ВЫБОр СОСТаВа ПИТаТЕЛЬНЫХ СрЕд, ПрИГОдНЫХ дЛЯ

ВОПРОСЫ ЛЕСНОЙ ФИТОПАТОЛОГИИ
ВЫБОР СОСТАВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД, ПРИГОДНЫХ
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПОРАЖЕНИЯ ХВОЙНЫХ
ПОРОД ГРИБОМ DIPLODIA PINEA
Р.А. УМАНОВ, асп. каф. экологии и защиты леса МГУЛ
Л
етом 2008 г. было обнаружено усыхание
сосны обыкновенной в посадках частных
владений ближнего Подмосковья. Было установлено, что причиной усыхания сосны является диплодиевый некроз, или диплодиоз, вызываемый грибом Diplodia pinea=Sphaeropsis
sapinea. Этот гриб, конечно, был известен
на территории бывшего СССР, но встречался преимущественно в южных республиках
(Казахстане, Грузии, Украине), где был обнаружен в 1926 г.[3]. Сравнительно недавно, в
2002 г., этот гриб был обнаружен в Московской области Соколовой Э. С. в питомниках
и городских посадках на кедровой, горной и
черной сосне.
Из литературы известно, что Diplodia
pinea является оппортунистической инфекцией, т. е. болезнь развивается на растениях,
ослабленных различными неблагоприятными
естественными и антропогенными факторами: повреждение насекомыми, солнечно-морозный ожог, дефицит влаги, засуха, чрезмерное затенение, уплотнение почвы и т. д. [4, 5,
6, 9]. Также известно, что болезнь в 70 % случаев протекает в скрытой форме. Это может
способствовать распространению диплодиоза в России и осложняет диагностику этого
заболевания.
Для облегчения диагностики заболевания диплодиозом разных видов сосны,
автором был проведен ряд экспериментов с
целью выявления оптимального состава синтетической стерильной среды для получения
плодоношений этого гриба.
Ранее подобные работы проводились
и в СССР [1] и за рубежом [8]. Так, О. Г. Кизикелашвили установил, что для прорастания спор и развития гриба необходима температура в интервале от +12° C до +36° C,
оптимальной является температура +25° С.
Также, экспериментируя с разнообразными
стерильными агаровыми средами, он уста-
118
caf-ecology@mgul.ac.ru
новил, что мицелий этого гриба лучше всего
развивается на картофельно-глюкозном агаре
(КГА), но плодоношений гриба отмечено не
было. Однако О. Г. Кизикелашвили сообщил,
что на среде Чапека с добавлением NH4NO3
или избытком NaNO3 возможно получение
плодовых тел гриба.
Вместе с этим зарубежные исследователи отмечают, что мицелий Diplodia pinea
успешно развивается на любой среде, содержащей крахмал и глюкозу [8], но плодовых
тел не образуется. И зарубежные исследователи и О. Г. Кизикелашвили успешно получали плодоношения гриба на стерильной молодой хвое сосны и стеблях донника [1, 7]. Но
такие среды не всегда доступны.
Для эксперимента использовались следующие среды: среда Чапека, среда Чапека с
избытком NaNO3 (избыток 2 %), среда Чапека
с добавлением NH4NO3 (2 %), среда Чапека с
добавлением маточного раствора витаминов
и органических веществ среды МурасигеСкуга, а также витамина А и С (далее среда
ЧМС), агаризованное пивное сусло, картофельно-глюкозный агар и черносливовый
агар [2].
Посевы проводились методом моноспоровых культур [2] в чашки Петри диаметром 9 см, в которые наливалось по 20 мл
среды. Для каждой среды использовалось
по 10 чашек Петри. Культивирование гриба
происходило при температуре 24° С и постоянной относительной влажности воздуха
86 %.
Наблюдение за ходом роста гриба проводились на 3, 7, 15, 20, 27, 35-й день после
посева. При этом измерялся диаметр колоний, отмечалось возрастное потемнение мицелия и наличие плодоношений. Результаты
измерений указаны в таблице.
Как видно из таблицы, самая высокая скорость роста мицелия гриба была на
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 4/2011
ВОПРОСЫ ЛЕСНОЙ ФИТОПАТОЛОГИИ
Рис. 1. Пикнида Diplodia pinea, полученная на среде ЧМС. Микросъемка с 135-кратным увеличением
Рис. 2. Конидии Diplodia pinea, полученные на среде ЧМС. Микросъемка с 600-кратным увеличением
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 4/2011
119
ВОПРОСЫ ЛЕСНОЙ ФИТОПАТОЛОГИИ
Таблица
Скорость развития мицелия гриба Diplodia pinea на различных стерильных средах
Среда, используемая
для выращивания
Картофельно-глюкозный агар
Черносливовый агар
Среда Чапека
Среда Чапека с избытком NaNO3
Среда Чапека с добавлением NH4NO3
Среда ЧМС
Агаризованное пивное
сусло
Диаметр ко- Диаметр ко- Диаметр ко- Диаметр ко- Диаметр ко- Диаметр колоний на 3-й лоний на 7-й лоний на 15-й лоний на 20-й лоний на 27-й лоний на 35-й
день после
день после
день после
день после
день после
день после
посева, см
посева, см
посева, см
посева, см
посева, см
посева, см
3,4
9
9
9
9
9
5,5
2,8
9
7
9
9
9
9
9
9
9
9
3,4
6,5
9
9
9
9
2,5
5,3
8
9
9
9
2,5
6,2
7,8
9
9
9
3
9
9
9
9
9
черносливовом агаре, на КГА скорость роста чуть ниже. Самой низкой скорость роста
была на среде Чапека с добавлением NaNO3.
Возрастное потемнение мицелия раньше всех
было отмечено на КГА (5-й день), на агаризованном пивном сусле потемнение мицелия
было отмечено на 7-й день, на среде Чапека
потемнение было отмечено на 10-й день, на
среде Чапека с избытком NaNO3 потемнение
было отмечено на 7-й день, на среде ЧМС и
среде Чапека с добавлением NH4NO3 возрастного потемнения мицелия отмечено не было,
на черносливовом агаре оно было отмечено
на 15-й день.
Плодоношений гриба ни на одной из
сред, кроме ЧМС, не было отмечено. Первые
плодоношения на ЧМС были обнаружены на
32-ой день после посева (рис. 1, 2.). Плодоношения были найдены в 9 из 10 чашек. Пикниды имеют размер около 200×230 µ в ширину, конидии коричневые и имеют размер
32×12 µ. Однако количество плодоношений
сильно варьирует.
Из всего сказанного можно сделать
вывод, что среда Чапека с добавлением маточного раствора витаминов и органических веществ среды Мурасиге-Скуга, а также
витамина А и С дает лучшие результаты по
сравнению с другими средами использованными в этом опыте.
120
Библиографический список
1. Кизикелашвили, О.Г. Результаты изучения диплодиоза пицундской сосны в Грузии: автореф. дис. ...
канд. биол. наук / О.Г. Кизикелашвили. – Тбилиси:
Мецниереба 1971. – 25 с.
2. Самуцевич, М.М. Техника фитопатологических
исследований / М.М. Самуцевич. – М.: Государственное издательство сельскохозяйственной и колхознокооперативной литературы, 1931. – 99 с.
3. Чернецкая, З.С. Материалы к изучению флоры
грибов Северной Осетии / З.С. Чернецкая. – Владикавказ, 1929. – C. 93.
4. J. T. Blodgett, E. L. Kruger and G. R. Stanosz. Effects
of Moderate Water Stress on Disease Development by
Sphaeropsis sapinea on Red pine. – Phytopathology.
1997. Volume 87. №4. С. 428-433.
5. J. Flowers, E. Nuckles, J. Hartman, and L. Vaillancourt.
Latent Infection of Austrian and Scots Pine tissues by
Sphaeropsis sapinea. – Plant disease. 2001. Volume
85, №10. С. 1107-1112.
6. J. Hartman, G. Mussey and W. Fountain. Evolution
of landscape Austrian pines for tip blight disease. –
1994.Untiv. Ky. Nursery Landsc. Program Res. Rep.
SR-94-1:31.
7. T. H. Nicholls and M. E. Ostry. Sphaeropsis sapinea
Cancers on Stressed Red and Jack Pines in Minnesota
and Wisconsin. – Plant disease. 1990. Vol. 74, № 1.
С. 54-56.
8. M. A. Palmer, T. H. Nicholls. How to identify and
control Diplodia shot blight, collar rot, and canker of
conifers. – North Central Research Station 1983. 9 с.
9. Wayne A. Sinclair and Howard H. Lyon. Diseases of
trees and shrubs / Cornell University: New York 2005.
2-nd. ed. С. 130.
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 4/2011