1 003462 2 Изобретение относится к области медици

1
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для коррекции
нарушенного иммунного гомеостаза, сопровождающегося изменением психосоматических
функций и/или биологических реакций, путем
многогранного воздействия на интегративную
деятельность мозга.
Известно использование антител в качестве лекарственного средства для лечения различных инфекционных, вирусных заболеваний (см.
Р.Я. Мешкова, Л.В.Ковальчук, М.И.Коновалова
«Клиника, диагностика, лечение некоторых
форм иммунодефецитов и аллергических заболеваний с основами организации службы клинической иммунологии», Смоленск, «Полиграмма», 1995 г., с.56-64; авт. свид. СССР
1131508, кл. А 61К 39/00, 1984 г.) Противовирусное действие этих лекарственных препаратов
на основе антител, специфических к антигенным детерминантам определенного вируса,
строго избирательно, а вызванный ими пассивный иммунитет держится относительно недолго.
Известно также лекарственное средство на
основе антител к возбудителю, модифицированных для повышения эффективности иммунной реакции 1-2 остатками жирных кислот (см.
авт. св. СССР 1730144, кл. C 12N 7/00,1992 г.)
Однако подобная обработка дает ожидаемый
эффект не для всех антител, используемых в
лечебных целях.
Наиболее близким к изобретению можно
считать использование в качестве нейротропного лекарственного средства антисыворотки антитела к мозгоспецифическим белкам для
лечения некоторых демиелинизирующих заболеваний центральной нервной системы (см. книгу М. Б. Штарк. Мозгоспецифические белки
(антигены) и функции нейрона. М., "Медицина",
1985 г.; с. 234-236, 224-225).
Однако такие препараты характеризуются
узкой специфичностью и, как правило, недостаточной активностью, что требует применения
дополнительных веществ, обладающих стимулирующим действием, и могут вызывать побочные явления.
Изобретение направлено на создание нейротропного лекарственного средства на основе
потенцированной формы антитела или антисыворотки к мозгоспецифическому белку, эффективно стимулирующего регенеративные процессы без побочных явлений.
Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что нейротропное лекарственное средство на основе антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому белку представляет собой
потенцированную форму антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100, полученную путем многократного разведения и
встряхивания по гомеопатическому методу.
Для приготовления потенцированной формы антитела-антисыворотки используют моз-
003462
2
госпецифический
белок
S-100,
физикохимические свойства которого описаны в статье
М. В. Старостина, С. М. Свиридов. Нейроспецифический белок S-100. Успехи современной
биологии, 1977 г., т. 5, с.170-178; книге М. Б.
Штарк. Мозгоспецифические белки (антигены)
и функции нейрона. М., "Медицина", 1985 г.;
с.12-14, выделенный из ткани головного мозга
быка по следующей методике:
- замороженную в жидком азоте ткань растирают в порошок на специальной мельнице;
- экстракцию белков проводят в соотношении 1:3 (вес/объем) в экстрагирующем буфере
при гомогенизации;
- гомогенат прогревают в течение 10 мин
при 60°С и охлаждают до 4°С на ледяной бане;
- термолабильные белки удаляют центрифугированием;
- проводят ступенчатое фракционирование
сульфатом аммония с последующим удалением
выпадающих в осадок примесных белков;
- содержащую белок S-100 фракцию осаждают 100% насыщенным сульфатом аммония
при снижении рН до 4,0 и собирают центрифугированием;
- осадок растворяют в минимальном объеме буфера, содержащего ЭДТА и меркаптоэтанол, диализируют против деионизованной воды
и лиофильно высушивают;
- фракционирование кислых белков продолжают хроматографией на ионообменных
носителях - ДЭАЭ-целлюлозе ДЕ-52 и затем
ДЭАЭ-сефадексе А-50;
- собранные и отдиализованные фракции,
содержащие белок S-100, разделяют по молекулярному весу гель-фильтрацией на сефадексе G100;
- очищенный белок S-100 диализируют и
лиофильно высушивают;
Молекулярный вес очищенного мозгоспецифического белка S-100 составляет - 21000 Д.
Благодаря высокому содержанию аспарагиновой и глутаминовой кислот мозгоспецифический белок S-100 является сильнокислым и
занимает крайнее анодное положение при электрофорезе в прерывистой буферной системе в
полиакриламидном геле, что облегчает его
идентификацию.
Для получения мозгоспецифической антисыворотки к выделенному мозгоспецифическому белку S-100 готовят смесь очищенного белка
S-100 (антигена) в комплексе с метилированным
бычьим сывороточным альбумином в качестве
носителя с полным адъювантом Фрейнда, которую вводят подкожно лабораторному животному - кролику в область спины в количестве 1-2
мл. На 8-й, 15-й день проводят повторную иммунизацию. Забор крови производят (например,
из вены уха) на 26-й и 28-й день.
Полученная антисыворотка имеет титр
1:500 - 1:1000, образует единственную полосу
преципитации с экстрактом из нервной ткани,
3
но не реагирует с экстрактами гетерологичных
органов и формирует единственный пик преципитации как с чистым белком S-100, так и с экстрактом нервной ткани, что свидетельствует о
моноспецифичности полученной антисыворотки.
Из полученной антисыворотки, представляющей собой растворимую в нейтральном растворителе (дистиллированной воде, физиологическом растворе, спирте и т.п.) субстанцию,
готовят потенцированную форму, при этом производят равномерное уменьшение концентрации
путем последовательного разведения 1 части
упомянутой субстанции в 9 частях (для десятичного разведения) или в 99 частях (для сотенного разведения или в 999 частях (для тысячного разведения) нейтрального растворителя с
многократным вертикальным встряхиванием
(«динамизацией») каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей
для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, В. Швабе. Гомеопатические лекарственные
средства. М., 1967 г., с. 14-29). Используют приготовленное таким образом нейротропное лекарственное средство в принятых в гомеопатической практике лекарственных формах и разведениях, преимущественно сотенных (С1С10000).
Лабораторные исследования биологической активности заявленного нейротропного
лекарственного средства в виде потенцированной формы антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 в разведениях С6С200 показали следующее:
1) при исследованиях на моделях условной
реакции избегания (УРИ) введение в течение 5ти дней потенцированной формы антителаантисыворотки к белку S-100 тормозило формирование УРИ независимо от модальности условного стимула и безусловного подкрепления
(реакции «наказания» или «награды»);
2) при исследовании в переживающих срезах гиппокампа крыс на модели длительной посттетанической потенциации (ДПТП) обнаружено, что потенцированная форма антителаантисыворотки к мозгоспецифическому белку
S-100 не влияет на индукцию потенциации, прединкубация срезов в потенцированной антисыворотке снимает эффект подавления ДПТП нативной антисыворотки к мозгоспецифическому
белку S-100. Модифицирующее влияние потенцированной антисыворотки на синаптическую
эффективность обусловлено проявлением феномена системной адаптации, ранее названного
«бипатическим» (см. заявку РСТ WO 97/28776,
кл. A 61 J 3/00, А 61Н 39/00, 1997 г.)
3) при исследовании влияния потенцированных антител-антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 в разведениях С6 и С200
(условная концентрация 10-12 и 10-400) на пас-
003462
4
сивные и активные характеристики мембран
нейронов подклеточного ганглия H. Pomatia
выявлено, что все варианты потенцированных
разведений оказывают идентичный с исходными веществами, но в разной степени выраженный эффект : деполяризуют мембрану, снижают
амплитуду потенциала действия и максимальную проводимость, способствуют росту инактивации каналов.
Ниже приведены примеры использования
нейротропного лекарственного средства.
Пример 1.
Б-ной С., 28 лет. Диагноз - хронический
алкоголизм II ст., алкогольный синдром средней
тяжести. Монотерапия потенцированной антисывороткой к мозгоспецифическому белку S100 по 5 капель спиртового раствора в разведении С200 5 раз в день в течение 2-х суток ликвидировала все проявления алкогольной абстиненции: тошноту, жажду, потливость, головную
боль. Нормализовались сон, аппетит, настроение.
Пример 2.
Б-ная П., 40 лет. Диагноз - хронический
алкоголизм II ст. в течение 3-х лет не употребляла алкогольные напитки, но в последнее время больная отмечает возобновление влечения к
алгоколю, расстройство сна, снижение настроения. Прием потенцитрованной антисыворотки антитела к мозгоспецифическому белку в разведении С200 в дозе по 1 таблетке 0,25г по утрам
в течение 2-х недель полностью подавил влечение к употреблению спиртных напитков, сон и
настроение нормализовались.
Пример 3.
Б-ной П., 20 лет. Диагноз - опийная наркомания II ст. В течение 2-х лет употребляет нарастающие дозы героина, внутривенно. Неоднократно лечился в стационарах, обычно курс дезинтоксикации достигал 2-3-х недель. Однако
после выписки из больницы сразу же возобновлял прием наркотиков. При очередной госпитализации в декабре 1998 г. в комплексную терапию героиновой абстиненции включен потенцированный препарат - потенцированная антисыворотка к мозгоспецифическому белку S-100
no 5 капель спиртового раствора в разведении
С100 3 раза в день. Абстинентный синдром купирован в течение 7 дней. После выписки в течение 1-го месяца героин не употребляет, при
появлении признаков влечения принимает по 1
таблетке (0,5г) С1000 заяленного препарата потенцированного антитела-антисыворотки к
мозгоспецифическому белку S-100.
Пример 4.
Б-ной Д., 45 лет. Диагноз - психоорганический синдром вследствие черепно-мозговой
травмы, астенический вариант. Инвалид II
группы. Весной и осенью состояние ухудшается: усиливаются головные боли, раздражительность, метеолабильность, нарушается сон.
Больной быстро устает, с трудом ухаживает за
5
003462
собой. Последний период обострения в течение
2-х месяцев принимал только заявленный нейротропный препарат в разведении С500 по 1
таблетке 0,25 г 1 раз в день. Состояние улучшилось, б-ной более активен, нормализовались сон
и настроение. Головных болей нет. Занимается
лечебной физкультурой. Субъективно оценивает свое состояние как удовлетворительное.
Пример 5.
Б-ная К., 43 года. Находится в психиатрической больнице с диагнозом эндогенная депрессия неуточненного генеза. Проводимая в
течение 3-х недель терапия антидепрессантами
и транквилизаторами неэффективна, жалуется
на заторможенность, бессоницу, «бесчувствие».
После присоединения к среднетерапевтическим
дозам антидепрессантов потенцированного антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому
белку S-100 в разведении С1000 по 5 капель
спиртового раствора 8 раз в день настроение
выровнялось в течение 10 дней. Выписана в
удовлетворительном состоянии.
Пример 6.
Б-ная В., 32 года. Диагноз - неврастения.
Жалуется на слабость, утомляемость, головную
боль, раздражительность. В амбулаторных условиях принимала утром по 1 таблетке С200
заявленного нейротропного препарата - потенцированного антитела к мозгоспецифическому
белку S-100. Состояние в течение 5 дней резко
изменилось: больная стенична, активна, улучшились настроение и сон, раздражительности
нет.
Пример 7.
Б-ной П., 19 лет, студент. Жалуется на быструю утомляемость, невозможность сосредоточиться, снизилась успеваемость, боится не сдать
очередную сессию. Эффективный в подобных
случаях курс ноотропила повышения работоспособности не принес. Прием в течение недели
заявленного нейротропного лекарственного
средства по 1 таблетке (0,25 г) 2 раза в день потенцированного антитела-антисыворотки к моз-
6
госпецифическому белку S-100 в разведении
С50 быстро восстановил работоспособность,
повысил уровень внимания. Больной успешно
сдал экзамены.
Пример 8.
Б-ная Т., 80 лет. Живет с дочерью - инвалидом. Из-за нарушений памяти не может
справляться с домашней работой, забывает дорогу в магазин. Курс лечения в течение 6 месяцев заявленным нейротропным лекарственным
средством по 5 капель спиртового раствора
С200 привел к заметному улучшению памяти. Бная стала ухаживать за дочерью, ходит по улицам, выполняет домашнюю работу.
Пример 9.
Б-ной С., 49 лет. Диагноз неоперабельная
нейробластома мозжечка. Болен в течение 3-х
лет, прошел курс химио- и лучевой терапии.
Несмотря на лечение состояние тяжелое: из-за
нарушений походки и слабости не способен к
самостоятельному передвижению, нарастает
кахексия. Назначено: потенцированная антисыворотка к мозгоспецифическому белку S-100B,
который является одной из фракций мозгоспецифического белка S-100, в разведении С1000
по % 5 капель спиртового раствора 2 раза в
день. На фоне терапии через 4 месяца состояние
больного несколько стабилизировалось: уменьшились нарушения походки (начал передвигаться с помощью палочки) и слабость, появился аппетит. Состояние стабилизировалось, опухоль не растет.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Нейротропное лекарственное средство на
основе антител или антисыворотки к мозгоспецифическому белку, отличающееся тем, что
содержит потенцированную форму антител или
антисыворотки к мозгоспецифическому белку
S-100, полученную путем последовательного
многократного разведения и встряхивания по
гомеопатическому методу.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ
Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2/6