Ключевые элементы регуляции экспрессии генов системы

операторы T7 полимеразы находится под репрессией. По мере роста плотности культуры пул
глюкозы исчерпывается, что приводит к включению lac-оператора. Соотношение глюкозы и
лактозы подбирается таким образом, что переключение происходит происходит по
окончании логарифмической фазы роста, что обеспечивает наибольший урожай белка с
культуры.
Нативная форма образует две полоски на электрофореграмме, верхняя соответствует
окисленной форме, образовавшей один или два цистеиновых мостика, в то время как нижняя
— восстановленной, цистеиновых мостиков не имеющей. Что интересно — данная картина
наблюдается и у слитого с убиквитином белка, так как за димеризацию отвечает C-концевой
домен.
Вывод: каждый из четырех цистеиновых остатков важен для формирования
холоформы Fur B. cereus, что также является свидетельством наличия структурного цинксвязывающего сайта и чувствительности регулятора к окислительному стрессу.
Для подтверждения гипотезы предлагается провести BN- или CN-PAGE нативной и
мутантных форм регулятора, а также EMSA-анализ ДНК-связывающей способности.
Ключевые элементы регуляции экспрессии генов системы
рестрикции-модификации EcoRII
Ибряшкина Е.М., Нагорных М.О., Солонин А.С., Захарова М.В.
Лаборатория молекулярной микробиологии ИБФМ РАН
Жизнеспособность бактериальной клетки обеспечивается многоуровневой регуляцией
молекулярных процессов, в основе которой лежит регуляция активности генов.
Системы рестрикции-модификации (СРМ) представлены эндонуклеазами рестрикции
(ЭР), способными фрагментировать немодифицированную чужеродную ДНК, и ДНКметилтрансферазами (МТ), которые метилируют цитозины или аденины в сайте узнавания и,
тем самым, защищают собственную ДНК от расщепления соответствующей эндонуклеазой.
На этапе поддержания СРМ в клетке, количества эндонуклеазы рестрикции и ДНКметилтрансферазы должны подчиняться регуляции с обратной связью. После модификации
хозяйской ДНК, должно происходить смещение в сторону увеличения активности экспрессии
эндонуклеазы, которая, в свою очередь, должна быть чувствительна к количеству
метилтрансферазы в клетке.
Система EcoRII является представителем системы с конвергентным расположением
генов. Ранее молекулярные механизмы регуляции активности генов СРМ изучались только
на уровне инициации транскрипции. Однако генетическая организация СРМ EcoRII
позволяет выдвинуть предположение о регуляции экспрессии генов также и на уровне
терминации транскрипции, что делает данное направление актуальным на сегодняшний день.
Точки начала и конца транскрипции генов СРМ EcoRII были определены с
использованием метода RACE. 3‘- концы генов ecoRIIR и ecoRIIM находятся в районе стоп
кодонов генов друг друга. 5‘- конец мРНК ecoRIIM находится на расстоянии 19 нуклеотидов
от инициирующего кодона гена, а 5‘ конец мРНК ecoRIIR находится на расстоянии 40
нуклеотидов от atg кодона своего гена. Для определения эффективности промоторов генов и
их трансляции были использованы векторы с геном lacZ для конструирования
транскрипционных и трансляционных фьюжинов. Как следует из данных для
трансляционных фьюжинов, активность галактозидазы под контролем регуляторных
элементов ecoRIIR существенно ниже активности галактозидазы под контролем
92