. – С. 50–52. 15. Кондратьева Л.М., Каретникова Е.А. Микробиологическая индикация фенольного загрязнения водных экосистем // Экология пойм сибирских рек и Арктики: Материалы II совещания. – Томск, 2000. – С. 248 – 256. 16. Кондратьева Л.М. Морские бактерии и первичное почвообразоваие на вулканопластах. – Владивосток: Дальнаука, 1996. – 118 с. 32 17. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии.– М., 1989. – 272 с. 18. Лабинская А.С. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований. – М.: Медицина, 2004.– 576 с. 19. Медицинская микробиология / Под ред. В.И. Покровского. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. – 768 с. 20. Методы общей бактериологии / Под ред. Ф. Герхардта и др. – М. : Мир, 1983. – Т. 1. – 536 с. 21. Методы общей бактериологии / Под ред. Ф. Герхардта и др. – М.: Мир, 1984. – 1272 с. 22. Михайлов, В.В., Терентьев, Л.Л., Терентьева, Н.А. Морские микроорганизмы и их ферменты / В.В. Михайлов. – Владивосток : Дальнаука, - 2004. - 230 с. 23. Многолетнее использование биоиндикатора для оценки экологического состояния реки / А.Г. Сидорский, Г.Г. Баранов, А.В. Лепилов и др. //Экология. – 1991. – №4. – С. 15-19. 24. Моисеев, П. А. Биологические ресурсы Мирового океана. – М.: Агропромиздат, 1989. – 368 с. 25. Новиков, Ю.В. Экология, окружающая среда и человек: учеб. Пособие для вузов, средних школ и колледжей. – 3-е изд., испр. и доп. / Ю. В. Новиков. – М.: ФАИР-ПРЕСС, 2005. – 736 с. 26. Основы биохимии / Под. ред. А.А. Анисимова. – М.: Наука, 1986 .– 552 с. 27. Проблемы Мирового океана / Под ред. А.А. Аксенова. – М.: Знание, 1981. – 140 с. 28. Протасов, В.Ф., Матвеева, А.С. Экология: Термины и понятия. Стандарты, сертификация. Нормативы и показатели: учеб. и справочное пособие / В.Ф. Протасов. – М. : Финансы и статистика, 2001. – 208 с. 33 29. Репина, М.А. Нефтеуглеводородокисляющие микроорганизмы прибрежных вод юга острова Сахалин : автореф. дис. … канд. биол. наук : 03.00.16 / М.А. Репина. – Владивосток, 2009. – 19 с. 30. Родионова, И.А. Глобальные проблемы человечества: Пособие для учащихся и студентов, - 2-е изд., испр. и доп. / И.А. Родионова – М.: Аспект Пресс, 1995. – 159 с. 31. Руководство по методам биологического анализа морской воды и донных отложений / Под ред. А. В. Цыбань. – Л.: Гидрометеоиздат, 1980. – 191 с. 32. Рубан Е. Л. Физиология и биохимия представителей рода Pseudomonas. – M.: Наука, 1986. – 200 c. 33. Руководства по гидробиологическому мониторингу пресноводных экосистем / Под ред. В. А. Абакумова. – СПб.: Гидрометеоиздат. 1992. – С. 18-40. 34. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов. – М.: Мир, 1980. – С. 373–388. 35. Химическое загрязнение морской среды / Под ред. А.И. Симонов; Гос. Ком. СССР по гидрометеорологии и контролю природ. Среды. – Л.: Гидрометеоиздат, 1979. – 165 с. 36. Христофорова Н.К., Соломай М.С. Химико-экологичекая оценка качества прибрежных вод города Владивостока // Электронный журнал «Исследовано в России», 2006. ... www.dissercat.com/.../ostrakody-kakindikatory 37. Цыбань А. В., Теплинская Н. Г. О методе изучения морских липолитических бактерий // Гидробиол. журн. – 1974. – Т. 10, № 2. – С. 116–122. 38. Цыбань А. В., Теплинская Н. Г. Эколого–физиологические свойства липолитической и протеолитической микрофлоры в море // Океанология. – 1982. – Т. 22, вып. 1. – С. 108–114. 34 39. Цыбань А.В. Панов Г.В., Баринова С.П. Индикаторная микрофлора в Балтийском море // Исследование экосистемы Балтийского моря. Вып. 3. – Л.: Гидрометеоиздат, 1990. – С.69 – 83. 40. Экология микроорганизмов: учеб. для студ. вузов / А.И. Нетрусов, Е. А. Бонч-Осмоловская, В. М. Горленко и др.; под ред. А.И. Нетрусова. – М.: издательский центр «Академия», 2004. -272 с. 41. Gadd G. M. Metal tolerance // Microbiology of extreme environments / Ed. by C. Edwards. – Philadelphia: Open University Press, 1990. – P. 178– 210. 42. Lambert R. J. W., Pearson J. Susceptibility testing: accurate and reproducible minimum inhibitory concentration (MIC) and non-inhibitory concentration (NIC) values // J. of Appl. Microbiol. – 2000. – Vol. 88. – P. 784–790. 43. Youchimizu M., Kimura T. Study on intestinal microflora of Salmonids // Fish. Pathol.– 1976.– Vol.10.– N.2.– P. 243–259. 44. Shewanella fidelis sp. nov., isolated from sedimentsand sea water / E.P. Ivanova, T. Sawabe, K. Hayashi et al. // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. – 2003. – V. 53. – P. 577–582. 35
