АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ И
advertisement
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ ЕСТЕСТВОЗНАНИЯ ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» «Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии» АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ Материалы VII-й Международной студенческой научной конференции Том 1 14 – 15 мая 2014 года Ульяновск – 2014 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 631 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии / Материалы VII-й Международной студенческой научной конференции, 14 – 15 мая 2014 г. / ред. кол.: Д.А. Васильев [и др.]. – Ульяновск: Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина, 2014, т. 1. – 121 с. Сборник содержит материалы исследований студентов ВУЗов России и ближнего зарубежья по актуальным проблемам микробиологии, вирусологии, иммунологии, санитарной экспертизы, товароведению, эпизоотологии, эпидемиологии, биотехнологии. Рассмотрены вопросы диагностики, лечения и профилактики инфекционных заболеваний людей и животных. Приводятся современные методы исследования пищевых продуктов и их санитарная оценка, информационно-аналитические исследования по распространению и угрозе возникновения опасных инфекционных заболеваний. Материалы сборника рекомендованы для студентов биологических, медицинских, ветеринарных специальностей, научных сотрудников, преподавателей и аспирантов. Редакционная коллегия Дмитрий Аркадьевич Васильев, зав. каф. МВЭиВСЭ (гл. редактор) Сергей Николаевич Золотухин, декан ФВМ (зам. гл. редактора) Елена Николаевна Ковалева, отв. по НИРС каф. МВЭиВСЭ (отв. редактор) Авторы опубликованных статей несут ответственность за патентную чистоту, достоверность и точность приведенных фактов, цитат, экономико-статистических данных, собственных имен, географических названий и прочих сведений, а также за разглашение данных, не подлежащих открытой публикации. Статьи приводятся в авторской редакции. Печатается на средства Научно-исследовательского инновационного центра микробиологии и биотехнологии Ульяновской ГСХА им. П.А. Столыпина. ISBN 978-5-905970-34-4 © ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», кафедра МВЭиВСЭ 2 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Дорогие коллеги! Студенческие научные конференции проводятся кафедрой микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ ежегодно с 2008 года. В настоящий момент область научных интересов кафедры включает в себя исследования этиологической роли малоизученных бактерий в инфекционной патологии сельскохозяйственных животных, их значимость в пищевых инфекциях людей. Ведётся разработка диагностических и лечебно-профилактических фаговых препаратов. Следующим направлением является исследование малоизученных инфекционных заболеваний домашних животных. Научно-исследовательская работа также направлена на изучение очаговых инфекций зооантропонозного характера на территории Ульяновской области и создание кадастров указанных инфекций. Студенты активно занимаются научно-исследовательской работой в научном студенческом кружке «Инфекционист» на базе научно-исследовательского инновационного центра микробиологии и биотехнологии. Студенты, выполняющие дипломные работы, проводят исследования не только на базе кафедры, а также во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии в г. Покров Владимирской области. Ежегодно студенты-кружковцы принимают участие в научных конкурсах, конференциях, ветеринарных конгрессах, выставках инновационных проектов. Студенты-кружковцы ежегодно занимают призовые места на научно-технических мероприятиях Всероссийского и Международного уровня. Отрадно отметить, что в конференции принимают участие студенты ВУЗов России и ближнего зарубежья. Благодаря таким мероприятиям значительно укрепляются межвузовские связи, расширяется научное сотрудничество молодого поколения, формируется научное сообщество. Желаю всем участникам конференции успехов в реализации своего научного потенциала, жизненного оптимизма и здоровья! Заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ УГСХА, директор НИИМиБ, президент УМОО «Ассоциация практикующих ветеринарных врачей», академик РАЕН, д.б.н., профессор Дмитрий Аркадьевич Васильев 3 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии О КАФЕДРЕ МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ, ЭПИЗООТОЛОГИИ И ВЕТЕРИНАРНО – САНИТАРНОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ В тяжелые годы войны, Совет Народных Комиссаров СССР 12 июля 1943 года, с осознанием необходимости того, что для разрушенной войной страны потребуются специалисты высшей квалификации, издал Распоряжение о создании Ульяновского сельскохозяйственного института. Уже в сентябре этого года на ветеринарном, зоотехническом и агрономическом факультетах нового вуза обучалось 293 студента. Тогда же были организованы кафедры, которые позднее и составили кафедру микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно– санитарной экспертизы. Это кафедры: эпизоотологии, которую возглавил первый директор института - доцент Леонид Дмитриевич Кузин (в последствие профессор Л. Д. Кузин - заведующий кафедрой микробиологии Оренбургского СХИ); микробиологии, заведующая – к.в.н., доцент А.М.Рубцова; ветеринарно-санитарной экспертизы, заведующий С.А.Лубянецкий, с сентября 1946 года до 6 ноября 1947 года работавший также заместителем директора УСХИ по учебной и научной работе (профессор Сергей Андреевич Лубянецкий, ученик основателя отечественной школы ветеринарно – санитарной экспертизы, автора первых в стране учебников по ВСЭ профессора В.Ю. Вольферца, являлся одним из крупнейших учёных, принявший участие в создании современной концепции ветеринарно–санитарной экспертизы в СССР). С 28 августа 1946 года доцентом кафедры микробиологии и исполняющим обязанности заведующего был назначен кандидат ветеринарных наук Гаврила Никитович Борисов. Через год заведующим этой кафедрой избран по конкурсу кандидат биологических наук Михаил Васильевич Земсков (в последствие профессор М. В. Земсков один из ведущих учёных СССР в области ветеринарной иммунологии). В 1950 году кафедру микробиологии и зоогигиены с основами ветеринарии возглавлял доцент Викторин Владимирович Сливко, одновременно являясь заместителем директора института по учебной и научной работе (в последствие профессор В.В. Сливко ректор Вологодского молочного института). С 1954 по 1985гг. руководителем курса ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии являлся к.в.н., доцент А.П. Васильев (ученик создателя отечественной школы ветеринарной микробиологии, автора самых массовых в стране учебников по ветеринарной микробиологии, генерал – майора Советской Армии, профессора Я.Е. Колякова). До 1964 года база курса микробиологии размещалась в правом крыле 2-го этажа 1 корпуса на бульваре Новый Венец. С 1964 года курс переехал в помещение на Молочном переулке. С 1985г. по 1999 гг. курсы ветеринарной микробиологии, иммунологии, вирусологии возглавлял д.в.н., профессор В.Я. Ганюшкин (аспирантура УСХИ у доцента А.П. Васильева). В настоящее время руководит этими курсами д.б.н, профессор С.Н. Золотухин (докторантура УГСХА у профессора Д.А. Васильева). Кафедра эпизоотологии к 1 сентября 1946 года называлась: "Эпизоотология с ветеринарным делом". С 1 сентября 1947 года до 1954 года её возглавлял кандидат ветеринарных наук Алексей Прокофьевич Новиков. Он выполнил здесь исследования по теме докторской диссертации «Эпизоотический лимфангит лошадей» и после её успешной защиты в ВИЭВе уехал. С 1954 года по 1958 год кафедрой заведовал доцент Иосиф Ефимович Голубев, работавший над темой НИР по бруцеллезу лошадей. Он с блеском защитил докторскую диссертацию и так же уехал. С 1957 года в состав этой кафедры помимо курса эпизоотологии входил и курс 4 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии паразитологии. С 1958 по 1963 гг. кафедрой руководил доцент курса паразитологии М.Н. Филимонов. Курс организации ветеринарного дела вел доцент Захар Мусаивич Куюмджи, работавший на кафедре с 1955 по 1968 годы, одновременно с 1963 года являясь проректором УСХИ по учебной работе. В 1963 году состоялась очередная реорганизация кафедры эпизоотологии. Новая кафедра включала три курса микробиологии, эпизоотологии, организации ветеринарного дела. Её заведующим стал доцент Александр Иванович Улендеев. С 1987 г. по настоящее время руководителем курса эпизоотологии является доцент А.И. Козин (аспирантура ВИЭВ у профессора В.Е. Щуревского). Кафедра ВСЭ также претерпела неоднократные изменения: к 1 сентября 1946 года она имела название: кафедра ветеринарно-санитарной экспертизы и технологии продуктов животноводства. А в 1950 году это была уже кафедра ветеринарносанитарной экспертизы и паразитологии. Неизменным её руководителем с 1943 года оставался Сергей Андреевич Лубянецкий. Защитив докторскую диссертацию в МВА, по ВСЭ при саркоцистозе он уехал в Воронеж. С этого времени руководителем курса ветеринарно-санитарной экспертизы стала доцент А.Г. Какурина. И курс вошёл в состав единой кафедры ВСЭ, фармакологии, паразитологии и молочного дела. Заведующей кафедрой являлась профессор Е.А. Савельева. А с 1974 года курс ВСЭ объединили в одну кафедру с курсами микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и организации ветеринарного дела. С 1987г. руководителем курса ВСЭ является профессор Д.А. Васильев (аспирантура ВНИИВВиМ у академика ВАСХНИЛ И.А. Бакулова). В связи с переездом в студенческий городок (1976 г) в пос. Октябрьский вышеуказанные кафедры были объединены, появилась наша кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно – санитарной экспертизы и мы получили специальный инфекционный корпус. В течение 10 лет кафедрой руководила доцент Александра Георгиевна Какурина. В 1985 году подразделение возглавил доктор ветеринарных наук, профессор Виктор Яковлевич Ганюшкин. Спустя десять лет, в 1995 году, В.Я. Ганюшкин предложил Д.А. Васильеву заменить его в должности заведующего кафедрой и с этого года согласно решению ученого совета вуза кафедрой руководит академик РАЕН, доктор биологических наук, профессор Дмитрий Аркадьевич Васильев. В настоящее время кафедра размещается в самостоятельном корпусе в академгородке УГСХА и располагает 6-ю учебными аудиториями, манежем, 9-ю стационарными микробиологическими боксами, автоклавной, бактериологической кухней, лабораторией биофизики бактерий, виварием для лабораторных и с/х животных. На базе 1 корпуса УГСХА (Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1) создана микробиологическая лаборатория совместно с учебной аудиторией, что позволяет вести учебный процесс для студентов биотехнологического факультета. Для проведения эпизоотологического мониторинга домашних животных города там же создана ветеринарная клиника. Существуют и постоянно обновляющиеся два музея – микробиологический и ВСЭ. Кафедра обладает комплектами ПК, принтерами, сканерами, мультимедийным проектором, своим сайтом в Интернете “www. Microbiology.by.ru”. По курсу эпизоотологии развернута фотогалерея на 47 стендах, включающая более 120 фотографий, в которых отражены клинические и паталогоанатомические особенности 24-х инфекционных болезней с/х животных, иммется видеотека по особо опасным инфекциям животных. Кафедра обеспечена лабораторной базой: определенным комплектом микроскопов (включая тринокуляры 5 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии с увеличением до 1600 и цифровыми видеонасадками, мультимидийным проектором получаемых изображений с микроскопа, 5-тью автоклавами, термостатами, минусовыми и бытовыми холодильниками, парком центрифуг (скоростная, большеобъемная, лабораторные – в том числе модели СМ-6М с угловыми и баккет роторами и показателем седиментации до 2000 g), установкой для лиофилизации бактерий LL-3000 (необходимой для пополнения микробиологического музея кафедры), ультразвуковым дезинтегратором MSE, денситометром Doc Print, оборудованием для электрофореза - S-2N (SE-2 ), набором для фильтрации бактерий и фагов (Millipore – Millivac), оборудованием для постановки ИФА и другими приборами необходимым для проведения учебного процесса в области микробиологии, эпизоотологии, ветеринарно –санитарной экспертизы и биотехнологии. Микробиологическая лаборатория имеет лицензию, на работу с микроорганизмами 3 – 4 групп патогенности. Коллектив кафедры составляет 28 человек, включая 6 профессоров являющихся докторами наук – д.б.н. Васильев Д.А. , д.б.н. Золотухин С.Н., д.б.н. Померанцев Д.А., д.м.н. Нафеев А.А., д.м.н. Потатуркина-Нестерова Н.И., д.б.н. Ильина Н.А. 12 кандидатов наук – к.б.н. Мерчина С.В., к.б.н. Молофеева Н.И., к.б.н. Пульчеровская Л.П., к.в.н. Богданов И.И., к.в.н. Васильева Ю.Б., к.б.н. Феоктистова Н.А., к.б.н. Ляшенко Е.А., к.б.н. Меркулов А.В., к.б.н. Канаева Т.И., к.б.н. Ковалева Е.Н., к.б.н. Журавская Н.П., к.б.н. Сверкалова Д.Г., к.б.н. Семанина Е.Н. по специальностям 03.00.06 – микробиология и 03.00.23 – биотехнология, 16.00.03 эпизоотология, 03.00.07 – вирусология. На кафедре по разным специальностям работают ассистенты: Кузнецова О.В., Калдыркаев А.И., Барт Н.Г. Старшие лаборанты: Юдина В.М., Евина О.В., Карамышева Н.Н., врач-ординатор Дулатова Р.Г. Все профессора – микробиологи нашего города получали это звание, проходя через кафедру микробиологии УГСХА. На кафедре существуют следующие специальности: «Ветеринария» УМО МВА, «Микробиология» УМО МГУ, «Ветеринарно-санитарная экспертиза» УМО Московского государственного университета прикладной биотехнологии, «Товароведение пищевых продуктов» УМО академии им. Плеханова. Учебная нагрузка кафедры за последние три года составляла от 13500 до 15500 часов. На кафедре в настоящее время преподаются более 80 дисциплин: история науки, теоритические основы товароведения и экспертизы, основы микробиологии, микробиология продовольственных товаров, гигиена и санитария, анатомия пищевого сырья, ветеринарная микробиология и иммунология, ветеринарная вирусология, стандартизация и контроль безопасности лекарственных средств и кормов, эпизоотология и инфекционные болезни животных, стандартизация и сертификация пищевых продуктов, микробиология, вирусология, фитопатогенные бактерии, частная вирусология и систематика вирусов, пробиотики, бактериологическая безопасность в лабораторных условиях, биотехнология, основы научных исследований, эволюция микроорганизмов, методология научных исследований, сельскохозяйственная микробиология, бактериофагия, токсины микроорганизмов, методы лабораторной диагностики, товароведение и экспертиза зерномучных товаров, товароведение и экспертиза кондитерских товаров, товароведение и экспертиза плодоовощных товаров, товароведение и экспертиза вкусовых товаров, товароведение и экспертиза молочных товаров, товароведение и экспертиза пищевых жиров, товароведение и экспертиза рыбных товаров, 6 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии товароведение упаковочных материалов, экспертиза продовольственных товаров, безопасность и гигиена питания, сенсорный анализ продовольственных товаров, таможенная экспертиза качества продовольственных товаров, идентификация и фальсификация, биоповреждение потребительских товаров, пищевые и биологически активные добавки, введение в технологию продуктов питания, оценка паразитологического загрязнения сырья и продуктов, ВСЭ с основами технологии и стандартизации продуктов животноводства, инфекционные болезни мелких домашних животных, санитарная микробиология, технология переработки продукции животноводства, товароведение и экспертиза товаров, производственный ветеринарно-санитарный контроль, ветеринарно-санитарная экспертиза, технология мяса и мясных продуктов, технология молока и молочных продуктов, ветеринарная санитария, товароведение, биологическая безопасность и экспертиза товаров, ВСЭ на перерабатывающих предприятиях, пищевые токсикозы и токсикоинфекции, ветеринарно-санитарный контроль на таможне и транспорте, ветеринарносанитарный контроль в лабораториях, цитология микроорганизмов, частная микробиология и систематика микроорганизмов, генетика микроорганизмов, промышленная микробиология и биотехнология, энзимология, иммунохимия и медицинская микробиология, антибиотики, эволюция микроорганизмов, основы регуляции метаболизма, физиология роста микроорганизмов, возбудители бактериальных инфекций человека, возбудители вирусных болезней человека, основы эпидемиологии, клиническая микробиология, возбудители грибковых заболеваний человека. По большинству их перечисленных учебных дисциплин сотрудниками кафедры подготовлены и изданы учебно – методические комплексы, включающие лекционный курс, лабораторно – практические занятия, глоссариум, вопросы к экзаменам, зачётам, темы курсовых работ, список литературы. В среднем объём УМК составляет от 330 до 600 страниц. Сотрудниками кафедры, совместно с ведущими учеными страны академиками РАСХН И.А. Бакуловым (ВНИИВВиМ), А.М. Смирновым (ВНИИВСГиЭ), академиком РАЕН В.В. Макаровым (РУДН), д.в.н. профессором В. Е. Никитченко (РУДН), руководителем Россельхознадзора МСХ РФ д.б.н. Н.А. Власовым и др., издаются учебные пособия для студентов, аспирантов и специалистов – по наиболее актуальным или малоизученным проблемам специальностей преподаваемых на кафедре. В настоящей момент выпущено около 100 таких изданий. Указанные учебные материалы размещены на сайте кафедры. С 2000 года готовятся комплекты учебно-методических разработок на электронных носителях с включением уникальных видеофильмов, выпущено более 20 комплектов. За последние годы преподаватели кафедры помимо активизации учебного процесса приняли решение увеличить объем работы со студентами в области повышения их профессионализма и активизации участия в научноисследовательской работе. Ежегодно в течение 5-ти лет кафедрой организуются поездки на Международный ветеринарный конгресс (Москва). На кафедре работает научный студенческий кружок «Инфекционист». Студенты-кружковцы представляют результаты научных исследований на ежегодных студенческих конференциях и участвуют в Международных, Всероссийских, региональных научных конкурсах. Студенты кружковцы ежегодно представляют результаты НИР на выставкеконкурсе творчества студентов (УГСХА), где занимают призовые места, награждаются грамотами. Кружковцы кафедры занимаются оформительской работой, периодически выпускают стенгазету «МИКРОБ», «ТОВАРОВЕД», стенды 7 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии «Осторожно еда», «Нобелевские лауреаты с области биологии», «Классификация вирусов» и другие. Преподаватели кафедры ежегодно проводят викторины по дисциплинам. Проводятся конкурсы стенгазет, научных рефератов, презентаций и др. Активная работа сотрудников кафедры по организации НИРС отмечена в рейтинге УГСХА, где кафедра ежегодно занимает призовые места. Одним из перспективных направлений является создание системы интеграции системы образования и науки. В этом направлении студенты, занимающиеся НИРС на кафедре, проходят производственную практику в ветеринарной клинике «Друг», закрепляя свои теоретические знания практическими навыками. Также выполняют НИР на базе научно-инновационного исследовательского центра микробиологии и биотехнологии (УГСХА). Студенты по специальности «Микробиология» могут выполнять дипломные исследования на базе крупнейших научно-производственных НИИ страны – ГНУ ВНИИВВиМ (Покров), ФГУ ВНИИЗЖ (Владимир). С данными научно-исследовательскими коллективами заключены договора о научном сотрудничестве. Многие студенты, занимающиеся НИР на кафедре, в дальнейшем продолжают свои исследования в аспирантуре кафедры или крупных научных центрах России. Ежегодно в эти научные центры по рекомендации кафедры от 4 до 8 человек поступают в аспирантуру. Заведующий кафедрой, д.б.н., профессор Дмитрий Аркадьевич Васильев 8 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии ИССЛЕДОВАНИЯ В ОБЛАСТИ МИКРОБИОЛОГИИ И ВИРУСОЛОГИИ УДК 602.3:579.8 ИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ SERRATIA MARCESCEN В ВОДЕ ОТКРЫТЫХ ВОДОЕМОВ Ефрейторова Е.О., аспирант, Галушко И., Барахтина Е. 4 курс факультета ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., доцент Пульчеровская Л.П., д.б.н., профессор Васильев Д.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: бактерии, серратии, индикация, идентификация, питательные среды, тест, биологические свойства Работа посвящена исследованиям по индикации и идентификации бактерий вида Serratia marcescens в воде открытых водоемов. Актуальность исследования. В древние времена появление «кровавых» пятен на различных продуктах, особенно на освященной пище, одни считали дьявольским наваждением, другие – промыслом божьим. Serratia marcescens и ее способность продуцировать розово-красный водонерастворимый пигмент, сыграла неожиданную роль в истории церкви. В 1264г. Богемский священник из Праги по имени Петр прибыл в Италию, чтобы получить аудиенцию у Папы Урбана IV. Встретившись с Папой, священник отправился назад в Богемию. По пути он остановился в Больсене и там служил Мессу в церкви св. Кристины. Когда он произнес слова освящения Даров, произошло чудо: “Внезапно Гостия видимым образом превратилась в окровавленную плоть, кроме той части, которую сжимали его пальцы. Все присутствующие могли видеть, что это та самая Гостия, которую держал над чашей священник, служивший Мессу”. Через это чудо священник укрепился в своей вере о святых Дарах, а Папа Урбан IV Торжество Пресвятого Тела и Крови Христа (хлеб и вино служат символами Тела и Крови Христа) провозгласил церковным праздником, сделав его общецерковным и даровав индульгенции всем, кто принимал участие в праздничной мессе. Позднее появление «кровавых» пятен стало причиной крестьянских волнений в Италии (Легарно, 1819). Ситуация настолько накалилась, что церковь ходатайствовала о создании специальной комиссии. При которой, в ходе исследований, окружной врач-хирург Винченсо Сетте, возглавивший ее работу, заключил, что виновник этого феномена – гриб Zoagalactina imetrofa. Однако профессор бактериологии Падуанского университета Бартоломео Бизио не согласился с заключением комиссии и в результате самостоятельного исследования установил этиологическую роль бактерий. Последние получили 9 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии название Serratia marcescens (в честь лоцмана Серафино Серрати). С этого времени начинается отсчет изучения энтеробактерий и насчитывает уже 195 лет (со времени выделения Serratia marcescens Бартоломео Бизио с кукурузной каши-поленты). Бактерии рода Serratia (семейство Enterobacteriaceae) распространены повсеместно в окружающей среде, их выделяют из почвы, воды, воздуха, пищевых продуктов, с растений, различных предметов, а так же из испражнений насекомых и грызунов. Серратии, особенно S.marcescens, ранее считали непатогенными и даже использовались при испытаниях аэрозолей или в исследованиях циркуляции воздуха в помещениях. Его красноватая окраска применялась в школьных экспериментах, чтобы проследить за распространением инфекции [1]. Серратии впервые выделил итальянский бактериолог Б. Бизио и назвал их Serratia marcescens (в честь лоцмана Серафино Серрати, проводившего суда по реке Арнб) [5]. Широкой распространенности Serratia marcescens способствует ее возможность размножаться при комнатной температуре, в физиологических растворах и на увлажненных поверхностях, естественная резистентность к антибиотикам, а так же способность переживать в дезинфектантах. В последние полтора-два десятилетия появилось много научных данных о патогенности бактерий рода Serratia для животных и людей [2]. Бактерии рода Serratia, как и другие представители семейства Enterobacteriaceae хорошо растут на обычных питательных средах в анаэробных и аэробных условиях. Они хорошо растут на синтетических средах с использованием различных соединений в качестве единственного источника углерода. Все серратии хорошо растут при температуре 15-30°С. На КА при 37 °С S.marcescens образуют серовато-белые прозрачные S-колонии 1-2 мм в диаметре, колонии могут быть гладкими или мелкозернистыми. При комнатной температуре через 24-48 ч колонии серратий становятся красными. В настоящее время бактерии рода Serratia marcesens могут вызывать диарейные заболевания у человека. По клиническим проявлениям заболевание представляет собой легкую форму гастроэнтерита. Продолжительность болезни от нескольких часов до 12 сут. Диагноз подтверждается лабораторно [6]. Цель и задачи исследования. Целью наших исследований явилось проведение индикации и идентификации бактерий вида Serratia marcescens в воде открытых водоемов (озера, пруды). Материал и методы исследования. Питательные среды: мясопептонный бульон, мясопептонный агар, среда КОДА, среды Эндо, Плоскирева и Левина, среды Гиса, лабораторные животные. Термостат ТС-80М-2, бактерицидная лампа, весы лабораторные, автоклав, сушильный шкаф, микроскоп МБИ-3, колбы емкостью 250 и 500 см3; пипетки мерные на 1,0 см3; чашки Петри, пробирки, стандарт мутности, набор красок по методу Грама. Материалом для исследования послужила водопроводная вода. Всего было отобрано 7 проб воды из озер и прудов. 10 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Исследования проводили бактериологическим методом. Результаты и выводы исследования. Для бактериологического исследования пробы отбирали в стерильные флаконы в объеме 500 мл. В первой серии опытов при индикации бактерий вида Serratia marcescens использовали общеупотребительские среды, индикаторные и селективные среды для энтеробактерий [4]. Посев проводили на среды КОДА, МПА, Эндо, Плоскирева и Левина. Через 18-20 ч инкубации учитывали изменения в комбинированной среде, изучали морфологию микроорганизмов, тинкториальные свойства, чистоту культуры и образование пигмента, который появлялся на свету через сутки или практически с ростом культуры. Изучали культуральные свойства бактерий на жидких и плотных средах и отсевали подозрительные колонии на МПБ с целью получения чистых культур микроорганизмов. На МПА искомые бактерии образовывали круглые ровные плосковыпуклые гладкие S-колонии диаметром 1-2 мм; на селективных средах Эндо, Левина и Плоскирева – прозрачные бесцветные и цвета среды колонии диаметром 2 мм, напоминающие колонии сальмонелл. При комнатной температуре через 18-24-48 ч колонии серратий становились красными. Таблица 1 – Биологические свойства выделенного штамма бактерий вида Serratia marcescens № п/п 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. Тест Ацетоин Мочевина Желатина Малонат Образование к-ты из α-метил –D-глюкозида Дезоксирибонуклеаза Липаза (кукурузное масло) D-глюкоза, образование к-ты в присутствии иодацетата, 0,001 М реакция Форгеса-Проснауэра Образование к-ты из Сахарозы d-сорбитола Раффинозы L-арабинозы Каталаза Пигмент Подвижность Патогенность Serratia marcescens + + + (+) + Serratia marcescens + + + (+) + + + + + + + + + + + + + + + Идентификацию искомых микроорганизмов проводили на основании изучения биологических свойств, для этого пересевали выделенные культуры 11 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии на минимальный дифференцирующий ряд. Выделенные культуры серратий издавала ароматный запах, напоминающий запах карамели. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1. Заключение. В результате проведенных микробиологических исследований воды с целью индикации и идентификации Serratia marcescens были выделены два штамма бактерий. Выделенные нами штаммы бактерий Serratia marcescens были патогенными для белых мышей, а, следовательно, имеют клиническое значение и будет использован для дальнейших исследований. Библиографический список Пульчеровская, Л.П., Васильев Д.А.., Кузнецова О.В., Бахаровская Е.О. Роль бактерий рода Serratia при производстве и сохранности пищевой продукции./ Материалы Международной научно-практической конференции. «Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения» Том 1, Ульяновск 2011 с. 146149 2. Определитель бактерий Берджи: В 2-х т.: Пер. 9-го амер.изд.Т.2 Беркли Р., Бок Э., Бун Д. И др.; Под ред Хоуолта Дж. И др. – М.: Мир, 1997. – 800 с. 3. Молофеева Н.И., Васильев Д.А. К вопросу о роли бактерий рода Serratia в патогенезе желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных/ Вопросы микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы. Сборник научных трудов, Ульяновск, - 1998. 4. Горшкова Д., Бахаровская Е.О. Биологические свойства бактерий рода Serratia/ Материалы IV-й Всероссийской студенческой научной конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии». Часть вторая. Ульяновск. С.67-70. 5. Золотухин С.Н., Пульчеровская Л.П., Васильев Д.А. Бактерии рода Citrobacter и их бактериофаги // Вопросы микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы. Сборник научных трудов, Ульяновск, - 2000. - С. 53-58. 6. Медицинская микробиология [Электронный ресурс] – Электрон. Текстовые дан., 2013. – Режим доступа: http://microbjournal.ru 7. Здоровый образ жизни [Электронный ресурс] – Электрон. Текстовые дан., 2008. – Режим доступа: http://detiboleyut.ru/ 8. Научно-практические конференции [Электронный ресурс] – Электрон. Текстовые дан., 2011. – Режим доступа: http://www.naykalab.ru 9. Васильев Д.А. Выделение и идентификация Bordetella bronchiseptica от животных / Д.А. Васильев, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Васильева // Естественные и технические науки. – 2010. - № 5. – С. 233-235. 10. Васильева Ю.Б. Особенности биологии бактерий вида Bordetella bronchiseptica // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.scienceeducation.ru/110-9927. 11. Гринева, Т.А. Схема выделения Pseudomonas chlororaphis / Т.А. Гринева, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Вестник ветеринарии. – Ставрополь: «Энтропос», 2013. – №64(1/2013). – С. 18-20. 12. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 1. 12 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 13. Васильев Д.А. Листериозные бактериофаги / Д.А.Васильев, Е.Н. Ковалева, С.Н. Золотухин / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. Ульяновск, 2013. 14. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. IDENTIFICATION OF THE BACTERIA SERRATIA MARCESCEN OPEN WATER RESERVOIRS Efreytorova E.O., Halushko I., Barakhtina E. Keywords: Bacteria, display, identification, culture media, test the biological properties Work is devoted to research on the indication and identification of the bacterium Serratia marcescens in water of open reservoirs . УДК 602.3:579.8 САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СМЫВОВ С КУХОННОГО ИНВЕНТАРЯ Абулханова Д., Камышев Я. 2 курс факультета ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., доцент Пульчеровская Л.П., д.б.н., профессорВасильев Д.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: санитарно-микробиологическое исследование, кухня Работа посвящена санитарно-микробиологическому исследованию кухонного инвентаря студенческих общежитий. Ученые из Великобритании, исследовавшие разные предметы домашнего обихода как источники для размножения вредных бактерий, пришли к выводу, что одним из самых излюбленных мест размножения бактерий является деревянные столы, ложки, разделочные и пластиковые доски. Дерево более пористый материал по сравнению с пластиком или металлом. Соответственно, бактериям (как правило речь идет о палочках) проще множиться в дереве. Отнюдь не безопасны разделочные доски из пластика. Многочисленные микрощели, образующиеся от порезов, способствуют стремительному росту бактерий, на одной доске в 50 раз больше вредоносных микроорганизмов, чем под ободком унитаза. Какими бы хорошими не были продукты питания, при нарушении правил санитарии, а также гигиены на кухне, при их хранении, подготовке к последующему приготовлению, могут вместо пользы принести вред здоровью 13 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии человека. В основном на кухонном столе приготовляют пищу, который после использования должен быть тщательно вымыт. Мыть рекомендуется посуду сразу же после еды, не откладывая это дело на потом. Посуду надо очистить от остатков еды, залить горячей водой с содой, после чего вымыть, сполоснуть и вытереть чистым полотенцем. Нежелательно хранить, перед приготовлением, продукты, в открытом виде, потому что вместе с пылью на них могут попасть бактерии, которые сделать могут их непригодными для приготовления. Хранение верхней одежды и других вещей, которые не имеют отношение к приготовлению пищи, совершенно недопустимо. Необходимо, чтобы кухня и весь кухонный инвентарь содержались в особой аккуратности, чистоте, одежда и руки человека, приготовляющего пищу, были абсолютно чистыми. Несоблюдение простых этих правил может привести к возникновению желудочно-кишечных заболеваний, особенно в летнее время года. Материалом для исследования послужили смывы со столов и раковин на кухнях общежития №5, уборка на кухне проводится один раз в день, утром в 6:00. На этих кухнях готовят студенты, и нам стало интересно насколько мы аккуратны при пользовании ими и насколько чисто убирают наши кухни, и можем ли мы чем-нибудь заразиться. Смывы брали с помощью стерильных увлажненных тампонов. В каждую пробирку с тампоном наливали стерильный изотонического раствора хлорида натрия объемом 2 мл таким образом, чтобы тампон не касался жидкости. Непосредственно перед взятием смыва тампон увлажняли, наклоняя пробирку. В процессе отбора смывов неоднократное смачивали тампоны. После проведения смыва тампон вкладывали в ту же пробирку, погружая в жидкость. Смывы исследовали сразу же после их взятия. Допускается их хранение и транспортирование не более 6 ч при температуре 1...10 0С. Для определения общего числа микроорганизмов (ОМЧ) в исследуемых смывах к 2 мл воды, которая была использована для увлажнения тампона, прибавляли еще 8 мл стерильной воды. Тампон тщательно в течение 2-3 мин отмывали, получая исходное разведение. Из него готовили ряд - 3 последовательных десятикратных разведений. Затем из разведений смыва брали по 1 мл, вносили в стерильные чашки Петри, заливали расплавленным и остуженным МПА. Посевы выдерживали 24 ч при 37°С и 24 ч при комнатной температуре, после чего производили подсчет выросших колоний. Устанавливали количество микроорганизмов в 1 мл исходного разведения смыва (для этого подсчитывают число колоний в чашке и полученную величину умножали на степень разведения смыва) [1,2]. Также производили посевы смывов на среду КОДА с целью обнаружения бактерий группы кишечной палочки (БГКП), которые инкубировали при температуре 37 0С. Через 24 ч из пробирок со средой КОДА производили высев на сектора чашек со средой Эндо в случае изменения окраски среды, (из исходной зеленого до желтого) или ее помутнения (пробы 2,4,5,8,9). Из колоний, характерных для БГКП, готовили мазки, окрашивали их по методу 14 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Грама, микроскопировали, идентифицировали по общепринятым тестам для бактерий группы кишечных палочек. Обнаружение БГКП в смывах с поверхностей свидетельствует о нарушении санитарного режима при пользовании кухонного инвентаря[1,2]. Для выявления стафилококков производили посев смыва на желточносолевой агар и в среду накопления (солевой бульон - МПБ, содержащий 6,5 % NaCl). Колонии с признаками, характерными для стафилококков, изучали согласно МУ. Просматривали посевы на плотных средах. Из подозрительных колоний готовили препараты, окрашивали по методу Грама. Проверяли наличие каталазы. Обнаружили Staphylococcus aureus, которые были - неподвижные округлой формы, расположенные одиночно, парами и гроздьями. По методу Грама окрашивались положительно. Из пробирок с солевым бульоном делали высев на желточно-солевой (колонии имели форму плоских дисков (диаметр 2 4 мм) белого, желтого, кремового и золотистого цвета с ровными краями; вокруг колоний образуются радужное кольцо и зона помутнения среды), проводили предварительную идентификацию, как описано выше. Сделали вывод о возможном наличии Staphylococcus aureus в исследуемом образце. Таблица 1 – Результаты микробиологических исследований панелей сотовых телефонов Наименование пробы Проба 1 Проба 2 Проба 3 Проба 4 Проба 5 Проба 6 Проба 7 Проба 8 Проба 9 ОМЧ (м.к./мл смыва) 1227 5133 505 11393 8339 1173 1910 33403 32653 БГКП Стафилококки Сальмонеллы + + + + + + + + + + + + + + - Сальмонеллы выявляли на средах Эндо и ВСА. Результат – отрицательный. Помимо микроорганизмов в пробах – 1,3,5 были выявлены плесневелые грибы. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1. Заключение. Проведенные нами исследования смывов с кухонного инвентаря говорят о том, что он находятся в удовлетворительном состоянии. Рекомендуем студентам соблюдать чистоту и санитарно-гигиенические правила при пользовании общественными кухнями при приготовлении пищи. Библиографический список 1. Сбойчаков В.Б. Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований/ В.Б. Сбойчаков.- СПб.:СпецЛит,2007.-592с. 15 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 2. Черкес Ф.К. Микробиология/ Ф.К.Черкес, Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А.М.: Медицина, 1987.- 512с. 3. http://xn----7sbabno2abl4a9aggb.xn--p1ai/food/sanitaria-kuhni-gigiena-chistota.html 4. Васильева Ю.Б. Новая тест-система идентификации возбудителя бордетеллёза – Bordetella bronchiseptica // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10. – Ч.1. 5. Васильева Ю.Б. Разработка методов детекции бактерий Bordetella bronchiseptica // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С. 46-51. 6. Горшков, И.Г. Исследование особенностей азотного питания бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas / И.Г. Горшков, Т.А. Гринева, А.П. Воротников, Н.Г. Куклина, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Международный научно-исследовательский журнал = Research journal of international studies. – Екатеринбург: «Индивидуальный предприниматель Соколова Марина Владимировна», 2013. – №1(8). – Ч. 1. – С. 75-76. 7. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 8. Васильев Д.А. Листериозные бактериофаги / Д.А.Васильев, Е.Н. Ковалева, С.Н. Золотухин / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. Ульяновск, 2013. 9. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. 10. Васильев Д.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, А.И. Калдыркаев, В.А. Макеев, И.Г. Швиденко / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 3 (23). С. 52-56. SANITARY MICROBIOLOGICAL STUDIES SWABS FROM KITCHEN UTENSILS Abulhanova D., Kamyshev Ya. Keywords: sanitary- microbiological study, kitchen Work is devoted to the sanitary-microbiological study of kitchen utensils student dormitories. 16 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 579.62 БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА FLAVOBACTERIUM PSYCHROPHILUM Воротников. А.П., 3 курс факультета ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., ст. преподаватель Викторов Д.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: Flavobacterium psychrophilum, биохимические свойства, мочевина, лактоза. Работа посвящена изучению биохимических свойств бактерий вида Flavobacterium psychrophilum. При проведении иследований было установленно, что данные бактерии утилизируют мочевину и лактозу. Введение Поскольку Flavobacterium psychrophilum способны вызывать массовую гибель рыбы [1], исследование данного микроорганизма видятся целесообразными, поскольку в дальнейшем на их основе имеется возможность разработки средств диагностики и лечения заболевания, вызываемого бактерией F. psychrophilum [2]. Наиболее сильно холодноводная болезнь рыб распространена на Дальнем Востоке, где смертность рыб может достигать 70% в периоды, когда температура воды находится в пределах 4-7°С. [5] F. psychrophilum – грамотрицательная палочковидные аэробы 2-5 мкм в длину 0,3-0,5 мкм в диаметре с округлыми или заостренными концами. Температурный оптимум в пределах 4-12 °С.[3, 6] В лабораторных условиях выращивается при комнатной температуре. На агаре дает колонии R-формы желтого цвета (от кремовых до оранжевых).[2, 3] Широко распространяются в почве и пресноводных водоёмах .[3, 6] Цель и задачи Целью исследования являлось определение биохимических свойств бактерий F. рsychrophilum. Данная цель достигалась путем исследования штаммов Fp 2, 16, 32, 570, 572, 365, 3008, которые были получены из музея кафедры микробиологии, вирусологии эпизоотологии и ветеринарносанитарной экспертизы Ульяновской ГСХА им П.А.Столыпина. Результаты и обсуждение Результаты тестов приведены в таблице 1. Все тесты ставились при температуре 10-15 0C. Охлаждение чашек обеспечивалось хладоэлементами. При постановке опытов в термостатате на 37 0 C рост полностью отсутствовал, в термостате на 28 0C рост отмечался лишь на третий день постановки опыта у трех штаммов. При температуре ниже 15 0C рост отмечался через 24 часа после посева. 17 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Таблица 1 – Биохимические свойства F.psychrophilum Биохимические свойства Арабиноза Манноза Лактоза Глюкоза Сахароза Триптофандезаминидаза Лизиндекарбоксилаза Орнитиндекарбоксилаза Аргининдегидролаза Нитраты Маннит Сорбат Адонит Эскулин Уреаза Цитрат натрия Ацетат натрия Индол H2S Fp2 + + + + +/+ + +/+ + - Fp16 + + + + + + + + + + + - Штаммы F.psychrophilum Fp32 Fp570 Fp572 Fp365 + + + + +/+ + + + + + + + + + +/+/+/+ + + +/+ + +/+/+ +/+ + + + + + + + + +/- Fp3008 +/+ + +/+/+ +/+ +/+ + + - В результате проведённых работ было обнаружено, что F. psychrophilum способны утилизировать мочевину и лактозу. Мочевина (карбамид) угнетает рост микроорганизмов, что позволяет использовать её как селективный компонент питательных сред для F. psychrophilum. Использование лактозы в качестве источника углерода позволяет комбинировать оба выше представленных признака для разработки методов индикации и идентификации в дополнение к морфологическим и культуральным свойствам. Выводы В ходе проведённых работ было выявлено, что культура F.psihrophilum наиболее быстро растет в оптимуме температур 10-15 0C Также были определенны биохимические свойства Флавобактерий, некоторые из которых позволяют использовать их в качестве основы для создания среды, обеспечивающий наиболее быстрый рост F.psihrophilum. Библиографический список 1. Викторов Д.А. Результаты изучения биохимических свойств Flavobacterium psychrophilum / Д.А. Викторов, А.П. Воротников, Н.А. Парамонова, Д.А. Васильев // Международный научно-исследовательский журнал = Research journal of international studies. – Екатеринбург: «Индивидуальный предприниматель Соколова Марина Владимировна», 2014. – № 2-1 (21). – С. 53-54. 2. Куклина Н.Г. Изучение культуральных свойств бактерии вида Aeromonas salmonicida / Н.Г. Куклина, И.Г. Горшков, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы V Международной научно-практической конференции, Ульяновск, 11 июня 2013. – Т. 2. – С. 81-83. 3. Bernardet J.F.Cutting a Gordian knot: emended classification and description of the genus Flavobacterium, emended description of the family Flavobacteriaceae, and proposal of 18 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Flavobacterium hydatis. /Bernardet J.F Segers P., Vancanneyt M., et al.// Int J Syst Bacteriol-1996.- 46:128-48. 4. Naoyuki Misaka1.Quantitative Detection of Viable Flavobacterium psychrophilum in Chum Salmon Oncorhynchus keta by Colony Blotting and Immunostaining. / Naoyuki Misaka1, Toyohiko Nishizawa and Mamoru Yoshimizu.// Fish Pathology-2008- 43 (3), 117–123,. 5. Б.Б. Намсараев. Экология микроорганизмов экстремальных водных систем: учеб. пособие / Б.Б. Намсараев, Е.Ю. Аби-дуева, Е.В. Лаврентьева и др. – Улан-Удэ: Издательство Бурятского госуниверситета, 2008. – 94 с. 6. Alvarez B. Development of genetic techniques for the psychrotrophic fish pathogen Flavobacterium psychrophilum. / Alvarez B, Secades P, McBride MJ, Guijarro JA// Appl Env Microbiol 2004, 70:581-587. BIOCHEMICAL PROPERTIES OF FLAVOBACTERIUM PSYCHROPHILUM. Vorotnikov.A.P. Keywords: Flavobacterium psychrophilum, biochemical properties, urea, lactose. This paper studies the biochemical properties of the bacterium Flavobacterium psychrophilum. During study researches it was established that these bacteria utilize urea and lactose. УДК 579.62 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РНФ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ESCHERICHIA COLI О157 В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ Воротников. А.П., 3 курс факультета ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., доцент Молофеева Н.И. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: E.coli О157, бактериофаги, БОЕ, РНФ. Работа посвящена исследованию нового способа обнаружения E.coli О157 в продуктах питания (в том числе в мясе). Данный метод подходит для исследование воды на зараженность кишечной палочкой. При проведении исследований было установлено, что РНФ способна указать на наличие патогена при его концентрации от 103 м.к./г. Введение Согласно литературным данным, заражение людей E.coli О157 происходит чаще всего при употреблении пищевых продуктов, поэтому разработка методов выявления вышеуказанных микроорганизмов в мясе и в других продуктах питания имеет актуальное значение [5, 8]. Исследование проб мяса искусственно контаминированного эшерихиями с помощь РНФ Кусочки свинины массой 5-10 г растирали в стерильной фарфоровой 19 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии ступке и вносили в колбы объемом 100 мл, заливали стерильным МПБ из расчета 10 мл бульона на 1 г. В опытные колбы вносили индикаторную культуру E.coli О157 штамм РЛ и №51659 в концентрации 105 104 ; 103 ; 102 ; 101 м.к./мл и брали колбы с пробой мяса не контаминированного бактериями E.coli О157. Содержимое колб встряхивали в шуттель-аппарате с последующим отстаиванием взвеси в течение 10 минут. Приготавливали для опытной и контрольной проб по 6 широких пробирок (диаметр 20 мм) и нумеровали их (1, 2, 3 и соответственно 1к, 2к и 3к – для каждого разведения культуры). В пробирки № 1, 2 и 1к, 2к вносили по 9 мл исследуемой взвеси мяса, в пробирки № 3 и 3к–9 мл стерильного МПБ. Затем в пробирки №1, 3 и 1к и 3к добавляли 1 мл индикаторного фага в рабочем разведении, а в пробирки №2 и 2 к вносили по 1 мл МПБ (контроль на присутствие свободного фага). Рабочее разведение фага должно содержать 1х104 БОЕ в 1мл. При титре фага, равном 2х108 БОЕ в 1 мл, фаг разводили 1:10000, при титре фага, равном 1-2х109 БОЕ в 1 мл –1:100000. Пробирки №1 и 1к, в которых находились взвеси мяса и индикаторный фаг, являлись опытными. Пробирки №2 и 2к – без фага были контрольными для выявления в пробах мяса свободного фага. Пробирки №3 и 3к – контроль на титр индикаторного фага. После культивирования при температуре 37 С содержимое каждой пробирки разводили МПБ (рН 7,4-7,6) так, чтобы при высеве 1 мл содержимого из пробирки №3 и 3к (контроль на титр фага) на чашках образовалось несколько десятков негативных колоний (зон лизиса) фага. В пробирке № 3 и 3к индикаторный фаг находился в концентрации нескольких тысяч БОЕ в 1 мл, и для того, чтобы получить в конечном разведении несколько десятков БОЕ в 1 мл, содержимое пробирки № 3 разводили в 20 раз, т.е. 0,25 мл исследуемой смеси вносили в 4,5 мл МПБ. Содержимое опытных пробирок № 1,1 и №2, 2 к разводили аналогично [1, 2, 3, 4]. Ввиду того, что селекционированные нами фаги являются термостабильными, то инактивацию микрофлоры разведенных смесей пробирок №1 и 1к, № 2 и 2к, № 3 и 3к мы проводили путем прогревания в водяной бане при температуре 58-60°С в течение 30 минут. После этого содержимое пробирок исследовали на количество БОЕ бактериофага методом агаровых слоев по Грациа. Для исследования методом агаровых слоев использовали МПА, содержащий 1,5%; 0,7% агара. 1,5% мясопептонный агар разливали в чашки по 25–30 мл. Чашки подсушивали в термостате в течение 2–3 часов. Индикаторные культуры эшерихий выращивали в МПБ в течение 18 часов. МПА с 0,7%-ным содержанием агара заготавливали заранее в пробирках по 2,5 мл, расплавляли, охлаждали до температуры 46-48 С. В пробирку вносили 0,2 мл бульонной культуры и 1 мл разведенной и прогретой исследуемой смеси, перемешивали и выливали вторым слоем на чашки с 1,5%ным МПА. Через 20-30 минут после застывания верхнего слоя агара чашки помещали в термостат на 12-16 часов. 20 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Из данных таблицы 1 можно сделать вывод, что увеличение титра фагов Е-61 УГСХА и Е-67 УГСХА более чем в 5 раза произошло уже при концентрации 103 микробных клеток эшерихий в 1 г мяса. При исследовании контаминированного эшерихиями МПБ, водопроводной воды, мяса, были получены схожие результаты: положительная РНФ была при минимальной концентрации эшерихий в материале 10 3 м.к./г. При концентрации бактерий 101 м.к./г исследуемого материала увеличение количества БОЕ было в пределах; 1,1 и 1,4 раз – при исследовании мяса (отрицательная реакция); 1,1 и 1,5 раз (отрицательная реакция) – при исследовании воды. Изменение концентрации микроорганизмов до 102 м.к./г увеличивало количество БОЕ фагов в 1,3 и 1,6 раза – при исследовании мяса (отрицательная реакция); 1,3 и 1,7 раз (отрицательная реакция) – при исследовании воды. Выводы Таким образом, результаты проведенной серии опытов свидетельствуют о положительной РНФ при концентрации эшерихий 10 3 м.к./г и более как в МПБ так и в воде и мясе. Библиографический список 1. Васильев Д.А. Детекция Aeromonas hydrophila в пищевой продукции из гидробионтов с применением биосенсоров на основе гомологичных бактериофагов / Д.А. Васильев, Д.А. Викторов, И.Р. Насибуллин, С.Н. Золотухин, А.А. Нафеев, И.Г. Горшков, Н.Г. Куклина, Н.Г. Барт // Фундаментальные исследования. – Пенза: Издательский Дом "Академия Естествознания", 2014. – № 5. – Ч. 1. – С. 50-54. 2. Васильев Д.А. Разработка методов фагоидентификации и фагодетекции бактерий Pseudomonas fluorescens / Д.А. Васильев, Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Т.А. Гринева, Е.А. Ляшенко // Фундаментальные исследования. – Пенза: Издательский Дом "Академия Естествознания", 2014. – № 5. – Ч. 1. – С. 55-58. 3. Викторов Д.А. Индикация бактерий Pseudomonas fluorescens методом реакции нарастания титра фага / Д.А. Викторов, Д.А. Васильев, А.М. Артамонов // Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: Материалы международной научнопрактической конференции, Ульяновск, ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», 23-25 апреля 2013. – Т. 1. – Ульяновск, 2013. – С. 159-162. 4. Насибуллин И.Р. Применение реакции нарастания титра фага для индикации аэромонад в рыбной продукции / И.Р. Насибуллин, И.Г. Горшков, Н.Г. Куклина, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев, А.А. Нафеев // Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: Материалы международной научно-практической конференции, Ульяновск, ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», 23-25 апреля 2013. – Т. 2. – Ульяновск, 2013. – С. 158-161. 5. Escherichia coli O157:H7. CDC Division of Bacterial and Mycotic Diseases. 6. Feng P, Weagant S, Grant, M. Enumeration of Escherichia coli and the Coliform Bacteria. Bacteriological Analytical Manual FDA/Center for Food Safety & Applied Nutrition 7. Chalmers, R.M.; H. Aird, F.J. Bolton (2000). «Waterborne Escherichia coli O157». Society for Applied Microbiology Symposium Series (29): 124S–132S 8. http://ru.wikipedia.org/wiki/%CA%E8%F8%E5%F7%ED%E0%FF_%EF%E0%EB%EE% F7%EA%E0 21 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии USING REACTION RISE TITER BACTERIOPHAGE FOR DETECTING ESCHERICHIA COLI O157 IN FOODS VorotnikovA.P., Molofeeva N.I. Keywords: E.coli O157, bacteriophages, PFU. The paper studies a new method for detecting E.coli O157 in food and privately in the meat. Also, this method is suitable for research of water contamination with Escherichia coli. During study researches it was established that RNF able indicate the presence of a pathogen, even if it is present at a concentration of 103 MK / g. УДК 619:579 ИССЛЕДОВАНИЕ СРЕДСТВ ЛИЧНОЙ ГИГИЕНЫ СОДЕРЖАЩИЕ БАКТЕРИОФАГИ Гановичева Е.П, Низамова Р.Р., Насибуллина Д.М., Ибрагимова Р.Р., Галушко И.С., 4 курс факультета ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., ст.преподаватель Барт Н.Г. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: бактериофаги, бактерии, вирусы, патогенный, специфичность. Работа посвящена применению бактериофагов в косметологии. Исследованию бактериофагов применяемых при производстве косметики «Сенгара» на специфичность. В 1896 году английский бактериолог Эрнест Ханкин обнаружил, что вода в индийских реках Ганг и Джамна обладает антибактериальной активностью, и предположил, что в этой воде содержится некая субстанция, не допускающая распространения эпидемии холеры. Первым явление разрушения палочки сибирской язвы наблюдал русский микробиолог Н. Ф. Гамалея в 1898 году. А в 1917 году ученый из института Пастера Феликс Д’Эрель сообщил, что нашел «невидимого микроба», поражающего дизентерийную палочку. Он и дал название «бактериофаг» («пожиратель бактерий») новому микроорганизму. Позднее Д’Эрель описал случай успешного лечения дизентерии с использованием бактериофагов, доказав, что они обеспечивают выздоровление больного организма, а затем и создают специфический иммунитет. Это привлекло к бактериофагам внимание многих исследователей, которые предполагали найти в них действенное средство борьбы с опасными инфекционными болезнями. Бактериофаг состоит из белковой оболочки и генетического материала – нуклеиновой кислоты (ДНК или, реже, РНК). Его размер составляет от 20 до 200 нм. Типичный фаг имеет головку и хвост, который обычно в 2–4 раза превышает диаметр головки. Бактериофаги – самая многочисленная и широко распространенная, а возможно, и наиболее древняя 22 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии группа вирусов. Они обнаружены для большинства бактерий, и патогенных, и сапрофитных. В природе фаги встречаются там, где имеются чувствительные к ним бактерии: в кишечнике животных и человека, в почве и воде, в растениях и т. д. Чем богаче субстрат микроорганизмами, тем больше в нем бактериофагов. Бактериофаги узко специфичны: каждый штамм избирательно поражает несколько штаммов бактерий. Бактериофаг прикрепляется к рецепторам на поверхности бактериальной клетки, прокалывает ее оболочку своим хвостом и впрыскивает в нее ДНК, содержащуюся в головке фага. После этого бактериальная клетка растворяется (происходит ее лизис) и появляются новые зрелые бактериофаги. Так происходит до тех пор, пока не будут разрушены все бактерии данного патогенного штамма. После этого бактериофаги самоуничтожаются. Сегодня при любой бактериальной инфекции врач назначит нам антибиотики – это стандарт лечения. Однако мы знаем, что антибиотики далеко не безобидны. Да, они убивают патогенную микрофлору, но одновременно уничтожают и полезные микроорганизмы. Кроме того, антибиотики оказывают множество побочных действий на все органы и системы. Еще один их недостаток – строгая схема приема. Принимать антибиотики надо в определенное время, и следует обязательно пройти весь курс. Иначе у бактерий может выработаться устойчивость к этому средству. Антибиотикам есть альтернатива это бактериофаги. Медицина пользуется «услугами» бактериофагов достаточно давно, а в косметологию они пришли (если о вирусах можно так сказать) относительно недавно. В косметические средства, содержащие бактериофаги обычно добавляют вещества позволяющие последним находиться «в полусонном» состоянии. Делается, это для того, что бы средство можно было хранить при комнатной температуре. Научные разработки ОАО Фаберлик Средства личной и интимной гигиены разработаны специально для защиты нормофлоры человека. Использование биологических методов защиты микрофлоры – ноу-хау компании Фаберлик. Принцип действия построен на использовании бактериофагов-природных биоограничителей чужеродных (болезнетворных) микроорганизмов. Разработка фаговых коллекций проводится компанией ООО «НПЦ Микромир». В каждое средство введена своя коллекция бактериофагов, активных в отношении одноименных бактерийпатогенов. Способ введения в гель живых активных бактериофагов и сохранение их активности при заявленных условиях хранения – это сложный микробиологический процесс, который запатентован нашим разработчиком Панюшиным С.К. Вся продукция сертифицирована в соответствии с законодательством РФ и имеет Свидетельство о государственной регистрации с экспертным заключением о соответствии продукции Единым санитарноэпидемиологическим и гигиеническим требованиям к товарам и Декларацию о соответствии. Вся продукция прошла клинические испытания и имеет протоколы: токсикологических исследований, микробиологических испытаний, клинической апробации и химико-аналитических испытаний. Клинические испытания проводились в ЗАО Медицинском центре косметологической 23 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии коррекции «ЭКЛАН» и Испытательном лабораторном центре Центральной клинической больницы (ЦКБ РАН). Очень высокая эффективность препаратов доказана в Федеральном государственном учреждении здравоохранения «Центр гигиены и эпидемиологии № 133» ФМБА. В 2008 году гигиеническим средствам присуждена Золотая медаль им. Чижевского – высший наградной знак Академии Медико-Технических наук. «За большие заслуги в развитии науки, разработку концепции производства серии биопрепаратов с бактериофагами, развивающей ряд основных положений научных школ академиков РАМН А.А. Воробьева и И.Н. Блохиной». В декабре 2011 года косметика данной фирмы получила высшую оценку совета «Знак качества ХХI века» и экспертной комиссии. Косметике «Сенгара» присужден «Золотой Знак Качества ХХI века». Специфичность действия бактериофагов рода Providencia Нами было взято два гель-спрея (гель-спрей для полости рта с бактериофагами и пребиотиками; гель-спрей для рук – биологические перчатки) произведено ООО «НВЦ Агроветзащита С.-П.», Россия, Московская область, г. Сергеев Посад, по заказу ООО «Сенгара» эксклюзивно для ОАО «Фаберлик» и проверено на наличие заявленных бактериофагов (Wolinella Spp., Actinovyces Spp., Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porfiromonas gingivalis, Campylobacter Spp., Bacteroides Spp., Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus mutans, Pstudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Klebsiella). Специфичность характеризуется наличием или отсутствием литической активности бактериофагов в отношении гетерологичных бактерий. Изучение специфичности бактериофагов проводили на плотном питательном агаре методом нанесения капель фагов на газон исследуемой культуры. Изучение специфичности бактериофагов Wolinella Spp., Actinovyces Spp., Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porfiromonas gingivalis, Campylobacter Spp., Bacteroides Spp., Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus mutans, Pstudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Klebsiella проводили по отношению к представителям следующих видов: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus mutans, Pstudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Klebsiella, Proteus vulgaris. На поверхность МПА в чашках Петри пипеткой наносили 3-4 капли 18часовой бульонной культуры исследуемых микроорганизмов. Затем равномерно распределяли по поверхности среды стерильным шпателем. Чашки ставили в термостат для подсушивания на 15-20 минут. После чего на чашках размечали маркером два сектора: на первый сектор засеянного агара легким прикосновением пипетки наносили капли исследуемого бактериофага; на второй сектор по центру в качестве контроля наносили стерильный МПБ. Чашки наклоняли, чтобы капли стекли, а затем инкубировали при температуре 37 ºС. Оценку результатов проводили через 18-24 часа. Установлено, что заявленные фаги неактивны по отношению к представителям бактерий использованных нами в исследовании, но это не позволяет нам утверждать, что данные бактериофаги не присутствуют в составе 24 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии названных гель-спреев. Взятые нами микрорганизмы из музея кафедры не являются индикаторными культурами, что и не позволило выявить бактериофаги. Библиографический список 1. Бактериофаги в ветеринарии: реальность и перспективы / Л. Натидзе [и др.] // Перспективы использования препаратов бактериофага для превенции и лечения инфекции, вызванных патогенными и условно-патогенными микроорганизмами: матер. междунар. семинара. – Тбилиси. – 2005. 2. Барт Н.Г., Золотухин С.Н., Васильев Д.А. / Н.Г.Барт и др.// Выделение бактериофагов рода Providencia. Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина. - 2013. 3. Гольдфарб Д.М. Бактериофагия / Д.М. Гольдфарб // М.: Медгиз. – 1961. 4. Покровский В.И. Медицинская микробиология. / В.И. Покровский, О.К. Поздеев – М.: Медицина. – 1999. 5. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 6. Васильев Д.А. Выделение и идентификация Bordetella bronchiseptica от животных / Д.А. Васильев, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Васильева // Естественные и технические науки. – 2010. - № 5. – С. 233-235. 7. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 8. Васильев Д.А. Разработка методов фагоидентификации и фагодетекции бактерий Pseudomonas fluorescens / Д.А. Васильев, Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Т.А. Гринева, Е.А. Ляшенко / Фундаментальные исследования. 2014. № 5-1. С. 55-58. 9. Васильева Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. 10. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. STUDY OF PERSONAL HYGIENE BACTERIOPHAGES Ganovicheva E.P., Nizamova R.R., Nasibullina D.M., Ibragimov R.R., Halushko I.S., Bart N.G. Keywords: bacteriophages, bacteria, viruses, pathogenic specificity. Work is devoted to the use of bacteriophages in cosmetology. Study of bacteriophages used in the manufacture of cosmetics specificity. 25 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 579.67 МОБИЛЬНЫЙ ТЕЛЕФОН – ОДНА ИЗ САМЫХ ГРЯЗНЫХ ВЕЩЕЙ ПОВСЕДНЕВНОЙ ЖИЗНИ Казакова Е.. Крылова Н, Алексеев О., Букин О. 1 курс факультета ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., доцент Пульчеровская Л.П., д.б.н., профессор Золотухин С.Н. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: сотовый телефон, бактерии, санитарномикробиологические исследования. Работа посвящена характеристики мобильного телефона как места повышенной опасности в санитарном отношении для человека. Места повышенной опасности в санитарном отношении в каждой семье строго индивидуальны, у кого-то это санузел, у кого-то коробка с детскими игрушками, а у кого-то это кухня, но все же давайте сравним свое мнение с мнением ученых по мнению которых он следующий. Лидер рейтинга – холодильник. Безгранично доверяя современной технике, мы зачастую забываем о простейших правилах сохранности продуктов. Мы не соблюдаем сроки хранения молочных, мясных продуктов и полуфабрикатов, храним их в открытом виде, складывая рядом с готовыми блюдами сырые овощи или фрукты, а еще хуже яйца, устанавливаем экономичный режим работы холодильника, забывая, что именно он может быть самым приятным для размножения патогенных микроорганизмов. Результат не заставит долго ждать – все прелести кишечных инфекций и пищевых отравлений вам обеспечены. Второе место – разделочная доска. Для резки сырого мяса и рыбы не используется доска на которой Вы режете готовые продукты. Отдельная доска должна быть и для резки сырых овощей, особенно листовых. Третье место – стиральная машина. При экономии электроэнергии, используя холодную стирку мы оставляем большинство микробов на белье и на барабане стиральной машины (отличное, уютное гнездышко для микробов). Четвертое место разделили клавиатуры и телефоны, знаете известную байку, «если наступит голод, то программист год сможет кормиться крошками из клавиатуры». Количество микробов на клавиатуре в 400 раз больше, чем на сиденье общественного унитаза. И только на пятом месте по опасности санузлы и прихожии. Хуже всего обстоят дела с телефонами, на одном квадратном сантиметре которых почему-то проживают почти 4 тысячи микробов. Далее с большим отрывом следуют клавиатуры (510) и компьютерные мыши (260). Для сравнения: на квадратном сантиметре среднестатистического сиденья от унитаза обитают всего 7,5 микроба. 26 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Владелец телефона постоянно носит его с собой, берется за «передающее устройство» немытыми руками, практически никогда не чистит его корпус. Ухо и рот человека - места, богатые микробами. К тому же человек постоянно сам переносит микробов с лица на мобильник и в обратном направлении подсчитано, что в среднем мы касаемся своего лица руками не менее двух раз в час. Микромир, кишащий на поверхности телефона, человек тщательно пополняет всеми доступными ему средствами несколько раз в день - ровно столько, сколько звонков он дает или принимает. Не удивительно, что на корпусе электронного устройства инфекционисты обнаружили богатый выбор от сальмонелл и кишечной палочки до зловещих стрептококков и золотистых стафилококков. Активной жизни и размножению микробов способствует и то, что телефон нагревается при работе, да и носят его часто близко к телу. Нравится микробам и пребывание телефона в дамской сумочке – тоже не самом чистом месте на планете, передает «Вести.Ру». Разговаривать же, одновременно поедая на улице бутерброд, - просто идеальный способ создать наилучшие условия для размножения тех семейств микробов, которые уже проживают на поверхности телефона. В том случае, если пользователь мобильника здоров, серьезных проблем у него не возникает, так как организм человека достаточно хорошо приспособлен для сожительства с немалым количеством микробов. Но если мобильник находится в руках у больного или ослабленного человека, последствия могут быть самыми неприятными и непредсказуемыми. Самые распространенные обитатели квартир, учебных заведений и офисов, которых обнаруживают инфекционисты: Escherichia coli – вызывает кишечные расстройства, заболевания кожи; Klebsiella pneumonia – вызывает целый спектр инфекционных заболеваний от кишечных до легочных; бактерии рода Salmonella – вызывают сальмонеллез; бактерии рода Streptococcus – вызывают кожные и внутренние инфекционные заболевания; Staphylococcus aureus – вызывает целый спектр болезней от кожных до сепсиса (общего заражения крови) [2]. Мыть сотовый телефон, конечно же, нельзя! Если внутрь попадет хоть капля воды, косметический ремонт может перерасти в капитальный. Использовать для протирки спирт тоже не рекомендуется, т.к. после него часто остаются некрасивые белые разводы и налет. Кроме того, спирт также может попасть внутрь телефона и повредить лак или клей на деталях. Единственное допустимое решение – протереть корпус телефона специальным раствором, провести химчистку. Медики и специалисты рекомендуют время от времени протирать устройства специальными антибактериальными салфетками. Кроме этого старайтесь поменьше давать в пользование их другим людям. Лучше для 27 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии сенсорного экрана мягкая влажная ткань без ворса. Стерилизация, которая действует идентично той, которой используются в медицинских учреждениях, а именно с помощью ультрафиолетовой лампой. Библиографический список 1. «Санитарные правила и нормативы "Гигиенические требования к персональным электронно-вычислительным машинам и организации работы СанПиН 2.2.2/2.4.134003», утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 30 мая 2003 года. 2. А.А. Воробьёв, А.С. Быков «Микробиология», М. 1994 год. 3. Микрофлора окружающей среды и тела человека Литусов Н.В., Сергеев А.Г., Григорьева Ю.В., Ишутинова В.Г., М. 2005 год. 4. Васильева Ю.Б. Новая тест-система идентификации возбудителя бордетеллёза – Bordetella bronchiseptica // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10. – Ч.1. 5. Васильева Ю.Б. Разработка методов детекции бактерий Bordetella bronchiseptica // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С. 46-51. 6. Горшков, И.Г. Исследование особенностей азотного питания бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas / И.Г. Горшков, Т.А. Гринева, А.П. Воротников, Н.Г. Куклина, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Международный научно-исследовательский журнал = Research journal of international studies. – Екатеринбург: «Индивидуальный предприниматель Соколова Марина Владимировна», 2013. – №1(8). – Ч. 1. – С. 75-76. 7. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 8. Васильев Д.А. Листериозные бактериофаги / Д.А.Васильев, Е.Н. Ковалева, С.Н. Золотухин / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. Ульяновск, 2013. 9. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. 10. Васильев Д.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, А.И. Калдыркаев, В.А. Макеев, И.Г. Швиденко / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 3 (23). С. 52-56. MOBILE PHONE - ONE OF THE DIRTIEST THINGS OF EVERYDAY LIFE E. Kazakova . Krylov H, O. Alexeev , Bukin O. Keywords: cell phone , bacteria, sanitary and microbiological studies . Work is devoted to the characteristics of the mobile phone as a high-risk place in sanitary respect for human rights. 28 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 579.67 САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПАНЕЛЕЙ СОТОВЫХ ТЕЛЕФОНОВ Красильникова Е.А., Барсукова А.А.,2 курс, факультет ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., доцент Пульчеровская Л.П., д.б.н., профессор Васильев Д.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: сотовый телефон, питательные среды, санитарнопоказательные микроорганизмы, заболевания Работа посвящена санитарно-микробиологическому исследованию панелей сотовых телефонов. Современный мир теперь трудно представить без инноваций и таких повседневных вещей как сотовый телефон. Сегодня в нашей повседневной жизни все чаще мы используем компьютеры, ноутбуки и сотовые телефоны. Скорее всего, эта техника уже присутствует в каждом доме. О вреде сотового телефона для здоровья человека написаны уже целые трактаты, однако большинство пользователей ассоциирует эту проблему с электромагнитными излучениями. Существует и другая угроза, но при упоминании слова "вирус" большинство пользователей ПК и сотовых телефонов представляют себе вредоносную программу. Тем не менее, наши сотовые телефоны способны причинять гораздо более ощутимый вред при помощи совсем иных вирусов, если не соблюдать элементарных мер гигиены. Один квадратный дюйм клавиатуры телефона может дать пристанище примерно 4000 микробам, и разумеется, что не все из них будут безвредными [3]. Понятно, что "чисто там, где не сорят", и пресловутому ободку унитаза в цивилизованных заведениях и домах уделяется гораздо больше внимания, чем предающимся ежедневному контакту с руками пользователя поверхностям панели телефона. И все же, пренебрегать правилами гигиены в отношении сотовых телефонов не стоит – исследования показывают, что к примеру при ежедневной обработке поверхности рабочего стола дезинфицирующими салфетками уровень содержания бактерий снизился на 99%. Если вы регулярно моете руки и не облизываете пальцы при пользовании сотовым телефоном, то особо бояться нечего – вирусы передаются преимущественно через руки. Владелец телефона постоянно носит его с собой, берется за «передающее устройство» немытыми руками, практически никогда не чистит его корпус. Ухо и рот человека - места, богатые микробами. К тому же человек постоянно сам переносит микробов с лица на мобильник и в обратном направлении - подсчитано, что в среднем мы касаемся своего лица 29 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии руками не менее двух раз в час. Просто не забывайте, что мы не одиноки во Вселенной, и еще несколько миллионов микроорганизмов присутствуют рядом. Материалом для исследований послужили смывы со студенческих мобильников. Всего было отобрано 8 проб. Пробы исследовали на наличие санитарно-показательных микроорганизмов, а именно: определяли общую микробную обсемененность, присутствие бактерий группы кишечных палочек, наличие патогенных микроорганизмов (бактерии родов: Salmonella, Staphylococcus). Смывы брали с помощью стерильных увлажненных тампонов. Ватные тампоны на металлических палочках, вмонтированных в пробирки с ватными пробками, заготавливали заранее в лаборатории. В день взятия смывов в каждую пробирку с тампоном наливали стерильный изотонического раствора хлорида натрия таким образом, чтобы тампон не касался жидкости. Непосредственно перед взятием смыва тампон увлажняли, наклоняя пробирку. В процессе отбора смывов неоднократное смачивали тампоны. После проведения смыва тампон вкладывали в ту же пробирку, погружая в жидкость. Смывы исследовали сразу же после их взятия. Хотя допускается их хранение и транспортирование не более 6 ч при температуре 1...10 0С. Для определения общего числа микроорганизмов (ОМЧ) в исследуемых смывах к 2 мл воды, которая была использована для увлажнения тампона, прибавляли еще 8 мл стерильной воды. Тампон тщательно в течение 2-3 мин отмывали, получая исходное разведение. Из него готовили ряд последовательных десятикратных разведений. Затем из различных разведений смыва брали по 1 мл, вносили в стерильные чашки Петри, заливали расплавленным и остуженным МПА. Посевы выдерживали 24 ч при 37°С и 24 ч при комнатной температуре, после чего производили подсчет выросших колоний. Устанавливали количество микроорганизмов в 1 мл исходного разведения смыва (для этого подсчитывают число колоний в чашке и полученную величину умножали на степень разведения смыва) [1,2]. В микробиологической лаборатории НИИЦМиБ также производили посевы смывов на среду КОДА с целью обнаружения бактерий группы кишечной палочки (БГКП), которые инкубировали при температуре 37 0С. Через 24 ч из пробирок со средой КОДА производили высев на сектора чашек со средой Эндо в случае изменения окраски среды, (из исходной зеленого до желтого) или ее помутнения. Из колоний, характерных для БГКП, готовили мазки, окрашивали их по методу Грама, микроскопировали, идентифицировали по общепринятым тестам для бактерий группы кишечных палочек. Обнаружение БГКП в смывах с поверхностей свидетельствует о нарушении санитарного режима при пользовании компьютеров[1,2]. Для выявления стафилококка производили посев 0,5 мл смыва на желточно-солевой агар и в среду накопления (солевой бульон - МПБ, содержащий 6,5 % NaCl). Колонии с признаками, характерными для стафилококков, изучали согласно МУ. 30 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Просматривали посевы на плотных средах. Из подозрительных колоний готовили препараты, окрашивали по методу Грама. Проверяли наличие каталазы. Обнаружили Staphylococcus aureus, которые были - неподвижные округлой формы, расположенные одиночно, парами и гроздьями. По методу Грама окрашивались положительно, каталазоположительны. Из пробирок с солевым бульоном делали высев на желточно-солевой (колонии имели форму плоских дисков (диаметр 2 - 4 мм) белого, желтого, кремового и золотистого цвета с ровными краями; вокруг колоний образуются радужное кольцо и зона помутнения среды), проводили предварительную идентификацию, как описано выше. Сделали вывод о возможном наличии Staphylococcus aureus в исследуемом образце. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1. Таблица 1 – Результаты микробиологических исследований панелей сотовых телефонов (м.к.) Микробиологический показатель КМАФАнМ (1х104) БГКП (не допускается) Патогенные микроорганизмы, в т.ч.: Сальмонеллы (не допускается) Коагулазоположительные стафилококки (не допускается) Плесневые грибы Номер исследуемой пробы Клавиатура стационарных Клавиатура ноутбуков компьютеров 1 2 3 4 5 6 7 8 541 209 30 130 367 508 707 190 + + + - - - - - - - - - - - - - - + + - норм. норм. норм. норм. норм. норм. норм. норм. Таким образом, из результатов проведенных исследований видно, что общая микробная обсемененность панелей мобильников находилась в пределах допустимого. В 3-х пробах обнаружены БГКП, в 2- пробах были обнаружены коагулазоположительные стафилококки, что свидетельствует о нарушении санитарного режима пользования телефонами и их хозяевам необходимо обратить внимание на соблюдение правил личной гигиены. Библиографический список 1. 2. 3. 4. 5. Сбойчаков В.Б. Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований/ В.Б. Сбойчаков.- СПб.:СпецЛит,2007.-592с. Черкес Ф.К. Микробиология/ Ф.К.Черкес, Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А.М.: Медицина, 1987.- 512с. http://www.overclockers.ru Васильева Ю.Б. Новая тест-система идентификации возбудителя бордетеллёза – Bordetella bronchiseptica // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10. – Ч.1. Васильева Ю.Б. Разработка методов детекции бактерий Bordetella bronchiseptica // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С. 46-51. 31 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 6. 7. 8. 9. Горшков, И.Г. Исследование особенностей азотного питания бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas / И.Г. Горшков, Т.А. Гринева, А.П. Воротников, Н.Г. Куклина, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Международный научно-исследовательский журнал = Research journal of international studies. – Екатеринбург: «Индивидуальный предприниматель Соколова Марина Владимировна», 2013. – №1(8). – Ч. 1. – С. 75-76. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. Васильев Д.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, А.И. Калдыркаев, В.А. Макеев, И.Г. Швиденко / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 3 (23). С. 52-56. SANITARY AND MICROBIOLOGICAL RESEARCH PANELS CELLPHONES Krasnoperova E., Barsukov A.A. Keywords: cell phone, culture media, sanitary indicator microorganisms. Work is devoted to the sanitary-microbiological study panels of cell phones. УДК 579.62 АКТУАЛЬНОСТЬ БОРДЕТЕЛЛЁЗНОЙ ИНФЕКЦИИ И ПРОБЛЕМА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ АНТИБИОТИКОВ В КАЧЕСТВЕ СЕЛЕКТИВНОГО КОМПОНЕНТА ПРИ ИДЕНТИФИКАЦИИ BORDETELLA BRONCHISEPTICA Ломакин А.А., 1 курс факультета ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., ст. преподаватель Мастиленко А.В., к.в.н., доцент Васильева Ю.Б. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: Bordetella, микроорганизмы, антибиотики, селективные компоненты Работа посвящена вопросам актуализации бордетеллезной инфекции в настоящее время и проблеме выбора антибактериальных препаратов в качестве селективного компонента при разработке дифференциально-диагностических и селективных сред для индикации и идентификации Bordetella bronchiseptica. 32 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Авторами установлена их множественная резистентность к β-лактамным пенициллинам, макролидам, линкозамидам. В то же время все исследуемые культуры B. bronchiseptica проявляют высокую чувствительность в отношении β-лактамных цефалоспоринов, аминогликозидов, фторхинолонов. Актуальность Долгое время Bordetella bronchiseptica считалась возбудителем оппортунистических инфекций респираторного тракта у кошек и собак, в отличии от свиней, где этиологическая роль этого возбудителя была доказана при атрофическом рините. Данный микроорганизм изолируют со слизистой верхних дыхательных путей большинства видов млекопитающих, однако далеко не у всех регистрируют клинические проявления бордетеллеза. Чем же так опасен данный возбудитель? Вспышки бордетеллеза у домашних животных регистрировались еще в первой половине XX века, и считалось, что вакцинация вполне способна решить данную проблему. Однако и в наше время наблюдается рост данного заболевания, несмотря на иммунопрофилактику, особенно среди собак и кошек. Содержание в питомниках, дефицитные состояния иммунной системы животных, наличие очагов инфекционного агента, контакты с инфицированными животными и т.п. только усугубляют эпидемическую ситуацию. Сегодня не редки случаи изоляции B. bronchiseptica и от людей с явными клиническими признаками бордетеллёзной инфекции. Конечно, стоит оговориться, что пока это дети дошкольного и младшего школьного возраста (с несовершенной иммунной системой), а также старики (с признаками иммунодифицита). Не стоит забывать, что пагубное влияние экологических и стрессовых факторов, а также рост вирусных заболеваний далеко не способствуют защите человека от инфицирования B. bronchiseptica. Учитывая, что возбудители коклюша (B. pertussi) и паракоклюша (B. parapertussis) являются всего лишь независимыми производными B. bronchiseptica, предполагается, что полный геном сохранен лишь у B. bronchiseptica, и имеет весь арсенал факторов патогенности, имеющийся у B. pertussis и B. parapertussis. Во время эволюционного развития этих видов произошла крупномасштабная генная потеря и инактивация некоторых генов (с возможным отсутствием промоторов и генетических регуляторов). Предполагаемое время генетического обособления видов 0,27-1,4 млн. лет назад для B. bronchiseptica и B. parapertussis, 0,7-3,5 млн. лет назад для B. bronchiseptica и B. pertussis [1]. Пристальное внимание исследователей к проблеме патогенных видов Bordetella было уделено только возбудителям коклюша и паракоклюша, которые считались эталонными. Поэтому основные разработки прошлых лет, касающиеся бактериологических схем идентификации, дифференциальнодиагностических и селективных сред, агглютинирующих специфических сывороток и т.п. относились именно к этим видам. B. bronchiseptica в данных разработках либо не рассматривалась вовсе, либо имела к ним косвенное отношение. Однако некоторые аспекты индикации и дифференциации вышеуказанного возбудителя были достаточно хорошо освещены в связи с 33 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии инфекционными заболеваниями свиней, т.к. экономические потери от инфекционного атрофического ринита свиней в ведущих европейских странах, США, России и т.д. были значительными. В нашей стране более глубоко вопросами бордетеллеза домашних животных (в частности изоляции B. bronchiseptica от собак и кошек) стали заниматься в начале 2000гг. Так коллектив авторов под руководством проф. Васильева Д.А. разработал схему бактериологического исследования, молекулярно-генетической идентификации и фагоиндикации при бордетеллезе домашних животных [2, 3, 4, 5, 6]. В данных исследованиях при бактериологической идентификации авторы используют дифференциально-диагностические среды, в том числе разработнную BBR–57, в которой в качестве селективного компонента используется цефазолин в количестве 0,004 г/л. S. Lariviere et al. (1993) в своих исследованиях также показал, что использование в среде цефалексина позволяет повысить селективность среды Smith-Baskerville (SB) в отношении B. bronchiseptica [7]. По данным более ранних исследований известно, что возбудители бронхисептикоза, коколюша и паракоклюша устойчивы к антибиотикам пенициллинового ряда, что в ряде исследований даже позволяло повысить продуктивность среды [8]. L. Stauffer et al. (1983) и в последствии C. Parker et al. (1985) в своих исследованиях указывали на наличие чувствительности к пенициллину и цефалексину у некоторых штаммов патогенных бордетелл [9, 10]. M. Fiizi (1973) для получения чистой культуры B. bronchiseptica из биоматериала, полученного из пораженных очагов дыхательных путей животных с клиническими признаками бордетеллёза в качестве селективных компонентов использовал сочетание пенициллина, стрептомицина и нистатина [11]. Согласно исследованиям K. Connor et al. (1996) среда MBM с заменой амфотерицина В и бензилпенициллин на спектиномицина и циклогексимида в конечной концентрации 100 мг/мл и 0,5 мг/мл, соответственно, существенно увеличивает селективность в отношении патогенных микроорганизмов рода Bordetella [12]. S.Armstrong and M. Clements (1993) в своих исследованиях показали селективность налидиксовой кислоты (35 мкг/мл) и канамицина (30 мкг/мл) для возбудителя бордетеллеза [13]. Очевидно, что мнения большинства современных исследователей в отношении селективного компонента для дифференциально-диагностических сред при идентификации B. bronchiseptica неравнозначны. Таким образом, актуальность исследования чувствительности к антибактериальным препаратам указанного возбудителя для выбора их оптимальных комбинаций при разработке транспортной, накопительной и селективной сред очевидна. Исследование чувствительности к антибактериальным препаратам является важным как в отношении разработки селективных и дифференциально-диагностических сред, так и в отношении видового и штаммового типирования выделенных бактериальных культур [14]. Поэтому результаты проведенных исследований могут быть положены в основу разработки схемы типирования B. bronchiseptica. Целью данной работы являлось исследование чувствительности к антибактериальным препаратам культур B. bronchiseptica. 34 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы и методы В работе были использованы 9 культур B. bronchiseptica из коллекции музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарносанитарной экспертизы Ульяновской ГСХА (№ 1, 7, 101, 157, 163, 207, 214, 22067, 8344) которые в соответствии с паспортными данными, обладали типичными для бактерий этих видов морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами. В работе использовали ГРМ-агар (ГНЦ ПМБ п. Оболенск, ТУ 9398-02078095326-2006, Рег. № ФСР 2007/00001), ГРМ-бульон (ГНЦ ПМБ п. Оболенск, ТУ 9398-021-78095326-2006, Рег. № ФСР 2007/00002), диски с антибиотиками (НИИ им. Пастера г. Санкт-Петербург). На всех этапах работы был использован 0,9% р-р NaCl. В данной работе была использована 6 часовая бульонная культура B. bronchiseptica, после инкубации в ГРМ-бульоне при 37°С. Для определения чувствительности к антибактериальным препаратам был использован дискодиффузионный метод (ДДМ), согласно МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам». Результаты исследований Бульонные культуры в количестве 1,0 мл были перенесены на чашки с плотной питательной средой и равномерно распределены на поверхности агара. После 15 минут инкубации при комнатной температуре на поверхность среды с культурой B. bronchiseptica в асептических условиях были помещены диски с антибактериальными препаратами. Условия культивирования посевов были следующими – 24 часа при 37°С. После окончания инкубации чашки помещали кверху дном на темную матовую поверхность так, чтобы свет падал на них под углом в 45° (учет в отраженном свете) (см. рис. 1, 2). Диаметр зон задержки роста измеряли с точностью до 1 мм (см. таблицу 1). Рис. 1. Множественная резистентность B. Bronchiseptica к антибактериальным препаратам Рис. 2. Чувствительность B.bronchiseptica к антибактериальным препаратам 35 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Таблица 1 – Диаметры зон подавления роста штаммов B. bronchiseptica Содержание в диске, мкг ß-лактамные пенициллины Ампициллин 10 Амоксициллин 20 Бензилпенициллин 10 Карбенициллин 100 ß-лактамные цефалоспорины Цефоперазон 75 Цефалотин 30 Цефтриаксон 30 Цефамандол 30 Цефазолин 30 Цефаклор 30 Природные макролиды Эритромицин ---Полусинтетические макролиды Кларитромицин 15 Тетрациклины Тетрациклин 30 Аминогликозиды Стрептомицин 30 Гентамицин 10 Неомицин 30 Канамицин 30 Левомицетины (синтет. аналоги хлорамфеникола) Левомицитин 30 Гликопептидные антибиотики Ванкомицин 30 Линкозаимды Клиндамицин 2 Фторхинолоны Ципрофлоксацин 5 Левофлоксацин 5 Энрофлоксацин 5 Норфлоксацин 10 Производные нитрофуранов Фурадон 300 Фуразолидон 300 Фурагин 300 Прочие Оптохин ---Антибактериальные препараты Диаметр зон подавления роста (мм) Штаммы Bordetella bronchiseptica 1 7 101 157 163 207 214 22067 8344 0 0 0 20 0 0 0 17 0 0 0 10 0 0 0 23 0 0 0 18 0 0 0 12 0 0 0 20 0 0 0 17 0 0 0 15 0 15 10 15 0 20 0 13 12 17 5 18 0 16 10 14 7 24 0 15 15 15 3 20 0 14 11 15 0 22 5 10 15 17 0 16 0 17 14 12 0 25 0 16 11 14 4 19 0 14 10 16 0 20 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 4 0 15 20 24 23 14 17 25 20 17 19 20 21 12 23 19 19 18 22 15 19 16 14 18 17 17 17 15 22 17 20 20 20 20 23 22 18 0 0 0 6 0 0 7 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 20 18 20 20 19 16 18 18 21 20 15 16 22 21 15 20 20 19 15 21 19 20 17 19 19 21 20 17 18 18 18 20 20 16 20 20 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5 0 0 0 0 6 0 36 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Выводы В результате проведенных исследований нами обнаружена множественная резистентность B. bronchiseptica к β-лактамным пенициллинам (за исключением карбенициллина), макролидам, линкозамидам. В то же время все исследуемые культуры B. bronchiseptica проявляют высокую чувствительность в отношении β-лактамных цефалоспоринов (за исключением цефоперазона), аминогликозидов, фторхинолонов. Диаметр зон задержки роста для ß-лактамных цефалоспоринов составляет в среднем 17,5 мм (от 10 до 25 мм), для аминогликозидов – 17,5 мм (от 12 до 23 мм), для фторхинолонов – 18,5 мм (от 15 до 22 мм). Согласно МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» величина диаметров зон задержки роста, при которых принято считать, что бактериальная культура чувствительна к антибактериальным препаратам составляет для ß-лактамных цефалоспоринов ≥ 18,0 мм, для аминогликозида канамицина ≥ 18,0 мм, для аминогликозида гентамицина ≥ 15,0 мм. Библиографический список 1. Comparative analysis of the genome sequences of B. pertussis, B. parapertussis and B. bronchiseptica / J. Parkhill [et al.] // Nature genetics Advance online publication. – 2003. – V.10. – P.1038-1227. 2. Никульшина Ю.Б. Культивирование Bordetella bronchiseptica на различных селективных средах / Ю.Б. Никульшина, Д.Г. Сверкалова, Д.А. Васильев, А.В. Мастиленко, Д.Н. Хлынов // Актуальные вопросы аграрной науки и образования: Материалы Международной научно-практической конференции, 20-22 мая, 2008. – Ульяновск, 2008. – С. 57-59. 3. Васильев Д.А. К вопросу о бактериологической диагностике бордетеллеза / Д.А. Васильев, Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Никульшина, А.В. Мастиленко // Актуальные вопросы аграрной науки и образования: Материалы Международной научнопрактической конференции, 20-22 мая, 2008. –Ульяновск, 2008. – С. 92-94. 4. Сверкалова Д.Г. Создание транспортной и накопительной сред для Bordetella bronchiseptica / Д.Г. Сверкалова, А.В. Мастиленко, Д.Н Хлынов, Ю.Б. Никульшина, Д.А. Васильев // Актуальные вопросы аграрной науки и образования: Материалы Международной научно-практической конференции, 20-22 мая, 2008. –Ульяновск, 2008. – С. 134-136. 5. Васильев Д.А. Разработка методики выявления специфического участка ДНК Bordetella bronchiseptica с помощью ПЦР в режиме «реального времени» / Д.А. Васильев, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Никульшина // Современный мир, природа и человек: Сборник научных трудов. – Томск, 2009. – С. 115-117. 6. Васильев Д.А. Выделение и идентификация Bordetella bronchiseptica от животных / Д.А. Васильев, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Васильева // Естественные и технические науки. – 2010. – №5(49). – С. 233-235. 7. Comparison of isolation methods for the recovery of Bordetella bronchiseptica and Pasteurella multocida from the nasal cavities of piglets / S. Lariviere [et al] // Journal of clinical microbiology. – 1993. – V.31. – №.2. – P. 364-367. 8. Identification of B. pertussis infection by shared-primer PCR / Z. Li [et al.] // J. Clin. Microbiol. – 1994. – V.32. – P.783-789. 9. Bordetella. Manual of clinical microbiology, 4th ed. American Society for Microbiology, Washington / C.D. Parker [et al.] // D.C. – 1985. – P.394-399. 10. Stauffer, L.R. Cephalexin-supplemented Jones-Kendrick charcoal agar for selective isolation 37 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии of Bordetella pertussis: comparison with previously described media / L.R, Stauffer, D.R. Brown, and R.E. Sandstrom // J. Clin. Microbiol. – 1983. – №17. – P.60-62. 11. Fiizi, M. Selective isolation of Bordetella bronchiseptica / M. Fiizi // Zentralbl. Bakteriol. Parasitenkd. Infektionskr. Hyg. Abt. 1 Orig. – 1973. – №24. – P.270-272. 12. Moredun Bordetella Medium, an improved selective medium for isolation of Bordetella parapertussis / K.M. Connor [et al.] // Journal of clinical microbiology. – 1996. – V.34. – №.3. – P.638-640. 13. Armstrong S. K., Clements M. O. Isolation and characterization of Bordetella bronchiseptica mutants deficient in siderophore activity / S.K.. Armstrong, M.O. Clements // Journal of bacteriology. – 1993. – V.175. – № 4. – P.1144-1152. 14. Гринева Т.А. Определение антибиотикочувствительности Pseudomonas chlororaphis / Т.А. Гринева, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы V Международной научно-практической конференции, Ульяновск, 11 июня 2013. – Т. 2. – С. 31-33. 15. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. 16. Сосина Ю.А. Выявление остаточных количеств антибиотиков в мясе убойных животных и птицы / Ю.А. Сосина, Е.А. Карцева, Е.И. Карамышева, Е.А. Ляшенко / Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии. Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия, кафедра МВЭиВСЭ. 2012. - С. 178-180. 17. Антибиотики / Пульчеровская Л.П., Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Власов Н.А. / Учебно-методический комплекс. Методические указания к выполнению лабораторнопрактических занятий / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. Ульяновск, 2009. – Т.2. 18. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов бактерии вида Pseudomonas putida / Д.А. Викторов, И.И. Богданов // В книге: Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. С. 241-262. RELEVANCE OF INFECTION AND THE PROBLEM BORDETELLEZNOY USE OF ANTIBIOTICS AS SELECTIVE COMPONENT IN IDENTIFICATION BORDETELLA BRONCHISEPTICA Lomakin A.A., Mastilenko A.V. Keywords: Bordetella, bacteria, antibiotics, selective components Work is devoted to mainstreaming bordetelleznoy infection at the moment and the problem of choice of antimicrobials as a selective component in the development of differential diagnostic and selective media for display and identification of Bordetella bronchiseptica. 38 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 579.67 САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ РЫБНЫХ КОНСЕРВОВ В МАСЛЯНО-ТОМАТНОЙ ЗАЛИВКЕ Лягина Е., Маланина В., 2 курс факультета ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., доцент Пульчеровская Л.П., д.б.н., профессор Васильев Д.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: рыба, консервы, бактерии, стерильность Работа посвящена практической работе по санитарномикробиологическому исследованию рыбных консервов в масляно-томатной заливке. Консервами называют продукцию, упакованную в герметичную тару и нагретую до температуры, при которой погибают все виды микрофлоры. Такой способ консервирования позволяет хранить продукцию в любых условиях неограниченное время. При массовом производстве возникает ряд причин, в результате которых сохранность консервов ограничена. Например, при транспортировании и хранении возможно нарушение герметичности тары, гарантировать однородность прогрева всех банок невозможно, при длительном хранении возможны химические изменения в продукте, снижающие его пищевые и вкусовые свойства. По этим причинам рекомендуют хранить консервы при температуре не выше 15 °С от 6 мес до 2,5 лет. Изобретением консервов человечество обязано парижскому кондитеру и повару Николя Франсуа Апперу. В 1810 году Аппер издал книгу "Искусство сохранения в течение нескольких лет животной и растительной субстанции". Вскоре он основал первое в мире консервное предприятие "Дом Аппера", и консервы были у него отменные. Научное обоснование консервирования было сделано великим Пастером. С тех пор люди совершенствуют и изобретают новые способы сохранения пищевых продуктов. Рыба, которая служит основой для рыбных консервов, по питательности и вкусовым свойствам не уступает мясу, а по усвояемости превосходит его. Ценность рыбы определяется наличием в ее составе от 15% до 26% белков. Белки рыбы содержат 20 аминокислот, из них 8 являются незаменимыми для человеческого организма. Эти аминокислоты не синтезируются в организме человека и должны в определенных соотношениях поступать с пищей. Отсутствие в пище любой из восьми аминокислот вызывает нарушение здоровья. Рыба содержит также жиры (0,1-30%), витамины и минеральные вещества (0,9- 2%). В отличие от жира млекопитающих животных жир рыбы жидкий, т.к. содержит большое количество полиненасыщенных жирных кислот, которые играют важную роль в обмене веществ. В морской рыбе по сравнению с пресноводной содержится больше минеральных веществ, поэтому 39 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии некоторые рыбы обладают специфическим ароматом моря - йодистым запахом - или имеют приятный кисловатый привкус. Разные продукты подвергаются порче различными микробами, а каждый вид микроорганизмов имеет различную устойчивость к нагреванию. Поэтому, чтобы простерилизовать мясные или рыбные консервы, в которых главную опасность представляют стойкие спорообразующие бактерии, банки стерилизуют при температуре 112-120 °С. Кислая среда ослабляет сопротивляемость микробов к нагреванию. Поэтому рыбные и овощные консервы с кислой томатной заливкой стерилизуют при более низкой температуре (100-110 °С), чем натуральные консервы без томата. При определении продолжительности термической обработки консервов ориентируются на присутствие микроорганизмов с более стойкими спорами. К ним относятся в первую очередь анаэробную бактерию Clostridium botulinum, вызывающую тяжелое пищевое отравление - ботулизм. На возможность развития Clostridium botulinum в консервах влияет загрязнение продукта другими видами микроорганизмов, например, Bacillus subtilis, Bacillus mesentericus, которые поглощают кислород, а также бактериями, понижающими кислотность и тем самым создающими условия развития для Clostridium botulinum [1]. К остаточной микрофлоре натуральных консервов относят: споровые аэробы Bacillus subtilis, Bacillus mesentericus, которые не развиваются; термофильные бактерии из почвы, сахара, соков, загрязненного оборудования; мезофильные бактерии. Исходя из выше изложенного целью наших исследований явилось изучение микробиологических показателей рыбных консервов в томатной заливке. Для проведения исследований в магазине «Солнышко» п. Октябрьский были приобретены рыбные консервы «Килька в томатном соусе» торговых марок: «Барс», «Рыбный остров» и «Главпродукт» методом случайной выборки. Микробиологические исследования проводили в микробиологическом боксе кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ по следующим показателям: КМАФАнМ, Выявление и определение количества Staphylococcus aureus, Определение бактерий рода Bacillus, Определение бактерий рода Clostridium, Определение плесневых грибов и дрожжей. В результате проведенных исследований были получены следующие результаты: 1 и 3 пробы отвечают нормам и нарушений в микробиологическом отношении не имеют, проба 2 имеет 3x101 м.к./мл аэробной микрофлоры, которой не должно быть. Далее изучили морфологию бактерий выросшей колонии. Для этого окрасили микроорганизмы по методу Грама и обнаружили в мазке грамположительные кокки расположенные в виде гроздей винограда, т.е. бактерии рода Staphylococcus (рис.1). 40 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Рис. 1. Морфология выросших микроорганизмов Таблица 1 – Результаты микробиологических исследований Плесневых грибов и дрожжей 3 .«Главпродукг» Clostridium 2.«Рыбный остров» Bacillus 1 .«Креон» Staphylococc us aureus № пробы (производитель) КМАФАнМ Наличие в пробах бактерий 3x10 3x10 - - - - - - - - Библиографический список 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Черкес Ф.К., БогоявленскаяЛ.Б., Вельская Н.А. Микробиология / под ред. Ф.К. Черкес, -М.: Медицина, 1987. - 512с. Васильева Ю.Б. Новая тест-система идентификации возбудителя бордетеллёза – Bordetella bronchiseptica // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10. – Ч.1. Васильева Ю.Б. Разработка методов детекции бактерий Bordetella bronchiseptica // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С. 46-51. Горшков, И.Г. Исследование особенностей азотного питания бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas / И.Г. Горшков, Т.А. Гринева, А.П. Воротников, Н.Г. Куклина, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Международный научно-исследовательский журнал = Research journal of international studies. – Екатеринбург: «Индивидуальный предприниматель Соколова Марина Владимировна», 2013. – №1(8). – Ч. 1. – С. 75-76. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. Васильев Д.А. Листериозные бактериофаги / Д.А.Васильев, Е.Н. Ковалева, С.Н. Золотухин / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. Ульяновск, 2013. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. 41 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 8. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. Васильев Д.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, А.И. Калдыркаев, В.А. Макеев, И.Г. Швиденко / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 3 (23). С. 52-56. SANITARY AND MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF CANNED FISH IN OIL- TOMATO FILLING Lyagina E., Malanina B. Keywords: fish , canned food , bacteria , sterility Work is devoted to the practical work of the sanitary-microbiological study of canned fish in oil- tomato filling . УДК 579 МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ДЕНЕЖНЫХ ЗНАКОВ Сатдарова Д.Г.,Резванова Ю.Р., 2 курс факультета ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., доцент Пульчеровская Л.П. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: деньги, бактерии, микробиологическое исследование. Работа посвящена микробиологическому исследованию денежных знаков. Загрязнение денег на сегодняшний день приобрела актуальный характер, поскольку в обороте находится довольно большое количество денежной наличности, и ими человек пользуется почти каждый день [1]. На наших деньгах могут жить вполне конкретные возбудители вполне конкретных болезней. Многие из них опасны и даже смертельны для человека [2]. Целью работы является выявление наличия микроорганизмов на поверхности денежных знаков и анализ их качественного состава. Методы исследования и материалы. Материалом для исследования послужили денежные знаки бумажные и металлические. Были взяты бумажные купюры достоинством – пятьсот и сто рублей, и металлические монеты – пять, десять, пятьдесят копеек, один, два, пять рублей. Исследуемые образцы были взяты с рынка, из столовой и магазина. Всего исследовано было 6 проб. Бактериологический анализ денежных знаков подтверждает то, что содержание микроорганизмов на денежных знаках колеблется в широких пределах в зависимости от санитарно-гигиенического состояния рук и количества людей пользовавшихся ими. 42 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Микроорганизмы представляют собой своеобразную форму организации живой материи. Их отличает беспрецедентная многочисленность, удивительная жизнеспособность, пластичность, повсеместность распространения, обширность сфер взаимодействия с абиогенными и биогенными компонентами. Микроорганизмы способны вступать с организмом человека в самые разные взаимоотношения – от симбиоза до паразитизма. Мы провели микробиологический анализ отобранных проб денежных знаков. В ходе бактериологического исследования мы определили следующие показатели: общее количество микроорганизмов санитарно-показательные и патогенные микроорганизмы. Исследования выполнялись в лаборатории кафедры МВЭ и ВСЭ ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина». С каждой пробы были взяты смывы и произведен посев глубинным методом в МПА для определения ОМЧ и по методу Дригальского на специальные питательные среды с целью выявления БГКП, стафилококков и сальмонелл. Посевы термостатировали при 37◦С в течение 24 часов. В результате проведенных исследований нами были получены результаты, которые представлены в таблице 1. Таблица 1.- Микробиологический состав денежных знаков Исследуемая проба 1(500 рублей) 2(100 рублей) 3(5 рублей) 4(2+2 рубля) 5( 1 рубль) –м.к, 6 (5, 10, 50 копеек) ОМЧ (м.к./мл смыва) 2380 324 2133 10 276 10106 БГКП (м.к./мл смыва) - Стафилококки Сальмонеллы (м.к./мл смыва) (м.к./мл смыва) 53 37 6 9 3 79 Рис.1. Рост стафилококков на солевом МПА (проба №1) а- колонии стафилококков; б- грамположительные кокки 43 - Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Самыми загрязненными оказались бумажные деньги; ими чаще всего пользуются при мелких расчетах, они быстрее ветшают, а именно в микротрещинах ветхих денег и гнездятся колонии страшных микробов [3]. Менее грязными оказались металлические монеты. Были обнаружены грамположительные кокки (рис.2), располагающиеся одиночно, парами, редко цепочками. Рис. 2. Рост стафилококков на солевом МПА (проба №4) а- колонии стафилококков; б- грамположительные кокки; Ни в одной из исследуемых проб не обнаружены бактерии группы кишечной палочки, сальмонеллы. Во всех исследуемых пробах, кроме 2 пробы (рис.3), были обнаружены плесневые грибы. Особенно хорошо они выросли на среде Эндо. Рис. 3. Рост плесневых грибов Вывод однозначен – на денежных знаках живут очень много микробов, способных вызывать множество заболеваний. Главное правило – соблюдение личной гигиены в течение дня. 44 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Библиографический список 1. Деньги и микробы. http://www.nutrition.ru/nutritsio/dengi-i-mikrobyi- 6.html 2. «На российской валюте обитает несколько сотен видов микробов» http://www.m3m.ru/news/2007/1/31/31958.html 3. Шуб Г. М. Основы медицинской бактериологии, вирусологии и иммунологии. Учебное пособие. Саратов, 2001 4. Васильева Ю.Б. Новая тест-система идентификации возбудителя бордетеллёза – Bordetella bronchiseptica // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10. – Ч.1. 5. Васильева Ю.Б. Разработка методов детекции бактерий Bordetella bronchiseptica // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С. 46-51. 6. Горшков, И.Г. Исследование особенностей азотного питания бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas / И.Г. Горшков, Т.А. Гринева, А.П. Воротников, Н.Г. Куклина, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Международный научно-исследовательский журнал = Research journal of international studies. – Екатеринбург: «Индивидуальный предприниматель Соколова Марина Владимировна», 2013. – №1(8). – Ч. 1. – С. 75-76. 7. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 8. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. 9. Васильев Д.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, А.И. Калдыркаев, В.А. Макеев, И.Г. Швиденко / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 3 (23). С. 52-56. MICROBIOLOGICAL RESEARCH OF BANK NOTES Satdarova D. G., RezvanovаYu.R., Pulcherovskaya L.P. Keywords: money, bacteria, microbiological research Pollution of money today I gained actual character as in a turn there is quite large number of monetary cash, and the person uses them nearly an every day. 45 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 619:579 ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ МОЮЩИХ И ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ СРЕДСТВ НА МИКРОФЛОРУ РУК Семенов А.Д., ученик 9Б класса МОУ СОШ №31 им. «ГЕРОЕВ СВИРИ» Научный руководитель: научный сотрудник Горшков И.Г. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: бактерии, гигиена, микробиология, микроорганизмы. В статье рассказывается об исследование различных методов обработки моющими и дезинфицирующими средствами и их влияние на микрофлору рук. Актуальность исследования Ещё в XІX веке люди узнали про микроорганизмы, вызывающие инфекционные заболевания и порчу продуктов питания. Бактерии живут и размножаются на многих предметах нашего обихода: на деньгах, поручнях общественного транспорта, дверных ручках и т.д. Ко всем выше причисленным предметам человек прикасается руками, а значит, бактерии остаются на руках. Все мы с детства помним инструкцию, полученную от родителей: «Мойте руки перед едой!», эти же слова прописаны и в указаниях гигиенистов, эпидемиологов и юридически закреплены в СанПиНе [1,2,3]. И основной целью нашего исследования будет оценка правильности данного суждения. Целью данного исследования являлось изучение эффективности действия различных моющих и дезинфицирующих средств на микрофлору рук. Для достижения цели были поставлены следующие задачи: 1) Произвести смывы с рук до и после использования гигиенических средств. 2) Определить количество колониеобразующих единиц на поверхности питательного агара после инкубации. 3) Сравнить полученные данные и выявить наиболее эффективное и оптимальное средство защиты от бактерий. Оборудование: Термостат лабораторный ТС-180, стандартный набор посуды для микробиологических исследований. Материалы: агар бактериологический (производства ГНЦ ПМБ, п. Оболенск), мыло, дезинфицирующее средство, раствор спирта 70%, Ход работы: Для исследования обсемененности рук нами был использован метод смыва. Метод основан на количественном подсчете колоний микроорганизмов, выросших на плотном питательном агаре при температуре 37 0С в течение 24 часов. Стерильным тампоном, смоченным физиологическим раствором (раствор хлорида натрия 0,9%), протирались ладони рук, тыльная сторона ладоней, пальцы, ногтевые пластинки. Затем собранные тампоном микроорганизмы втирались в поверхность питательного агара, в заранее подготовленных шашках Петри. 46 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Смыва брались в шести вариантах: 1. Смыв брался с не мытых рук. 2. Смыв брался с рук мытых проточной водой из под крана. 3. Смыв брался с рук мытых водой с мылом. 4. Смыв брался с рук обработанных 70% раствором этилового спирта. 5. Смыв брался после обработки рук дезинфицирующим средством. 6. Шестая чашка была оставлена в качестве контроля стерильности. После посева чашки были поставлены в термостат на инкубацию при 37°С в течение 24 часов. Результаты исследований После инкубации на поверхности чашек образовались бактериальные колонии различных размеров и отличающиеся друг от друга по морфологическим признакам. Общие число бактериальных колоний на питательном агаре, при различных методах обработки рук приведены в таблице 1. Таблица 1 – Количество бактериальных колоний на поверхности питательного агара после инкубации № п/п Способ обработки рук 1 2 3 4 5 6 Контроль Не мытые руки Руки мытые проточной водой из под крана Рук мытых водой с мылом Рук обработанных 70% раствором этилового спирта Шестая чашка была оставлена в качестве контроля стерильности Количество бактериальных колоний на поверхности питательного агара после инкубации. 0 2040 1600 340 3 0 Выводы Нами был произведен смыв с рук, в результате которого было установлена динамика изменения количества бактерий на поверхности рук в зависимости от метода мытья/дезинфекции рук. Самый не эффективный метод по обработки рук это мытье рук проточной водой. Самыми эффективными методами оказались дезинфекция рук 70% раствором этилового спирта и обработка специальными дезинфицирующими средствами. Но в повседневной жизни будет достаточно просто мытья рук с мылом, что уже значительно снижает количество бактерий на поверхности рук. Библиографический список 1. СанПиН 2.4.2.576-96 «Гигиенические требования к условиям обучения школьников в различных видах современных общеобразовательных учреждений» 2. СанПиН 2.4.2.1178-02 Гигиенические требования к условиям обучения в общеобразовательных учреждениях. 3. Московец Г. Н. Личная гигиена младшего школьника [Текст] / Г. Н. Московец // Молодой ученый. – 2012. – №11. – С. 460-462. 47 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии STUDY OF DETERGENTS AND DISINFECTANTS ON THE MICROFLORA HANDS Semenov A.D. Gorshkov I.G. Keywords: bacteria, hygiene, microbiology, microorganisms. The article describes the study of various methods of processing detergents and disinfectants and their effect on the microflora of hands. УДК 619:579 ВЫДЕЛЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ БАКТЕРИОФАГОВ, АКТИВНЫХ В ОТНОШЕНИИ БАКТЕРИИ PSEUDOMONAS FLUORESCENS Семенов А.Д., ученик 9Б класса МОУ СОШ №31 им. «ГЕРОЕВ СВИРИ» Научный руководитель: научный сотрудник Горшков И.Г. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: бактериофаги, Рseudomonas fluorescens, биотехнология, микробиология, фагология. В результате проведенных исследований из объектов внешней среды (водные источники) был выделен штаммов бактериофага, специфичных для Pseudomonas fluorescens, исследованы его основные биологические свойства: Морфология негативных колоний межвидовая и внутриродовая специфичность, литическая активность. Актуальность исследования Бактерия Pseudomonas fluorescens – распространенные сапротрофные микроорганизмы, они заселяют ризосферу как естественные регуляторы фитопатогенных микроорганизмов. Бактерии характеризуются активным ростом, хорошо усваивают различные органические субстраты, продуцируют сидерофоры, бактериоцины и антибиотики, а также стимуляторы роста. Так же P. fluorescens играют значительную роль в порче пищевого сырья и продовольственных товаров (особенно яиц, мяса, рыбы, молока) [1,4]. Выше перечисленные причины обуславливают необходимость в разработке эффективной, быстрой и точной методике индикации и идентификации Pseudomonas fluorescens из объектов окружающей среды и объектов санитарного объекта. Первым этапом разработки метода, является выделение бактериофага активного по отношению к P.fluorescens. Цель исследования: выделение бактериофага бактерии Pseudomonas fluorescens, и изучение его биологических свойств; Литическая активность, морфология образуемых негативных колоний, активность по отношению к другим изучение её активности в отношении к другим рода бактериям рода Pseudomonas и другим родам бактерий. Задачи: 1. Выделение бактериофагов, активных в отношении Pseudomonas fluorescens. 2. Изучение морфологических признаков негативных 48 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии колоний бактериофага. 3. Исследование видовой и родовой специфичности выделенных бактериофагов. 4. Установление литической активности выделенных бактериофагов. Объект исследования В качестве источников для выделения бактериофагов из окружающей среды использовались образцы воды из источников: Черное море(в близи железнодорожной станции Лоо и р.Свияга в черте города Ульяновска. При выделении бактериофагов в качестве индикаторных бактериальных культур использовались полевой штамм Pseudomonas fluorescens, полученные из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарносанитарной экспертизы Ульяновской ГСХА им. П.А. Столыпина. Для определения видовой и родовой специфичности выделенных бактериофагов использовали культуры бактерий следующих видов: Aeromonas sobria, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Serratia marcescens. Материалы: ГРМ-бульон (производства ГНЦ ПМБ, п. Оболенск), агар бактериологический (производства ГНЦ ПМБ, п. Оболенск), дистиллированная вода, физиологический раствор хлорида натрия(0.9%) стандартный набор посуды для микробиологических исследований. Оборудование: Термостат лабораторный ТС-180, центрифуга лабораторная MULTI CENTRIFUGE CM 6 M, мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм (Millipore - Millivac). Методы: Выделение бактериофагов, активных в отношении Pseudomonas fluorescens, проводили методом накопления по схемам, описанным в работах Викторова Д.А. [1,2], Васильева С.Н. [1,2], и оптимизированным нами с учётом биологических особенностей Pseudomonas fluorescens и их бактериофагов. В 2 колбы на 200 мл с 50 мл стерильного концентрированного (концентрация бульона увеличена в два раза) мясопептонного бульона добавлялось по 50 мл исследуемых образцов воды, взятых из различных источников. В каждую из колб добавлялось по 0,5 мл суточных индикаторных культур полевых штаммов бактерии Pseudomonas fluorescens после чего полученная смесь перемешивалась и помещалась в термостат на 24 часа при 27 °С. После инкубации из полученной в колбах суспензии отбиралось по 10 мл бульона в стерильные пластиковые пробирки для центрифугирования. Отобранные образцы центрифугировались 20 минут при 3000 об/мин (700 g). По окончанию центрифугирования надосадочная жидкость фильтровалась через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, после чего фильтрат помечался в стерильные пробирки для хранения и дальнейших исследований. Определение наличия фагов, активных в отношении бактерий Pseudomonas fluorescens и определение внутри родовой и межродовой активности бактериофагов проводили методом спот-теста [2,3]. Для этого на чашки Петри, засеянные суточной культурой следующих бактериальных культур: Aeromonas sobria, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Serratia marcescens и подсушенные в термостате в течение 20 минут при 37°С по каплям пипеткой наносился 49 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии исследуемый фильтрат. После чего чашки Петри помечались в термостат на 24 часа при температуре 27 °С. Литическую активность бактериофагов определяли по методу Грациа. Результаты исследований В результате исследования проб воды на наличие в них бактериофагов, активных по отношению к индикаторным штаммам Pseudomonas fluorescens, было выделено 1 штамм бактериофаг. Морфология негативных колоний выделенного бактериофага Pseudomonas fluorescens. Негативные колонии диаметром от 1мм до1,5мм с прозрачным центром и зоной вторичного лизиса по периферии. В ходе исследования межвидовой активности было установлено, что выделенные бактрериофог не активен по отношению и бактериям Aeromonas sobria, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Serratia marcescens. При изучение литической активности был установлен титр полученного нами бактериофага, который составил 3,0(±0,3)х106 БОЕ/МЛ3. Выводы: 1. В результате проведённых исследований нами был выделен 1штамм бактериофага, активного по отношению к Pseudomonas fluorescens. 2. Установлена литическая активность бактериофагов по методу Грациа, составившая 3,0(±0,3)х106 БОЕ/МЛ3 3. Изучена морфология негативных колоний бактериофага. 4. Установлено, что выделенный бактриофаг обладают видовой специфичностью по отношению к Pseudomonas fluorescens. Библиографический список 1. 2. 3. 4. 5. Васильев, Д.А. Выделение бактериофагов бактерий Pseudomonas putida и их селекция в целях создания биопрепарата для диагностики псевдомоноза рыб / Д.А. Васильев, Д.А. Викторов, И.И. Богданов // Естественные и технические науки. – 2011. – №2(52). – С. 79-82. Викторов, Д.А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Pseudomonas fluorescens/ Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Д.А. Васильев // Ветеринария и кормление. – Москва: «ВЕТКОРМ», 2012. – №5. – С. 8-9. Викторов Д.А. Усовершенствование методов диагностики псевдомонозов рыб / Д.А. Викторов, Т.А. Гринева, Д.А. Васильев, А.М. Артамонов, С.Н. Золотухин//Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: Материалы международной научно-практической конференции, Ульяновск, ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», 23-25 апреля 2013. – Т. 1. – Ульяновск, 2013. – С. 162-164. Артамонов А.М. Спектр литической активности и специфичность бактериофагов Pseudomonas fluorescens / А.М. Артамонов, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы V Международной научно-практической конференции, Ульяновск, 11 июня 2013. – Т. 2. – С. 3-6. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова 50 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 6. Васильев Д.А. Листериозные бактериофаги / Д.А.Васильев, Е.Н. Ковалева, С.Н. Золотухин / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. Ульяновск, 2013. 7. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 8. Васильева Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. 9. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. 10. Васильев Д.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, А.И. Калдыркаев, В.А. Макеев, И.Г. Швиденко / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 3 (23). С. 52-56. MOLECULAR GENETIC ANALYSIS OF THE GENOME OF THE NEW BACTERIOPHAGES Gorshkov I. G. Keywords: Bacteriophages, Pseudomonas fluorescens, microbiology. The studies of objects in the environment (water sources) was isolated strains of bacteriophage specific for Pseudomonas fluorescens, investigated its basic biological properties: negative colonies morphology and intrapartum interspecies specificity, lytic activity. УДК 619:616.98 ИЗУЧЕНИЕ МОРФОЛОГИИ НЕГАТИВНЫХ КОЛОНИЙ ВЫДЕЛЕННЫХ БАКТЕРИОФАГОВ PROTEUS VULGARIS И PROTEUS MIRABILIS Шкаликова М.В., 4 курс факультета ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., доцент Феоктистова Н.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: морфология, бактериофаги, негативные колонии, штаммы фагов, бактерии рода Proteus. Поиск новых экологически чистых препаратов - альтернатив антибиотикам – это серьезная проблема для современной медицины. Использование бактериофагов, обладающих лизирующим действием на 51 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии конкретный возбудитель заболевания – это медицинская панацея в терапии. Бактериофаги экологически чисты, просты в применении и не имеют, в отличие от антибиотиков, побочных эффектов. Целью наших исследований является изучение морфологии негативных колоний выделенных бактериофагов Proteus vulgaris и Proteus mirabilis. Материалы и методы: штаммы фагов бактерий рода Proteus, выделенные из фекалий молодняка сельскохозяйственных животных и сточных вод животноводческих хозяйств Ульяновской и Самарской областей. Питательные среды и реактивы: мясопептонный бульон, мясопептонный агар, 0,04% спиртовый раствор генцианвиолета. Оборудование: холодильники бытовые, ультратермостаты УТ-15У4,2; термостаты ТС-80М-2, центрифуги лабораторные ОПн-8УХЛ4,2 и ЦЛС-3, весы чашечные с разновесами, автоклав, шуттель-аппарат, сушильный шкаф, водяная баня, пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3; флаконы емкостью 50, 100, 200 см3; стекла предметные, чашки Петри, пробирки. Морфология негативных колоний Морфологию негативных колоний выделенных бактериофагов изучали при посевах фагов методом агаровых слоев по Грациа. Накануне опыта по чашкам разливали 1,5 % мясопептонный агар, куда добавляли 0,04 % спиртовый ратсвор генцианвиолета (0,1 мл на каждые 100 мл). Перед использованием чашки подсушивали в термостате 15-20 минут. Индикаторные выращивались в условиях термостата в течение 18-20 часов при 37 0С на мясо-пептонном бульоне. Стерильно подготовленный 0,7 % мясопептонный агар, разлитый в пробирки по 2,5 мл, расплавляли и остужали до 46-48 0С. Исследуемый бактериофаг в количестве 1,0 мл помещали в 2,5 мл 0,7 % мясопептонного агара, туда же вносили 0,2 мл индикаторной культуры. Все быстро и тщательно перемешивали вращением пробирки в ладонях и выливали на поверхность 1,5 % МПА. Смесь осторожными движениями распределяли по поверхности мясопептонного агара, чашки оставляли на горизонтальной поверхности на 30 минут до полного застывания агара, затем инкубировали в термостате при 37 0С в течение 16-20 часов. Учет проводили через 16 часов инкубации при температуре 37 0С. Рис. 1. Негативные колонии фага П-16 УГСХА Рис. 2. Негативные колонии фага П-261 УГСХА 52 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Таблица 1 – Морфология негативных колоний выделенных фагов бактерий рода Proteus 1. Бактериальная культура Proteus / название фага. P. vulgaris 261 / П-1 УГСХА 2. P. vulgaris 3 / П-2 УГСХА 3. 6. P. mirabilis 4/2 3“П” / П-3 УГСХА P. vulgaris 82/98 / П-4 УГСХА P. vulgaris 85/98 / П-5 УГСХА P. mirabilis 1 / П-6 УГСХА 7. P. vulgaris 7 / П-7 УГСХА 8. P.vulgaris 55 А / П-8 УГСХА 9. P.vulgaris 3 П №3 / П-9 УГСХА P. mirabilis 31/32 / П-10 УГСХА P. vulgaris 10 / П-11 УГСХА № 4. 5. 10. 11. 12. 13. P .vulgaris 55 А / П-12 УГСХА P. vulgaris 261/ П-261 УГСХА 14. P .vulgaris 3 / П-14 УГСХА 15. 16. P. mirabilis 95/98 / П-15 УГСХА P. vulgaris 3 / П-16 УГСХА 17. P. vulgaris 1 / П-17 УГСХА 18. P. vulgaris 1 / П-18 УГСХА 19. P. mirabilis 4/2 3 П / П-19 УГСХА P. vulgaris 6 / П-20 УГСХА 20. 21. P. vulgaris 85/98 / П-21 УГСХА 22. P. vulgaris 2 / П-22 УГСХА Наличие негативных колоний или лизиса Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 2,0-2,5 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 3,0-4,0 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,0 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,0-1,5 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 0,5-1,0 мм в диаметре Полупрозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,0-1,3 мм в диаметре Полупрозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,0-1,5 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,0-1,5 мм в диаметре Полупрозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,0 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,0-1,5 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,5-2,0 мм в диаметре Полупрозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,0-1,5 мм в диаметре Полупрозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, с зоной неполного лизиса по периферии, 6,0-8,0 мм в диаметре Полупрозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,0 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,5 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 2,0-3,0 мм в диаметре Полупрозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,5 мм в диаметре Полупрозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1.0-1,5 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, 1,0-1,5 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, с зоной неполного лизиса по периферии, 2,0-2,5 мм в диаметре Прозрачные негативные колонии, округлой формы с ровными краями, с зоной неполного лизиса по периферии, 2,5-3,0 мм в диаметре Полупрозрачные негативные колонии, с ровными краями, 2,0-2,5 мм 53 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Заключение: изучение морфологии негативных колоний выделенных бактериофагов показало, что их можно сгруппировать в пять типов негативных колоний (Бабков, 1973): 1 тип: прозрачные негативные колонии округлой формы, 1,0-1,5 мм в диаметре (фаги П-3, П-4, П-5, П-8, П-10, П-15, П-19 серии УГСХА); 2 тип: прозрачные негативные колонии округлой формы, 2,0-4,0 мм в диаметре (фаги П-1, П-2, П-11, П-16 серии УГСХА) (рис. 1); 3 тип: мутные негативные колонии округлой формы, 1,0-2,5 мм в диаметре (фаги П-9, П-12, П-14, П-17, П-18, П-22 серии УГСХА); 4 тип: мутные негативные колонии округлой формы с выраженным вторичным ростом бактерий в центре и ореолом по периферии, 6,0-8,0 мм в диаметре (фаг П-261 серии УГСХА) (рис. 2); 5 тип: прозрачные негативные колонии округлой формы с ровными краями и ореолом по периферии, 2,0-3,0 мм в диаметре (фаги П-20, П-21 серии УГСХА). Библиографический список 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Барт, Н.Г. Бактериофаги Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения», Ульяновск, 2009. – с.140-146. Барт, Н.Г. Биологические свойства бактериофагов Providencia Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», Ульяновск, 2009. – C.6-8. Барт, Н.Г. Спектр литической активности бактериофагов Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы V Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». – Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2013. – Т.II. – C.12-16. Викторов, Д.А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Pseudomonas fluorescens / Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Д.А. Васильев // Ветеринария и кормление. – Москва: «ВЕТКОРМ», 2012. – №5. – С. 8-9. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов диагностики псевдомонозов рыб / Д.А. Викторов, Т.А. Гринева, Д.А. Васильев, А.М. Артамонов, С.Н. Золотухин // Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: Материалы международной научнопрактической конференции, Ульяновск, ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», 23-25 апреля 2013. – Т. 1. – Ульяновск, 2013. – С. 162-164. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas putida // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Саратов. – 2011. – 22 с. Васильев, Д.А. Выделение и идентификация Bordetella bronchiseptica от животных / Д.А. Васильев, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Васильева // Естественные и технические науки. – 2010. - № 5. – С. 233-235. Васильев, Д.А. Изучение основных биологических свойств бактериофагов Bordetella bronchiseptica, выделенных методом индукции / Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, С.Н. Золотухин, И.Н. Хайруллин, Ю.Б. Васильева, А.Г. Шестаков // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - №1 (13). - С. 59–62. 54 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. Выделение бактериофагов Listeria monocytogenes методом индукции/ Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, С.Н, Золотухин, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов, И.Г. Швиденко // Вестник УГСХА. – 2013. - №1(21) – С. 45-49 Выделение и характеристика бактериофагов Listeria monocytogenes / Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов// Материалы международной научнопрактической конференции "Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности". - Ульяновск: Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина, 2013,т.2 - С. 130-133 Изучение биологических свойств бактериофагов Listeria / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, Д.А. Васильев, М.А. Имамов // Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве: Материалы Международной научно-практической конференции. – Саратов, 2013. – С. 125 – 127. Перспективы применения бактериофагов Listeria monocytogenes / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов [и др.] // Животноводство России в условиях ВТО: от фундаментальных исследований до высокопродуктивного производства: Материалы Международной научно-практической конференции молодых ученых, 9-11 апреля 2013. – Орел: Изд-во Орел ГАУ, 2013. – С. 181 – 184. Фагоиндикация бактерий рода Listeria с целью мониторинга почвенных экосистем / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, Д.А. Васильев [и др.] // Биодиагностика в экологической оценке почв и сопредельных сред: Тезисы докладов Международной конференции, Москва 4-6 февраля 2013 г. - М.: Бином, 2013. – С. 97. Васильева, Ю.Б. Конструирование биопрепаратов для лабораторной диагностики бордетеллёзной инфекции // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С. 25-29. Васильева, Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. Васильева, Ю.Б. Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики бордетеллёза // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.science-education.ru/110-9751. Васильева, Ю.Б. Особенности биологии бактерий вида Bordetella bronchiseptica // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.scienceeducation.ru/110-9927. Васильева, Ю.Б. Новая тест-система идентификации возбудителя бордетеллёза – Bordetella bronchiseptica // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10. – Ч.1. Васильева, Ю.Б. Разработка методов детекции бактерий Bordetella bronchiseptica // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С. 46-51. Васильева, Ю.Б. Фаги бактерий Bordetella bronchiseptica: свойства и перспективы применения // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №3 (23).- C. 44-49. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 55 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 23. Васильев Д.А. Разработка методов фагоидентификации и фагодетекции бактерий Pseudomonas fluorescens / Д.А. Васильев, Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Т.А. Гринева, Е.А. Ляшенко / Фундаментальные исследования. 2014. № 5-1. С. 55-58. 24. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. STUDYING OF MORPHOLOGY OF NEGATIVE COLONIES OF THE ALLOCATED BACTERIOPHAGES OF PROTEUS VULGARIS AND PROTEUS MIRABILIS Shkalikova M. V., Feoktistova N. A. Keywords: morphology, bacteriophages, negative colonies, strains of phages, sort Proteus bacteria. Search of new environmentally friendly preparations - alternatives to antibiotics is a serious problem for modern medicine. Use of the bacteriophages possessing liziruyushchy action on the concrete causative agent of a disease is a medical panacea in therapy. Bacteriophages are ecologically pure, simple in application and have no, unlike antibiotics, side effects. УДК 619:616.98 ИЗУЧЕНИЕ СПЕКТРА ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ВЫДЕЛЕННЫХ ПРОТЕЙНЫХ БАКТЕРИОФАГОВ Шкаликова М.В., 4 курс, факультет ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., доцент Феоктистова Н.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: бактериофаги, протейный фаговый биопрепарат, спектр литической активности, бульонная культура. Создаваемый нами протейный фаговый биопрепарат будет лизировать только бактерии своего рода и будет абсолютно безопасен для других видов микроорганизмов, в отличие от традиционной формы лечения протейной инфекции при помощи антибиотиков. Целью наших исследований является изучение спектра литической активности выделенных бактериофагов Proteus vulgaris и Proteus mirabilis. Материалы и методы. В работе были использованы как гомологичные, так и гетерологичные штаммы бактерий. В качестве гомологичных бактерий использовали 40 штаммов бактерии рода Proteus. 14 музейных штаммов из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарносанитарной экспертизы Ульяновской ГСХА: P. mirabilis Тр.1 Культ., P. 56 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии mirabilis 95/98, P. mirabilis 31/82, P. mirabilis №14 3”П”, P. mirabilis 4/2 3“П”, P. mirabilis 31/32, P. mirabilis 523, P. mirabilis 491, P. vulgaris Куз.с/х Тр.1 сел, P. vulgaris Куз. с/х фекал., P. vulgaris 82/98, P. vulgaris 3”П” №3, P.vulgaris 85/98, P. vulgaris 55 А. 14 музейных штаммов из лаборатории санитарной микробиологии ВНИИВСГиЭ: 4 P. mirabilis 4, P. mirabilis Тр. 13, P. mirabilis “3П”, P. mirabilis 9, P. vulgaris Тр. 12, P. vulgaris Куз. Тр. 5, P. vulgaris 71, P. vulgaris 8, P. vulgaris 25, P. vulgaris 61, P. vulgaris 18, P. vulgaris 16, P. vulgaris 13, P. vulgaris 34. 12 штаммов выделены из объектов ветеринарного надзора и патологического материала: P. vulgaris 261, P. vulgaris 1, P. vulgaris 2, P. vulgaris 3, P. vulgaris 4, P. vulgaris 5, P. vulgaris 6, P. vulgaris 7, P. vulgaris 8, P. vulgaris 9, P. vulgaris 10, P. mirabilis 1. Изучение биологических свойств выделенных фагов бактерий рода Proteus. Спектр литической активности является одной из основных характеристик диагностического препарата фага. Определение спектра литической активности проводили методом нанесения фага на газон бактериальной культуры (Aдамс, 1961; Ганюшкин, 1988). Для изучения спектра литической активности селекционированных нами 22 изолятов фагов было использовано 12 полевых и 14 штаммов бактерий рода Proteus из музея кафедры микробиолгии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ Ульяновской ГСХА бактерий рода Proteus. На поверхность МПА в чашках Петри пастеровской пипеткой наносили 3-4 капли 18-ти часовой бульонной культуры исследуемых микроорганизмов. Затем равномерно распределяли по поверхности среды стерильным шпателем. Чашки ставили в термостат для подсушивания на 15-20 минут. Чашку делили бактериологическим карандашом на два сектора. На поверхность засеянной среды в первом секторе пастеровской пипеткой легким прикосновением капли наносили исследуемый фаг и наклоняли, чтобы капля стекла, на второй сектор аналогичным образом наносили МПБ (для контроля), затем инкубировали при температуре 37 0С, оценку результатов проводили через 16 часов. Результаты исследований представлены в таблице 1. Заключение: в результате исследований изучено чрезвычайно важное биологическое свойство выделенных протейных фагов – спектр литической активности. Полученные результаты показали, что бактериофагов, лизирующих только один штамм, нами обнаружено не было, а максимальное количество штаммов (по 17) лизировали 2 протейных фага П-16 УГСХА и П-261 УГСХА. Процент лизиса фагов составил 86,5 %. Все выделенные фаги обладали перекрестным лизисом, в ходе исследований нам не удалось выделить протейные бактериофаги, обладающие видовой принадлежностью. Учитывая вышеизложенные результаты, фаги П-16 УГСХА и П-261 УГСХА могут быть выбраны для конструирования диагностического препарата. 57 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Таблица 1 – Спектр литической активности выделенных фагов бактерий рода Proteus № п/п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 Фаги П-1 УГСХА П-2 УГСХА П-3 УГСХА П-4 УГСХА П-5 УГСХА П-6 УГСХА П-7 УГСХА П-8 УГСХА П-9 УГСХА П-10 УГСХА П-11 УГСХА П-12 УГСХА П-261 УГСХА П-14 УГСХА П-15 УГСХА П-16 УГСХА П-17 УГСХА П-18 УГСХА П-19 УГСХА П-20 УГСХА П-21 УГСХА П-22 УГСХА Процент лизиса Кол-во испытанных штаммов 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 Из них чувствительны к фагу 13 5 5 8 13 12 7 10 8 9 11 12 17 8 10 17 6 9 3 7 8 10 Процент лизируемых штаммов 50 19 19 31 50 45 30 38 31 35 42 46 65 31 38 65 23 35 12 30 31 38 86,5 Рис. 1. Зона лизиса на газоне культуры P. vulgaris 261 при нанесении фага П-261 УГСХА Библиографический список 1. Барт, Н.Г. Бактериофаги Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения», Ульяновск, 2009. – с.140-146. 58 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Барт, Н.Г. Биологические свойства бактериофагов Providencia Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», Ульяновск, 2009. – C.6-8. Барт, Н.Г. Спектр литической активности бактериофагов Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы V Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». – Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2013. – Т.II. – C.12-16. Викторов, Д.А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Pseudomonas fluorescens / Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Д.А. Васильев // Ветеринария и кормление. – Москва: «ВЕТКОРМ», 2012. – №5. – С. 8-9. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов диагностики псевдомонозов рыб / Д.А. Викторов, Т.А. Гринева, Д.А. Васильев, А.М. Артамонов, С.Н. Золотухин // Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: Материалы международной научнопрактической конференции, Ульяновск, ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», 23-25 апреля 2013. – Т. 1. – Ульяновск, 2013. – С. 162-164. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas putida // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Саратов. – 2011. – 22 с. Васильев, Д.А. Выделение и идентификация Bordetella bronchiseptica от животных / Д.А. Васильев, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Васильева // Естественные и технические науки. – 2010. - № 5. – С. 233-235. Васильев, Д.А. Изучение основных биологических свойств бактериофагов Bordetella bronchiseptica, выделенных методом индукции / Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, С.Н. Золотухин, И.Н. Хайруллин, Ю.Б. Васильева, А.Г. Шестаков // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - №1 (13). - С. 59–62. Выделение бактериофагов Listeria monocytogenes методом индукции/ Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, С.Н, Золотухин, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов, И.Г. Швиденко // Вестник УГСХА. – 2013. - №1(21) – С. 45-49 Выделение и характеристика бактериофагов Listeria monocytogenes / Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов// Материалы международной научнопрактической конференции "Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности". - Ульяновск: Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина, 2013,т.2 - С. 130-133 Изучение биологических свойств бактериофагов Listeria / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, Д.А. Васильев, М.А. Имамов // Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве: Материалы Международной научно-практической конференции. – Саратов, 2013. – С. 125 – 127. Перспективы применения бактериофагов Listeria monocytogenes / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов [и др.] // Животноводство России в условиях ВТО: от фундаментальных исследований до высокопродуктивного производства: Материалы Международной научно-практической конференции молодых ученых, 9-11 апреля 2013. – Орел: Изд-во Орел ГАУ, 2013. – С. 181 – 184. Фагоиндикация бактерий рода Listeria с целью мониторинга почвенных экосистем / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, Д.А. Васильев [и др.] // Биодиагностика в экологической оценке почв и сопредельных сред: Тезисы докладов Международной конференции, Москва 4-6 февраля 2013 г. - М.: Бином, 2013. – С. 97. Васильева, Ю.Б. Конструирование биопрепаратов для лабораторной диагностики бордетеллёзной инфекции // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С. 25-29. 59 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 15. Васильева, Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. 16. Васильева, Ю.Б. Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики бордетеллёза // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.science-education.ru/110-9751. 17. Васильева, Ю.Б. Особенности биологии бактерий вида Bordetella bronchiseptica // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.scienceeducation.ru/110-9927. 18. Васильева, Ю.Б. Новая тест-система идентификации возбудителя бордетеллёза – Bordetella bronchiseptica // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10. – Ч.1. 19. Васильева, Ю.Б. Разработка методов детекции бактерий Bordetella bronchiseptica // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С. 46-51. 20. Васильева, Ю.Б. Фаги бактерий Bordetella bronchiseptica: свойства и перспективы применения // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №3 (23).- C. 44-49. 21. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 22. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 23. Васильев Д.А. Разработка методов фагоидентификации и фагодетекции бактерий Pseudomonas fluorescens / Д.А. Васильев, Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Т.А. Гринева, Е.А. Ляшенко / Фундаментальные исследования. 2014. № 5-1. С. 55-58. 24. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. STUDYING OF THE RANGE OF LYTIC ACTIVITY OF THE ALLOCATED BACTERIOPHAGES OF PROTEUS VULGARIS AND PROTEUS MIRABILIS Shkalikova M. V., Feoktistova N. A. Keywords: bacteriophages, proteyny fagovy biological product, range of lytic activity, bulyonny culture. The proteyny fagovy biological product created by us will be лизировать only bacteria some kind of and will be absolutely safe for other species of microorganisms, unlike a traditional form of treatment of a proteyny infection by means of antibiotics. 60 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 619:616.98 СЕЛЕКЦИЯ ВЫДЕЛЕННЫХ БАКТЕРИОФАГОВ PROTEUS VULGARIS И PROTEUS MIRABILIS И ИЗУЧЕНИЕ ИХ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ Шкаликова М.В., 4 курс, факультет ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., доцент Феоктистова Н.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: бактериофаги, литическая активность, селекция, метод Аппельмана и Грация, индикаторная культура. Создание экологически чистого препарата точечного действия для лечения и профилактики протейной инфекции – это чрезвычайно актуальная проблема современной фармации. Бактерии рода Proteus являются возбудителями внутрибольничных инфекций, энтеритов у детей и взрослых людей, способны вызывать воспалительные процессы мочевыводящих путей, быть причиной послеоперационных и ожоговых осложнений, сепсиса, дисбактериоза, токсикоинфекций и других заболеваний. Целью наших исследований является селекция выделенных бактериофагов Proteus vulgaris и Proteus mirabilis и изучение их литической активности. Материалы и методы: штаммы фагов бактерий рода Proteus, выделенные из фекалий молодняка сельскохозяйственных животных и сточных вод животноводческих хозяйств Ульяновской и Самарской областей. Питательные среды и реактивы: МПА, МПБ, 0,04% спиртовый раствор генцианвиолета. Оборудование: холодильники бытовые, ультратермостаты УТ-15У4,2; термостаты ТС-80М-2, центрифуги лабораторные ОПн-8УХЛ4,2 и ЦЛС-3, весы чашечные с разновесами, автоклав, шуттель-аппарат, сушильный шкаф, водяная баня, пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3; флаконы емкостью 50, 100, 200 см3; стекла предметные, чашки Петри, пробирки. Селекцию бактериофагов и повышение их литической активности проводили методом пассирования фага на индикаторной культуре с периодической отвивкой типичных негативных колоний по методике, описанной И.М. Габриловичем (1992), С.Н. Золотухиным (1994). Для этого, исследуемый бактериофаг засевали по методу агаровых слоев по Грациа, используя разведения 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10,чтобы на питательной среде сформировались отдельные негативные колонии. После 16-часового культивирования в термостате одну негативную колонию, расположенную от других не менее чем в 10 мм, отвивали бактериологической петлёй на мясопептонный бульон, туда же вносили индикаторную культуру Proteus в количестве 0,2 мл. Одновременно ставился контроль: мясопептонный бульон, засеянный индикаторной культурой Proteus в количестве 0,2 мл. Пробирки культивировали в термостате при 37 0С в течение 4 часов. Полученный 61 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии фаголизат прогревали в водяной бане при 58-60 0С в течение 30 минут и исследовали методом агаровых слоев по Грациа, затем отбирали негативную колонию идентичную исходной, с которой вновь проводили такую же операцию. Литическая активность выделенных протейных бактериофагов Литическая активность бактериофага оценивается по его способности вызывать лизис бактериальной культуры в жидких или плотных питательных средах и выражает это тем максимальным разведением, в котором испытуемый бактериофаг проявил свое литическое действие. Более точным методом оценки литической активности бактериофага является определение количества активных корпускул фага в единице объема. Однако этот показатель относительный, так как активность фага зависит от различных условий, основными из которых являются биологические особенности бактериальной клетки, которые в свою очередь зависят от физических свойств среды, ее химического состава, окружающей температуры и так далее. Поэтому активность фага всегда определяется в конкретных, стандартных условиях. Культуры бактерий Proteus для определения литической активности бактериофагов, выращивали на стандартном мясопептонном бульоне в течение 16-18 часов. Литическую активность селекционированных бактериофагов определяли по методу Аппельмана и Грация (Ревенко, 1978). Определение литической активности фага по методу Аппельмана: в ряд пробирок из нейтрального стекла одинакового диаметра наливали по 4,5 мл бульона. В первую пробирку вносили 0,5 мл исследуемого протейного фага. Затем делали последовательные разведения, перенося отдельными пипетками из из пробирки в пробирку по 0,5 мл бактериофага. Использовали 10 пробирок. Из последней пробирки 0,5 мл выливали в дезинфицирующий раствор, затем во все пробирки вносили по 0,2 мл 18-часовой индикаторной культуры. 11 и 12 пробирки являются контрольными, в первой из них находится МПБ и культура (без фага), во второй - один МПБ (контроль на стерильность). Все 12 пробирок помещали в термостат при 37 0С на 18 часов. Титр фага устанавливали по последней, прозрачной пробирке ряда и выражали разведением фага. Также литическую активность определяли методом агаровых слоевпо Грациа. Результаты исследований представлены в таблице 1. Заключение: согласно данных таблицы 1, можно сделать вывод о том, что выделенные протейные бактериофаги обладали разной литической активностью в диапазоне от 10–5 до 10-8, оценивая ее по Аппельману и от 2,1х106 до 2,0х109 (по Грациа). Максимальные показатели литической активности, определяемые по методу Аппельмана, составили 10-8 у фагов П-16 УГСХА и П-261 УГСХА, методом агаровых слоев (по Грациа) максимальные показатели были также у фагов П-16 УГСХА и П-261 УГСХА - она составила у фага П-16 УГСХА 2,0х109 и у фага П-261 УГСХА 1,8х109. Учитывая вышеизложенные результаты, фаги П-16 УГСХА и П-261 УГСХА могут быть выбраны для конструирования диагностического препарата. 62 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Таблица 1 – Литическая активность протейных бактериофагов по Аппельману и Грациа № п/п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 Название бактериофага П-1 УГСХА П-2 УГСХА П-3 УГСХА П-4 УГСХА П-5 УГСХА П-6 УГСХА П-7 УГСХА П-8 УГСХА П-9 УГСХА П-10 УГСХА П-11 УГСХА П-12 УГСХА П-261 УГСХА П-14 УГСХА П-15 УГСХА П-16 УГСХА П-17 УГСХА П-18 УГСХА П-19 УГСХА П-20 УГСХА П-21 УГСХА П-22 УГСХА Титр по Аппельману Титр по Грациа 10-6 10-7 10-6 10-7 10-6 10-7 10-6 10-5 10-6 10-7 10-7 10-6 10-8 10-7 10-6 10-8 10-6 10-7 10-6 10-6 10-6 10-7 3,0х107 2,0х108 3,6х107 2,4х108 4,0х107 1,0х108 6,0х107 2,1х106 1,8х107 5,0х108 6,0х108 5,0х107 1,8х109 1,4х108 2,0х107 2,0х109 2,4х107 1,4х108 2,0х107 3,2х107 5,0х107 2,7х108 Библиографический список. 1. 2. 3. 4. 5. Барт, Н.Г. Бактериофаги Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения», Ульяновск, 2009. – с.140-146. Барт, Н.Г. Биологические свойства бактериофагов Providencia Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», Ульяновск, 2009. – C.6-8. Барт, Н.Г. Спектр литической активности бактериофагов Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы V Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». – Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2013. – Т.II. – C.12-16. Викторов, Д.А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Pseudomonas fluorescens / Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Д.А. Васильев // Ветеринария и кормление. – Москва: «ВЕТКОРМ», 2012. – №5. – С. 8-9. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов диагностики псевдомонозов рыб / Д.А. Викторов, Т.А. Гринева, Д.А. Васильев, А.М. Артамонов, С.Н. Золотухин // Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: Материалы международной научнопрактической конференции, Ульяновск, ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», 23-25 апреля 2013. – Т. 1. – Ульяновск, 2013. – С. 162-164. 63 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas putida // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Саратов. – 2011. – 22 с. Васильев, Д.А. Выделение и идентификация Bordetella bronchiseptica от животных / Д.А. Васильев, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Васильева // Естественные и технические науки. – 2010. - № 5. – С. 233-235. Васильев, Д.А. Изучение основных биологических свойств бактериофагов Bordetella bronchiseptica, выделенных методом индукции / Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, С.Н. Золотухин, И.Н. Хайруллин, Ю.Б. Васильева, А.Г. Шестаков // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - №1 (13). - С. 59–62. Выделение бактериофагов Listeria monocytogenes методом индукции/ Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, С.Н, Золотухин, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов, И.Г. Швиденко // Вестник УГСХА. – 2013. - №1(21) – С. 45-49 Выделение и характеристика бактериофагов Listeria monocytogenes / Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов// Материалы международной научнопрактической конференции "Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности". - Ульяновск: Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина, 2013,т.2 - С. 130-133 Изучение биологических свойств бактериофагов Listeria / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, Д.А. Васильев, М.А. Имамов // Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве: Материалы Международной научно-практической конференции. – Саратов, 2013. – С. 125 – 127. Перспективы применения бактериофагов Listeria monocytogenes / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов [и др.] // Животноводство России в условиях ВТО: от фундаментальных исследований до высокопродуктивного производства: Материалы Международной научно-практической конференции молодых ученых, 9-11 апреля 2013. – Орел: Изд-во Орел ГАУ, 2013. – С. 181 – 184. Фагоиндикация бактерий рода Listeria с целью мониторинга почвенных экосистем / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, Д.А. Васильев [и др.] // Биодиагностика в экологической оценке почв и сопредельных сред: Тезисы докладов Международной конференции, Москва 4-6 февраля 2013 г. - М.: Бином, 2013. – С. 97. Васильева, Ю.Б. Конструирование биопрепаратов для лабораторной диагностики бордетеллёзной инфекции // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С. 25-29. Васильева, Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. Васильева, Ю.Б. Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики бордетеллёза // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.science-education.ru/110-9751. Васильева, Ю.Б. Особенности биологии бактерий вида Bordetella bronchiseptica // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.scienceeducation.ru/110-9927. Васильева, Ю.Б. Новая тест-система идентификации возбудителя бордетеллёза – Bordetella bronchiseptica // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10. – Ч.1. Васильева, Ю.Б. Разработка методов детекции бактерий Bordetella bronchiseptica // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С. 46-51. Васильева, Ю.Б. Фаги бактерий Bordetella bronchiseptica: свойства и перспективы применения // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №3 (23).- C. 44-49. 64 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 21. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 22. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 23. Васильев Д.А. Разработка методов фагоидентификации и фагодетекции бактерий Pseudomonas fluorescens / Д.А. Васильев, Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Т.А. Гринева, Е.А. Ляшенко / Фундаментальные исследования. 2014. № 5-1. С. 55-58. 24. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. SELECTION OF THE ALLOCATED BACTERIOPHAGES OF PROTEUS VULGARIS AND PROTEUS MIRABILIS AND STUDYING OF THEIR LYTIC ACTIVITY Shkalikova M. V., Feoktistova N. A. Keywords: bacteriophages, lytic activity, selection, method Appelmana and Grazia, indicator culture. Creation of an environmentally friendly preparation of dot action for treatment and prevention of a proteyny infection is an extremely actual problem of modern pharmacy. Bacteria of the sort Proteus are causative agents of intrahospital infections, энтеритов at children and adults, are capable to cause inflammatory processes of urinary ways, to be the cause of postoperative and burn complications, sepsis, dysbacteriosis, toksikoinfektion and other diseases. УДК 619: 579.63 ИССЛЕДОВАНИЕ ВНУТРИБОЛЬНИЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ НА ПРИМЕРЕ ХИРУРГИЧЕСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ Бурова Н.С. 3 курс факультет ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., Е.Н. Ковалева, д.б.н., профессор Д.А. Васильев ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: внутрибольничные инфекции, госпитальный штамм, смывы, питательные среды. Работа посвящена обнаружению штаммов, вызывающих внутрибольничные инфекции на примере хирургического отделения. 65 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Санитарно-микробиологический контроль лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ) проводят с целью предупреждения внутрибольничных инфекций (ВБИ) и ликвидации эпидемиологически опасных ситуаций. [1] Внутрибольничные инфекции - согласно определению ВОЗ, это любые клинически выраженные заболевания микробного происхождения, поражающие больного в результате его госпитализации или посещения лечебного учреждения с целью лечения, а также больничный персонал в силу осуществления им деятельности, независимо от того, проявляются или не проявляются симптомы этого заболевания во время нахождения данных лиц в стационаре. Инфекция считается внутрибольничной, если она впервые проявляется через 48 часов или более после нахождения в больнице, при условии отсутствия клинических проявлений этих инфекций в момент поступления и исключения вероятности инкубационного периода.[2] Спектр возбудителей внутрибольничных инфекции охватывает вирусы, бактерии, грибы и простейших, представленных наиболее вирулентными «госпитальными» штаммами. Госпитальный штамм - это штамм, который в процессе циркуляции адаптировался к условиям стационара, т.е. приобрел большие возможности к паразитированию, специфичному для больных данного стационара, а именно, вирулентность, устойчивость к неблагоприятным внешним факторам и способность вызывать групповые внутрибольничные случаи заболеваний. Ежегодно их число увеличивается, преимущественно за счёт условнопатогенных микроорганизмов. Основные возбудители бактериальных инфекций – стафилококки, энтерококки, пневмококки, энтеробактерии, псевдомонады и др. Ведущую роль играют стафилококки (до 60% всех случаев внутрибольничных инфекции), грамотрицательные бактерии, респираторные вирусы и грибы рода Candida. Некоторые из микроорганизмов (например, стафилококки, эшерихии, клебсиеллы, синегнойная палочка и др.) вызывают разные клинические формы ВБИ, другие выделяются только при определенных клинических состояниях (анаэробные микроорганизмы, например, встречаются преимущественно как возбудители ВБИ при глубоких инфекциях мягких тканей или при интраабдоминальных хирургических инфекциях). Некоторые возбудители поражают преимущественно определенные группы пациентов (парвовирус B19, вирусы кори, краснухи, ветряной оспы и эпидемического паротита в педиатрической практике; хламидии, микоплазмы, стрептококки группы В у новорожденных и рожениц и т.п.). Различия в экологических свойствах возбудителей ВБИ, среди которых присутствуют все возможные варианты (от облигатных внутриклеточных паразитов до свободноживущих микроорганизмов) также могут быть весьма существенными, определяя, в свою очередь, соответствующие особенности механизма развития эпидемического процесса в ЛПУ. В основе группировки возбудителей ВБИ лежат эпидемиологические аспекты. Первая группа – патогенные агенты - возбудители традиционных 66 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии инфекций, не имеют в госпитальных условиях специфических черт. Они получают, как правило, большое распространение в стационарах в связи с высокой концентрацией и тесным общением в лечебном учреждении госпитализированных больных. Не исключено, что в какой-то степени сказывается и пониженная общая резистентность организма. Вторая группа – это облигатные паразиты, но их патогенность более всего проявляется в госпитальных условиях. Связано это в первую очередь с пониженной сопротивляемостью организма госпитализированных больных и в определенной степени – с реализацией путей передачи, которые имеют определенный специфический характер. В таких условиях возможно формирование госпитальных штаммов. Третья группа - условно-патогенные микроорганизмы (УПМ). Возникновение и распространение заболеваний, вызванных УПМ, целиком и полностью определяются причинами, которые действуют лишь в госпитальных условиях. Циркулирующие в стационаре возбудители ВБИ постепенно формируют так называемые госпитальные штаммы, т.е. штаммы наиболее эффективно адаптированные к местным особенностям того или иного отделения.[3] Факторы, способствующие возникновению внутрибольничной инфекции: недооценка эпидемической опасности внутрибольничных источников инфекции и риска заражения при контакте с пациентом; перегрузка ЛПУ; наличие не выявленных носителей внутрибольничных штаммов среди медперсонала и пациентов; нарушение медперсоналом правил асептики и антисептики, личной гигиены; несвоевременное проведение текущей и заключительной дезинфекции, нарушение режима уборки; недостаточное оснащение ЛПУ дезинфекционными средствами; нарушение режима дезинфекции и стерилизации медицинских инструментов, аппаратов, приборов и т. д.; устаревшее оборудование; неудовлетворительное состояние пищеблоков, водоснабжения; отсутствие фильтрационной вентиляции.[4] В связи с такой важностью и опасностью распространения внутрибольничных инфекций целью нашей работы было проведение исследования санитарно-гигиенического состояния ЛПУ на примере хирургического отделения городской больницы. Материалы и методы Объектами исследования стали смывы с поверхностей: 1. диван (коридор) 2. стол с емкостями для дезинфекции использованного материала (процедурный кабинет) 3. кушетка (перевязочная №2 – «гнойная») 67 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии кушетка (перевязочная №1 – «чистая») тумбочка (палата) пол (палата) стол (пост) Для идентификации микроорганизмов использовали следующие среды: МПА, МПБ, среда Эндо, среда Сабуро, желточно-солевой агар, физиологический раствор и дифференциально-диагностические среды Гисса. Исследования проводились по общепринятым микробиологическим методам. Результаты исследований С помощью ватных палочек были сделаны смывы с исследуемых поверхностей. Для достоверности результатов забор материала дублировался. Пробирки с исследуемым материалом помещали в термостат при 37◦С на 24 часа для культивирования микроорганизмов. По истечении суток с каждой пробирки был сделан мазок, который окрашивали по Граму и микроскопировали. Для определения родовой принадлежности микроорганизмов были сделаны посевы на среды: 1. Эндо (определение наличия БГКП) 2. Сабуро (определение наличия патогенных и плесневых грибов) 3. желточно-солевой агар – ЖСА (определение наличия стафилококка) 4. газоном на МПА с разведения 10-5 (наблюдение за общей картиной наличия микроорганизмов в пробирке) Чашки с посевами поместили в термостат и культивировали 24 часа при температуре 37◦С. Результаты представлены в таблице 1. 4. 5. 6. 7. Таблица 1 – Результаты посевов исследуемых проб на питательные среды -5 № Среда ЖСА МПА 10 пробы Сабуро 1 Рост Сплошной рост, Прозрачные, присутствует матовые, ровный край, непрозрачные, глянцевые, неровный край однородные, серого цвета 2 Рост Мелкие, белые, Средний размер, присутствует округлые, неровный прозрачные, край, непрозрачные, мутные, округлые, однородные, матовые глянцевые, однородные, серые 3 Рост Неровный край, белые, Мелкие, глянцевые, присутствует матовые, среднего непрозрачные, размера, плоские серые, мутные 4 Рост Мелкие, круглые, Средний размер, присутствует прозрачные,молочный прозрачные, цвет мутные, округлые, глянцевые, однородные, серые 5 Рост Непрозрачные, Мелкие, 68 Среда Эндо Крупный, сливной рост, белый с малиновым оттенком цвет, слизистая Рост отсутствует Рост отсутствует Рост отсутствует Мелкие, Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 6 7 присутствует матовые, мелкие, непрозрачные, с зернистые, ареалом, креповый неоднородные цвет, глянец Рост Непрозрачные, присутствует мутные, сплошной рост, неровный край, матовые, крупные точечные, малиновый цвет белые,блестящие, гладкие, неровный край, малиновые, круглые, мелкие глянцевые Рост Непрозрачные, Средний размер, Рост отсутствует присутствует среднего размера, прозрачные, глянцевые, круглые мутные, округлые, глянцевые, однородные, серые Рис.1 Рост на МПА, ЖСА и среде Эндо Для дальнейших исследований были отобраны единичные колонии, с которых были сделаны мазки и посев в МПБ для выделения чистых культур. По истечении 24 часов термостатирования при 37◦С, с бульона были сделаны посевы штрихом на МПА, Эндо и ЖСА. Результаты представлены в таблице 2. Таблица 2 – Результаты посевов чистой культуры № пробы 1 2 ЖСА Среда Эндо МПА Рост отсутствует Тёмно-розовые, глянцевые, неровный край, мелкие Рост отсутствует Рост отсутствует Светло-жёлтые, мелкие, морщинистые, неоднородные, матовые Мелкие, круглые, прозрачные, молочного цвета 69 Окраска по Граму Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 3 Мелкие, округлые, кремового цвета Рост отсутствует Мелкие, белого цвета, ровный край, матовые 4 Рост отсутствует Рост отсутствует Мелкие, круглые, прозрачные 5 Мелкие с Мелкие, матовые, ареалом однородные, белого цвета, бледно-розовые непрозрачны е Мелкие, непрозрачные, бледнооранжевое, матовые 6 Рост отсутствует Среднего размера, бледно-розовые, однородные, глянцевые Мелкие, круглые, прозрачные, серого цвета, однородные 7 Среднего размера, молочного цвета, круглые, глянцевые, непрозрачны е Мелкие, круглые, Среднего ровный край размера, непрозрачные, серого цвета, однородные, округлые, неровный край Видовую принадлежность выделенных культур определяли с помощью цветного ряда Гисса (глюкоза, лактоза, маннит, мальтоза, сахароза, ксилоза, дульцит) Таблица 3 – Результаты посевов на среды Гисса № пробы 1 глюкоза Лактоза маннит мальтоза сахароза ксилоза дульцит + + + - + - +- 2 + + + - + - +- 3 + + + + + + - 4 + + + - + - +- 5 + - - + + - - 6 + - + + + + - 7 + + + - - - - 70 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Рис.2. Ферментирование сахаров (среды Гисса) Выводы: Таким образом, при проведении исследования санитарногигиенического состояния ЛПУ, на примере хирургического отделения городской больницы, на основании биохимических свойств культур, роста на питательных средах и окраски мазков по Граму нами были выявлены 1. БГКП (Klebsiella) 3 штамма (1,2 и 4 пробы) 2. Стафилококки (Staphylococcus aureus) 1 штамм(3 проба) 3. Энтерококки (Enterococcus faecalis) 1 штамм (7 проба) 4. Нейссерии (Neisseria meningitidis)1 штамм (5 проба) 5. Бациллы (Bacillus subtilis) 1 штамм (6 проба) Присутствие данных штаммов свидетельствует о риске возникновения внутрибольничных инфекций. Для предупреждения заражения необходимо производить дезинфекцию механическим, физическим и химическим путями, соблюдать санитарно-гигиенический режим. Библиографический список 1. 2. 3. 4. http://meduniver.com/Medical/Microbiology/872.html wikipedia.org http://ibvlpu.ucoz.ru/publ/profilaktika_vbi/vozbuditeli/2-1-0-6 http://nursebook.ru/внутрибольничная_инфекция_вби INVESTIGATION OF NOSOCOMIAL INFECTIONS FOR EXAMPLE, THE SURGICAL DEPARTMENT Burova N.S., Kovaleva E.N. Key words: nosocomial infections, hospital strain, wipes, nutrient media. The study investigates to the detection of strains causing nosocomial infections on the example of the surgical department. 71 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ БИОТЕХНОЛОГИИ (В ТОМ ЧИСЛЕ НАНОБИОТЕХНОЛОГИИ) И ИММУНОЛОГИИ УДК 579.695 ХАРАКТЕРИСТИКА СТРУКТУРЫ МИКРОБНОГО СООБЩЕСТВА, УЧАСТВУЮЩЕГО В ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ОЧИСТКЕ НЕФТЕХИМИЧЕСКИХ СТОЧНЫХ ВОД Дао Линь Тхи Тху, аспирант 4 года обучения института Фундаментальной Медицины и Биологии Научный руководитель: д.б.н., профессор Ильинская О.Н. Казанский Федеральный Университет Ключевые слова: Нефтехимические сточные воды, биологическая предварительная очистка, аэробные гетеротрофы, дрожжи, микромицеты. Данная работа была посвящена определению величины нагрузки по органическим загрязнениям сточных вод производства стирола с окисью пропилена, а также изучению состава микробного сообщества, участвующего в процессе биологической очистки сточных вод в биореакторе. Производство нефтехимических продуктов неизбежно сопряжено с образованием высококонцентрированных и токсичных сточных вод [1]. Такие сточные воды не пригодны для очистки традиционными биологическими методами в аэротенках [2]. Объектом исследования служили сточные воды совместного производства стирола с окисью пропилена (СОП) предприятия «Нижнекамскнефтехим». Предварительная очистка данных сточных вод осуществляется в локальных очистных сооружениях биологическим способом при участии свободно взвешенной и иммобилизованной микрофлоры. ХПК необработанных сточных вод в период исследования изменялось в интервале от 8155 до 15728 мг/л (рис.1). Рис. 1– Динамика уровня органической нагрузки на входе и выходе из сооружений 72 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Несмотря на высокую загрязненность исследуемых сточных вод, эффективность очистки по ХПК варьирует от 38% до 58%, в зависимости от исходной органической нагрузки, а также зависит от состояния микробиоты, участвующей в процессе предобработки в биореакторе. Выделены изоляты аэробных гетеротрофных бактерий, а также несколько изолятов дрожжей, микромицетов и потенциальных азотфиксаторов с капсульными экзополисахаридами (рис.2). Рис. 2– Доля микроорганизмов в сообществе биореактора (КОЕ = 475×106) Среди микробного сообщества в биореакторе подавляющее большинство составляют аэробные гетеротрофы, а потенциальные азотфиксаторы значительно меньше по численности. Дрожжи и микромицеты встречались в очень незначительном количестве. Основной вклад в очистку стоков данного производства вносят в основном протеобактерии (по большей части Gamma-, а также Beta- и Alphaproteobacteria). Доминирующие бактерии из биореакторов идентифицированы как Citrobacter amalonaticus, Paracoccus versutus и Pseudomonas putida. Микрофлора биореактора является основой биологической очистки, она играет основную роль в устранении загрязнений, токсичности сточных вод и преодолении ряда факторов, определяющих неудовлетворительное состояние предобработки. Библиографический список 1. Selivanovskaya, S.Yu. Development of a Test System for Assessing the Toxicity of Multicomponent Wastes Stored in the Natural Environment / S. Yu. Selivanovskaya, V.Z. Latypova // Russian Journal of Ecology. – 2004. – № 35. – С. 21 – 25. 2. Zhao, X. Oil field wastewater treatment in Biological Aerated Filter by immobilized microorganisms / X. Zhao, Y. Wang, Z. Ye, A.G.L. Borthwick, J. Ni // Process Biochemistry. – 2006. – № 41. – С. 1475 – 1483. 73 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии CHARACTERIZATION OF THE MICROBIAL COMMUNITY PARTICIPATING IN THE PRETREATMENT OF PETROCHEMICAL WASTEWATER Dao Thi Thuy Linh, Ilinskaya O.N. Keywords: Petrochemical wastewater, biological pretreatment, aerobic heterotrophs, yeast, fungi. This work was devoted to the determination of organic loading of wastewater from styrene and propylene oxide production, as well as the research of the structure of the microbial community participating in the biological wastewater treatment process in a bioreactor. УДК 616:619 БИОПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ФАГОВ ДЛЯ ОБРАБОТКИ ОВОЩЕЙ Камалова Р.Р., Фролова А.С., 4 курс факультета ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н, доцент Феоктистова Н.А., к.б.н, доцент Калдыркаев А.И., к.б.н, старший преподаватель, Лыдина М.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: Бактериофаги, спорообразующие бактерии, ферменты. Работа посвящена разработке экспериментального биопрепарата, применение которого для обработки овощей позволит быстро и качественно инактивировать фитопатогенные бациллы в процессе хранения в условиях специализированных овощехранилищах и в торговых залах магазинов, а также выделению и идентифицированию фитопатогенных бацилл, контаминирующих корне- и клубнеплоды. В работе использовали методики, изложенные в следующих нормативнотехнических документах и научных трудах: - ГОСТ 26669-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов»; - ГОСТ Р 51426-99 «Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований»; - ГОСТ 26669-85 «Подготовка проб для микробиологического анализа»; - для выделения бактерий Bacillus использовали схему дифференциации бактерий рода Bacillus (Gordon, 1973, Затула, 1973; Смирнов, 1982). Было исследовано 36 проб корне- и клубнеплодов. Картофель, морковь, репа, редька, свекла красная, полученные в хозяйствах Ульяновской, Самарской областей и Краснодарского края. Выделение бактерий проводили по методике (Gordon, 1973). Первый день. Исследуемые пробы вносили в физиологический раствор и прогревали на водяной бане при температуре 70-75 °С в течение 30 мин и высевают на чашки Петри с МПА. Все посевы помещали в термостат- при 37 °С 74 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии на 18 ч. Культуры, выросшие на МПА, отсевали в пробирку с МПБ и инкубировали в термостате при 37 °С в течение 4-5 ч. Для чистоты эксперимента мы анализировали не менее трех колоний. Второй день. Просматривали посевы и делали высевы на МПА, среды Громыко и Гаузе № 2. Исходные посевы, а также засеянные чашки и пробирки помещали в термостат при 37 °С на 18 часов. Третий день. При наличии роста на МПА, средах Громыко и Гаузе № 2 готовили мазки выросших культур, затем окрашивали по Граму. Грамположительные спорообразующие бактерии засевали в пробирки с МПБ. После 4-5 ч инкубации в термостате при 37 °С и высевали на следующие среды: среду Кларка, МПБ с 7% поваренной соли, среду с мочевиной, бульон с нитратами, молочный агар, тирозировый агар, картофельный агар, МПБ с индикаторными бумажками на сероводород, аммиак и индол, бульон с яичным желтком, 1% глюкозный агар, среду Омелянского с глюкозой, МПА, кукурузнопептонный агар. Все отобранные посевы помещали в термостат при 37 °С. Четвертый день. Учитывали результаты определения ферментативных свойств выделенных культур. Для выявления глобул в протоплазме микробных клеток готовили мазки культур, выросших на 1% глюкозном агаре, окрашивали и микроскопировали. Грамположительные бациллы, образующие эндоспоры и продуцирующие каталазу, относили к роду Bacillus. Культуры, клетки которых не раздуваются при спорообразовании, считали представителями первой морфологической группы. Бактерии рода Bacillus, как правило, обнаруживаются в ассоциациях с другими бактериями, которые могут подавлять рост бацилл при высевании проб на обычно применяемые среды. Поэтому при выделении спорообразующих бактерий пробы прогревали перед высевом на полноценные питательные среды при температуре 70 0С в течение 40 минут. Таким образом, в результате проведенных исследований на наличие бактерий Bacillus mesentericus, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides 36 проб корне- и клубнеплодов. Нами установлено, что уровень контаминации исследованных проб бактериями рода Bacillus составил более 70 %. В результате проведенных исследований нами было выделено 26 культур бактерий рода Bacillus, которые мы дифференцировали по ферментативным свойствам (на основании тестов, описанных в литературных источниках и изучения биохимических свойств выделенных штаммов и штаммов из коллекции бактерий рода Bacillus Научно-исследовательского инновационного центра микробиологии и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Ульяновской ГСХА им. П.А. Столыпина»), как бактерии видов Bacillus mesentericus (pumilus) Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Bacillus mycoides, Bacillus megaterium.. Библиографический список 1. Алехин Р.М., Бакулов И.А., Ведерников В.А. и др. Руководство по общей эпизоотологии. - М.: Колос, 1979 г. 2. Болезни собак: Справочник / Сост. Проф. А.И.Майоров. - 3-е изд., перераб. и доп. М.: Колос, 2001 г. 3. Ветеринарное законодательство.Т. 1 и 2 / под общей ред. Третьякова А.Д. - М.: Колос, 1972 г. 75 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 4. Конопаткин А.А., Артемов Б.Т., Бакулов И.А. и др. Эпизоотология и инфекционные болезни. - М.: Колос, 1993 г. 5. Поляков А.А. Ветеринарная дезинфекция. - М.: Колос, 1975 г. 6. Справочник ветеринарного врача. - СПб.: Издательство «Лань», 2000 г. 7. Барт, Н.Г. Бактериофаги Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения», Ульяновск, 2009. – с.140-146. 8. Барт, Н.Г. Биологические свойства бактериофагов Providencia Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», Ульяновск, 2009. – C.6-8. 9. Барт, Н.Г. Спектр литической активности бактериофагов Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы V Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». – Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2013. – Т.II. – C.12-16. 10. Викторов, Д.А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Pseudomonas fluorescens / Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Д.А. Васильев // Ветеринария и кормление. – Москва: «ВЕТКОРМ», 2012. – №5. – С. 8-9. 11. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов диагностики псевдомонозов рыб / Д.А. Викторов, Т.А. Гринева, Д.А. Васильев, А.М. Артамонов, С.Н. Золотухин // Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: Материалы международной научнопрактической конференции, Ульяновск, ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», 23-25 апреля 2013. – Т. 1. – Ульяновск, 2013. – С. 162-164. 12. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas putida // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Саратов. – 2011. – 22 с. 13. Васильев, Д.А. Выделение и идентификация Bordetella bronchiseptica от животных / Д.А. Васильев, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Васильева // Естественные и технические науки. – 2010. - № 5. – С. 233-235. 14. Васильев, Д.А. Изучение основных биологических свойств бактериофагов Bordetella bronchiseptica, выделенных методом индукции / Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, С.Н. Золотухин, И.Н. Хайруллин, Ю.Б. Васильева, А.Г. Шестаков // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - №1 (13). - С. 59–62. 15. Выделение бактериофагов Listeria monocytogenes методом индукции/ Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, С.Н, Золотухин, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов, И.Г. Швиденко // Вестник УГСХА. – 2013. - №1(21) – С. 45-49 16. Выделение и характеристика бактериофагов Listeria monocytogenes / Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов// Материалы международной научнопрактической конференции "Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности". - Ульяновск: Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина, 2013,т.2 - С. 130-133 17. Изучение биологических свойств бактериофагов Listeria / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, Д.А. Васильев, М.А. Имамов // Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве: Материалы Международной научно-практической конференции. – Саратов, 2013. – С. 125 – 127. 18. Фагоиндикация бактерий рода Listeria с целью мониторинга почвенных экосистем / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, Д.А. Васильев [и др.] // Биодиагностика в экологической оценке почв и сопредельных сред: Тезисы докладов Международной конференции, Москва 4-6 февраля 2013 г. - М.: Бином, 2013. – С. 97. 76 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 19. Васильева, Ю.Б. Конструирование биопрепаратов для лабораторной диагностики бордетеллёзной инфекции // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С. 25-29. 20. Васильева, Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. 21. Васильева, Ю.Б. Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики бордетеллёза // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.science-education.ru/110-9751. 22. Васильева, Ю.Б. Особенности биологии бактерий вида Bordetella bronchiseptica // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.scienceeducation.ru/110-9927. 23. Васильева, Ю.Б. Новая тест-система идентификации возбудителя бордетеллёза – Bordetella bronchiseptica // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10. – Ч.1. 24. Васильева, Ю.Б. Разработка методов детекции бактерий Bordetella bronchiseptica // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С. 46-51. 25. Васильева, Ю.Б. Фаги бактерий Bordetella bronchiseptica: свойства и перспективы применения // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №3 (23).- C. 44-49. 26. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 27. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 28. Васильев Д.А. Разработка методов фагоидентификации и фагодетекции бактерий Pseudomonas fluorescens / Д.А. Васильев, Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Т.А. Гринева, Е.А. Ляшенко / Фундаментальные исследования. 2014. № 5-1. С. 55-58. 29. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. BIOLOGICAL PREPARATION ON THE BASIS OF PHAGES FOR PROCESSING OF VEGETABLES Kamalov R.R., Frolovа A.S., Feoktistova N.A., Kuldyrkaev A.I. Keywords: Bacteriophages, spore-forming bacteria, enzymes. The work is devoted to the development of experimental biological product, which is used for processing of vegetables will quickly and efficiently inactivation of pathogenic bacilli in storage in conditions of specialized depositories and trading halls of shops as well as the isolation and identification of pathogenic bacilli, which contaminate the root - and tuber vegetables. 77 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 616:619 БИОПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ФАГОВ ДЛЯ ОБРАБОТКИ ФРУКТОВ Камалова Р.Р., Фролова А.С., 4 курс, факультет ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н, доцент Феоктистова Н.А., к.б.н, доцент Калдыркаев А.И., к.б.н, старший преподаватель, Лыдина М.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: ферментативные свойства, культура, среда Омелянского. Работа посвящена разработке экспериментального биопрепарата, применение которого для обработки фруктов по разработанной нами технологии, позволит быстро и качественно инактивировать фитопатогенные бациллы в процессе хранения в условиях специализированных и овощехранилищах и в торговых залах магазинов. Данная цель достигается выделением, и идентифицировать фитопатогенные бациллы, контаминирующие фрукты. В работе использовали методики, изложенные в следующих нормативнотехнических документах и научных трудах: - ГОСТ 26669-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов»; - ГОСТ Р 51426-99 «Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований»; - ГОСТ 26669-85 «Подготовка проб для микробиологического анализа»; - для выделения бактерий Bacillus использовали схему дифференциации бактерий рода Bacillus (Gordon, 1973, Затула, 1973; Смирнов, 1982). Было исследовано 52 пробы фруктов. Выделение бактерий проводили по методике (Gordon, 1973). Первый день. Исследуемые пробы вносили в физиологический раствор и прогревали на водяной бане при температуре 70-75 °С в течение 30 мин и высевают на чашки Петри с МПА. Все посевы помещали в термостат- при 37 °С на 18 ч. Культуры, выросшие на МПА, отсевали в пробирку с МПБ и инкубировали в термостате при 37 °С в течение 4-5 ч. Для чистоты эксперимента мы анализировали не менее трех колоний. Второй день. Просматривали посевы и делали высевы на МПА, среды Громыко и Гаузе № 2. Исходные посевы, а также засеянные чашки и пробирки помещали в термостат при 37 °С на 18 часов. Третий день. При наличии роста на МПА, средах Громыко и Гаузе № 2 готовили мазки выросших культур, затем окрашивали по Граму. Грамположительные спорообразующие бактерии засевали в пробирки с МПБ. После 4-5 ч инкубации в термостате при 37 °С и высевали на следующие среды: среду Кларка, МПБ с 7% поваренной соли, среду с мочевиной, бульон с 78 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии нитратами, молочный агар, тирозировый агар, картофельный агар, МПБ с индикаторными бумажками на сероводород, аммиак и индол, бульон с яичным желтком, 1% глюкозный агар, среду Омелянского с глюкозой, МПА, кукурузнопептонный агар. Все отобранные посевы помещали в термостат при 37 °С. Четвертый день. Учитывали результаты определения ферментативных свойств выделенных культур. Для выявления глобул в протоплазме микробных клеток готовили мазки культур, выросших на 1% глюкозном агаре, окрашивали и микроскопировали. Грамположительные бациллы, образующие эндоспоры и продуцирующие каталазу, относили к роду Bacillus. Культуры, клетки которых не раздуваются при спорообразовании, считали представителями первой морфологической группы. Бактерии рода Bacillus, как правило, обнаруживаются в ассоциациях с другими бактериями, которые могут подавлять рост бацилл при высевании проб на обычно применяемые среды. Поэтому при выделении спорообразующих бактерий пробы прогревали перед высевом на полноценные питательные среды при температуре 70 0С в течение 40 минут. По результатам исследований на наличие бактерий Bacillus mesentericus, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides 52 пробы фруктов (яблоки, груши, слива, персики, абрикосы, мандарины, завезенные из Израиля и Краснодарского края (Россия)). Нами установлено, что уровень контаминации исследованных проб бактериями рода Bacillus составил более 27 %. В результате проведенных исследований было выделено 19 культур бактерий рода Bacillus, которые мы дифференцировали по ферментативным свойствам (на основании тестов, описанных в литературных источниках и изучения биохимических свойств выделенных штаммов и штаммов из коллекции бактерий рода Bacillus Научноисследовательского инновационного центра микробиологии и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Ульяновской ГСХА им. П.А. Столыпина»), как бактерии видов Bacillus mesentericus (pumilus) Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Bacillus mycoides, Bacillus megaterium.. Бактерии рода Bacillus - фитопатогенные бактерии, поражающие тыкву, кукурузу, свеклу, плоды апельсина, абрикоса, кабачков и других растений, клубни картофеля, семенники капусты, коробочки хлопчатника и т.п., и тем самым наносящие значительный экономический ущерб сельскохозяйственным и перерабатывающим предприятиям (Аскалонов, 1962; Меркулов, 2011). Библиографический список 1. Алехин Р.М., Бакулов И.А., Ведерников В.А. и др. Руководство по общей эпизоотологии. - М.: Колос, 1979 г. 2. Болезни собак: Справочник / Сост. Проф. А.И.Майоров. - 3-е изд., перераб. и доп. М.: Колос, 2001 г. 3. Ветеринарное законодательство.Т. 1 и 2 / под общей ред. Третьякова А.Д. - М.: Колос, 1972 г. 4. Конопаткин А.А., Артемов Б.Т., Бакулов И.А. и др. Эпизоотология и инфекционные болезни. - М.: Колос, 1993 г. 5. Поляков А.А. Ветеринарная дезинфекция. - М.: Колос, 1975 г. 6. Справочник ветеринарного врача. - СПб.: Издательство «Лань», 2000 г. 7. Барт, Н.Г. Бактериофаги Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и 79 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения», Ульяновск, 2009. – с.140-146. 8. Барт, Н.Г. Биологические свойства бактериофагов Providencia Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», Ульяновск, 2009. – C.6-8. 9. Барт, Н.Г. Спектр литической активности бактериофагов Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы V Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». – Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2013. – Т.II. – C.12-16. 10. Викторов, Д.А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Pseudomonas fluorescens / Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Д.А. Васильев // Ветеринария и кормление. – Москва: «ВЕТКОРМ», 2012. – №5. – С. 8-9. 11. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов диагностики псевдомонозов рыб / Д.А. Викторов, Т.А. Гринева, Д.А. Васильев, А.М. Артамонов, С.Н. Золотухин // Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: Материалы международной научнопрактической конференции, Ульяновск, ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», 23-25 апреля 2013. – Т. 1. – Ульяновск, 2013. – С. 162-164. 12. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas putida // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Саратов. – 2011. – 22 с. 13. Васильев, Д.А. Выделение и идентификация Bordetella bronchiseptica от животных / Д.А. Васильев, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Васильева // Естественные и технические науки. – 2010. - № 5. – С. 233-235. 14. Васильев, Д.А. Изучение основных биологических свойств бактериофагов Bordetella bronchiseptica, выделенных методом индукции / Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, С.Н. Золотухин, И.Н. Хайруллин, Ю.Б. Васильева, А.Г. Шестаков // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - №1 (13). - С. 59–62. 15. Выделение бактериофагов Listeria monocytogenes методом индукции/ Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, С.Н, Золотухин, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов, И.Г. Швиденко // Вестник УГСХА. – 2013. - №1(21) – С. 45-49 16. Выделение и характеристика бактериофагов Listeria monocytogenes / Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов// Материалы международной научнопрактической конференции "Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности". - Ульяновск: Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина, 2013,т.2 - С. 130-133 17. Изучение биологических свойств бактериофагов Listeria / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, Д.А. Васильев, М.А. Имамов // Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве: Материалы Международной научно-практической конференции. – Саратов, 2013. – С. 125 – 127. 18. Перспективы применения бактериофагов Listeria monocytogenes / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов [и др.] // Животноводство России в условиях ВТО: от фундаментальных исследований до высокопродуктивного производства: Материалы Международной научно-практической конференции молодых ученых, 9-11 апреля 2013. – Орел: Изд-во Орел ГАУ, 2013. – С. 181 – 184. 19. Фагоиндикация бактерий рода Listeria с целью мониторинга почвенных экосистем / Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, Д.А. Васильев [и др.] // Биодиагностика в экологической оценке почв и сопредельных сред: Тезисы докладов Международной конференции, Москва 4-6 февраля 2013 г. - М.: Бином, 2013. – С. 97. 80 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 20. Васильева, Ю.Б. Конструирование биопрепаратов для лабораторной диагностики бордетеллёзной инфекции // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С. 25-29. 21. Васильева, Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. 22. Васильева, Ю.Б. Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики бордетеллёза // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.science-education.ru/110-9751. 23. Васильева, Ю.Б. Особенности биологии бактерий вида Bordetella bronchiseptica // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.scienceeducation.ru/110-9927. 24. Васильева, Ю.Б. Новая тест-система идентификации возбудителя бордетеллёза – Bordetella bronchiseptica // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10. – Ч.1. 25. Васильева, Ю.Б. Разработка методов детекции бактерий Bordetella bronchiseptica // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С. 46-51. 26. Васильева, Ю.Б. Фаги бактерий Bordetella bronchiseptica: свойства и перспективы применения // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №3 (23).- C. 44-49. 27. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 28. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 29. Васильев Д.А. Разработка методов фагоидентификации и фагодетекции бактерий Pseudomonas fluorescens / Д.А. Васильев, Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Т.А. Гринева, Е.А. Ляшенко / Фундаментальные исследования. 2014. № 5-1. С. 55-58. 30.Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. BIOLOGICAL PREPARATION ON THE BASIS OF PHAGES FOR PROCESSING FRUITS Kamalov R.R., Frolovа A.S., Feoktistova N.A., Kuldyrkaev A.I. Keywords: enzymatic properties, culture, environment Alanskogo. The work is devoted to the development of experimental biological product, which is used for processing fruit on our technology, will allow quickly and qualitatively the inactivation of pathogenic bacilli in storage in conditions of specialized and vegetable storages and in trading halls of shops. This purpose is reached by selection, and identify plant pathogenic bacilli, which contaminate fruits. 81 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 637.051(571.51) ОЦЕНКА ПИТАТЕЛЬНОЙ ЦЕННОСТИ ОТХОДОВ МЯСНОГО ПРОИЗВОДСТВА МУП «УЯРСКИЙ МЯСОКОМБИНАТ» КРАСНОЯРСКОГО КРАЯ Кочергина Д. О., студент 2 курса направление 111100.62 – зоотехния институт прикладной биотехнологии и ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., доцент Козина Е.А. ФГБО ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» Ключевые слова: корма, рубец говяжий, фаллос бычий, обрезь говяжья, зоотехнический анализ, питательность. Проведен зоотехнический анализ отходов Уярского мясокомбината. Установлено, что их можно применять в кормления мелких домашних животных в составе рационов или готовых кормов. Мясная промышленность – одна из ведущих отраслей агропромышленного комплекса. К сожалению, в этой отрасли, нет 100% безотходного производства, наладить которое было бы очень выгодно с экономической и экологической точки зрения. Решение этой проблемы все ещё остается актуальным. В производстве кормов для мелких домашних животных часто используются субпродукты, обрезь, рубец, сухожилия и т.д. [1]. В ходе исследования впервые определяли питательную ценность отходов «Уярского мясокомбината» Красноярского края, для возможности дальнейшего использования их в кормлении мелких домашних животных. Цель: провести зоотехнический анализ имеющихся кормов, оценить питательность некоторых отходов мясного производства. Задачи: провести зоотехнический анализ кормов на содержание питательных веществ;сравнить питательность изучаемых отходов рубца говяжьего и обрези говяжьей со стандартными данными. Для оценки качества питательности образцов, был проведен зоотехнический анализ в научной лаборатории кафедры кормления сельскохозяйственных животных. Анализ корма начинался с измельчения, после этого определялась массовая доли первоначальной влаги и гигроскопической влаги методом высушивания. Массовая доля белка в исследуемых кормах изучалась в научно исследовательском центре по контролю качества сельскохозяйственного сырья и пищевых продуктов КрасГАУ.Высушенные образцы корма, использовались для определения содержания «сырого» жира в кормах. При помощи аппарата Сокслета, методом экстрагирования.Сырую золу определяли методом сжигания и прокаливания навески корма в муфельной печи.Массовую долю кальция определяли методом титрования аксалата кальция.Массовую долю фосфора определяли ванадомолибдатным методом. После чего пересчиталисодержание питательных веществ в кормах натуральной влажности (табл. 1) [2]. 82 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Таблица 1 – Химический состав кормов натуральной влажности, % Показатель Первоначальная влага Гигроскопическая влага Общая влажность Абсолютно-сухое вещество Массовая доля белка Массовая доля сырого жира Массовая доля сырой золы Массовая доля кальция Массовая доля фосфора Рубец говяжий 8,05 0,03 8,19 91,8 8,66 3,14 0,84 0,4 0,41 Фаллос бычий 10,15 0,15 10,31 89,7 8,94 0,53 0,75 0,66 0,07 Обрезь говяжья 7,6 0,22 7,82 92,2 7,38 10,24 1,77 0,3 0,34 Основание фаллоса 6,7 0,17 7,01 93 9,1 5,11 2,69 0,4 0,37 Сравнивая химический состав исследуемых кормов, можно сделать вывод, что они богаты сухим веществом 89,7–93%, а следовательно, и содержащимися в них питательными веществами. Белка больше в основании фаллоса – 9,1% и фаллосе бычьем – 8,94, но в них меньше содержится сырого жира. Обрезь говяжья отличается высоким содержанием жира по сравнению с другими кормами на – 9,71–5,13%, массовая доля сырой золы больше в основании фаллоса и обрези говяжьей на – 1,94 и 0,92% по сравнению с фаллосом бычьим. В фаллосе бычьем больше кальция на – 0,26–0,36%, но он беден фосфором по сравнению с другими кормами. В таблице 2 представлены для сравнения оценки качества исследуемых кормов, рубца говяжьего и обрези говяжьей, с табличными показателями содержания питательных и минеральных веществ [3]. Таблица 2 – Состав и питательность кормов, % Показатель Общая влага Массовая доля белка Массовая доля сырого жира Массовая доля сырой золы Массовая доля кальция Массовая доля фосфора Рубец говяжий 8,0 13,1 4,1 0,5 1,5 0,84 Исследуемый рубец говяжий 8,19±0,095 8,66±2,22 3,14±0,48 0,84±0,17 0,4±0,55 0,41±0,22 Обрезь говяжья Исследуемая обрезь говяжья 5,5 14,3 16,44 2,04 0,6 0,25 7,01±0,76 7,38±3,46 10,24±3,1 2,69±0,33 0,4±0,1 0,37±0,06 Исследуемые корма, рубец и обрезь говяжьи, содержат больше влаги на 0,19 и 1,51% соответственно по сравнению со стандартными образцами. Следовательно, количество сухого вещества меньше, поэтому массовая доля питательных веществ ниже, в изучаемых кормах. Показатели исследуемого рубца в основном ниже тех, что приведены в стандартных таблицах: белка меньше на – 4,44%, жира на – 0,96, кальция на – 1,1 и фосфора на – 0,43, кроме массовой доля сырой золы, она выше на 0,34%. Большее количество сырой золы, позволяет сделать предположение, что взятый образец, содержит большое количество других минеральных веществ.Висследуемой обрези 83 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии говяжьей, меньше белка на – 6,92, жира на – 6,2 и кальция на – 0,2% по сравнению с табличными данными, а содержание массовой доли сырой золы и фосфора выше на 0,65 и 0,12%, соответственно. Таким образом, полученные результаты питательности отходов МУП «Уярский мясокомбинат», позволят правильно сбалансировать рационы для мелких домашних животных с включением исследуемых кормов. Библиографический список 1. Востриков, Н.И. Технология производства говядины на промышленной основе / Н. И. Востриков, Г. И. Бельков, Г. М. Туников. – М.: ВО «АГРОПРОМИЗДАТ», 1988. – C. 210-211. 2. Козина, Е.А. Зоотехнический анализ кормов / Е.А. Козина. – Красноярск, 2012. – 116 с.2 3. Козина, Е.А. Кормление мелких домашних животных / Е.А. Козина. - Красноярск, 2007. - 103 с. ASSESSMENT OF NUTRITIONAL VALUE OF WASTE OF MEAT PRODUCTION MUE «UYAR MEAT» KRASNOYARSK REGION Kochergina D. O.,Kozina E. A. Key words: food, beef tripe, phallus bullish, beef trimmings, zootechnical analysis, nutritional value. Analysis of Uyarsk meat-packing factory's wastes was conducted. It was established that they can be used as part of rations or prepared forage to feed small domestic animals. УДК 579.64 БИОПРЕПАРАТЫ ДЛЯ УТИЛИЗАЦИИ ОРГАНИЧЕСКИХ ОТХОДОВ В СЕЛЬСКОМ ХОЗЯЙСТВЕ Ломакин А.А. , 1 курс факультета ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., ст. преподаватель Викторов Д.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: микробиология, биотехнология, биопрепарат, биоутилизация, органические отходы, животноводство, сельское хозяйство. Проблема утилизации отходов имеет важное экологическое, экономическое и энергосберегающее значение. Особенно это актуально для сельскохозяйственной отрасли, где утилизация органических отходов играет важную роль, но, к сожалению, действенные технологии переработки отходов используются лишь в небольшом количестве сельскохозяйственных предприятий. В связи с ростом поголовья скота в фермерских хозяйствах встаёт проблема ежегодного скапливания огромного количество навоза и навозных стоков. Скопления навоза являются источником токсинов, паразитов и т. д., что 84 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии влечет за собой ухудшение экологической и санитарно-эпидемиологической обстановки. Хранение навоза чревато загрязнением окружающей среды и является источником инфекции для животных и людей, живущих в близлежащих населенных пунктах. В современном мире уже существует большое количество разработок, направленных на решение этой проблемы. Таким образом, переработка и утилизация навоза стала проблемой, которая приводит к снижению коммерческой рентабельности предприятия и наносит значительный вред экологии. В большинстве разработанных методик предлагается многоступенчатый и экономически затратный процесс утилизации, который включает в себя несколько этапов - от сбора и транспортировке навоза и стоков до использования промышленного оборудования. Оборудование данного назначения очень дорогостояще и требует квалифицированного обслуживания. Также в последнее время все большую популярность набирает методика, основанная на использовании червей в качестве утилизатора. Однако недостатком этой технологии является то, что дождевые черви чувствительны к аммиаку и высоким температурам. Поэтому в качестве субстрата для червей необходимо использовать остывший навоз, прошедший процесс ферментации. Другие органические отходы также должны быть частично разложившимися. Наиболее перспективными на настоящий момент является использование бактериальных препаратов. Такая биотехнология способна решать сразу несколько проблем. Во-первых, значительно ускорить процесс биоразложения навоза, повысить его биологическую ценность и сократить сроки обеззараживания. Во-вторых, уменьшить использование технологической воды, что в свою очередь сократит количество образования навозных стоков. Помимо этого минимизировать концентрацию токсинов в воздухе и в производственных помещениях, что в свою очередь способствует улучшению экологической обстановки в близлежащих районах. Разрабатываемый коллективом авторов метод утилизации органических отходов, в частности навоза, основан на использовании биопрепарата с применением эффективных штаммов сапрофитных бактерий Lactobacillus acidophilus, а также ферментов эффективной биологической утилизации органических отходов, очистки, обеззараживания и детоксикации сточных вод и донных отложений прудов сельскохозяйственного назначения с возможностью получения эффективного органического удобрения. Разрабатываемый биопрепарат прост в использовании, не требует больших экономических затрат, выделение больших площадей для оборудования, поэтому данный биопрепарат возможно использовать на любых типах сельскохозяйственных предприятий. Одним из главных плюсов предлагаемой технологии является сокращение количества используемой технической воды, что в свою очередь способствует снижению вероятности появления вязкого донного осадка, бесподстилочного навоза и гомогенизации навоза. Так же минимизирует токсичность навоза и образование вредных газов. Это в свою очередь позволит снизить выделение токсинов и неприятного запаха в атмосферу и риск 85 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии взыскания штрафов контролирующими органами. Биопрепарат позволит улучшить качество и эффективность использования самого навоза. Библиографический список 1. Антюхов Ю. Н. Больше времени на бизнес, меньше - на утилизацию / Ю. Н. Антюхов // Твердые бытовые отходы. - Отраслевые ведомости. – 2012. - №10. – с. 38-39. 2. Афанасьев В.Н., Афанасьев А.В., Самсонов А.Н. Технологические решения по утилизации навоза на животноводческих фермах при отсутствии сельскохозяйственных угодий // Вестник Всероссийского научно-исследовательского института механизации животноводства. 2009. Т. 20. № 3. С. 150-155. 3. Белоусов Н. Утилизация навоза - это экологично, технологично и выгодно / Н. Белоусов // Свиноводство. – 2010. - № 4. – С. 24-27. 4. Биркин С.М. Совершенствование технологии и технических средств утилизации навоза крупного рогатого скота // автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук / Волгоградская государственная сельскохозяйственная академия. Волгоград, 2009. 5. Викторов, Д.А. Разработка биопрепарата для эффективной утилизации органических отходов в сельском хозяйстве, очистки сточных вод и прудов сельскохозяйственного назначения / Д.А. Викторов, А.П. Воротников, И.Г. Горшков, Т.А. Гринева, Н.Г. Куклина, Д.А. Васильев // Стратегия инновационного развития агропромышленного комплекса: Материалы Международной научно-практической конференции, Курган, 25-26 апреля 2013. – Курган: Изд-во Курганской ГСХА, 2013. – С. 310-313. 6. Доля А.М. Утилизация навоза молочных ферм / А.М. Доля, Д.И. Згировский // Техника и оборудование для села. – 2009. – № 4. – С. 39-42. 7. Дорофеев И.Г. Бытовые, промышленные и сельскохозяйственные отходы производства в непале и их утилизация / И.Г. Дорофеев, С. Шрестха // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Экология и безопасность жизнедеятельности. – 2002. – № 6. – С. 121-123. 8. Друзьянова В.П. Ресурсосберегающая технология утилизации бесподстилочного навоза в условиях республики саха (якутия) //Аграрный вестник Урала. 2008. № 1. С. 63-64. 9. Китиков В.О., Башко Ю.А. Переоснащение молочно-товарных ферм республики беларусь современными техническими средствами для удаления и утилизации бесподстилочного навоза // Вестник Всероссийского научно-исследовательского института механизации животноводства. 2012. № 4. С. 72-82. 10. Климова Е.В. Методика выбора экологически безопасных технологий уборки и утилизации навоза на фермах по откорму КРС // Экологическая безопасность в АПК. Реферативный журнал. 2004. № 2. С. 493. 11. Ковалев А.А. Совершенствование процесса утилизации навоза свиноферм // Вестник ВИЭСХ. 2006. Т. 1. № 2. С. 161-165. 12. Ковалев Д.А., Камайданов Е.Н. Основные направления совершенствования линий утилизации бесподстилочного навоза с получением удобрений и биогаза // Вестник Всероссийского научно-исследовательского института механизации животноводства. 2009. Т. 20. № 3. С. 195-201. 13. Матросова Л.Е. Биотехнологические решения при утилизации бесподстилочного свиного навоза // Вестник ветеринарии. 2013. № 1. С. 45-47. 14. Методические указания МУ 2.1.7.730-99 «Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест». 15. Санитарные правила 1.2.1170-02 «Гигиенические требования к безопасности агрохимикатов». 86 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК: 612.017+577.153.365 : 576.8.097.4 ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕННОСТИ ГИАЛУРОНИДАЗЫ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Музаффаров Б.Ю., студент 4 курса стоматологического факультета, Научный руководитель: к.м.н., с.н.с. Сулейманов С.Ф. Бухарский государственный медицинский институт Ключевые слова: гиалуронидаза, иммуноадъювант, гуморальный иммунитет, титр. Изучены иммуностимулирующие свойства полиионов – сульфата декстрана (СД) и полиоксидония (ПО) у мышей-гибридов. Под влиянием дан-ных стимуляторов происходило усиление специфической первичной и вто-ричной антительной реакции на Нyal. у мышей. По своим иммуноадъювант-ным характеристикам СД приближался к полному адъюванту Фрейнда. Гиалуронидаза (Нyal.) - это лизосомальный фермент, осуществляющий гидролитическое расщепление глюкуроновой кислоты. Глюкуроновая кислота как обязательный компонент входит в состав многих видов соединительной ткани [1, 2]. Нyal. вырабатывается многими паразитарными гельминтами и вызывает патологические изменения в организме хозяина. Настоящий фермент является фактором патогенности и агрессивности гельминтов. Нyal., выполняя протективную функцию для паразитарных гельминтов, «облегчает» проникновение и распространение их организме. Нyal. играет важную роль в патогенезе многих паразитарных болезней [3]. Цель: Экспериментальное изучение антигенных свойств и усиление иммунитета на Нyal. при помощи иммуноадъювантов. Материалы и методы В экспериментах были использованы мыши-гибриды (CBAxC57Bl/6)F1 с массой 18-24 г. В качестве антигена использовали Нyal. («Serva Finebio-chem.». Нyal. растворяли 0,9% р-ре NaCl. Мышей примировали в следующих вариантах: Нyal., Нyal. + полиоксидоний (ПО), Нyal. + сульфат декстрана (СД) («Sigma Chem. Co»), эмульсией Нyal. в полном адъюванте Фрейнда (ПАФ, «Сalbiochem») п/к в основание хвоста. Спустя 1 месяц повторяли иммунизацию, которая была аналогична первичной, из расчёта 10 мкг Нyal./ мышь. Доза СД составляла 300 мкг, ПО - 200 мкг/мышь. Количество специфичных к Нyal. антител классов М и G их изотипов определяли в сыворот-ках мышей методом иммуноферментного анализа (ИФА) по A.Voller (1980). Результаты и обсуждение Нyal. обладала низкими иммуногенными свойствами (ИФА-титры в динамике: 1:100 до 1:300). Иммунизация мышей комплексом Нyal.+СД приводила к индукции антителогенеза, специфичного к Нyal., в десятки раз бо-лее интенсивного, нежели при введении одного лишь антигена Нyal. После однократной иммунизации синтез ИФА-титры составляли 1: 900. Вторичная продукция антител ((в основном IgG-типа) повышалась в 90 раз - 1:25000 с 87 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии пиком на 1 нед. после реиммунизации). Спектр изотипов антител к Нyal. был следующим: IgG1 (ИФА-титр до 1:12000) > IgG2a (ИФА-титр до 1:5000) > IgG2b (ИФА-титр до 1:2000) > IgM (ИФА-титр до 1:200). Одновременное введение мышам Нyal. в составе ковалентного комплекса с поликатионом ПО (Нyal.+ПО) стимулировало только вторичный антительный ответ – от 5 до 20 раз (ИФА-титры до 1:2000 – 1:6000). При этом доминировали антитела изотипа IgG1 (ИФА-титр до 1:2000). Использование в качестве репера положительного контроля ПАФ к Нyal. индуцировало у мышей интенсивную продукцию антител уже при первичном иммунном ответе ИФА-титр до 1:4000 с достижением пика ответа на 4 нед. При этом наблю-дали 200-кратное увеличение специфического синтеза IgG по сравнению с ответом на антиген Нyal. (ИФА-титры – 1:25000 – 1:52000). В данной группе был выявлен следующий спектр изоти-пов антител к Нyal.: IgG2а (ИФА-титр до 1:12000) > IgG1 (ИФА-титр до 1: 7000) > IgG2b (ИФА-титр до 1:3000) > IgM (ИФА-титр до 1:700). Таким образом, в отличие от поликатиона ПО полианион СД оказался более эффективным иммуноадъювантом к Нyal. Он индуцировал высокий уровень антительной иммунной реакции у мышей, специфичной в отноше-нии к Нyal. По своим иммуногенным характеристикам СД приближался к действию, оказываемому ПАФ. Полученные теоретические данные могут быть использованы в практическом здравоохранении и в ветеринарии, нап-ример, при создании эффективной защиты против паразитов-гельминтов. Библиографический список 1. Приваленко, М.К., Виха И.В. Определение активности гиалуронидазы / М.К. Приваленко, И.В. Виха // Лаб. дело. - 1974. - № 9. - С. 539-542. 2. Росин, Я.А. Биохимические регуляторы проницаемости / Я.А. Росин //В кн.: Физиология гисто-гематических барьеров. М.: Наука, 1977, стр. 60-73. 3. Сулейманов, С.Ф. О стимуляции иммунитета на гиалуронидазу - фактор патогенности паразитов / С.Ф. Сулейманов, Л.А. Ким, К.Г. Талипова и [ др.] //Doktor Axborotnomasi. - 2007. - С. 144-145. IMMUNOGENICITY STUDY HYALURONIDASE IN EXPERIMENT Muzaffarov B.Y., Suleymanov S.F. Keywords: hyaluronidase, immunoadjuvant, humoral immunity, titer. Immunostimulatory properties studied polyions - dextran sulfate (DS) and polyoxidonium (PO) in mice-hybrids. Under the influence of these stimulants is an amplification of specific primary and secondary response to the antibody Hyal. mi-ce. According to its characteristics immunoenhancing DS approaching complete Freund's adjuvant. 88 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 636.7:636.084 ПРИМЕНЕНИЕ ГОТОВЫХ КОРМОВ В КОРМЛЕНИИ СОБАК Сайбель Д.О., Белянина Ю.Л., студентки 2 курса специальности 11801.65 – Ветеринария, институт прикладной биотехнологии и ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., доцент Козина Е.А. ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» Ключевые слова: готовые корма, организм собаки, питание, рацион, нормы кормления Работа посвящена изучению классификации готовых сухих кормов для собак и их влияния на организм собаки. Цель работы: изучить классификацию готовых сухих кормов для собак и их влияние на организм собаки. Задачи: изучить готовые корма для собак и их классификацию; сравнить готовые корма разных классов; выявить влияние кормов разных классов на организм собаки. Одним из первых вопросов, встающих перед владельцами собак, является вопрос кормления. В отличие от диких животных, домашние, которые были выведены селекционным способом, отличаются тем, что натуральной пищи для здоровой жизни им недостаточно. Собакам, особенно породистым, обязательно нужны дополнительные витамины и микроэлементы для поддержания здоровья. Единой классификации сухих кормов для животных не существует, однако в целом выделяют следующие группы сухих кормов:обычный; премиум класса; супер-премиум класса; наивысшего класса – холистик; для диетического питания[1]. Корм обычный. Эти корма сбалансированы, полноценны, но имеют в своём составе пищевые красители и вкусовые добавки. Изготавливаются корма из сырья невысокого качества. Белок в корме в основном растительного происхождения, диетические виды мяса в состав корма обычно не включены. Корма экономического и коммерческого класса не рекомендуется использоватьв качестве основного рациона[2]. К таким кормам относятся: Трапеза, Оскар, Педигри, Чаппи. Корм премиум класса. При изготовлении кормов данного класса используются продукты высокого качества: диетическое мясо – куриное мясо, ягнятина, мясо индейки. Растительным компонентом корма обычно является рис. Корма хорошо усваиваются, и так же экономичны в расходовании [1]. К кормам премиум класса относятся: Пурина, Роял Канин (Россия), Брит Премиум, Red OK, Хеппи Дог Натур Крок. Корм супер-премиум класса. Это наиболее полноценные и сбалансированные корма. Для производства корма используются компоненты самого высокого качества. Приготовление кормов класса «супер-премиум» 89 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии осуществляется с применением специальных технологий. За счёт этого питательные вещества кормов наиболее приближены к натуральным кормам и хорошо усваиваются животными[2].Одна серия такого корма представлена в большом ассортименте разных рационов, рассчитанных на своеобразие пород собак, их возраста, физиологического состояния, склонностей к заболеваниям[1]. К таким кормам относятся: Роял Канин (Франция), Про План, Нутро Голд. Корм наивысшего класса – холистик. Это продукт, представляющий собой только лучшее мясо с добавлением овощей и фруктов и высококачественных зерновых. Здесь используется говядина, ягненок, утка и другие виды мяса высокого качества. Корма класса холистик содержат оптимальный комплекс минеральных веществ, подобранных для собак в зависимости от возрастного периода и даже породы. Он не содержит красителей, дешевых наполнителей, вкусовых ароматизаторов и других вредных веществ. Это полностью натуральный продукт [1]. К таким кормам относятся: Акана, Ориджин, ГолденИгл. Корм для диетического питания. Диетический корм – это готовый сбалансированный рацион питания, рекомендуемый при определенных заболеваниях собаки, а также в период выздоровления.Существует множество видов диетических кормов. Специальные диеты предусмотрены при сердечной недостаточности у питомца и гипертонии, помогают бороться с заболеваниями мочевыделительной системы. Корма для собак, в которых уменьшена доза фосфора и белка, полезны при почечных болезнях [2]. Практически любая линия корма премиум и супер-премиум класса имеет специальный рацион для кастрированных собак, который регулирует метаболизм и работу мочеотделительной системы. Также диетическое питание часто необходимо стареющим животным [4]. В диетические комплексы собрано множество питательных веществ, лечебных трав и натуральных адсорбентов, которыеспособствуют оздоровлению собаки [3]. К таким кормам относятся: Хиллс, Экануба, Брит. По содержанию белка и жира, готовые корма делятся на 5 классов:экономический (белок - до 18%, жир - до 8%); средний (белок - до 19%, жир - до 7%);высокий (белок - до 22%, жир - до 11%); супер (белок - до 25%, жир - до 15%); ультра-класс (белок - до 30%, жир - до 20%). Корма, относящиеся к двум последним классам, предназначены, в основном, для животных с высоким уровнем активности (рабочие собаки) или для беременных и кормящих сук. Животные, страдающие ожирением, должны получать корм с низким содержанием белка и жира - два первых класса [4]. При кормлении собаки породы Той-терьер(возраст 2 года)в домашних условиях кормом эконом класса фирмы Педигри наблюдалась нехватка витаминов и микроэлементов, проявляющаяся в низком уровне активности собаки, пониженном аппетите, плохим отделением каловых масс, линькой шерстного покрова, отсутствовал блеск шерсти. Для этого требовалось компенсировать рацион прикормом из натуральных овощей, добавлять витамины и биологически активные добавки. На опыте выяснили, что 90 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии кормление собаки породы Йоркширский терьер (возраст 7 месяцев) в домашних условиях кормом супер-премиум класса фирмы Роял Канин, обеспечило собаку полноценным кормлением, а также полным комплексом витаминов, микроэлементов и минералов, то есть питание данной собаки является сбалансированным по всем питательным веществам. Библиографический список 1. Зорин, В.Л. Кормление собаки. / В.Л. Зорин, А.И.Зорина – М.:ООО «АквариумПринт», 2006. – С. – 17–56. 2. Зубко, В. Энциклопедия собаководства. / В. Зубко, А.Алексеев. –М.: ТЕРРА – Книжный клуб, 2006. – С. – 159–164 3. Гусев, В.Г. Энциклопедия домашних животных./ В.Г. Гусев, Е.С Гусева – М.: ОЛМАПРЕСС, 2002. – 351 с. 4. Хохрин, С.Н. Кормление собак. / С.Н. Хохрин – СПб.: Издательство «Лань», 2001. – 192 с. READY-MADE FEEDS IN THE DOG DIET Saybel D.O., Belyanina Y.L., Kozina E.A. Keywords: ready-made feeds, the body of a dog, food, nutrition, food standards. The present article is concerned with the classification of ready-made dry feeds for dogs and their effects on the body of a dog. УДК 619:614.48 ДЕЙСТВИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ДЕЗИНФЕКТАНТА НА БАКТЕРИИ YERSINIA ЕNTEROCOLITICA Семанин А.Г., Скорик А.С., Суркова Е.И., Пирюшова А.Н. 4 курс факультета ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., доцент Феоктистова Н.А., к.в.н., доцент Васильева Ю.Б., д.б.н., профессор Золотухин С.Н. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: фаги, Yersinia enterocolitica, кишечные инфекции, профилактика. Исследование посвящено испытанию дезинфектанта на бактерии Yersinia enterocolitica. Новый препарат получен на основе биосенсоров – бактериофагов строго специфичных к требуемым возбудителям кишечных инфекций. Заболевания, которые в настоящее время называют кишечными иерсиниозами, лет 30 - 40 назад считались редкими и не привлекали к себе внимания специалистов. В настоящее время исследователи стали уделять гораздо больше внимания возбудителю Yersinia enterocolitica после сообщений о том, что данный возбудитель стал причиной возникновения заболевания 91 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии людей и животных США, Бразилии, Канаде, странах Европы, южной Африке, Японии, Иране и других странах (Mollaret, 1995). В Нидерландах, Бельгии, Германии, Канаде, Австралии иерсиниоз занимает третье место среди пищевых зоонозов, после сальмонеллёза и кампилобактериоза (Bockemuhl, 1995). По данным Российских исследователей, в нашей стране заболевания вызываемые бактериями вида Y. enterocolitica занимает второе место среди пищевых зоонозов, после сальмонеллёза (Черкасский, Подунова, Акулова, 1995). Несмотря на большой интерес, проявляемый к данному возбудителю, в России до сих пор не ясна картина заболеваемости, структура и динамика (Смирнов, 1992). Отдельные серо- и биовары Y. enterocolitica, являющимися документированными этиологическими агентами, по прежнему находятся в 4-й группе «условно» патогенных бактерий. Это является основной из причин унифицированного подхода к их индикации и идентификации в условиях клиники и эпидемиологической практики (Волкова, 2000). Опасность иерсиниоза усугубляется чрезвычайной распространённостью возбудителя Y. enterocolitica в природе. Бактерии Y. enterocolitica выделены практически от всех видов млекопитающих, птиц, рыб, земноводных, моллюсков и насекомых. Кроме того, Y. enterocolitica обнаружены в воде, почве, сточных водах, продуктах животного происхождения (Ленченко, 1998). Целью нашей работы явилось исследование действия экспериментального биопрепарата на бактерии Y. еnterocolitica. Материалы и методы. Работу проводили на базе научноисследовательского инноционного центра микробиологии и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина». Бактериальную массу бактерии Y. еnterocolitica нарабатывали на оптимальной для микроорганизма питательной среде (мясо-пептонном бульоне). В полученную бактериальную суспензию добавляли экспериментальный биопрепарат в соотношении 1:1. Бактериостатическое действие препарата проверяли методом контрольного высева бактериальных культур Y. еnterocolitica, взаимодействующих с изучаемым препаратом в различные промежутки времени от 1 до 5 часов без освобождения их от буферного раствора, содержащего препарат. Бактерицидную активность экспериментального биопрепарата определяли методом контрольного высева бактериальной суспензии, но после освобождения её от буферного раствора, содержащего препарат. Центрифугированием осаждали бактериальные клетки, надосадок удаляли, осадок ресуспендировали в свободном от препарата физиологическом растворе и опять центрифугировали. Данную процедуру повторяли двухкратно. После последнего ресуспендирования и часовой экспозиции раствора с бактериями высевали на твёрдые питательные среды (мясо-пептонный агар с добавлением спиртового раствора генцианвиолета). 92 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Рис.1. Зона лизиса на газоне бактериальной культуры Отсутствие бактериального роста в течение трёх суток наблюдения (при положительном контроле интактными штаммами), означает, что данная доза препарата при используемой экспозиции обладает бактерицидным действием. В результате проведённых исследований установлено, что 4 экспериментальный биопрепарат в концентрации 10 корпускул в мл после 6 часовой экспозиции с бактериальной культурой концентрацией 10 10 микробных тел является бактерицидным для всех изучаемых штаммов бактерии Y.еnterocolitica. Библиографический список 1. Ленченко, Е.М. Иерсиниоз. Этиология, диагностика, меры борьбы и профилактика (проблемная лекция) / Ленченко Е. М. - М., 2002. - С.42. 2. Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора / Утверждены заместителем руководителя Департамента Ветеринарии. - М., 2002. – С. 35-38. 3. Смирнов, И.В. Фенотип возбудителя иерсиниоза и его значение для диагностики / И.В. Смирнов, Г.Я. Ценева // Журн. микробиол. 1992. - №1. - С.13-16. 4. Bockemuhl, I. Epidemiology and visk factors of Yersinia infections in humans Working paper for WHO concultatin emerginj foodborne diseases agents / I. Bockemuhl // Berlin, March. 1995.-P.20-24. 5. Mollaret, H.H. Fifteen Centuries of Yersiniosis: Present and Future. Gontrib. Microbiol Immunol / Н.Н. Mollaret // Basel,. Karger. 1995.- №13. - P.1-4. 6. Артамонов А.М. Спектр литической активности и специфичность бактериофагов Pseudomonas fluorescens / А.М. Артамонов, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы V Международной научно-практической конференции, Ульяновск, 11 июня 2013. – Т. 2. – С. 3-6. 7. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 93 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 8. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 9. Васильева Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. 10. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. 11. Васильев Д.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, А.И. Калдыркаев, В.А. Макеев, И.Г. Швиденко / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 3 (23). С. 52-56. THE PILOT DISINFECTANT BY THE BACTERIA YERSINIA ЕNTEROCOLITICA Semanin A.G., Skoryk A.S., Surkov E.I., Feoktistova N.A., Vasilyeva Yu.B., Zolotukhin S.N. Keywords: phages, Yersinia enterocolitica, intestinal infections, prevention. The study aims to test disinfectant to bacteria Yersinia enterocolitica. New drug based on biosensors - bacteriophages strictly specific to certain pathogens of enteric infections. УДК 619:614.48 ИССЛЕДОВАНИЕ ДЕЙСТВИЯ НОВОГО ДЕЗИНФЕКТАНТА НА ЭНТЕРОБАКТЕРИИ РОДА MORGANELLA Семанин А.Г., Скорик А.С., Суркова Е.И., Пирюшова А.Н. 4 курс факультета ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., доцент Феоктистова Н.А., к.в.н., доцент Васильева Ю.Б., д.б.н., профессор Золотухин С.Н. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: бактериофаг, Enterobacteriaceae, Morganella, дезинфекция, биопрепарат. Исследование посвящено испытанию действия нового биопрепарата на энтеробактерии рода Morganella. Новый дезинфектант получен на основе биосенсоров – бактериофагов строго специфичных к возбудителям кишечных инфекций. В настоящее время, благодаря работам отечественных и зарубежных исследователей установлено, что наряду с общепризнанными возбудителями 94 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии инфекционной диареи новорожденных животных (энтеропатогенные эшерихии, сальмонеллы, клостридии перфрингенс) важную роль в возникновении кишечных инфекций играют и другие микроорганизмы, в частности представители семейства Enterobacteriaceae, относящиеся к роду Morganella, виду M. morganii (JI.С. Каврук, 1994; С.Н. Золотухин, 1997; C.B. Бритова, 1997). Целью нашей работы явилось исследование действия экспериментального биопрепарата на энтеробактерии рода Morganella. Материалы и методы. Работу проводили на базе научноисследовательского инноционного центра микробиологии и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина». Бактериальную массу патогенов рода Morganella нарабатывали на оптимальной для микроорганизма питательной среде (мясо-пептонном бульоне). В полученную бактериальную суспензию добавляли раствор экспериментального фагового биопрепарата в соотношении 1:1. Бактериостатическое действие препарата проверяли методом контрольного высева бактериальных культур взаимодействующих с изучаемым препаратом в различные промежутки времени от 1 до 5 часов без освобождения их от буферного раствора, содержащего препарат. Бактерицидную активность экспериментального биопрепарата определяли методом контрольного высева бактериальной суспензии, но после освобождения её от буферного раствора, содержащего препарат. Центрифугированием осаждали бактериальные клетки, надосадок удаляли, осадок ресуспендировали в свободном от препарата физиологическом растворе и опять центрифугировали. Данную процедуру повторяли двухкратно. После последнего ресуспендирования и часовой экспозиции раствора с бактериями высевали на твёрдые питательные среды. Отсутствие бактериального роста в течение трёх суток наблюдения (при положительном контроле интактными штаммами), означало, что данная доза препарата при используемой экспозиции обладала бактерицидным действием. Результаты исследований. Нами было установлено, что 4 экспериментальный биопрепарат в концентрации 10 корпускул в мл после 5 часовой экспозиции с бактериальной культурой концентрацией 10 10 микробных тел является бактерицидным для всех изучаемых штаммов бактерии рода Morganella. Библиографический список 1. Бритова, C.B. Биологические особенности бактерий рода Morganella и ускоренная индикация в объектах ветеринарного надзора / Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата вет. наук // Москва, 1997. 2. Золотухин, С.Н. Бактериофаги M. morganii и их применение при желудочнокишечных заболеваниях поросят / Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата вет. наук // Ульяновск, 1994. 3. Инструкция о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях. - М., 1975. – С. 6. 4. Каврук, Л.С. Роль Morganella morganii в этиологии кишечной инфекции телят и поросят. Учебное пособие / Л.С. Каврук, С.Н. Золотухин, В.Я. Ганюшкин, Д.А. Васильев. - Ульяновск, 1998. – С. 56. 95 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 5. Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях. - М., 1990. – С. 4. 6. Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора/ Утверждены заместителем руководителя Департамента Ветеринарии. - М., 2002. – С. 35-38. 7. Специализированный справочно-информационный каталог [Электронный ресурс]. Режим доступа: www.DEZSREDSTVA.RU. 8. Артамонов А.М. Спектр литической активности и специфичность бактериофагов Pseudomonas fluorescens / А.М. Артамонов, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы V Международной научно-практической конференции, Ульяновск, 11 июня 2013. – Т. 2. – С. 3-6. 9. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 10. Васильев Д.А. Листериозные бактериофаги / Д.А.Васильев, Е.Н. Ковалева, С.Н. Золотухин / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. Ульяновск, 2013. 11. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 12. Васильева Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. 13. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. 14. Васильев Д.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, А.И. Калдыркаев, В.А. Макеев, И.Г. Швиденко / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 3 (23). С. 52-56. THE STUDY OF THE NEW DISINFECTANT ON ENTEROBACTERIA OF THE SPECIES MORGANELLA Semanin A.G., Skoryk A.S., Surkov E.I., Feoktistova N.A., Vasilyeva Yu.B., Zolotukhin S.N. Keywords: bacteriophage, Enterobacteriaceae, Morganella, disinfection, the biological product. The research is dedicated to the testing of the new biopreparation enterobacteria kind Morganella. New disinfectant obtained on the basis of biosensors - bacteriophages strictly specific pathogens of enteric infections. 96 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 619:614.48 ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ АССОЦИИРОВАННОГО ФАГОВОГО ПРЕПАРАТА НА БАКТЕРИИ РОДА SALMONELLA Скорик А.С., Семанин А.Г., Суркова Е.И., Пирюшова А.Н. 4 курс факультета ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., доцент Феоктистова Н.А., к.в.н., доцент Васильева Ю.Б., д.б.н., профессор Золотухин С.Н. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: бактериофаг, Enterobacteriaceae, Salmonella, дезинфекция, биопрепарат. Исследование посвящено испытанию нового биопрепарата, содержащего фаги бактерий рода Salmonella. Контаминация пищевого сырья и продуктов питания патогенными энтеробактериями и бациллами на этапах технологического процесса – это серьезная проблема не только переработчиков, но и медиков. Пищевые отравления, вызванные бактериями родов и видов Morganella, E. coli, Salmonella, Y. еnterocolitica, часто характеризуются острым течением болезни и могут вызвать летальный исход. В настоящее время дезинфекция на перерабатывающих предприятиях осуществляется при помощи разрешенных дезинфицирующих средств. Обладая рядом ценных качеств, таких как малая токсикологическая и экологогигиеническая опасность, наличие моющих свойств, бактерицидная эффективность в отношении широкого спектра грамположительных и грамотрицательных бактерий, традиционные дезинфекционные средства характеризуются недостаточной бактерицидной активностью. Задача изыскания эффективного и безвредного способа дезинфекции – актуальная тема для исследований, результаты которых позволят повысить эффективность применения контрольных мер на перерабатывающих предприятиях мясной, молочной, рыбной и др. продукции, а также сделать данные исследования значительно дешевле. Целью нашей работы явилось исследование действия экспериментального биопрепарата в качестве дезинфектанта на энтеробактерии рода Salmonella. Материалы и методы. Работу проводили на базе научноисследовательского инноционного центра микробиологии и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина». Бактериальную массу бактерии Salmonella нарабатывали на оптимальной для микроорганизма питательной среде (мясо-пептонном бульоне). В полученную бактериальную суспензию добавляли раствор экспериментального биопрепарата в соотношении 1:1 (рис. 1). 97 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Рис.1. Негативные колонии фагового биопрепарата Бактериостатическое действие препарата проверяли методом контрольного высева бактериальных культур взаимодействующих с изучаемым препаратом в различные промежутки времени от 1 до 5 часов без освобождения их от буферного раствора, содержащего препарат. Бактерицидную активность экспериментального биопрепарата определяли методом контрольного высева бактериальной суспензии, но после освобождения её от буферного раствора, содержащего препарат. Центрифугированием осаждали бактериальные клетки, надосадок удаляли, осадок ресуспендировали в свободном от препарата физиологическом растворе и опять центрифугировали. Данную процедуру повторяли двухкратно. После последнего ресуспендирования и часовой экспозиции раствора с бактериями высевали на твёрдые питательные среды. Отсутствие бактериального роста в течение трёх суток наблюдения (при положительном контроле интактными штаммами), означает, что данная доза препарата при используемой экспозиции обладает бактерицидным действием. Результаты исследований. В результате проведённых исследований установлено, что экспериментальный биопрепарат в концентрации 104 корпускул в мл после 3 часовой экспозиции с бактериальной культурой концентрацией 1010 микробных тел является бактерицидным для всех изучаемых штаммов бактерии рода Salmonella. Библиографический список 1. Инструкция о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях. - М., 1975. – С. 6. 2. Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях. - М., 1990. – С. 4. 3. Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора/ Утверждены заместителем руководителя Департамента Ветеринарии. - М., 2002. – С. 35-38. 4. Черкасский, Б.Л. Пищевые зоонозы у людей в России / Б.Л Черкасский, Л.Г. Подунова, Н.К. Акулова // Пищевые зоонозы сальмонелл ёзы, кампилобактериоз, иерсиниозы, листериоз. Методы и средства диагностики, лечения и профилактики: тез. докл. - М., 1995. - С. 18-19. 98 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 5. Специализированный справочно-информационный каталог [Электронный ресурс]. Режим доступа: www.DEZSREDSTVA.RU. 6. Артамонов А.М. Спектр литической активности и специфичность бактериофагов Pseudomonas fluorescens / А.М. Артамонов, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы V Международной научно-практической конференции, Ульяновск, 11 июня 2013. – Т. 2. – С. 3-6. 7. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 8. Васильев Д.А. Листериозные бактериофаги / Д.А.Васильев, Е.Н. Ковалева, С.Н. Золотухин / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. Ульяновск, 2013. 9. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 10. Васильева Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. 11. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. 12. Васильев Д.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, А.И. Калдыркаев, В.А. Макеев, И.Г. Швиденко / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 3 (23). С. 52-56. THE STUDY OF THE ACTIONS ASSOCIATED PHAGE PREPARATION BY BACTERIA OF THE GENUS SALMONELLA Skoryk A.S., Semanin A.G., Surkov E.I., Feoktistova N.A., Vasilyeva Yu.B., Zolotukhin S.N. Keywords: bacteriophage, Enterobacteriaceae, Salmonella, disinfection, the biological product. The study aims to test a new biological product containing phages bacteria of the genus Salmonella. 99 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 619:614.48 ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ БАКТЕРИЙ ВИДА ESCHERICHIA COLI К КОМПЛЕКСНОМУ ФАГОВОМУ БИОПРЕПАРАТУ Суркова Е.И., Семанин А.Г., Скорик А.С., Пирюшова А.Н. 4 курс факультета ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., доцент Феоктистова Н.А., к.в.н., доцент Васильева Ю.Б., д.б.н., профессор Золотухин С.Н. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: бактериофаг, Enterobacteriaceae, Escherichia coli, биосенсоры, биопрепарат. В статье приводятся результаты исследования чувствительности бактерий вида Escherichia coli к экспериментальному биопрепарату на основе фагов. Дальнейшее применение биопрепарата в качестве дезинфектанта по разработанной авторами технологии, позволит быстро и качественно инактивировать неспецифическую микрофлору производственных помещений, инвентаря и оборудования на всех этапах технологического цикла. Escherichia coli являются распространенными возбудителями инфекционных заболеваний желудочно-кишечного тракта у животных и человека (Покровский и др., 1989; Cantey, 1993). Наиболее частый путь распространения инфекции, вызванной E.coli О157:Н7 – пищевой, при этом мясо, особенно мясной фарш, прошедшие недостаточную термическую обработку, имеют ведущее значение. В качестве наиболее вероятного контаминирующего агента часто рассматривают испражнения животных (Karmali et al., 1985; Carter et al., 1987). Однако данные о частоте обнаружения в них E.coli О157:Н7 в разных публикациях существенно отличаются друг от друга, что связано, возможно, с неодинаковой чувствительностью методов их обнаружения. Через фекалии может контаминироваться не только мясо, но и другие продукты питания. Немаловажную роль играет в распространении инфекции молоко. Помимо возможности фекального заражения молока, не исключается вероятность попадания в него возбудителя через молочную железу. Описаны также случаи прямого заражения человека от крупного рогатого скота в процессе ухода за ним (Donnenberg, Kaper, 1992). Материалы и методы. Работу проводили на базе научноисследовательского инноционного центра микробиологии и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина». Бактериальную массу бактерии E. coli нарабатывали на оптимальной для микроорганизма питательной среде (рисунок 1). В полученную бактериальную суспензию добавляли раствор экспериментального биопрепарата в соотношении 1:1. 100 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Рис. 1. Рост культуры E. coli на среде Эндо Бактериостатическое действие препарата проверяли методом контрольного высева бактериальных культур взаимодействующих с изучаемым препаратом в различные промежутки времени от 1 до 5 часов без освобождения их от буферного раствора, содержащего препарат. Бактерицидную активность экспериментального биопрепарата определяли методом контрольного высева бактериальной суспензии, но после освобождения её от буферного раствора, содержащего препарат. Центрифугированием осаждали бактериальные клетки, надосадок удаляли, осадок ресуспендировали в свободном от препарата физиологическом растворе и опять центрифугировали. Данную процедуру повторяли двухкратно. После последнего ресуспендирования и часовой экспозиции раствора с бактериями высевали на твёрдые питательные среды. Отсутствие бактериального роста в течение трёх суток наблюдения (при положительном контроле интактными штаммами), означает, что данная доза препарата при используемой экспозиции обладает бактерицидным действием. Рис. 2. Внешний вид фагового биопрепарата 101 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Результаты. В результате проведённых исследований установлено, что экспериментальный биопрепарат в концентрации 104 корпускул в мл после 3,5 часовой экспозиции с бактериальной культурой концентрацией 10 10 микробных тел является бактерицидным для всех изучаемых штаммов бактерии E. coli. Библиографический список: 1. Инструкция о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях. - М., 1975. – С. 6. 2. Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях. - М., 1990. – С. 4. 3. Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора/ Утверждены заместителем руководителя Департамента Ветеринарии. - М., 2002. – С. 35-38. 4. Черкасский, Б.Л. Пищевые зоонозы у людей в России / Б.Л Черкасский, Л.Г. Подунова, Н.К. Акулова // Пищевые зоонозы сальмонелл ёзы, кампилобактериоз, иерсиниозы, листериоз. Методы и средства диагностики, лечения и профилактики: тез. докл. - М., 1995. - С. 18-19. 5. Cantey, J.R. Growth and processing conditions affecting acid tolerance in Escherichia соli 0157:H7. // Gastroent Clin. N. Amer. – 1993. – V. 22. – P. 609-622. 6. Carter, A.O. Escherichia coli O157:H7 episode with a perspective on vero toxins / Carter A.O., Borczyk A.A., Carlson J.A. // New Engl. J. Med. - 1987. - V. 317 - P. 1496 - 1500. 7. Donnenberg, M.S. Persistence of Escherichia coli 0157:H7 in dairy cattle and the dairy farm environment / M.S. Donnenberg, J.B. Kaper // Infect. Immun. – 1992. - V. 60. - P. 3953 3961. 8. Karmali, M.A. Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 episode with a perspective on vero toxins / М.А. Karmali // Clin. Microbiol. Rev. - 1989. - V. 2. - P. 15 - 38. 9. Специализированный справочно-информационный каталог [Электронный ресурс]. Режим доступа: www.DEZSREDSTVA.RU. 10. Артамонов А.М. Спектр литической активности и специфичность бактериофагов Pseudomonas fluorescens / А.М. Артамонов, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы V Международной научно-практической конференции, Ульяновск, 11 июня 2013. – Т. 2. – С. 3-6. 11. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 12. Васильев Д.А. Листериозные бактериофаги / Д.А.Васильев, Е.Н. Ковалева, С.Н. Золотухин / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. Ульяновск, 2013. 13. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 14. Васильева Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. 15. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе 102 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. 16. Васильев Д.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, А.И. Калдыркаев, В.А. Макеев, И.Г. Швиденко / Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 3 (23). С. 52-56. THE SENSITIVITY OF THE BACTERIA SPECIES ESCHERICHIA COLI TO INTEGRATED PHAGE THE BIOLOGICAL PRODUCT Surkov E.I., Semanin A.G., Skoryk A.S., Feoktistova N.A., Vasilyeva Yu.B., Zolotukhin S.N. Keywords: bacteriophage, Enterobacteriaceae, Escherichia coli, biosensors, biological preparation. The article provides the investigation results of the sensitivity of the bacteria species, Escherichia coli to experimental biological preparation based on phages. Further use of the biological product as a disinfectant for developed technology, will allow quickly and qualitatively to inactivate non-specific microflora of industrial premises, equipment and equipment at all stages of the technological cycle. УДК УДК 619:616.98 ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ БИОПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ВЫДЕЛЕННЫХ ФАГОВ PROTEUS Шкаликова М.В., 4 курс, факультет ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., доцент Феоктистова Н.А. ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: биопрепарат, реакция нарастания титра фага, ферментативные свойства, энтеробактерии. Применение созданного нами фагового препарата позволит избежать осложнений, которые наблюдаются после антибиотикотерапии. Низкая себестоимость, простота изготовления, срок годности в течение 1 года и высокая эффективность биопрепарата делают его коммерчески выгодным. Целью наших исследований является проведение испытания биопрепарата на основе выделенных фагов Proteus. Материалы и методы. В работе были использованы 2 штамма бактерии рода Proteus, выделенные из объектов ветеринарного надзора и патологического материала: P. vulgaris 26, P. vulgaris13. Питательные среды и реактивы: мясопептонный бульон, мясопептонныйагар, 0,04% спиртовый раствор генцианвиолета, среды Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит-агар, биохимические тесты института Пастера для изучения ферментативных свойств выделенных протеев. 103 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Объекты исследований. Пробы фекалий от больных диареей поросят из ЗАО «СВ – Поволжское» Ставропольского района Самарской области, беспородные белые мыши. Для оценки эффективности реакции нарастания титра фага в условиях производства нами были проведены исследования по фагодиагностике кишечной инфекции поросят, протекающей с участием бактерий рода Proteus. Методика бактериологического исследования Посев материала производили на среды Эндо, Плоскирева и висмутсульфит агар, инкубировали при температуре 36-37 0С 18-20 часов. Выросшие в чашках на среде Эндо: бесцветные или сероватые колонии с розовым оттенком, с характерным для протея ползущим ростом; на агаре Плоскирева – полупрозрачные колонии с перламутровым оттенком, в зоне роста колоний среда подщелачивалась и приобретала желтизну; на висмутсульфит агаре (через 48 часов инкубации) – темно-коричневые колонии, пересевали в МПБ (по 4-6 колоний с чашки). Культуры микроорганизмов инкубировали при 37 0С в течение 18 часов (до появления выраженного помутнения среды). Видовую принадлежность культур устанавливали на основе определения морфологических и культурально-биохимических свойств. Ферментативные свойства изучали у агаровых культур бактерий, выделенных из одного патологического материала, на наборе полужидких сред с углеводами и индикатором ВР. Посевы инкубировали при температуре 37-38 0С в течение 2448 часов. Результаты исследований представлены в таблице 1. Таблица 1 - Ферментативные свойства выделенных культур Подвижность Метил-рот Фогес-Проскауэр Мальтоза Фенилаланин Мочевина Желатин Агар Симонса Сахароза Выделенная культура Лактоза № п/п Глюкоза Название теста Культура №1 + + + + + + + + Культура №2 + + + + + + + + Культура №3 + + + + + + + + Культура №4 + + + + + + + + Примечания: «+» - ферментация сахара с образованием кислоты и газа, рост на среде Симонса, образование индола, расщепление мочевины и т.д.; «-« - отрицательный результат. 1 2 3 4 Таким образом, в результате проведенных исследований нами было выделено из 16 проб фекалий 4 культуры бактерий, которые мы классифицировали по ферментативным свойствам. Патогенные свойства выделенных культур бактерий рода Proteus определяли в биопробе на белых мышах методом внутрибрюшинного введения 0,5 млрд. микробных клеток. Культуру признавали патогенной в случае гибели 104 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии двух или более мышей в течение трех суток после заражения и относили ее к возбудителям болезни. Результаты исследований представлены в таблице 2. Таблица 2 – Патогенность выделенных бактерий рода Proteus № п/п 1 2 3 4 Название культуры Биопроба №1 Биопроба №2 Биопроба №3 P. vulgaris 2 P.vulgaris 5 P.vulgaris 6 P.vulgaris 7 + + - + + + + Примечания: «+» - доза введенной культуры была летальной, «-» - отрицательный результат. Анализируя, данные таблицы 2, можно утверждать, что выделенные нами культуры бактерий рода Proteus обладают патогенными свойствами. При фагоиндикации результат реакции учитывали путем подсчета негативных колоний фага в опытных и контрольных чашках. Оценку реакции проводили в соответствии с показателями таблицы 3 (по Ганюшкину, 1988). Положительная реакция характеризовалась увеличением количества корпускул хотя бы одного штамма фага по сравнению с контролем в 5 и более раз. Таблица 3 – Оценка реакции нарастания титра фага (РНФ) Увеличение количества корпускул индикаторного фага в опытной пробе (пробирка №1) в отношении к количеству корпускул в контроле (пробирка №3) Увеличение в 2,5 раза Увеличение от 3 до 5 раз Увеличение свыше 5 раз Увеличение более 10 раз Оценка Сомнительная Слабо положительная Положительная Резко положительная При исследовании материала в РНФ с использованием диагностического набора протейных бактериофагов, включающего фаги П-6 и П-2 серии УГСХА, положительная реакция была в 10 пробах фекалий. Результаты проведенных исследований представлены в таблицах 4-5. Из таблицы 4 видно, что при исследовании 16 проб фекалий от больных диареей поросят, бактериологическим методом выделено бактерий рода Proteusиз 36 % проб, а в РНФ - 55 % проб. Таблица 4 - Результаты исследования проб фекалий от больных диареей поросят Всего проб От поросят 16 Результаты исследований Бактериологический метод РНФ Количество проб % Количество проб 4 25 10 % 62,5 Результаты проведенных исследований свидетельствуют о более высокой чувствительности РНФ (18 часов) при обнаружении бактерий рода Proteus в испражнениях больных диареей поросят в сравнении с бактериологическим 105 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии методом исследования при меньшей затрате времени (96 часов), реактивов и посуды. Таблица 5 - Результаты использования РНФ для индикации протеев в фекалиях от больных диареей поросят № Количество Количество Увеличение исслед № негативных негативных негативных уемой фага колоний колоний колоний пробы в контроле в опыте (раз) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 П-6 П-2 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 56±4,1 44±3,3 71±3,1 89±4,9 60±4,1 266±30,2 281±36,3 59±4,5 304±34,7 105±9,6 56±1,8 69±3,5 64±4,9 89±7,1 117±8,6 269±17,3 54±5,2 131±9,3 342±29,8 309±40,3 89±7,7 126±10,5 62±5,2 148±11,4 280±16,1 308±14,6 336±10,2 264±14,1 560±25,7 220±11,1 392±35,3 484±43,2 560±13,5 396±24,6 2 6 5 5 2 2 2 6 2 6 7 2 3 5 7 6 6 10 5 7 11 10 9 Результат РНФ Отрицательный Отрицательный Отрицательный Положительный Положительный Отрицательный Положительный Отрицательный Отрицательный Отрицательный Отрицательный Отрицательный Отрицательный Положительный Отрицательный Отрицательный Положительный Положительный Отрицательный Отрицательный Отрицательный Отрицательный Положительный Положительный Положительный Положительный Положительный Положительный Положительный Положительный Положительный Положительный Результат бактериологических исследований Отрицательный Отрицательный Отрицательный Отрицательный Отрицательный Отрицательный Отрицательный Отрицательный Положительный Отрицательный Отрицательный Положительный Отрицательный Положительный Положительный Отрицательный Свободный фаг в контроле не был обнаружен. Заключение. Важное место среди условно-патогенных микроорганизмов, вызывающих различные заболевания у животных и человека, занимают энтеробактерии рода Proteus. Борьба с любыми инфекционными заболеваниями зависит от своевременной диагностики, поэтому усовершенствование методов лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых этими 106 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии микроорганизмами, уделяется большое внимание. Современные методы диагностики, которые могут быть использованы для индикации и идентификации микроорганизмов дорогостоящи и недоступны большинству районных бактериологических лабораторий. Поэтому изысканию простых и доступных методов для лабораторий любого уровня является актуальной проблемой. На основании экспериментов, проведенных нами, доказана возможность применения РНФ с целью обнаружения бактерий рода Proteus в объектах ветеринарного надзора, позволяющая сократить время исследования, уменьшить расход питательных сред и лабораторной посуды, увеличить эффективность обнаружения бактерий рода Proteus. Библиографический список 1. Барт, Н.Г. Бактериофаги Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения», Ульяновск, 2009. – с.140-146. 2. Барт, Н.Г. Биологические свойства бактериофагов Providencia Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», Ульяновск, 2009. – C.6-8. 3. Барт, Н.Г. Спектр литической активности бактериофагов Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев / Материалы V Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». – Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2013. – Т.II. – C.12-16. 4. Викторов, Д.А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Pseudomonas fluorescens / Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Д.А. Васильев // Ветеринария и кормление. – Москва: «ВЕТКОРМ», 2012. – №5. – С. 8-9. 5. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов диагностики псевдомонозов рыб / Д.А. Викторов, Т.А. Гринева, Д.А. Васильев, А.М. Артамонов, С.Н. Золотухин // Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: Материалы международной научнопрактической конференции, Ульяновск, ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», 23-25 апреля 2013. – Т. 1. – Ульяновск, 2013. – С. 162-164. 6. Викторов, Д.А. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas putida // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Саратов. – 2011. – 22 с. 7. Васильев, Д.А. Выделение и идентификация Bordetella bronchiseptica от животных / Д.А. Васильев, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Васильева // Естественные и технические науки. – 2010. - № 5. – С. 233-235. 8. Васильев, Д.А. Изучение основных биологических свойств бактериофагов Bordetella bronchiseptica, выделенных методом индукции / Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, С.Н. Золотухин, И.Н. Хайруллин, Ю.Б. Васильева, А.Г. Шестаков // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - №1 (13). - С. 59–62. 9. Выделение бактериофагов Listeria monocytogenes методом индукции/ Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, С.Н, Золотухин, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов, И.Г. Швиденко // Вестник УГСХА. – 2013. - №1(21) – С. 45-49 10. Выделение и характеристика бактериофагов Listeria monocytogenes / Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов// Материалы международной научнопрактической конференции "Бактериофаги: теоретические и практические аспекты 107 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности". - Ульяновск: Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина, 2013,т.2 - С. 130-133 11. Васильева, Ю.Б. Конструирование биопрепаратов для лабораторной диагностики бордетеллёзной инфекции // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С. 25-29. 12. Васильева, Ю.Б. Разработка методов фагодиагностики бордетеллёза // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С.51-56. 13. Васильева, Ю.Б. Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики бордетеллёза // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.science-education.ru/110-9751. 14. Васильева, Ю.Б. Особенности биологии бактерий вида Bordetella bronchiseptica // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.scienceeducation.ru/110-9927. 15. Васильева, Ю.Б. Новая тест-система идентификации возбудителя бордетеллёза – Bordetella bronchiseptica // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10. – Ч.1. 16. Васильева, Ю.Б. Разработка методов детекции бактерий Bordetella bronchiseptica // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С. 46-51. 17. Васильева, Ю.Б. Фаги бактерий Bordetella bronchiseptica: свойства и перспективы применения // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №3 (23).- C. 44-49. 18. Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека / Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Алёшкин А.В., Барт Н.Г., Богданов И.И., Васильева Ю.Б., Викторов Д.А., Золотухин Д.С., Журавская Н.П., Калдыркаев А.И., Карамышева Н.Н., Ковалева Е.Н., Коритняк Б.М., Ляшенко Е.А., Молофеева Н.И., Пожарникова Е.Н., Пульчеровская Л.П., Семанина Е.Н., Феоктистова Н.А., Шестаков А.Г. и др. Ульяновск, 2013. 19. Васильев Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Васильев Д.А., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н., Алешкин А.В. / Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; НИИЦМиБ. Ульяновск, 2013. 20. Васильев Д.А. Разработка методов фагоидентификации и фагодетекции бактерий Pseudomonas fluorescens / Д.А. Васильев, Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Т.А. Гринева, Е.А. Ляшенко / Фундаментальные исследования. 2014. № 5-1. С. 55-58. 21. Шестаков А.Г. Соотношение бактериофагов в биопрепарате полифага / А.Г. Шестаков, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научнопрактической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. - 2013. - С. 205-210. CARRYING OUT TEST OF THE BIOLOGICAL PRODUCT ON THE BASIS OF THE ALLOCATED PHAGES OF PROTEUS Shkalikova M. V., Feoktistova N. A. Keywords: biological product, reaction of increase of a caption of a phage, fermentativny properties, enterobakteriya. Application of the fagovy preparation created by us will allow to avoid complications which are observed after an antibiotikoterapiya. Low prime cost, simplicity of production, expiration date during 1 year and high efficiency of a biological product do it commercially favorable. 108 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 636.084.4 ПРИМЕНЕНИЕ ОТХОДОВ ПРОИЗВОДСТВА ХЛОПКА В КОРМЛЕНИИ ЖИВОТНЫХ Шопенкова Т.А., студентка 2 курса, специальность 111801.65 – Ветеринария, институт прикладной биотехнологии и ветеринарной медицины Научный руководитель: к.б.н., доцент Козина Е.А. ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» Ключевые слова: шрот, жмых, шелуха, госссипол, хлопковые коробочки, крупный рогатый скот, свиньи, овцы. Отходы производства хлопка (жмых, шрот, шелуха, хлопковые коробочки) применяют в кормлении сельскохозяйственных животных. Жмыхи и шроты скармливают в составе комбикормов, но массовая доля свободного госсипола не должна превышать 0,02% в пересчете на абсолютно-сухое вещество. Хлопковую шелуху добавляют в комбикорма. Овцам используют хлопковые коробочки в виде комплексной гранулированной смеси. Из семян хлопка, помимо ценного пищевого продукта – хлопкового масла, получаются отходы, которые с успехом могут быть использованы в корм скоту. Это жмых, шрот и хлопковая шелуха. Цель: изучить использование в кормлении животных отходов производства хлопка. В задачи исследования входило изучить: химический состав и питательность исследуемых отходов; рациональное использование этих отходов в кормлении животных. Хлопковая шелуха, содранная с семян вместе с линтерным пухом, представляет из себя грубый корм, равный по питательности мякине. Козы очень охотно поедают хлопковую шелуху, сваленную во дворе в кучу. Хлопковая шелуха может быть применена в качестве грубого корма при изготовлении комбикормов. В ней содержание клетчатки доходит до 43% [1]. Хлопковый шрот получают из ошелушённых и обычных семян хлопчатника, в связи с чем, его подразделяют на два сорта, значительно отличающихся по содержанию основных питательных веществ [2]. Растворимость протеина хлопкового шрота невысока. В связи с этим его предпочтительнее использовать для приготовления комбикормов для жвачных животных [3]. Хлопковый жмых, так же как и другие жмыхи, является богатым источником получения белковых веществ для составления рациона, полноценного в белковом отношении. Несмотря на большую ценность хлопковых отходов, необходимо с большой осторожностью подходить к назначению размеров дач, сроков скармливания жмыха и шелухи, так как в них содержится ядовитое вещество, называемое госсиполом. 109 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Это вещество обнаружено в хлопковом жмыхе в очень малом количестве. В отходах производства, по данным химического анализа – около 17% госсипола, что близко к нормальному содержанию. Госсипол в больших дозах может привести к отравлению животных. В основном отравление проявляется уменьшением аппетита, наличием жажды. Животные после незначительного беспокойства вначале угнетены. Отмечаются нарушения координации движений, судорожные сокращения мускулатуры, общая слабость. Дыхание частое, поверхностное, временами тяжелое. Слизистые оболочки цианотичны, сердечная деятельность ослаблена, пульс учащенный. Принятый внутрь госсипол поражает слизистую желудка, но это действие бывает слабее выражено, чем в тонком отделе кишечника, хотя яд находится в желудке дольше и в больших концентрациях. Объясняется это тем, что госсипол почти не растворим в кислой среде. Переходя в щелочную среду кишечника, он лучше растворяется и поэтому действует сильнее. И.С Мозгов считает наиболее чувствительными к госсиполу свиней, птиц, кроликов, лошадей и крупный рогатый скот, особенно в молодом возрасте. Менее всех чувствительны к нему овцы. В связи с этим рекомендуется скармливать хлопковый жмых не в чистом виде, а в смеси с другими кормами. Кроме того, непрерывное кормление жмыхом может привести к отравлению, поэтому необходимо делать перерывы в скармливании этого отхода. Учитывая наличие госсипола в жмыхе, не следует превышать рекомендуемые суточные дачи: крупному рогатому скоту 2,5 кг жмыха на голову, свиньям – 0,5 кг на 100 кг живой массы. Но массовая доля свободного госсипола не должна превышать 0,02% в пересчете на абсолютно-сухое вещество [1]. А.Л. Петрушкин и И. Бражников отметили резкое снижение продуктивности, повышение падежа и вынужденного убоя поголовья кур с признаками отравления при введении в комбикорма хлопчатникового шрота. Изучая действие изолированного госсипола на цыплятах, зарегистрировали уменьшение массы цыплят и смертельные случаи [4]. Нормы включения хлопчатниковых жмыхов, шротов в комбикорма и рационы (%): молодняк крупного рогатого скота в возрасте от 6 до 12 месяцев – до 10. старше 12 месяцев, коровы и крупный рогатый скот на откорме – до 20, ремонтный молодняк свиней старше 4-месячного возраста – до 3, свиньи на откорме в первый период – до 5, во второй период – до 7, овцы взрослые – до 20, ягнята старше 4-месячного возраста – до 10 (по массе) [1]. Имеется практический опыт скармливания каракульским овцам хлопковых коробочек, которые в хлопкосеющих областях накапливаются в больших количествах. В натуральном виде животные поедают их плохо. По своему химическому составу они содержат протеина 6,8%;сырого жира 2,0;клетчатки 40 и 38% безазотистык экстрактивных веществ. В сравнительном опыте на восьми группах овец в комплексной смеси 20, 30, 40, 50% сена заменяли молотыми хлопковыми коробочками. Включение 20-50% хлопковых коробочек в комплексные кормосмеси не ухудшило использование питательных веществ, а даже наблюдался некоторый положительный эффект. При изучении содержания летучих жирных кислот в рубцовой жидкости 110 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии оказалось, что с повышением содержания молотых хлопковых коробочек в кормосмеси уровень этих кислот снижался. Тем не менее, в зимний период в рационах каракульских овец стало целесообразно использовать хлопковые коробочки в виде комплексной гранулированной смеси .[5] Таким образом, применение хлопковых жмыхов, шротов, хлопковой шелухи и коробочек возможно в кормлении животных. Библиографический список: 1. ПлешкоС.И. Кормовые отходы промышленности / С.И. Плешко.-1942.-С.13-15. 2. Богданов Г.А.. Кормление сельскохозяйственных животных / Г.А. Богданов. - М.: Колос. – 1990. - С. 106. 3. Богданов Г.А. Кормление сельскохозяйственных животных / Г.А. Богданов. - М.: Колос. – 1981.- С. 165. 4. Ветеринарный энциклопедический словарь. - М.: Советская Энциклопедия. -1981. 5. Менькин В.К. Кормление сельскохозяйственных животных / В.К. Менькин. - М.: Колос. – 1997. - С. 156. APPLICATION OF WASTE COTTON PRODUCTION IN ANIMAL FEEDING Shopenkova T.A., Kozina E.A. Key words: cake, cake, husks, gossypol , cotton boxes, cattle, pigs, sheep. Cotton waste (cake, meal, hulls, cotton boxes) used in the feeding of farm animals. Cake and meal fed as part of animal feed, but the mass fraction of free gossypol should not exceed 0.02%, based on absolutely dry substance. Cotton husk is added to the feed. Sheep capsule using cotton as a complex mixture of granulated. УДК 57:083 ДИЗАЙН РЕКОМБИНАНТНЫХ МОЛЕКУЛ ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ Щербина А.А., 5 курс факультета ветеринарной медицины. Научные руководители: к.б.н., с.н.с. Малоголовкин А.С. к.б.н., доцент Ковалева Е.Н. ГНУ ВНИИИВВиМ Россельхозакадемии ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» Ключевые слова: АЧС, рекомбинантные молекулы, молекулярная биология, трансфекция, лигирование, плазмиды. Работа посвящена созданию работоспособных рекомбинантных молекул вируса АЧС для их дальнейшего использования при создании вакцин и тест систем. При использовании методов молекулярной биологии была создана рекомбинантная молекула белка р 60 вируса АЧС. Особенностью биотехнологии, является то, что в ее основе лежит большое количество новых современных дисциплин, таких как: биология, 111 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии молекулярная биология, биохимия, генетика, клеточная инженерия, генетическая инженерия и многие другие [1]. Длительное время конструирование вакцин диагностикумов шло по пути получения хроматографически чистых протеактивных антигенов [2]. Значительный прогресс, достигнут в биотехнологии за счет внедрения достижений генетической инженерии, с помощью которой удалось добиться ранее невозможного, а именно: заставить биообъекты синтезировать новые, ранее не присущие им биологически активные вещества, в том числе и рекомбинантные молекулы[3,4,5]. Рекомбинантные технологии ДНК позволяют получать белки дикого типа и модифицированные белки человека и млекопитающих в больших количествах [6].Такие белки, полученные с помощью генной инженерии, так же называемой сплайсингом генов или методом рекомбинантных ДНК. Вирус Африканской чумы свиней (АЧС) является - бичом настоящего времени. Суммарно в России было зафиксировано более 500 вспышек заболевания экономические потери превысили 30 млрд рублей, уничтожено порядка миллиона животных[3]. Создание дизайна рекомбинантных генов для экспрессии генов вируса АЧС является перспективным направлением, потому что средства специфической профилактики при АЧС до сих пор не разработаны. Во многом это объясняется биологическими свойствами вируса. Целью данной работы является создание генно-инженерной конструкции в бактериальном векторе и оценка функциональности данной конструкции в эукариотических клетках. В соответствии с поставленной целью необходимо решить следующие задачи: 1. Осуществить полимеразную цепную реакцию (ПЦР) для получения ПЦР-продуктов, содержащих нуклеотидные последовательности генов р72, р17 и р60 вируса АЧС; 2. Создать генно-инженерные конструкции, экспрессирующие белки р72, р17 и р60; 3. Оптимизировать условия наращивания, выделения и очистки рекомбинантных плазмид р17, р60 и р72; 4. Оценить пригодность рекомбинантных конструкций в условиях селекции, используя трансфекцию в эукариотических клетках. Пользуясь таким методом молекулярной биологии, как ПЦР нужно было добиться значительного увеличения малых концентраций нуклеотидных последовательностей генов вируса АЧС в биологическом материале. Увеличение концентрации нуклеотидных последовательностей наращивали процессом амплификации. Для этого процесса следует подобрать оптимальную программу на амплификаторе. В исследовании была использована готовая смесь, так называемая Mix смесь. После брали из холодильника праймеры Forward и Reverse, в котором они хранятся при -20. Перемешивали и осаждали на Vortex, а затем раскапывали по 1,5 µl. В самом конце раскапывали по 2 µl исходной ДНК. 112 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Провели ПЦР для белков р17, р60 и р72 вируса АЧС. По окончании амплификации ставили электрофорез в 1,5% агарозном геле для определения размеров продуктов реакции. На основании размеров и расстоянии пробегов маркерных ДНК (рестрицированная HindIII и EcoRI ДНК фага лямбда) вычисляли размеры исследуемых фрагментов ДНК. Рис. 1. Электрофорез в 1,5% агарозном геле после ПЦР Следующим этапом предстояло провести лигирование. В молекулярной биологии, лигирование относится к соединению двух фрагментов ДНК путем образования фосфодиэфирной связи. Ферменты, известные как лигазы катализирует реакцию лигировани.(Таб. 1) Для этого смешали все компоненты реакции и поставили на ночь на +4 0С. Таблица 1 – Компоненты реакционной смеси лигирования p 72: р 60: p 17: буфер = 1 µl; буфер= 1 µl; буфер= 1 µl; вставка=2,54 µl; вставка=1,67 µl; вставка=1,68 µl; вектор= 1 µl; вектор= 1,48 µl; вектор= 0,8 µl; лигаза= 1 µl; лигаза= 1 µl; лигаза= 1 µl; Н2О= 4,46 µl; Н2О= 4,85 µl; Н2О= 5,52 µl; Затем требовалось чтобы комплекс вектор+ вставка вошел в бактериальную клетку E. сoli. Под действием электрического тока, поры в клетках открываются, что позволяет войти комплексу, данная процедура называется электропорацией. После электропорации клетки посеяли шпателем на агар с Канамицином. После суток инкубирования выросшие колонии пересадили в жидкую среду SOС. В пробирках (это пробы под номерами: 1 р17, 2 р17, 3 р17, 4 р17, 1 р60, 2 р60, 3 р60, 4 р60, 2 р72), в которых среда через сутки помутнела, провели выделение плазмид коммерческим набором The Pure Link (USA), согласно инструкции. После для плазмид поставили электрофорез в 1,5% геле для определения размеров продуктов реакции и обнаружению комплекса в реакции. 113 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Рис. 2. Электрофорез плазмид в 1,5% геле Проведенный электрофорез в агарозном геле выявил, что лишь в одной пробе- 3 р60 находится комплекс вектор + вставка. С этой пробой проводили дальнейшие исследования. Последним этапом нужно было провести трансфекцию — процесс введения нуклеиновой кислоты в клетки человека и животных невирусным методом и подтвердить наше исследованием, тем, что эукариотическая клетка способна синтезировать созданную искусственно генно-инженерную конструкцию белка р60 вируса АЧС. Трансфекцию проводили при помощи реагента Липофектамин-плюс (Invitrogen, США) согласно инструкции производителя. Клетки HEК-293 культивировали в 6-луночном планшете, в среде DMEM c 10 % FBS. Для трансфекции использовали 2,5 мкг плазмидной ДНК, содержащей полноразмерную копию гена p60, и 4 µl Липофектамина. Трансфекцию проводили в среде OptiMem в течении 12 часов. Клетки культивировали со средой DMEM c 10 % FBS 24 часа в CO2 инкубаторе (SANYO CO2 Incubator). Так как наша вставка имела последовательность гена, кодирующего зеленый флюористентный белок GFP, то после трансфекции под микроскопом мы наблюдали зеленые клетки. Это говорит о том, что трансфекция в эукариотических клетках прошла успешно и клетки теперь экспрессируют белок. Рис. 3. Эукариотические клетки с комплексом вставка + вектор под флюриористентным белком GFP. 114 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии В ходе данного исследования была создана успешно функционирующая генно-инженерная конструкция, которая подтверди свою работоспособность на примере трансфекции. Данная конструкция может быть использована в дальнейшем при создании тест- систем, вакцин. Использование рекомбинантных молекул является перспективным направлением, огромным преимуществом которого является экологическая и биологическая безопасность, быстрота проводимых исследований и приближается к 100% точности анализа. Библиографический список 1. Барышников, А.Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин. – М.: Эдиториал УРСС, 2002. – 320 с. 2. Копытов, В.О. Клонирование и экспрессия генов структурных белков р30 и р72 вируса африканской чумы свиней: дис. … к.б.н. / Копытов Валерий Олегович. – Покров, 2004. – 127 с. 3. Колонцов, А.А. Локализация мажорных полипептидов вируса АЧС и вирусассоциированных ферментов в структуре вирионов / А.А. Колонцов. – Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 1995. – № 3. – С. 34-38. 4. Балышев, В.М. География АЧС и типовая гетерогенность возбудителя болезни / В.М. Балышев, В. А. Книзе, С.Ж. Цыбанов [и др.]. – М.: МВА им. К.И. Скрябина, 1999. – С. 92-94. 5. Гловер, Д. Клонирование ДНК. Методы / Д. Гловер. –М.: Мир, 1988. – 538 с. 6. Afonso, C.L. Characterization of рЗО, a highly antigenic membrane and secreted protein of african swine fever virus / C.L. Afonso, С. Alcaraz, А. Brun. – Virology. –1992. – № 189 (1). – P. 368-373. DESIGN THE RECOMBINANT MOLECULES OF AFRICAN SWINE FEVER VIRUS Shcherbina A.A., Malogolovkin A.S.,Kovaleva E.N. Keywords: ASF, recombinant molecules, molecular biology, transfection, ligation, plasmid. Work is devoted to the creation of workable ASFV recombinant molecules for their further use in the development of vaccines and test systems. When using the techniques of molecular biology in this research was created recombinant protein molecule p 60 of ASF virus. 115 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 636.982 СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХХАРАКТЕРИСТИКА СОДЕРЖАНИЯ ЗМЕЙ РОДА: LAMPROPELTIS, NATRIX, ERYX, В ДОМАШНИХ УСЛОВИЯХ Пахомов Е.С., 2 курс направления 111100.62 – Зоотехния Научный руководитель: к.б.н., доцент Козина Е.А., ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» Ключевые слова: Содержание, змеи, песчаный удавчик, молочная змея, уж обыкновенный. Для основы наблюдений, были взяты три вида змей, относящихся к разным родам и видам. Наблюдения проводились в домашних условиях где имеются террариумы для содержания пресмыкающихся, а также все необходимые условия для комфортного содержания змей. В наблюдениях использовался метод этологических наблюдений за животными. У рептилий плохая репутация и мало друзей среди людей. Существует множество недоразумений, связанных с их телом и образом жизни сохранившихся до наших дней. Действительно, само слово «рептилия» означает «животное, которое пресмыкается» и словно напоминает о распространённом представлении, о них, в особенности, о змеях как об отвратительных созданиях. Несмотря на этот необычный образ, не все змеи ядовитые и многие рептилии играют полезную роль в регулировании численности насекомых и грызунов. Только исследования последних лет смогли опровергнуть множество ошибочных представлений о свойствах рептилий [1]. Актуальность. Видовое разнообразие пресмыкающихся, содержащихся в зоологических уголках или террариумах любителей, как правило, невелико. Оно значительно уступает количеству рыб, птиц или млекопитающих содержащихся в неволе. Более детальное изучение позволит максимально полезно использовать представителей данной систематической группы животных для развития исследовательских умений. К нам часто обращаются за помощью по содержанию таких животных. И я думаю, что на сегодняшний день тема актуальна и носит вспомогательный характер [2]. Новизна. Изучением поведения змей занимаются Новосибирский зоопарк, Московский зоопарк, но в Красноярске нет специалиста герпетолога, у которого можно было бы узнать о содержании, болезнях и кормлении [3]. Наблюдения проводились в домашних условиях, где имеется два террариума для содержания пресмыкающихся. Цель: сравнить особенности содержания королевской молочной змеи и песчаного удавчика, ужа обыкновенного в домашних условиях. Задачей исследований является изучение поведения и кормления змей в домашних условиях. 116 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Использовали методику «Метод этологических наблюдений за животными в неволе» или метод регистрации отдельных поведенческих проявлений [4]. Наблюдения проводились в домашних условиях, где имеется три террариума для содержания пресмыкающихся. Оборудование: эл. лампочка 60Вт для обогрева, термометр для измерения температуры, сосуд для воды, булыжник и коврик (размер =дл.1м50см. ширина 60см, высота 60см.). Для королевской молочной змеи добавил корягу. Песчаный удавчик содержался в условиях ДЭБЦ где имеется террариум для содержания рептилий (размер =дл.1м50см. ширина 60см, высота 60см). В качестве грунта был использован песок и коврик. Комфортная для змеи температура +25 – 35 С. Также в террариуме была поилка с водой из которой змея пила. Кормление производилось крысами средних размеров по одной или две крыски в неделю. Уборка террариума проводилась раз в месяц растворами креолина и хлорной извести. Наблюдения проводились, по 20 минут – в течение 5 дней в неделю, 22 часа. Наблюдения за молочной змеёй проводились в домашних условиях по 20 минут, ежедневно, 103 часа. Результаты исследований представлены в таблице 1. Таблица 1 – Результаты наблюдений за змеями в домашних условиях Королевская молочная змея Песчаный удавчик Окрас На красном фоне белые кольца с чёрной окантовкой От светлопесчаного до тёмно коричневого «Желтые ушки» - ярковыраженные отметины на голове, чаще всего желтого цвета, белого или оранжевые. Окраска тела чёрная Питание Мелкие грызуны Мелкие грызуны Лягушки любых размеров, аквариумные рыбки Отношение к человеку Опасается, от рук старается уползать Охотно ползёт на руки Опасается рук, уползает, сворачивается, шипит. Активность Преимущественно ведёт ночной образ жизни В любое время суток Преимущественно в ночное время Размер, см 100 80 75 Показатель Обыкновенный уж Таким образом, в домашних условиях рекомендуем содержать всех трёх представителей: молочную змею, песчаного удавчика и обыкновенного ужа. При содержании молочной змеи, песчаного удавчика и ужа были выявлены особенности: песчаный удавчик активен в дневное время, а молочная змея, как и уж, только в вечернее и ночное; песчаный удавчик может быть агрессивным, молочная змея – нет, уж тоже не проявляет агрессии; быстрее становится ручным – песчаный удавчик; молочная змея долго остается пугливой, как и уж. 117 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Молочная змея и песчаный удавчик питаются мышами и молодыми крысами, уж от мышей отказывается. Температурный режим необходим 24–28 градусов Цельсия. Все эти виды не ядовиты. Внешне молочная змея по окрасу ярче и красивее, по размерам она превосходит обыкновенного ужа и песчаного удавчика. Библиографический список 1. Джонсон Дж, Животные / Дж. Джонсон, Э. Кэй, С. Паркер. – М.: «РОСМЭНПРЕСС», 2004. - С. 224. 2. Красная Книга [Электронный ресурс]: животные/рептилии, Интерсофт, сор. 1997. – 1 электрон, опт. Диск (CD-ROM). 3. Орлова В.Ф., Природа России: жизнь животных. Земноводные и пресмыкающиеся./ В.Ф. Орлова, Д.В. Семёнов – М.; «Издательство АСТ», 1999. – С. 480. 4. Попов С.В. Методы этологических наблюдений в неволе: Методическое пособие./ С.В. Попов, О.Г. Ильченко - М., Экосистема, 1997. – С. 25. COMPARATIVE CHARACTERISTIC OF SNAKES GENUS: LAMPROPELTIS, NATRIX, ERYX, AT HOME Pakhomov E.S. Key words: Content, snakes, sand boa, milk snake, grass snake. For a basis of supervision, three species of the snakes belonging to different childbirth and types were taken. To supervision were carried out in house conditions where there are terrariums for the maintenance of reptiles, and also all necessary conditions for the comfortable maintenance of snakes. In supervision the etological method was used. 118 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии СОДЕРЖАНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ОБЛАСТИ МИКРОБИОЛОГИИ И ВИРУСОЛОГИИ 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. Ефрейторова Е.О., Галушко И., Барахтина Е. Идентификация бактерий Serratia marcescen в воде открытых водоемов Абулханова Д., Камышев Я. Санитарно-микробиологическое исследование смывов с кухонного инвентаря Воротников. А.П. Биохимические свойства Flavobacterium psychrophilum Воротников. А.П. Использование РНФ для обнаружения Escherichia coli о157 в пищевых продуктах Гановичева Е.П., Низамова Р.Р., Насибуллина Д.М., Ибрагимова Р.Р., Галушко И.С. Исследование средств личной гигиены содержащие бактериофаги Казакова Е., Крылова Н, Алексеев О., Букин О. Мобильный телефон – одна из самых грязных вещей повседневной жизни Красильникова Е.А., Барсукова А.А. Санитарномикробиологическое исследование панелей сотовых телефонов Ломакин А.А. Актуальность бордетеллёзной инфекции и проблема использования антибиотиков в качестве селективного компонента при идентификации Bordetella bronchiseptica Лягина Е., Маланина В. Санитарно-микробиологическое исследование рыбных консервов в масляно-томатной заливке Сатдарова Д.Г.,Резванова Ю.Р. Микробиологическое исследование денежных знаков Семенов А.Д. Исследование влияния моющих и дезинфицирующих средств на микрофлору рук Семенов А.Д. Выделение и исследование биологических свойств бактериофагов, активных в отношении бактерии Pseudomonas fluorescens Шкаликова М.В. Изучение морфологии негативных колоний выделенных бактериофагов Proteus vulgaris и Proteus mirabilis Шкаликова М.В. Изучение спектра литической активности выделенных протейных бактериофагов Шкаликова М.В. Селекция выделенных бактериофагов Proteus vulgaris и Proteus mirabilis и изучение их литической активности Бурова Н.С. Исследование внутрибольничных инфекций на примере хирургического отделения 9 13 17 19 22 26 29 32 39 42 46 48 51 56 61 65 АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ БИОТЕХНОЛОГИИ (В ТОМ ЧИСЛЕ НАНОБИОТЕХНОЛОГИИ) И ИММУНОЛОГИИ 17. Дао Линь Тхи Тху Характеристика структуры микробного сообщества, участвующего в предварительной очистке 119 72 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. нефтехимических сточных вод Камалова Р.Р., Фролова А.С. Биопрепарат на основе фагов для обработки овощей Камалова Р.Р., Фролова А.С. Биопрепарат на основе фагов для обработки фруктов Кочергина Д. О. Оценка питательной ценности отходов мясного производства муп «Уярский мясокомбинат» Красноярского края Ломакин А.А. Биопрепараты для утилизации органических отходов в сельском хозяйстве Музаффаров Б.Ю. Изучение иммуногенности гиалуронидазы в эксперименте Сайбель Д.О., Белянина Ю.Л. Применение готовых кормов в кормлении собак Семанин А.Г., Скорик А.С., Суркова Е.И., Пирюшова А.Н. Действие экспериментального дезинфектанта на бактерии Yersinia еnterocolitica Семанин А.Г., Скорик А.С., Суркова Е.И., Пирюшова А.Н. Исследование действия нового дезинфектанта на энтеробактерии рода Morganella Скорик А.С., Семанин А.Г., Суркова Е.И., Пирюшова А.Н. Изучение действия ассоциированного фагового препарата на бактерии рода Salmonella Семанин А.Г., Скорик А.С., Суркова Е.И., Пирюшова А.Н. Чувствительность бактерий вида Escherichia coli к комплексному фаговому биопрепарату Шкаликова М.В. Проведение испытания биопрепарата на основе выделенных фагов Proteus Шопенкова Т.А. Применение отходов производства хлопка в кормлении животных Щербина А.А. Дизайн рекомбинантных молекул вируса африканской чумы свиней Пахомов Е.С. Сравнительная ххарактеристика содержания змей рода: lampropeltis, natrix, eryx, в домашних условиях 120 74 78 82 84 87 89 91 94 97 100 103 109 112 116 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ Материалы VII-й Международной студенческой научной конференции 14 – 15 мая 2014 года Подписано в печать 12.05.2014 Формат 60х90 1/16 Усл.п.л. 7,4 . Тираж 150. Заказ 121
