АКСЁНОВ Андрей Сергеевич

На
АКСЁНОВ
Андрей
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ
ЦЕЛЛЮЛОЗЫ
С
правах
рукописи
Сергеевич
ОТБЕЛКИ
СУЛЬФАТНОЙ
ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
ФЕРМЕНТОВ
КСИЛАНАЗ
05.21.03 - Технология и оборудование химической
переработки биомассы дерева; химия древесины
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата технических наук
Архангельск - 2007
Работа выполнена на кафедре биотехнологии Архангельского государст­
венного технического университета
Научный руководитель:
доктор технических наук,
профессор Новожилов Е.В.
Официальные оппоненты:
доктор технических наук,
профессор Канарский А.В.
кандидат технических наук,
доцент Суханова Г.П.
ОАО «ЦНИИБ»
Ведущая организация:
Защита диссертации состоится 14 декабря 2007 г. в 10 — часов на заседа­
нии диссертационного совета Д.212.008.02 в Архангельском государствен­
ном техническом университете по адресу: 163002, г. Архангельск, наб. Се¬
верной Двины, 17.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Архангельского государственного технического университета.
Автореферат разослан
ноября 2007 г.
Ученый секретарь диссертационного совета,
канд. хим. наук, профессор
Т.Э. Скребец
2
ОБЩАЯ Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А
Актуальность
РАБОТЫ
темы.
Основным направлением развития производства беленой сульфатной цел­
люлозы является снижение или полное исключение применения
хлорсодержа-
щ и х р е а г е н т о в и п е р е х о д к ш и р о к о м у и с п о л ь з о в а н и ю к и с л о р о д с о д е р ж а щ и х от­
беливающих химикатов.
сульфатной
Большое внимание уделяется повышению
белимости
целлюлозы, для чего предлагаются усовершенствованные
методы
варки, а т а к ж е э ф ф е к т и в н ы е с т а д и и п р е д в а р и т е л ь н о й о б р а б о т к и ц е л л ю л о з ы пе¬
ред о т б е л к о й , к о т о р ы е п о з в о л я ю т с у щ е с т в е н н о у м е н ь ш и т ь з а т р а т ы на п р о и з в о д ¬
ство товарной целлюлозы по E C F - и T C F - схемам отбелки.
Наряду с к и с л о р о д с о д е р ж а щ и м и о т б е л и в а т е л я м и все ч а щ е находят при­
менение ферменты. В производстве сульфатной целлюлозы используются ксиланазы. Действие ферментов данного класса направлено на гидролиз лигноуглев о д н ы х с в я з е й и на р а с щ е п л е н и е к с и л а н а , с о р б и р о в а н н о г о на п о в е р х н о с т и цел¬
л ю л о з н ы х волокон при варке. Предварительная обработка ц е л л ю л о з ы
ксилана-
з а м и с н и ж а е т р а с х о д о т б е л и в а ю щ и х р е а г е н т о в и п р и в о д и т к б о л е е в ы с о к о м у от¬
беливающему эффекту.
В
настоящее
время
ксиланазы
выпускаются
в
США
(Genencor
International), Д а н и и (Novozymes), Ф и н л я н д и и ( О у Banmark А В ) , К а н а д е
Bio-Products), И н д и и (Biocon).
Ферментные препараты
зарубежных
т е л е й и с п о л ь з у ю т с я в н а с т о я щ е е в р е м я на ц е л л ю л о з н о - б у м а ж н ы х
(IOGEN
производи¬
предприятиях
Р о с с и и . П р о и з в о д с т в о к с и л а н а з д л я н у ж д Ц Б П в н а ш е й с т р а н е н а х о д и т с я на ста¬
дии лабораторных
ГосНИИГенетики
canescens F-912.
исследований
и получения
опытных
партий.
В
институте
п о л у ч е н а в ы с о к о о ч и щ е н н а я к с и л а н а з а из ш т а м м а P e n i c i l l i u m
Представляет
интерес
проверить
возможность
использования
этого препарата для предварительной обработки сульфатной целлюлозы
перед
отбелкой.
Д а н н а я р а б о т а в ы п о л н е н а в р а м к а х Р о с с и й с к о й н а у ч н о - т е х н и ч е с к о й про¬
г р а м м ы " Ж и в ы е с и с т е м ы " Ж С - К П 4/002 (2006 - 2007 г о д ы ) .
Цель
и задачи
исследования.
Целью настоящей
р а б о т ы я в л я л а с ь разра¬
ботка методов у л у ч ш е н и я белимости сульфатной целлюлозы за счет х и м и ч е с к и х
и б и о х и м и ч е с к и х в о з д е й с т в и й на с т а д и и её п о д г о т о в к и к п р о ц е с с у о т б е л к и и в
процессе отбелки.
Для достижения этой
•
цели были поставлены с л е д у ю щ и е
задачи:
установить влияние условий хранения небеленой сульфатной
целлюлозы
на у д а л е н и е ч е р н о г о щ е л о к а из в о л о к н а и п р е д л о ж и т ь в а р и а н т ы интенси¬
фикации этого процесса;
3
•
провести сравнительную оценку действия различных препаратов ксиланаз
и их о т д е л ь н ы х ф р а к ц и й на н е б е л е н у ю с у л ь ф а т н у ю ц е л л ю л о з у и целлю¬
лозу в п р о ц е с с е о т б е л к и ;
•
и с с л е д о в а т ь п о в е д е н и е л и г н о у г л е в о д н ы х к о м п л е к с о в с у л ь ф а т н о й целлю¬
лозы при ферментативном гидролизе ксиланазами;
•
р а з р а б о т а т ь р е ж и м и п р о в е с т и п р о м ы ш л е н н ы е и с п ы т а н и я с т а д и и биохи¬
мической обработки сульфатной х в о й н о й целлюлозы отечественной ксиланазой.
Научная
новизна
П о к а з а н о , ч т о п о в ы ш е н и е р Н при х р а н е н и и н е б е л е н о й с у л ь ф а т н о й целлю¬
л о з ы и н т е н с и ф и ц и р у е т у д а л е н и е л и г н и н а и в с о ч е т а н и и с ф е р м е н т а т и в н о й обра¬
боткой ксиланазой повышает белимость целлюлозы. Выявлено, что
обработка
лиственной сульфатной целлюлозы ксиланазой в процессе отбелки приводит к
удалению фрагментов ксилана, с н и ж а ю щ и х белимость целлюлозы.
У с т а н о в л е н о , ч т о в р е з у л ь т а т е ф е р м е н т а т и в н о г о г и д р о л и з а к с и л а н а з о й не¬
беленой сульфатной целлюлозы растворяются лигноуглеводные комплексы.
В
их с о с т а в в х о д я т ф р а г м е н т ы к с и л а н а с ч и с л о м о с т а т к о в к с и л о з ы до 10.
У с т а н о в л е н а с у б с т р а т н а я с п е ц и ф и ч н о с т ь к с и л а н а з по о т н о ш е н и ю к лист¬
венной и хвойной сульфатной целлюлозе. Подтверждено отрицательное влияние
ц е л л ю л а з н о й а к т и в н о с т и на п р о ч н о с т н ы е х а р а к т е р и с т и к и в о л о к о н .
Определено
с о о т н о ш е н и е к с и л а н а з н о й и ц е л л ю л а з н о й а к т и в н о с т и в п р о м ы ш л е н н ы х препара¬
т а х к с и л а н а з , при к о т о р о м ф е р м е н т ы не с н и ж а ю т п р о ч н о с т ь ц е л л ю л о з ы .
Практическая
ценность
П р е д л о ж е н с п о с о б п о д г о т о в к и с у л ь ф а т н о й ц е л л ю л о з ы к о т б е л к е , обеспе¬
чивающий интенсификацию
числа Каппа
д и ф ф у з и и ч е р н о г о щ е л о к а из в о л о к н а ,
снижение
и уменьшение расхода отбеливающих химикатов.
Показана эффективность
ферментативной обработки сульфатной хвойной
ц е л л ю л о з ы о т е ч е с т в е н н о й к с и л а н а з о й F-912 д л я п о в ы ш е н и я б е л и м о с т и целлю¬
лозы при сохранении прочностных характеристик волокна.
Предложен способ оценки компонентного состава препаратов ксиланаз с
п о м о щ ь ю э к с к л ю з и о н н о й В Э Ж Х и м е т о д и к а о ц е н к и а к т и в н о с т и к с и л а н а з и их
отдельных фракций.
Автором
сертационной
•
выносятся
на
защиту
следующие
основные
положения
работы:
результаты хроматографического анализа препаратов ксиланаз;
4
дис­
•
результаты обработки различными ксиланазами и отдельными
препаратов ксиланаз
•
результаты
фракциями
лиственной и хвойной сульфатных целлюлоз;
хроматографического
анализа
лигноуглеводных
комплексов,
растворяющихся при ферментативной обработке ц е л л ю л о з ы ;
•
режим
обработки небеленой хвойной сульфатной целлюлозы
отечествен¬
н ы м п р е п а р а т о м к с и л а н а з ы F-912.
Апробация
работы
Основные положения диссертационной работы докладывались и получили
п о л о ж и т е л ь н у ю о ц е н к у на
м е ж д у н а р о д н ы х к о н ф е р е н ц и я х « Ф и з и к о х и м и я лиг¬
н и н а » I и II ( А р х а н г е л ь с к , 2005, 2007 г.); В с е р о с с и й с к о й н а у ч н о й
конференции
« Х и м и я и т е х н о л о г и я р а с т и т е л ь н ы х в е щ е с т в » ( С ы к т ы в к а р , 2006 г.); междуна¬
родной научно-технической конференции, посвященной 75-летию А Л Т И - А Г Т У
«Современная наука и образование в решении проблем экономики Европейского
С е в е р а » ( А р х а н г е л ь с к , 2004 г.); II В с е р о с с и й с к о й
научно-технической
конфе¬
р е н ц и и с т у д е н т о в и а с п и р а н т о в ( Е к а т е р и н б у р г , 2006 г.); а т а к ж е на е ж е г о д н ы х
н а у ч н о - т е х н и ч е с к и х к о н ф е р е н ц и я х А р х а н г е л ь с к о г о Г Т У (2005-2007 гг.).
Публикации.
Структура
ние;
По теме диссертации опубликовано
и объем
аналитический
диссертации.
обзор;
9
работ.
Диссертация включает в себя:
методическую
часть;
экспериментальную
в к л ю ч а ю щ у ю 4 раздела; общие в ы в о д ы и список использованных
введе¬
часть,
источников.
С о д е р ж а н и е р а б о т ы и з л о ж е н о на 127 с т р а н и ц а х , в к л ю ч а я 31 р и с у н о к и 32 таб¬
л и ц ы , б и б л и о г р а ф и я с о д е р ж и т 161 н а и м е н о в а н и е .
КРАТКОЕ
В
аналитическом
сульфатной целлюлозы.
различных
ксилана,
обзоре
СОДЕРЖАНИЕ
рассмотрены
РАБОТЫ
современные
методы
Отмечены преимущества и недостатки
отбеливающих
лигноуглеводных
химикатов.
Рассмотрено
комплексов,
влияние
гексенуроновых
кислот
отбелки
использования
сорбированного
на
белимость
сульфатной целлюлозы. Представлен обзор применения ферментов в целлюлоз¬
но-бумажной промышленности, особое внимание уделено
ческим ферментам. Показана эффективность
гемицеллюлозолити-
и с п о л ь з о в а н и я к с и л а н а з п е р е д от¬
б е л к о й с у л ь ф а т н о й ц е л л ю л о з ы . О т м е ч е н о , ч т о м е х а н и з м их д е й с т в и я
на целлю¬
лозу и з у ч е н н е д о с т а т о ч н о , с д е л а н в ы в о д о н е о б х о д и м о с т и п р о в е д е н и я исследо¬
в а н и й в д а н н о м н а п р а в л е н и и . Н а о с н о в е а н а л и з а л и т е р а т у р н ы х д а н н ы х сформу¬
лированы цель и задачи работы.
5
В методической
части
представлены
характеристики
объектов,
риалов и методики исследования. В работе использовались образцы
мате¬
небеленой
лиственной сульфатной и небеленой хвойной сульфатной целлюлоз, полученных
по р е ж и м а м А р х а н г е л ь с к о г о и К о т л а с с к о г о Ц Б К ; п р е п а р а т ы к с и л а н а з : Pulpzyme
Н С ("Novozymes", Д а н и я ) , Ecopulp Т Х - 2 0 0 А ("Оу Banmark А В " ,
Финляндия),
B i o b r i t e U H B ("Iogen", К а н а д а ) , Neoxylanase A L K Н С ( " B i o c o n " И н д и я ) ,
F-912
( " С и б б и о ф а р м " , Р о с с и я ) . О б р а б о т к у ц е л л ю л о з ы ф е р м е н т а м и и о т б е л к у проводи¬
ли в условиях,
Анализ
близких к технологическим режимам указанных
целлюлозы
выполняли
в соответствии
со
предприятий.
стандартными
методиками
Г О С Т , S C A N , ISO.
Анализ
состава препаратов
также определение
эксклюзионной
состава олигосахаридов
ВЭЖХ
«Мультихром»).
ксиланаз,
выделение отдельных
в фильтратах проведены
(хроматографичеекая
Молекулярно-массовое
фракций,
система
распределение
«Стайер»,
а
методом
программа
лигноуглеводных
ком­
плексов было определено с помощью эксклюзионной В Э Ж Х (хроматограф «Милихром - 4»).
Экспериментальная
часть
с о с т о и т из 4 р а з д е л о в .
1. Влияние условий подготовки лиственной сульфатной целлюлозы к
отбелке на эффективность ферментативной обработки ксиланазой
При подготовке к отбелке в процессе выдерживания целлюлозы в башнях
высокой концентрации
( Б В К ) и м а с с н ы х б а с с е й н а х п р о и с х о д и т д и ф ф у з и я чер¬
н о г о щ е л о к а из в о л о к н а , ч т о п р и в о д и т к с н и ж е н и ю ч и с л а К а п п а н е б е л е н о й цел¬
л ю л о з ы . П е р е х о д в р а с т в о р л и г н и н а при х р а н е н и и ц е л л ю л о з н о й м а с с ы подтвер¬
ж д а е т с я у в е л и ч е н и е м о п т и ч е с к о й п л о т н о с т и ф и л ь т р а т а (рис. 1, р Н 9).
Число
Каппа
показатель
товки
оно
-
это
важный
качества
подго¬
небеленой
во
расход
целлюлозы,
многом
определяет
химикатов
дующую
тельное
на
отбелку.
и
уменьшение
после¬
Дополни¬
существенное
числа
Каппа
(2...3 ед.) м о ж н о д о с т и ч ь
П
р
о
д
о
л
ж
и
т
е
л
ь
н
о
с
т
ь
х
р а н е н и я
,
м
и
счет
н
Рисунок 1 - Оптическая плотность фильтратов
при хранении небеленой сульфатной целлюлозы
6
тщательной
массы с большим
за
промывки
расходом
в о д ы , но э т о н е п р и е м л е м о д л я у с л о в и й п р о и з в о д с т в а .
На ряде целлюлозно-бумажных предприятий России обработка небеленой
х в о й н о й и л и с т в е н н о й ц е л л ю л о з ы к с и л а н а з о й я в л я е т с я з а в е р ш а ю щ е й с т а д и е й ее
подготовки к отбелке. Необходимо максимально полно удалить черный
щелок
из в о л о к о н д о с т а д и и ф е р м е н т а т и в н о й о б р а б о т к и , к о т о р а я п р о в о д и т с я в с р е д е ,
близкой
к нейтральной,
в
которой
процесс
диффузии
лигнина
замедляется
( р и с . 1 , рН 6).
В д а н н о й р а б о т е и з у ч е н о и п р е д л о ж е н о д л я у м е н ь ш е н и я ч и с л а К а п п а не¬
б е л е н о й ц е л л ю л о з ы п р о в о д и т ь ее в ы д е р ж и в а н и е
при
более высоком значении
р Н ч е м о б ы ч н о . Э т о т с п о с о б м о ж н о р е а л и з о в а т ь при х р а н е н и и м а с с ы в Б В К п р и
т е м п е р а т у р е 70...80 °С, п р о д о л ж и т е л ь н о с т и
8... 10 %, д о б а в л я я N a O H
Выдерживание
к набуханию
120 м и н у т и к о н ц е н т р а ц и и
массы
с р а с х о д о м 2...5 кг/т ц е л л ю л о з ы .
целлюлозы при сильно щ е л о ч н о м значении
целлюлозы,
раскрытию
микрокапиллярной
рН приводит
структуры
волокон,
р а с т в о р е н и ю о с т а т о ч н о г о л и г н и н а ц е л л ю л о з ы . С н и ж е н и е ч и с л а К а п п а на 0,5 ед.
в данном случае имеет место и у тщательно промытой пробы целлюлозы (рис.
2), ч т о у к а з ы в а е т на т о , ч т о в п р о ц е с с е « в ы щ е л а ч и в а н и я » и д е т д о п о л н и т е л ь н о е ,
по с р а в н е н и ю с о б ы ч н о й д и ф ф у з и о н н о й п р о м ы в к о й м а с с ы , и з в л е ч е н и е л и г н и н а
из в о л о к н а .
10))
7,0 Н
m
s
^
J
рН = 9
1
^ —
1
1
рН=12
Целлюлоза после промывки
в производстве
^
1
рН = 8
1
| а
**
1
рН=12
Целлюлоза после про¬
мывки в лаборатории
Рисунок 2 - Влияние подщелачивания при хранении небеленой
целлюлозы на число Каппа
7
Д а л ь н е й ш е е с н и ж е н и е числа Каппа может быть получено при
небеленой целлюлозы
ксиланазой.
Механизм
действия
ксиланаз
обработке
предполагает
д е с т р у к ц и ю сорбированного ксилана и разрыв связей между лигнином и углево­
д а м и , ч т о п р и в о д и т к д о п о л н и т е л ь н о м у у д а л е н и ю о с т а т о ч н о г о л и г н и н а целлю¬
лозы.
К а к в и д н о из р и с . 3, в ы д е р ж и в а ­
5,0
н и е н е б е л е н о й ц е л л ю л о з ы в ще¬
4,5
лочной
4,0
в
в
g
с
усиливает
3,5
стадией
обработки
растворение
и дополняет действие
в
V
перед
ферментативной
4,0
|
среде
Уменьшение
(Ф)
лигнина
фермента.
числа Каппа
после
3,0
начальных
2,5
ДсЯЩ н а 0,2...0,3 е д . в е с ь м а су¬
2,0
+
после
хранение
промывки
без NaOH
стадий
щественно
2 кг/т
+ 4 кг/т
мости
NaOH
NaOH
полной
отбелки
с к а з ы в а е т с я на
целлюлозы.
бели-
Отбелка
схеме проходит при
Рисунок 3 - Влияние хранения целлюлозы при вы¬
соком значении р Н на число Каппа целлюлозы после
лее низком
обработки ксиланазой и отбелки по схеме До-Шд
дельных стадиях процесса,
по
бо¬
ч и с л е К а п п а на от¬
что
о б е с п е ч и в а е т п о в ы ш е н н у ю к о н е ч н у ю б е л и з н у ц е л л ю л о з ы ( т а б л и ц а 1).
Таблица 1 - Влияние значения р Н при хранении небеленой сульфатной лиственной
целлюлозы на ее белимость
Число Каппа
р Н при
Белизна
целлюлозы
Схема подготовки
хранении
и отбелки целлюлозы
массы перед
стадией Ф
Перед
После
целлюлозы,
стадией
стадии
%
До
Щд
Ф-Д0-Щ1-Д1-Щ2-Д2-К
8,8
9,6
3,2
88,3
Щ-Ф-Д0-Щ1-Д1-Щ2-Д2-К
12,0
9,3
2,9
89,0
Повышение рН
сификации удаления
после
обработки ксиланазой также
приводит
к интен¬
лигнина и снижению числа Каппа перед отбелкой (таблица
2). К п р о б а м ц е л л ю л о з ы , в з я т ы м п о с л е о б р а б о т к и к с и л а н а з о й
и з в о д с т в а , не п р о в о д я п р о м ы в к и , д о б а в л я л и N a O H
жали обработку в щелочной среде
до р Н
в
у с л о в и я х про¬
11,0... 11,5 и продол¬
п р и к о н ц е н т р а ц и и м а с с ы 3,5% в т е ч е н и е 40
м и н у т при т е м п е р а т у р е 55 °С. З а в е р ш е н и е п о д г о т о в к и ц е л л ю л о з ы к о т б е л к е в
щелочной среде способствует
переходу лигнина в раствор, что выражается в
8
с н и ж е н и и ч и с л а К а п п а п о с л е щ е л о ч н о й о б р а б о т к и на 0,6... 0,9 ед. К а п п а .
Таблица 2 - Влияние ферментативной и щелочной обработки на растворение лигнина и
на число Каппа небеленой сульфатной лиственной целлюлозы
Показатели фильтратов
Оптическая плот¬
ность фильтрата,
Е.о.п.
237 нм
280 нм
Реагент
Содержание лигнина в
фильтрате по
Пирлу-Бенсону,
мг/л
Число
Каппа
целлюлозы
Фермент
4,7
2,8
83
12,7
NaOH
4,9
3,4
95
13,1
Фермент / N a O H
6,0
3,1
113
12,2
Это объясняется тем, что деструкция
к с и л а н а на п о в е р х н о с т и
волокон
ц е л л ю л о з ы и р а з р ы в с в я з е й м е ж д у к с и л а н о м и ф р а г м е н т а м и л и г н и н а при фер¬
ментативной
обработке
в сочетании
с последующим
набуханием
сульфатной
ц е л л ю л о з ы в щ е л о ч н о й с р е д е при р Н 11 у в е л и ч и в а ю т д о с т у п н о с т ь л и г н и н а , ч т о
в ы з ы в а е т его у с и л е н н о е у д а л е н и е
из в о л о к о н в р е з у л ь т а т е щ е л о ч н о й э к с т р а к ц и и
(выщелачивания). В данном случае, при высокой концентрации лигнина в
ок¬
ружающей волокна жидкости исключительно в а ж н у ю роль играет эффективная
п р о м ы в к а ц е л л ю л о з ы п е р е д ее о т б е л к о й .
На
Архангельском
ЦБК
стадия
ферментативной
обработки
постоянно
п р и м е н я е т с я при п о д г о т о в к е с у л ь ф а т н о й л и с т в е н н о й ц е л л ю л о з ы к п о с л е д у ю щ е й
отбелке
по Е С Т - с х е м е
Д -Щ -Д -Щ -Д2-К.
0
1
2
1
Использование
предлагаемого
способа выдерживания
90,0
сы в щ е л о ч н о й
печивает
отбелки
при
мас¬
с р е д е обес¬
такой
схеме
повышение
белиз¬
н ы п р и р а в н о м р а с х о д е от¬
беливающих химикатов
при равной
шение
расхода
х л о р а на
35
40
45
50
55
О б щ и й р а с х о д д и о к с и д а х л о р а на о т б е л к у ,
—О — производственная
~-8—
схема
с добавкой
кг/т
белизне
или
умень¬
диоксида
5... 10 %
( р и с . 4).
В ц е л о м , с о в м е с т н о е приме¬
н е н и е щ е л о ч н о й и фермент¬
схема
NaOH
ной
Рисунок 4 - Влияние подщелачивания
лиственной сульфатной целлюлозы
на
белизну
обработок
сульфатной
целлюлозы
небеленой
лиственной
повышает
эф¬
ф е к т и в н о с т ь п о д г о т о в к и ее к о т б е л к е , с н и ж а е т ч и с л о К а п п а на 2... 3 ед., у л у ч ш а е т
9
б е л и м о с т ь ц е л л ю л о з ы и у м е н ь ш а е т р а с х о д х и м и к а т о в на о т б е л к у на 10... 15 %.
2. Сравнение эффективности действия ксиланаз на сульфатную
целлюлозу
Д л я о ц е н к и в л и я н и я к с и л а н а з на п р о ц е с с у д а л е н и я л и г н и н а б ы л
жен следующий
метод.
Образец
небеленой
сульфатной
целлюлозы
предло­
дополни¬
тельно промывали в лаборатории и обрабатывали ксиланазами при оптимальных
значениях р Н и температуры. Затем проводили начальные стадии отбелки. Д л я
лиственной сульфатной целлюлозы это стадии Д - Щ ; для хвойной - Д о - Щ р Д р
0
Щ . П о с л е э т о г о в п р о б а х о п р е д е л я л и ч и с л о м и к р о - К а п п а , п о с н и ж е н и ю которо¬
2
го п о с р а в н е н и ю с к о н т р о л е м м о ж н о с у д и т ь о д е л и г н и ф и ц и р у ю щ е м
действии
препаратов ксиланаз.
М е т о д о м э к с к л ю з и о н н о й В Э Ж Х на к о л о н к е BioSep-SECS
рованной
по глобулярным
3000,
откалиб-
б е л к а м ( р и с . 5) б ы л и п о л у ч е н ы х р о м а т о г р а м м ы то¬
варных
препаратов
кси-
л а н а з ( р и с . 6). П р е п а р а т ы
неоднородны
составу.
ция,
Основная
имеющая
мальную
(для
по своему
UHB
макси¬
величину
ксиланазы
фрак¬
пика
Biobrite
э т о п и к 2, д л я
Ecopulp Т Х - 2 0 0 А - п и к
3) о б л а д а е т
ксиланазной
активностью.
6
7
8
9
10
Продолжительность элюирования, мин
11
фракции,
BioSep-SEC
колонки
S3000
соответствую¬
щ и е пикам
brite
Рисунок 5 - Калибровочная зависимость
Минорные
1 и 3 у Bio­
U H B , 1
и
2
у
Ecopulp Т Х - 2 0 0 А, м о г у т
обладать
как ксиланаз-
ной, т а к и ц е л л ю л а з н о й а к т и в н о с т ь ю . 4 - й п и к с о о т в е т с т в у е т н и з к о м о л е к у л я р н ы м
с т а б и л и з и р у ю щ и м д о б а в к а м , в н о с и м ы м в п р е п а р а т д л я с о х р а н е н и я е г о активно¬
сти.
Хроматографический
метод
позволяет
оценивать
чистоту
препарата,
с т е п е н ь к о н ц е н т р и р о в а н и я , н а л и ч и е п р и м е с е й , о б л а д а ю щ и х п о б о ч н ы м и актив¬
н о с т я м и . Ч е м б о л ь ш е в п р е п а р а т е ф р а к ц и й , о б л а д а ю щ и х ц е л л ю л а з н о й активно¬
с т ь ю , т е м б о л е е в е р о я т е н г и д р о л и з ц е л л ю л о з ы п р и ф е р м е н т н о й о б р а б о т к е . Пре¬
п а р а т B i o B r i t e U H B , о б л а д а я в 2,5 раза б о л е е в ы с о к о й к с и л а н а з н о й а к т и в н о с т ь ю
10
Ч80
p.280
7
5
Э
10
11
12
8
Продолжительность, злкзирования, мин
8
10
11
12
Продолжительность, элюирования, мин
Рисунок 6 - Хроматограммы ферментных препаратов ксиланаз
Biobrite U H B (А) и Ecopulp ТХ-200 А (Б)
по с р а в н е н и ю п р е п а р а т о м Ecopulp Т Х - 2 0 0 А, я в л я е т с я при э т о м и б о л е е ч и с т ы м .
С
помощью
фракции препаратов
хроматографического
метода
были
выделены
ксиланаз. Представляло интерес оценить
отдельные
эффективность
обработки целлюлозы фракциями отечественного фермента, полученного с по­
м о щ ь ю ш т а м м а P e n i c i l i u m canescens F-912 ( р и с . 7).
У
этого
п р е п а р а т а нет я р к о в ы р а ж е н н о г о о с н о в н о г о пика,
содержание
ф р а к ц и й , с о о т в е т с т в у ю щ и х п и к а м 1 и 2, на х р о м а т о г р а м м е п р и м е р н о о д и н а к о в о .
Б о л е е в ы с о к а я м о л е к у л я р н а я м а с с а ф р а к ц и и № 1 м о ж е т б ы т ь о б у с л о в л е н а нали¬
чием наряду с каталитическим доменом еще и субстратсвязывающего
домена,
как э т о ч а с т о б ы в а е т у ц е л л ю л а з .
В пробах целлюлозы,
обработанных этими фракциями, число Каппа после
н а ч а л ь н ы х с т а д и й о т б е л к и н и ж е , ч е м у к о н т р о л ь н ы х о б р а з ц о в ( т а б л и ц а 3). Уста¬
новлено, что фракции препарата
хвойную сульфатную
целлюлозу.
по-разному
Обработка
ц и е й № 2, и м е в ш е й м е н ь ш у ю м о л е к у л я р н у ю
№
действуют
лиственной
на
лиственную
целлюлозы
м а с с у по с р а в н е н и ю с
и
фрак­
фракцией
1, п р и в е л а к б о л е е з н а ч и т е л ь н о м у с н и ж е н и ю ч и с л а К а п п а ц е л л ю л о з ы .
Для
х в о й н о й ц е л л ю л о з ы , н а о б о р о т , ф р а к ц и я № 1 п р и о т б е л к е по с х е м е Д - Ш а - Д 1 0
Щ
2
оказалась эффективнее.
11
D
280
Л
V
/
V
'A
A
7
8
9
10
11
12
Продолжительность, элюирования,
мин
Рисунок 7 - Хроматограмма ферментного препарата ксиланазы F-912
Таблица 3 Влияние обработки фракциями ксиланазы F-912 на белимость хвойной и
лиственной сульфатной целлюлозы
Число микро-Каппа
Фермент
и его ф р а к ц и и
Число Каппа лиственной
целлюлозы после стадий
хвойной
целлюлозы
после стадий
До-Шл
Д0-Щ1-Д1-Щ2
Контроль
8,7
6,0
Фермент
7,8
5,3
Фракция № 1
8,5
5,3
Фракция № 2
8,0
5,6
При действии
к с и л а н а з на л и с т в е н н у ю
целлюлозу в а ж н у ю роль
играет
разрыв связей между лигнином и углеводами, в результате чего наряду с л и г н и ­
ном с п р о д у к т а м и д е с т р у к ц и и к с и л а н а ч а с т и ч н о у д а л я ю т с я и
гексенуроновые
к и с л о т ы . Э т о п р и в о д и т к с н и ж е н и ю ч и с л а К а п п а ц е л л ю л о з ы на
1...2
ед н е п о ­
средственно после ферментативной обработки. Чем м е н ь ш е молекулярная масса,
тем л е г ч е к с и л а н а з а п р о н и к а е т в н у т р ь в о л о к о н , т е м в б о л ь ш е й с т е п е н и катали¬
з и р у е т г и д р о л и з связей м е ж д у л и г н и н о м и к с и л а н о м .
У хвойной сульфатной целлюлозы
центрация
о б щ е е с о д е р ж а н и е к с и л а н а и его кон¬
на в н е ш н е й п о в е р х н о с т и в о л о к о н з н а ч и т е л ь н о н и ж е , чем у л и с т в е н 12
ной ц е л л ю л о з ы .
При ксиланазной обработке небеленой
хвойной
целлюлозы
и м е е т с я н е к о т о р о е с н и ж е н и е ч и с л а К а п п а , но э ф ф е к т п о в ы ш е н и я б е л и м о с т и в
основном проявляется
в процессе отбелки. Частичный
гидролиз ксилана уско­
ряет п р о н и к н о в е н и е о т б е л и в а ю щ и х х и м и к а т о в в в о л о к н о , а з а т е м из ф е р м е н т а тивно обработанной
ц е л л ю л о з ы на д е л и г н и ф и ц и р у ю щ и х с т а д и я х о т б е л к и и з ­
в л е к а е т с я б о л ь ш е о с т а т о ч н о г о л и г н и н а с б о л ь ш е й м о л е к у л я р н о й м а с с о й , ч е м из
необработанной целлюлозы. Высокая эффективность фракции № 1 при действии
на х в о й н у ю ц е л л ю л о з у , в е р о я т н о , о б у с л о в л е н а б о л ь ш е й а к т и в н о с т ь ю каталити¬
ч е с к о г о ц е н т р а ф е р м е н т а за счет н а л и ч и я с у б с т р а т с в я з ы в а ю щ е г о м о д у л я .
В п р о ц е с с е м н о г о с т у п е н ч а т о й о т б е л к и п р и у д а л е н и и о с н о в н о й м а с с ы лиг¬
нина
раскрывается
структура
волокна
и доступность
внутри клеточной стенки, увеличивается.
ксилана,
находящегося
П о э т о м у н а м и б ы л а п р о в е р е н а воз¬
м о ж н о с т ь и с п о л ь з о в а н и я к с и л а н а з на з а в е р ш а ю щ и х с т а д и я х о т б е л к и .
лиственную
стадии Д
ь
целлюлозу,
отобранную
в ходе производственной
Для этого
отбелки
после
обрабатывали ксиланазой, а в контрольных пробах проводили щело­
чение с расходом N a O H 5 и
10 кг/т ц е л л ю л о з ы . З а т е м п р о в о д и л и с т а д и ю Д в
2
условиях, аналогичных производственным.
О б р а б о т к а ц е л л ю л о з ы ф е р м е н т а м и Ecopulp Т Х - 2 0 А и Pulpzyme Н С в м е ­
сто стадии Щ
2
п р и в о д и т к у д а л е н и ю ф р а к ц и й , о т р и ц а т е л ь н о в л и я ю щ и х на б е л и -
мость целлюлозы.
В р е з у л ь т а т е б е л и з н а (рис. 8) и с т а б и л ь н о с т ь б е л и з н ы целлю¬
лозы увеличиваются.
90,0
89,6
3
П
89,2
88,8
S
88,8
S
ё?
88,4
88,6
HP
"is
И
88,0
NaOH 5 кг/т
NaOH 10 кг/т
Ксиланаш
Рисунок 8 - Влияние ферментативной обработки после стадии
Д 1 на белимость сульфатной лиственной целлюлозы
На этом этапе отбелки щелочение
д а ж е п р и р а с х о д е N a O H 10 кг/т целлю¬
л о з ы о к а з ы в а е т с я м е н е е э ф ф е к т и в н ы м по с р а в н е н и ю
с ксиланазной обработкой,
т е м б о л е е , ч т о р а с х о д к с и л а н а з п р и э т о м в о з м о ж н о у м е н ь ш и т ь д о 0,1...0,2 кг/т
13
целлюлозы.
Проведенные
исследования
показали,
что при получении
ферментных
п р е п а р а т о в д л я ц е л л ю л о з н о - б у м а ж н о й п р о м ы ш л е н н о с т и п е р с п е к т и в н ы м являет¬
ся с о з д а н и е м о н о к о м п о н е н т н ы х в ы с о к о о ч и щ е н н ы х к с и л а н а з ,
предназначенных
для обработки конкретных видов целлюлоз.
3. Влияние ксиланаз на гидролиз связей между лигнином и углевода­
ми в сульфатной целлюлозе
К с и л а н а з ы катализируют гидролиз р-1,4 г л и к о з и д н ы х связей в макромо¬
лекуле ксилана, в т е х местах цепи, где отсутствуют боковые заместители. П р и
этом образуются ксилоолигосахариды, которые легко переходят в раствор. М е ­
т о д о м В Э Ж Х н а к о л о н к е Rezex RSO - OligosacharidesAg
4 % с рефрактометриче¬
ским детектором были обнаружены ксилотриоза, ксилотетраоза и олигосахарид ы с б о л ь ш е й д л и н о й ц е п и , п е р е ш е д ш и е в ф и л ь т р а т п о с л е к с и л а н а з н о й обработ¬
ки н е б е л е н о й с у л ь ф а т н о й ц е л л ю л о з ы ( р и с . 9).
- I - I - I
14
15
16
—i —I - I—I - I—I - I—I - I—i —i —I - I—I - I—I - I—I - I—I - I —
17
18
19
20
21
22
23
24
Продолжительность
25
26
27
28
ЗЛЮИ|М>В<1НИЯ,
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
мин
Рисунок 9 - Хроматографический анализ продуктов деструкции ксилана
технической
целлюлозы
Согласно одной из теорий, о б ъ я с н я ю щ и х механизм действия ксиланаз на
ц е л л ю л о з н о е в о л о к н о , ф е р м е н т ы к а т а л и з и р у ю т г и д р о л и з л и г н о у г л е в о д н ы х свя¬
зей, б л а г о д а р я ч е м у ч а с т ь о с т а т о ч н о г о л и г н и н а д и ф ф у н д и р у е т из в о л о к н а в рас¬
т в о р . В р а з в и т и е э т о г о п о д х о д а , н а м и б ы л и в ы д е л е н ы л и г н о у л е в о д н ы е комплек¬
сы
(ЛУ комплексы)
сульфатной
целлюлозы
и определены
их молекулярно-
м а с с о в ы е х а р а к т е р и с т и к и м е т о д о м В Э Ж Х на х р о м а т о г р а ф е « М и л и х р о м - 4 » .
Было установлено, что в процессе ферментативной обработки лиственной
с у л ь ф а т н о й ц е л л ю л о з ы и з в л е к а ю т с я Л У к о м п л е к с ы с м о л е к у л я р н о й м а с с о й , на
25 % б о л ь ш е й , ч е м м о л е к у л я р н а я м а с с а ф р а г м е н т о в л и г н и н а , у д а л е н н ы х из цел¬
л ю л о з ы п р о м ы в к о й в о д о й ( р и с . 10, а).
В процессе обработки ксиланазой происходит раскрытие микрокапилляр¬
ной с т р у к т у р ы в о л о к н а з а счет ч а с т и ч н о г о г и д р о л и з а п о в е р х н о с т н о
14
локализо-
в а н н о г о к с и л а н а . Э т о п р и в о д и т к р а с т в о р е н и ю Л У к о м п л е к с о в с в ы с о к о й моле¬
к у л я р н о й м а с с о й не т о л ь к о из н е б е л е н о й ц е л л ю л о з ы , но и из ц е л л ю л о з ы на на¬
ч а л ь н ы х с т а д и я х о т б е л к и . Так, п о с л е с т а д и и Д0 в ф и л ь т р а т е ф е р м е н т а т и в н о об¬
работанной целлюлозы обнаружены ЛУ комплексы с большей молекуляр
м а с с о й , ч е м Л У к о м п л е к с ы в п р о б а х без п р е д в а р и т е л ь н о й
ной
о б р а б о т к и (рис.
10,
б).
ftp
/
J J
/7
fl
5вв
t«M
70*
Щ0
Ы>р90О V. ш Н
Г.Р0
vQO
тел
see
V . inkl
ООО
б
Рисунок 10 - Нормированные хроматограммы Л У комплексов, выделенных после обра¬
ботки лиственной сульфатной ц е л л ю л о з ы *
а) после ферментативной обработки;
б) после стадии До
1 - фильтрат ф е р м е н т а т и в н о о б р а б о т а н н о й ц е л л ю л о з ы ;
2 - фильтрат ц е л л ю л о з ы без ф е р м е н т а т и в н о й о б р а б о т к и (контроль)
* - молекулярные массы рассчитаны по калибровочной кривой для сульфатного лигнина
Ферментная
обработка
ЛУ комплекс,
в ы д е л е н н ы й из ф и л ь т р а т а по¬
сле ф е р м е н т н о й о б р а б о т к и , б ы л р а з д е л е н
с х е м е (рис. 11).
Отбор
фильтрата
определено,
с.ион-н.о
с н он-н о
5
Т
что
оставшаяся
ВЭЖХ
углеводная
часть Л У комплекса представлена
олигоса-
харидами с несколькими мономерными
т а т к а м и (рис.
ос¬
12). В п р о д у к т а х д е с т р у к ц и и
Л У комплекса наряду с остатками углеводов
2
Обработка смесью
2
в мягких условиях
удаляли диоксидом хлора. М е т о д о м
Обработка смесью
Обработка
осадка СЮ
Лигнин
по
2
Углеводная часть
Л У комплекса
присутствуют и остатки у р о н о в ы х кислот.
В
ментативной
целлюлозе
обработки
после
фер¬
сохраняются
ЛУ
комплексы, которые недоступны для ксилан а з ы , но м о г у т б ы т ь в ы д е л е н ы э к с т р а к ц и е й
5%-ным
таким
Рисунок 11 - Схема разделения Л У
комплекса, выделенного из фильтра¬
та после ферментативной обработки
целлюлозы
лиственной
раствором
образом
ЛУ
NaOH.
В
комплексах
выделенных
ксиланаза
с п о с о б н а д е с т р у к т и р о в а т ь с в я з и м е ж д у лиг¬
нином и углеводами.
ния с м о л о й К У - 2
15
После декатионирова+
в Н форме полученный
109
-i
U
8
7
6
1
1
1
1
1
1
15
16
17
13
19
20
1
5
1
4
1
3
1 — — i
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
26
27 28
29
а л ю н р о в л н н я . мин
30
31
32
33
34
35
36
37
25
21
22 23 24
Продолжительность
2
1—i
38
число
—
39
Р и с у н о к 12 - Х р о м а т о г р а ф и ч е с к и й а н а л и з п р о д у к т о в д е с т р у к ц и и Л У к о м п л е к с а
раствор обрабатывали
ксиланазой. При этом молекулярная
масса ЛУ комплекса
у м е н ь ш и л а с ь с 22 к Д а до 16 кДа.
Таким образом, экспериментально
ксилана,
показано,
что наряду с
деструкцией
при ксиланазной обработке целлюлозы может происходить
связей между лигнином и ксиланом в Л У комплексах. П о в ы ш е н и е
гидролиз
белимости
с у л ь ф а т н о й ц е л л ю л о з ы при ф е р м е н т а т и в н о й о б р а б о т к е п р о и с х о д и т как за счет
раскрытия микрокапиллярной структуры волокна, так и вследствие перехода в
растворимое состояние фрагментов лигнина при разрушении ЛУ комплексов.
4. Разработка режима биохимической обработки сульфатной хвойной
целлюлозы ферментным препаратом
F-912
В работе исследована возможность использования в производстве беленой
с у л ь ф а т н о й ц е л л ю л о з ы из д р е в е с и н ы х в о й н ы х п о р о д к с и л а н а з ы F-912, п о л у ч е н ­
ной в Р о с с и и . С п о м о щ ь ю г е н е т и ч е с к о й м о д и ф и к а ц и и ш т а м м а
г р и б а P e n i c i l l i u m canescens F-912
целлюлазная активность.
в препарате
полностью
удалена
В сравнении с ксиланазами, уже используемыми
целлюлозно-бумажной промышленности
отечественной
практически
мицелиального
(Ecopulp Т Х - 2 0 0 А и Biobrite U H B ) ,
ксиланазе доля целлюлазной
активности
ксиланаз
Препарат
ксиланазы
Ксиланазная
активность,
ед/мл
Целлюлазная
активность,
ед/мл
Общий
белок,
г/л
Ксиланаза F-912
Biobrite U H B
Ecopulp ТХ-200 А
700
6000
4100
0,7
14,9
31,0
5,5
8,0
4,5
16
в
в н е с к о л ь к о раз н и ж е
( т а б л и ц а 4).
Таблица 4 - Характеристика
в
Ксиланазная
активность/
целлюлазная
активность
1000 : 1
402 : 1
132 : 1
Определены условия проведения стадии ферментативной обработки цел­
люлозы с
использованием
к с и л а н а з ы F-912: п р о д о л ж и т е л ь н о с т ь - 40...60 м и ­
нут, т е м п е р а т у р а - 40... 50 °С, р Н - 6,0... 7,0, к о н ц е н т р а ц и я
массы
- 3,5 %, р а с ­
х о д - 1 кг/т ц е л л ю л о з ы .
Б ы л и проведены серии отбелки сульфатной х в о й н о й ц е л л ю л о з ы со стади­
ей ф е р м е н т а т и в н о й о б р а б о т к и п р е п а р а т о м Ecopulp Т Х - 2 0 0 А и о т е ч е с т в е н н ы м
п р е п а р а т о м F-912. О б а ф е р м е н т а д е й с т в у ю т на ц е л л ю л о з у а н а л о г и ч н ы м
обра­
зом, что проявляется в снижении числа Каппа после начальных стадий отбелки,
а также в повышении степени белизны
на к о н е ч н ы х с т а д и я х о т б е л к и п о с р а в н е ­
н и ю с к о н т р о л ь н о й п р о б о й ( т а б л и ц а 5). П р и п р а к т и ч е с к и р а в н о й б е л и з н е с л е д у е т
отметить сохранение высокого значения разрывной длины беленой целлюлозы,
п о л у ч е н н о й с и с п о л ь з о в а н и е м к с и л а н а з ы F-912.
Таблица 5 Влияние ксиланазной обработки хвойной сульфатной целлюлозы на
ее белимость и разрывную длину
Фермент
Расход,
кг/т целлюлозы
Белизна,
%
Разрывная
длина, м
Контроль
(без фермента)
-
84,2
9600
Ecopulp ТХ-200 А
0,3
85,9
8700
Ксиланаза F-912
1,5
85,8
9500
П р о в е д е н ы о п ы т н о - п р о м ы ш л е н н ы е и с п ы т а н и я с т а д и и о б р а б о т к и небеле¬
ной
с у л ь ф а т н о й х в о й н о й ц е л л ю л о з ы к с и л а н а з о й F-912 п е р е д о т б е л к о й на О А О
« К о т л а с с к и й Ц Б К » . В п е р и о д и с п ы т а н и й в ы р а б о т а н о 1200 т б е л е н о й ц е л л ю л о з ы .
Использование
отечественной
ксиланазы
обеспечило
повышение
белимости
ц е л л ю л о з ы , ч т о п о з в о л и л о с о к р а т и т ь р а с х о д о т б е л и в а ю щ и х х и м и к а т о в на 14 %
по а к т и в н о м у х л о р у п р и с о х р а н е н и и в ы с о к и х п р о ч н о с т н ы х п о к а з а т е л е й б е л е н о й
целлюлозы.
ВЫВОДЫ
1.
Для повышения белимости сульфатной целлюлозы предложено
ж и в а н и е н е б е л е н о й м а с с ы п р и з н а ч е н и и р Н 11... 12 п е р е д
выдер¬
обработкой
к с и л а н а з о й и щ е л о ч н а я о б р а б о т к а ц е л л ю л о з ы п о с л е у к а з а н н о й обработ¬
ки.
Применение
Каппа целлюлозы
предложенных
методов
перед отбелкой
приводит
на 2... 3 ед. и п о з в о л я е т
р а с х о д о т б е л и в а ю щ и х х и м и к а т о в на 10... 15 %.
17
к снижению
числа
уменьшить
2.
И с п о л ь з о в а н и е о б р а б о т к и к с и л а н а з о й в п р о ц е с с е м н о г о с т у п е н ч а т о й от­
белки вместо стадии Щ
2
повышает белизну сульфатной
целлюлозы
на
0. 6... 0 , 8 % .
3.
Из сульфатной лиственной целлюлозы различными методами
лигноуглеводные
комплексы.
Показано,
что ксиланазы
выделены
разрушают
ЛУ
комплексы с образованием олигосахаридов различной д л и н ы цепи, что
свидетельствует о наличии в составе этих комплексов фрагментов ксилана. Э к с п е р и м е н т а л ь н о у с т а н о в л е н о , ч т о р а с щ е п л е н и е с в я з е й м е ж д у лиг¬
нином
и углеводами
способствует
растворению
остаточного
лигнина
сульфатной лиственной целлюлозы.
4.
П р о в е д е н с к р и н и н г к с и л а н а з п о т е х н о л о г и ч е с к и м п а р а м е т р а м д л я обра¬
ботки
л и с т в е н н о й и х в о й н о й с у л ь ф а т н о й ц е л л ю л о з ы п е р е д о т б е л к о й . Ус¬
т а н о в л е н о , ч т о д л я с о х р а н е н и я в ы с о к и х п р о ч н о с т н ы х п о к а з а т е л е й беле¬
ной целлюлозы отношение
к с и л а н а з н о й а к т и в н о с т и к ц е л л ю л а з н о й ак¬
т и в н о с т и в п р е п а р а т а х к с и л а н а з д о л ж н о б ы т ь не м е н е е
5.
1000 : 1.
Методом эксклюзионной В Э Ж Х выделены отдельные фракции
препара­
т о в к с и л а н а з . О ц е н е н о их в л и я н и е на б е л и м о с т ь с у л ь ф а т н о й ц е л л ю л о з ы .
Экспериментально показано, что для небеленой лиственной
целлюлозы эффективнее применение ксиланаз с меньшей
сульфатной
молекулярной
массой.
6.
Проведены опытно-промышленные
F-912,
которые
показали
испытания отечественной
высокую эффективность
этого
ксиланазы
фермента для
у л у ч ш е н и я б е л и м о с т и с у л ь ф а т н о й ц е л л ю л о з ы и с н и ж е н и я р а с х о д а хими¬
катов в процессе отбелки.
Основное
содержание
диссертации
изложено
в следующих
публикациях:
1. А к с е н о в , А . С . И н т е н с и ф и к а ц и я у д а л е н и я о с т а т о ч н о г о л и г н и н а с у л ь ф а т ­
н о й ц е л л ю л о з ы с п р и м е н е н и е м к с и л а н а з [Текст] / А . С . А к с е н о в , Д . Г . Ч у х ч и н ,
Е . В . Н о в о ж и л о в // С о в р е м е н н а я н а у к а и о б р а з о в а н и е в р е ш е н и и п р о б л е м эконо¬
мики
европейского
севера.
Материалы
международной
научно-технической
конференции, посвященной 75-летию АЛТИ-АГТУ. - Архангельск: Изд-во А Г Т У , 2004. - С . 1 8 6 - 1 8 8 . - I S B N 5-261-00166-8.
2. А к с е н о в , А . С . В л и я н и е п р е д в а р и т е л ь н о й п о д г о т о в к и с у л ь ф а т н о й цел¬
л ю л о з ы на э ф ф е к т и в н о с т ь с т а д и и ф е р м е н т н о й о б р а б о т к и к с и л а н а з а м и [Текст] /
А . С . А к с е н о в , Е . В . Н о в о ж и л о в // Н а у к а - С е в е р н о м у р е г и о н у . С б . н а у ч н ы х тру¬
д о в . А р х а н г е л ь с к : И з д - в о А Е Т У , 2005. - В ы п . 6 2 . - С. 6-8.
3. А к с е н о в , А . С . М о л е к у л я р н о - м а с с о в ы е и с п е к т р а л ь н ы е х а р а к т е р и с т и к и
л и г н и н а , р а с т в о р е н н о г о из с у л ь ф а т н о й л и с т в е н н о й ц е л л ю л о з ы п р и ф е р м е н т н о й
18
о б р а б о т к е к с и л а н а з о й [Текст] / А . С . А к с е н о в , Е . В . Н о в о ж и л о в , Л . В . М а й е р , Д . Г .
Ч у х ч и н , И . В . Л о б о в а // Ф и з и к о х и м и я л и г н и н а . М а т е р и а л ы м е ж д у н а р о д н о й к о н ­
ференции. - Архангельск:
И з д - в о А Г Т У , 2005. - С.
129 - 133. - I S B N
5-261¬
00212-6.
4. А к с е н о в , А . С . П о в е д е н и е л и г н и н а с у л ь ф а т н о й ц е л л ю л о з ы в п р о ц е с с е
ферментной обработки ксиланазами
[Текст] / А . С . А к с е н о в , Е . В . Н о в о ж и л о в ,
И . В . Л о б о в а , Д . Г . Ч у х ч и н // Ф и з и к о х и м и я л и г н и н а . М а т е р и а л ы
международной
к о н ф е р е н ц и и . - А р х а н г е л ь с к : И з д - в о А Г Т У , 2005. - С. 89 - 93. - I S B N
5-261¬
00212-6.
5. А к с е н о в ,
А.С. Делигнифицирующее
действие
различных
к с и л а н а з на н а ч а л ь н ы х с т а д и я х о т б е л к и с у л ь ф а т н о й ц е л л ю л о з ы
препаратов
[Текст] / А . С .
А к с е н о в , А . В . К о н д а к о в , Н . А . С в и я з о в , Н . В . Я г у ш к и н // М а т е р и а л ы II В с е р о с ¬
сийской научно-техн.
конференции
студентов
У Г Л Т У . - 2006. - С. 250 - 252. - I S B N
и аспирантов.
-
Екатеринбург:
5-94984-118-2.
6. А к с е н о в , А . С . Х а р а к т е р и с т и к а к с и л а н а з р а з л и ч н ы м и м е т о д а м и [Текст] /
А . С . А к с е н о в , Е . В . Н о в о ж и л о в , Д . Г . Ч у х ч и н // Х и м и я и т е х н о л о г и я р а с т и т е л ь н ы х
веществ: Тезисы докладов I V Всероссийской научной конференции «Химия и
технология растительных веществ»
- С ы к т ы в к а р . - 2006. - С. 309. - I S B N 5¬
89606-270-2.
7. А к с е н о в , А . С . П р о м ы ш л е н н о е и с п о л ь з о в а н и е к с и л н а з п р и о т б е л к е суль¬
ф а т н о й ц е л л ю л о з ы [Текст] / А . С . А к с е н о в , Е . В . Н о в о ж и л о в , О.А. Д е м а ш е в , А А .
О п а р и н а // « Ц е л л ю л о з а . Б у м а г а . К а р т о н » , п и л о т н ы й н а у ч н ы й в ы п у с к - 2006. - С.
15-17.
8. А к с е н о в , А . С . В л и я н и е ф р а к ц и й ф е р м е н т н ы х п р е п а р а т о в к с и л а н а з на
б е л и м о с т ь с у л ь ф а т н ы х ц е л л ю л о з [Текст] / А . С . А к с е н о в , Д . Г . Ч у х ч и н , Е.В.Но¬
в о ж и л о в , С В . Б е н е в о л е н с к и й , A . M . Ч у л к и н // Л е с н о й ж у р н а л . - 2007. - № 2 . - С.
90-96. ( И з в . в ы с ш . у ч е б . з а в е д е н и й ) . - I S S N 0536-1036.
9. А к с е н о в ,
А.С. Деструкция
лигноуглеводного
комплекса
сульфатной
ц е л л ю л о з ы п р и ф е р м е н т а т и в н о й о б р а б о т к е к с и л а н а з о й / А . С . А к с е н о в , Е . В . Но¬
вожилов,
Д . Г . Ч у х ч и н // Ф и з и к о х и м и я
лигнина.
Материалы
международной
к о н ф е р е н ц и и . - А р х а н г е л ь с к : И з д - в о А Г Т У , 2007. - С. 89 - 93. - I S B N
5-261¬
00335-Х.
О т з ы в ы на а в т о р е ф е р а т в 2-х э к з е м п л я р а х с з а в е р е н н ы м и г е р б о в о й печа¬
тью подписями просим направлять по адресу:
163002, г. А р х а н г е л ь с к , н а б . С е в е р н о й Д в и н ы ,
ный совет Д.212.008.02
19
17, А Г Т У ,
диссертацион¬